本发明属于保健品领域,具体涉及一种含有异土木香内酯的抗肝癌保健品。
背景技术
肝癌是全球死亡率第三位的恶性肿瘤疾病,我国每年约有38.3万人死于肝癌,占全球肝癌死亡病例数的51%,是全球肝癌发病率和死亡率最高的国家。肝癌恶性程度高,浸润和转移性强,愈后差。肝癌对化疗的敏感性差是肝癌治疗失败的重要原因之一。在临床治疗中,肝癌患者的5年生存率仅为10%左右。目前,治疗肝癌的多数化学药物都有较强的毒副作用,因此寻找和开发具有抗肝癌的天然药物,对于肝癌的预防和治疗,增加患者的生存时间具有重要的意义。
国际医药界正在进行一场扩大天然药物使用的“绿色革命”。中药作为主要的天然药物,其开发与应用正成为世界各国医药产品发展的方向之一。我国的中草药资源非常丰富,而且我国中医药学在数千年的实践中积累了丰富的临床应用经验。中药以天然植物药品为主,不仅价格低廉,而且天然的低毒副作用,脏器的毒性作用较低,故使用安全,可长期服用,显示了巨大的潜在优势。更重要的是,中药会降低肿瘤细胞对身体机能的侵袭力、会加大对癌细胞生长的遏制并提高患者身体的抵抗力,进而达到对癌细胞的抵抗,因此,应用前景广阔。
技术实现要素:
本发明目的是提供一种具有抗肝癌功能的含有异土木香内酯的保健品,以我国具有丰富的资源中药为起点,制备异土木香内酯和其他中药提取物的保健品。
本发明采用的技术方案为:
含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,由以下原料按重量百分比组成:
异土木香内酯60-80%,半枝莲提取物5-10%,水红花子提取物5-10%,夏枯草提取物5-10%,泽漆提取物5-10%。
所述含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,所述异土木香内酯的制备方法如下:
1)土木香粉碎:取干燥的土木香根茎药材适量,用粉碎机粉碎,过200目筛,得土木香粉末;
2)乙醇浸提提取:按料液比1:(10-20),将土木香粉末溶于70-90%乙醇,室温浸提20-24h,得乙醇提取混合物;
3)微波辅助提取:将乙醇提取混合物微波处理,温度为40-60℃,提取时间为170-200s,离心,取上清液;
4)将所得上清液旋转蒸发浓缩,过滤,冷冻干燥,得异土木香内酯干粉。优选的,将所得上清液旋转蒸发浓缩,先经滤纸过滤后,再用滤膜进行超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得异土木香内酯干粉。
所述含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,所述半枝莲提取物的制备方法为:在室温条件下,将阴干的半枝莲药材切断至1-2cm长,粉碎机粉碎,过200目筛,得半枝莲粉末;按料液比1:15,取半枝莲粉末和75%乙醇,50-60℃下加热回流提取,提取液过滤,冷冻干燥,得半枝莲提取物。优选的,在室温条件下,将阴干的半枝莲药材切断至1-2cm长,粉碎机粉碎,过200目筛,得半枝莲粉末;按料液比1:15,取半枝莲粉末和75%乙醇,50-60℃下加热回流提取2次,每次2h,合并2次提取液,先滤纸过滤,再滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得半枝莲提取物。
所述含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,所述水红花子提取物的制备方法为:在室温条件下,按料液比1:10,取水红花子粉末和55%乙醇,室温下浸泡30min,超声提取,过滤,冷冻干燥,得水红花子提取物。优选的,在室温条件下,按料液比1:10,取水红花子粉末和55%乙醇,室温下浸泡30min,超声提取2次,每次1.5h,合并提取液,先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液减压浓缩,无菌冷冻干燥,得水红花子提取物。
所述含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,所述夏枯草提取物的制备方法为:在室温条件下,按料液比1:20,取夏枯草粉末和70%乙醇,超声提取,过滤,滤液减压浓缩,冷冻干燥,得夏枯草提取物。优选的,在室温条件下,按料液比1:20,取夏枯草粉末和70%乙醇,超声提取2次,每次2h,合并提取液,先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液减压浓缩,无菌冷冻干燥,得夏枯草提取物。
所述含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,所述泽漆提取物的制备方法为:在室温条件下,将泽漆用粉碎机粉碎,过200目筛,得泽漆粉末;按料液比1:15,取泽漆粉末和60%乙醇,超声提取后,室温浸提,过滤,冷冻干燥,得泽漆提取物。优选的,在室温条件下,将泽漆用粉碎机粉碎,过200目筛,得泽漆粉末;按料液比1:15,取泽漆粉末和60%乙醇,超声提取30min,室温浸提3h,先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得泽漆提取物。
本发明的有益效果是:本发明开创性的技术是将异土木香内酯作为抗肝癌的核心功能性原料,提出用于治疗肝癌的中药组合物,配伍合理,形成具有抗肝癌中草药混合保健品。本发明通过对人体外肝癌细胞的实验研究,发现异土木香内酯组合物对体外肿瘤细胞具有较好的抑制作用,对于肝癌的防治有着非常显著的效果,可以避免过多的化学合成药物造成的毒副作用,而且来源广泛,也使得异土木香内酯组合物受到广泛关注。
附图说明
图1是异土木香内酯组合物抑制hepg2细胞增殖。
图2是异土木香内酯组合物抑制hepg2细胞集落形成。
具体实施方式
实施例1含有异土木香内酯的抗肝癌保健品
(一)异土木香内酯的制备
采用粉碎-乙醇浸提-微波辅助提取分步法的工艺组合提取异土木香内酯,步骤如下:
1)土木香粉碎:取干燥的土木香根茎药材适量,用粉碎机粉碎10-20min,过200目筛,得土木香粉末;
2)乙醇浸提提取:按料液比1:10-1:20,将土木香粉末溶于体积百分浓度为70-90%的乙醇中,室温下浸提20-24h,得乙醇提取混合物;
3)微波辅助提取:将乙醇提取混合物微波处理,温度为40-60℃,提取时间为170-200s,离心,取上清液;
4)将上清液旋转蒸发浓缩,先滤纸过滤后,再用滤膜进行超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得到异土木香内酯干粉。
异土木香内酯含量鉴定:上清液用流动相稀释100倍,经0.22μm微孔滤膜过滤,取20l注入液相色谱仪,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(50:50),流速1.0ml·min-1,检测波长220nm,柱温30℃。经检测,产率为1-2%。
(二)半枝莲提取物的制备
在室温条件下,将阴干的半枝莲药材切断至1-2cm长,粉碎机粉碎,过200目筛,得半枝莲粉末。
按料液比1:15,取半枝莲粉末和75%乙醇,50-60℃下加热回流提取2次,每次2h,合并提取液,提取液先滤纸过滤,再滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得半枝莲提取物。
(三)水红花子提取物的制备
在室温条件下,按料液比1:10,取水红花子粉末和55%乙醇,室温下浸泡30min,超声提取2次,每次提取1.5h,合并提取液,提取液先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液减压浓缩,无菌冷冻干燥,得水红花子提取物。
(四)夏枯草提取物的制备
在室温条件下,按料液比1:20,取夏枯草粉末和70%乙醇,超声提取2次,每次提取2h,合并提取液,先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液减压浓缩,无菌冷冻干燥,得夏枯草提取物。
(五)泽漆提取物的制备
在室温条件下,将泽漆用粉碎机粉碎,过200目筛,得泽漆粉末。
按料液比1:15,取泽漆粉末和60%乙醇,超声提取30min,室温浸提3h,提取液先滤纸过滤,再超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得泽漆提取物。
(六)含有异土木香内酯的抗肝癌保健品组合物(简称异土木香内酯组合物)
由以下原料按重量百分比组成:
异土木香内酯60%,半枝莲提取物10%,水红花子提取物10%,夏枯草提取物10%,泽漆提取物10%。
(七)mtt实验
本实施例使用人肝癌细胞株hepg2细胞,采用mtt法检测异土木香内酯组合物体外抗癌活性,实验步骤如下:
1)取对数生长期的肝癌细胞系(hepg2)细胞接种于96孔培养板,过夜培养使其贴壁;
2)分别加入不同浓度的异土木香内酯组合物(50、100和200μm);
3)培养24h后加入mtt(5mg/ml)20μl/孔,继续培养4h;
4)孵育结束后,弃去上清,加入150μl的dmso,使甲瓒晶体完全溶解;
5)在490nm波长下测吸光度值(od值),根据吸光度计算细胞生长增殖率。结果如图1所示。
如图1所示,不同浓度的异土木香内酯组合物(50、100和200μm)分别孵育hepg2细胞24h,检测细胞增殖情况。结果显示,与正常对照组相比,浓度为100和200μm的异土木香内酯组合物均明显的抑制hepg2的增殖,当浓度达到200μm时,增殖率仅为32.91%,结果表明,异土木香内酯组合物在体外可抑制人肝癌细胞增殖。
(八)集落形成实验
1)取对数生长期的肝癌细胞系(hepg2)细胞制备成单细胞悬液并计数,以每孔1000个细胞的密度接种于6孔培养板,培养过夜使其贴壁。
2)分别加入50、100和200μm的异土木香内酯组合物培养14d,弃去培养基,pbs洗3遍。
3)每孔加入1ml甲醇固定15min,然后用0.5%结晶紫染色15min,用流动水缓慢洗去染液,室温晾干后拍照、计数分析,结果如图2所示。
如图2所示,异土木香内酯组合物抑制肝癌细胞集落形成。异土木香内酯组合物孵育hepg2细胞14d后,集落数量与正常对照组相比明显降低。浓度越大集落形成越少,表明异土木香内酯组合物导致细胞的集落形成能力有所下降,与上述mtt实验结果的变化趋势一致。
实施例2含有异土木香内酯的抗肝癌保健品
(一)-(五)同实施例1。
(六)含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,由以下原料按重量百分比组成:
异土木香内酯80%,半枝莲提取物5%,水红花子提取物5%,夏枯草提取物5%,泽漆提取物5%。
实施例3含有异土木香内酯的抗肝癌保健品
(一)-(五)同实施例1。
(六)含有异土木香内酯的抗肝癌保健品,由以下原料按重量百分比组成:
异土木香内酯70%,半枝莲提取物5%,水红花子提取物10%,夏枯草提取物10%,泽漆提取物5%。