外用组合物的制作方法

本申请涉及用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、特应性皮炎的预防/治疗、细胞增殖促进、及透明质酸产生促进的外用组合物。进而，本申请涉及提高皮肤的保湿的方法、抑制皱纹的方法、抑制松弛的方法、治疗创伤的方法、防脱发的方法、促进育发的方法、预防/治疗特应性皮炎的方法、促进细胞的增殖的方法、及促进透明质酸的产生的方法。

背景技术：

皮肤原本具备保湿功能，皮肤表面的皮脂膜防止水分从体内蒸腾，另外，皮肤中的氨基酸、无机盐类等天然保湿因子保持住皮肤内部的水分。然而，若皮肤老化或持续处于干燥状态，则皮脂、天然保湿因子的量减少而皮肤的保湿功能衰退。

作为天然保湿因子之一的透明质酸是β-d-n-乙酰葡糖胺与β-d-葡萄糖醛酸交替结合而成的直链状的高分子多糖，具有较高的水分保持能力。皮肤具有自外侧起依次为表皮、真皮及皮下组织的层状结构。透明质酸主要由存在于表皮的角质形成细胞和存在于真皮的成纤维细胞产生，填充表皮的细胞外空间、真皮的网状结构，且与细胞的功能维持、皮肤的恒常性维持密切相关。皮肤中尤其在真皮中富含，因生理性老化而皮肤的透明质酸量减少。

透明质酸在众多的化妆品等中作为代表性的保湿成分而被使用。另外，透明质酸除了其较高的保水能力之外，尽管尚未阐明其全貌，但报道其具有促进组织再生等的多种功能，进而用于例如皱纹和松弛的治疗(非专利文献1和2)、创伤的治疗(非专利文献3和4)、特应性皮炎的治疗(非专利文献5)等多种用途。

已知分子量为500以下对于经皮吸收是理想的，但通常配混在化妆品等中的透明质酸的分子量为100万以上，即使涂布于皮肤也难以传递至皮肤内。即，虽然含有透明质酸的外用剂能使皮肤表面保湿，但无法提高皮肤内部的保水能力。因此，例如，虽然含有透明质酸的外用剂对于表皮性皱纹是有用的，但无法期待对真皮性皱纹有效果，针对真皮性皱纹进行了直接向皮肤内注入透明质酸之类的侵入式方法(非专利文献1)。

开发了提高皮肤的透明质酸产生能力本身的化妆品等，专利文献1、专利文献2中公开了乙酰葡糖胺、葡萄糖醛酸等为促进透明质酸产生的物质。然而，这些文献中公开的仅仅是针对作为表皮的最外层的角质层的效果，而并未证实大多数透明质酸所具有的针对真皮的效果。

为了能够根据使用者的状态来开发外用剂，强烈期望增加透明质酸产生促进物质的种类、特别是除了皮肤表皮之外对皮肤真皮的细胞也具有效果的透明质酸产生促进物质。

毛囊真皮乳头细胞被称为育发信号的指挥塔，是护发研究的核心所在。关于育发/脱发，一直以来积累了许多着眼于毛囊真皮乳头细胞的研究，已知毛囊真皮乳头细胞增殖促进可带来增发效果。尽管基于毛囊真皮乳头细胞增殖促进作用已经开发出了它们的试剂(例如专利文献6和7)，但仍然需要新的育发促进剂、防脱发剂。

尿苷单磷酸为核苷酸中的一种，为尿苷的磷酸酯。

专利文献2、专利文献3、专利文献4中虽然公开了将尿苷单磷酸作为其它有效成分的增强剂而使用，但这些文献中均未公开尿苷单磷酸单独作为有效成分而发挥作用。

专利文献5中公开了：用尿苷对角膜实质细胞进行处置时，促进了透明质酸的产生。该专利文献是涉及干眼综合征的预防/治疗用组合物的发明，并非以皮肤的透明质酸产生促进为对象。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-2551号公报

专利文献2：日本特开2014-88329号公报

专利文献3：国际公开第2003/084485号

专利文献4：国际公开第2005/034902号

专利文献5：日本特表2009-517380号公报

专利文献6：国际公开第2016/079912号

专利文献7：日本特开2015-13849号公报

非专利文献

非专利文献1：宫地、其他2名著、advancedcosmeticdermatology2、消除皱纹/松弛提高患者的满意度的治疗法大全(皱纹·たるみを取る患者の満足度を高める治療法のすべて)、南江堂、2006年6月、53～59页

非专利文献2：nobilev,buonocored,michelottia,marzaticof(2014)anti-agingandfillingefficacyofsixtypeshyaluronicacidbaseddermo-cosmetictreatment:doubleblind,randomizedclinicaltrialofefficacyandsafety.jcosmetdermatol13:277-287.

非专利文献3：wyjchen,gabatangelo(1999)functionsofhyaluronaninwoundrepair.woundrepairandregeneration,vol7,no.2:79-89

非专利文献4：neuman,m.g.；nanau,r.m.；oruna-sanchez,l.；coto,g.hyaluronicacidandwoundhealing.j.pharm.pharm.sci.2015,18,53-60.

非专利文献5：draeloszd.aclinicalevaluationofthecomparableefficacyofhyaluronicacid-basedfoamandceramide-containingemulsioncreaminthetreatmentofmild-to-moderateatopicdermatitis.jcosmetdermatol.2011；10:185-188

本说明书中引用的现有技术文献公开的全部内容通过参照引入本说明书中。

技术实现要素：

发明要解决的问题

本申请的课题在于提供在皮肤表皮和皮肤真皮中促进透明质酸产生的、对保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、或特应性皮炎的预防/治疗有用的外用组合物。进而，本申请的课题在于提供提高皮肤的保湿的方法、抑制皱纹的方法、抑制松弛的方法、治疗创伤的方法、防脱发的方法、促进育发的方法、及预防/治疗特应性皮炎的方法。

用于解决问题的方案

本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果令人惊讶地发现：单独使用尿苷的磷酸酯时具有优异的细胞增殖促进作用、及在皮肤表皮和皮肤真皮中能够促进透明质酸产生，以至完成了本发明。

本发明提供下述：

[1]一种外用组合物，其特征在于，含有尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发或预防/治疗特应性皮炎的有效成分。

[2]根据[1]所述的组合物，其包含该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为单独的有效成分。

[3]根据[1]或[2]所述的组合物，其不包含有效量的用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发或预防/治疗特应性皮炎的其它有效成分。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷单磷酸、尿苷二磷酸、尿苷三磷酸、或它们的生理上允许的盐。

[5]根据[1]～[4]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷单磷酸或其生理上允许的盐。

[6]根据[1]～[5]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷5’-磷酸或其生理上允许的盐。

[7]根据[1]～[6]中任一项所述的组合物，其中，该组合物是用于皮肤的外用组合物。

[8]根据[1]～[7]中任一项所述的组合物，其中，该组合物用于促进细胞增殖的用途或用于促进透明质酸产生的用途。

[9]根据[1]～[8]中任一项所述的组合物，其为化妆品、外用药物、或外用准药物。

[10]一种外用组合物，其特征在于，含有尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为用于促进细胞增殖或促进透明质酸产生的有效成分。

[11]根据[10]所述的组合物，其包含该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为单独的有效成分。

[12]根据[10]或[11]所述的组合物，其不包含有效量的用于促进细胞增殖或促进透明质酸产生的其它有效成分。

[13]根据[10]～[12]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷单磷酸、尿苷二磷酸、尿苷三磷酸、或它们的生理上允许的盐。

[14]根据[10]～[13]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷单磷酸或其生理上允许的盐。

[15]根据[10]～[14]中任一项所述的组合物，其中，该尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐选自尿苷5’-磷酸或其生理上允许的盐。

[16]根据[10]～[15]中任一项所述的组合物，其中，该组合物是用于皮肤的外用组合物。

[17]根据[10]～[16]中任一项所述的组合物，其用于选自保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、或特应性皮炎的预防/治疗中的用途。

[18]根据[17]所述的组合物，其不包含有效量的用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发或预防/治疗特应性皮炎的其它有效成分。

[19]根据[10]～[18]中任一项所述的组合物，其为化妆品、外用药物、或外用准药物。

[20]一种将尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐用于皮肤的方法，其特征在于，该方法用于选自下述(1)～(9)的目的：

(1)提高皮肤的保湿

(2)抑制皱纹

(3)抑制松弛

(4)治疗创伤

(5)防脱发

(6)促进育发

(7)预防/治疗特应性皮炎

(8)促进细胞的增殖

(9)促进透明质酸的产生。

[21]一种尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐在制造外用组合物中的应用，其中，所述外用组合物含有尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、或特应性皮炎的预防/治疗、细胞增殖促进、或透明质酸产生促进的有效成分。

[22]一种尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐在保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、特应性皮炎的预防/治疗、细胞增殖促进、或透明质酸产生促进中的应用。

发明的效果

本申请的组合物能够促进细胞的增殖。本申请的组合物能够在皮肤表皮细胞和皮肤真皮细胞中促进透明质酸的产生，对皮肤赋予保湿性和柔软性，能够保持健康且紧绷的皮肤。本申请的组合物能够防止脱发或促进育发。

附图说明

图1是示出试验例1中用含有各种浓度的ump2na或尿苷的培养基培养人表皮角质形成细胞时所产生的透明质酸量的图。

图2是示出试验例1中用含有各种浓度的ump2na或尿苷的培养基培养人真皮成纤维细胞时所产生的透明质酸量的图。

图3是示出试验例2中用含有各种浓度的ump2na或尿苷的培养基培养人真皮成纤维细胞时的细胞数的图。

图4是示出试验例3中用含有各种浓度的ump2na的培养基培养人毛囊真皮乳头细胞时的细胞数的图。

图5是示出试验例4中用含有各种浓度的amp2na的培养基培养人真皮成纤维细胞时所产生的透明质酸量的图。

具体实施方式

本发明的组合物的特征在于，含有尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐作为用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、特应性皮炎的预防/治疗、细胞增殖促进、或透明质酸产生促进的有效成分。

本发明中有效成分是指：能够独立地对皮肤呈现出目标生理作用的、期待含有该有效成分的组合物呈现出其目标生理作用而在该组合物中含有的物质。作为该目标生理作用的例子，可列举出：保湿作用、抗皱作用、抗松弛作用、创伤治疗作用、防脱发作用、育发促进作用、特应性皮炎预防/治疗作用、细胞(例如透明质酸产生细胞(例如角质形成细胞、成纤维细胞)、毛囊真皮乳头细胞)增殖促进作用、或透明质酸产生促进作用。本发明中有效成分虽然能独立呈现出目标生理作用，但通过与其它成分组合使用而可以使目标生理作用相加或协同增强。

本发明中单独的有效成分是指：尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐不依赖于与其它有效成分的相互作用，而能够发挥出保湿作用、抗皱作用、抗松弛作用、创伤治疗作用、防脱发作用、育发促进作用、特应性皮炎预防/治疗作用、细胞(例如透明质酸产生细胞(例如角质形成细胞、成纤维细胞)、毛囊真皮乳头细胞)增殖促进作用、或透明质酸产生促进作用的成分，不排除本发明的组合物中含有其它有效成分。

本说明书中“有效量”是指：对于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发、特应性皮炎的预防/治疗、细胞增殖促进、或促进透明质酸产生有效的量。

本说明书中“用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发或预防/治疗特应性皮炎的其它有效成分”是指：作为用于保湿、抗皱、抗松弛、创伤治疗、防脱发、育发或预防/治疗特应性皮炎的有效成分而已知的、除了尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐以外的成分。

本说明书中“用于促进细胞增殖或促进透明质酸产生的其它有效成分”是指：作为用于促进细胞增殖或促进透明质酸产生的有效成分而已知的、除了尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐以外的成分。

本说明书中，作为尿苷的磷酸酯的例子，可列举出尿苷单磷酸(尿苷5’-磷酸、尿苷3’-磷酸、尿苷2’-磷酸)、尿苷二磷酸、尿苷三磷酸、尿苷环状磷酸。作为优选的尿苷的磷酸酯的例子，可列举出尿苷单磷酸、更优选列举出尿苷5’-磷酸。

作为尿苷的磷酸酯的生理上允许的盐的例子，可以列举出：钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐和钡盐等碱土金属盐；精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸盐；铵盐、三环己基铵盐等铵盐；单乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、单异丙醇胺盐、二异丙醇胺盐和三异丙醇胺等各种烷醇胺盐。

优选的盐为钠盐等碱金属盐。作为上述碱金属盐的例子，可列举出尿苷单磷酸一钠和尿苷单磷酸二钠(以下为ump2na)。

本发明中，尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐可以是单一的尿苷的磷酸酯或其盐，还可以是多种尿苷的磷酸酯或其盐的混合。

作为本发明的组合物中配混的尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐的量，根据尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐的种类、及该组合物的用途、形态等而异，例如，相对于该组合物的总重量，可以适宜选自：通常为0.0001～20重量％、优选为0.0001～10重量％的范围。可示例出：优选为0.001重量％～10重量％、进一步优选为0.01重量％～10重量％、更优选为0.01重量％～5重量％、更进一步优选为0.1重量％～10重量％、特别优选为0.5重量％～5重量％、另外优选为0.05重量％～3重量％、进一步优选为0.1重量％～1重量％。

作为本申请的组合物中包含的尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐的含量的上限值的进一步的例子，相对于该组合物的总重量，可列举出：优选为10重量％、7重量％、5重量％、3重量％、及2重量％，以及特别优选为1重量％。

作为本申请的组合物中包含的尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐的含量的下限值的进一步的例子，相对于该组合物的总重量，可列举出：优选为0.01重量％、0.05重量％、0.1重量％、0.5重量％、及0.7重量％，以及特别优选为1重量％。

对于本发明的组合物，除了尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐之外，还可以组合药学或香料和化妆品允许的基剂、载体而制备成各种形态。对于药学或香料和化妆品中允许的基剂、载体，可以使用现有公知的物质。另外，本发明的组合物中可以根据需要配混化妆品、外用的药物/准药物等适于皮肤、粘膜的外用组合物中配混的公知的各种成分。作为这样的成分，例如可以列举出：表面活性剂、色素(染料、颜料)、香料、防腐剂、杀菌剂(抗菌剂)、增稠剂、抗氧化剂、金属螯合剂、清凉剂、防臭剂、保湿剂、紫外线吸收剂、紫外线散射剂、维生素类、植物提取物、皮肤收敛剂、抗炎剂(消炎剂)、美白剂、细胞活化剂、血管扩张剂、血行促进剂、及皮肤功能增强剂等。

上述成分中，作为表面活性剂的具体例，可以列举出：高级脂肪酸皂、烷基硫酸酯盐、聚氧亚乙基烷基醚硫酸盐、烷基醚磷酸酯盐、n-酰基氨基酸盐、酰基n-甲基牛磺酸盐等阴离子表面活性剂；氯化烷基三甲基铵、氯化二烷基二甲基铵等阳离子表面活性剂；烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱、烷基酰胺二甲基氨基乙酸甜菜碱、2-烷基-n-羧基-n-羟基咪唑啉甜菜碱等两性表面活性剂；聚氧乙烯型、多元醇酯型、环氧乙烷/环氧丙烷嵌段共聚物等非离子表面活性剂等。另外，还可以没有特别限制地使用属于高分子表面活性剂、天然表面活性剂的表面活性剂。

另外，作为防腐剂的具体例，可以示例出：对羟基苯甲酸乙酯、水杨酸、及山梨酸等。作为增稠剂的具体例，可以示例出：黄原胶、羧甲基纤维素钠、羧基乙烯基聚合物等。作为多价螯合剂的具体例，可以示例出：乙二胺四乙酸的钠盐、磷酸、柠檬酸等。

本发明的组合物可以以涂布或喷雾至皮肤的外用组合物的形式使用。具体而言，本发明的组合物可以以化妆品、外用药物或外用准药物等外用剂(皮肤外用剂)的形式使用。其中，从日常能够促进皮肤的透明质酸产生这样的观点出发，优选化妆品。需要说明的是，上述外用剂中包含养发剂、育发剂、或对养发、育发有效果的洗发剂(shampoo)、护发素(rinse)、护发乳液(包括营养液(tonic)、整发液(liquid))等各种毛发化妆品。

在本发明的组合物用于头发的育发或防脱发的情况下，本发明的组合物优选制剂化成上述示例的毛发化妆品。另外，本发明的组合物还可用作使用者希望除了头发之外使眉毛、睫毛等增量/伸长的毛生成促进/防脱发剂。

育发是指包括毛发生长在内的使现有毛发的健康生长，还包括促进新毛发的生成。防脱发是指防止现有的毛发脱落。

在本发明的组合物用于育发或防脱发的情况下，本发明的组合物可以用于随附于这些用途的用途(例如，头发稀薄的预防或治疗、发生长促进、生发促进、病后/产后脱发的治疗、养发等)。

对于本发明的组合物的形态，只要能用于皮肤、粘膜就没有特别限制，例如可以示例出：膏状、摩丝状、啫喱状、液态、乳液状、悬浮液状、乳霜状、软膏状、固体状、片状、气雾状、喷雾状、擦剂。尤其在制成化妆品的情况下，可以示例出：化妆水；润肤乳液、奶液、营养乳液、洁面乳液等乳液；润肤霜、按摩膏、洁面霜、化妆膏等霜；润唇膏等。另外，尤其若制成养发剂、育发剂等头发制品的情况下，可以示例出：营养液、护发膏、护发乳液、气雾剂(喷雾剂)、摩丝、洗发剂、护发素、整发液等。

本发明的组合物可以作为化妆品、外用药物或外用准药物直接涂布、喷雾或粘贴于皮肤来使用。对于其使用比例，根据使用者(人)的年龄、性别、用途、患部的症状的程度等，将呈现出目标作用的有效量以1次/天至5或6次/天的次数经皮给于皮肤。本发明的组合物的使用期间没有限定，为了有效地持续促进细胞增殖和/或促进透明质酸产生而优选持续地使用，例如可以使用1个月(优选为2个月以上)。

本发明的组合物通过促进细胞的增殖及/或促进透明质酸的产生，可发挥如下作用：抗老化、保湿、抗皱、抗松弛、育发、防脱发、创伤治疗、特应性皮炎的预防/治疗、老年性干皮病等的预防/治疗效果。因此，本发明的组合物可以用作以抗老化、保湿、抗皱、抗松弛、育发、防脱发、创伤治疗、特应性皮炎预防/治疗、老年性干皮病等的预防/治疗为目的的化妆品、外用药物或外用准药物。

作为本发明的一个方式，可列举出：日本特开2014-88329号公报中提出了与尿苷的磷酸酯组合来配混在化妆品中的、不包含乙酰葡糖胺、葡萄糖醛酸、葡萄糖醛酸的盐、或它们的衍生物的组合物。

本说明书中，乙酰葡糖胺的衍生物为下述化学式(1)的化合物：

(r1为氢原子或碳数2～18的烷基。r2、r3和r4为氢原子或碳数2～18的酰基，可以全部相同或任意者不同。1位的立体结构可以是α或β中的任一种。其中，r1、r2、r3、r4不能全部为氢原子。)。

具体而言，为辛基(2-乙酰胺基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、2-乙酰胺基-1,3,4,6-四-o-乙酰基-2-脱氧-β-d-吡喃葡萄糖苷、2-乙酰胺基-2-脱氧-6-o-辛酰基-α-d-吡喃葡萄糖、辛基(2-乙酰胺基-2-脱氧-6-o-辛酰基)β-d-吡喃葡萄糖苷、丁基(2-乙酰胺基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、戊基(2-乙酰胺基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、月桂基(2-乙酰胺基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、2-乙酰胺基-2-脱氧-6-o-棕榈酰基-α-d-吡喃葡萄糖、香叶基(2-乙酰胺基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、乙基(2-乙酰胺基-3,4,6-三-o-乙酰基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、戊基(2-乙酰胺基-3,4,6-三-o-乙酰基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、辛基(2-乙酰胺基-3,4,6-三-o-乙酰基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷、香叶基(2-乙酰胺基-3,4,6-三-o-乙酰基-2-脱氧)β-d-吡喃葡萄糖苷。

葡萄糖醛酸的盐为钾盐、钠盐、及其它生理上允许的盐。葡萄糖醛酸的衍生物为葡萄糖醛酸内酯、及葡糖醛酸木聚糖。

作为本发明的另一方式，可列举出：国际公开第wo2003/084485号和国际公开wo2005/034902号中提出了与尿苷的磷酸酯组合来配混在化妆品等中的、不包含嘌呤系核酸相关物质的组合物。

本说明书中，嘌呤系核酸相关物质为：腺嘌呤、腺苷、腺苷的磷酸酯〔腺苷2’-磷酸、腺苷3’-磷酸、腺苷5’-磷酸、腺苷5’-二磷酸、腺苷5’-三磷酸、环磷酸腺苷、腺苷酸基琥珀酸、烟酰胺腺嘌呤单核苷酸(nmn)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)、黄素腺嘌呤二核苷酸(fad)〕、其代谢物〔次黄嘌呤、肌苷、肌苷酸〕及其盐类；鸟嘌呤、鸟苷、鸟苷的磷酸酯〔鸟苷3’-磷酸、鸟苷5’-磷酸、鸟苷5’-二磷酸、鸟苷5’-三磷酸等〕、其代谢产物〔黄苷酸、黄嘌呤〕及其盐类。

上述的盐为：钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐和钡盐等碱土金属盐；精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸盐；铵盐、三环己基铵盐等铵盐；单乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、单异丙醇胺盐、二异丙醇胺盐和三异丙醇胺等烷醇胺盐。

本发明提供：提高皮肤的保湿的方法、抑制皱纹的方法、抑制松弛的方法、治疗创伤的方法、防脱发的方法、促进育发的方法、预防/治疗特应性皮炎的方法、细胞(例如透明质酸产生细胞(例如角质形成细胞、成纤维细胞)、毛囊真皮乳头细胞)的增殖促进的方法、及促进透明质酸的产生的方法。该方法可通过将尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐用于皮肤来实施。

本发明的方法中，对于上述物质在皮肤上的应用，为了简便可以通过将本发明的上述组合物涂布、喷雾或粘贴于皮肤来进行。

本发明的方法中，对于将尿苷的磷酸酯或其生理上允许的盐施用于皮肤的频度和量，没有特别限制。例如，可以根据使用对象的年龄、性别、所期待的效果、皮肤症状的程度等，以1次/天至5或6次/天的次数将适合量经皮给予至皮肤。具体而言，使用本发明的组合物并实施本发明的方法的情况下，例如可以使该组合物相对于所施用的皮肤面积的使用比例为0.5～10mg/cm²的范围的量作为1次用量的基准。本发明的方法的使用期间没有限定，为了有效地持续促进细胞增殖和促进透明质酸产生而优选持续地使用，例如可以使用1个月(优选为2个月以上)。

实施例

以下列举实施例和试验例对本发明进行说明，但本发明不限定于这些。需要说明的是，以下的试验例中，w/v％是指100ml中所包含的重量(g)。

[实施例1]化妆水(ph6.5)

依据常规方法，制备上述配方的化妆水。

[实施例2]乳液(ph6.5)

[实施例3]育发剂(ph7.0)

依据常规方法，制备上述配方的育发剂。

＜试验例1：ump2na和尿苷在培养人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的促进透明质酸产生的效果的评价＞

将预培养的初代培养人表皮角质形成细胞(kuraboindustriesltd.制)在96微孔板中、用含增殖因子的epilife液体培养基(thermofisherscientifick.k.制)进行培养后，更换为用不含增殖因子的培养基制成为各浓度(0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2mol/l)的ump2na或尿苷溶液。

将预培养的初代培养真皮成纤维细胞(kuraboindustriesltd.制)在96微孔板中、用含血清的medium106液体培养基(thermofisherscientifick.k.制)进行培养后，更换为用无血清培养基制成为各浓度(0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2mol/l)的ump2na或尿苷溶液。

将它们在37℃、5％co2的条件下培养48小时和72小时。培养后，回收各孔中的培养上清液，使用透明质酸定量试剂盒(cosmobioco.,ltd.制)来检测该培养上清中的透明质酸量，用酶标仪进行测定。

图1示出表皮角质形成细胞的结果。

图2示出真皮成纤维细胞的结果。

＜试验例2：ump2na和尿苷在培养人皮肤成纤维细胞中的促进增殖效果的评价＞

将预培养的初代培养人皮肤成纤维细胞(kuraboindustriesltd.制)在96微孔板中、用含血清的medium106液体培养基(thermofisherscientifick.k.制)进行培养，在附着稳定化后更换为用相同培养基制成各浓度(0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2mol/l)的ump2na或尿苷溶液。将它们在37℃、5％co2的条件下培养48小时、72小时和96小时。培养各时间后，使用wst-1试剂(takarabioinc.制)来检测各孔中的细胞数，然后用酶标仪进行测定。

将结果示于图3。

＜试验例3：ump2na的培养人毛囊真皮乳头细胞的增殖促进效果的评价＞

将预培养的初代培养人毛囊真皮乳头细胞(takarabioinc.制)在96微孔板中、用毛囊真皮乳头细胞增殖培养基(takarabioinc.制)进行培养，在附着稳定化后更换为制成各种浓度的含有试剂的试验培养基。将其在37℃、5％co2的条件下培养72小时、96小时和120小时。在培养各时间后将细胞核进行染色，进行了各孔中的细胞数的计数。

将结果示于图4。

＜试验例4：单磷酸腺苷二钠在培养人真皮成纤维细胞中的促进透明质酸产生效果的评价＞

将预培养的初代培养真皮成纤维细胞(kuraboindustriesltd.制)在96微孔板中、用含血清的medium106液体培养基(thermofisherscientifick.k.制)进行培养后，更换为用无血清培养基制成各浓度(0、10^-8、10^-6、10^-4w/v％)的单磷酸腺苷二钠(amp2na)。

将其在37℃、5％co2的条件下培养48小时和96小时。培养后，回收各孔中的培养上清，使用透明质酸定量试剂盒(cosmobioco.,ltd.制)来检测该培养上清中的透明质酸量，用酶标仪进行测定。

将结果示于图5。