抗体-药物缀合物制剂及其冻干的制作方法

本发明涉及一种特异性抗体-药物缀合物制剂和冻干该制剂的方法。

背景技术：

因此，预期一种抗体-药物缀合物(adc)，其具有与抗体缀合的具有细胞毒性的药物，所述抗体的抗原在癌细胞表面表达并且所述抗体还与能够细胞内化的抗原结合，并且因此能够选择性地将药物递送至癌细胞，从而引起药物在癌细胞内的积聚并杀死癌细胞(非专利文献1至5)。

作为一种这样的抗体-药物缀合物，已知包含抗体和作为拓扑异构酶i抑制剂的依沙替康作为其组分的抗体-药物缀合物(专利文献1至8，和非专利文献6、7)。由于这些抗体-药物缀合物发挥特别优异的抗肿瘤作用并具有安全性，因此它们目前正处于临床研究中。

作为这种抗体-药物缀合物的制剂，已知包含美登木素生物碱作为组分的抗体-药物缀合物的制剂(专利文献9至12)、包含一甲基澳瑞他汀e作为组分的抗体-药物缀合物的制剂(专利文献13至15)、包含sn-38作为组分的抗体-药物缀合物的制剂(专利文献16)等。

引文列表

专利文献

专利文献1：国际公开号wo2014/057687

专利文献2：国际公开号wo2014/061277

专利文献3：国际公开号wo2015/098099

专利文献4：国际公开号wo2015/115091

专利文献5：国际公开号wo2015/146132

专利文献6：国际公开号wo2015/155976

专利文献7：国际公开号wo2015/155998

专利文献8：国际公开号wo2018/135501

专利文献9：国际公开号wo2004/004639

专利文献10：国际公开号wo2004/110498

专利文献11：国际公开号wo2007/019232

专利文献12：国际公开号wo2015/059147

专利文献13：国际公开号wo2010/081004

专利文献14：国际公开号wo2014/143765

专利文献15：国际公开号wo2015/157286

专利文献16：国际公开号wo2014/092804

非专利文献

非专利文献1：ducry，l.等人，bioconjugatechem.(2010)21，5-13。

非专利文献2：alley，s.c等人，currentopinioninchemicalbiology(2010)14，529-537。

非专利文献3：damlen.k，expertopin.biol.ther.(2004)4，1445-1452。

非专利文献4：senterp.d等人，naturebiotechnology(2012)30，631-637。

非专利文献5：howarda.等人，jclinoncol29：398-405。

非专利文献6：ogitaniy.等人，clinicalcancerresearch(2016)22(20)，5097-5108。

非专利文献7：ogitaniy.等人，cancerscience(2016)107，1039-1046。

技术实现要素：

技术问题

在抗体制剂中，聚集体的形成和分解产物的产生引起医学上不希望的作用，例如，它们成为接受制剂的患者的免疫原性或静脉病症的因素。因此，在配制抗体时，需要抑制聚集体的形成和分解产物的产生，并且鉴于此，已经研究了各种药物组合物(例如，水性注射剂和冻干注射剂形式)。

然而，当配制抗体-药物缀合物时，需要更复杂的研究，因为不仅需要考虑抗体部分的具体性质，而且需要考虑药物-接头部分的具体性质。

另外，在由含有蔗糖或海藻糖的水溶液制备冻干注射剂时，存在问题，例如(1)初次干燥过程长以及(2)在冻干块中倾向于产生收缩。

因此，本发明的主要目的在于提供一种其中抑制了聚集体的形成和分解产物的产生的特异性抗体-药物缀合物的药物组合物(尤其是水性注射剂和冻干注射剂形式)，以及一种将水溶液冻干成冻干注射剂的有效方法。

问题的解决方案

本发明人已经发现了一种其中抑制了聚集体的形成和分解产物的产生的特异性抗体-药物缀合物的药物组合物(尤其是水性注射剂和冻干注射剂形式)，并且还发现了一种将水溶液冻干成冻干注射剂的有效方法。

具体地，本发明涉及以下。

[1]一种药物组合物，其包含

(i)抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖或海藻糖，和

(iv)表面活性剂，

其中所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式1]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[2]根据[1]的药物组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[3]根据[1]或[2]的药物组合物，其包含

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)3至80mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)24至320mg的蔗糖或海藻糖，和

(iv)0.05至1.6mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[4]根据[1]-[3]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10至40mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖或100mg的海藻糖水合物，和

(iv)0.2至0.4mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[5]根据[1]或[2]的药物组合物，其包含

(i)抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖，和

(iv)聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[6]根据[1]、[2]或[5]的药物组合物，其包含

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)3至80mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)24至320mg的蔗糖，和

(iv)0.05至1.6mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[7]根据[1]、[2]、[5]或[6]的药物组合物，其包含

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10至40mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2至0.4mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[8]根据[1]-[7]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10或25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

[9]根据[1]-[8]中任一项的药物组合物，其中，所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为4.0-7.0。

[10]根据[1]-[9]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为2至8。

[11]根据[1]-[10]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗her2抗体、抗her3抗体、抗trop2抗体、抗b7-h3抗体或抗gpr20抗体。

[12]根据[11]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗her2抗体。

[13]根据[12]的药物组合物，其中所述抗her2抗体为包含由seqidno：1的氨基酸残基1-449组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2的氨基酸残基1-214组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或包含由seqidno：1所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[14]根据[12]或[13]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[15]根据[12]-[14]的药物组合物，其包含

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80，

其中所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为5.5。

[16]根据[12]-[14]的药物组合物，其包含

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.89mg的l-组氨酸和4.04mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

[17]根据[12]-[14]中任一项的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.45mg的l-组氨酸和20.2mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

[18]根据[11]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗her3抗体。

[19]根据[18]的药物组合物，其中所述抗her3抗体是包含由seqidno：3所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：4所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

[20]根据[18]或[19]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[21]根据[18]-[20]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯20，

其中所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为5.4。

[22]根据[18]-[20]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.81mg的l-组氨酸和4.14mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯20。

[23]根据[18]-[20]中任一项的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.06mg的l-组氨酸和20.7mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯20。

[24]根据[11]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗trop2抗体。

[25]根据[24]的药物组合物，其中所述抗trop2抗体是包含由seqidno：5的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：6的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

[26]根据[24]或[25]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为3至5。

[27]根据[24]-[26]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80，

其中所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为6.0。

[28]根据[24]-[26]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.78mg的l-组氨酸和1.05mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80。

[29]根据[24]-[26]中任一项的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.88mg的l-组氨酸和5.26mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯80。

[30]根据[11]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗b7-h3抗体。

[31]根据[30]的药物组合物，其中所述抗b7-h3抗体是包含由seqidno：7的氨基酸残基20-471组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：8的氨基酸残基21-233组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

[32]根据[30]或[31]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为3至5。

[33]根据[30]-[32]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯20，

其中所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为5.9。

[34]根据[30]-[32]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.65mg的l-组氨酸和1.22mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯20。

[35]根据[30]-[32]中任一项的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.23mg的l-组氨酸和6.12mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯20。

[36]根据[11]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗gpr20抗体。

[37]根据[36]的药物组合物，其中所述抗gpr20抗体是包含由seqidno：9的氨基酸残基20-472组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：10的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

[38]根据[36]或[37]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[39]根据[36]-[38]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80，

其中所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时组合物的ph为5.4。

[40]根据[36]-[38]中任一项的药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.32mg的l-组氨酸和1.66mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

[41]根据[36]-[38]中任一项的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)1.62mg的l-组氨酸和8.29mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

[42]一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.89mg的l-组氨酸和4.04mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80，

其中所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式2]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[43]根据[42]的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.45mg的l-组氨酸和20.2mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

[44]根据[42]或[43]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[45]根据[42]-[44]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗her2抗体。

[46]根据[45]的药物组合物，其中所述抗her2抗体是包含由seqidno：1的氨基酸残基1-449组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2的氨基酸残基1-214组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[47]根据[45]的药物组合物，其中所述抗her2抗体是包含由seqidno：1所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[48]一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.81mg的l-组氨酸和4.14mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯20，

其中所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式3]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[49]根据[48]的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.06mg的l-组氨酸和20.7mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯20。

[50]根据[48]或[49]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[51]根据[48]-[50]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗her3抗体。

[52]根据[51]的药物组合物，其中所述抗her3抗体是包含由seqidno：3所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：4所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[53]根据[52]的药物组合物，其中所述抗her3抗体在所述重链的羧基末端处缺乏赖氨酸残基。

[54]一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.78mg的l-组氨酸和1.05mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80，

其中所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式4]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[55]根据[54]的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.88mg的l-组氨酸和5.26mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯80。

[56]根据[54]或[55]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为3至5。

[57]根据[54]-[56]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗trop2抗体。

[58]根据[57]的药物组合物，其中所述抗trop2抗体是包含由seqidno：5的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：6的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[59]根据[58]的药物组合物，其中所述抗trop2抗体在所述重链的羧基末端处缺乏赖氨酸残基。

[60]一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.65mg的l-组氨酸和1.22mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯20，

其中所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式5]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[61]根据[60]的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.23mg的l-组氨酸和6.12mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯20。

[62]根据[60]或[61]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为3至5。

[63]根据[60]-[62]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗b7-h3抗体。

[64]根据[63]的药物组合物，其中所述抗b7-h3抗体是包含由seqidno：7的氨基酸残基20-471组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：8的氨基酸残基21-233组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[65]根据[64]的药物组合物，其中所述抗b7-h3抗体在所述重链的羧基末端处缺乏赖氨酸残基。

[66]一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.32mg的l-组氨酸和1.66mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80，

其中，所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式6]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

[67]根据[66]的药物组合物，其包含

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)1.62mg的l-组氨酸和8.29mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

[68]根据[66]或[67]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数范围为7至8。

[69]根据[66]-[68]中任一项的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗gpr20抗体。

[70]根据[69]的药物组合物，其中所述抗gpr20抗体是包含由seqidno：9的氨基酸残基20-472组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：10的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

[71]根据[70]的药物组合物，其中所述抗gpr20抗体在所述重链的羧基末端处缺乏赖氨酸残基。

[72]根据[1]-[71]中任一项的药物组合物，其中所述组合物是注射剂形式。

[73]根据[72]的药物组合物，其中所述组合物是水性注射剂形式。

[74]根据[73]的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物的浓度为20mg/ml。

[75]根据[73]或[74]的药物组合物，其中所述组合物是冷冻的。

[76]根据[72]的药物组合物，其中所述组合物是冻干注射剂的形式。

[77]根据[76]的药物组合物，其中所述组合物储存在棕色小瓶中。

[78]根据[1]-[77]中任一项的药物组合物，其中所述组合物用于治疗癌症。

[79]一种用于生产根据[76]的药物组合物的方法，包括以下步骤

(1)制备包含预定量的以下物质的水溶液

(i)抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖或海藻糖，和

(iv)表面活性剂，

(2)如果需要，将水溶液的ph调节至预定值，然后，

(3)冻干水溶液。

[80]根据[79]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤包括在接近水溶液的共晶点的搁板温度(shelftemperature)下退火的过程，

其中所述接近共晶点指示从低于所述共晶点1.5℃的温度到高于所述共晶点1.5℃的温度的范围。

[81]根据[80]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤包括在与所述水溶液的共晶点相同的搁板温度下退火的过程。

[82]根据[80]或[81]的生产方法，其特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，缩短了初次干燥过程的时间。

[83]根据[80]-[82]中任一项的生产方法，其特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，获得了收缩较少的冻干块。

[84]根据[79]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤包括在-4至-1℃的搁板温度下进行退火的过程。

[85]根据[79]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤包括在-4至-2℃的搁板温度下进行退火的过程。

[86]根据[79]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤包括在-2.5℃的搁板温度下进行退火的过程。

[87]根据[84]-[86]中任一项的生产方法，其中冻干水溶液的步骤还包括在-5至5℃的搁板温度下在5至15pa的真空下进行初次干燥的过程。

[88]根据[84]-[86]中任一项的生产方法，其中冻干水溶液的步骤还包括在0℃的搁板温度下在10pa的真空下进行初次干燥的过程。

[89]根据[87]或[88]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤还包括在40至50℃的搁板温度下在5至15pa的真空下进行二次干燥的过程。

[90]根据[87]或[88]的生产方法，其中冻干水溶液的步骤还包括在45℃的搁板温度下在10pa真空下进行二次干燥的过程。

[91]一种试剂盒，其包含根据[42]或[43]的药物组合物和注射用水。

[92]根据[91]的试剂盒，其中所述注射用水储存在安瓿中。

[93]一种生产冻干注射剂的方法，其包括使含有蔗糖或海藻糖的水溶液在接近所述水溶液的共晶点的搁板温度下退火的过程，其中所述接近共晶点指示从低于所述共晶点1.5℃的温度到高于所述共晶点1.5℃的温度的范围。

[94]一种生产冻干注射剂的方法，其包括使含有蔗糖或海藻糖的水溶液在与所述水溶液的共晶点相同的搁板温度下退火的过程。

发明的有益效果

本发明可以提供抑制聚集体的形成和分解产物的产生的药物组合物(尤其是水性注射剂和冻干注射剂形式)，并且还可以提供从水溶液到冻干注射剂的有效冻干方法，其中包括特异性抗体-药物缀合物。

附图简述

[图1]图1是显示抗her2抗体的重链氨基酸序列(seqidno：1)的图。

[图2]图2是显示抗her2抗体的轻链氨基酸序列(seqidno：2)的图。

[图3]图3是与赋形剂筛选相关的图。横坐标描绘各制剂中的时间进程，和纵坐标描绘聚集体的含量。

[图4]图4是与缓冲剂筛选相关的图。横坐标描绘各制剂中的时间进程，和纵坐标描绘聚集体的含量。

[图5]图5是与ph筛选相关的图。横坐标描绘各制剂中的时间进程，和纵坐标描绘聚集体的含量。

[图6]图6是与ph筛选相关的图。横坐标描绘各制剂中的时间进程，和纵坐标描绘npi的含量。

[图7]图7是与表面活性剂筛选相关的图。横坐标描绘各制剂中的时间进程，和纵坐标描绘小于10mm的不溶性微粒的数量的含量比。在图中，"ps"是指聚山梨酯，"ps20"是指聚山梨酯20，和"ps80"是指聚山梨酯80。

[图8]图8是与对小瓶的研究有关的图。横坐标描绘光照射量，和纵坐标描绘聚集体的含量。

[图9]图9是与对小瓶的研究有关的图。横坐标描绘光照射量，和纵坐标描绘iop的含量。

[图10]图10是在初次干燥过程中改变搁板温度和室真空度时水溶液(1)的产物温度的等值线图。

[图11]图11是在初次干燥过程中改变搁板温度和室真空度时水溶液(1)的干燥时间的等值线图。

[图12]图12是显示当在-7至0.5℃的搁板温度下进行退火和冻干时产品温度(在退火期间)和冻干块的形状的图。

[图13]图13是显示通过毛细管差示扫描量热计测得的抗体-药物缀合物(1)热变性的图。

[图14]图14是显示抗her3抗体的重链氨基酸序列(seqidno：3)的图。

[图15]图15是显示抗her3抗体的轻链氨基酸序列(seqidno：4)的图。

[图16]图16是显示抗trop2抗体的重链氨基酸序列(seqidno：5)的图。

[图17]图17是显示抗trop2抗体的轻链氨基酸序列(seqidno：6)的图。

[图18]图18是显示抗b7-h3抗体的重链氨基酸序列(seqidno：7)的图。

[图19]图19是显示抗b7-h3抗体的轻链氨基酸序列(seqidno：8)的图。

[图20]图20是显示抗gpr20抗体的重链氨基酸序列(seqidno：9)的图。

[图21]图21是显示抗gpr20抗体的轻链氨基酸序列(seqidno：10)的图。

具体实施方式

以下，参照附图对实施本发明的优选方式进行说明。给出下面描述的实施方案仅用于说明本发明的典型实施方案的一个实例，而不是意欲限制本发明的范围。

[抗体-药物缀合物]

本发明中使用的抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式7]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

在本发明中，将抗体-药物缀合物中由接头和药物组成的部分结构称为"药物-接头"。药物-接头与在抗体的链间二硫键位点(重链之间的两个位点，以及重链和轻链之间的两个位点)处形成的巯基(换句话说，半胱氨酸残基的硫原子)连接。

本发明的药物接头包括依沙替康(iupac名称：(1s,9s)-1-氨基-9-乙基-5-氟-1,2,3,9,12,15-六氢-9-羟基-4-甲基-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉13-二酮，(也表示为化学名称：(1s,9s)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1h,12h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13(9h,15h)-二酮))作为组分，其是拓扑异构酶i抑制剂。依沙替康是具有抗肿瘤作用的喜树碱衍生物，由下式表示：

[式8]

本发明中使用的抗体-药物缀合物还可以由下式表示：

[式9]

其中，所述药物接头通过硫醚键缀合至抗体。n的含义与所谓的缀合药物分子的平均数(dar；药物/抗体比)相同，并且表示每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数。

在迁移到癌细胞中后，本发明中使用的抗体-药物缀合物释放由下式表示并具有拓扑异构酶i抑制作用的化合物(下文称为"化合物(1)")：

[式10]

。

推断化合物(1)是通过分解由下式表示的化合物的缩醛胺结构形成的：

[式11]

上式化合物据推断通过裂解本发明中使用的抗体-药物缀合物的接头部分形成。

已知本发明中使用的抗体-药物缀合物具有旁观者效应(ogitaniy.等人，cancerscience(2016)107,1039-1046)。

旁观者效应通过这样的过程来发挥，其中本发明中使用的抗体-药物缀合物内化在表达靶标的癌细胞中，然后释放的化合物(1)也对存在于其周围且不表达靶标的癌细胞发挥抗肿瘤作用。

[抗体-药物缀合物中的抗体]

本发明中使用的抗体-药物缀合物中的抗体可以来源于任何物种，并且优选来源于人、大鼠、小鼠或兔的抗体。在抗体来源于除人物种以外的物种的情况下，优选使用公知技术进行嵌合或人源化。本发明的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，并且优选单克隆抗体。

本发明的抗体-药物缀合物中的抗体是优选具有能够靶向癌细胞的性质的抗体，并且优选具有例如识别癌细胞的性质、结合癌细胞的性质、在癌细胞中内化的性质和/或针对癌细胞的杀细胞活性的抗体。

抗体对癌细胞的结合活性可以使用流式细胞术确认。可以使用以下方法确认抗体在癌细胞中的内化：(1)使用与治疗性抗体结合的二抗(荧光标记的)通过荧光显微镜可视化掺入细胞中的抗体的测定法(celldeathanddifferentiation(2008)15,751-761)，(2)使用与治疗性抗体结合的二抗(荧光标记的)测量掺入细胞中的荧光强度的测定法(molecularbiologyofthecell,vol.15,5268-5282,2004年12月)，或(3)使用与治疗性抗体结合的免疫毒素的mab-zap测定法，其中毒素在掺入细胞后释放以抑制细胞生长(biotechniques28:162-165,2000年1月)。作为免疫毒素，可以使用白喉毒素催化区域和蛋白质g的重组复合蛋白。

抗体的抗肿瘤活性可以通过测定对细胞生长的抑制活性而在体外证实。例如，培养过表达抗体靶蛋白的癌细胞系，并将抗体以不同浓度加入培养体系中，以测定对病灶形成、集落形成和球状体生长的抑制活性。抗肿瘤活性可以通过例如向具有高表达靶蛋白的移植癌细胞系的裸鼠施用抗体，并测定癌细胞的变化而在体内证实。

由于抗体-药物缀合物中缀合的化合物发挥抗肿瘤作用，所以优选但非必需的是抗体本身应具有抗肿瘤作用。为了特异性地和选择性地发挥抗肿瘤化合物对癌细胞的细胞毒活性，重要的是并且还优选抗体应具有内在化以迁移到癌细胞中的性质。

本发明中使用的抗体-药物缀合物中的抗体可以通过本领域已知的程序获得。例如，本发明的抗体可以使用本领域通常实施的方法获得，所述方法包括用抗原性多肽免疫动物，收集并纯化体内产生的抗体。抗原的来源不限于人，并且可以用来源于非人动物如小鼠、大鼠等的抗原免疫动物。在这种情况下，可以测试与所获得的异源抗原结合的抗体与人抗原的交叉反应性，以筛选适用于人类疾病的抗体。

或者，按照本领域已知的方法(例如，kohler和milstein,nature(1975)256,p.495-497；和kennet,r.ed.,monoclonalantibodies,p.365-367,plenumpress,n.y.(1980))将产生针对抗原的抗体的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立杂交瘤，进而可以从杂交瘤中获得单克隆抗体。

可通过基因工程化宿主细胞以产生编码抗原蛋白的基因来获得抗原。具体地，制备允许抗原基因表达的载体，并将其转移至宿主细胞，以使基因表达。可以纯化如此表达的抗原。抗体也可以通过用上述基因工程化的抗原表达细胞或表达抗原的细胞系免疫动物的方法获得。

本发明中使用的抗体-药物缀合物中的抗体优选是通过人工修饰以降低对人的异源抗原性而获得的重组抗体，例如嵌合抗体或人源化抗体，或者优选是仅具有来源于人的抗体的基因序列的抗体，即人抗体。这些抗体可以使用已知方法生产。

作为嵌合抗体，可以列举其中抗体可变区和恒定区来源于不同物种的抗体，例如，其中小鼠或大鼠来源的抗体可变区与人来源的抗体恒定区连接的嵌合抗体(proc.natl.acad.sci.u.s.a.,81,6851-6855,(1984))。

作为人源化抗体，可以列举通过仅将异源抗体的互补决定区(cdr)整合到人来源的抗体中而获得的抗体(nature(1986)321,pp.522-525)，和通过cdr移植方法将异源抗体框架以及异源抗体的cdr序列的部分氨基酸残基移植到人抗体中而获得的抗体(wo90/07861)，和使用基因转换诱变策略人源化的抗体(美国专利号5821337)。

作为人抗体，可以列举通过使用具有包括人抗体重链和轻链基因的人染色体片段的人抗体产生小鼠而产生的抗体(参见，例如，tomizuka,k.等人,naturegenetics(1997)16,p.133-143;kuroiwa,y.等人,nucl.acidsres.(1998)26,p.3447-3448;yoshida,h.等人,animalcelltechnology:basicandappliedaspectsvol.10,p.69-73(kitagawa,y.,matsuda,t.和iijima,s.eds.),kluweracademicpublishers,1999;tomizuka,k.等人,proc.natl.acad.sci.usa(2000)97,p.722-727)。或者，可以列举通过噬菌体展示从人抗体文库筛选而获得的抗体(参见，例如，wormstone,i.m.等人,investigativeophthalmology&visualscience(2002)43(7),p.2301-2308;carmen,s.等人,briefingsinfunctionalgenomicsandproteomics(2002),1(2),p.189-203;.siriwardena,d.等人,ophthalmology(2002)109(3),p.427-431)。

在本发明中，还包括在本发明中使用的抗体-药物缀合物中的抗体的修饰变体。修饰变体是指通过对根据本发明的抗体进行化学或生物学修饰而获得的变体。化学修饰的变体的实例包括包含化学部分与氨基酸骨架的连接的变体，包含化学部分与n-连接或o-连接的糖链的连接的变体等。生物学修饰的变体的实例包括通过翻译后修饰(如n-连接或o-连接的糖基化、n-或c-末端加工、脱酰胺、天冬氨酸异构化或甲硫氨酸氧化)获得的变体，以及通过在原核宿主细胞中表达而已在n末端添加甲硫氨酸残基的变体。另外，为了能够检测或分离根据本发明的抗体或抗原而标记的抗体，例如酶标记的抗体、荧光标记的抗体、和亲和标记的抗体也包括在修饰变体的含义中。根据本发明的抗体的这种修饰变体可用于改善抗体的稳定性和血液保留、降低其抗原性、检测或分离抗体或抗原等。

此外，通过调节与根据本发明的抗体连接的聚糖的修饰(糖基化、脱岩藻糖基化等)，可以增强抗体依赖性细胞的细胞毒活性。作为调节抗体的聚糖修饰的技术，已知wo99/54342、wo00/61739、wo02/31140等。然而，该技术不限于此。在根据本发明的抗体中，还包括其中调节聚糖修饰的抗体。

已知在培养的哺乳动物细胞中产生的抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失(journalofchromatographya，705:129-134(1995))，并且还已知在培养的哺乳动物细胞中产生的抗体的重链羧基末端的两个氨基酸残基(甘氨酸和赖氨酸)缺失，并且新位于羧基末端的脯氨酸残基被酰胺化(analyticalbiochemistry，360:75-83(2007))。然而，重链序列的这种缺失和修饰不影响抗体的抗原结合亲和力和效应子功能(补体的激活、抗体依赖性细胞毒性等)。因此，在根据本发明的抗体中，还包括经过这种修饰的抗体和抗体的功能片段，还包括其中在重链的羧基末端缺失一个或两个氨基酸的缺失变体、通过缺失变体的酰胺化获得的变体(例如，其中羧基末端的脯氨酸残基被酰胺化的重链)等。在根据本发明的抗体的重链羧基末端具有缺失的缺失变体的类型不限于上述变体，只要抗原结合亲和力和效应子功能被保留即可。构成根据本发明的抗体的两条重链可以是选自全长重链和上述缺失变体的一种类型，或者可以是选自全长重链和上述缺失变体的两种类型的组合。每种缺失变体的量的比例可受产生根据本发明的抗体的培养的哺乳动物细胞的类型和培养条件的影响；然而，可以优选地列举其中在根据本发明的抗体中在两条重链中都缺失羧基末端的一个氨基酸残基的抗体。

作为根据本发明的抗体的同种型，例如可以列举igg(igg1、igg2、igg3、igg4)，并且优选可以列举igg1或igg2。

本发明中使用的抗体-药物缀合物中的抗体的实例可包括但不特别限定于抗her2抗体、抗her3抗体、抗trop2抗体、抗b7-h3抗体、抗cd3抗体、抗cd30抗体、抗cd33抗体、抗cd37抗体、抗cd56抗体、抗cd98抗体、抗dr5抗体、抗egfr抗体、抗epha2抗体、抗fgfr2抗体、抗fgfr4抗体、抗folr1抗体、抗vegf抗体和抗gpr20抗体，并且可优选列举抗her2抗体、抗her3抗体、抗trop2抗体、抗b7-h3抗体和抗gpr20抗体。

在本发明中，术语"抗her2抗体"是指特异性结合her2(人表皮生长因子受体2型；erbb-2)的抗体，并且优选通过结合her2而具有在her2表达细胞中内化的活性。

抗her2抗体的实例包括曲妥珠单抗(美国专利号5821337)和帕妥珠单抗(国际公开号wo01/00245)，并且可优选列举曲妥珠单抗。

在本发明中，术语"曲妥珠单抗"是人源化抗her2单克隆抗体，其包含由seqidno：1的氨基酸残基1-449组成的氨基酸序列组成的重链(图1)和由seqidno：2的氨基酸残基1-214组成的氨基酸序列组成的轻链(图2)。

在本发明中，术语"抗her3抗体"是指特异性结合her3(人表皮生长因子受体3型；erbb-3)的抗体，并且优选通过结合her3表达细胞表面上的her3而具有在her3表达细胞中内化的活性。

抗her3抗体的实例包括patritumab(u3-1287)、u1-59(国际公开号wo2007/077028)、mm-121(seribantumab)、描述于国际公开号wo2008/100624的抗erbb3抗体、rg-7116(lumretuzumab)和ljm-716(elgemtumab)，并且可优选列举patritumab和u1-59。

在本发明中，术语"抗trop2抗体"是指特异性结合trop2(tacstd2：肿瘤关联钙信号转导因子2；egp-1)的抗体，优选通过结合trop2而具有在trop2表达细胞中内化的活性。

抗trop2抗体的实例包括htina1-h1l1(国际公开号wo2015/098099)。

在本发明中，术语"抗b7-h3抗体"是指特异性结合b7-h3(b细胞抗原#7同系物3；pd-l3；cd276)的抗体，并且优选通过结合b7-h3而具有在b7-h3表达细胞中内化的活性。

抗b7-h3抗体的实例包括m30-h1-l4(国际公开号wo2014/057687)。

在本发明中，术语"抗gpr20抗体"是指特异性结合gpr20(g蛋白偶联受体20)的抗体，并且优选通过结合gpr20而具有在gpr20表达细胞中内化的活性。

抗gpr20抗体的实例包括h046-h4e/l7(国际公开号wo2018/135501)。

[用于生产抗体-药物缀合物的药物-接头中间体]

用于生产根据本发明的抗体-药物缀合物的药物-接头中间体由下式表示。

[式12]

药物-接头中间体可参考国际公开号wo2014/057687、国际公开号wo2015/098099、国际公开号wo2015/115091、国际公开号wo2015/155998等中的描述来生产。

[抗体和药物-接头中间体之间的缀合]

本发明中使用的抗体-药物缀合物可以通过使上述药物-接头中间体与具有巯基(thiol)(或称为巯基(sulfhydryl))的抗体反应来生产。

具有巯基的抗体可以通过本领域公知的方法获得(hermanson,g.t,bioconjugatetechniques,pp.56-136,pp.456-493,academicpress(1996))。例如，通过每个抗体内的链间二硫化物使用0.3-3摩尔当量的还原剂如三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(tcep)，并在含有螯合剂如乙二胺四乙酸(edta)的缓冲剂溶液中与抗体反应，可以获得具有巯基的抗体，其中在抗体内具有部分或完全还原的链间二硫化物。

此外，通过每个具有巯基的抗体使用2至20摩尔当量的药物-接头中间体，可以产生其中每个抗体分子缀合2至8个药物分子的抗体-药物缀合物。

每个产生的抗体-药物缀合物的抗体分子缀合的药物分子的平均数可以例如通过基于在280nm和370nm的两个波长下测量抗体-药物缀合物及其缀合前体的uv吸光度的计算方法(uv方法)，或基于通过hplc测量通过用还原剂处理抗体-药物缀合物获得的片段的定量的计算方法(hplc方法)来确定。

抗体和药物接头中间体之间的缀合以及抗体-药物缀合物的每个抗体分子缀合的药物分子的平均数的计算可以参考国际公开号wo2014/057687、国际公开号wo2015/098099、国际公开号wo2015/115091、国际公开号wo2015/155998、国际公开号wo2018/135501等中的描述来进行。

在本发明中，术语"抗her2抗体-药物缀合物"是指这样的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物中的抗体是抗her2抗体。

抗her2抗体优选是包含由seqidno：1的氨基酸残基1-449组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2的氨基酸残基1-214组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或包含由seqidno：1所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体。

在本发明所用的抗her2抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数优选为2至8，更优选3至8，甚至更优选7至8，甚至更优选7.5至8，并且甚至更优选约8。

本发明所用的抗her2抗体-药物缀合物可参考国际公开号wo2015/115091等的描述来生产。

在本发明中，术语"抗her3抗体-药物缀合物"是指这样的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物中的抗体是抗her3抗体。

抗her3抗体优选是包含由seqidno：3所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：4所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

在本发明所用的抗her3抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数优选为2至8，更优选3至8，甚至更优选7至8，甚至更优选7.5至8，并且甚至更优选约8。

本发明所用的抗her3抗体-药物缀合物可参考国际公开号wo2015/155998等的描述来生产。

在本发明中，术语"抗trop2抗体-药物缀合物"是指这样的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物中的抗体为抗trop2抗体。

抗trop2抗体优选为包含由seqidno：5的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：6的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

在本发明所用的抗trop2抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数优选为2-8，更优选3-5，甚至更优选3.5-4.5，并且甚至更优选约4。

本发明中使用的抗trop2抗体-药物缀合物可参考国际公开号wo2015/098099等中的描述生产。

在本发明中，术语"抗b7-h3抗体-药物缀合物"是指这样的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物中的抗体是抗b7-h3抗体。

抗b7-h3抗体优选是包含由seqidno：7的氨基酸残基20-471组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：8的氨基酸残基21-233组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

在本发明所用的抗b7-h3抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数优选为2至8，更优选3至5，甚至更优选3.5至4.5，并且甚至更优选约4。

本发明所用的抗b7-h3抗体-药物缀合物可参考国际公开号wo2014/057687等中的描述生产。

在本发明中，术语"抗gpr20抗体-药物缀合物"是指这样的抗体-药物缀合物，其中抗体-药物缀合物中的抗体为抗gpr20抗体。

抗gpr20抗体优选是包含由seqidno：9的氨基酸残基20-472组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：10的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体。

本发明所用的抗gpr20抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的平均单元数优选为2-8，更优选3-8，甚至更优选7-8，甚至更优选7.5-8，并且甚至更优选约8。

本发明所用的抗gpr20抗体-药物缀合物可参考国际公开号wo2018/135501等的描述生产。

[药物组合物]

以下，描述根据本发明的药物组合物。

根据本发明的药物组合物包含

(i)抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖或海藻糖，和

(iv)表面活性剂，

其中，所述抗体-药物缀合物是其中由下式表示的药物-接头：

[式13]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物。

在本发明中，术语"组氨酸缓冲剂"是组氨酸和组氨酸的盐(酸加合物)的混合物，优选地，l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐(和/或其水合物)的混合物。本发明中其中溶解有组氨酸缓冲剂的水与组氨酸缓冲剂溶液同义。

组氨酸缓冲剂的量优选为每20mg抗体-药物缀合物3至80mmol，更优选每20mg抗体-药物缀合物10至80mmol，甚至更优选每20mg抗体-药物缀合物10至40mmol，甚至更优选每20mg抗体-药物缀合物10至25mmol，并且甚至更优选每20mg抗体-药物缀合物10或25mmol。

需要指出的是，其中本发明的药物组合物溶解于水的状态的ph依赖于组氨酸缓冲剂溶液中的组氨酸和组氨酸的盐的含量比。即，通过调节组氨酸和组氨酸的盐的含量比，可以提供在溶解于水的状态下具有期望ph的药物组合物。

所述抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时，本发明的药物组合物的ph为4.0至7.0，优选5.0至6.0。此外，根据抗体-药物缀合物中抗体的类型，可以选择更合适的ph。

蔗糖或海藻糖的量优选为每20mg抗体-药物缀合物24至320mg。对于蔗糖，该量更优选为90mg。对于海藻糖，当以海藻糖水合物计算时，该量更优选为100mg。在蔗糖和海藻糖中，本发明的药物组合物可以更优选采用蔗糖。

在本发明中，术语"表面活性剂"是指具有亲水基团和疏水基团并且用作药物制剂的组分之一的物质。本发明中的表面活性剂优选聚山梨酯，如聚山梨酯80(吐温80)、聚山梨酯20(吐温20)和聚山梨酯60(吐温60)、聚氧乙烯(160)、聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、或聚氧乙烯蓖麻油或十二烷基硫酸钠，并且更优选聚山梨酯80或聚山梨酯20。

聚山梨酯80或聚山梨酯20的量为每20mg抗体-药物缀合物优选0.05至1.6mg，更优选0.1至1.6mg，甚至更优选0.2至0.4mg，甚至更优选0.2至0.3mg，并且甚至更优选0.2或0.3mg。

综合考虑上述因素，本发明的药物组合物优选是，

一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)3至80mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)24至320mg的蔗糖或海藻糖，和

(iv)0.05至1.6mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20，

更优选地，

一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10至40mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖或100mg的海藻糖水合物，和

(iv)0.2至0.4mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20，

甚至更优选地，

一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10或25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80或聚山梨酯20。

当表达为包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液时，上述药物组合物可重新表述如下。

即，本发明的药物组合物优选是，

一种药物组合物，其包含

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖或海藻糖，和

(iv)表面活性剂，和

(v)水，

更优选地，

一种药物组合物，其包含

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)3至80mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)2.4至32%的蔗糖或海藻糖，

(iv)0.005至0.16%的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和

(v)水，

甚至更优选地，

一种药物组合物，其包含

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)10至40mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖或10%的海藻糖，

(iv)0.02至0.04%的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和

(v)水，

甚至更优选地，

一种药物组合物，其包含

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)10或25mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，和

(iv)0.02或0.03%的聚山梨酯80或聚山梨酯20，和

(v)水。

在本发明中，蔗糖和海藻糖含量的"%"是指相对于1ml水的重量%。因此，例如，"9%的蔗糖"是指其相对于1ml水含有90mg的蔗糖，"10%的海藻糖水合物"是指其相对于1ml水含有100mg的海藻糖水合物。

类似地，在本发明中，关于聚山梨酯80和聚山梨酯20的含量的"%"是指相对于1ml水的重量%。因此，例如，"0.03%的聚山梨酯80"是指其相对于1ml水含有0.3mg的聚山梨酯80，和"0.03%的聚山梨酯20"是指其相对于1ml水含有0.3mg的聚山梨酯20。

对于本发明的药物组合物，根据抗体-药物缀合物中抗体的类型，可以选择更合适的制剂。

例如，当抗体-药物缀合物中的抗体是抗her2抗体(优选地，包含由seqidno：1的氨基酸残基1-449组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2的氨基酸残基1-214组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体或包含由seqidno：1所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：2所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体)时，本发明的药物组合物优选是包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

此外，抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时药物组合物的ph优选为5.3至5.7，更优选5.4至5.6，还更优选5.5。

当组氨酸缓冲剂由l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐的含量表示时，上述药物组合物当其ph为5.5时可以表示为包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.89mg的l-组氨酸和4.04mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

此外，当以包含100mg抗体-药物缀合物的单位制剂表示时，上述药物组合物当其ph为5.5时可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.45mg的l-组氨酸和20.2mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

或者，当以包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液形式表示时，上述药物组合物可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)25mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，

(iv)0.03%的聚山梨酯80，和

(v)水，

其中所述组合物的ph为5.5。

当抗体-药物缀合物中的抗体是抗her3抗体(优选地，包含由seqidno：3所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：4所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体)时，本发明的药物组合物优选是包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)25mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯20。

此外，抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时药物组合物的ph优选为5.2至5.6，更优选5.3至5.5，还更优选5.4。

当组氨酸缓冲剂由l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐的含量表示时，上述药物组合物当其ph为5.4时可以表示为包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.81mg的l-组氨酸和4.14mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯20。

此外，当以包含100mg抗体-药物缀合物的单位制剂表示时，上述药物组合物当其ph为5.4时可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)4.06mg的l-组氨酸和20.7mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯20。

或者，当以包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液形式表示时，上述药物组合物可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)25mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，

(iv)0.03%的聚山梨酯20，和

(v)水，

其中所述组合物的ph为5.4。

当抗体-药物缀合物中的抗体是抗trop2抗体(优选地，包含由seqidno：5的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：6的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体)时，本发明的药物组合物优选是，

一种药物组合物，其包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80。

此外，抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时药物组合物的ph优选为5.8至6.2，更优选5.9至6.1，还更优选6.0。

当组氨酸缓冲剂由l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐的含量表示时，上述药物组合物当其ph为6.0时可以优选表示为包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.78mg的l-组氨酸和1.05mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90m的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯80。

当以包含100mg抗体-药物缀合物的单位制剂表示时，上述药物组合物当其ph为6.0时可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.88mg的l-组氨酸和5.26mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯80。

或者，当以包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液形式表达时，上述药物组合物可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)10mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，

(iv)0.02或0.03%的聚山梨酯80，和

(v)水，

其中所述组合物的ph为6.0。

当抗体-药物缀合物中的抗体是抗b7-h3抗体(优选地，其中抗体是包含由seqidno：7的氨基酸残基20-471组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：8的氨基酸残基21-233组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体)时，本发明的药物组合物优选是包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯20。

此外，抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时药物组合物的ph优选为5.7至6.1，更优选5.8至6.0，还更优选5.9。

当组氨酸缓冲剂由l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐的含量表示时，上述药物组合物当其ph为5.9时可以表示为包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.65mg的l-组氨酸和1.22mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.2或0.3mg的聚山梨酯20。

此外，当以包含100mg抗体-药物缀合物的单位制剂表示时，上述药物组合物当其ph为5.9时可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)3.23mg的l-组氨酸和6.12mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.0或1.5mg的聚山梨酯20。

或者，当以包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液形式表示时，上述药物组合物可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)10mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，和

(iv)0.02或0.03%的聚山梨酯20，和

(v)水，

其中所述组合物的ph为5.9。

当抗体-药物缀合物中的抗体是抗gpr20抗体(优选包含由seqidno：9的氨基酸残基20-472组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：10的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体，或其中重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体变体)时，本发明的药物组合物优选包含，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)10mmol的组氨酸缓冲剂，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

此外，抗体-药物缀合物以20mg/ml的浓度溶解于水中时药物组合物的ph优选为5.2至5.6，更优选5.3至5.5，还更优选5.4。

当组氨酸缓冲剂由l-组氨酸和l-组氨酸盐酸盐的含量表示时，上述药物组合物当其ph为5.4时可以优选表示为包含以下物质的药物组合物，

(i)每20mg抗体-药物缀合物，

(ii)0.32mg的l-组氨酸和1.66mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)90mg的蔗糖，和

(iv)0.3mg的聚山梨酯80。

此外，当以包含100mg抗体-药物缀合物的单位制剂表示时，上述药物组合物当其ph为5.4时可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)100mg的抗体-药物缀合物，

(ii)1.62mg的l-组氨酸和8.29mg的l-组氨酸盐酸盐水合物，

(iii)450mg的蔗糖，和

(iv)1.5mg的聚山梨酯80。

或者，当以包含浓度为20mg/ml的抗体-药物缀合物的水溶液形式表示时，上述药物组合物可以表示为包含以下物质的药物组合物

(i)20mg/ml的抗体-药物缀合物，

(ii)10mm的组氨酸缓冲剂，

(iii)9%的蔗糖，和

(iv)0.03%的聚山梨酯80，和

(v)水，

其中所述组合物的ph为5.4。

本发明的药物组合物优选为注射剂，更优选为水性注射剂或冻干注射剂，甚至更优选为冻干注射剂的形式。

在本发明中，术语"注射剂"是指用针施用于生物组织（例如静脉内、皮内、皮下、肌内和腹膜内）的药物组合物。在本发明的注射剂中，不仅包括液体注射剂，还包括在使用时溶解在液体中的固体注射剂。对于液体注射剂，溶剂可以是水，或除水以外的溶剂，或水和除水以外的溶剂的混合溶剂。

在本发明中，术语"水性注射剂"是指一种药物组合物，其为液体注射剂形式并且其溶剂为水(优选注射用水)。

在本发明中，术语"冻干注射剂"是固体注射剂，其可以通过在使用时溶解在水(优选注射用水)中来使用，其通过冻干包含预定量的药物组分的水溶液来获得。

当本发明的药物组合物为水性注射剂时，抗体-药物缀合物的浓度优选为5-60mg/ml，更优选为15-40mg/ml，还优选为20mg/ml。

当本发明的药物组合物为水性注射剂形式时，本发明的药物组合物可以优选以冷冻状态储存。

当本发明的药物组合物为冻干注射剂时，本发明的药物组合物可以优选容纳在棕色小瓶中储存。

当本发明的药物组合物为冻干注射剂形式时，可以适当地使用包含本发明的药物组合物和注射用水的试剂盒。在此，注射用水可以优选以容纳在安瓿中的状态储存。

其中本发明中使用的抗体-药物缀合物的含量为20mg的冻干注射剂可适当地通过再溶解于1ml注射用水中来使用。另外，其中本发明中使用的抗体-药物缀合物的含量为100mg的冻干注射剂可适当地通过再溶解于5ml注射用水中来使用。

当本发明的药物组合物为冻干注射剂形式时，生产本发明药物组合物的方法优选包括以下步骤

(1)制备包含预定量的以下物质的水溶液

(i)抗体-药物缀合物，

(ii)组氨酸缓冲剂，

(iii)蔗糖或海藻糖，和

(iv)表面活性剂，

(2)如果需要，将水溶液的ph调节至预定值，然后，

(3)冻干水溶液。

冻干水溶液的步骤优选包括在接近水溶液的共晶点的搁板温度下退火的过程。在本文中，"接近共晶点"指示从低于共晶点1.5℃的温度到高于共晶点1.5℃的温度的范围。

在本发明中，术语"退火"是指在等于或高于冷冻玻璃化转变点(tg')的产品温度下在冷冻体中生长冰晶的过程。随着冰晶变大，在干燥时升华的水(水蒸气)的通道变大。这降低了升华阻力，并且可以预期改善冻干块的形式并缩短干燥时间。

在本发明中，术语"搁板温度"是指用于进行冻干的设备(系统中)中的温度。

在本发明中，术语"产品温度"是指待冻干的对象(产品)的温度。

在本发明中，术语"冻干块"是指通过一系列冻干过程获得的冻干体(具有多孔结构的固体)。

如上所述，退火可以适当地从比水溶液的共晶点低1.5℃的温度至比共晶点高1.5℃的温度进行，更优选地可以在与水溶液的共晶点相同的搁板温度下进行。

这些生产方法优选特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，缩短了初次干燥过程的时间。此外，这些生产方法优选特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，获得具有较少收缩的冻干块。

由于本发明的药物组合物的共晶点为约-3℃至约-1℃，退火可优选在-4.5℃至0.5℃的搁板温度下进行，更优选在-4℃至-1℃的搁板温度下进行，甚至更优选在-4℃至-2℃的搁板温度下进行，甚至更优选在-3℃至-2℃的搁板温度下进行，并且甚至更优选在-2.5℃的搁板温度下进行。

退火后，进行第一干燥过程和第二干燥过程，然后以冻干注射剂的形式生产本发明的药物组合物。

在本发明中，术语"初次干燥过程"是冻干注射剂的生产过程之一，并且其是指用于升华冷冻体内的自由水的过程。

在本发明中，术语"二次干燥过程"是冻干注射剂的生产过程之一，并且其是指用于升华与溶质结合的水(结合水)的过程。

初级干燥过程可以优选在-5至5℃的搁板温度下在5至15pa的真空下进行，更优选在-4至4℃的搁板温度下在7至13pa的真空下进行，甚至更优选在-3至3℃的搁板温度下在8至12pa的真空下进行，甚至更优选在-2至2℃的搁板温度下在9至11pa的真空下进行，甚至更优选在-1至1℃的搁板温度下在9至11pa的真空下进行，并且甚至更优选在0℃的搁板温度下在约10pa的真空下进行。

二次干燥过程可以优选在40至50℃的搁板温度下在5至15pa的真空下或在没有真空的情况下进行，更优选在42至48℃的搁板温度下在7至13pa的真空下进行，甚至更优选在44至46℃的搁板温度下在9至11pa的真空下进行，并且甚至更优选在45℃的搁板温度下在10pa的真空下进行。

本发明的药物组合物的质量可以通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，在50℃下、在40℃/75%rh下、在25℃/60%rh下或在5℃下评价1个月、3个月、6个月、12个月、18个月、24个月或36个月时的储存稳定性来确认。此外，根据抗体-药物缀合物中抗体的类型，可以通过采用例如与抗原的结合活性或效力(生物测定法)作为指标来评价质量。此外，还可以进行采用药物分布或rce-sds作为指标的质量评价，和通过性质(外观)观察进行的质量评价。当药物组合物为水性注射剂形式时，可以通过采用渗透压比作为指标来评价质量，并且当药物组合物为冻干注射剂形式时，可以通过采用再溶解时间作为指标来评价质量。通过这些质量评价，还可以证实本发明药物组合物优于现有药物组合物。

预期本发明的冻干方法不仅对包含本发明所用的抗体-药物缀合物的药物组合物，而且对含有蔗糖或海藻糖的水溶液也具有普遍适用性。

因此，在本发明的范围内还包括一种生产冻干注射剂的方法，其包括使含有蔗糖或海藻糖的水溶液在接近该水溶液的共晶点的搁板温度下退火的过程，其中接近共晶点表示从低于共晶点1.5℃的温度到高于共晶点1.5℃的温度的范围。

此外，退火可合适地在与含有蔗糖或海藻糖的水溶液的共晶点相同的搁板温度下进行。

这些生产方法优选特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，缩短了初次干燥过程的时间。

此外，这些生产方法优选特征在于，与在低于共晶点5℃的搁板温度下进行退火时相比，获得具有较少收缩的冻干块。

[药物组合物的用途]

可以预期本发明的药物组合物通过作为全身疗法应用于患者以及另外通过局部应用于癌组织发挥治疗作用。

本发明的药物组合物可以优选用于哺乳动物，但更优选用于人。

可用于施用本发明的药物组合物的施用途径的实例包括静脉内、皮内、皮下、肌内和腹膜内途径，但静脉内施用是优选的施用途径。

当本发明的药物组合物为水性注射剂形式时，水性注射剂可优选在用合适的稀释剂稀释后静脉内输注。稀释剂的实例包括葡萄糖溶液(优选5%葡萄糖溶液)和生理盐水。

当本发明的药物组合物为冻干注射剂形式时，可以用水(优选注射用水)溶解冻干注射剂，并在用适当的稀释剂稀释后静脉内输注。稀释剂的实例包括葡萄糖溶液(优选5%葡萄糖溶液)和生理盐水。

当抗体-药物缀合物对抗原具有较高的亲和力(即就本发明的抗体-药物缀合物的解离常数(kd值)而言，对抗原具有较高的亲和力(较低的kd值))时，本发明的药物组合物即使在小剂量下也可以表现出药物效果。因此，本发明的药物组合物的剂量可以根据与抗原的亲和力相关的情况来确定。当将本发明的药物组合物施用于人时，例如，约0.001至100mg/kg，以抗体-药物缀合物的形式(其中"mg/kg"是指每1kg人体重的抗体-药物缀合物的剂量)，可以施用一次或以1至180天的间隔分几部分施用。例如，当本发明所用的抗体-药物缀合物是抗her2抗体-药物缀合物时，本发明药物组合物的施用方法的实例包括每三周一次0.8mg/kg至8mg/kg的施用方法，更优选每三周一次0.8mg/kg、1.6mg/kg、3.2mg/kg、5.4mg/kg、6.4mg/kg、7.4mg/kg或8mg/kg，甚至更优选每三周一次5.4mg/kg、6.4mg/kg、7.4mg/kg或8mg/kg，甚至更优选每三周一次5.4mg/kg、6.4mg/kg、7.4mg/kg或8mg/kg，并且甚至更优选每三周一次5.4mg/kg和6.4mg/kg。

本发明的药物组合物可以用于治疗癌症，优选地，可以用于治疗至少一种选自以下的癌症：乳腺癌、胃癌(也称为胃腺癌)、结肠直肠癌(也称为结肠和直肠癌，并且包括结肠癌和直肠癌)、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、唾液腺癌、食管胃交界部腺癌、胆管癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌肉瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、胃肠道间质瘤、宫颈癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、子宫癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织瘤、神经鞘瘤、头颈癌、皮肤癌、喉癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤和肉瘤。例如，当本发明所用的抗体-药物缀合物是抗er2抗体-药物缀合物时，本发明的药物组合物更优选可用于治疗至少一种选自以下的癌症：乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、食管癌、唾液腺癌、食管胃交界部腺癌、胆管癌、佩吉特病、胰腺癌、卵巢癌和子宫癌肉瘤；更优选可用于治疗至少一种选自以下的癌症：乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、食道癌、唾液腺癌、食管胃交界部腺癌、胆管癌和佩吉特病；并且甚至更优选地可用于治疗乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌或非小细胞肺癌。

本发明的药物组合物可以选择性地用作药物疗法的药剂，所述药物疗法是治疗癌症的主要方法，并且因此可以延缓癌细胞的发育，抑制其生长，并进一步杀死癌细胞。这些作用可以使癌症患者没有由癌症引起的症状，或者实现癌症患者qol的改善，并通过维持癌症患者的生命而获得治疗效果。即使本发明的药物组合物和治疗方法没有达到杀死癌细胞，它们也可以通过抑制或控制癌细胞的生长而实现癌症患者的更高qol，同时实现更长期存活。

在这样的药物疗法中，本发明的药物组合物可以单独使用，另外，它们可以与辅助疗法中的另外的疗法组合使用，并且可以与外科手术、放射疗法、激素疗法等组合。此外，它们还可用于新辅助疗法中的药物疗法。

除了上述治疗用途之外，例如，对于根据本发明的药物组合物，还可以预期预防效果，例如抑制小转移性癌细胞的生长和进一步杀死它们。例如，可以预期在转移过程中抑制和杀死体液中的癌细胞的效果，或者例如在移植到任何组织中之后立即抑制和杀死小癌细胞的效果。因此，特别是在手术去除癌症之后，可以预期抑制癌症转移或预防效果。

本发明的药物组合物可以与其它癌症治疗剂组合施用。因此可以增强抗癌效果。用于这种目的的其它癌症治疗剂的实例包括5-氟尿嘧啶(5-fu)、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、卡铂、顺铂、吉西他滨、卡培他滨、伊立替康(cpt-11)、多西他赛、培美曲塞、索拉非尼、长春碱、长春瑞滨、依维莫司、坦螺旋霉素、贝伐单抗、奥沙利铂、拉帕替尼、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(t-dm1)或国际公开号wo2003/038043中描述的药剂、lh-rh类似物(亮丙瑞林、戈舍瑞林等)、磷酸雌莫司汀、雌激素拮抗剂(他莫昔芬、雷洛昔芬等)和芳香酶抑制剂(阿那曲唑、来曲唑、依西美坦等)，但不限于此，只要它们是具有抗肿瘤活性的药剂即可。

实施例

本发明将根据以下所示的实施例进行具体描述。然而，本发明并不限于这些。此外，决不应以限制的方式来解释。

[实施例1：抗体-药物缀合物(1)的生产]

根据国际公开号wo2015/115091中描述的使用人源化抗her2抗体(曲妥珠单抗)的生产方法，生产抗体-药物缀合物(下文称为抗体-药物缀合物(1))，其中由下式表示的药物接头：

[式14]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合。抗体-药物缀合物(1)的dar为7.8。

[实施例2：抗体-药物缀合物(1)的制剂的制备]

制剂(1)的制备方法

将含有抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、10mm的组氨酸缓冲剂、11.1%的海藻糖水合物和0.02%的聚山梨酯20的水溶液(ph5.8)分配到透析盒(透析膜，slide-a-lyzer，mwco20,000)中，并用含有目标制剂的赋形剂的缓冲剂以注射到透析盒中的样品体积的50倍或更多进行透析。在5℃进行透析两次，持续5小时或更长时间。透析后，适当进行浓缩或稀释，使得蛋白质浓度变为约20mg/ml。将该溶液通过0.22µm过滤器过滤。将过滤溶液以1ml填充到玻璃小瓶中，小瓶用橡胶塞半塞住，并在表1所示的条件下进行冻干。冻干后，用盖将用橡胶塞塞住的小瓶密封。过滤和填充操作在洁净工作台内进行。

制剂(2)的制备方法

将含有抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、10mm的组氨酸缓冲剂、11.1%的海藻糖水合物和0.02%的聚山梨酯20的水溶液(ph5.8)分配到uf膜试剂盒(amiconultra-15，30kda)中，并在3000rpm和5℃的设定下离心以浓缩至约2倍。通过吸附在疏水吸附剂(amberlitexad7hp)上除去浓缩溶液中所含的聚山梨酯20。将除去聚山梨酯20后获得的化学溶液注入透析盒(透析膜，slide-a-lyzer，mwco20,000)中，并用含目标制剂的赋形剂的缓冲剂以注入透析盒的样品体积的50倍或更多进行透析。在5℃进行透析两次，持续5小时或更长时间。透析后，适当进行浓缩或稀释，使得蛋白质浓度变为约20mg/ml，然后向所得溶液中加入聚山梨酯20或聚山梨酯80并混合。将该溶液通过0.22µm过滤器过滤。将过滤溶液以1ml填充到玻璃小瓶中，小瓶用橡胶塞半塞住，并在表2中所示的条件下进行冻干。冻干后，用盖将用橡胶塞塞住的小瓶密封。过滤和填充操作在洁净工作台内进行。

[实施例3：稳定性试验]

将冻干注射剂在40℃/75%rh下储存3个月。通过采用蛋白质浓度(由uv法测量)、水分(由卡尔·费歇尔法测量)、不溶性微粒(由微流成像法测量)、药物/抗体比(dar)(由hplc法测量)、单体、聚集体和片段的比例(由se-hplc(sec)测量)、非蛋白杂质(npi)(由hplc法测量)、有效载荷杂质(iop)(由hplc法测量)、电荷异构体(由cze测量)、ph和her2结合活性(由elisa法测量)作为指标，比较和评价其稳定性。

[实施例4：赋形剂筛选]

冻干注射剂的赋形剂选自10%海藻糖水合物、9%蔗糖和5%山梨糖醇，它们实际上已经用于生物药品中，并且其浓度使得渗透压基本上等渗。冻干注射剂中的其它组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、40mm的组氨酸缓冲剂、和0.02%的聚山梨酯20，并且制剂的ph设定为5.8。

结果如表3所示。发现与使用5%山梨糖醇时相比，当使用9%蔗糖或10%海藻糖水合物时，聚集体的产生较少。特别地，发现当使用9%蔗糖时聚集体的产生变得最少(图3)。

[实施例5：缓冲剂筛选]

冻干注射剂的缓冲剂选自组氨酸、柠檬酸、磷酸、琥珀酸和谷氨酸，它们已经用于生物药品，并且在ph4至ph7附近具有缓冲能力。这些缓冲剂的浓度一律为25mm。冻干注射剂中的其它组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、10%的海藻糖水合物和0.02%的聚山梨酯20，并且制剂的ph设定为5.8。

结果如表4所示。发现当使用组氨酸作为缓冲剂时，聚集体的产生变得最少(图4)。

[实施例6：ph筛选]

对于重构的冻干注射剂的ph，考虑到通过缓冲剂筛选选择的组氨酸缓冲剂的使用，以及生物相容性和安全性例如静脉滴注施用中的刺激性，ph选自ph4至ph7。冻干注射剂中的其它组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、9%的蔗糖、25mm的组氨酸缓冲剂和0.02%的聚山梨酯20。通过制剂(1)的制备方法进行样品的制备。

结果如表5所示。揭示了随着ph增加，聚集体增加(图5)，并且随着ph降低，npi增加(图6)。结果发现，当ph为5.5时，可以良好的平衡抑制聚集体的增加和npi的增加。

[实施例7：缓冲剂浓度筛选]

经选择作为冻干注射剂的缓冲剂的组氨酸缓冲剂的浓度选自10mm-40mm的范围。冻干注射剂中的其它组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、9%的蔗糖和0.02%的聚山梨酯20，并且制剂的ph为5.5。按照制剂(1)的制备方法进行样品的制备。

结果如表6所示。当组氨酸缓冲剂的浓度为10mm-40mm时，任一样品都显示出同等的稳定性。

[实施例8：表面活性剂筛选]

在冻干注射剂中，期望表面活性剂用作冷冻期间蛋白浓缩层的界面保护剂或用作抵抗在冻干体再溶解期间产生的微泡的界面保护剂。考虑到这一点，研究了0.02%-0.04%的聚山梨酯20(吐温20)和聚山梨酯80(吐温80)作为表面活性剂。冻干注射剂中的其它组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、9%的蔗糖和25mm的组氨酸缓冲剂，并且制剂的ph设定为5.5。按照制剂(2)的制备方法进行样品的制备。

结果如表7和8所示(其中，"ps"是指聚山梨酯，"ps20"是指聚山梨酯20，"ps80"是指聚山梨酯80)。通过使用0.02%至0.04%的聚山梨酯20或80，观察到对细颗粒数量的抑制，并且发现使用0.02%至0.04%的聚山梨酯80特别抑制了微粒数量(图7)。

[实施例9：对小瓶的研究]

在每一个棕色玻璃小瓶和透明玻璃小瓶中填充冻干注射剂，并且比较和研究在1,000lx的白色荧光灯下暴露于光时制剂的质量变化。冻干注射剂的组分通常设定为抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、9%的蔗糖、25mm的组氨酸缓冲剂和0.02%的聚山梨酯20，并且制剂的ph设定为5.5。按照制剂(1)的制备方法进行样品的制备。

结果如表9所示。发现与使用透明玻璃小瓶时相比，当使用棕色玻璃小瓶时，可以更好地抑制产生聚集体(图8)和iop(图9)。

[实施例10：冻干方法的设定]

作为设定注射剂的冻干方法的指标，重要的物理性质是待冻干的含药物水溶液的冷冻玻璃化转变点(tg')和在冻干期间产生的具有多孔结构的所得块的塌陷温度(tc)。通过在等于或小于tg'或tc的产品温度下进行干燥，得到具有块状多孔结构的冻干体。干燥过程通常由使冷冻体内的自由水升华的第一干燥过程和使结合到溶质的水(结合水)升华的第二干燥过程组成。在初次干燥过程中，适宜的是，自由水在等于或小于tg'的产品温度下升华，并且也可以在等于或小于tc的产品温度下升华。

对于包含抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、9%的蔗糖、25mm的组氨酸缓冲剂和0.03%的聚山梨酯80且ph为5.5的水溶液(下文称为"水溶液(1)")，tg'为-31℃和tc为-27℃。

通过将5.2-5.5ml水溶液(1)填充到约10ml体积的玻璃小瓶中，进行对冻干方法的研究。

(1)对初次干燥过程参数的研究

在初次干燥过程中最重要的参数是搁板温度和室真空度。冻干块的形状(稳定性)和再溶解性以及干燥时间受这些参数的显著影响，因此通过设计的实验方法研究了-20℃至0℃范围内的搁板温度和5pa至15pa范围内的室真空度。使用表9中所示的参数(退火的搁板温度为-7℃)进行冻干。

图10是当在初次干燥过程中改变搁板温度和室真空度时，水溶液(1)的产品温度的等值线图。产品温度显示了一般的产品温度行为，即在低搁板温度和高室真空度的条件下，在初次干燥期间的产品温度变得较低，而在高搁板温度和低室真空度的条件下，产品温度变得较高。在-20℃至0℃的搁板温度和5pa至15pa的室真空度下，产品温度显示tc或更低。但是，揭示了在除了三角形包围的部分以外的参数下，在冻干块的多孔结构中发生部分塌陷，并且冻干块的外观变得紧缩(收缩)。

图11是在初次干燥过程中改变搁板温度和室真空度时水溶液(1)的干燥时间的等值线图。干燥时间显示了一般的干燥速率行为，即，在低搁板温度和高室真空度的条件下，初次干燥时间变得更长，而在高搁板温度和低室真空度的条件下，干燥时间变得更短。观察到干燥时间和产品温度之间的相关性。对于由产品温度等值线图中的三角形包围的部分的参数面积，揭示了可以获得良好形状的冻干块，但是需要长的初次干燥过程。

由于期望冻干块的形状就外观质量而言没有收缩状态，所以基于该研究的结果，变得显而易见地是初次干燥过程需要至少58小时。因此，得出结论，总冻干时间变为81小时，因为冷冻过程需要至少11小时，并且二次干燥和卸载过程需要至少12小时。换言之，据估计，冻干的加工时段需要3天或更长，并且通过增加冻干的起始日期和结束日期，制造时间需要5天。

然而，就生产效率和生产成本而言，冻干期望短的时间或短的时段。因此，长时间冻干过程的必要性被认为是一个问题。

为了解决该问题，并且为了获得即使在缩短初次干燥过程时间时也具有较少收缩的冻干块，进行了对退火参数的研究，集中于可以预期改善冻干快的多孔结构的退火步骤。

(2)退火的参数设定

退火过程中的重要参数是搁板温度。通过改变搁板温度，可以调节冷冻体的产品温度。

在本研究中，考虑到通过冰晶中的冰的升华而制成的冻干块的多孔结构，进行了退火中的搁板温度的优化。退火的搁板温度通常被设定为使得与共晶点有安全裕度。考虑到这一点，退火在-7℃的搁板温度下进行，因为水溶液(1)的共晶点是-2.5℃。另外，为了使冰晶在冷冻体内生长和降低冰的升华阻力以顺利地进行干燥，并且然后得到在冻干块中难以产生收缩的具有小比表面积的多孔结构，还尝试了在高于-7℃的搁板温度下退火。因此，通过将退火中的搁板温度范围设定为-7℃至0.5℃以制备具有小比表面积的多孔结构，研究了冻干块的外观质量的改善。本研究的冻干通过采用表11中的参数进行，并且初次干燥时间设定为总计约42小时。

退火在范围为-7℃至0.5℃的搁板温度下进行。进行冻干时，产品温度(退火时)和冻干块的形状如图12所示。退火时的产品温度范围为-7.0℃至-4.6℃时，从瓶底部向下侧观察到冻干块的明显收缩，并且当产品温度范围为-4.2℃至-3.4℃时，观察到轻微收缩。然而，当产品温度范围为-2.6℃至-1.5℃时，获得没有收缩的冻干块。由这些结果揭示了，在靠近共晶点的搁板温度下进行退火时，冻干块的收缩减少，并且在接近共晶点的搁板温度下进行退火时，能够得到没有收缩的冻干块。此外，揭示了即使当产品温度升高到高于共晶点-1.5℃时，仍保持固态并且可以得到正常形状的冻干块。

虽然退火常规上在低于共晶点约5℃的搁板温度下进行，但从本研究发现，通过在接近共晶点的温度下退火，可得到具有更好外观的冻干块。根据该研究的结果，退火的搁板温度被设定为-4℃至-2℃，其为接近共晶点的温度。

此外，从该研究中发现，在接近共晶点的温度下退火，初次干燥过程的时间可以缩短约40小时。基于图10和11的结果，将-5℃的搁板温度和7pa的室真空度设定为初次干燥参数，因为其被认为是允许以相对低的产品温度进行干燥并且预期将干燥时间缩短约18小时的条件。

(3)二次干燥过程的参数设定

二次干燥过程是用于使与溶质结合的水(结合水)干燥的过程，并且通常已知二次干燥后的干燥程度极大地影响了冻干注射剂的储存稳定性。虽然在较高温度下进行干燥时可以减少结合水，但是抗体-药物缀合物的抗体部分通常对热不稳定。鉴于此，通过毛细管差示扫描量热仪测量蛋白质热变性的开始。如图13所示，抗体-药物缀合物(1)的热变性开始是52℃至53℃，因此在将二次干燥的搁板温度设定为50℃或更低时评价干燥(残留水分)。

在二次干燥的搁板温度范围为30℃至50℃的情况下，进行干燥评价。本该研究的冻干通过采用表12的参数进行。

在二次干燥的各搁板温度下，冻干注射剂中的残留水分结果如表13所示。可以确认稳定性被保持，直到冻干注射剂中的残留水分为5%。然而，为了达到更高的稳定性水平，制剂中的残留水分被设定为1%或更低。尽管残留水分或多或少受初次干燥条件的影响，但证实当二次干燥的搁板温度在40℃至50℃的范围内时残留水分的含量变为1%或更低。基于热变性开始和本研究的结果，将40℃至50℃的范围内的中间值45℃设定为二次干燥的搁板温度。

(4)总结

生物药品(蛋白药品)的冻干注射剂中的赋形剂对蛋白质具有防冷冻作用，并且在药物制剂中通常选择非还原性二糖，例如蔗糖和海藻糖，其在储存期间没有美拉德反应的风险。这些二糖具有比其它糖低的tg'和tc，因此它们需要在低搁板温度下干燥使得产品温度不超过tg'和tc。因此，存在冻干过程变得更长和冻干块倾向于收缩的问题。水溶液(1)也被认为具有同样的问题，因此，为了解决这些问题，进行了对初次干燥、退火过程和初次干燥过程的研究，并且根据这些研究的结果，如表14所示设定了水溶液(1)的冻干方法。该冻干方法的特征是退火参数，并且发现通过在接近共晶点的温度下退火，可以在短时间内生产收缩显著降低的冻干块。

对于通过本冻干方法生产的冻干注射剂，通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，评价在50℃下1个月、在40℃/75%rh下3个月、在25℃/60%rh下3个月和在5℃下3个月的储存稳定性。结果揭示了，没有观察到显著的质量变化。

[实施例11：长期储存稳定性的评价]

对于实施例10中生产的冻干注射剂，通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，评价在40℃/75%rh下6个月、在25℃/60%rh下12个月和在5℃下18个月的储存稳定性。结果揭示了，没有观察到显著的质量变化。

[实施例12：对冻干方法的附加研究]

(1)退火的参数设定

作为用于使冰晶在冷冻体内生长的水溶液(1)的冻干方法，采用了进行退火120分钟同时将搁板温度保持在-2.5℃下的方法。但是，揭示了120分钟不能使冷冻体上部的温度升高到-2.5℃，使得冰晶的生长变得不充分并且冻干块轻微收缩。此外，揭示了当退火时间延长至240分钟时，冷冻体上部的温度达到-2.5℃，因此退火时间的设定变为4小时。已经揭示了，通过将退火时间改变为4小时，冰晶生长变得充分，因此水的升华速率变得更快，并且初次干燥时间缩短。

(2)初次干燥过程的参数设定

在-2.5℃下进行退火4小时，并研究了从-10℃到15℃的搁板温度和从4pa到30pa的室真空度的初次干燥过程参数。用表15的参数进行冻干。

当搁板温度在-10℃至10℃的范围内并且室真空度为4pa至30pa时，产品温度为tc或更低，并且冻干块的外观为没有收缩或塌陷的块形。

特别地，-5℃至5℃的搁板温度和5pa至15pa的室真空度被认为是特别安全的范围，并且还考虑到干燥时间，0℃的搁板温度和10pa的室真空度(其是这些范围的中间条件)被设定为合适的条件。

(3)总结

基于上述结果，水溶液(1)的冻干方法如表16所示设定。

对于通过本冻干方法产生的冻干注射剂，通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，评价在40℃/75%rh下3个月的储存稳定性。从开始时间起没有观察到质量的显著变化。

[实施例13：其它制剂和冻干条件的研究]

(1)制剂的制备

将活性药物成分(抗体-药物缀合物(1)(20mg/ml)、25mm的组氨酸、9%的蔗糖、ph5.5)分配到uf膜试剂盒(amiconultra-15，30kda)中，并在3000rpm和5℃的设定下离心以浓缩至约3倍。将所得浓缩的活性药物成分注入透析盒(透析膜，slide-a-lyzer，mwco20,000)中，并用目标制剂的缓冲剂透析至注入透析盒中的样品体积的50倍或更多。在5℃下进行两次透析，持续超过5小时。透析后，适当进行浓缩或稀释，使得蛋白质浓度变为约5mg/ml或约50mg/ml，然后加入聚山梨酯80并混合以制备包含抗体-药物缀合物(1)(5mg/ml)、8%的蔗糖、20mm的组氨酸缓冲剂和0.04%的聚山梨酯80且ph为4.0的水溶液(下文称为"水溶液(2)")；包含抗体-药物缀合物(1)(50mg/ml)、6%的蔗糖、40mm的组氨酸缓冲剂和0.04%的聚山梨酯80且ph为7.0的水溶液(下文称为"水溶液(3)")；包含抗体-药物缀合物(1)(5mg/ml)、8%的海藻糖水合物、20mm的组氨酸缓冲剂和0.04%的聚山梨酯80且ph为4.0的水溶液(下文称为"水溶液(4)")；以及包含抗体-药物缀合物(1)(50mg/ml)、6%的海藻糖水合物、40mm的组氨酸缓冲剂和0.04%的聚山梨酯80且ph为7.0的水溶液(下文称为"水溶液(5)")。

当以每20mg抗体-药物缀合物(1)表示时，水溶液(2)包含320mg蔗糖、80mm组氨酸缓冲剂和1.6mg聚山梨酯80；水溶液(3)包含24mg蔗糖、16mm组氨酸缓冲剂和0.16mg聚山梨酯80；水溶液(4)包含320mg海藻糖水合物、80mm组氨酸缓冲剂和1.6mg聚山梨酯80；和水溶液(5)包含24mg海藻糖水合物、16mm组氨酸缓冲剂和0.16mg聚山梨酯80。

这些溶液通过0.22µm过滤器过滤。将过滤溶液各5ml填充到棕色玻璃小瓶中，并且在冻干制剂的情况下，小瓶用橡胶塞半塞住，并在表17中所示的条件下进行冻干。冻干后，用盖将用橡胶塞塞住的小瓶密封。

(2)稳定性试验

对于通过本冻干方法制备的冻干注射剂，通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，评价在40℃/75%rh下的储存稳定性。

[实施例14：对抗体-药物缀合物(2)的生产和制剂的研究]

参考国际公开号wo2015/155998中描述的生产方法，使用抗her3抗体(包含由seqidno：3所示的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：4所示的氨基酸序列组成的轻链的抗体)，生产抗体-药物缀合物(下文称为"抗体-药物缀合物(2)")，其中由下式表示的药物接头：

[式15]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗体缀合。抗体-药物缀合物(2)的dar为7.7。

对于抗体-药物缀合物(2)，通过与实施例2-8的方法相似的方法对制剂(20mg/ml的抗体-药物缀合物(2)，9%的蔗糖，25mm的组氨酸缓冲剂，0.01-0.1%的聚山梨酯20，ph4.9-5.9)进行筛选。结果发现，包含抗体-药物缀合物(2)(20mg/ml)、9%的蔗糖、25mm的组氨酸缓冲剂和0.03%的聚山梨酯20且ph为5.4的水溶液(下文称为"水溶液(6)")是优选的制剂。

[实施例15：对抗体-药物缀合物(3)的生产和制剂的研究]

参考国际公开号wo2015/098099中描述的生产方法，使用抗trop2抗体(包含由seqidno：5的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：6的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体)，生产抗体-药物缀合物(下文称为"抗体-药物缀合物(3)")，其中由下式表示的药物接头：

[式16]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗trop2抗体缀合。抗体-药物缀合物(3)的dar为4.3。

对于抗体-药物缀合物(3)，以与实施例2-8的方法相似的方法对制剂(抗体-药物缀合物(3)(20mg/ml)、蔗糖(3-9%)、组氨酸缓冲剂(3-15mm)、聚山梨酯20或聚山梨酯80(0.01-0.1%)、ph5-7；或抗体-药物缀合物(3)(15-40mg/ml)、9%蔗糖、10mm组氨酸缓冲剂、0.02%聚山梨酯80、ph6.0)进行筛选。结果发现，包含抗体-药物缀合物(3)(20mg/ml)、9%蔗糖、10mm组氨酸缓冲剂和0.02%聚山梨酯80且ph为6.0的水溶液(下文称为"水溶液(7)")；以及包含抗体-药物缀合物(3)(20mg/ml)、9%蔗糖、10mm组氨酸缓冲剂和0.03%聚山梨酯80且ph为6.0的水溶液(下文称为"水溶液(8)")是优选的制剂。

[实施例16：对抗体-药物缀合物(4)的生产和制剂的研究]

参考国际公开号wo2014/057687中描述的生产方法，使用抗b7-h3抗体(包含由seqidno：7的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：8的氨基酸残基21-233组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体)，生产抗体-药物缀合物(下文称为"抗体-药物缀合物(4)")，其中由下式表示的药物接头：

[式17]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗b7-h3抗体缀合。抗体-药物缀合物(4)的dar为4.6。

对于抗体-药物缀合物(4)，以与实施例2-8的方法类似的方法对制剂(抗体-药物缀合物(4)(20mg/ml)、9%的蔗糖或10%的海藻糖水合物、10mm的组氨酸缓冲剂或10mm的琥珀酸盐缓冲剂、聚山梨酯20或聚山梨酯80(0.005-0.04%)、ph5.2-6.2；或抗体-药物缀合物(4)(20-60mg/ml)、9%的蔗糖、10mm的组氨酸缓冲剂、聚山梨酯20(0.005-0.04%)、ph5.2-6.2)进行筛选。结果发现，包含抗体-药物缀合物(4)(20mg/ml)、9%的蔗糖、10mm的组氨酸缓冲剂和0.02%的聚山梨酯20且ph为5.9的水溶液(下文称为"水溶液(9)")；以及包含抗体-药物缀合物(4)(20mg/ml)、9%的蔗糖、10mm的组氨酸缓冲剂和0.03%的聚山梨酯20且ph为5.9的水溶液(下文称为"水溶液(10)")是优选的制剂。

[生产实施例17：对抗体-药物缀合物(5)的生产和制剂的研究]

参考国际公开号wo2018/135501中描述的生产方法，使用抗gpr20抗体(包含由seqidno：9的氨基酸残基20-470组成的氨基酸序列组成的重链和由seqidno：10的氨基酸残基21-234组成的氨基酸序列组成的轻链的抗体)，生产抗体-药物缀合物(下文称为"抗体-药物缀合物(5)")，其中由下式表示的药物接头：

[式18]

其中a表示与抗体的连接位置，

通过硫醚键与抗gpr20抗体缀合。抗体-药物缀合物(5)的dar为7.8。

对于抗体-药物缀合物(5)，以与实施例2-8的方法类似的方法对制剂(抗体-药物缀合物(5)(20-60mg/ml)、9%的蔗糖、10mm的组氨酸缓冲剂和聚山梨酯80(0.01-0.1%)，ph5.0-6.5)进行筛选。结果发现，包含抗体-药物缀合物(5)(20mg/ml)、9%的蔗糖、10mm的组氨酸缓冲剂和0.03%的聚山梨酯80且ph为5.4的水溶液(下文称为"水溶液(11)")是优选的制剂。

[实施例18：冻干注射剂的制备及稳定性试验]

将实施例14-17中调整的水溶液(6)-(11)分别以与实施例10和12中描述的类似的方式冻干，以生产冻干注射剂。

对于这些获得的冻干注射剂，通过采用蛋白质浓度、水分、不溶性微粒、dar、单体、聚集体和片段的比例、npi、iop、电荷异构体和ph作为指标，评价在40℃/75%rh下1个月和3个月的储存稳定性。从开始时间起没有观察到质量的显著变化。

序列表的自由文本

seqidno：1-抗her2抗体的重链氨基酸序列

seqidno：2-抗her2抗体的轻链氨基酸序列

seqidno：3-抗her3抗体的重链氨基酸序列

seqidno：4-抗her3抗体的轻链氨基酸序列

seqidno：5-抗trop2抗体的重链氨基酸序列

seqidno：6-抗trop2抗体的轻链氨基酸序列

seqidno：7-抗b7-h3抗体的重链氨基酸序列

seqidno：8-抗b7-h3抗体的轻链氨基酸序列

seqidno：9-抗gpr20抗体的重链氨基酸序列

seqidno：10-抗gpr20抗体的轻链氨基酸序列

序列表

<110>daiichisankyocompany,limited

<120>抗体-药物缀合物制剂及其冻干

<130>dspct-fp1822

<150>jp2017-160071

<151>2017-08-23

<160>10

<170>patentin版本3.5

<210>1

<211>450

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抗her2抗体的重链

<400>1

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglypheasnilelysaspthr

202530

tyrilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

alaargiletyrprothrasnglytyrthrargtyralaaspserval

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

serargtrpglyglyaspglyphetyralametasptyrtrpglygln

100105110

glythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyproserval

115120125

pheproleualaproserserlysserthrserglyglythralaala

130135140

leuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalser

145150155160

trpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalaval

165170175

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<220>

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lyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglu

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leuleuglyglyproservalpheleupheproprolysprolysasp

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