本发明涉及一种银翘散超微粉的制备方法，属于药品技术的领域。
背景技术：
：：银翘散，辛凉透表，清热解毒。用于风热感冒，发热头痛，口干咳嗽，咽喉疼痛，小便短赤。银翘散以中药材直接打粉入药，采用温开水直接吞服或开水泡服的服用方法，存在服用剂量大，患者服药顺从性差等缺点。而超微粉碎技术可以使中药超微粉体的粒径达到75μm以下，使中药材的破壁率达到90％以上，与传统的普通粉碎相比，超微粉碎可以提高药物的有效成分的溶出，从而增加有效成分的生物利用度，提高药效。因此，发明一种重复性、稳定性良好的银翘散超微粉备方法具有重要的意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种银翘散超微粉的制备方法。本发明的重复性和稳定性良好，制成的银翘散超微粉粒径较小，和传统的银翘散细粉相比，抗炎效果更好，作用起效快，提高了肿胀抑制率，减少了一半的服药量，有减量增效的作用。本发明的技术方案：一种银翘散超微粉的制备方法，它由金银花100份、连翘100份、桔梗60份、薄荷60份、淡豆豉50份、淡竹叶40份、牛蒡子60份、荆芥40份、芦根100份、甘草40份制备而成；其制备方法为：按比例称取上述各单味药材，研磨成20-100目银翘散初粉；取超微粉碎机容量20％-100％量的银翘散初粉，置于超微粉碎机中粉碎10-30min，即得银翘散超微粉。前述的一种银翘散超微粉的制备方法中，所述制备方法包括以下步骤：(a)按比例称取上述各单味药材，用药粉碎机分别预粉碎并过20-100目药典筛，得药材初粉；(b)将各味药材初粉按比例混合均匀，得银翘散初粉；(c)取超微粉碎机容量的20％-100％量的银翘散初粉，置于超微粉碎机中粉碎10-30min，即得银翘散超微粉。前述的一种银翘散超微粉的制备方法中，所述步骤(a)是将各单味药材用药粉碎机分别预粉碎后过80目药典筛，得80目的药材初粉。前述的一种银翘散超微粉的制备方法中，所述步骤(c)是将银翘散初粉置于超微粉碎机中粉碎，填料量为超微粉碎机容量的40％。前述的一种银翘散超微粉的制备方法中，所述步骤(c)中超微粉碎机中粉碎时间为20min。前述的一种银翘散超微粉的制备方法中，所述银翘散超微粉粒径为5-75μm。与现有技术相比，本发明是通过借助振动磨超微粉碎机为加工设备，以粉碎时间、初粉粒度和填料量为考察因素，d50、浸出物含量及休止角的综合评分为评价指标，通过单因素考察和正交实验优化银翘散超微粉的制备工艺。一方面该部分银翘散超微粉的制备工艺研究可以为将来应用超微粉碎技术工业化生产银翘散超微粉提供的实验基础；另一方面该部分工艺优化可以为实验研究提供较稳定的、可重复制备的银翘散超微粉，保证整个研究的科学性。发明人为得到最佳工艺进行了大量的实验研究；同时也比较了该工艺制备的银翘散超微粉和普通银翘散的药理效果，以下为本发明实验研究的结果：实验例1：银翘散超微粉的粉碎工艺研究1材料与方法1.1材料1.1.1仪器：116摇摆式六两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司)；nld-25di型超微粉碎机(济南纳力德超微粉碎技术有限公司)；bt-9300h激光粒度分析仪(丹东百特仪器有限公司)；tb-215d型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；me104e型分析天平(梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司)；101-1ab型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。1.1.2材料银翘散处方中各药材购于贵阳济仁堂药业有限公司，各药材产地及批号见表1。表1-1药材的产地与批号table1-1medicinaloriginandbatchnumber1.2方法1.2.1粒径与粒径分布的测定取供试品约0.1g，加水30ml，超声处理，并时时振摇3分钟，使粉末分散成混悬于水中的超微粉体，采用bt-9300h型激光粒度分布仪测定粉体的中位粒径d50(d50值表示样品的累计粒度分布百分数达到50％时所对应的粒径，常用来表示粉体的平均粒度)。1.2.2浸出物测定按照《中国药典》2015年版第四部通则2201项下热浸法进行。取各样品粉末约4g，精密称定，置250ml的锥形瓶中，精密加水100ml，密塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，以干燥品计算样品中水溶性浸出物的含量(％)。1.2.3休止角的测定采用固定漏斗法，即将漏斗固定于桌面，桌面上放一块玻璃板，使漏斗保持垂直，漏斗尾端距玻璃板垂直距离为3cm，分别取银翘散细粉及银翘散超微粉各3.00g，经玻璃漏斗垂直流至玻璃平板上，流下的粉体在玻璃平板上形成圆锥体，圆锥表面和水平面的夹角即为休止角θ，分别测定圆锥体高度h和底面原形的半径l，通过正切函数即可求出休止角θ，θ＝arctanh/l。各样品平行操作3次，取平均值。一般认为θ≤30°时流动性好，θ＞45°时流动性差，但θ≤40°时可以满足生产过程中的流动性需求。1.2.4单因素考察以粉碎时间、初粉粒度和填料量为考察因素，d50、浸出物含量及休止角的综合评分为评价指标。在综合评分中d50、浸出物含量和休止角的权重系数分别为0.4、0.4、0.2。由于本实验中d50和休止角欲求最小值，浸出物含量欲求最大值，因此计算公式如下：(1)填料量的考察分别称取20目银翘散粉末400、800、1200、1600、2000g，共5份，置超微粉碎机中粉碎20min，取样进行测定。(2)初粉粒度的考察：取分别过20、40、60、80、100目的银翘散粉末各400g，置超微粉碎机中粉碎20min，取样进行测定。(3)粉碎时间的考察：取银翘散20目粉末400g共5份，置超微粉碎机中，分别粉碎10、15、20、25、30min，取样进行测定。1.2.5超微粉碎工艺优化采用正交试验法对银翘散的超微粉碎工艺进行优选，本实验选取三个因素a(填料量)、b(初粉粒度)、c(粉碎时间)，并根据单因素试验结果将每个因素设三个水平，评价指标同“1.2.3”，选用l9(34)正交表进行试验。1.2.6工艺验证试验根据所筛选的最佳工艺条件同法制备3批银翘散超微粉，并同法进行粒径、浸出物含量及休止角测定。2结果2.1单因素考察2.1.1填料量的考察结果表明，随着填料量的增加，综合评分呈明显下降趋势，填料量为1600g时达最低点且之后趋于平缓。由于超微粉碎设备是利用振动过程中钢棒之间的挤压力和摩擦力使物料粉碎，因此，过高或过低的进料量均不利于超微粉碎。综合考虑到仪器本身参数(装料量3.8l约相当于药粉1.9kg)和实际生产的可操作性选择填料量为400～1200g为宜。因此正交试验中该因素的三个水平选择400、800、1200g。结果见表1和图1。表1填料量的考察结果tab.1investigationresultsoffillercontent2.1.2初粉粒度的考察结果表明，随着初粉粒度逐渐减小，综合评分先升高后降低，当初粉粒度为80目时综合评分最高。因此，本研究中正交试验初粉粒度的三个水平选择60、80、100目。结果见表2和图2。表2初粉粒度的考察结果tab.2investigationresultsofparticlesizeofprimarypowder2.1.3粉碎时间的考察结果结果表明，随着粉碎时间的延长综合评分呈增加趋势，且粉碎时间为25min时综合评分最高。因此本研究正交试验中粉碎时间的三个水平应选择20、25、30min。结果见表3和图3。表3粉碎时间的考察结果tab.3investigationresultsofgrindingtime2.2超微粉碎工艺优化由单因素试验得各因素水平结果见表4，正交试验设计及结果见表5，对综合得分进行方差分析，结果见表6。结果表明，各因素影响大小依次为a(填料量)>b(初粉粒度)>c(粉碎时间)，且均无显著性。最佳工艺参数组合为a2b2c1，即填料量为800g，初粉粒度为80目，粉碎时间为20分钟。表4因素水平表tab.4factorleveltable表5l9(34)正交试验设计及结果tab.5designandresultsofl9(34)orthogonaltest表6方差分析tab.6analysisofvariance注：f0.05(2,2)＝192.3工艺验证实验结果在上述最佳工艺参数条件下，同法制备3批银翘散超微粉进行工艺验证，结果三批银翘散超微粉的综合得分分别为98.82、99.99、99.41，见表7。由结果可知该工艺重复性、稳定性良好，可作为银翘散超微粉的制备工艺。表7工艺验证结果tab.7processverificationresult实验例2：银翘散超微粉及普通银翘散细粉解热作用对比1材料与方法1.1材料1.1.1仪器tb-215d型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；mc-3b电子体温计(欧姆龙(大连)有限公司)；大鼠灌胃针。1.1.2药品及试剂阿司匹林肠溶片(批号：150601，江苏平光制药有限责任公司)；银翘散细粉及其超微粉(自制，取第二章项下细粉和超微粉进行药理实验)；2,4-二硝基苯酚(批号：900915，上海试剂三厂)；氯化钠注射液(贵州科伦药业有限公司，批号：d16031205)1.1.3实验动物sd大鼠64只，体重180～220g，雌雄各半，并由贵州医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证证号：scxk(黔)2012-0001。实验动物饲养环境和设施符合《中华人民共和国实验动物规范》。1.2方法与结果取sd大鼠64只，禁食不禁水12小时，用数字表法随机分为8个组，分别为模型对照组、阳性对照组(0.105g·kg-1)、银翘散超微粉高、中、低剂量组(3.78g·kg-1、1.89g·kg-1、0.945g·kg-1)，普通银翘散粉高、中、低剂量组(3.78g·kg-1、1.89g·kg-1、0.945g·kg-1)，每组各8只鼠，雌雄各半。每天以20ml·kg-1灌胃给药1次，连续7天，模型对照组给予等体积生理盐水。于末次给药后1h，每组sd大鼠按照0.2ml·100g-1的剂量背部皮下注射浓度为1.25％的2,4-二硝基苯酚无水乙醇溶液致热，并分别记录制热前和制热后1、2、3、4、5、6、7h每只sd大鼠的肛温。银翘散对2,4-二硝基苯酚所致发热大鼠体温的影响结果如图4所示，基于以上结果可知，银翘散具有显著的解热作用，且相当于普通细粉剂量1/2的超微粉可达到与原剂量细粉相当的解热效果。实验例3：银翘散超微粉及普通银翘散抗炎作用对比1材料与方法1.1材料1.1.1仪器tb-215d型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；打孔器(直径6mm)；elx800吸收光酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)；高精度游标卡尺(上海新量螺纹工具有限公司)；uv-2700型紫外-可见分光光度计(日本岛津)；小鼠灌胃针。1.1.2药品及试剂阿司匹林肠溶片(批号：150601，江苏平光制药有限责任公司)；银翘散细粉及其超微粉(自制，取第二章项下细粉和超微粉进行药理实验)；二甲苯(批号：20151008，天津恒兴试剂有限公司)；氯化钠注射液(贵州科伦药业有限公司，批号：d16031205)；角叉菜胶(批号：20160912，solarbio公司)；超氧化物歧化酶试剂盒(sod，批号：20161205，南京建成生物工程研究所)；5-羟色氨(5-ht，批号：ak0016dec09025)、组胺(his，批号：ak0016dec09017)、白细胞介素-1β(il-1β，批号：ak0016dec09022)、白细胞介素-6(il-6，批号：ak0016dec09023)、前列腺素e2(pge2，批号：ak0016dec09026)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α，批号：ak0016dec09024)等试剂盒均购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。1.1.3实验动物雄性spf级昆明小鼠160只，体重18～20g，由贵州医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证证号：scxk(黔)2012-0001。实验动物饲养环境和设施符合《中华人民共和国实验动物规范》。1.2方法与结果1.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验选取昆明小鼠80只，数字表法随机分为8个组，分别为模型对照组、阳性对照组(0.15g·kg-1)、超微粉高、中、低剂量组(5.46g·kg-1、2.73g·kg-1、1.37g·kg-1)，细粉高、中、低剂量组(5.46g·kg-1、2.73g·kg-1、1.37g·kg-1)每组各10只鼠。每组连续灌胃给药7天，每天一次，灌胃体积按0.2ml·10g-1计。末次给药30min后，于小鼠的右耳均匀涂抹二甲苯致炎，剂量为每只20μl。致炎30min后脱颈椎处死小鼠，然后用直径为6mm的打孔器分别于左耳和右耳的同一部位打孔，并称取打下耳片的重量，计算肿胀度(mg)和肿胀抑制率(％)，对比两种粉体的抗炎作用。公式如下：肿胀度(mg)＝右耳耳片重量(mg)-左耳耳片重量(mg)结果见表3-1。表8对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(n＝10)注：与模型对照组比较△p<0.05，△△p<0.01；与阳性对照组比较#p<0.05，##p<0.01；与细粉高剂量组比较▲p<0.05，▲▲p<0.01由肿胀抑制率结果可以看出超微粉的肿胀抑制率比普通细粉高剂量组高14.48％。1.2.2角叉菜胶致小鼠足肿胀实验取昆明小鼠80只，数字表法随机分为8个组，分别为空白对照组、模型对照组、超微粉高、中、低剂量组(5.46g·kg-1、2.73g·kg-1、1.37g·kg-1)，细粉高、中、低剂量组(5.46g·kg-1、2.73g·kg-1、1.37g·kg-1)，每组各10只。各组均连续灌胃给药7天，每天一次，灌胃体积按0.2ml·10g-1计。其中模型对照组以生理盐水灌胃。于末次给药30min后每只小鼠以1％角叉菜胶液(用生理盐水配制)50μl皮下注射于右后足趾部致炎，4h后，摘眼球取血，并于室温静置2h后，2500r·min-1离心10min得血清，-20℃保存备用。脱颈椎处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称重，肿胀度及肿胀抑制率计算方法同“1.2.1”公式；结果见表9。表9对角叉菜胶致足肿胀的影响(n＝10)注：与模型对照组比较，△p<0.05,△△p<0.01；与细粉高剂量组比较，▲p<0.05,▲▲p<0.01。由肿胀抑制率结果可以看出超微粉高、中剂量组的肿胀抑制率分别比细粉高剂量组高12.99％，3.07％，说明剂量减半后的超微粉对角叉菜胶致小鼠足肿胀的抑制作用优于原剂量细粉，或与之相当。基于以上结果可知，银翘散具有显著的抗炎作用，且相当于细粉剂量1/2的超微粉可达到与原剂量细粉相当的抗炎效果，说明银翘散超微粉碎后能达到减量增效的作用。综上所述，本发明的重复性和稳定性良好，制成的银翘散超微粉粒径较小，和传统的银翘散细粉相比，抗炎效果更好，作用起效快，提高了肿胀抑制率，减少了一半的服药量，有减量增效的作用。附图说明图1是实验例1中填料量的考察结果；图2是实验例1中初粉粒度的考察结果；图3是实验例1中粉碎时间的考察结果；图4是实验例2中2,4-二硝基苯酚致大鼠发热实验曲线图。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。实施例1：一种银翘散超微粉的制备方法，取金银花200g、连翘200g、桔梗120g、薄荷120g、淡豆豉100g、淡竹叶80g、牛蒡子120g、荆芥80g、芦根200g、甘草80g，分别用摇摆式高速中药粉碎机预粉碎并过80目药典筛，将各味药材初粉混合均匀，制成银翘散初粉；取上述制得的80目银翘散初粉800g，置于纳力德超微粉碎机中超微粉碎20分钟，即得粒径为30μm银翘散超微粉。所述纳力德超微粉碎机装料量3.8l相当于药粉1.9kg。用法用量：采用温开水直接吞服或开水泡服的服用，用量：一日2-3次，一次3g。实施例2：一种银翘散超微粉的制备方法，取金银花100g、连翘100g、桔梗60g、薄荷60g、淡豆豉50g、淡竹叶40g、牛蒡子60g、荆芥40g、芦根100g、甘草40g，分别用摇摆式高速中药粉碎机预粉碎并过20目药典筛，将各味药材初粉混合均匀，制成银翘散初粉；取上述制得的20目银翘散初粉400g，置于纳力德超微粉碎机中超微粉碎30分钟，即得粒径为45μm银翘散超微粉。所述纳力德超微粉碎机装料量3.8l相当于药粉1.9kg。用法用量：采用温开水直接吞服或开水泡服的服用，用量：一日2-3次，一次3g。实施例3：一种银翘散超微粉的制备方法，取金银花100g、连翘100g、桔梗60g、薄荷60g、淡豆豉50g、淡竹叶40g、牛蒡子60g、荆芥40g、芦根100g、甘草40g，分别用摇摆式高速中药粉碎机预粉碎并过20目药典筛，将各味药材初粉混合均匀，制成银翘散初粉；取上述制得的60目银翘散初粉600g，置于纳力德超微粉碎机中超微粉碎25分钟，即得。所述纳力德超微粉碎机装料量3.8l相当于药粉1.9kg。用法用量：采用温开水直接吞服或开水泡服的服用，用量：一日2-3次，一次3g。实施例4：一种银翘散超微粉的制备方法，取金银花200g、连翘200g、桔梗120g、薄荷120g、淡豆豉100g、淡竹叶80g、牛蒡子120g、荆芥80g、芦根200g、甘草80g，分别用摇摆式高速中药粉碎机预粉碎并过100目药典筛，将各味药材初粉混合均匀，制成银翘散初粉；取上述制得的100目银翘散初粉1100g，置于纳力德超微粉碎机中超微粉碎15分钟，即得粒径为65μm银翘散超微粉。所述纳力德超微粉碎机装料量3.8l相当于药粉1.9kg。用法用量：采用温开水直接吞服或开水泡服的服用，用量：一日2-3次，一次3g。当前第1页12当前第1页12