含有盐酸小檗碱和PD1-抗体的预防和/或治疗肿瘤的联用药物的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含有盐酸小檗碱和pd1-抗体的预防和/或治疗肿瘤的联用药物。
背景技术：
：肿瘤免疫治疗已经成为继手术治疗、放射治疗和化疗药物治疗之后的第四大肿瘤治疗疗法，也是目前最热门的肿瘤治疗手段。目前肿瘤免疫治疗主要包括免疫疫苗、免疫检查点抑制剂治疗、过继性免疫细胞治疗和细胞因子治疗等，其中免疫检查点抑制剂治疗以其显著的临床疗效而备受瞩目，而以“pd-1/pd-l1”为代表的免疫药物在癌症研究和治疗领域展现出令人鼓舞的临床效果，为患者的重生带来了崭新的希望。“pd-1/pd-l1”是人体免疫系统的重要组成部分t细胞上的一个药物靶点，针对这一靶点设计的药物可以激活t细胞对肿瘤细胞的免疫作用，从而唤醒患者自身的抗肿瘤效应。由于pd-1/pd-l1抗体药物在疗效上相较于传统疗法有明显的优势，全球各大药企都在积极开发新药，并扩大已上市药物的适应症。然而，研究发现，不是所有患者都对此类药物有良好反应，这可能与人体内pd-1抗体的数量与分布相关，这也对医生更有针对性的个体化诊疗和用药提出了要求。另外，免疫抑制剂的治疗给癌症的治疗带来新希望的同时，它们的毒性作用也引起了人们的关注。由于免疫抑制剂治疗是通过利用机体自身的免疫系统，能够解除免疫系统的抑制状态，因此免疫检查点抑制剂的相关不良事件包括几乎所有的器官。在炎症过程中，pd-l1对于维护免疫抑制的环境是至关重要的，任何由干扰素激发的组织都会表达pd-l1来减轻t细胞在炎症过程中所造成的损伤。如果对病人使用pd-l1抑制剂，会使系统的免疫抑制失效，这增加了肿瘤周边炎症损伤的可能性。pd-l1抑制剂组成的治疗会导致副作用和自体免疫时间的发生率更高，而pd-1抑制剂主要影响t细胞，因此不会使身体发生不必要的自体免疫事件，免疫和非免疫细胞都具有表达pd-l1的能力，pd-l1无处不表达的潜力是理解pd-1和pd-l1抑制剂之间安全性差异的关键。在一项56名患有自身免疫病的晚期非小细胞肺癌患者的研究中，研究人员对这些患者接受pd-1抑制剂的治疗情况作了评价。这56名患者合并的自身免疫性疾病，包括：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、多发性肌炎、干燥综合征、银屑病关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎等。pd-1抑制剂治疗之前，10名患者自身免疫病的症状尚未控制、11名患者还用着免疫抑制剂来控制自身免疫病。用了pd-1抑制剂以后，56名患者中，13名患者自身免疫病症状加重，疾病开始活动，但是疾病活动的程度大多数都是1-2级的，只有13％的患者是3级的，没有出现4-5级的自身免疫病活动。不过，那些用药前症状尚未控制的患者，有一半人在pd-1抑制剂使用后，出现了自身免疫病加重。治疗结果，56名患者接受pd-1抑制剂治疗后，11名患者肿瘤明显缩小、15名患者肿瘤稳定——客观有效率和疾病控制率，与那些没有自身免疫病的患者，基本相当。因此，以pd-1为靶点之细胞免疫疗法的副作用可见一斑。盐酸小檗碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、金葡菌、链球菌、伤寒杆菌及阿米巴原虫有抑制作用，临床主要用于肠道感染及菌痢等。目前，尚没有文献报道将盐酸小檗碱与pd-1抗体药物联合使用治疗肿瘤，减少其治疗副作用的相关报道。技术实现要素：为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种含有盐酸小檗碱和pd1-抗体的预防和/或治疗肿瘤的联用药物。当pd-1抗体为nivolumab时，发现将其与盐酸小檗碱联合使用，比nivolumab单独使用有更好的肿瘤敏感性，将二者联用有协同增效的作用，同时可以减少nivolumab单独使用的治疗副作用。本发明的目的通过下述技术方案实现：本发明提供了一种含有盐酸小檗碱和pd1-抗体的预防和/或治疗肿瘤的联用药物，包含不同规格单位制剂的用于依次给药的盐酸小檗碱和pd1-抗体。进一步地，所述pd-1抗体为nivolumab。进一步地，所述联用药物中盐酸小檗碱和nivolumab的重量配比为(1～2.5):1。进一步地，所述盐酸小檗碱和nivolumab的重量配比为1:1。进一步地，所述盐酸小檗碱和nivolumab的重量配比为2.5:1。进一步地，所述肿瘤包括以下肿瘤的一种或几种：卵巢癌、肺癌、胃癌、肝癌、结直肠癌、食管癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、脑瘤或胰腺癌。进一步地，本发明药物还可含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。本文中所述“药学上可接受的载体”是指用于治疗及给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂，并且是本领域普通技术人员所熟知的。进一步地，所述联用药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂。进一步地，所述药物制剂为注射剂。进一步地，所述联用药物为依次给药的药物。在本发明的一个优选例中，每天一次或多次地依次施用盐酸小檗碱和nivolumab，其中盐酸小檗碱和nivolumab给药途径包括但不限于注射给药，腹腔给药；优选的注射给药包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射或者腔内注射。优选地，两者依次给药时，可以是相同的给药途径或是不同的给药途径。在本发明的一个优选例中，盐酸小檗碱适用于腹腔注射，nivolumab静脉注射给药。在施用本发明药物时，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能的范围之内的。本发明还提供了上述药物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种盐酸小檗碱与nivolumab联用药物，其对多种肿瘤的抑制能力显著优于单独使用nivolumab的效果，二者联用取得了协同增效的作用，提高了实验小鼠对nivolumab药物的敏感性，同时可以减少nivolumab单独使用的治疗副作用，疗程结束后，实验小鼠体重保持稳定，与现有技术相比，取得了显著的进步。附图说明图1为盐酸小檗碱联合nivolumab对肝癌移植瘤小鼠体重的影响；图2为盐酸小檗碱联合nivolumab对肺癌移植瘤小鼠体重的影响；图3为盐酸小檗碱联合nivolumab对乳腺癌移植瘤小鼠体重的影响；图4为盐酸小檗碱联合nivolumab对结肠癌移植瘤小鼠体重的影响。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。实施例1、盐酸小檗碱的制备取黄连粗粉100g，用900ml50％乙醇回流提取2次，每次1h，合并两次提取液，减压浓缩，直至提取液呈棕红色糖浆状。向糖浆状的黄连流浸膏中加入1％乙酸使其溶解，趁热抽滤，向滤液中滴加浓盐酸调节ph为1.0，室温放置冷却，即有黄色颗粒状物质析出，抽滤，用冰冷水洗涤两次，丙酮洗涤一次，50℃烘干，即得盐酸小檗碱粗品。粗品用水(70ml/1g粗品)溶解加热，滴加浓盐酸调节ph值至2-3后趁热过滤，在室温下静置使之缓缓冷却。析出结晶后，抽滤、干燥。取适量重结晶后的盐酸小檗碱，用40-80目硅胶拌样。取200-300目活化好的硅胶，干法装柱。用甲醇-乙酸乙酯(1:1)洗脱，等体积法接样，每份50ml。洗脱过程中各组分以tlc检测,将含有相同成分的洗脱液合并，减压浓缩至20ml左右，挥干有机溶剂，得到黄色针状结晶即为盐酸小檗碱，纯度98％。实施例2、试验用鼠nivolumab抗体制备以表达pd-1抗体5c4基因的可变区与鼠igg2b基因恒定区融合为杂合抗体，将该基因合成并克隆到pegfp-c1质粒中，在293f细胞中瞬时转染表达pd-1。通过proteina柱、分子筛以及内毒素清除柱纯化后，使其纯度达98％，内毒素低于1eu/ml，溶解于磷酸盐缓冲液，冻干后保存。实验例一、盐酸小檗碱与nivolumab联合用药对动物皮下移植瘤生长的抑制作用及对动物的毒性作用。1.1受试药物：实施例1制备的盐酸小檗碱和实施例2制备的nivolumab。1.2实验动物：32只c57bl/6鼠，雌性，体重约20g，6周龄，spf级，所有小鼠自由取食和饮水，在室温(25±2)℃条件下饲养。饲料及水均经高压灭菌处理，全部饲养过程为spf级。1.3实验方法：1.3.1荷瘤小鼠模型的建立与干预分别制备4种皮下移植瘤模型：肝癌细胞株huh7、肺癌细胞株a549、乳腺癌细胞株mcf-7、结肠癌细胞株lovo在细胞对数期收集细胞，制成浓度为5.0×106/ml的细胞悬液，c57bl/6鼠右前肢腋下注射200ul细胞悬液，8-10天左右肿瘤长至直径约4-6mm为造模成功。每种肿瘤模型随机分为4组，每组8只小鼠，按照以下方式给药：阴性对照组(静脉注射生理盐水组)；nivolumab给药组(静脉注10mg/kg组)；盐酸小檗碱低剂量联用组(腹腔注射rh10mg/kg加nivolumab10mg/kg)；盐酸小檗碱高剂量联用组(腹腔注射rh25mg/kg加nivolumab10mg/kg)。其中，盐酸小檗碱每天给药一次，连续给药16天；nivolumab每4天给药一次，共4次；16天后给小鼠行安乐死，称瘤重，计算抑瘤率＝[1-实验组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重]×100％。1.3.2结果统计学分析小鼠皮下接种肿瘤细胞后，成功制备皮下移植瘤模型，盐酸小檗碱联合nivolumab可显著抑制肿瘤生长，给药16天后瘤重均显著低于nivolumab对照组(p<0.05，p<0.01)(见表1-4)，而且小鼠体重下降较单用nivolumab组为少(图1-4)，表明rh联合nivolumab用于抑制肿瘤生长显著优于单独使用nivolumab，且小鼠的耐受性更好，具体结果见下表1-4。表1rh联合nivolumab对肝癌细胞株huh7的抑制效果组别平均移植瘤重量(g)平均抑瘤率(％)阴性对照组2.05±0.22-nivolumab组1.13±0.5644.9盐酸小檗碱低剂量联用组0.89±0.24*56.6盐酸小檗碱高剂量联用组0.71±0.16**65.4注：*p<0.05vsnivolumab组；**p<0.01vsnivolumab组。表2rh联合nivolumab对肺癌细胞株a549的抑制效果组别平均移植瘤重量(g)平均抑瘤率(％)阴性对照组2.70±0.14-nivolumab组1.03±0.6161.9盐酸小檗碱低剂量联用组0.71±0.24**73.7盐酸小檗碱高剂量联用组0.51±0.25**81.1注：**p<0.01vsnivolumab组。表3rh联合nivolumab对乳腺癌细胞株mcf-7的抑制效果注：*p<0.05vsnivolumab组；**p<0.01vsnivolumab组。表4rh联合nivolumab对结肠癌细胞株lovo的抑制效果组别平均移植瘤重量(g)平均抑瘤率(％)阴性对照组2.25±0.20-nivolumab组1.33±0.4340.9盐酸小檗碱低剂量联用组0.83±0.21**63.1盐酸小檗碱高剂量联用组0.57±0.24**74.7注：**p<0.01vsnivolumab组。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页12