本发明涉及一种多糖生物材料，特别是涉及一种多糖烧伤敷料及其制备方法和应用，属于医药生物技术领域。
背景技术：
烧伤是由于火焰、热水、强酸、强碱、放射性等致伤因素导致皮肤的正常结构遭到破坏，伤及皮肤、肌肉等，临床表现为疼痛、渗液、肿胀、表皮破损。烧伤面积、部位和烧伤深度不同，患者的局部和全身反应也不同，大面积严重烧伤则是危机生命的一种全身性疾病，需要从电解质平衡、防治感染、心、肺、肝、肾功能变化等方面进行治疗。烧伤敷料也是烧伤创面治疗的不可缺少的医用材料，用于覆盖和保护创面，减轻疼痛，吸收渗出液，促进创面愈合，免遭细菌感染等。
临床使用的医用敷料一般有两种：一种是水凝胶敷料，另一种是薄膜烧伤敷料。薄膜烧伤敷料具有良好的机械性能，可以覆盖创面并阻隔微生物、提供气体交换。理想的烧伤敷料需要有良好的组织相容性，能够覆盖创面，并具有良好的吸液性、透气性、抗菌性、促愈合性能，为创面营造一个湿润、微酸、低氧环境。理想的多功能性烧伤敷料，加速烧伤创面愈合，一直是国内外烧伤材料的主要研究方向。
壳聚糖是一种天然高分子聚阳离子多糖，生物相容性好，无免疫原性，无毒副作用，生物安全性好，同时具有止血、镇痛、抗菌、抗感染等多种作用，并能促进创伤愈合，易于制成膜片，具有制备止血敷料、抑菌敷料、烧伤敷料的良好性能。以壳聚糖为原料制备创伤止血、抗菌、促进创面愈合的材料已有报道。这些报道通常是将壳聚糖制成不溶于水的壳聚糖粉、壳聚糖膜、壳聚糖海绵、壳聚糖纤维和织物等，作为烧伤敷料使用。但由于壳聚糖本身的功能效果有限，制备的敷料效果不太理想，需要将壳聚糖与其它与其他材料复合使用，以提高敷料的综合性能。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种多糖烧伤敷料及其制备方法和应用，以满足现有技术的上述需求。
一种多糖烧伤敷料，其特征是由氨基多糖和氧化多糖交联反应而成的膜片状或海绵状产品；其中，所述的氨基多糖是透明质酸、硫酸软骨素、肝素、壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖、磺酸化壳聚糖、羟丁基壳聚糖、羧甲基壳聚糖、琥珀酰壳聚糖或其它壳聚糖衍生物中的一种或几种；所述的氧化多糖，是含双醛基的氧化多糖中的一种或几种，其中含双醛基的糖单元占多糖分子总糖单元的百分数为1%～70%。
所述含双醛基的氧化多糖是氧化淀粉衍生物、氧化纤维素衍生物、氧化海藻多糖衍生物、氧化氨基多糖衍生物、氧化瓜尔胶衍生物、氧化普鲁兰多糖衍生物、氧化黄原胶衍生物、氧化葡聚糖衍生物、氧化右旋糖酐衍生物，或其它氧化植物多糖衍生物中的一种或几种。
上述多糖烧伤敷料的制备方法，其特征是包括以下步骤：用无菌水或无菌生理盐水，分别配制重量百分浓度为0.5～20%的氧化多糖胶液，0.5～20%的氨基多糖胶液；将氧化多糖胶液与氨基多糖胶液混合、快速搅拌均匀，将得到的混合多糖胶液快速在玻璃平板或不锈钢平板或聚苯乙烯平板上延流并刮膜，自然干燥或加热干燥，得膜片状多糖烧伤敷料；或将得到的混合多糖胶液快速在不锈钢或塑料模具中刮平，真空冷冻干燥，得海绵状多糖烧伤敷料。
上述多糖烧伤敷料，在制备治疗烧烫伤创面、溃疡创面、创伤创面的药物或医疗器械中的应用。
本发明的多糖烧伤敷料具有较好的机械强度、柔韧性、通透性，具有促进烧烫伤创面、溃疡创面和创伤创面愈合的作用，显著缩短创面的愈合时间；敷料无毒性，具有较好的生物相容性，具有使用方便、吸收液体量大的特点。因此，本发明的多糖烧伤敷料在制备治疗烧烫伤创面、溃疡创面、创伤创面治疗的药物或医疗器械中的应用，具有广阔的市场前景。
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步详细说明本发明。
一、氧化多糖的制备
实施例1：氧化淀粉的制备
称取淀粉15g，加入500ml玻璃三角瓶中，加水200ml，加热搅拌溶解，用5%（重量百分比，下同）的醋酸水溶液调ph值至ph5.5，加入氧化剂naio43.5g，封口，于室温下避光搅拌氧化反应24h。反应完毕，将反应液装入截留分子量为3000道尔顿的透析袋中，避光、4℃下蒸馏水透析24h，其中每6h更换蒸馏水一次。透析结束后，将透析袋内的液体于冷冻干燥机冷冻干燥48h，制得含双醛基的氧化淀粉13.5g，其双醛基百分含量为12.5%（双醛基百分含量是指多糖分子中含双醛基的糖单元占多糖分子总糖单元的百分数，下同）。
实施例2：氧化羧甲基纤维素的制备
称取羧甲基纤维素粉15g，加入1000ml玻璃三角瓶中，加水800ml，搅拌溶解，用5%的醋酸水溶液调ph值至ph5.5，加入氧化剂kio48g，封口，于室温下避光搅拌氧化反应60h。反应完毕，搅拌下加入4倍体积的95%的乙醇水溶液，沉淀，沉淀物抽滤，用95%的乙醇水溶液洗涤3次，无水乙醇脱水，真空干燥，制得含双醛基的氧化羧甲基纤维素12.1g，其双醛基百分含量为62.5%。
实施例3：氧化海藻酸的制备
称取海藻酸钠15g，加入1000ml玻璃三角瓶中，加水800ml，搅拌溶解，用1mol/l的盐酸水溶液调ph值至ph5.0，加入氧化剂kio49g，封口，于4℃下避光搅拌氧化反应36h。反应完毕，将反应液装入截留分子量为3000道尔顿的透析袋中，避光、4℃下蒸馏水透析24h，其中每6h更换蒸馏水一次。透析结束后，将透析袋内的液体于冷冻干燥机冷冻干燥48h，制得含双醛基的氧化海藻酸钠13g，其双醛基百分含量为48.5%。
实施例4：氧化硫酸软骨素的制备
称取硫酸软骨素12.0g，加入500ml玻璃三角瓶中，加水200ml，搅拌溶解，用1mol/l的盐酸水溶液调ph值至ph5.0，加入氧化剂naio41g，封口，于4℃下避光搅拌氧化反应18h。反应完毕，将反应液装入截留分子量为3000道尔顿的透析袋中，避光、4℃下蒸馏水透析24h，其中每6h更换蒸馏水一次。透析结束后，将透析袋内的液体于冷冻干燥机冷冻干燥48h，制得含双醛基的氧化硫酸软骨素11.3g，其双醛基百分含量为2.5%。
实施例5：氧化透明质酸的制备
称取透明质酸5g，加入1000ml玻璃三角瓶中，加水500ml，搅拌溶解，用5%的醋酸水溶液调ph值至ph5.5，加入氧化剂naio42.5g，封口，于室温下避光搅拌氧化反应24h。反应完毕，将反应液装入截留分子量为3000道尔顿的透析袋中，避光、4℃下蒸馏水透析24h，其中每6h更换蒸馏水一次。透析结束后，将透析袋内的液体于冷冻干燥机冷冻干燥48h，制得含双醛基的氧化透明质酸3.9g，其双醛基百分含量为30.8%。
在上述实施例1～5中，采用高碘酸氧化法制备了含双醛基的氧化多糖。高碘酸氧化法可以对多种生物多糖进行氧化，如淀粉、醋酸酯淀粉及其它淀粉衍生物，羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素及其它纤维素衍生物，海藻酸钠，岩藻多糖，琼脂多糖，肝素，硫酸软骨素，透明质酸，壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖、羟丁基壳聚糖、琥珀酰壳聚糖、羧甲基壳聚糖及其它壳聚糖衍生物，羟乙基甲壳素、羟丙基甲壳素、羟丁基甲壳素、羧甲基甲壳素及其它甲壳素衍生物，瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶及其它瓜尔胶衍生物，葡聚糖，右旋糖酐，以及本领域技术人员能够制备的其它多糖，如白芨多糖、芦荟多糖等。上述多糖经高碘酸氧化后，分子中都含有双醛基，均可作为本发明所述的烧伤敷料制备的原材料。
二、多糖烧伤敷料的制备
所述的多糖烧伤敷料的制备中使用的原材料、容器、器皿等均为无菌状态，制备在无菌条件下完成，具体制备方法如下：
实施例6：多糖烧伤敷料1的制备
称取氧化羧甲基纤维素（双醛基含量为62.5%）0.5g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入溶剂无菌水40ml，搅拌下溶解，得重量百分比浓度为1.25%的氧化多糖胶液。称取磺酸化壳聚糖0.8g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入溶剂无菌水40ml，搅拌下溶解，得重量百分浓度为2%的氨基多糖胶液。将40ml氧化多糖胶液倒入40ml氨基多糖胶液中，等比例、搅拌均匀，得到的混合多糖胶液快速倒在洁净的玻璃平板（或不锈钢平板或聚苯乙烯平板）上延流并刮膜，控制胶液用量，使干膜的厚度为100～1000μm，自然干燥（或加热干燥），得膜片状多糖烧伤敷料1。
实施例7：多糖烧伤敷料2的制备
称取氧化海藻酸（双醛基含量为48.5%）2g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入溶剂无菌生理盐水40ml，搅拌下溶解，得重量百分比浓度为5%的氧化多糖胶液。羟丙基壳聚糖4g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入溶剂无菌生理盐水40ml，搅拌下溶解，得重量百分浓度为10%的氨基多糖胶液。将40ml氧化多糖胶液倒入40ml氨基多糖胶液中，等比例、搅拌均匀，得到的混合多糖胶液快速倒在洁净的玻璃平板（或不锈钢平板或聚苯乙烯平板）上延流并刮膜，控制胶液用量，使干膜的厚度为200～1500μm，自然干燥（或加热干燥），得膜片状多糖烧伤敷料2。
实施例8：多糖烧伤敷料3的制备
称取氧化淀粉（双醛基含量为12.5%）3.5g，称取氧化透明质酸（双醛基含量为30.8%）2.5g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入无菌水溶剂40ml，搅拌下溶解，得重量百分比浓度为15%的氧化多糖胶液。称取羟乙基壳聚糖3g，称取琥珀酰壳聚糖3g，置于100ml的玻璃烧杯中，加入无菌水溶剂40ml，搅拌下溶解，得重量百分浓度为15%的氨基多糖胶液。将40ml氧化多糖胶液倒入40ml氨基多糖胶液中，等比例、搅拌均匀，得到的混合多糖胶液快速倒入50mm×50mm×5mm的不锈钢（或塑料）模具中，刮平，放入真空冷冻干燥机中-45℃冷冻2～10小时后，真空冷冻干燥36～48小时，得海绵状多糖烧伤敷料3。
在上述实施例6～8多糖烧伤敷料的制备中，所述的氧化多糖，其特征是含双醛基的氧化多糖中的一种或几种，其中含双醛基的糖单元占多糖分子总糖单元的百分数为1%～70%。所述的氧化多糖，是氧化淀粉衍生物、氧化纤维素衍生物、氧化海藻多糖衍生物、氧化氨基多糖衍生物、氧化瓜尔胶衍生物、氧化普鲁兰多糖衍生物、氧化黄原胶衍生物、氧化葡聚糖衍生物、氧化右旋糖酐衍生物，或其它氧化植物多糖衍生物；氧化多糖的分子中都含有双醛基，均能达到相似的效果。所述的氧化淀粉衍生物，是指氧化淀粉、氧化醋酸酯淀粉，或其它氧化淀粉衍生物；所述的氧化纤维素衍生物，是指氧化羧甲基纤维素、氧化羟乙基纤维素、氧化羟丙基纤维素，或其它氧化纤维素衍生物；所述的氧化海藻多糖衍生物，是指氧化海藻酸多糖、氧化岩藻多糖、或氧化琼脂多糖；所述的氧化氨基多糖衍生物，是指氧化肝素、氧化硫酸软骨素、氧化透明质酸、氧化壳聚糖、氧化羟乙基壳聚糖、氧化羟丙基壳聚糖、氧化羟丁基壳聚糖、氧化琥珀酰壳聚糖、氧化羧甲基壳聚糖、氧化羟乙基甲壳素、氧化羟丙基甲壳素、氧化羟丁基甲壳素、氧化羧甲基甲壳素，或其它含双醛基的氧化壳聚糖衍生物、氧化甲壳素衍生物；所述的氧化瓜尔胶衍生物，是指氧化瓜尔胶、氧化羟丙基瓜尔胶，或其它含氧化瓜尔胶衍生物；所述的其它氧化植物多糖衍生物，是指氧化白芨多糖、氧化芦荟多糖，或其它氧化植物多糖。
在上述实施例6～8多糖烧伤敷料的制备中，所述的氨基多糖，是透明质酸、硫酸软骨素、肝素、壳聚糖、羟乙基壳聚糖、羟丙基壳聚糖、磺酸化壳聚糖、羟丁基壳聚糖、羧甲基壳聚糖、琥珀酰壳聚糖或其它壳聚糖衍生物中的一种或几种。
三、多糖烧伤敷料作为烧伤治疗敷料的应用
实施例9：多糖烧伤敷料作为促进烧烫伤溃疡创面愈合的生物材料的应用
大鼠深ⅱ度烫伤溃疡模型制备及分组治疗：将32只大鼠背部用脱毛膏脱毛，生理盐水擦拭干净，腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉。倒置口径2.2cm的无底三角瓶于大鼠背部中线脱毛处，内装99℃热水300ml，烫伤18s，制作大鼠深ⅱ度烫伤溃疡模型。在烫伤结束时用无菌刀片刮除烫伤处表面皮层，生理盐水将创面擦拭干净。将烫伤大鼠分为阴性对照组、多糖敷料1组、多糖敷料2组，阴性对照组大鼠的烫伤创面不做治疗处理，多糖敷料1组大鼠在烫伤创面贴附无菌膜片状多糖烧伤敷料2（长宽为3cm×3cm），多糖敷料2组大鼠在烫伤创面贴附无菌海绵状多糖烧伤敷料3（长宽为3cm×3cm），各组创面均贴敷无菌敷贴固定，实验大鼠单笼饲养，每天观察创面愈合情况，每3d细心更换创面材料。
大鼠深ⅱ度烫伤溃疡创面愈合情况：烫伤后1d，对照组创面潮红，有组织液渗出；多糖敷料1组、2组创面较为湿润，敷料与创面粘合，无明显组织液渗出。烫伤后7d，对照组痂皮较厚，基底泛白；2个敷料组痂皮外周开始溶解剥脱。烫伤后14d，对照组创面痂皮厚硬且颜色暗红，2个敷料组痂皮外围溶解明显，部分脱落，形成新的皮肤。烫伤后21d，对照组痂皮外围溶解脱落，出现新生表皮；2个敷料组创面大部分愈合，中间小部分愈合不完全。实验结果显示，多糖烧伤敷料对大鼠深ⅱ度烫伤溃疡创面的愈合具有促进作用，与对照组比较，显著缩短创面的愈合时间。
本发明的多糖烧伤敷料具有较好的机械强度、柔韧性、通透性，具有促进烧烫伤溃疡创面愈合的作用，显著缩短创面的愈合时间；敷料无毒性，具有较好的生物相容性。因此，本发明的多糖烧伤敷料可以在制备烧烫伤创面、溃疡创面、创伤创面治疗的药物或医疗器械中应用，作为药物或医疗器械进行开发，用于治疗烧烫伤创面、溃疡创面和创伤创面，具有广阔的市场前景。