3，7-二（二正丙胺基）-吩噻嗪-5-鎓碘化物与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用的制作方法

本发明属于医药领域，具体涉及一种3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用。

背景技术：

sdt是一种有前景的非入侵治疗肿瘤的方法，超声照射治疗可以聚焦于肿瘤病灶区，而对正常组织基本没有什么损害，同时比光辐射有更强的穿透性。由于sdt具有相对小的不良反应，且具有无创的优点，sdt一经提出立刻受到全世界学者的高度重视。由于该方法对于治疗肿瘤细胞有较强的针对性以及对正常组织的无创伤性，所以对于治疗肿瘤，特别是组织深层肿瘤有着较好的应用前景。声动力疗法(sdt)是利用超声能穿透生物组织深部，激活在肿瘤组织中富集并可长时间满留的声敏物质，而产生协同效应杀伤肿瘤细胞的治疗方法。声动力疗法在抗肿瘤领域的独特优势与临床应用潜力得到了国内外学者的广泛关注，其中声敏剂研究是推动sdt早日应用于临床抗肿瘤的关键。

亚甲蓝(mb)作为一种吩噻嗪类化合物，其声动力抗肿瘤活性已经被证实。本课题组在mb基础上合成多个衍生物，其中prb具有较好的声动力活性。该研究有望为筛选声动力活性更优的声敏剂提供参考，并为推动sdt早日广泛应用于抗肿瘤临床奠定理论基础。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用。

本发明采用的技术方案为：

1.3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用。

所述的应用，所述肿瘤细胞为k562细胞。

所述的应用，所述超声频率为40khz。

所述的应用，所述超声功率450w。

所述的应用，所述超声温度为20℃。

所述的应用，所述超声过程在避光条件下进行。

所述的应用，所述prb的浓度为12.5μmol/l。

所述的应用，所述prb的制备方法包括如下步骤：

(1)室温下，称取吩噻嗪2.0860g溶于100ml的二氯甲烷溶液中，称取碘固体8.4056g溶于400ml二氯甲烷中，将碘的二氯甲烷溶液缓慢滴加到吩噻嗪的二氯甲烷溶液后，搅拌24h，抽滤，所得沉淀加二氯甲烷连续搅拌16h进行洗涤，得中间产物吩噻嗪-5-鎓四碘化物；

(2)室温下，将二正丙胺的甲醇溶液缓慢滴加到吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液中，所述吩噻嗪-5-鎓四碘化物与二正丙胺的摩尔比为1:14，继续搅拌，以薄层色谱法判断反应终点，抽滤得到滤液，旋蒸后粗产物，加入50ml二氯甲烷和5％的稀盐酸进行萃取，收集下层溶液用蒸馏水洗涤，得3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物。

所述的应用，产物纯化包括：先用柱层析梯度洗脱，洗脱剂分别为甲醇:二氯甲烷＝1:100和甲醇:二氯甲烷＝1:50；再用薄层层析，展开剂为甲醇:二氯甲烷＝1:30，即可得到3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物纯品。

本发明具有以下有益效果：

本发明以k562细胞为研究对象，结合低频超声，公开了3,7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)作为声敏剂与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用，prb自身具有一定的抑制肿瘤细胞增殖效果，实验证明prb与超声协同作用后，能够更明显有效的抑制肿瘤细胞k562细胞的增殖，其抑制效果明显优于单独使用prb或超声，为吩噻嗪类化合物声动力活性以及为更高活性声敏剂的构效关系研究提供有力理论支持，并推动sdt用于抗肿瘤临床。

附图说明

图1为单独超声、单独使用prb、prb与超声协同作用于k562细胞的抑制作用对比图

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

通过prb与超声协同作用，可以达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。

实施例1：3,7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)的制备

包括如下步骤：

1)中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物的合成

称取2.0860g吩噻嗪置于烧杯中，向烧杯中加入100ml二氯甲烷进行搅拌溶解，得到黄绿色吩噻嗪的二氯甲烷溶液，再将其转移至1000ml茄形瓶中。

称取8.4056g碘固体于烧杯中，向烧杯中加入400ml二氯甲烷进行搅拌溶解，得到紫红色碘的二氯甲烷溶液，分次加入滴液漏斗中。

于室温下，向吩噻嗪的二氯甲烷溶液中缓慢滴加碘的二氯甲烷溶液，边滴加边搅拌。滴加完于常温下继续搅拌24h，可观察到黄绿色反应物溶液颜色逐渐发生变化，最终呈深棕色。用薄层板检测反应，展开剂选择甲醇:二氯甲烷＝1:30，出现清晰的绿色斑点即反应完全。反应结束后，对溶液进行抽滤得到深灰色固体。将此深灰色固体加入含100ml二氯甲烷的茄形瓶中，连续搅拌16h进行洗涤。之后进行抽滤，得到银灰色固体，干燥，得中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物，产率82％。

2)3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物的合成

称取2.1945g中间体吩噻嗪-5-鎓四碘化物于烧杯中，用200ml甲醇使其溶解，得吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液。

称取4.2420g的二正丙胺，用30ml甲醇溶解，得二正丙胺的甲醇溶液。

室温下，向吩噻嗪-5-鎓四碘化物的甲醇溶液中缓慢滴加二正丙胺的甲醇溶液，采用薄层板检测反应是否完全，选择的展开剂是体积比为1:30的甲醇与二氯甲烷，若反应完全可见到清晰蓝色斑点。反应完成后将产物溶液抽滤，滤液旋蒸得到固体物，再用50ml二氯甲烷将此固体物溶解，置于分液漏斗，加入50ml体积分数为5％的稀盐酸溶液洗涤两次，振荡后静置，使其分层，将收集到的下层溶液用适量蒸馏水洗涤两次，并加入无水硫酸钠适量干燥，避光放置24h。最后将其抽滤，滤液旋蒸得到深蓝色3,7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物。

3)产物纯化

将3,7--二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物粗产物先用柱层析梯度洗脱，洗脱剂分别为甲醇:二氯甲烷＝1:100和甲醇:二氯甲烷＝1:50再用薄层层析，展开剂为甲醇:二氯甲烷＝1:30。即可得到3,7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物纯品。

实施例2：3，7-二(二正丙胺基)-吩噻嗪-5-鎓碘化物(prb)与超声协同抑制肿瘤细胞增殖的应用

将k562细胞株接种于含15％胎牛血清、1％双抗的rpmi1640培养基中，在37℃、5％co2、饱和湿度的培养箱中培养，实验所用为对数生长期细胞。

取对数生长期的k562细胞，离心后弃掉上清液，取培养基3ml吹悬细胞。将细胞悬液随机分为空白组、单纯超声组、单纯药物组(prb)和超声结合药物组(超声+prb)，每组细胞悬液最终密度为5×10⁴cells/ml。在无菌条件下，单纯药物组和超声结合药物组细胞悬液分别分装至5mlep管中，用培养基稀释药物浓度至12.5μmol/l，并用此含药培养基稀释细胞，得到适量密度为5×10⁴cells/ml的细胞悬液；空白组和单纯超声组细胞悬液同样分别装至5mlep管中，用培养基稀释细胞，得到适量密度为5×10⁴cells/ml的细胞悬液。以上四组细胞均避光孵育30min。将超声组和超声结合药物组进行超声处理1min，超声时ep管用封口膜密封。超声结束后，于无菌条件下将上述各组细胞接种至96孔细胞培养板，每孔200μl,每组设置4个复孔。置于培养箱中孵育24h后，每孔加20μlmtt后，将96孔细胞培养板置于培养箱中继续孵育4h。离心去除上清液，每孔加人150μl的dmso，振荡8min后于酶标仪测定波长490nm测定各孔的吸光值(od值)，采用公式(1)计算肿瘤细胞抑制率。

实验结果显示，单独超声对k562细胞增殖的抑制率为13.4％±1.83％，单独的prb对k562细胞的增殖抑制率为57.7％±2.10％，而prb协同超声对k562细胞的增殖抑制率为78.5％±2.19％，明显高于单独超声以及单独药物对k562细胞增殖的抑制作用。