一种索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物及其在制备抗癌药物中的应用的制作方法

本发明涉及一种抗癌组合药物，更具体的说涉及一种用于抗癌的索拉菲尼和青蒿素类化合物组合药物为活性成分的药物。

技术背景

索拉菲尼(sorafenib，商品名nexavar)是一种口服的多激酶抑制剂，临床用于治疗肾细胞癌和肝癌。索拉菲尼可以通过抑制raf/mek/erk信号通路抑制肿瘤细胞增殖，同时还能阻断vegf通路，抑制肿瘤血管生长。

青蒿素类化合物是以青蒿素为代表的含有过氧基团的倍半萜内酯药物。青蒿素是从植物黄花蒿茎叶中提取分离获得，二氢青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚均为青蒿素的半合成衍生物。近年来，研究发现青蒿素类化合物类药物在抗癌方面具有良好的活性，具体作为抗癌药物可能有两种应用方式：一种是作为单独使用的抗肿瘤药物；另一种是与其他肿瘤化疗药物联合使用，作为一种增敏剂的抗肿瘤药物。

技术实现要素：

为解决索拉菲尼单独使用副作用大，易产生耐药性等问题，本发明提供了一种由索拉菲尼和青蒿素类化合物的组合药物为活性成分的药物，所述组合药物的活性成分为索拉菲尼和青蒿素类化合物两种成分组成。

其中的组合药物方案之一为是索拉菲尼和青蒿素的组合药物。

其中的组合药物方案之一为是索拉菲尼和二氢青蒿素的组合药物。

其中的组合药物方案之一为是索拉菲尼和青蒿琥酯的组合药物。

其中的组合药物方案之一为是索拉菲尼和蒿甲醚的组合药物。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗癌症的药物中的应用。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗肝癌的药物中的应用。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗肾癌的药物中的应用。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗结肠癌的药物中的应用。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗肺癌的药物中的应用。

所述的索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。

本发明的有益技术效果是：索拉菲尼和青蒿素类化合物的组合药物为活性成分的药物，具有显著的协同抗肿瘤效应。

附图说明：

图1各组组合药物抗肝癌活性体外模型影像；

图2各组组合药物抗肾癌活性体外模型影像；

图3各组组合药物抗结肠癌活性体外模型影像；

图4各组组合药物抗肺癌活性体外模型影像；

图5各组组合药物抗乳腺癌活性体外模型影像；

图6各组小鼠肝癌肿瘤组织对比影像；

图7各组小鼠肝癌肿瘤组织的病理切片影像；

其中，图6数字1、2、3、4、5、6分别为空白组、对照组1、对照组2、实验组1、实验组2和实验组3中切除肿瘤细胞；

图7数字1、2、3、4、5、6分别为空白组、对照组1、对照组2、实验组1、实验组2和实验组3中切除肿瘤细胞的切片。

具体实施方式

实施例1索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物抗癌活性考察

1、索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物抗肝癌活性的体外模型考察

将人肝癌细胞hepg2系接种入6孔板中，每孔2ml细胞悬液。培养介质为dmem培养液，并添加有10％fbs和2mm谷氨酸盐。接种24小时后，分别添加索拉菲尼、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、索拉菲尼与青蒿素组合药物、索拉菲尼与蒿甲醚组合药物、索拉菲尼与青蒿琥酯组合药物、索拉菲尼与二氢青蒿素组合药物；对照组培养基不加药物。添加药物24小时后，加入荧光染料sytox染色。sytox可以穿透受损细胞膜，但不能穿透活细胞膜，因此死亡细胞能与sytox结合而发绿色荧光，而活细胞不发光。首先通过荧光显微镜观察细胞的死亡情况(具体如图1所示)，然后通过流式细胞仪测定不同给药情况下的sytox荧光率，评估不同给药组细胞的死亡率。结果如表1所示。

表1索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物对肝癌hepg2细胞的抑制作用

2、索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物抗肾癌活性的体外模型考察

将人肾癌细胞uok268系接种入6孔板中，每孔2ml细胞悬液。培养介质为dmem培养液，并添加有10％fbs和2mm谷氨酸盐。接种24小时后，分别添加索拉菲尼、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、索拉菲尼与青蒿素组合药物、索拉菲尼与蒿甲醚组合药物、索拉菲尼与青蒿琥酯组合药物、索拉菲尼与二氢青蒿素组合药物；对照组培养基不加药物。添加药物24小时后，加入荧光染料sytox染色。sytox可以穿透受损细胞膜，但不能穿透活细胞膜，因此死亡细胞能与sytox结合而发绿色荧光，而活细胞不发光。首先通过荧光显微镜观察细胞的死亡情况(具体如图2所示)，然后通过流式细胞仪测定不同给药情况下的sytox荧光率，评估不同给药组细胞的死亡率。结果如表2所示。

表2索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物对肾癌细胞uok268细胞的抑制作用

3、索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物抗结肠癌活性的体外模型考察

将人结肠癌细胞hct116系接种入6孔板中，每孔2ml细胞悬液。培养介质为dmem培养液，并添加有10％fbs和2mm谷氨酸盐。接种24小时后，分别添加索拉菲尼、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、索拉菲尼与青蒿素组合药物、索拉菲尼与蒿甲醚组合药物、索拉菲尼与青蒿琥酯组合药物、索拉菲尼与二氢青蒿素组合药物；对照组培养基不加药物。添加药物24小时后，加入荧光染料sytox染色。sytox可以穿透受损细胞膜，但不能穿透活细胞膜，因此死亡细胞能与sytox结合而发绿色荧光，而活细胞不发光。首先通过荧光显微镜观察细胞的死亡情况(具体如图3所示)，然后通过流式细胞仪测定不同给药情况下的sytox荧光率，评估不同给药组细胞的死亡率。结果如表3所示。

表3索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物对结肠癌细胞hct116细胞的

抑制作用

4、索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物抗肺癌活性的体外模型考察

将人肺癌细胞h292系接种入6孔板中，每孔2ml细胞悬液。培养介质为dmem培养液，并添加有10％fbs和2mm谷氨酸盐。接种24小时后，分别添加索拉菲尼、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、索拉菲尼与青蒿素组合药物、索拉菲尼与蒿甲醚组合药物、索拉菲尼与青蒿琥酯组合药物、索拉菲尼与二氢青蒿素组合药物；对照组培养基不加药物。添加药物24小时后，加入荧光染料sytox染色。sytox可以穿透受损细胞膜，但不能穿透活细胞膜，因此死亡细胞能与sytox结合而发绿色荧光，而活细胞不发光。首先通过荧光显微镜观察细胞的死亡情况(具体如图4所示)，然后通过流式细胞仪测定不同给药情况下的sytox荧光率，评估不同给药组细胞的死亡率。结果如表4所示。

表4索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物对肺癌细胞h292细胞的抑制作用

5、索拉菲尼与青蒿素类化合物的组合药物抗乳腺癌活性的体外模型考察

将人乳腺癌细胞t47d系接种入96孔板中，每孔100μl细胞悬液。培养介质为dmem培养液，并添加有10％fbs和2mm谷氨酸盐。接种24小时后，分别添加索拉菲尼、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、索拉菲尼与青蒿素组合药物、索拉菲尼与蒿甲醚组合药物、索拉菲尼与青蒿琥酯组合药物、索拉菲尼与二氢青蒿素组合药物；对照组培养基不加药物。添加药物24小时后，加入荧光染料sytox染色。sytox可以穿透受损细胞膜，但不能穿透活细胞膜，因此死亡细胞能与sytox结合而发绿色荧光，而活细胞不发光。首先通过荧光显微镜观察细胞的死亡情况(具体如图5所示)，然后通过流式细胞仪测定不同给药情况下的sytox荧光率，评估不同给药组细胞的死亡率。结果如表5所示。

表5索拉菲尼与青蒿素类化合物组合药物对乳腺癌细胞t47d细胞的抑制作用

实施例6索拉菲尼与二氢青蒿素的组合药物抑制肝癌的动物实验考察

将索拉菲尼和二氢青蒿素按照重量比5:1混合得到实验组1药物、将索拉菲尼和二氢青蒿素按照重量比1:1混合得到实验组2药物，将索拉菲尼和二氢青蒿素按照重量比1:5混合得到实验组3药物，将索拉菲尼作为对照组1药物，二氢青蒿素作为对照组2药物。选取雌性小鼠30只，剃毛，随机分为6组，分别命名为空白组、对照组1、对照组2、实验组1、实验组2和实验组3。采用肝癌huh-7细胞，接种于雌性裸鼠皮下，每只接种3x10⁶个细胞，待10天后，肿瘤体积长到100mm³左右，各组小鼠分别给药对应名称的实验药物。索菲拉尼给药剂量为10mg/kg，二氢青蒿素的给药剂量为10mg/kg，实验组1的给药剂量为索拉菲尼5mg/kg和二氢青蒿素1mg/kg，实验组2的给药剂量为索拉菲尼5mg/kg和二氢青蒿素5mg/kg，实验组3的给药剂量为索拉菲尼1mg/kg和二氢青蒿素5mg/kg，空白组腹腔注射蒸馏水。各组均为每天腹腔注射给药一次。14d后，切除肿瘤细胞(具体如图6所示)，进行病理切片检查(如图7所示)，发现索拉菲尼和二氢青蒿素的组合药物具有明显的协同作用，其作用明显优于单独使用低剂量的二氢青蒿素或单独使用低剂量的索菲拉尼。