本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
糖尿病是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病，糖尿病患者体内糖、脂肪、蛋白质的代谢紊乱可导致高血压、肾脏病变、血管病变等一系列慢性并发症，糖尿病已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。国际糖尿病联合会(idf)最新发布的第8版《糖尿病概览》(diabetesatlas)指出，2017年全球约4.25亿成人患糖尿病，预计到2045年，糖尿病患者可能达到6.29亿，每6秒即有1位糖尿病患者死亡，全球每年死于糖尿病的人数超过了疟疾、肺结核与艾滋病的致死人数总和。我国糖尿病患者已超1亿，成人糖尿病和糖尿病前期患病率分别为11.6％和50.1％，呈高度流行态势。目前，临床上主要采用化学药物治疗糖尿病，其具有降血糖作用强、起效快的特点，但往往缺乏整体的协调性，同时存在疗效有限、长期用药后毒副作用较大、可能引发和加重并发症等缺点。中草药在我国用于治疗糖尿病已有几千年的历史，临床经验丰富，已有不少验方在临床中得到了很好的应用。近来研究表明，中草药可通过多环节、多靶点降低血糖、减轻糖尿病对机体损害、控制和延缓糖尿病并发症，且中药有效成分具有疗效稳定、毒性小、不良反应少等优点，尤其适用于防治糖尿病并发症。因此，从中草药中筛选和研发高效低毒的糖尿病治疗药物仍然是创新药物研发的重点之一，具有显著的重要性和迫切性。
蒲桃种子，中药名，为桃金娘科植物蒲桃syzygiumjambos(l.)alston的种子。分布于福建、广东、广西、海南、贵州、云南、台湾等地。具有健脾，止泻之功效。常用于脾虚泄泻，久痢，糖尿病。现有技术虽然有对蒲桃种子提取物具有降血糖的报道，但其对蒲桃种子中有效成分的研究不够深入，仅仅在蒲桃种子经水或醇提取后做的简单研究。而本领域技术人员都知道，蒲桃种子中含有的大量的化学成分，那么哪些成分或哪些有效部位具有降血糖作用，现有技术未做深入的研究。而对于蒲桃种子，如何制备富集大量具有降血糖成分的有效部位是本领域技术人员的研究方向之一。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，提供一种具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物及其制备方法；所述的蒲桃种子提取物富集了大量的降血糖和降血脂有效成分，其降血糖和降血脂效果显著。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种具有降血糖或降血脂作用的蒲桃种子提取物的制备方法，其包含如下步骤：
取蒲桃种子，用乙醇提取得蒲桃种子醇提物；
将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取1～3次，得蒲桃种子萃取物，即具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物；所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇组成的混合有机溶剂。
优选地，所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇按体积比1～3:1组成的混合有机溶剂。
优选地，所述的乙醇提取，采用的是体积分数为95％的乙醇提取。
优选地，所述的乙醇提取是指乙醇加热回流提取，所述的加热回流提取次数为1～3次，每次提取时间为1～2h，蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：5～10ml。
优选地，所述的制备方法，进一步包括硅胶柱层析步骤，所述的硅胶柱层析步骤具体为：
将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用体积比为95～92:5～8的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为88～85:12～15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物。
进一步优选地，所述的硅胶柱层析步骤具体为：
将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物。
更进一步优选地，所述的硅胶柱层析步骤具体为：
将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用2～4倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用4～6倍柱体积的体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物。
最优选地，所述的硅胶柱层析步骤具体为：
将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物。
所述的柱体积是指用硅胶填料装柱后，从柱的底板到硅胶填料沉积表面的体积。
本发明还提供一种由上述制备方法制备得到的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物。
本发明还提供一种由上述具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物在制备药物或保健品中的应用。
有益效果：本发明提供了一种全新的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物的制备方法；由该方法制备得到的蒲桃种子提取物富集了大量的降血糖和降血脂有效成分，其降血糖和降血脂效果显著；该方法经乙醇提取后，采用了由乙酸乙酯和正丁醇的混合有机溶剂进行萃取，由实施例试验可以看出采用混合溶剂萃取得到的萃取物，其降血糖和降血脂作用要优于采用单独乙酸乙酯和正丁醇萃取得到的萃取物；进一步地，所述的方法还包括硅胶柱层析步骤，由实施例试验可以看出，在本发明所述的硅胶柱层析条件下可以进一步富集效果更优异的降血糖和降血脂有效成分；经对比，在其它硅胶柱层析条件下并不能富集具有降血糖或降血脂的有效成分，或不能富集效果更好的具有降血糖或降血脂的有效成分。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物，即具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇按体积比2:1组成的混合有机溶剂；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中混合有机溶剂的体积与水的体积比为1:1。
实施例2蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物；
(3)将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积比为87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的具有降血糖或降血脂作用蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇按体积比2:1组成的混合有机溶剂；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中混合有机溶剂的体积与水的体积比为1:1；
步骤(3)硅胶柱中硅胶的目数为300目，硅胶的重量用量为蒲桃种子萃取物重量的30倍。
对比例1蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物，即蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中有机溶剂的体积与水的体积比为1:1。
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1萃取过程中仅仅用了乙酸乙酯，而实施例1萃取过程中则是采用了由乙酸乙酯和正丁醇组成的混合有机溶剂。
对比例2蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物，即蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为正丁醇；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中有机溶剂的体积与水的体积比为1:1。
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1萃取过程中仅仅用了正丁醇，而实施例1萃取过程中则是采用了由乙酸乙酯和正丁醇组成的混合有机溶剂。
对比例3蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物；
(3)将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的体积比为93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇按体积比2:1组成的混合有机溶剂；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中混合有机溶剂的体积与水的体积比为1:1；
步骤(3)硅胶柱中硅胶的目数为300目，硅胶的重量用量为蒲桃种子萃取物重量的30倍。
对比例3与实施例2的不同之处在于，硅胶柱层析的洗脱条件不同。对比例3是先用93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集80:20的洗脱部位；而实施例2则是先用93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集87:13的洗脱部位。对比例3和实施例2的除杂洗脱溶剂比例相同，而洗脱的洗脱溶剂比例不同，其洗脱使用了更大极性的洗脱溶剂比例。
对比例4蒲桃种子提取物的制备
(1)取蒲桃种子，用乙醇加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并并浓缩提取液，去除溶剂后得蒲桃种子醇提物；
(2)将蒲桃种子醇提物加水混悬，然后用有机溶剂萃取2次，合并萃取液浓缩去除溶剂得蒲桃种子萃取物；
(3)将制备得到的蒲桃种子萃取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的体积比为85:15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积比为80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集该洗脱部位，浓缩干燥后即得所述的蒲桃种子提取物；
步骤(1)中所述的蒲桃种子与乙醇的用量比为1g：8ml；
步骤(2)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯和正丁醇按体积比2:1组成的混合有机溶剂；所述蒲桃种子醇提物与水的用量比为1g：20ml；每次萃取过程中混合有机溶剂的体积与水的体积比为1:1；
步骤(3)硅胶柱中硅胶的目数为300目，硅胶的重量用量为蒲桃种子萃取物重量的30倍。
对比例4与实施例2的不同之处在于，硅胶柱层析的洗脱条件不同。对比例3是先用85:15的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用80:20的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集80:20的洗脱部位；而实施例2则是先用93:7的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱除杂；然后再用87:13的环己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂洗脱，并收集87:13的洗脱部位。对比例4和实施例2的除杂洗脱溶剂比例与洗脱溶剂比例不同，其均使用了更大极性的洗脱溶剂比例。
实施例3蒲桃种子提取物的降血糖降血脂效果评价
取昆明种雄性小鼠(km)，spe级，体质量(20±2)g，购自广东省实验动物中心。适应性喂养1周后，随机抽取10只作为空白组，喂养常规饲料，其余小鼠喂养高糖高脂饲料(饲料中含20％的猪油、20％的蛋黄粉、10％的蔗糖、2％的胆固醇、1％的胆酸盐和47％常规饲料)。4周后，禁食8h，空白组小鼠给予ph4.4柠檬酸缓冲液40mg/kg腹腔注射4次，高糖高脂饮食组小鼠给予stz溶液(ph4.4柠檬酸缓冲液配制)40mg/kg腹腔注射4次，每天1次，继续用同样的饲料喂养各组小鼠。stz注射1周后，小鼠尾静脉取血，测定血糖值，将血糖值在11.1mmol/l以上的定为实验性糖尿病模型小鼠。
取上述实验性糖尿病模型小鼠进行随机分组，分为模型组与实验组具体分组情况见表1和表2，每组各10只；同时设正常的小鼠做正常组以及阳性对照药二甲双胍组做对照。实验组进行灌胃给药，给药剂量为200mg/(kg·d)；模型组和正常组灌胃生理盐水；阳性对照药二甲双胍组给予阳性对照药二甲双胍，剂量为200mg/(kg·d)。每天灌胃给药1次，连续4周。每周末称量体重1次，根据体重调整给药剂量。每周取血测空腹血糖值以及第四周后测tg，tc，ldl-c，hdl-c值；抽血前小鼠禁食12h；具体结果见表1和表2。
所述实验组分别给药情况如下：实验组1给予实施例1制备得到的蒲桃种子提取物；实验组2给予实施例2制备得到的蒲桃种子提取物；实验组3给予对比例1制备得到的蒲桃种子提取物；实验组4给予给予对比例2制备得到的蒲桃种子提取物；实验组5给予给予对比例3制备得到的蒲桃种子提取物；实验组6给予给予对比例4制备得到的蒲桃种子提取物。
表1本发明蒲桃种子提取物对糖尿病小鼠空腹血糖的影响
由表1数据可以看出：试验组1(实施例1蒲桃种子提取物)显示一定的降血糖作用，这说明蒲桃种子经本发明乙醇提取和混合溶剂萃取后具有一定的降血糖作用。试验组2(实施例2蒲桃种子提取物)其降血糖效果与实验组1相比有了大幅的提升，且其降血糖效果要优于二甲双胍组；这说明所述的蒲桃种子进一步经本发明所述的硅胶柱层析后，富集了大量的降血糖成分，其降血糖效果十分显著，且要优于阳性对照药二甲双胍。
由实验组1(实施例1蒲桃种子提取物)和实验组3(对比例1蒲桃种子提取物)、4(对比例2蒲桃种子提取物)相比，可以看出，实验组1的降血糖数据要优于实验组3和4的降血糖数据；这说明在萃取步骤中采用由乙酸乙酯和正丁醇组成的混合有机溶剂进行萃取，得到的蒲桃种子提取物的降血糖效果要优于单独采用乙酸乙酯或正丁醇进行萃取得到的蒲桃种子提取物。
由实验组2(实施例2蒲桃种子提取物)和实验组5(对比例3蒲桃种子提取物)、6(对比例4蒲桃种子提取物)相比，可以看出，实验组2的降血糖数据要远远优于实验组5和6的降血糖数据；这说明采用本发明所述的硅胶柱层析洗脱条件能富集到大量的效果优异的降血糖成分，而采用其他洗脱条件不能富集或不能富集具有很好效果的降血糖成分。
表2.蒲桃种子提取物对血清tg，tc，ldl-c，hdl-c的影响
由表2数据可以看出：试验组1(实施例1蒲桃种子提取物)显示一定的降血脂作用，这说明蒲桃种子经本发明乙醇提取和混合溶剂萃取后具有一定的降血脂作用。试验组2(实施例2蒲桃种子提取物)其降血糖效果与实验组1相比有了大幅的提升；这说明所述的蒲桃种子进一步经本发明所述的硅胶柱层析后，富集了大量的降血脂成分，其降血脂效果十分显著。
由实验组1(实施例1蒲桃种子提取物)和实验组3(对比例1蒲桃种子提取物)、4(对比例2蒲桃种子提取物)相比以及由实验组2(实施例2蒲桃种子提取物)和实验组5(对比例3蒲桃种子提取物)、6(对比例4蒲桃种子提取物)相比，可以看出，实验组1的降血脂数据要优于实验组3和4的降血脂数据；实验组2的降血脂数据要远远优于实验组5和6的降血脂数据。这说明在萃取步骤中采用由乙酸乙酯和正丁醇组成的混合有机溶剂进行萃取，得到的蒲桃种子提取物的降血脂效果要优于单独采用乙酸乙酯或正丁醇进行萃取得到的蒲桃种子提取物；采用本发明所述的硅胶柱层析洗脱条件能富集到大量的效果优异的降血脂成分，而采用其他洗脱条件不能富集或不能富集具有很好效果的降血脂成分。