肾茶总黄酮提取物在制备预防或治疗尿路结石药物中的应用的制作方法

本发明涉及医药、食品和保健品技术领域，具体地说，涉及一种肾茶总黄酮提取物在制备预防或治疗尿路结石药物中的应用。

背景技术：

泌尿结石又称作尿石症，发病率高，是泌尿外科患者中最常见的疾病。结石可见于肾、膀胱、输尿管和尿道的任何部位。临床症状表现为腹腰部痛、血尿、尿频、尿急、小便疼痛等，可引起泌尿道梗阻不畅、尿道损伤、积水、感染、肾功能受损等危害。大量的流行病学资料表明泌尿结石与遗传、年龄、性别、饮食习惯、营养状况、尿路感染、环境、代谢异常、血脂异常等诸多因素均有关系。这是一种全球性常见疾病，欧美国家发病率为5％-12％(assimosdg.predictivefactorsandmanagementofsteinstrasseaftershockwavelithotripsyinpediatricurolithiasis-amultivariateanalysisstudy.jurol，2013,189(3):1089-1090)，我国患者基数大，发病率在120/10万-6020/10万(zengg,maiz,xias,etal.prevalenceofkidneystonesinchina:anultrasonographybasedcross-sectionalstudy.bjuint,2017)。泌尿结石有着高复发率的特点，5年复发率为50％左右，10年内复发率高达80％-90％(brianhe,davidsg.anomogramforthepredictionofkidneystonerecurrence.jamsocnephrol，2014,25(12):2685-2687)。因此，这是一种慢性、易复发的疾病，严重影响着患者的生命质量，并给患者、家庭以及社会均带来沉重的负担，尽管可以通过外科手术、体外震波碎石等方法治愈，但结石患者在复发率上并未减少，且费用昂贵，对机体创伤较大，目前常用的药物主要为溶石或防止结石增大的药物，这些药物仅对尿酸结石和胱氨酸结石可以达到溶解的目的，而其他类型的结石目前尚无药物可以溶解(泌尿系结石的治疗方法及最新进展.临床与病理杂志,2017,37(12):2726-2731)。因此，寻求治疗或预防泌尿性结石的药物仍是世界医学界面临的一项艰巨任务和难题。

肾茶(clerodendranthusspicatus(thunb.)c.y.wu)，为唇形科肾茶属植物，因其雄蕊长得酷似猫的胡须，又名猫须草(orthosiphon)。分布于我国福建、台湾、海南、广西、云南、浙江等地。民间药用全草，以其利尿作用而闻名，具有清热去湿、排石利水之功效，广泛用于治疗急慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿性关节炎等疾病。肾茶的化学成分主要为黄酮类、酚酸类、萜类、甾体皂苷类、木脂素类、烷基糖苷类、蒽醌类、氨基酸、有机酸等多种活性成分(赵爱华，赵勤实，李蓉涛，等.肾茶的化学成分.云南植物研究，2004，(5)：563-568)。研究发现猫须草的甲醇提取物对草酸晶体形成的抑制作用(chemometrintelllabsyst,2006,81:21-28)。arafat等(jethnopharmacol,2008,118:354-360.)用急性和慢性尿酸血症sd大鼠模型验证猫须草水醇提取物(0.5、0.1、2.0g/kg)，表现出明显的利尿、利钠、利钾尿及降低尿酸的作用。日本学者发现肾茶中的利尿成分肌醇可以增加尿量以及尿酸的排泄量，从而促进排石(任文辉、洪俪芳，猫须草的药理作用研究进展，中草药.2013,44(20):2946-2950)；黄荣桂等研究发现肾茶水提取物对尿路结石具有治疗作用(黄荣桂，沈文通，郑兴中，等.肾茶对尿路结石的治疗作用.福建医科大学学报.1999,33(4):402-405)；蒋维晟报道肾茶提取液可以增加尿量，降低尿草酸含量及尿钙的浓度，抑制肾脏草酸钙结晶沉积(蒋维晟.肾茶提取液对肾结石模型影响的实验研究,江西中医学院学报.2009,21(1):52-54)。由此可见，猫须草在治疗泌尿结石方面效果明显。

目前，肾茶及肾茶提取液对尿路结石具有治疗作用，药理活性研究仅局限于其粗提物，但其有效成分尚未发现，作用机制不明确。中国专利cn101069704报道了肾茶中脂溶性黄酮苷元类化合物具有明显改善泌尿系统结石症状、减少结石量、增加尿量、有助于结石排出及消炎等效果。但专利中所制得脂溶性黄酮苷元类化合物为粗提物、黄酮得率和纯度都很低，制约了其深度开发和应用。

有鉴于此，有必要发展一种得率高、纯度高的肾茶总黄酮提取物，并将其用于制备预防或治疗尿路结石药物中。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种肾茶总黄酮提取物在制备预防或治疗尿路结石药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面提供了一种肾茶总黄酮提取物在制备预防或治疗尿路结石药物中的应用。

所述预防或治疗尿路结石药物是以肾茶总黄酮提取物为唯一的活性成份，或包含肾茶总黄酮提取物的组合物。

所述包含肾茶总黄酮提取物的组合物是指肾茶总黄酮提取物与药学上允许的一种或多种辅料构成的药物组合物。

所述辅料为稀释剂、赋形剂、香味剂、甜味剂中的至少一种。

所述预防或治疗尿路结石药物中，肾茶总黄酮提取物的含量为0.1％-99.9％。

所述肾茶总黄酮提取物可以和药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。

所述药物制剂是胶囊剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂中的至少一种。

所述药物制剂的给药方式为口服、注射。

所述肾茶总黄酮提取物的提取方法包括以下步骤：

将肾茶粉末中加入液料比为5-25l/kg、浓度为0-95％的乙醇水溶液，室温浸泡1～48h边浸泡边搅拌，超声处理，获得的浸提液过滤，滤液浓缩得膏状物；

膏状物用弱极性大孔吸附树脂柱分离，2-4bv水洗脱除杂、2-4bv浓度为0-95％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥得肾茶总黄酮提取物。

所述肾茶粉末的目数为1～20目，优选为10目。

所述液料比优选为10-25l/kg。

所述乙醇水溶液的浓度优选为60-80％。

所述室温浸泡优选24h。

所述超声处理的条件是：100-400w超声处理1-60min。

所述超声处理的条件是：280w超声处理30min。

所述过滤采用中速定量滤纸，孔径为20～50μm。

所述弱极性大孔吸附树脂柱为ab-8、d101、hpd100、h103、hpd826、nka-96型号大孔吸附树脂柱。

所述肾茶总黄酮提取物经hplc-q-tof-ms检测，所含有的主要化学成分包括5-羟基-6,7,4'-三甲氧基黄酮、3,5,3',4'-四羟基-7-甲氧基黄酮、3,7-二-o-甲基槲皮素、鼠尾草素、橙黄酮、半齿泽兰素、3,4,5,7-四甲氧基黄酮。

由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：

本发明通过对肾茶总黄酮成分进行提取，采用腹腔注射乙醛酸盐溶液制作小鼠草酸钙结晶模型，研究肾茶总黄酮提取物对草酸钙结晶产生的作用。实验结果显示：肾茶总黄酮提取物能够促使小鼠血肌酐、尿素氮水平显著下降，肾脏组织钙含量显著下降、肾组织草酸钙结晶沉积及肾脏病理组织损伤均显著减轻，肾茶总黄酮提取物具有预防或治疗泌尿结石活性，可以用于制备预防或治疗泌尿结石的药物、保健品或食品。

附图说明

图1为冯库萨染色检测各组小鼠肾脏血生化指标的结果(100×)，其中：a组为对照组，b组为乙醛酸盐结晶组，c组为低剂量肾茶总黄酮提取物干预组，d组为中剂量肾茶总黄酮提取物干预组，e组为高剂量肾茶总黄酮提取物干预组。

图2为各组小鼠肾脏组织钙含量检测结果示意图。

图3为各组小鼠血肌酐含量检测结果示意图。

图4为各组小鼠血尿素氮含量检测结果示意图。

图5为正模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果示意图。

图6为负模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果示意图。

图7是实施例1制备的肾茶总黄酮提取物hplc-q-tof-ms负离子模式总离子流图。

图8是实施例1制备的肾茶总黄酮提取物hplc-q-tof-ms正离子模式总离子流图。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

本发明中，采用下述文献报道的紫外分光光度法对总黄酮含量进行测定：陆应彩，卯明霞，彭霞等.肾茶总黄酮的含量测定.中国民族民间医药2018，27(11):37-41。该方法的简要操作过程如下：精密称取一定量的总黄酮提取物，制备样品溶液。加al(no3)3/nano2试液显色，以芦丁(购自中国药品生物制品检定所)为对照品，于500nm处测定吸光度。根据测定的吸光度值，即可计算得到肾茶总黄酮的含量。

实施例1

提取：取目数为10目的肾茶(又名：猫须草叶，购至同仁堂药业有限责任公司)粉末，按液料比10l/kg加入浓度为60％的乙醇水溶液，室温浸泡24h边浸泡边搅拌，280w超声(超声仪器型号为uc-10、购自上海泰坦科技股份有限公司)处理30min，获得的浸提液采用中速定量滤纸(孔径为20～50μm)过滤，滤液旋转蒸发浓缩得膏状物；

纯化：将上述膏状物用ab-8(购自北京索莱生物科技有限公司)大孔吸附树脂柱分离，3bv水洗脱除杂、3bv浓度为70％的乙醇洗脱，收集浓度为70％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥得总黄酮提取物，最终总黄酮得率为6.42％，提取物于干燥器中保存，经测定总黄酮含量为89.43％。

实施例2

提取：取目数为10目的肾茶(又名：猫须草叶，购至同仁堂药业有限责任公司)粉末，按液料比20l/kg加入浓度为70％的乙醇水溶液，室温浸泡24h边浸泡边搅拌，280w超声(超声仪器型号为uc-10、购自上海泰坦科技股份有限公司)处理30min，获得的浸提液采用中速定量滤纸(孔径为20～50μm)过滤，滤液旋转蒸发浓缩得膏状物；

纯化：将上述膏状物用ab-8大孔吸附树脂柱分离，4bv水洗脱除杂、4bv浓度为70％的乙醇洗脱，收集浓度为70％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥得总黄酮提取物，最终总黄酮得率为5.97％，提取物于干燥器中保存；经测定总黄酮的含量为90.21％。

实施例3

提取：取目数为10目的肾茶(又名：猫须草叶，购至同仁堂药业有限责任公司)粉末，按液料比25l/kg加入浓度为80％的乙醇水溶液，室温浸泡24h边浸泡边搅拌，280w超声(超声仪器型号为uc-10、购自上海泰坦科技股份有限公司)处理30min，获得的浸提液采用中速定量滤纸(孔径为20～50μm)过滤，滤液旋转蒸发浓缩得膏状物；

纯化：将上述膏状物用ab-8大孔吸附树脂柱分离，2bv水洗脱除杂、2bv浓度为70％的乙醇洗脱，收集浓度为70％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，减压干燥得总黄酮提取物，最终总黄酮得率为6.42％，提取物于干燥器中保存；经过测定总黄酮的含量为83.95％。

实施例1制备的肾茶总黄酮提取物通过hplc-q-tof-ms检测如图7和图8所示(图7是实施例1制备的肾茶总黄酮提取物hplc-q-tof-ms负离子模式总离子流图，图8是实施例1制备的肾茶总黄酮提取物hplc-q-tof-ms正离子模式总离子流图。)，根据正负离子流数据分析，共识别了22个色谱峰，通过质谱裂解碎片分析并结合文献报道数据对照，鉴定了19种化合物，所含有的主要化学成分包括5-羟基-6,7,4'-三甲氧基黄酮(3)、3,5,3',4'-四羟基-7-甲氧基黄酮(6)、3,7-二-o-甲基槲皮素(7)、鼠尾草素(9)、橙黄酮(10)、半齿泽兰素(11)、3,4,5,7-四甲氧基黄酮(12)，结果如表1所示：

表1肾茶总黄酮提取物化学成分解析结果

实施例4

动物实验

c57bl/6雄性小鼠(7～8周龄体重约180-200g雄性c57bl/6小鼠为清洁级，购自上海斯莱克实验动物有限公司，小鼠饲养于第二军医大学动物实验中心，所有动物实验均获得第二军医大学动物伦理学委员会认可。)随机分为对照组(a组)、乙醛酸盐结晶组(b组)、低剂量肾茶总黄酮提取物干预组(c组)、中剂量肾茶总黄酮提取物干预组(d组)和高剂量肾茶总黄酮提取物干预组(e组)，a组腹腔注射100mg/kg生理盐水，b组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐，c组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+90mg/kg肾茶总黄酮提取物，d组腹腔注100mg/kg乙醛酸盐+180mg/kg肾茶总黄酮提取物，e组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+360mg/kg肾茶总黄酮提取物，连续给药5天后，通过血生化分析仪(labospect008as、日立)、冯库萨染色检测各组小鼠血生化指标、肾组织钙含量、各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶体分布及组织病理改变。

实验结果：

1、各组小鼠肾脏组织结晶沉淀

利用冯库萨染色各组小鼠肾脏组织切片(参照王向丽等报道的方法，取约1cm³肾脏组织，4％戊二醛溶液中固定24h，常规石蜡包埋，制成5μm厚切片。随后，按照苏木素-伊红(he)顺序染色，随后用中性树胶封片。最后，在光学显微镜下观察肾组织结构)，在光学显微镜下观察各组小鼠肾脏结晶情况，如图1所示，图1为冯库萨染色检测各组小鼠肾脏血生化指标的结果(100×)，其中：a组为对照组，b组为乙醛酸盐结晶组，c组为低剂量肾茶总黄酮提取物干预组，d组为中剂量肾茶总黄酮提取物干预组，e组为高剂量肾茶总黄酮提取物干预组，从图1中可以看出，b组、c组、d组较a组小鼠肾小管腔中出现大量黑色钙盐结晶体；e组小鼠肾小腔中出现少量黑色钙盐结晶体。结果说明乙醛酸盐造模b组小鼠结晶较多，中剂量肾茶总黄酮提取物d组和高剂量肾茶总黄酮提取物e组灌胃对小鼠肾脏组织的结晶有明显减少，低剂量肾茶总黄酮提取物c组灌胃对肾脏组织结晶无明显作用。

2、各组小鼠肾脏组织钙含量测定

为进一步验证肾茶总黄酮提取物三个剂量对于小鼠肾脏组织中钙含量是否有影响，采用甲基百里酚蓝法分别测定5组小鼠肾脏组织中的钙含量，如图2所示，图2为各组小鼠肾脏组织钙含量检测结果示意图，结果显示b组小鼠肾脏组织钙含量显著高于对照组a组(p<0.05)；e组小鼠肾脏组织钙含量明显低于b组(p<0.05)；c组小鼠肾脏组织钙含量较对照组a组显著升高(p<0.01)，与b组小鼠肾脏组织钙含量无明显差异(p>0.05)；d组小鼠肾脏组织钙含量较对照组a组、模型组b组小鼠肾脏组织钙含量均无明显差异(p>0.05)。其结果说明高剂量肾茶总黄酮提取物可以有效减少草酸钙结晶小鼠肾脏组织中钙含量，而低中剂量肾茶总黄酮提取物对小鼠草酸钙结晶模型小鼠肾脏组织中钙含量无明显影响。

3、各组小鼠血肌酐含量检测结果

为明确肾茶总黄酮提取物三个不同剂量对于小鼠草酸钙结晶模型小鼠生化指标是否有影响，采用颗粒增强透射比浊法(petia)测定各组小鼠的血肌酐含量。如图3所示，图3为各组小鼠血肌酐含量检测结果示意图，结果显示：b组小鼠血肌酐水平显著高于对照组a组(p<0.001)；c组、d组、e组小鼠血肌酐水平明显低于b组(p<0.05)。此结果说明b组乙醛酸盐造肾结晶模型成功，小鼠血肌酐水平明显升高，c、d、e组小鼠血肌酐水平低于b组小鼠，说明肾茶总黄酮提取物三个不同剂量对小鼠生化指标有效。

4、各组小鼠血尿素氮含量检测结果

为进一步验证肾茶总黄酮提取物三个剂量对于小鼠草酸钙结晶模型小鼠生化指标是否有影响，采用酶偶联速率法分别测定5组小鼠血清中的尿素氮含量。如图4所示，图4为各组小鼠血尿素氮含量检测结果示意图，结果显示：b组小鼠尿素氮水平显著高于对照组a组(p<0.05)；d组、e组小鼠尿素氮水平明显低于b组(p<0.05)。此结果说明b组乙醛酸盐造肾结晶模型成功，小鼠尿素氮水平明显升高，c、d、e组小鼠尿素氮水平低于b组小鼠，且e组的尿素氮水平较c组、d组更低，说明肾茶总黄酮提取物低、中、高三个剂量对小鼠生化指标有效，且随着剂量的增大对小鼠草酸钙结晶模型小鼠尿素氮水平降低越明显。

5、正模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果

通过脂质组学方法分析肾茶总黄酮提取物对于草酸钙结晶模型小鼠的代谢影响，分别对对照组a组、乙醛酸盐结晶组b组以及高剂量肾茶总黄酮提取物干预组e组的肾脏组织进行pls-da分析，正模式的结果显示见图5所示，图5为正模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果示意图，a组、b组和e组的肾脏样本之间具有良好的分离趋势，且较b组样本而言，e组样本在第一主成分上有向a组样本聚拢趋势，说明在给予草酸钙结晶小鼠高剂量肾茶总黄酮提取物后，其体内的代谢水平趋于正常化。

6、负模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果

通过脂质组学方法分析肾茶黄酮提取物对于草酸钙结晶模型小鼠的代谢影响，分别对对照组a组、乙醛酸盐结晶组b组以及高剂量肾茶总黄酮提取物干预组e组的肾脏组织进行pls-da分析，负模式的结果显示见图6所示，图6为负模式下对照组、乙醛酸盐结晶组以及肾茶总黄酮提取物干预组的pls-da结果示意图，a组和b组的肾脏样本之间分离度良好，且与b组样本比较，e组样本有向a组样本聚拢趋势，说明在给予草酸钙结晶小鼠高剂量肾茶总黄酮提取物后，其体内的代谢水平趋于正常化。

鉴于上述动物实验评价结果，本发明的肾茶总黄酮提取物具有预防或治疗泌尿结石活性，因此可用于制备治疗泌尿结石药物。

对比例1

cn101069704公开以下内容：

(一)肾茶提取物a组分，可按以下方法制得：

(1)将肾茶[c.spicatus(thunb.)c.y.wuexh.w.li]干品粉碎后与甲醇按克重量∶毫升体积为1∶4～10的比例，浸泡3次，每次10天，合并、浓缩浸提液得浸膏混合物；

(2)先将水与甲醇按1∶5～12体积比混配成溶解液，再将步骤(1)浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶解；

(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚萃取4次，充分去除树脂、叶绿素等低极性的杂质成分后，再用乙酸乙酯萃取4次，合并、浓缩萃取物；

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得黑褐色粘稠状的肾茶提取物a组分。

肾茶提取物a组分，经过鉴定分析为脂溶性的黄酮甙元类化合物。

肾茶提取物a组分，具有明显改善结石症状，减少肾脏组织中钙和草酸的含量，减轻肾脏组织病变程度，减少结石量；增加肾结石者的尿量，尤其在0～4h时的作用点尿量增加较显著；增加膀胱平滑肌收缩幅度，加快节律，松驰输尿管、尿道平滑肌，有助于对泌尿系结石的排出；消炎；在一定程度上降低肾结石肾组织lpo含量，改善对肾组织的损伤等作用，可直接、复合或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性成份，用于泌尿系抗结石、排石、利尿和消炎等的药物。

对比例2

cn101066292公开了以下内容：

(二)肾茶提取物b组分，可按以下方法制得：

(1)将肾茶[c.spicatus(thunb.)c.y.wuexh.w.li]干品粉碎后与甲醇按克重量∶毫升体积为1∶4～10的比例，共浸泡3次，每次10天，合并、浓缩浸提液得浸膏混合物；

(2)先将水与甲醇按1∶5～12体积比混配成溶解液，再将步骤(1)浸膏混合物与溶解液按克重量∶毫升体积为1∶1比例混合、搅拌至充分溶解；

(3)将步骤(2)浸膏溶解液先用石油醚和乙酸乙酯分别萃取3-5次，充分去除树脂、叶绿素等低极性的杂质和脂溶性成分后，再用正丁醇萃取4次，合并、浓缩萃取物；

(4)将步骤(3)萃取物进行硅胶柱层析、梯度洗脱、收集并浓缩得浅褐色粘稠状的肾茶提取物b组分。

肾茶提取物b组分，经过鉴定分析为脂溶性的黄酮醇甙类化合物。

肾茶提取物b组分，具有明显改善结石症状，减少肾脏组织中钙和草酸的含量，减轻肾脏组织病变程度，减少结石量；增加肾结石者的尿量；增加膀胱平滑肌收缩幅度，加快节律，松驰输尿管、尿道平滑肌，有助于对泌尿系结石的排出；消炎；在一定程度上降低肾结石肾组织lpo含量，改善对肾组织的损伤等作用，可直接、复合或作为中间体进一步分离出提取药用有效活性成份，用于泌尿系抗结石、排石、利尿、消炎等的药物。

对比例3

cn101069705公开了以下内容：

(三)肾茶提取物c组分，可按以下方法制备获得：

(1)将肾茶[c.spicatus(thunb.)c.y.wuexh.w.li]干品粉碎后与甲醇按克重量∶毫升体积为1∶4～10的比例，浸泡2-3周后，滤去甲醇溶液至充分挥发干燥，备用；

(2)将步骤(1)处理后肾茶，用水浸没后煮3-4次，每次4小时，合并水煮液、浓缩；

(3)将步骤(2)浓缩液，分别用浓度为65％、75％、85％、95％的乙醇进行分级沉降，收集后得黑色粘稠状的肾茶提取物c组分。

肾茶提取物c组分，经过鉴定分析为多糖类化合物。

肾茶提取物c组分，具有明显改善结石症状，减少肾脏组织中钙和草酸的含量，减轻肾脏组织病变程度，减少结石量；可延长利尿的时间，明显增加肾结石者的尿量；增加膀胱平滑肌收缩幅度，加快节律，松驰输尿管、尿道平滑肌，有助于对泌尿系结石的排出；明显降低肾结石肾组织lpo含量，改善对肾组织的损伤等作用，可直接、复合或作为中间体进一步分离提取出药用有效活性成份，用于泌尿系抗结石、排石、利尿、抗肾结石损伤等的药物。

对比例4

cn105078811公开的cof植物水油平衡因子中公开了以下方法：

所述的肾茶提取物是通过以下方法制备的：将肾茶叶子干燥并研磨成粉，经100目筛网过滤备用。采用乙醇水溶液作为提取介质，置于超声波细胞粉碎机上，进行超声提取1.5h。超声提取后将萃取液移出，过滤，残渣用乙醇水溶液洗涤，过滤，合并滤液，将滤液进行减压浓缩，过滤得到肾茶提取物。

对比例5

cn101143160公开一种肾茶提取物及制备方法和用途：所述肾茶提取物的制备方法，包括下列步骤：a、将粉碎的肾茶原料用含水乙醇充分加热回流提取后，对加热回流提取得到的溶液过滤并减压除去乙醇后得到的剩余的水提取溶液，浓缩，再用去离子水稀释，离心，取上清液备用。b、将a步骤处理后得到的上清液再用大孔树脂进行吸附，然后依次分别用水和含水乙醇分别洗脱吸附树脂，合并洗脱液，除去溶液中的乙醇并浓缩，得到浸膏状提取物，干燥得干粉。

对比例6

cn101628030公开了肾茶提取物的制备方法及其组合物，

肾茶提取物的制备方法，包括清洗干燥工序，粉碎过筛工序、水提工序、醇提工序：

所述的醇提工序为将前处理工序过滤所得到的滤渣，加入滤渣总重量2-5倍的体积浓度为80-95％乙醇，回流1-2小时，过滤，收集乙醇提取液，此过程重复3-5次，合并乙醇提取液，减压浓缩得到棕色的肾茶提取物b。

为了提高肾茶提取物b的纯度，还可将肾茶提取物b用体积浓度为80-95％的乙醇溶解后，用石油醚萃取2-3次，再用正丁醇萃取2-3次，合并，浓缩，得到正丁醇浓缩物，用足量的体积浓度80-95％的乙醇将正丁醇浓缩物溶解，加入8-10倍乙醇体积的丙酮，使沉淀析出，得到肾茶提取物b1。

所述的水提工序包括前处理工序，后处理工序，

所述的前处理工序为：在粒径符合要求的肾茶颗粒中，加入水及纤维素霉，在30-40℃反应2-5小时，再升温至50-60℃，反应2-5小时，冷却到室温，过滤，得到滤渣及滤液；肾茶、水的重量比为1∶4-10，肾茶与复合纤维素酶的重量/体积(kg/l)比为1∶0.02-0.1。

所述的复合纤维素霉为：木霉(trichodermasp)cgmcc3.3068与康宁木霉(trichodermakoningii)cgmcc3.2774的混合物，其扩大培养基的体积比为1∶0.5-0.8。

为了提高前处理工序的提取效果，还可将已经冷却到室温的滤液在频率为2-5万赫兹的超声波中超声提取10-30分钟。

所述的后处理工序为：将滤液用乙醚萃取不小于3次，合并乙醚提取液，50℃蒸干，得到棕褐色的肾茶提取物a，滤液与乙醚的体积比为1∶0.5-0.8。

为了提高提取物的纯度，还可将后处理工序处理所制备的提取物a用硅胶柱进行分离，得到肾茶提取物a1，硅胶与提取物a的上样量重量比不小于1∶0.5；洗脱液为水和甲醇的混合溶剂，二者混合的体积比为水∶甲醇＝1∶10-5。

所述的肾茶提取物的组合物为：相当于原药1克的肾茶提取物a或a1，与相当于原药1.5-2克的肾茶提取物b或b1组合的效果最佳。

将所制备的肾茶提取物a、a1、b、b1进行喷雾干燥后，加入辅料后可以制成药品、保健品、提取物在药品、保健品中的重量百分比为1-99％。

所述的组合物的剂型为滴丸剂、片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、口服液、粉针剂、注射液、输液。

本发明利用复合纤维素酶溶解肾茶茎杆中的纤维素，使包裹在纤维素中的水溶性、醇溶性有益成分容易被提取出来。

本发明与现有技术相比，利用生物提取及化学提取，将肾茶提取物中的水溶性及醇溶性有效物质充分提取出来，提高肾茶提取物的消炎、溶石、利尿的功能。

对比例7

cn101693051公开了一种肾茶提取物的制备方法及其组合物：

1、清洗干燥工序：取肾茶原料，清除其中的杂物，并用水清洗，日光下晒干。

2、粉碎工序：将晒好的肾茶粉碎成40-80目的颗粒。

3、前处理工序：在粉碎好的肾茶颗粒中，加入水及纤维素霉，在30-35℃反应5小时，再升温至50-60℃，反应2小时，冷却到室温，再在频率为2.5万赫兹的超声波中超声提取20分钟，过滤，即可；肾茶、水的重量比为1∶4，肾茶与复合纤维素酶的重量/体积(kg/l)比为1∶0.02。

所述的复合纤维素霉为：木霉(trichodermasp)cgmcc3.3068与康宁木霉(trichodermakoningii)cgmcc3.2774的混合物，其扩大培养基的体积比为1∶0.5。

4、后处理工序为：将滤液用乙醚萃取3次，合并乙醚提取液，50℃蒸干，得到棕褐色的提取物a，滤液与乙醚的体积比为1∶0.5。提取物a收率以肾茶原料计算为14.5％。

5、醇提工序为：将前处理工序过滤所得到的滤渣，加入滤渣总重量2倍的体积浓度为95％乙醇，回流1小时，过滤，收集乙醇提取液，此过程重复3次，合并乙醇提取液，减压浓缩得到棕色的肾茶提取物b。提取物b收率以肾茶原料计算为5.8％。

6、乙酸乙酯提取工序为：将醇提工序过滤所得到的滤渣，加入总重量2倍的乙酸乙酯，回流1小时，冷却到室温，过滤，滤液浓缩即可得到肾茶提取物c，提取物c收率以肾茶原料计算1.6％。

本发明实施例1～3及对比例1～7的肾茶提取物对比结果如表2所示：

表2

以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。