本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种治疗咳嗽的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：咳嗽是一种呼吸道常见症状，由于气管、支气管黏膜或胸膜受炎症、异物、物理或化学性刺激引起，表现先是声门关闭，呼吸肌收缩，肺内压升高，然后声门张开，肺内空气喷射而出。通常伴随声音。咳嗽具有清除呼吸道异物和分泌物的保护性作用。但如果咳嗽不停，由急性转为慢性，常给患者带来更大的痛苦，如胸闷、咽痒、喘气等，咳嗽可伴随咳痰。中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1581-93公开了咳宁冲剂，【处方】松塔930g，棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，加蔗糖粉适量，制成颗粒或压块，干燥，即得。【用法与用量】开水冲服，一次10g，一日3次。咳宁冲剂由于三味药采取水醇提取，枇杷叶中齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)有效成分较低，且杂质较多，其辅料为蔗糖，颗粒剂服用不方便，且每次服用量达10g,服用量较大，而糖尿病人不宜服用。中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1582-93公开了咳宁糖浆，【处方】松塔930g棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至适量，加蔗糖400g与防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，滤液加水至1000ml，搅匀，即得。咳宁糖浆由于三味药采取水醇提取，枇杷叶中齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)有效成分较低，杂质较多，其辅料为蔗糖，且含有防腐剂，每次服用量达10ml,服用量较大，含防腐剂，糖尿病人不宜服用。申请号cn200710160509.2，一种用于镇咳祛痰、平喘的中药颗粒剂，其特征在于由活性成分和辅料组成，其活性成分和辅料的重量份为：活性成份300～600稀释剂800～1800粘合剂0.1～0.4所述的活性成分是由以下重量份的原料制备而成的：松塔60～120棉花根40～70枇杷叶10～40。其特征在于活性成分是用以下方法制备而成的：将松塔、棉花根、枇杷叶3味药材，加水煎煮1～3次，每次加水量为松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的6～12倍，每次煎煮时间为1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相当于松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的0.2～0.5倍，放冷，加乙醇至含乙醇的重量百分比浓度为40％～60％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30的清膏，即得到活性成分。cn200710160509.2也是三味药采取水醇提取，但水醇提取杂质较多，枇杷叶中齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)有效成分较低，杂质较多，颗粒剂服用不方便。咳宁颗粒是贵州大隆药业有限责任公司生产的品种之一，发明人经过长期大量的试验研究，在原基础上优化了配方中的枇杷叶用量，将枇杷叶由原来的水醇提取采取水提过柱后醇提，并将原颗粒剂改为胶囊剂，解决了有效成分含量低，杂质多，颗粒剂服用量不方便的技术问题。技术实现要素：本发明的目的是克服现有技术中三味药水醇提取、枇杷叶中齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)有效成分较低，杂质较多、颗粒剂服用不方便的技术问题。本发明的目的是提供一种治疗咳嗽的药物组合物。本发明的另一目的是提供一种治疗咳嗽的药物组合物的制备方法。本发明提供一种治疗咳嗽的药物组合物，该药物组合物由以下重量份的药物制成：由松塔268-320份、棉花根280-336份、枇杷叶350-420份组成，其活性成份为：松塔、棉花根水醇提取物，枇杷叶水提过柱后醇提提取物。本发明所述枇杷叶水提过柱后醇提提取物具体步骤如下：将枇杷叶水提取，然后过大孔吸附树脂柱，用60-90％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥，粉碎成细粉，即得。优选的，本发明所述枇杷叶水提过柱后醇提提取物具体步骤如下：将药材加5-8倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟-18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6-0.8g/ml,上样量为1-3g生药/ml树脂；吸附速度为8-15ml/分钟；洗脱速度为16-25ml/分钟；水洗脱体积为3-6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3-8倍柱体积浓度为75-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，即得。进一步优选的，本发明所述枇杷叶水提过柱后醇提提取物具体步骤如下：将药材加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，即得。本发明所述治疗咳嗽的药物组合物具体步骤如下：松塔、棉花根加水煎煮，煎液滤过，滤液浓缩，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得。优选的，本发明所述的松塔、棉花根水醇提取物具体步骤如下：松塔、棉花根加3-5倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，即得。本发明所述药物组合物还含有药学上可接受的载体或稀释剂。本发明所述药物组合物的制备方法包括以下步骤:1)将枇杷叶加5-8倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟-18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6-0.8g/ml,上样量为1-3g生药/ml树脂；吸附速度为8-15ml/分钟；洗脱速度为16-25ml/分钟；水洗脱体积为3-6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3-8倍柱体积浓度为75-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮1-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入药学上可接受的辅料按常规工艺制成药学上可接受的制剂。优选的，本发明所述药物组合物的制备方法包括以下步骤:1)将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，即得。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入药学上可接受的辅料按常规工艺制成药学上可接受的制剂。本发明所述的提取物在制备治疗咳嗽药物中的应用。倍量的含义是指药材的重量比。所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。本发明的有益效果：1、与现有技术相比1)本发明优化了各药材的配方量比重，重点使用枇杷叶，增强了止咳的功效。2)本发明将制备方法由现有技术的三味药水醇提技术优化将枇杷叶采取水提过柱后醇提，由于方中枇杷叶量最大，通过水提过柱后醇提可以对其齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)等有效成分的富集，经测定本发明齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量1.538％；对比例1为0.723％，对比例2为0.705％，对比例3为0.751％。2、本发明动物试验显试咳嗽潜伏期较对比例1、对比例2、对比例3长，本发明在2分钟内咳嗽次数较对比例1、对比例2、对比例3次数少。3、本发明的药物能提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率，延长金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活时间，效果优于对比例组。4、本发明药物能不同程度地降低醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加，其抑制率高于对比例1及对比例2及对比例3。5、本发明药物能降低二甲苯引起的小鼠耳肿胀度，其抑制率为47.65％，而对比例1组抑制率为42.28％，对比例2组抑制率为40.26％，对比例3组抑制率为43.29％。6、本发明治疗咳嗽具有良好的作用，且无毒副作用。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1组方：松塔268kg、棉花根280kg、枇杷叶350kg。制备方法：1)将枇杷叶加5倍量水煎煮1次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6g/ml,上样量为1g生药/ml树脂；吸附速度为8ml/分钟；洗脱速度为16ml/分钟；水洗脱体积为3-倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3倍柱体积浓度为75％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮1次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。实施例2组方：松塔268kg、棉花根280kg、枇杷叶350kg。制备方法：1)将枇杷叶加8倍量水煎煮3次，每次3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.8g/ml,上样量为3g生药/ml树脂；吸附速度为15ml/分钟；洗脱速度为25ml/分钟；水洗脱体积为6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用8倍柱体积浓度为90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。实施例3组方：松塔268kg、棉花根280kg、枇杷叶350kg。制备方法：1)将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。。2)松塔、棉花根加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，即得。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。实施例4组方：松塔320kg、棉花根336kg、枇杷叶420kg。制备方法：1)将枇杷叶加5倍量水煎煮1次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6g/ml,上样量为1g生药/ml树脂；吸附速度为8ml/分钟；洗脱速度为16ml/分钟；水洗脱体积为3-倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3倍柱体积浓度为75％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮1次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。实施例5组方：松塔320kg、棉花根336kg、枇杷叶420kg。制备方法：1)将枇杷叶加8倍量水煎煮3次，每次3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.8g/ml,上样量为3g生药/ml树脂；吸附速度为15ml/分钟；洗脱速度为25ml/分钟；水洗脱体积为6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用8倍柱体积浓度为90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。实施例6组方：松塔320kg、棉花根336kg、枇杷叶420kg。制备方法：1)将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。。2)松塔、棉花根加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，即得。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。试验例发明人对组方、提取、成型工艺进行了大量的实验研究，具体如下：一、组方来源本发明是在咳宁颗粒的基础上优化配方及工艺而来的，原配方具有镇咳祛痰，平喘，扶正固本，用于反复咳嗽，咯痰历年不愈，遇寒即发，咳喘胸满；慢性支气管炎，受凉引冒咳嗽。但发明人经过反复试验，发现按以下方法配伍后，镇咳祛痰，平喘效果更明显。枇杷叶具有清热解毒、祛痰止咳功效，发现将配方加大枇杷叶用量，成为君药后，其止咳效果明显；松塔祛痰，止咳，平喘，棉花根具有平喘止咳的功效，松塔与棉花根在本方中配合枇杷叶使用，使痰去咳止，共凑镇咳祛痰，平喘、扶正固本的功效。二、工艺的筛选1、本发明工艺是发明人通过试验后，基于以下目的而来的。现有技术的三味药水醇提技术优化而来，现有技术中三味药采取水醇提取，但水醇提取杂质较多，枇杷叶中齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)有效成分较低。1)将枇杷叶采取水提过柱后醇提，由于方中枇杷叶量最大，通过水提过柱后醇提可以对其有效成分齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)等有效成分富集。2)咳宁颗粒是贵州大隆药业有限责任公司生产的品种之一，发明人经过长期大量的试验研究，在原基础上优化了配方中的枇杷叶用量，将枇杷叶由原来的水醇提取采取水提过柱后醇提，并将原颗粒剂改为胶囊剂，以期解决有效成分含量低，杂质多，颗粒剂服用量不方便的技术问题。2、药材枇杷叶的选择与工艺研究枇杷叶具有清热解毒、祛痰止咳功效，本发明首先对枇杷叶进行研究，调整枇杷叶用量，成为主药。2.1枇杷叶提取不同加水量的有效成分齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量考察，结果见表12.1.1含量测定方法：【含量测定】照高效液相色谱法(附录ⅵd)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5％醋酸铵溶液(67：12：21)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品、熊果酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含齐墩果酸50μg、熊果酸0.2mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)的总量不得少于0.70％。表1枇杷叶不同加水量提取有效成分结果表编号提取方法齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量(％)15倍量1.28126倍量1.52538倍量0.913由表1可知，提取加水量与有效成份齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量有较大的关系，最佳方案为6倍量水提取，较好方案为5倍量水提取，可行方案为8倍量水提取。2.2加水提取次数的考察加水量采取最佳加水量，然后考察不同提取次数有效成分齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量，结果见表22.2.1含量测定方法：同2.1.1表2枇杷叶不同提取次数有效成分结果表编号提取方法(次)齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量(％)111.257221.513330.906由表2可知，提取次数与有效成份齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量有较大的关系，最佳方案为2次，较好方案为1次，可行方案为3次。2.3加水提取次数的考察采取最佳加水量、提取次数，然后考察不同提取时间有效成分齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量，结果见表32.3.1含量测定方法：同2.1.1表3枇杷叶不同提取次数有效成分结果表编号提取时间(小时)齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量(％)111.249221.508330.918由表3可知，提取时间与有效成份齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量有较大的关系，最佳方案为2小时，较好方案为1小时，可行方案为3小时。2.3过大孔吸附树脂柱的考察2.3.1采取最佳加水量、提取次数、提取时间，然后考察不过树脂以及过树脂不同参数有效成分齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量，结果见表42.3.2考察方法：a方法(过树脂)：将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为75-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。b方法(过树脂)将枇杷叶加5倍量水煎煮1次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6g/ml,上样量为1g生药/ml树脂；吸附速度为8ml/分钟；洗脱速度为16ml/分钟；水洗脱体积为3-倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3倍柱体积浓度为75％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。c方法(过树脂)将枇杷叶加8倍量水煎煮3次，每次3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.8g/ml,上样量为3g生药/ml树脂；吸附速度为15ml/分钟；洗脱速度为25ml/分钟；水洗脱体积为6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用8倍柱体积浓度为90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。d方法(不过树脂)：将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2.3.3含量测定方法：同2.1.1表4枇杷叶提取过树脂不同参数与不过树脂有效成分结果表编号样品齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量(％)1a方法(过树脂)1.2872b方法(过树脂)1.5163c方法(过树脂)0.9314d方法(不过树脂)0.706由表4可知，过树脂齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量最高达到了1.516％，而未过树脂的齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量为0.706％。通过上述实验可知，本发明可行制备方法为：1)将枇杷叶加8倍量水煎煮3次，每次3小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为18分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.8g/ml,上样量为3g生药/ml树脂；吸附速度为15ml/分钟；洗脱速度为25ml/分钟；水洗脱体积为6倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用8倍柱体积浓度为90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。较好制备方法为：1)将枇杷叶加5倍量水煎煮1次，每次1小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为13分钟分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.6g/ml,上样量为1g生药/ml树脂；吸附速度为8ml/分钟；洗脱速度为16ml/分钟；水洗脱体积为3-倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用3倍柱体积浓度为75％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。2)松塔、棉花根加水煎煮1次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。最佳制备方法为：1)将枇杷叶加6倍量水煎煮2次，每次2小时，提取液滤过，合并滤液，趁热离心，转速为2000rpm，时间为15分钟，倾出上清液，过大孔吸附树脂柱，上样液浓度为0.7g/ml,上样量为2g生药/ml树脂；吸附速度为11ml/分钟；洗脱速度为20ml/分钟；水洗脱体积为4倍柱体积，洗脱液呈淡黄色，弃去水洗脱液，然后用6倍柱体积浓度为75-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥，粉碎成细粉，备用。。2)松塔、棉花根加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约800ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩干燥，即得。3)取步骤1)及2)备用的细粉，混合均匀，加入批总量2％的淀粉，混合，装入胶囊，得胶囊剂。三、本发明与对比例有效成份含量比较1、试验样品，本发明实施例3的胶囊剂、对比例1、对比例2、对比例3。1)对比例1组的配方及方法中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1581-93公开了咳宁冲剂，【处方】松塔930g，棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，加蔗糖粉适量，制成颗粒或压块，干燥，即得。【用法与用量】开水冲服，一次10g，一日3次。2)对比例2组的配方及方法中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1582-93公开了咳宁糖浆，【处方】松塔930g棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至适量，加蔗糖400g与防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，滤液加水至1000ml，搅匀，即得。3)对比例3组的配方及方法申请号cn200710160509.2，一种用于镇咳祛痰、平喘的中药颗粒剂，其特征在于由活性成分和辅料组成，其活性成分和辅料的重量份为：活性成份300～600稀释剂800～1800粘合剂0.1～0.4所述的活性成分是由以下重量份的原料制备而成的：松塔60～120棉花根40～70枇杷叶10～40。其特征在于活性成分是用以下方法制备而成的：将松塔、棉花根、枇杷叶3味药材，加水煎煮1～3次，每次加水量为松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的6～12倍，每次煎煮时间为1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相当于松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的0.2～0.5倍，放冷，加乙醇至含乙醇的重量百分比浓度为40％～60％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30的清膏，即得到活性成分。2、【含量测定】照高效液相色谱法(附录ⅵd)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5％醋酸铵溶液(67：12：21)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品、熊果酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含齐墩果酸50μg、熊果酸0.2mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率50khz)30分钟，放冷，再称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)的总量不得少于0.70％。3、含量测定结果，见表5：表5含量测定结果表样品齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量(％)本发明实施例31.538对比例10.723对比例20.705对比例30.751从表5可知，本发明齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量1.538％；对比例1为0.723，对比例2为0.705，对比例3为0.751。四、为验证本方法的可行性，进行药效学研究如下：1实验材料1.1实验动物及仪器健康昆明种雄性小鼠50只，体重18～22g。1.2实验药品：模型组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、本发明实施例3组。1)对比例1组的配方及方法中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1581-93公开了咳宁冲剂，【处方】松塔930g，棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩成稠膏状，加蔗糖粉适量，制成颗粒或压块，干燥，即得。【用法与用量】开水冲服，一次10g，一日3次。2)对比例2组的配方及方法中国药品质量标准标准编号：ws3-b-1582-93公开了咳宁糖浆，【处方】松塔930g棉花根560g枇杷叶280g。【制法】以上三味，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至600ml，放冷，加乙醇使含醇量为50％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至适量，加蔗糖400g与防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，滤液加水至1000ml，搅匀，即得。3)对比例3组的配方及方法申请号cn200710160509.2，一种用于镇咳祛痰、平喘的中药颗粒剂，其特征在于由活性成分和辅料组成，其活性成分和辅料的重量份为：活性成份300～600稀释剂800～1800粘合剂0.1～0.4所述的活性成分是由以下重量份的原料制备而成的：松塔60～120棉花根40～70枇杷叶10～40。其特征在于活性成分是用以下方法制备而成的：将松塔、棉花根、枇杷叶3味药材，加水煎煮1～3次，每次加水量为松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的6～12倍，每次煎煮时间为1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相当于松塔、棉花根、枇杷叶3味药材重量的0.2～0.5倍，放冷，加乙醇至含乙醇的重量百分比浓度为40％～60％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.30的清膏，即得到活性成分。2实验方法2.1对氨水喷雾致小鼠咳嗽的影响将50只昆明小鼠，雌雄各半，随机分为5组：模型组、对比例1组、对比例2组，对比例3组，本发明实施3组，每组10只小鼠。本发明实施例4的药物组合物：由大隆药业有限责任公司提供。模型组：等体积蒸馏水。对比例1组：对比例1的配方及方法制备而成。对比例2组：对比例2的配方及方法制备而成。对比例3组：对比例3的配方及方法制备而成。每日给药2次，模型组给予等体积蒸馏水，末次给药后1.5小时，将小鼠逐只放入玻璃烧杯中，上面加盖，雾化杯中加入13％的氨水45ml,送雾管连接雾化器与玻璃烧杯，以中度送风和最大送雾量的一定功率开机，喷雾6s停止，观察并记录引起小鼠咳嗽所需时间(咳嗽潜伏期)及2min内咳嗽次数，以t检验进行组间比较。结果见表6。表6：对氨水喷雾致小鼠咳嗽的影响(n＝10)组别剂量咳嗽潜伏期/s2分钟内咳嗽次数/次模型组-16.8±2.922.32±5.7对比例1组10g/次33.7±1.8*12.23±2.1*对比例2组10ml/次32.4±5.9*13.89±3.1*对比例3组4g/次34.1±2.810.58±1.8本发明实施例34g/次38.21±3.1**8.3±1.5**由表6可知，本发明实施例3咳嗽潜伏期较对比例1、对比例2、对比例3长，本发明在2分钟内咳嗽次数较对比例1、对比例2、对比例3次数少。3、抗菌作用3.1对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用。取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，各组按表6所示的剂量灌胃给药，每天给药2次，连续5天，模型组灌胃等体积蒸馏水，第3天给药后60min，除正常对照组外，腹腔注射金黄色葡萄球菌培养液(含菌量为1个ld50)0.5ml/只。观察动物感染及给药后的发病及死亡情况，记录7天内的死亡数。结果详见表7。表7对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用(n＝20)注：与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。从表7可以看出，本发明实施例3的药物均能不同程度地提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率，延长金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活时间，效果优于对比例组。4、抗炎作用①对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只,各组按表7所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续3天，模型组灌胃等体积蒸馏水。末次给药后30min，尾静脉注射0.4％伊文思蓝生理盐水溶液0.20ml/10g，随行腹腔注射0.50％醋酸0.12ml/10g，20min后，处死小鼠，打开腹腔，用5ml生理盐水反复冲洗腹腔三次，收集洗涤液，1000rpm离心5min，紫外分光光度计550nm处测定吸收度(od值)。结果详见表8。表8对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响(n＝10)注：与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。从表8可以看出，本发明药物能降低醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加，其抑制率高于对比例1及对比例2及对比例3。②对二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎作用取昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只。各组按表8所示的剂量灌胃给药，每天1次，连续3天，模型组灌胃等体积蒸馏水，末次给药后40min，小鼠右耳两面涂二甲苯0.05ml/只，左耳不涂。30min后处死小鼠，分别在双耳相同部位打下圆片，称重，计算肿胀度＝(右耳重量-左耳重量)、肿胀抑制率＝[(模型组肿胀度均值-给药组肿胀度均值)/模型组肿胀度均值×100％]。结果详见表9。表9对二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎作用(n＝10)组别剂量(g/kg)耳廓肿胀度(mg)肿胀抑制率(％)模型-0.0298士0.0021-对比例1组10g/次0.0172士0.0028**42.28对比例2组10ml/次0.0178士0.0016*40.26对比例3组4g/次0.0169士0.0026**43.29本发明实施例3组4g/次0.0156士0.0035*47.65注：与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。从表9可以看出，本发明实施例3的药物能降低二甲苯引起的小鼠耳肿胀度，其抑制率为47.65％，而对比例1组抑制率为42.28％，对比例2组抑制率为40.26％，对比例3组抑制率为43.29％。小结，表8～9的实验结果表明，本发明药物组合物对化学物质刺激引起的炎症反应具有一定的对抗作用。总结：综上所述，1、与现有技术相比，1)本发明优化了各药材的配方量比重，重点使用枇杷叶，增加了止咳的功效。2)本发明将制备方法由现有技术的三味药水醇提技术优化将枇杷叶采取水提过柱后醇提，由于方中枇杷叶量最大，通过水提过柱后醇提可以对其齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)等有效成分的富集，经测定本发明齐墩果酸(c30h48o3)和熊果酸(c30h48o3)含量1.538％；对比例1为0.723％，对比例2为0.705％，对比例3为0.751％。2、本发明咳嗽潜伏期较对比例1、对比例2、对比例3长，本发明在2分钟内咳嗽次数较对比例1、对比例2、对比例3次数少。3、本发明的药物能提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率，延长金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活时间，效果优于对比例组。4、本发明药物能不同程度地降低醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加，其抑制率高于对比例1及对比例2及对比例3。4、本发明实施例3的药物能降低二甲苯引起的小鼠耳肿胀度，其抑制率为47.65％，而对比例1组抑制率为42.28％，对比例2组抑制率为40.26％，对比例3组抑制率为43.29％。虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12