局部递送抗肿瘤颗粒与全身递送免疫治疗剂相结合用于治疗癌症的制作方法

交叉引用本申请要求于2017年10月3日提交的美国临时专利申请序列号62/567,445的优先权，所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。技术实现要素：本发明提供了通过使用局部和全身联合疗法来治疗癌症的方法，即，将抗肿瘤剂颗粒(化疗颗粒)(如紫杉烷颗粒)直接局部施用于肿瘤作为全身施用免疫治疗剂的佐剂。在本发明的一个方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者的皮肤肿瘤的受影响区域局部施用包块抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在一些实施例中，所述皮肤肿瘤是良性皮肤肿瘤，并且其中所述受试者在身体的除皮肤之外的区域中患有癌症。在其它实施例中，所述皮肤肿瘤是皮肤恶性肿瘤(恶性皮肤肿瘤)。在一些实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有癌症。在一些实施例中，所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过肺部施用向所述受试者施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，其中所述受试者患有肺病，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在一些实施例中，所述肺病是非癌性的，并且其中所述受试者在身体的除肺部之外的区域中患有癌症。在一些实施例中，非癌性肺病是限制性或阻塞性肺病。在其它实施例中，所述肺病是癌性的。在一些实施例中，所速癌性肺病是恶性肿瘤或间皮瘤。在一些实施例中，所述恶性肿瘤是非小细胞肺癌肿瘤。在一些实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有癌症。在一些实施例中，所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在一些实施例中，所述肺部施用包括雾化，并且其中雾化使得将所述第一组合物的气溶胶液滴肺部递送到所述受试者。在一些实施例中，在施用所述第一组合物后至少4天或至少14天，所述抗肿瘤剂能够在所述受试者的肺组织中检测到。在本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过瘤内注射将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物直接施用于所述受试者的实体瘤中，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在一些实施例中，所述实体瘤是良性肿瘤，并且其中所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在其它实施例中，所述实体瘤是恶性肿瘤。在一些实施例中，所述恶性肿瘤包括肉瘤、癌、淋巴瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、头颈部肿瘤、成胶质细胞瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、肝脏肿瘤、卵巢肿瘤、结肠直肠肿瘤、皮肤肿瘤、皮肤转移瘤、淋巴和/或胃肠肿瘤。在一些实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有癌症。在一些实施例中，所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过腹膜内注射向所述受试者的腹膜内器官肿瘤施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在一些实施例中，所述肿瘤是良性的，并且其中所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在其它实施例中，所述肿瘤是恶性的。在一些实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有癌症。在一些实施例中，所述肿瘤是卵巢肿瘤。在一些实施例中，所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在本发明的各个实施例中，所述第二种组合物的所述免疫治疗剂是单克隆抗体、癌症疫苗、非特异性免疫治疗剂、细胞因子、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、检查点抑制剂、免疫调节剂、过继性细胞转移剂、t细胞治疗剂、细胞治疗剂、溶瘤病毒治疗剂、bcg和/或辅助免疫治疗剂。在一些实施例中，所述第二组合物的所述全身给药是静脉内(iv)注射或口服递送。在一些实施例中，所述第一组合物在所述第二组合物施用前至少一天施用。在其它实施例中，所述第二组合物在所述第一组合物施用前至少一天施用。在仍其它实施例中，所述第一组合物和所述第二组合物在同一天施用。在各个实施例中，所述第一组合物中的抗肿瘤颗粒的量和所述第二组合物中的免疫治疗剂的量是治疗所述受试者的所述癌症和任选地治疗所述受试者的所述肿瘤的有效量。在各个实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。在本发明的另一方面，公开了一种试剂盒，其包括：(a)包括紫杉烷颗粒的第一组合物，其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，(b)包括免疫治疗剂的第二组合物，和(c)用于以下的说明书：(i)将所述第一组合物局部施用于受试者，以及(ii)将所述第二组合物全身施用于所述受试者。在本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过囊内注射将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物直接施用于所述受试者的囊肿中，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在各种实施例中，所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在一些实施例中，所述囊肿是上皮囊肿。在一些实施例中，所述囊肿是良性囊肿，并且所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，所述囊肿是恶性囊肿。在一些实施例中，所述恶性囊肿是所述受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有恶性囊肿和癌症。在一些实施例中，所述囊肿是胰腺囊肿。在其它实施例中，所述抗肿瘤剂是紫杉烷，并且所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。所述紫杉烷颗粒可以包含所述紫杉烷颗粒的药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在一些实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。在本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过注射到受试者体腔内，将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物施用到位于所述体腔内的肿瘤，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在各种实施例中，所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在一些实施例中，所述肿瘤是良性肿瘤，并且所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，所述肿瘤是恶性肿瘤。在一些实施例中，所述恶性肿瘤是所述受试者的所述身体内唯一的癌症。在其它实施例中，所述受试者在所述身体的其它区域患有恶性肿瘤和癌症。在其它实施例中，所述抗肿瘤剂是紫杉烷，并且所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。所述紫杉烷颗粒可以包含所述紫杉烷颗粒的药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在一些实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。在本发明的上下文中公开了以下实施例1到133：实施例1是治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括:(a)向所述受试者的皮肤肿瘤的受影响区域局部施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。实施例2是根据实施例1所述的方法，其中所述皮肤肿瘤是良性皮肤肿瘤，并且其中所述受试者在身体的除皮肤之外的区域中患有癌症。实施例3是根据实施例2所述的方法，其中所述良性皮肤肿瘤是光化性角化病。实施例4是根据实施例1所述的方法，其中所述皮肤肿瘤是皮肤恶性肿瘤(恶性皮肤肿瘤)。实施例5是根据实施例4所述的方法，其中所述皮肤恶性肿瘤包括皮肤癌。实施例6是根据实施例5所述的方法，其中所述皮肤癌包括黑素瘤、基底细胞癌或鳞状细胞癌。实施例7是根据实施例6所述的方法，其中所述皮肤恶性肿瘤包括皮肤转移瘤。实施例8是根据实施例7所述的方法，其中所述皮肤转移瘤来自肺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、卵巢癌、肾癌、食道癌、胃癌、肝癌和/或卡波西氏肉瘤。实施例9是根据实施例4到8中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述身体的其它区域患有癌症。实施例10是根据实施例1到9中任一项所述的方法，其中所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。实施例11是根据实施例10所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。实施例12是根据实施例10或11中任一项所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。实施例13是根据实施例12所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。实施例14是根据实施例13所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例15是根据实施例13或14中任一项所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例16是根据实施例12所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒。实施例17是根据实施例16所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例18是根据实施例16或17中任一项所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例19是根据实施例1到18中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是无水的。实施例20是根据实施例1到19中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是疏水性的。实施例21是根据实施例20所述的方法，其中所述第一组合物包括疏水性载剂。实施例22是根据实施例21所述的方法，其中所述疏水性载剂是非挥发性的。实施例23是根据实施例21或22中任一项所述的方法，其中所述疏水性载剂是非极性的。实施例24是根据实施例21到23中任一项所述的方法，其中所述疏水性载剂包括烃。实施例25是根据实施例24所述的方法，其中所述烃是矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。实施例26是根据实施例25所述的方法，其中所述矿物油是重质矿物油。实施例27是根据实施例21到26中任一项所述的方法，其中所述疏水性载剂大于所述疏水性组合物的50％w/w。实施例28是根据实施例1到27中任一项所述的方法，其中所述第一组合物进一步包括一种或多种挥发性硅氧烷流体。实施例29是根据实施例28所述的方法，其中所述一种或多种挥发性硅氧烷流体的浓度为所述第一组合物的5到24％w/w。实施例30是根据实施例28或29中任一项所述的方法，其中所述挥发性硅氧烷流体是环甲硅油。实施例31是根据实施例30所述的方法，其中所述环甲硅油是环戊硅氧烷。实施例32是根据实施例1到31中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是半固态的。实施例33是根据实施例32所述的方法，其中，如在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒所测量的，所述第一组合物的粘度为25,000cps到500,000cps。实施例34是根据实施例32或33中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是软膏。实施例35是根据实施例1到35中任一项的方法，其中所述第一组合物不含挥发性c1-c4脂肪醇、不含另外的渗透增强剂、不含另外的挥发性溶剂、不含表面活性剂、不含蛋白质和/或不含白蛋白。实施例36是根据实施例1到35中任一项所述的方法，其中所述抗肿瘤颗粒分散在所述第一组合物中。实施例37是根据实施例1到36中任一项所述的方法，其中所述组合物中的所述抗肿瘤颗粒的浓度为约0.1到约2％w/w。实施例38是治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过肺部施用向所述受试者施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，其中所述受试者患有肺病，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。实施例39是根据实施例38所述的方法，其中所述肺病是非癌性的，并且其中所述受试者在身体的除肺部之外的区域中患有癌症。实施例40是根据实施例39所述的方法，其中所述非癌性肺病是限制性或阻塞性肺病。实施例41是根据实施例40所述的方法，其中所述限制性肺病是肺纤维化。实施例42是根据实施例40所述的方法，其中所述阻塞性肺病是慢性阻塞性肺病(copd)。实施例43是根据实施例38所述的方法，其中所述肺病是癌性的。实施例44是根据实施例43所述的方法，其中所述癌性肺病是恶性肿瘤或间皮瘤。实施例45是根据实施例44所述的方法，其中所述恶性肿瘤是非小细胞肺癌肿瘤。实施例46是根据实施例43到45中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述身体的其它区域患有癌症。实施例47是根据实施例38到46中任一项所述的方法，其中所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。实施例48是根据实施例47所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。实施例49是根据实施例48或49中任一项所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。实施例50是根据实施例49所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。实施例51是根据实施例50所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例52是根据实施例50或51任一项所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例53是根据实施例49所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒。实施例54是根据实施例53所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例55是根据实施例53或54任一项所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例56是根据实施例38到55中任一项所述的方法，其中所述第一组合物进一步包括液体载剂，并且其中所述抗肿瘤颗粒分散在所述载剂中。实施例57是根据实施例38到56中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是无水的。实施例58是根据实施例56所述的方法，其中所述液体载剂是水性载剂。实施例59是根据实施例58所述的方法，其中所述水性载剂包括0.9％盐水溶液。实施例60是根据实施例58或59中任一项所述的方法，其中所述水性载剂包括表面活性剂。实施例61是根据实施例60所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。实施例62是根据实施例61所述的方法，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80，并且其中所述聚山梨醇酯80以介于约0.01％v/v与约1％v/v之间的浓度存在于所述水性载剂中。实施例63是根据实施例47到62中任一项所述的方法，其中所述第一组合物中的所述紫杉烷颗粒的浓度介于约1mg/ml与约40mg/ml之间，或介于约6mg/ml与约20mg/ml之间。实施例64是根据实施例38到63中任一项所述的方法，其中所述组合物不含蛋白质，如白蛋白。实施例65是根据实施例38到64中任一项所述的方法，其中所述肺部施用包括雾化，并且其中雾化使得将所述第一组合物的气溶胶液滴肺部递送到所述受试者。实施例66是根据实施例65所述的方法，其中所述气溶胶液滴的质量中值空气动力学直径(mmad)介于约0.5μm到约6μm直径之间，或介于约1μm到约3μm直径之间，或介于约2μm到约3μm直径之间。实施例67是根据实施例38到66中任一项所述的方法，其中，在施用所述第一组合物后至少4天或至少14天，所述抗肿瘤剂能够在所述受试者的肺组织中检测到。实施例68是治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过瘤内注射将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物直接施用于所述受试者的实体瘤中，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。实施例69是根据实施例68所述的方法，其中所述实体瘤是良性肿瘤，并且其中所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。实施例70是根据实施例68所述的方法，其中所述实体瘤是恶性肿瘤。实施例71是根据实施例70所述的方法，其中所述恶性肿瘤包括肉瘤、癌、淋巴瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、头颈部肿瘤、成胶质细胞瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、肝脏肿瘤、卵巢肿瘤、结肠直肠肿瘤、皮肤肿瘤、皮肤转移瘤、淋巴和/或胃肠肿瘤。实施例72是根据实施例70到71中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述身体的其它区域患有癌症。实施例73是根据实施例68到72中任一项所述的方法，其中所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。实施例74是根据实施例73所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。实施例75是根据实施例73或74中任一项所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。实施例76是根据实施例75所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。实施例77是根据实施例76所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例78是根据实施例76或77任一项所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例79是根据实施例75所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒。实施例80是根据实施例79所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例81是根据实施例79或80任一项所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例82是根据实施例68到81任一项所述的方法，其中所述第一组合物进一步包括液体载剂，并且其中所述抗肿瘤颗粒分散在所述载剂中。实施例83是根据实施例82所述的方法，其中所述液体载剂是水性载剂。实施例84是根据实施例83所述的方法，其中所述水性载剂包括0.9％盐水溶液。实施例85是根据实施例83或84中任一项所述的方法，其中所述水性载剂包括表面活性剂。实施例86是根据实施例85所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。实施例87是根据实施例86所述的方法，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80，并且其中所述聚山梨醇酯80以介于约0.01％v/v与约1％v/v之间的浓度存在于所述水性载剂中。实施例88是根据实施例73到88中任一项所述的方法，其中所述第一组合物中的所述紫杉烷颗粒的浓度介于约1mg/ml与约40mg/ml之间，或介于约6mg/ml与约20mg/ml之间。实施例89是根据实施例68到88中任一项所述的方法，其中所述组合物不含蛋白质，如白蛋白。实施例90是治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过腹膜内注射向所述受试者的腹膜内器官肿瘤施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。实施例91是根据实施例90所述的方法，其中所述肿瘤是良性的，并且其中所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。实施例92是根据实施例90所述的方法，其中所述肿瘤是恶性的。实施例93是根据实施例92所述的方法，其中所述受试者在所述身体的其它区域患有癌症。实施例94是根据实施例90到93中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是卵巢肿瘤。实施例95是根据实施例90到94中任一项所述的方法，其中所述抗肿瘤颗粒包括紫杉烷颗粒。实施例96是根据实施例95所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。实施例97是根据实施例95或96中任一项所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒包括紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。实施例98是根据实施例97所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。实施例99是根据实施例98所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例100是根据实施例98或99任一项所述的方法，其中所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例101是根据实施例97所述的方法，其中所述紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒。实施例102是根据实施例101所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例103是根据实施例101或102任一项所述的方法，其中所述多西紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例104是根据实施例90到103任一项所述的方法，其中所述第一组合物进一步包括液体载剂，并且其中所述抗肿瘤颗粒分散在所述载剂中。实施例105是根据实施例104所述的方法，其中所述液体载剂是水性载剂。实施例106是根据实施例105所述的方法，其中所述水性载剂包括0.9％盐水溶液。实施例107是根据实施例105或106中任一项所述的方法，其中所述水性载剂包括表面活性剂。实施例108是根据实施例107所述的方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯。实施例109是根据实施例108所述的方法，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80，并且其中所述聚山梨醇酯80以介于约0.01％v/v与约1％v/v之间的浓度存在于所述水性载剂中。实施例110是根据实施例95到109中任一项所述的方法，其中所述第一组合物中的所述紫杉烷颗粒的浓度介于约1mg/ml与约40mg/ml之间，或介于约6mg/ml与约20mg/ml之间。实施例111是根据实施例90到110中任一项所述的方法，其中所述组合物不含蛋白质，如白蛋白。实施例112是根据实施例1到111中任一项所述的方法，其中所述免疫治疗剂是单克隆抗体、癌症疫苗、非特异性免疫治疗剂、细胞因子、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、检查点抑制剂、免疫调节剂、过继性细胞转移剂、t细胞治疗剂、细胞治疗剂、溶瘤病毒治疗剂、bcg和/或辅助免疫治疗剂。实施例113是根据实施例112所述的方法，其中所述免疫治疗剂是单克隆抗体。实施例114是根据实施例113所述的方法，其中所述单克隆抗体是派姆单抗。实施例115是根据实施例1到114中任一项所述的方法，其中所述第二组合物包括药学上可接受的载剂。实施例116是根据实施例1到115中任一项所述的方法，其中所述全身施用是静脉内(iv)注射或口服递送。实施例117是根据实施例1至116中任一项所述的方法，其中所述第一组合物在所述第二组合物施用前至少一天施用。实施例118是根据实施例1到116中任一项所述的方法，其中所述第二组合物在所述第一组合物施用前至少一天施用。实施例119是根据实施例1到116中任一项所述的方法，其中所述第一组合物和所述第二组合物在同一天施用。实施例120是根据实施例1到119中任一项所述的方法，其中所述第一组合物中的抗肿瘤颗粒的量和所述第二组合物中的免疫治疗剂的量是治疗所述受试者的所述癌症和任选地治疗所述受试者的所述肿瘤的有效量。实施例121是根据实施例1到120中任一项所述的方法，其中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。实施例122是一种试剂盒，其包括：(a)包括紫杉烷颗粒的第一组合物，其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，(b)包括免疫治疗剂的第二组合物，和(c)用于以下的说明书：(i)将所述第一组合物局部施用于受试者，以及(ii)将所述第二组合物全身施用于所述受试者。实施例123是根据实施例112所述的试剂盒，其中所述免疫治疗剂是单克隆抗体、癌症疫苗、非特异性免疫治疗剂、细胞因子、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、检查点抑制剂、免疫调节剂、过继性细胞转移剂、t细胞治疗剂、细胞治疗剂、溶瘤病毒治疗剂、bcg和/或辅助免疫治疗剂。实施例124是根据实施例122或123中任一项所述的试剂盒，其中所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。实施例125是根据实施例122到124中任一项所述的试剂盒，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。实施例126是根据实施例125所述的试剂盒，其中所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。实施例127是根据实施例126所述的试剂盒，其中所述紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例128是根据实施例126或127中任一项所述的试剂盒，其中所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例129是根据实施例125所述的试剂盒，其中所述紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒。实施例130是根据实施例129所述的试剂盒，其中所述多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。实施例131是根据实施例129或130中任一项所述的试剂盒，其中所述多西紫杉醇的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。实施例132是根据实施例125所述的试剂盒，其中所述第一组合物是疏水性软膏。实施例133是根据实施例125所述的试剂盒，其中所述第一组合物是水性悬浮液。如本文使用的，术语“抗肿瘤剂”是用于治疗包含癌症在内的肿瘤的药物，并且包含“化疗剂”，其是用于治疗癌症的药物。在一个优选的实施例中，所述抗肿瘤剂是紫杉烷。如本文使用的，术语“抗肿瘤剂颗粒”、“抗肿瘤剂颗粒”或“一种或多种抗肿瘤剂颗粒”是抗肿瘤剂颗粒，并且其平均粒径(数值)为直径约0.1微米到约5微米(约100nm至约5000nm)。在一个优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。如本文所用的，术语“肿瘤”是指在细胞分裂超过其应该分裂的程度时产生或者在其应该分裂的时候没有死亡的一个或多个异常的组织块。肿瘤可能是良性的(不是癌症)，也可能是恶性的(癌症)。如本文所用的，术语“疏水性”描述在室温下在水中溶解度小于或等于10mg/ml的化合物、组合物或载剂。如本文所用的，术语“挥发性”描述在室温下蒸汽压大于或等于10pa的化合物、组合物或载剂。如本文所用的，术语“非挥发性”描述了在室温下蒸汽压小于10pa的化合物、组合物或载剂。如本文中关于本发明的组合物或载剂所用的，术语“无水”是指组合物或载剂中存在小于3％w/w、优选地小于2％w/w、更优选地小于1％w/w或最优选0％w/w的水。这可以解释存在的少量水(例如，组合物或载剂的任何成分中固有包含的水、从大气中收缩的水等)。如本文所用的，术语“皮肤”是指表皮和/或真皮。如本文所用的，术语“皮肤肿瘤”包含良性皮肤肿瘤和恶性皮肤肿瘤。如本文所用的，术语“皮肤恶性肿瘤”或“恶性皮肤肿瘤”包含癌性皮肤肿瘤，其包含皮肤癌和皮肤转移瘤。皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤的“受影响区域”可以包含皮肤的至少一部分，其中皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤明显存在于皮肤的最外表面上或直接在皮肤表面之下(上皮/皮肤覆盖物)，并且可以包含皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤附近的可能含有明显不可检测的临床前损伤的皮肤区域。如本文所用的，术语“皮肤(皮)转移瘤(metastasis/metastases(复数))”是指皮肤中的恶性肿瘤表现为由身体另一部位的癌症肿瘤的原发性生长引起的继发性生长(恶性肿瘤)。原发性肿瘤可通过淋巴或血液循环系统或其它方式传播。如本文关于癌症的治疗和/或肿瘤的治疗所用的术语“治疗(treat/treating/treatment)”是指完成以下一项或多项：(a)减小肿瘤大小；(b)减少肿瘤生长；(c)消除肿瘤；(d)减少或限制转移瘤的发展和/或扩散；(e)获得癌症的部分或完全缓解。本文使用的术语“受试者”或“患者”是指脊椎动物。在一些实施例中，所述脊椎动物可以是哺乳动物。在一些实施例中，哺乳动物可以是灵长类动物，包含人类。本文使用的术语“室温(rt)”是指15-30℃或20-25℃。如本文所用的，术语“渗透增强剂”或“皮肤渗透增强剂”是指促进药物吸收到皮肤(表皮和真皮)中的化合物或材料或物质。如本文所用的，术语“表面活性剂(surfactant/surfaceactiveagent)”是指显示出能够降低水的表面张力或能够降低两种不混溶物质之间的界面张力的能力的化合物或材料或物质。如本文所使用的，除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”可以包含复数个提及物。除非另有明确说明，本文中使用的“和”可与“或”互换使用。本文使用的术语“约”或“近似”是指所述测量单位的+/-百分之五(5％)。对于此应用，可以使用标准舍入准则将具有一个或多个小数位的数值舍入为最接近的整数，即，如果被舍入的数字是5、6、7、8或9，则向上舍入；如果被舍入的数字是0、1、2、3或4，则向下舍入。例如，3.7可以舍入为4。除非上下文明确要求，否则在整个说明书和权利要求书中，词语“包括(comprise/comprising)”等应被理解为包含性或开放性的，而不是排他性或穷尽性的；也就是说，其意义为“包含但不限于”。使用单数或复数的词语也分别包含复数和单数。此外，当在本申请中使用时，词语“本文”、“上面”和“下面”以及类似含义的词语应指本申请的整体，而不是指本申请的任何特定部分。组合物及其使用方法可以“包括”说明书中公开的任何成分或步骤，或“基本上由”或“由”其组成。关于短语“基本上由……组成”，本发明方法的一个基本和新的特性是组合物及其使用方法通过局部递送抗肿瘤颗粒组合物与全身递送免疫治疗剂组合物相结合来治疗癌症的能力。可以设想，本说明书中讨论的任何实施例可以相对于本发明的任何方法或组成来实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。本公开的实施例的描述不旨在穷举或将本公开限制为所公开的精确形式。虽然本文出于说明的目的描述了本公开的具体实施例和实例，但是如相关领域的技术人员将认识到的，在本公开的范围内，各种等同的修改是可能的。附图说明图1以图形方式示出了调配物f1到f7体外递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图2以图形方式示出了调配物f6*(重复分析)和f8至f13体外递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图3图形方式示出了调配物f1至f7体外递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图4图形方式示出了调配物f6*(重复分析)和f8至f13体外递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图5是皮肤转移瘤研究中基线时(第1天)患有4期乳腺癌的妇女胸部的皮肤转移瘤病灶的照片。图6是皮肤转移瘤研究中局部治疗期间第8天患有4期乳腺癌的妇女胸部的皮肤转移瘤病灶的照片。图7是皮肤转移瘤研究中局部治疗期间第15天患有4期乳腺癌的妇女胸部的皮肤转移瘤病灶的照片。图8a是在皮肤转移瘤研究研究结束时局部治疗期间第29天患有4期乳腺癌的妇女胸部的皮肤转移瘤病灶的照片。图8b是在皮肤转移研究瘤中局部治疗结束两周后的第43天患有4期乳腺癌的妇女胸部的皮肤转移瘤病灶的照片。图9是通过级联冲击器测量的6.0mg/ml调配物气溶胶的粒径分布图。图10是通过级联冲击器测量的20.0mg/ml调配物气溶胶的粒径分布图。图11是大鼠肺部施用后血浆中紫杉醇水平随时间推移的曲线图。图12是大鼠肺部施用后肺组织中紫杉醇水平随时间推移的曲线图。图13是原位肺癌研究中动物体重随时间推移的曲线图。图14是原位肺癌研究中动物体重随时间变化的曲线图。图15是原位肺癌研究中动物肺重量的图。图16是原位肺癌研究中动物肺与体重比率的图。图17是原位肺癌研究中动物肺与脑重量比率的图。图18是原位肺癌研究中的平均肿瘤面积图。图19是原位肺癌研究中的平均肿瘤面积图。图20是h&e染色的原位肺癌组织载玻片—1006(对照)(腺癌-3、原始-1、消退-0)的显微照片。肺部肿瘤块的主要特征(2×)。图21是h&e染色的原位肺癌组织载玻片—2003(ivabraxane)(腺癌-1、原始-1、消退-1)的显微照片。正在消退的肺部肿瘤的特征(4×)。图22是h&e染色的原位肺癌组织载玻片—2010(ivabraxane)(腺癌-3、原始-1、消退-0)的显微照片。肺部肿瘤块的主要特征(2×)。图23是h&e染色的原位肺癌组织载玻片—4009(ih1×高)(腺癌-0、原始-0、消退-4)的显微照片。已经完全消退的肺部肿瘤的特征(2×)。图24是h&e染色的原位肺癌组织载玻片-5010(ih2×低)腺癌-1、原始-0、消退-3的显微照片。正在消退的肺部肿瘤的特征(2×)。图25是h&e染色的原位肺癌组织载玻片—6005(ih2×高)(腺癌-1、原始-0、消退-4)的显微照片。正在消退的肺部肿瘤的特征(2×)。图26是原位肺癌研究中的肿瘤消退的图。图27是原位肺癌组织载玻片的各种显微照片-(对照)。顶行：h/e染色部分。底行：用角蛋白或cd11b免疫组织化学染色。图28是原位肺癌组织载玻片—(ivabraxane)的各种显微照片。顶行：h/e染色部分。底行：用角蛋白或cd11b免疫组织化学染色。图29是原位肺癌组织载玻片—(吸入性)的各种显微照片。用h/e染色、三色染色、角蛋白染色和cd11b进行各种染色。图30是显示存在tls的原位肺癌组织载玻片的各种显微照片。图31是膀胱癌异种移植物研究中的平均肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的箭头表示施用点。图32是来自膀胱癌异种移植物研究的媒剂3周期的个体肿瘤体积随时间的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。图33是膀胱癌异种移植研究中多西紫杉醇iv3个周期的单个肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。图34是膀胱癌异种移植物研究中it1个周期的单个肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示单一施用点。图35是膀胱癌异种移植研究中it2个周期的单个肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。图36是膀胱癌异种移植物研究中3个周期的单个肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。图37是研究结束时的肿瘤体积相对于膀胱癌异种移植研究的第1天处理时的肿瘤体积的散点图。图38是膀胱癌异种移植研究中的平均体重随时间推移的曲线图。x轴上的箭头表示施用点。图39是膀胱癌异种移植物研究中每个施用组在第61天的平均肿瘤体积图。图40是膀胱癌异种移植物研究中的肿瘤植入后第27天、第40天和第61天来自每个施用组的动物的照片。图41是膀胱癌异种移植物研究中的1个周期、2个周期和3个周期的肿瘤组织中多西紫杉醇的浓度图。图42是膀胱癌异种移植组织载玻片(it媒剂对照物)的显微照片。h&e.放大率2.52×。图43是膀胱癌异种移植组织切片—it媒剂对照物的显微照片。h&e.放大率6.3×。图44是膀胱癌异种移植组织切片—it媒剂对照物的显微照片。h&e.放大率25.2×。图45是膀胱癌异种移植组织载玻片(iv多西紫杉醇3个周期)的显微照片。h&e.放大率2.52×。图46是膀胱癌异种移植组织载玻片(iv多西紫杉醇3个周期)的显微照片。h&e.放大率6.3×。图47是膀胱癌异种移植组织载玻片(iv多西紫杉醇3个周期)的显微照片。h&e.放大率25.2×。图48是膀胱癌异种移植组织载玻片(it2个周期)的显微照片。h&e.放大率2.52×。图49是膀胱癌异种移植组织载玻片(it2个周期)的显微照片。h&e.放大率6.3×。图50是膀胱癌异种移植组织载玻片(it3个周期)的显微照片。h&e.放大率2.52×。图51是膀胱癌异种移植组织载玻片(it3个周期)的显微照片。h&e.放大率2.52×。图52是膀胱癌异种移植组织载玻片(it3个周期)的显微照片。h&e.放大率25.2×。图53是膀胱癌异种移植组织载玻片(it媒剂对照物3个周期f4/80染色)的显微照片。放大率2.52×。图54是膀胱癌异种移植组织载玻片(iv多西紫杉醇3个周期f4/80染色)的显微照片。放大率2.52×。图55是膀胱癌异种移植组织载玻片(it3个周期f4/80染色)的显微照片。放大率2.52×。图56是来自雌性大鼠(未处理)的肾细胞腺癌异种移植组织载玻片的显微照片。h&e.放大率6.3×。图57是来自雌性大鼠的肾细胞腺癌异种移植组织载玻片(媒剂对照物(it)3个周期)的显微照片。h&e.放大率6.3×。图58是来自雌性大鼠的肾细胞腺癌异种移植组织载玻片(多西紫杉醇溶液(iv)3个周期)的显微照片。h&e.放大率6.3×。图59是来自雌性大鼠的肾细胞腺癌异种移植组织载玻片((it)3个周期)的显微照片。h&e.放大率6.3×。图60是肾细胞腺癌异种移植组织载玻片的对照病例的各种显微照片。顶行：h&e染色部分。底行：免疫组织化学染色。图61是肾细胞腺癌异种移植物组织载玻片的各种it病例的显微照片。顶行：一个周期的(1×)。第二行：一个周期的(1×)。第三行：两个周期的(2×)。第四行：两个周期的(2×)。第五行：三个周期的(3×)。图62是肾细胞腺癌异种移植物研究中的组中大鼠的平均肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。图63是肾细胞腺癌异种移植物研究中的组中大鼠的平均肿瘤体积随时间推移的曲线图。x轴上的三角形表示施用点。具体实施方式本发明提供了通过使用局部和全身联合疗法来治疗癌症的方法，即，将抗肿瘤剂颗粒(化疗颗粒)(如紫杉烷颗粒)直接局部施用于肿瘤作为全身施用免疫治疗剂的佐剂。当将抗肿瘤颗粒(如紫杉烷颗粒(例如紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒))局部(locally)施用于良性或恶性肿瘤时(即瘤内注射、腹膜内注射、通过吸入沉积在肺中、或局部(topically)施用于皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤(如皮肤转移瘤))，抗肿瘤剂(例如紫杉醇或多西紫杉醇)的分子在肿瘤部位停留的时间比以高浓度iv溶液形式施用抗肿瘤剂的时间长。因此，局部施用的抗肿瘤颗粒(如紫杉烷颗粒)可作为全身免疫疗法的局部佐剂。不受任何特定机制的限制，这种辅助作用可以包括例如为淋巴细胞提供足够的时间来激活其对肿瘤的先天和适应性免疫应答，所有这些都没有iv化疗的附加相关毒性。响应于紫杉烷颗粒的局部(local)施用而发生的免疫系统刺激(包含局部树突细胞对肿瘤抗原的反应的激活)可以通过例如将紫杉烷颗粒局部(topical)施用于皮肤或通过肺部吸入紫杉烷颗粒得到增强。不受任何特定机制的限制，通过施用紫杉烷颗粒的局部肿瘤细胞杀伤释放附着于树突细胞的肿瘤细胞抗原。然后，活化的树突状细胞可将肿瘤特异性抗原呈递至在患者血管系统中循环的t细胞和其它杀瘤细胞，并进入包含肿瘤的组织，从而破坏患者全身的癌症。因此，局部微粒施用的使用允许直接局部治疗，以及间接免疫系统介导的系统性癌细胞杀伤。通过皮肤肿瘤的局部(topical)治疗、实体肿瘤的瘤内注射、腹膜内注射或肺病的吸入治疗来局部(local)施用紫杉烷颗粒，局部紫杉烷分子作为用于刺激免疫应答的佐剂。紫杉烷的局部浓度持续升高超过4天，这提供了足够的时间来杀死局部肿瘤细胞以及刺激适于杀死可能在体内广泛传播的癌症的免疫应答。通过局部施用紫杉烷颗粒对免疫系统的刺激不会在患者循环血液中产生伴随的高水平紫杉烷。因此，局部施用颗粒紫杉烷不会降低骨髓中的涉及降低白细胞(如淋巴细胞)的数量的造血作用。由于循环的紫杉烷浓度较高，骨髓抑制是紫杉烷iv时的常见副作用。不受任何特定机制的限制，紫杉烷颗粒的局部施用可以长时间产生足够浓度的紫杉烷，以通过树突细胞的激活来刺激对免疫疗法的局部免疫应答。树突状细胞的激活最明显地发生在树突状细胞大量存在的皮肤或肺部。将紫杉烷颗粒局部施用于皮肤肿瘤导致紫杉醇进入肿瘤细胞，从而在肿瘤细胞分裂周期中杀死肿瘤细胞，使肿瘤细胞更易于通过免疫疗法进行免疫识别。然后，淋巴细胞将在患者体内循环，从而产生对肿瘤细胞的细胞表面抗原具有特异性的体液介质。淋巴细胞破坏位于皮肤中的肿瘤以及远处的转移瘤。淋巴细胞肿瘤的杀伤也可以通过免疫监视的细胞途径发生。例如，对皮肤转移瘤局部施用紫杉烷颗粒将带来患者全身癌症的根除，而不仅仅是皮肤转移瘤。转移性肺癌响应于吸入的紫杉烷颗粒也会在体内消除癌症。因此，本发明的癌症治疗方法包含使用局部和全身联合疗法，即，将包括抗肿瘤剂颗粒(如紫杉烷颗粒)的组合物直接局部施用于肿瘤；与全身施用包括免疫治疗剂的组合物相结合。抗肿瘤剂颗粒(例如紫杉烷颗粒)的局部施用作为系统免疫疗法的局部佐剂，为淋巴细胞提供足够的时间来激活其对肿瘤的先天和适应性免疫应答。与单独使用免疫治疗剂和/或单独使用包括抗肿瘤颗粒的组合物的治疗(单一疗法)相比，使用包括抗肿瘤颗粒的组合物的局部施用和免疫治疗剂的全身施用的联合治疗显示出更好的疗效，这由以下至少一项证明：(a)与单独用免疫治疗剂处理的动物相比，用包括抗肿瘤颗粒组合物与免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤大小减少更多，或(b)与单独用免疫治疗剂处理的动物相比，用包括抗肿瘤颗粒组合物与免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤生长减少更多，或(c)与用单独的免疫治疗剂处理的动物的无肿瘤消除发生率相比，用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物具有一种或多种肿瘤消除发生率，或(d)与用仅包括抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物相比，用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤大小减少更多，或(e)与比用仅包括抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物相比，用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤生长减少更多，或(f)与用仅包括抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物无肿瘤消除发生率相比，用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物具有一种或多种肿瘤消除发生率。此外，通过组合局部施用的包括抗肿瘤颗粒的组合物和全身施用的免疫治疗剂，实现了对功效的协同作用，如以下至少一项所证明的：(g)用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤大小的减少量大于用单独的免疫治疗剂处理的动物的肿瘤大小的减少量加上用包括单独的抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物的肿瘤大小的减少量之和，或(h)用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤生长的减少量大于用单独的免疫治疗剂处理的动物的肿瘤生长的减少量加上用包括单独的抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物的肿瘤生长的减少量之和，或(i)用包括抗肿瘤颗粒的组合物和免疫治疗剂的组合处理的动物的肿瘤消除发生率的数量大于单独用派姆单抗处理的动物的肿瘤消除发生率的数量加上用包括单独的抗肿瘤颗粒的组合物处理的动物的肿瘤消除发生率的数量之和。i.抗肿瘤剂颗粒“抗肿瘤剂”是用于治疗包含癌症在内的肿瘤的药物，并且包含“化疗剂”，其是用于治疗癌症的药物。合适的抗肿瘤剂包含当施用于受试者时刺激免疫应答的抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的非限制性实例可在高尔出版有限公司(gowerpublishinglimited)2000年出版的“《阿什盖特抗肿瘤剂手册(ashgatehandbookofantineoplasticagents)》”中找到，该手册通过引用并入本文。抗肿瘤剂颗粒的平均粒径(数值)为直径约0.1微米到约5微米(约100nm到约5000nm)。在一些实施例中，抗肿瘤剂颗粒的平均粒径(数值)为直径约0.1微米到约1.5微米(约100nm到约1500nm)。在一些实施例中，抗肿瘤剂颗粒的平均粒径(数值)为约0.1微米到小于1微米(约100nm到小于1000nm)。抗肿瘤剂颗粒处于不可能被通过全身循环带出肿瘤的大小范围，但受益于高比表面积以提供增强的药物溶解和释放。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒是固体的、未包衣的(“纯的”或“裸的”)单个颗粒。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒不与任何物质结合。在一些实施例中，没有物质被吸收或吸附到抗肿瘤颗粒的表面上。在一些实施例中，抗肿瘤剂或抗肿瘤颗粒没有包封、包含、封装或包埋在任何物质中。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒没有用任何物质包衣。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒不是含有抗肿瘤剂的微乳剂、纳米乳剂、微球体或脂质体。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒不与单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白质、表面活性剂或白蛋白结合、包封在其中或用其包衣。在一些实施例中，单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白质、表面活性剂或白蛋白不被吸收或吸附到抗肿瘤颗粒的表面上。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒呈结晶形式。在其它实施例中，抗肿瘤颗粒呈无定形形式，或呈结晶和无定形形式的组合。在一些实施例中，本发明的抗肿瘤颗粒含有在制备抗肿瘤剂期间通常发现的痕量杂质和副产物。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒包括至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的抗肿瘤剂，这意味着抗肿瘤颗粒由基本上纯的抗肿瘤剂组成或基本上由基本上纯的抗肿瘤剂组成。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒被如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质包衣或与其结合。在一些实施例中，如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质被吸收或吸附到抗肿瘤颗粒的表面上。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒被包封、包含、封装或包埋在如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质中。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒是含有抗肿瘤剂的微乳剂、纳米乳剂、微球体或脂质体。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒是非集合的单个颗粒，并且不是通过如非共价相互作用、范德华力(vanderwaalforces)、亲水性或疏水性相互作用、静电相互作用、库仑力、与分散材料的相互作用或通过官能团的相互作用等相互作用力结合在一起的多个抗肿瘤颗粒的簇。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是由融合在一起形成较大的单个抗肿瘤颗粒的较小颗粒的集合形成的单个抗肿瘤颗粒，所有这些都发生在抗肿瘤颗粒的加工过程中。在其它实施例中，抗肿瘤颗粒是通过如非共价相互作用、范德华力、亲水或疏水相互作用、静电相互作用、库仑力、与分散材料的相互作用或通过官能团的相互作用等的相互作用力结合在一起的抗肿瘤颗粒的簇或集合体。在一个优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。紫杉烷是水溶性较差的化合物，通常在室温下在水中的溶解度小于或等于10mg/ml。紫杉烷广泛用作抗肿瘤剂和化疗剂。如本文所用的，术语“紫杉烷”包含紫杉醇(i)、多西紫杉醇(ii)、卡巴他赛(iii)和任何其它紫杉烷或紫杉烷衍生物，其非限制性实例为紫杉醇b(三尖杉宁碱)、紫杉醇c、紫杉醇d、紫杉醇e、紫杉醇f、紫杉醇g、紫杉二烯、浆果赤霉素iii、10-脱乙酰基浆果赤霉素、紫杉酚a、短叶紫杉醇和紫杉酚d，并且还包含紫杉烷的药学上可接受的盐。(i)紫杉醇(ii)多西紫杉醇(iii)卡巴他赛紫杉醇和多西紫杉醇活性药物成分(api)可从加拿大温哥华的phyton生物技术有限公司(phytonbiotechllc)商购获得。多西紫杉醇api以无水无溶剂为基础计算含有不少于90％、或不少于95％、或不少于97.5％的多西紫杉醇。紫杉醇api以无水无溶剂为基础计算含有不少于90％、或不少于95％、或不少于97％的紫杉醇。在一些实施例中，紫杉醇api和多西紫杉醇api为usp和/或ep级。紫杉醇api可通过半合成化学工艺或天然来源(如植物细胞发酵或提取)制备。紫杉醇有时也被称为taxol，尽管这是一个用词不当的名称，因为taxol是紫杉醇在聚氧乙烯蓖麻油和乙醇中用于在静脉输注前用合适的胃肠外液稀释的溶液的商品名。紫杉烷api可用于制备紫杉烷颗粒。紫杉烷颗粒可以是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒或卡巴他塞颗粒，或其它紫杉烷衍生物的颗粒，包含紫杉烷的药学上可接受的盐的颗粒。紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为直径约0.1微米到约5微米(约100nm至约5000nm)。在优选的实施例中，紫杉烷颗粒是固体的、未包衣的(纯的)单个颗粒。紫杉烷颗粒处于不可能被通过全身循环带出肿瘤的大小范围，但受益于高比表面积以提供增强的药物溶解和释放。在一些实施例中，紫杉烷颗粒不与任何物质结合。在一些实施例中，没有物质被吸收或吸附到紫杉烷颗粒的表面上。在一些实施例中，紫杉烷或紫杉烷颗粒没有包封、包含、封装或包埋在任何物质中。在一些实施例中，紫杉烷颗粒没有用任何物质包衣。在一些实施例中，紫杉烷颗粒不是含有紫杉烷的微乳剂、纳米乳剂、微球体或脂质体。在一些实施例中，紫杉烷颗粒不与单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白质、表面活性剂或白蛋白结合、包封在其中或用其包衣。在一些实施例中，单体、聚合物(或生物相容性聚合物)、蛋白质、表面活性剂或白蛋白不被吸收或吸附到紫杉烷颗粒的表面上。在一些实施例中，组合物和紫杉烷颗粒不含白蛋白。在一些实施例中，紫杉烷颗粒呈结晶形式。在其它实施例中，紫杉烷颗粒呈无定形形式，或呈结晶和无定形形式的组合。在一些实施例中，本发明的紫杉烷颗粒含有在制备紫杉烷期间通常发现的痕量杂质和副产物。在一些实施例中，紫杉烷颗粒包括至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的紫杉烷，这意味着紫杉烷颗粒由基本上纯的紫杉烷组成或基本上由基本上纯的紫杉烷组成。在一些实施例中，紫杉烷颗粒被如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质包衣或与其结合。在一些实施例中，如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质被吸收或吸附到紫杉烷颗粒的表面上。在一些实施例中，紫杉烷颗粒被包封、包含、封装或包埋在如蛋白质(例如白蛋白)、单体、聚合物、生物相容性聚合物或表面活性剂等的物质中。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是含有紫杉烷的微乳剂、纳米乳剂、微球体或脂质体。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是非集合的单个颗粒，并且不是通过如非共价相互作用、范德华力(vanderwaalforces)、亲水性或疏水性相互作用、静电相互作用、库仑力、与分散材料的相互作用或通过官能团的相互作用等相互作用力结合在一起的多个紫杉烷颗粒的簇。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是由融合在一起形成较大的单个紫杉烷颗粒的较小颗粒的集合形成的单个紫杉烷颗粒，所有这些都发生在紫杉烷颗粒的加工过程中。在其它实施例中，紫杉烷颗粒是通过如非共价相互作用、范德华力、亲水性或疏水性相互作用、静电相互作用、库仑力、与分散材料的相互作用或通过官能团的相互作用等的相互作用力结合在一起的紫杉烷颗粒的簇或集合体。抗肿瘤颗粒或紫杉烷颗粒(包含紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒或卡巴他赛颗粒)的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米、或0.1微米到2微米、或0.1微米到1.5微米、或0.1微米到1.2微米、或0.1微米到1微米、或0.1微米到小于1微米、或0.1微米到0.9微米、或0.1微米到0.8微米、或0.1微米到0.7微米、或0.2微米到5微米、或0.2微米到2微米、或0.2微米到1.5微米、或0.2微米到1.2微米、或0.2微米到1微米、或0.2微米到小于1微米、或0.2微米到0.9微米、或0.2微米到0.8微米、或0.2微米到0.7微米、或0.3微米到5微米、或0.3微米到2微米、或0.3微米到1.5微米、或从0.3微米到1.2微米、或者从0.3微米到1微米、或者从0.3微米到小于1微米、或0.3微米到0.9微米、或0.3微米到0.8微米、或0.3微米到0.7微米、或0.4微米到5微米、或0.4微米到2微米、或从0.4微米到1.5微米、或者从0.4微米到1.2微米、或者从0.4微米到1微米、或者从0.4微米到小于1微米、或者从0.4微米到0.9微米、或者从0.4微米到0.8微米、或者从0.4微米到0.7微米、或从0.5微米到5微米、或从0.5微米到2微米、或从0.5微米到1.5微米、或从0.5微米到1.2微米、或从0.5微米到1微米、或从0.5微米到小于1微米、或0.5微米到0.9微米、或0.5微米到0.8微米、或0.5微米到0.7微米、或0.6微米到5微米、或0.6微米到2微米、或0.6微米到1.5微米、或0.6微米到1.2微米、或0.6微米到1微米、或0.6微米到小于1微米、或0.6微米到0.9微米、或0.6微米到0.8微米、或0.6微米到0.7微米。抗肿瘤颗粒或紫杉烷颗粒处于不可能被通过全身循环带出肿瘤的大小范围，但受益于高比表面积以提供增强的药物溶解和释放。包含紫杉烷颗粒的抗肿瘤颗粒的颗粒大小可以通过颗粒大小分析仪来确定，并且测量值表示为基于数分布(数)的平均直径。合适的粒径分析仪是一种采用光遮蔽分析技术的仪器，也称为光带或单粒子光学传感(spos)。一种合适的光遮蔽粒径分析仪是accusizer，如accusizer780sis，可从佛罗里达里奇港的粒径分析仪公司(particlesizingsystems)获得。另一种合适的粒径分析仪是采用激光衍射的仪器，如岛津(shimadzu)sald-7101。包含紫杉烷颗粒的抗肿瘤剂颗粒可以使用本领域已知的各种粒径减小方法和设备制造。这些方法包含但不限于常规的粒径减小方法，如湿磨或干磨、微粉化、粉碎和粉碎。其它方法包含“用经压缩反溶剂沉淀(pca)”，如用超临界二氧化碳沉淀。在各个实施例中，抗肿瘤颗粒和/或紫杉烷颗粒通过如在美国专利us5874029、us5833891、us6113795、us7744923、us8778181、us9233348；美国公开us2015/0375153、us2016/0354336、us2016/0374953；和国际专利申请公开wo2016/197091、wo2016/197100和wo2016/197101中公开的pca方法制备；所有这些专利和公开通过引用并入本文。在使用超临界二氧化碳的pca粒径减小方法中，使用超临界二氧化碳(反溶剂)和溶剂(例如丙酮或乙醇)来产生在良好表征的粒径分布内小至0.1到5微米的未包衣的抗肿瘤或紫杉烷颗粒。二氧化碳和溶剂在加工过程中被去除(最多可保留0.5％的残留溶剂)，留下粉末形式的抗肿瘤或紫杉烷颗粒。稳定性研究表明，紫杉醇颗粒粉末在室温下储存长达59个月并且在加速条件下(40℃/75％相对湿度)储存长达六个月时在小瓶剂型中是稳定的。通过各种超临界二氧化碳粒径减小方法生产的紫杉烷颗粒与通过使用物理冲击或研磨(例如湿磨或干磨、微粉化、崩解、粉碎、微流化或粉碎)的常规粒径减小方法生产的紫杉烷颗粒相比可以具有独特的物理特性。如美国公开2016/0374953(通过应用并入本文)中所公开的，这种独特的特性包含体积密度(未振实)介于0.05g/cm3与0.15g/cm3之间和比表面积(ssa)为至少18m2/g紫杉烷(例如，紫杉醇和多西紫杉醇)颗粒(其通过美国公开2016/0374953中所述的超临界二氧化碳粒径减小方法产生，如下所述)。该体积密度范围通常低于通过常规方法生产的紫杉烷颗粒的体积密度，并且ssa通常高于通过常规方法生产的紫杉烷颗粒的ssa。与通过常规方法生产的紫杉烷相比，这些独特的特性使得在水/甲醇介质中的溶解速率显著增加。如本文所用的，“比表面积”(ssa)是每单位紫杉烷质量的紫杉烷颗粒的总表面积，通过brunauer-emmett-teller(bet)等温线通过以下方法测量：将200至300mg的已知质量的分析物加入到30ml样品管中。然后将装载好的试管安装到多孔材料公司(porousmaterialsinc.)生产的bet-202a型上。然后使用betwin软件包进行自动测试，并随后计算每个样品的表面积。如本领域技术人员所理解的，“紫杉烷颗粒”可以包含集合的紫杉烷颗粒和非集合的紫杉烷颗粒；由于ssa是以每克为基础测定的，因此ssa考虑了组合物中集合的和未集合的紫杉烷颗粒。集合的紫杉烷颗粒在本文中被定义为由融合在一起形成较大的单个紫杉烷颗粒的较小颗粒集合而形成的单个紫杉烷颗粒，所有这些都发生在紫杉烷颗粒的加工过程中。bet比表面积测试程序是《美国药典(unitedstatespharmaceopeia)》和《欧洲药典(europeanpharmaceopeia)》都包含的药典方法。体积密度的测量可以通过将紫杉烷颗粒倒入量筒中而不在室温下振实、测量质量和体积、并计算体积密度来进行。如美国公开2016/0374953中所公开的，研究显示在deco-pbm-v-0.41球磨机中使用5mm的球尺寸在室温下以600rpm的转速研磨紫杉醇60分钟产生的紫杉醇颗粒的ssa为15.0m2/g，体积密度为0.31g/cm3。在美国公开2016/0374953中也公开了，当使用以下方法通过超临界二氧化碳方法生产时，一批紫杉醇颗粒的ssa为37.7m2/g，体积密度为0.085g/cm3：在丙酮中制备65mg/ml紫杉醇的溶液。betemicro雾喷嘴(bete雾喷嘴公司(betefognozzle,inc.))和声波探针(桂宁(qsonica)，型号q700)被定位于结晶室中，相距约8mm。将具有大约100nm孔的不锈钢筛网过滤器附接到结晶室，以收集沉淀的紫杉醇颗粒。将超临界二氧化碳置于制造设备的结晶室中，并使其在约38℃和24千克/小时的流速下达到约1200psi。声波探头在20khz的频率下被调整到总输出功率的60％。将含有紫杉醇的丙酮溶液以4.5毫升/分钟的流速泵送通过喷嘴约36小时。通过上述超临界二氧化碳方法生产的另外批次的紫杉醇颗粒的ssa值为：22.27m2/g、23.90m2/g、26.19m2/g、30.02m2/g、31.16m2/g、31.70m2/g、32.59m2/g、33.82m2/g、35.90m2/g、38.22m2/g和38.52m2/g。如美国公开2016/0374953中所公开的，研究显示在deco-pbm-v-0.41球磨机中使用5mm的球尺寸在室温下以600rpm的转速研磨多西紫杉醇60分钟产生的多西紫杉醇颗粒的ssa为15.2m2/g，体积密度为0.44g/cm3。在美国公开2016/0374953中也公开了，当使用以下方法通过超临界二氧化碳方法生产时，一批多西紫杉醇颗粒的ssa为44.2m2/g，体积密度为0.079g/cm3：在乙醇中制备79.32mg/ml多西紫杉醇的溶液。将喷嘴和声波探头定位于可加压室中，相距约9mm。将具有大约100nm孔的不锈钢筛网过滤器连接到可加压室，以收集沉淀的多西紫杉醇颗粒。将超临界二氧化碳置于制造设备的可加压室中，并使其在约38℃和68slpm的流速下达到约1200psi。声波探头在20khz的频率下被调整到总输出功率的60％。将含有多西紫杉醇的乙醇溶液以2毫升/分钟的流速泵送通过喷嘴约95分钟。当混合物被泵送通过不锈钢筛网过滤器时，沉淀的多西紫杉醇集合颗粒和较小的多西紫杉醇颗粒随后从超临界二氧化碳中收集。打开含有多西紫杉醇颗粒的过滤器，并从过滤器中收集所得产物。如美国公开2016/0374953中所公开的，溶出度研究显示，通过美国公开2016/0374953中所述的超临界二氧化碳方法制备的紫杉醇和多西紫杉醇颗粒在甲醇/水介质中的溶出速率比通过使用deco-pbm-v-0.41球磨机使用5mm球大小在室温下以600rpm研磨紫杉醇和多西紫杉醇60分钟而制备的紫杉醇和多西紫杉醇颗粒在甲醇/水介质中的溶出速率高。用于确定溶解速率的程序如下。对于紫杉醇，通过将材料和珠子在小瓶中翻滚约1小时，将约50mg材料涂覆在约1.5克1mm玻璃珠上。将珠子转移到不锈钢网容器中，并置于含有37℃、ph为7的甲醇/水50/50(v/v)介质以及以75rpm操作的usp设备ii(桨叶)的溶出浴中。在10、20、30、60和90分钟时，取出5ml等分试样，通过0.22μm过滤器过滤，并在227nm的uv/vis分光光度计上分析。将样品的吸光度值与溶解介质中制备的标准溶液的吸光度值进行比较，以确定溶解的物质的量。对于多西紫杉醇，将约50mg材料直接放入含有37℃、ph为7的甲醇/水15/85(v/v)介质以及以75rpm操作的usp设备ii(桨叶)的溶出浴中。在5、15、30、60、120和225分钟时，取出5ml等分试样，通过0.22μm过滤器过滤，并在232nm的uv/vis分光光度计上分析。将样品的吸光度值与溶解介质中制备的标准溶液的吸光度值进行比较，以确定溶解的物质的量。对于紫杉醇，通过超临界二氧化碳法制备的颗粒在30分钟内的溶解率为47％，而通过研磨制备的颗粒在30分钟内的溶解率为32％。对于多西紫杉醇，通过超临界二氧化碳法制备的颗粒在30分钟内的溶解率为27％，而通过研磨制备的颗粒在30分钟内的溶解率为9％。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒的ssa为至少10、至少12、至少14、至少16、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28、至少29、至少30、至少31、至少32、至少33、至少34或至少35m2/g。在一个实施例中，抗肿瘤颗粒的ssa介于约10m2/g与约50m2/g之间。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒的体积密度介于约0.050g/cm3与约0.20g/cm3之间。在进一步的实施例中，抗肿瘤颗粒的ssa为：(a)介于16m2/g与31m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(b)介于16m2/g与30m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(c)介于16m2/g与29m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(d)介于17m2/g与31m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(e)介于17m2/g与30m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(f)介于17m2/g与29m2/g之间或介于32m2/g与40m2/g之间；(g)介于16m2/g与31m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(h)介于16m2/g与30m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(i)介于16m2/g与29m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(j)介于17m2/g与31m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(k)介于17m2/g与30m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(l)介于17m2/g与29m2/g之间或介于33m2/g与40m2/g之间；(m)介于16m2/g与31m2/g之间，或≥32m2/g；(h)介于17m2/g与31m2/g之间，或≥32m2/g；(i)介于16m2/g与30m2/g之间，或≥32m2/g；(j)介于17m2/g与30m2/g之间，或≥32m2/g；(k)介于16m2/g与29m2/g之间，或≥32m2/g；(l)介于17m2/g与29m2/g之间，或≥32m2/g；(m)介于16m2/g与31m2/g之间，或≥33m2/g；(n)介于17m2/g与31m2/g之间，或≥33m2/g；(o)介于16m2/g与30m2/g之间，或≥33m2/g；(p)介于17m2/g与30m2/g之间，或≥33m2/g；(q)介于16m2/g与29m2/g之间，或≥33m2/g；或(r)介于17m2/g与29m2/g之间，或≥33m2/g。在一些实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒或紫杉烷颗粒是由融合在一起形成较大的单个紫杉烷颗粒的较小颗粒的集合形成的单个紫杉烷颗粒，所有这些都发生在紫杉烷颗粒的加工过程中。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒或紫杉烷颗粒是非集合的单个颗粒，并且不是通过如非共价相互作用、范德华力(vanderwaalforces)、亲水性或疏水性相互作用、静电相互作用、库仑力、与分散材料的相互作用或通过官能团的相互作用等相互作用力结合在一起的多个抗肿瘤颗粒或紫杉烷颗粒的簇。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒，并且ssa为至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28、至少29、至少30、至少31、至少32、至少33、至少34或至少35m2/g。在其它实施例中，紫杉醇颗粒的ssa为18m2/g到50m2/g、或20m2/g到50m2/g、或22m2/g到50m2/g、或25m2/g到50m2/g、或26m2/g到50m2/g、或30m2/g到50m2/g、或35m2/g到50m2/g、或18m2/g到45m2/g、或20m2/g到45m2/g、或22m2/g到45m2/g、或25m2/g到45m2/g、或26m2/g到45m2/g、或30m2/g到45m2/g、或35m2/g到45m2/g、或18m2/g到40m2/g、或20m2/g到40m2/g、或22m2/g到40m2/g、或25m2/g到40m2/g、或26m2/g到40m2/g、或30m2/g到40m2/g，或35m2/g到40m2/g。在一些实施例中，紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3，或0.05g/cm3到0.20g/cm3。在一些实施例中，紫杉醇颗粒的溶出速率为至少40％w/w，其溶于以75rpm操作的uspii桨式设备中的37℃和ph为7的50％甲醇/50％水(v/v)的溶液中的时间为30分钟或更少。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是多西紫杉醇颗粒，并且ssa为至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28、至少29、至少30、至少31、至少32、至少33、至少34、至少35、至少36、至少37、至少38、至少39、至少40、至少41或至少42m2/g。在其它实施例中、多西紫杉醇颗粒的ssa为18m2/g到60m2/g、或22m2/g到60m2/g、或25m2/g到60m2/g、或30m2/g到60m2/g、或40m2/g到60m2/g、或18m2/g到50m2/g、或22m2/g到50m2/g、或25m2/g到50m2/g、或26m2/g到50m2/g、或30m2/g到50m2/g、或35m2/g到50m2/g、或40m2/g到50m2/g。在一些实施例中，多西紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。在一些实施例中，多西紫杉醇颗粒的溶出速率为至少20％w/w，其溶于以75rpm操作的uspii桨式设备中的37℃和ph为7的15％甲醇/85％水(v/v)的溶液中的时间为30分钟或更少。ii.局部施用的组合物用于局部施用的组合物是包括抗肿瘤颗粒(包含紫杉烷颗粒)的组合物，如本文和本公开全文所述，并且是适用于各种类型的局部(local)施用(即局部(topical)应用、肺部施用、肿瘤内(it)注射和腹膜内(ip)注射)的组合物。所述组合物可以是悬浮液。例如，组合物可以包括载剂，其中抗肿瘤颗粒分散在载剂中，使得载剂是连续相，抗肿瘤颗粒是分散(悬浮)相。抗肿瘤颗粒可以完全分散，或者部分分散和部分溶解在组合物和/或载剂中，但是抗肿瘤颗粒不能被完全溶解在组合物和/或载剂中。a.局部应用的组合物局部应用的组合物(局部用组合物)包括抗肿瘤颗粒，如紫杉烷颗粒。抗肿瘤颗粒可以分散(悬浮)在局部用组合物中。局部用组合物可以是适于局部递送的任何组合物。局部用组合物可以是疏水性组合物。局部用组合物可以是无水组合物，其可以包含无水亲水组合物或无水疏水性组合物。无水亲水组合物的非限制性实例包含基于多元醇、二醇(例如丙二醇、peg)和/或泊洛沙姆的组合物。局部用组合物可以是非无水的，如水基组合物。局部用组合物可以是无菌的，可以是自保存的，或者可以包含防腐剂。局部用组合物可以被配制成适于局部递送的各种形式。非限制性实例包含半固态组合物、洗剂、液体悬浮液、乳剂、乳膏、凝胶、软膏、糊剂、气雾剂、气雾剂泡沫、非气雾剂喷雾、非气雾剂泡沫、薄膜和薄片。半固态组合物包含软膏、糊剂和乳膏。局部用组合物可以浸渍在纱布、绷带或其它皮肤敷料材料中。在一些实施例中，局部用组合物是半固态组合物。在一些实施例中，局部用组合物是软膏。在其它实施例中，局部用组合物是凝胶。在仍其它实施例中，局部用组合物是液体悬浮液。在一些实施例中，局部用组合物不是喷雾剂，并且不可喷雾。在一些实施例中，局部用组合物不含或不含有聚合物/共聚物或生物相容性聚合物/共聚物。在一些实施例中，所述组合物不含/不包含或不含有蛋白质。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有白蛋白。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸和紫杉烷的缀合物。本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸和紫杉醇的缀合物。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有泊洛沙姆、聚阴离子、聚阳离子、改性聚阴离子、改性聚阳离子、壳聚糖、壳聚糖衍生物、金属离子、纳米载剂、聚γ-谷氨酸(pga)、聚丙烯酸(paa)、藻酸(alg)、维生素e-tpgs、二甲基异山梨醇(dmi)、甲氧基peg350、柠檬酸、抗vegf抗体、乙基纤维素、聚苯乙烯、聚酸酐、聚羟基酸、聚磷腈、聚原酸酯、聚酯、聚酰胺、多糖、多蛋白、苯乙烯-异丁烯-苯乙烯(sibs)、聚酸酐共聚物、聚己内酯、聚乙二醇(peg)、聚(双(对-羧基苯氧基)丙烷-癸二酸、聚(d,l-乳酸)(pla)、聚(d,l-乳酸-乙醇酸共聚物)(plaga)和/或聚(d,l-乳酸-乙醇酸共聚物(plga))。局部用组合物可以包装在任何适合局部用产品的包装结构中。非限制性实例包含瓶子、带泵的瓶子、小瓶子、管子(铝、塑料或层压材料)、罐子、非气溶胶泵喷雾器、气溶胶容器、小袋和小包。包装可以被配置用于单剂量或多剂量施用。国际专利公开wo2017/049083中公开了合适的局部用组合物的非限制性实例，所述专利公开通过引用并入本文。1.疏水性局部用组合物在一些实施例中，局部用组合物是疏水性组合物。出于本公开的目的，疏水性组合物是组合物中疏水性成分的总量大于组合物中非疏水性成分的总量的组合物。在一些实施例中，疏水性组合物是无水的。在一些实施例中，疏水性组合物包括疏水性载剂。疏水性载剂可以包括来自植物、动物、石蜡和/或合成来源的物质。疏水性物质通常被认为是对水缺乏亲和力并且排斥水的物质。疏水性载剂可以是局部用组合物的连续相，抗肿瘤颗粒可以是分散相。在各个实施例中，疏水性载剂是非极性的和/或非挥发性的。疏水性载剂的非限制性实例包括脂肪、黄油、油脂、蜡、溶剂和油；矿物油；植物油；矿脂；不溶水性有机酯和甘油三酯；和氟化化合物。疏水性载剂也可以包括硅树脂材料。硅酮材料被定义为基于聚二烷基硅氧烷的化合物，包含聚合物、弹性体(交联硅酮)和粘合剂(支化硅酮)。硅氧烷材料的非限制性实例包含二甲基硅氧烷(聚二甲基硅氧烷)、二甲基硅氧烷共聚醇、环甲硅油、二甲基硅氧烷、硅氧烷弹性体(st-弹性体10(dowcorning))、硅油、硅氧烷聚合物、挥发性硅氧烷流体和硅氧烷蜡。在一些实施例中，所述疏水性载剂不包括硅酮材料。来源于植物的材料包含但不限于花生(花生仁)油、秘鲁香脂油、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、蓖麻油、氢化蓖麻油、可可脂、椰子油、玉米油、棉籽油、荷荷巴油、澳洲坚果籽油、橄榄油、橙油、橙蜡、棕榈仁油、菜籽油、红花油、芝麻油、乳木果油、大豆油、向日葵籽油、茶树油、植物油和氢化植物油。来源于动物的材料的非限制性实例包含蜂蜡(黄蜡和白蜡)、鱼肝油、鸸鹋油、猪油、貂油、鲨鱼肝油、角鲨烷、角鲨烯和牛油。石蜡材料的非限制性实例包含异链烷烃、微晶蜡、重质矿物油、轻质矿物油、地蜡、矿脂、白矿脂和石蜡。有机酯和甘油三酯的非限制性实例包含c12-15烷基苯甲酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、中链甘油三酯、单甘油酯和二甘油酯、三甘油酯和三羟基硬脂酸甘油酯。氟化化合物的一个非限制性实例是全氟聚醚(pfpe)，如可从苏威特种聚合物公司(solvayspecialtypolymers)商购获得的hc04。疏水性载剂可以包括药用级疏水性物质。在各个实施例中，疏水性载剂包括矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。矿脂是从石油中获得的半固态饱和烃的纯化混合物，颜色从深琥珀色到浅黄色不等。白色矿脂完全或几乎脱色，颜色从奶油色到雪白色不等。矿脂具有不同的熔点、粘度和稠度特性。矿脂也可以含有稳定剂，如抗氧化剂。药用级的矿脂包含矿脂usp和白矿脂usp。矿物油是从石油中获得的液态烃的混合物。矿物油具有各种粘度等级，如轻质矿物油、重质矿物油和超重质矿物油。轻质矿物油在40℃时的运动粘度不超过33.5厘沲。重质矿物油在40℃时的运动粘度不低于34.5厘沲。药用级矿物油包含矿物油usp(其是重质矿物油)和轻质矿物油nf(其是轻质矿物油)。在一些实施例中，所述矿物油是重质矿物油。石蜡是从石油中获得的固体烃的纯化混合物。石蜡也可以通过费-托工艺(fischer-tropschprocess)从催化转化成链烷烃的混合物的一氧化碳和氢气中合成得到。石蜡可能含有抗氧化剂。石蜡的药用等级包含石蜡nf和合成石蜡nf。在一些实施例中，疏水性组合物中疏水性载剂的浓度大于总组合物重量的10％w/w。在其它实施例中，疏水性合物中疏水性载剂的浓度大于总组合物重量的15％，或大于20％，或大于25％，或大于30％，或大于35％，或大于40％，或大于45％，或大于50％，或大于55％，或大于60％，或大于65％，或大于70％，或大于75％，或大于80％，或大于82％，或大于85％，或大于87％，或大于90％w/w。在其它实施例中，疏水性组合物中疏水性载剂的浓度为大于总组合物重量的10％w/w到95％w/w。在其它实施例中，疏水性组合物中疏水性载剂的浓度为总组合物重量的11％w/w到95％w/w，或12％w/w到95％w/w，或13％w/w到95％w/w，或14％w/w到95％w/w，或15％w/w到95％w/w，或16％w/w到95％w/w，或17％w/w到95％w/w，或18％w/w到95％w/w，或19％w/w到95％w/w，或20％w/w到95％w/w。在优选的实施例中，疏水性组合物中的疏水性载剂大于疏水性组合物的50％。疏水性组合物可包括疏水性载剂，并进一步包括一种或多种挥发性硅氧烷流体。挥发性硅氧烷流体(也称为挥发性硅油)是挥发性液体聚硅氧烷(可以是环状的或线性的)。所述液体聚硅氧烷在室温下是液体。挥发性硅油是疏水性材料。线性挥发性硅氧烷流体包含聚二甲基硅氧烷、六甲基二硅氧烷和八甲基三硅氧烷，可分别以商品名dowcorningq7-9180硅氧烷流体0.65cst和dowcorningq7-9180硅氧烷流体1.0cst从道康宁公司(dowcorning)购得。环状挥发性硅氧烷流体通常被称为环甲硅油。环甲硅油是一种完全甲基化的环状硅氧烷，含有下式(iv)的重复单元：(iv)[-(ch3)2sio-]n其中n是3、4、5、6或7；或其混合物。环甲硅油是一种无色透明的挥发性液体硅油。环甲硅油具有润肤性能，通过减少皮肤油腻感，有助于改善油基产品的触感。药用级环甲硅油包含环甲硅油nf。环甲硅油nf由式(iv)表示，其中n是4(环四硅氧烷)、5(环戊硅氧烷)或6(环己硅氧烷)；或其混合物。环戊硅氧烷，也称为十甲基环戊硅氧烷、环甲硅氧烷d5或环甲硅氧烷5，是由式(iv)表示的环甲硅氧烷，其中n是5(五聚体)，但其可以含有少量(通常小于1％)一种或多种其它环链长度的环甲硅氧烷。存在可使用的药用级环戊硅氧烷(环甲硅氧烷nf)。环甲锥可以商品名dowcorningst-环甲锥5-nf、dowcorningst-环甲锥56-nf和xiameterpmx-0245从道康宁购得。它也可以从光谱化学制造公司(spectrumchemicalmfg.corp.)商购获得。环戊硅氧烷在25℃时蒸气压为约20到约27pa。在一个实施例中，环甲硅油在疏水性组合物中的浓度小于25％w/w。在另一个实施例中，环甲硅油在疏水性组合物中的浓度为5到24％w/w。在另一个实施例中，环甲硅油的浓度为5到20％w/w。在另一个实施例中，环甲硅油的浓度为5到18％w/w。在另一个实施例中，环甲硅油的浓度为13％w/w。在各个实施例中，环甲硅油的浓度可以是总组合物重量的5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5或24％w/w或其中可得出的任何百分比。在一些实施例中，挥发性硅氧烷流体是环甲硅油。在一些实施例中，所述环甲硅油是环戊硅氧烷。疏水性组合物可以是抗肿瘤颗粒(如紫杉烷颗粒)在疏水性载剂和挥发性硅氧烷流体的混合物中的悬浮液。抗肿瘤颗粒可以完全分散，或者部分分散和部分溶解在疏水性组合物中，但是抗肿瘤颗粒不能完全溶解在疏水性组合物中。疏水性载剂可以是疏水性组合物的连续相，抗肿瘤颗粒可以是分散相。因此，疏水性组合物可以包含至少两相—连续的疏水性载剂相和分散的(悬浮的)抗肿瘤颗粒相。挥发性硅氧烷流体可以溶解和/或分散在连续相中。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有另外的渗透增强剂。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有月桂氮卓酮。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有二甘醇单乙醚(dgme)。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不含有肉豆蔻酸异丙酯。在其它实施例中，疏水性组合物不含/不包含α生育酚。在其它实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有另外的挥发性溶剂或化合物。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有任何醇或c1-c4脂肪醇。在一些实施例中，疏水性组合物不含/不包含或不含有醇或c1-c5脂肪醇。在其它实施例中，疏水组合物不含/不包含或不含有表面活性剂。在其它实施例中，疏水组合物不含/不包含聚合物/共聚物(或可生物降解的聚合物/共聚物)。在其它实施例中，疏水性组合物不含/不包含泊洛沙姆、苯乙烯-异丁烯-苯乙烯(sibs)、聚酸酐共聚物、聚己内酯、聚乙二醇、聚(双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸和/或聚(d,l乳酸-共-乙醇酸(plga))。在一些实施例中，疏水性组合物是半固态组合物。在一些实施例中，疏水性组合物是软膏。在一些实施例中，所述疏水性组合物是半固态组合物(包含软膏)，并且，如在室温下使用带有sc4-14转子和6r室的小样品适配器在5rpm的转速下以2分钟的平衡时间用brookfieldrv粘度计测量的，其粘度为12,500cps到247,500cps或25,000cps到150,000cps。进行疏水性半固态组合物粘度测量的另一种方法是：在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒。在一些实施例中，所述疏水性组合物是半固态组合物(包含软膏)，并且在室温下在helipath接通的情况下在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计以t-e转子转速10rpm持续45秒测量其粘度为25,000cps到500,000cps、或25,000cps到400,000cps、或25,000cps到350,000cps、或25,000cps到300,000cps、或50,000cps到500,000cps、或50,000cps到400,000cps、或50,000cps到350,000cps、或50,000cps到300,000cps、或75,000cps到500,000cps、或75,000cps到400,000cps、或从75,000cps到350,000cps、或75,000cps到300,000cps、或100,000cps到500,000cps、或100,000cps到400,000cps、或100,000cps到350,000cps，或100,000cps到300,000cps。2.水基局部用组合物局部用水基组合物包括抗肿瘤颗粒(如紫杉烷颗粒)和水性载剂。水性组合物是抗肿瘤颗粒在水性载剂中的分散体(悬浮液)。抗肿瘤颗粒可以完全分散、部分分散和部分溶解，但不能完全溶解在水性载剂中。水基组合物是以水为主要成分(大于50％)的组合物。水性载剂可以包含单相水溶液和多相水基乳液，如水包油乳液和油包水乳液。水性载剂的非限制性实例包含水溶液和缓冲溶液。局部用水基组合物的非限制性实例包括水性载剂(例如水)，所述水性载剂包括泊洛沙姆407、季铵化合物和/或交联丙烯酸聚合物，如国际专利公开wo2017/049083中所公开的。季铵化合物的非限制性实例包含苯扎氯铵和苯扎氯铵。交联丙烯酸聚合物的非限制性实例包含卡波姆(inci名称)、丙烯酸酯共聚物(inci名称)、丙烯酸酯/丙烯酸10-30烷基酯交联聚合物(inci名称)、丙烯酸酯交联聚合物-4(inci名称)和聚丙烯酸酯-1交联聚合物(inci名称)。3.局部用组合物另外的成分和赋形剂局部用组合物可以进一步包括适用于局部用组合物的功能性成分。限制性实例包含吸收剂、酸化剂、抗菌剂、抗氧化剂、粘合剂、杀生物剂、缓冲剂、填充剂、晶体生长抑制剂、螯合剂、着色剂、除臭剂、乳液稳定剂、成膜剂、芳香剂、湿润剂、溶解剂、酶促剂、遮光剂、氧化剂、ph调节剂、增塑剂、防腐剂、还原剂、润肤剂皮肤调理剂、保湿剂皮肤调理剂、增湿剂、表面活性剂、乳化剂、清洁剂、发泡剂、水滑石、溶剂、悬浮剂、粘度控调配物(流变改性剂)、增粘剂(增稠剂)和推进剂。《国际化妆品成分词典和手册(theinternationalcosmeticingredientdictionaryandhandboo)(inci)》(第12版，2008年)中公开了在本文中描述的功能性成分的实例的列表和专论，该文献通过引用并入本文。在一些实施例中，局部用组合物包括渗透增强剂。在其它实施例中，局部用组合物不含/不包含另外的渗透增强剂。术语“渗透增强剂”用于描述促进药物通过皮肤吸收的化合物或材料或物质。这些化合物或材料或物质可以对皮肤的渗透性有直接影响，或者其可以通过增加渗透剂的热力学活性来增加经皮吸收，由此增加扩散物质的有效逃逸趋势和浓度梯度。这些增强剂的主要作用是增加角质层的水合程度或破坏其脂蛋白基质，两种情况下的最终结果都是降低对药物(渗透剂)扩散的抵抗力(remington，《药学科学与实践(thescienceandpracticeofpharmacy)》，第22版)。肤渗透增强剂的非限制性实例包含油醇、肉豆蔻酸异丙酯、二甲基异山梨醇(dmi)(可以商品名arlasolvedmi获得)和二甘醇单乙醚(dgme)(可以商品名transcutolp获得)。皮肤渗透增强剂的其它实例可在“技术文献中引用的皮肤渗透增强剂(skinpenetrationenhancerscitedinthetechnicalliterature)”(osborne、davidw和henke,jillj，《制药技术(pharmaceuticaltechnology)》，1997年11月)中找到，该文献通过引用并入本文。此类实例包含：脂肪醇(如脂肪族醇)、癸醇、月桂醇(十二烷醇)、亚麻烯醇、橙花叔醇、1-壬醇、正辛醇、油醇、脂肪酸酯、乙酸丁酯、鲸蜡基乳酸、n,n-二甲基氨基乙酸癸基酯、n,n-二甲基氨基异丙酸癸基酯、油酸二乙二醇酯、癸二酸二乙酯、琥珀酸二乙酯、癸二酸二异丙酯、n,n-二甲基氨基乙酸十二烷基酯、(n,n-二甲基氨基)-丁酸十二烷基酯、n,n-二甲基氨基异丙酸十二烷基酯、2-(二甲基氨基)丙酸十二烷基酯、eo-5-油酸酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯乙酸乙酯、丙酸乙酯、甘油单醚、甘油单月桂酸酯、甘油单油酸酯、甘油单亚油酸酯、异硬脂酸异丙酯、亚油酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯/脂肪酸单甘油酯组合、肉豆蔻酸异丙酯/肉豆蔻酸异丙酯/乙醇/l-乳酸(87:10:3)组合、棕榈酸异丙酯、乙酸甲酯、癸酸甲酯、月桂酸甲酯、丙酸甲酯、戊酸甲酯、1-单己酰基甘油、单甘酯(中等链长)、烟酸酯(苄基)、乙酸辛酯、n,n-二甲氨基乙酸辛基酯、油酸油酸油酸酯、n-乙酰脯氨酸n-戊基酯、丙二醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇二月桂酸酯、脱水山梨糖醇二油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇三月桂酸酯、脱水山梨糖醇三油酸酯、蔗糖椰子脂肪酯混合物、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖单油酸酯和n,n-二甲基氨基乙酸十四烷基酯；脂肪酸，如链烷酸、癸酸、二酸、乙基十八酸、己酸、乳酸、月桂酸、亚油酸、亚麻酸、新癸酸、油酸、棕榈酸、壬酸、丙酸和癸酸；脂肪醇醚，如α-单乙二醇醚、eo-2-油基醚、eo-5-油基醚、eo-10-油基醚，以及聚甘油和醇的醚衍生物(1-o-十二烷基-3-o-甲基-2-o-(2',3'-二羟基丙基)甘油)；生物制品，如l-α-氨基酸、卵磷脂、磷脂、皂苷/磷脂、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠和牛磺胆酸钠；酶，如酸性磷酸酶、甘氨酶、甘油三酯酶、木瓜蛋白酶、磷脂酶a-2、磷脂酶c和三酰甘油水解酶；胺和酰胺，如乙酰胺衍生物、无环酰胺、正链烷酰胺n-金刚烷基、氯贝特酰胺、乙酰胺n,n-二癸基、二-2-乙基己胺、二乙基甲基苯甲酰胺、n,n-二乙基间甲苯酰胺、n,n-二甲基间甲苯酰胺、乙基胺s12[双(2-羟乙基)油胺]、六亚甲基月桂酰胺、月桂胺(十二烷基胺)、辛基酰胺、油胺、不饱和环状脲和脲；络合剂，如β-和γ-环糊精络合物、羟丙基甲基纤维素、脂质体、萘二酰胺二酰亚胺和萘二酯二酰亚胺；大环化合物，如大环内酯、酮和酸酐(最佳环-16)，以及不饱和环状脲；经典表面活性剂，如brij30、brij35、brij36t、brij52、brij56、brij58、brij72、brij76、brij78、brij92、brij96、brij98、十六烷基三甲基溴化铵、empicolml26/f、hco-60表面活性剂、羟基聚乙氧基十二烷、离子表面活性剂(roona、roso3na、rnh3cl、r＝8-16)、月桂酰基肌氨酸、非离子表面活性剂、壬苯醇醚、辛基酚聚醚、苯磺酸ca、聚醚f68、聚醚f127、聚醚l62、聚油酸酯(非离子表面活性剂)、rewopalhv10、月桂酸钠、月桂基硫酸钠(十二烷基硫酸钠)、油酸钠、山梨糖醇二月桂酸酯、山梨糖醇二油酸酯、山梨糖醇单月桂酸酯、山梨糖醇单油酸酯、山梨糖醇三月桂酸酯、山梨糖醇三油酸酯、司盘20、司盘40、司盘85、泊洛沙姆np、曲通x-100、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80和吐温85；n-甲基吡咯烷酮和相关化合物，如n-环己基-2-吡咯烷酮、1-丁基-3-十二烷基-2-吡咯烷酮、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮、1,5-二甲基-2-吡咯烷酮、4,4-二甲基-2-十一烷基-2-噁唑啉、1-乙基-2-吡咯烷酮、1-己基-4-甲氧基羰基-2-吡咯烷酮、1-己基-2-吡咯烷酮、1-(2-羟乙基)吡咯烷酮、3-羟基-n-甲基-2-吡咯烷酮、1-异丙基-2-十一烷基-2-咪唑啉、1-月桂基-4-甲氧基羰基-2-吡咯烷酮，n-甲基-2-吡咯烷酮、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、焦谷氨酸酯和2-吡咯烷酮(2-吡咯烷酮)；离子化合物，如抗坏血酸、两性阳离子和阴离子、巯基乙酸钙、十六烷基三甲基溴化铵、3,5-二碘水杨酸钠、月桂酰胆碱碘化物、5-甲氧基水杨酸钠、单烷基磷酸酯、2-pam氯化物、4-pam氯化物(n-甲基吡啶鎓氯化物的衍生物)、羧酸钠和透明质酸钠；二甲基亚砜和相关化合物，如环亚砜、癸基甲基亚砜、二甲基亚砜(dmso)和2-羟基癸基甲基亚砜；溶剂和相关化合物，如丙酮、正构烷烃(链长介于7与16之间)、环己基-1,1-二甲基乙醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乙醇、乙醇/d-柠檬烯组合、2-乙基-1,3-己二醇，乙二甘醇(还氧二元醇(transcutol))、甘油、乙二醇、月桂酰氯、柠檬烯、n-甲基甲酰胺、2-苯乙醇、3-苯基-1-丙醇、3-苯基-2-丙-1-醇、聚乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨醇单酯、聚丙二醇、伯醇(十三烷醇)、丙二醇、角鲨烯、三醋精、三氯乙醇、三氟乙醇、三亚甲基二醇和二甲苯；氮杂和相关化合物，如n-酰基-六氢-2-氧代-1h-氮杂环庚烷、n-烷基-二氢-1,4-氧杂氮杂-5,7-二酮、n-烷基吗啉-2,3-二酮、n-烷基吗啉-3,5-二酮、氮杂环烷烃衍生物(-酮、-硫酮)、氮杂环烯酮衍生物、1-[2-(癸硫基)乙基]氮杂环戊烷-2-酮(hpe-101)、n-(2,2-二羟乙基)十二烷基胺、1-十二烷基六氢-1-h-氮杂环庚烷、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮((氮酮)azone或月桂capram)、n-十二烷基二乙醇胺、n-十二烷基-六氢-2-硫基-1h-氮杂、n-十二烷基-n-(2-甲氧基乙基)乙酰胺、n-十二烷基-n-(2-甲氧基乙基)异丁酰胺、n-十二烷基-哌啶-2-硫酮、n-十二烷基-2-哌啶酮、n-十二烷基吡咯烷-3,5-二酮、n-十二烷基吡咯烷-2-硫酮、n-十二烷基-2-吡咯烷酮、1-法美拉唑环庚烷-2-酮、1-法美拉唑环戊烷-2-酮、1-天竺葵环庚烷-2-酮、1-天竺葵环戊烷-2-酮、六氢-2-氧代-氮杂氮杂-1-乙酸酯、n-(2-羟乙基)-2-吡咯烷酮、1-月桂氮杂环庚烷、2-(1-壬基)-1,3-二氧戊环、1-n-辛基吡咯烷-2-酮、n-(1-氧十二烷基)-六氢-1h-氮杂、n-(1-氧十二烷基)-吗啉、1-氧烃基取代的氮杂环己烷、n-(1-氧代贸易基)-六氢-2-氧代-1h-氮杂环庚三烯和n-(1-噻吩基)-吗啉；其它化合物，如脂肪族硫醇、烷基n,n-二烷基取代的氨基乙酸乙酸酯、茴香油、抗胆碱剂预处理剂、驱蛔萜、双相基团衍生物、比沙泊洛尔、豆蔻精油、1-香芹酮、藜(70％驱蛔萜)、土荆芥油、1,8苯二酚(桉树油)、鱼肝油(脂肪酸提取物)、4-癸基噁唑烷丁-2-酮、二环己基甲基胺氧化物、十六烷基膦酸二乙酯、十六烷基氨基磷酸二乙酯、n,n-二甲基十二烷基胺-n-氧化物、4,4-二甲基-2-十一烷基-2-噁唑啉、n-十二烷酰基-l-氨基酸甲酯、1,3-二氧杂环烷烃(sepa)、二硫苏糖醇、桉树油(桉树脑)、桉树油、丁子香酚、草药提取物、内酰胺n-乙酸酯、n-羟基乙醛酰胺、n-羟基乙基乙酰胺、2-羟基-3-油酰氧基-1-焦戊二酰氧基丙烷、薄荷醇、薄荷酮、吗啉衍生物、n-氧化物、神经甾醇、辛基-β-d-(硫代)吡喃葡萄糖苷、噁唑烷酮、哌嗪衍生物、极性脂质、聚二甲基硅氧烷、聚[丙烯酸2-(甲基亚磺酰基)乙酯]、聚轮烷、聚乙烯基苄基二甲基烷基氯化铵、聚(n-乙烯基-n-甲基乙酰胺)、焦谷氨酸钠、萜烯和氮杂环化合物、维生素e(α-生育酚)、维生素etpgs和依兰油。以上未列出的渗透增强剂的另外的实例可在第五版“药用赋形剂手册(handbookofpharmaceuticalexcipients)”中找到，包含甘油、羊毛脂、轻质矿物油、肉豆蔻酸、聚氧乙烯醇醚和麝香草酚。渗透增强剂的其它实例包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甘醇、单乙醚、柠檬酸、琥珀酸、琉璃苣油、四氢胡椒碱(thp)、甲醇、乙醇、丙醇、辛醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇和聚乙二醇单月桂酸酯。在一些实施例中，局部用组合物包括醇、c1-c4脂肪醇和/或c1-c5脂肪醇。在其它实施例中，局部用组合物不含/不包含或不含有c1-c4脂肪醇和/或c1-c5脂肪醇。在一些实施例中，局部用组合物包括挥发性溶剂。在其它实施例中，局部用组合物不含/不包含挥发性溶剂。挥发性溶剂也称为“易变性”溶剂。挥发性溶剂的非限制性实例包含挥发性醇，如c1到c4脂肪醇；c1到c5醇；和挥发性c1到c4脂族酮，如丙酮。在一些实施例中，局部用组合物包括表面活性剂。在其它实施例中，局部用组合物不含/不包含表面活性剂。术语“表面活性剂”或“表面活性剂”是指表现出降低水的表面张力或降低两种不混溶物质之间的界面张力的能力的化合物或材料或物质，包含阴离子、阳离子、非离子、两性和/或磷脂表面活性剂。表面活性剂的非限制性实例可以在《乳化剂和洗涤剂(emulsifiers&detergents)》(mccutcheon著，2001北美版)中找到，该文献通过引用并入本文，也可以在《国际化妆品成分词典和手册(inci)》(第12版,2008)中找到，该文献通过引用并入本文。此类实例包含但不限于以下：嵌段聚合物，例如泊洛沙姆124；乙氧基化醇，例如鲸蜡醇聚醚-2、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、月桂醇聚醚-3；乙氧基化脂肪酯和油，例如peg-40氢化蓖麻油、peg-36蓖麻油、peg-150二硬脂酸酯；甘油酯，例如聚甘油基-3二异硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯；乙二醇酯，peg-12二油酸酯，lexemulp；磷酸酯，例如十六烷基磷酸酯；聚合表面活性剂，例如pvm/ma共聚物、丙烯酸酯/丙烯酸c10-30烷基酯交联聚合物；四元表面活性剂，例如氯化西曲铵；硅酮基表面活性剂，例如peg/ppg-20/6二甲基硅油；脱水山梨醇衍生物，例如脱水山梨醇硬脂酸酯、聚山梨醇酯80；蔗糖和葡萄糖酯及其衍生物，例如peg-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯；和醇的硫酸盐，例如十二烷基硫酸钠。更通常地，表面活性剂可按其离子类型分类，如阴离子型、阳离子型、非离子型或两性型。表面活性剂也可以按化学结构分类，例如嵌段聚合物、乙氧基化醇、乙氧基化脂肪酯和油、甘油酯、乙二醇酯、磷酸酯、聚合表面活性剂、季表面活性剂、硅氧烷基表面活性剂、脱水山梨醇衍生物、蔗糖和葡萄糖酯及其衍生物以及醇的硫酸盐。在一些实施例中，局部用组合物包括蛋白质，如白蛋白。在其它实施例中，局部用组合物不含/不包含蛋白质，如白蛋白。在一个优选的实施例中，局部用组合物是包括疏水性载剂、一种或多种挥发性硅氧烷流体和紫杉烷颗粒的疏水组合物，其中紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米至1.5微米。在进一步优选的实施例中，疏水性载剂包括矿脂、矿物油或石蜡或其混合物。在进一步优选的实施例中，一种或多种挥发性硅氧烷流体是浓度为组合物的5到25％w/w的环甲硅油。在进一步优选的实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。4.局部用组合物中抗肿瘤颗粒的浓度局部用组合物中抗肿瘤颗粒的浓度或量为(1)刺激受试者对免疫治疗剂的免疫应答和(2)治疗受试者的一个或多个肿瘤(即通过完成以下一项或多项来对肿瘤提供治疗效果：(a)减小肿瘤大小；(b)降低肿瘤生长率；(c)消除肿瘤)的“有效量”。抗肿瘤颗粒(可以是紫杉烷颗粒)的浓度可以为0.05到10％w/w，或者抗肿瘤颗粒的浓度可以为0.05到5％w/w，或者抗肿瘤颗粒的浓度可以为0.1到5％w/w，或者抗肿瘤颗粒的浓度可以为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.75、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.25、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.75、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.25、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.75、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.25，3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.75、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.25、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.75、4.8、4.9、5、6、7、8、9或10％w/w或其中可导出的总组合物重量的任何百分比。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒，如紫杉醇纳米颗粒、多西紫杉醇纳米颗粒或卡巴他塞纳米颗粒。在一些实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。在一些实施例中，组合物中紫杉烷颗粒的浓度为约0.05到小于3％w/w、或约0.05到约2％w/w、或约0.05到约1％w/w、或约0.05到约0.3％w/w、或约0.05到约0.2％w/w、或约0.05到约0.15％w/w、或约0.1到约2％w/w、或约0.1到约1％w/w、或约0.1到约0.3％w/w、或约0.1到约0.2％w/w、或约0.15到约2％w/w、或约0.15到约1％w/w、或约0.15到约0.3％w/w、或约0.3到约2％w/w、或约0.3到约1％w/w、或约1到约2％w/w、或约0.2到约0.4％w/w、或约0.5到约1.5％w/w或约1.5到约2.5％w/w。在其它实施例中，紫杉烷颗粒的浓度为1％w/w的80到120％(即0.8到1.2％w/w)、或0.05％w/w的80到120％、或0.1％w/w的80到120％、或0.15％w/w的80％到120％、或0.2％w/w的80％到120％、或0.25％w/w的80％到120％、或0.3％w/w的80％到120％、或0.35％w/w的80到120％、或0.4％w/w的80到120％、或0.45％w/w的80到120％、或0.5％w/w的80到120％、或0.55％w/w的80％到120％、或0.6％w/w的80％到120％、或0.65％w/w的80％到120％、或0.7％w/w的80％到120％、或0.75％w/w的80到120％、或0.8％w/w的80到120％、或0.85％w/w的80到120％、或0.9％w/w的80到120％、或0.95％w/w的80％到120％、或1.5％w/w的80％到120％、或2％w/w的80％到120％或2.5％w/w的80％到120％。b.用于肺部施用、瘤内(it)注射和/或腹膜内(ip)注射的组合物适用于肺部施用、瘤内(it)注射和/或腹膜内(ip)注射的组合物包括抗肿瘤颗粒，如紫杉烷颗粒，并描述如下。组合物可以进一步包括载剂。所述组合物可以是无水的，并且包含无水载剂。载剂可以是液体(流体)载剂，如水性载剂。合适的水性载剂的非限制性实例包含水，例如注射用无菌水(usp)；0.9％盐水溶液(生理盐水)，如0.9％注射用氯化钠注射液(usp)；葡萄糖溶液，如5％注射用葡萄糖(usp)；和注射用乳酸林格氏溶液(usp)。可以使用非水基液体载剂和其它水基液体载剂。所述载剂可以是药学上可接受的载剂，即，适于通过注射、肺部途径或其它给药途径施用于受试者。载剂可以是任何其它类型的液体，如乳液或可流动半固体。可流动半固体的非限制性实例包含凝胶和热固性凝胶。所述组合物可以是悬浮液，即抗肿瘤颗粒(如紫杉烷颗粒)分散(悬浮)在连续载剂和/或稀释剂中的悬浮液剂型组合物。抗肿瘤颗粒可以完全分散、部分分散和部分溶解，但不能完全溶解在载剂中。在一些实施例中，组合物是分散在连续载剂中的紫杉烷颗粒的悬浮液。在优选的实施例中，载剂是药学上可接受的载剂。在优选的实施例中，组合物是无菌的。在各个实施例中，所述组合物包含、基本上由或由抗肿瘤颗粒和液体载剂组成，其中所述组合物是分散在液体载剂中的抗肿瘤颗粒的悬浮液。在一些实施例中，组合物基本上由或由抗肿瘤颗粒和载剂组成，其中所述载剂是水性载剂，并且其中所述组合物是悬浮液。抗肿瘤颗粒和载剂的组合物可以原样施用。任选地，抗肿瘤颗粒和载剂的组合物可以进一步包括合适的用于稀释组合物的稀释剂，以便获得抗肿瘤颗粒的期望浓度(剂量)。在一些实施例中，载剂可以用作稀释剂；换句话说，组合物中载剂的量提供了组合物中抗肿瘤颗粒的所需浓度，并且不需要进一步稀释。合适的稀释剂可以是流体，如水性流体。合适的水性稀释剂的非限制性实例包含水，如注射用无菌水(usp)；0.9％盐水溶液(生理盐水)，如0.9％注射用氯化钠注射液(usp)；葡萄糖溶液，如5％注射用葡萄糖(usp)；和注射用乳酸林格氏溶液(usp)。可以使用适于注射施用的其它液体和水基稀释剂，并且所述液体和水基稀释剂可以任选地包含盐、缓冲剂和/或其它赋形剂。在优选实施例中，稀释剂是无菌的。所述组合物可以用稀释剂以一定比例稀释，以提供抗肿瘤颗粒的所需浓度剂量。例如，组合物与稀释剂的体积比可以在1:1-1:100v/v的范围内或可以为其它合适的比率。在一些实施例中，组合物包括抗肿瘤颗粒、载剂和稀释剂，其中所述载剂和稀释剂形成混合物，并且其中所述组合物是分散在载剂/稀释剂混合物中的抗肿瘤颗粒的悬浮液。在一些实施例中，载剂/稀释剂混合物是连续相，抗肿瘤颗粒是分散相。组合物、载剂和/或稀释剂可进一步包括功能性成分，如缓冲剂、盐、渗透剂、表面活性剂、粘度调节剂、流变调节剂、悬浮剂、ph调节剂(如碱化剂或酸化剂)、张力调节剂、防腐剂、抗微生物剂(包含季铵化合物(如苯扎氯铵和氯化苄乙铵))、破乳剂、抗氧化剂、消泡剂、螯合剂和/或着色剂。例如，所述组合物可以包括紫杉烷颗粒和载剂，所述载剂包括水、盐、表面活性剂和任选的缓冲剂。在一个实施例中，载剂是水性载剂并包括表面活性剂，其中所述表面活性剂的浓度基于w/w或w/v为1％或更低；在其它实施例中，表面活性剂小于0.5％，小于0.25％，小于0.1％，或为约0.1％。在其它实施例中，水性载剂不包含表面活性剂(由甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯以及聚乙二醇的单酯和二酯构成的聚乙二醇甘油酯)和/或(聚乙氧基化蓖麻油)。在一些实施例中，组合物或载剂不包含聚合物、蛋白质(如白蛋白)、聚乙氧基化蓖麻油和/或由聚乙二醇的单酯、二酯和三酯以及单酯和二酯构成的聚乙二醇甘油酯。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种表面活性剂。合适的表面活性剂包含例如但不限于聚山梨醇酯、十二烷基硫酸盐、乙酰化单酸甘油酯、二乙酰化单酸甘油酯和泊洛沙姆(如泊洛沙姆407)。聚山梨醇酯是聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，其是山梨醇及其酸酐与每摩尔山梨醇及其酸酐约20、5或4摩尔环氧乙烷共聚的一系列偏脂肪酸酯。聚山梨醇酯的非限制性实例是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85和聚山梨醇酯120。含有大约20摩尔环氧乙烷的聚山梨醇酯是亲水性非离子表面活性剂。含有大约20摩尔环氧乙烷的聚山梨醇酯的实例包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85和聚山梨醇酯120。聚山梨醇酯可以商品名tweentm从禾大公司(croda)购得。山梨醇酯的编号对应于tween的编号，例如，聚山梨醇酯20是tween20，聚山梨醇酯40是tween40，聚山梨醇酯60是tween60，聚山梨醇酯80是tween80，等等。usp/nf级聚山梨醇酯包含聚山梨醇酯20nf、聚山梨醇酯40nf、聚山梨醇酯60nf和聚山梨醇酯80nf。聚山梨醇酯也有pheur级(欧洲药典)、bp级和jp级。术语“聚山梨醇酯”是非专有名称。聚山梨醇酯20的化学名称是聚氧乙烯20脱水山梨醇单月桂酸酯。聚山梨醇酯40的化学名称是聚氧乙烯20脱水山梨醇单棕榈酸酯。聚山梨醇酯60的化学名称是聚氧乙烯20脱水山梨醇单硬脂酸酯。聚山梨醇酯80的化学名称是聚氧乙烯20脱水山梨醇单油酸酯。在一些实施例中，组合物、载剂和/或稀释剂可以包括聚山梨醇酯的混合物。在一些实施例中，组合物、载剂和/或稀释剂包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85和/或聚山梨醇酯120。在一些实施例中，组合物、载剂和/或稀释剂包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和/或聚山梨醇酯80。在一个实施例中，组合物、载剂和/或稀释剂包括聚山梨醇酯80。在一些实施例中，组合物包括抗肿瘤颗粒、载剂和任选的稀释剂，其中所述载剂和/或稀释剂包括水和聚山梨醇酯。在一个实施例中，组合物是悬浮液，抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒，聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。在其它实施例中，聚山梨醇酯或聚山梨醇酯80以介于约0.01％v/v与约1.5％v/v之间的浓度存在于组合物、载剂和/或稀释剂中。诸位发明人惊奇地发现，所述非常少量的聚山梨醇酯80降低抗肿瘤颗粒和水性载剂(如盐溶液)的界面处的表面张力。这些实施例通常在临近组合物使用时配制。在一些实施例中，颗粒可以使用聚山梨醇酯或聚山梨醇酯80涂覆。在其它实施例中，颗粒不使用聚山梨醇酯或聚山梨醇酯80涂覆。在各个其它实施例中，聚山梨酯或聚山梨酯80以以下浓度存在于组合物、载剂和/或稀释剂中：介于约0.01％v/v与约1％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.5％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.4％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.35％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.3％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.25％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.2％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.15％v/v之间、介于约0.01％v/v与约0.1％v/v之间、介于约0.05％v/v与约1％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.5％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.4％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.35％v/v之间、介于约0.05％v/v约0.3％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.25％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.2％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.15％v/v之间、介于约0.05％v/v与约0.1％v/v之间、介于约0.1％v/v与约1％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.5％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.4％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.35％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.3％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.25％v/v之间、介于约0.1v/v与约0.2％v/v之间、介于约0.1％v/v与约0.15％v/v之间、介于约0.2％v/v与约1％v/v之间、介于约0.2％v/v与0.5％v/v之间、介于约0.2％v/v与约0.4％v/v之间、介于约0.2％v/v与约0.35％v/v之间、介于约0.2％v/v与约0.3％v/v之间、介于0.2％v/v与大约0.25％v/v之间、介于约0.3％v/v与大约1％v/v之间、介于约0.3％v/v与约0.5％v/v之间、介于约0.3％v/v约0.4％v/v之间、或介于约0.3％v/v与约0.35％v/v之间；或约0.01％、约0.05％、约0.1％v/v、约0.15％v/v、约0.16％v/v、约0.2％v/v、约0.25％v/v、约0.3％v/v、约0.35％v/v、约0.4％v/v、约0.45％v/v、约0.5％v/v或约1％v/v。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种张力调节剂。合适的张力调节剂包含例如但不限于一种或多种无机盐、电解质、氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、钠、硫酸钾、碳酸氢钠和钾以及碱土金属盐(如碱土金属无机盐(例如钙盐和镁盐))、甘露醇、葡萄糖、甘油、丙二醇及其混合物。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如但不限于磷酸氢二钠、磷酸一钠、柠檬酸、柠檬酸钠、三(羟甲基)氨基甲烷、双(2-羟乙基)亚氨基三-(羟甲基)甲烷和碳酸氢钠以及本领域普通技术人员已知的其它缓冲剂。通常使用缓冲剂将ph调节到用于腹膜内使用的理想范围。通常需要ph为约5到9、5到8、6到7.4、6.5到7.5或6.9到7.4。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种破乳剂。缓和剂是一种在粘膜(如衬套腹膜和其中的器官的膜)上形成舒缓膜的物质。镇痛剂可以减轻轻微的疼痛和炎症，有时被称为粘膜保护剂。合适的破乳剂包含约0.2％到约2.5％的纤维素衍生物，如羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素；约0.01％的明胶；约0.05到约1％的多元醇，还包含约0.05到约1％的如甘油、聚乙二醇300、聚乙二醇400和丙二醇；约0.1到约4％的聚乙烯醇；约0.1到约2％的聚维酮；和至少约0.1％的葡聚糖70(当与本文所述的另一种聚合物破乳剂一起使用时)。组合物、载剂和/或稀释剂可包括一种或多种用于调节ph的碱化剂。如本文所用，术语“碱化剂”是指用于提供碱性介质的化合物。这些化合物包含但不限于氨溶液、碳酸铵、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠以及本领域普通技术人员已知的其它化合物。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种用于调节ph的酸化剂。如本文所用，术语“酸化剂”是指用于提供酸性介质的化合物。此类化合物包含例如但不限于乙酸、氨基酸、柠檬酸、硝酸、富马酸和其它α-羟基酸、盐酸、抗坏血酸和硝酸以及本领域普通技术人员已知的其它物质。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种消泡剂。如本文所用的，术语“消泡剂”是指一种或多种防止或减少在填料组合物表面形成的泡沫量的化合物。合适的消泡剂包含例如但不限于二甲基硅氧烷、二甲基硅氧烷(simethicone)、辛氧醇和本领域普通技术人员已知的其它消泡剂。组合物、载剂和/或稀释剂可以包括一种或多种增加或降低悬浮液粘度的粘度调节剂。合适的粘度调节剂包含甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮、交联丙烯酸聚合物(如卡波姆(carbomer))和本领域普通技术人员已知的其它物质。组合物、载剂和/或稀释剂可以进一步包括用于改变组合物的流动特性以使其充分流过装置如注射针或管的流变调节剂。粘度和流变改性剂的非限制性实例可以在“流变改性剂手册-实际使用和应用(rheologymodifiershandbook-practicaluseandapplication)”(braun,威廉·安德鲁出版社(williamandrewpublishing),2000年)中找到。用于肺部使用、瘤内注射或腹膜内注射组合物中抗肿瘤颗粒的浓度或量处于“有效量”用于(1)刺激受试者对免疫治疗剂的免疫应答和(2)治疗受试者的一种或多种肿瘤(即通过完成以下一项或多项来提供对肿瘤的治疗效果：(a)减小肿瘤大小；(b)降低肿瘤生长率；(c)消除肿瘤)的“有效量”。在一个实施例中，组合物中抗肿瘤颗粒(可以是紫杉烷颗粒)的浓度介于约0.1mg/ml与约100mg/ml之间。在各个进一步的实施例中，组合物中抗肿瘤颗粒(可以是紫杉烷颗粒)的浓度介于：约0.5mg/ml与约100mg/ml之间、约1mg/ml与约100mg/ml之间、约2mg/ml与约100mg/ml之间、约5mg/ml与约100mg/ml之间、约10mg/ml与约100mg/ml之间、约25mg/ml与约100mg/ml之间、约30mg/ml与约100mg/ml之间、约0.1mg/ml与约75mg/ml之间、约0.5mg/ml与约75mg/ml之间、约1mg/ml与约75mg/ml之间、约2mg/ml与约75mg/ml之间、约5mg/ml与约75mg/ml之间、约10mg/ml与约75mg/ml之间、约25mg/ml与约75mg/ml之间、约30mg/ml与约75mg/ml之间、约0.1mg/ml与约50mg/ml之间、约0.5mg/ml与约50mg/ml之间、约1mg/ml与约50mg/ml之间、约2mg/ml与约50mg/ml之间、约5mg/ml与约50mg/ml之间、约10mg/ml与约50mg/ml之间、约25mg/ml与约50mg/ml之间、约30mg/ml与约50mg/ml之间、约0.1mg/ml与约40mg/ml之间、约0.5mg/ml与约40mg/ml之间、约1mg/ml与约40mg/ml之间、约2mg/ml与约40mg/ml之间、约5mg/ml与约40mg/ml之间、约10mg/ml与约40mg/ml之间、约25mg/ml与约40mg/ml之间、约30mg/ml与约40mg/ml之间、约0.1mg/ml与约30mg/ml之间、约0.5mg/ml与约30mg/ml之间、约1mg/ml与约30mg/ml之间、约2mg/ml与约30mg/ml之间、约5mg/ml与约30mg/ml之间、约10mg/ml与约30mg/ml之间、约25mg/ml与约30mg/ml之间、约0.1mg/ml与约25mg/ml之间、约0.5mg/ml与约25mg/ml之间、约1mg/ml与约25mg/ml之间、约2mg/ml与约25mg/ml之间、约5mg/ml与约25mg/ml之间、约10mg/ml与约25mg/ml之间、约0.1mg/ml与约20mg/ml之间、约0.5mg/ml与约20mg/ml之间、约1mg/ml与约20mg/ml之间、约2mg/ml与约20mg/ml之间、约5mg/ml与约20mg/ml之间、约10mg/ml与约20mg/ml之间、约0.1mg/ml与约15mg/ml之间、约0.5mg/ml与约15mg/ml之间、约1mg/ml与约15mg/ml之间、约2mg/ml与约15mg/ml之间、约5mg/ml与约15mg/ml之间、约10mg/ml与约15mg/ml之间、约0.1mg/ml与约10mg/ml之间、约0.5mg/ml与约10mg/ml之间、约1mg/ml与约10mg/ml之间、约2mg/ml与约10mg/ml之间、约5mg/ml与约10mg/ml之间、约0.1mg/ml与约5mg/ml之间、约0.5mg/ml与约5mg/ml之间、约1mg/ml与约5mg/ml之间、约2mg/ml与约5mg/ml之间、约0.1mg/ml与约2mg/ml之间、约0.5mg/ml与约2mg/ml之间、约1mg/ml与约2mg/ml之间、约0.1mg/ml与约1mg/ml之间、约0.5mg/ml与约1mg/ml之间、约0.1mg/ml与约0.5mg/ml之间、约3mg/ml与约8mg/ml之间、或约4mg/ml与约6mg/ml之间；或为至少约0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、61、65、70、75或100mg/ml；或为约0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、61、65、70、75或100mg/ml。抗肿瘤颗粒可以是唯一施用的治疗剂，或者可以与其它治疗剂一起施用。在各个实施例中，所述组合物包括紫杉烷颗粒(紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒)、载剂和稀释剂，其中所述紫杉烷颗粒在所述组合物中(包含所述载剂和稀释剂)的浓度介于：约1mg/ml与约40mg/ml之间、约5mg/ml与约20mg/ml之间、约5mg/ml与约15mg/ml之间、约5mg/ml与约10mg/ml之间、约6mg/ml与约20mg/ml之间、约6mg/ml与约15mg/ml之间、约6mg/ml与约10mg/ml之间、约10mg/ml与约20mg/ml之间或约10mg/ml与约15mg/ml之间；或为约6mg/ml、约10mg/ml或约15mg/ml。在进一步的实施例中，载剂是水性载剂，所述水性载剂可以是盐溶液(如约0.9％氯化钠溶液)，稀释剂是水性稀释剂，所述水性稀释剂可以是盐溶液(如约0.9％氯化钠溶液)。在进一步的实施例中，水性载剂包括聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯80。在一些实施例中，组合物不含/不包含或不含有聚合物/共聚物或生物相容性聚合物/共聚物。在一些实施例中，所述组合物不含/不包含或不含有蛋白质。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有白蛋白。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸和紫杉烷的缀合物。本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有透明质酸和紫杉醇的缀合物。在本发明的一些方面，所述组合物不含/不包含或不含有泊洛沙姆、聚阴离子、聚阳离子、改性聚阴离子、改性聚阳离子、壳聚糖、壳聚糖衍生物、金属离子、纳米载剂、聚γ-谷氨酸(pga)、聚丙烯酸(paa)、藻酸(alg)、维生素e-tpgs、二甲基异山梨醇(dmi)、甲氧基peg350、柠檬酸、抗vegf抗体、乙基纤维素、聚苯乙烯、聚酸酐、聚羟基酸、聚磷腈、聚原酸酯、聚酯、聚酰胺、多糖、多蛋白、苯乙烯-异丁烯-苯乙烯(sibs)、聚酸酐共聚物、聚己内酯、聚乙二醇(peg)、聚(双(对-羧基苯氧基)丙烷-癸二酸、聚(d,l-乳酸)(pla)、聚(d,l-乳酸-乙醇酸共聚物)(plaga)和/或聚(d,l-乳酸-乙醇酸共聚物(plga))。在一个优选的实施例中，适用于肺部给药、肿瘤内注射和/或腹膜内注射的组合物包括紫杉烷颗粒和液体载剂，其中所述紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在进一步优选的实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。在进一步优选的实施例中，所述液体载剂是水性载剂。iii.用于全身递送免疫治疗剂的免疫治疗剂和组合物用于治疗癌症的免疫治疗剂有几类，包含但不限于以下类别：单克隆抗体：设计用来结合体内特定目标的药物。单克隆抗体的非限制性实例包含帕妥珠单抗(pertuzumab)、曲妥单抗(trastuzumab)、阿多-他曲妥珠单抗丹坦(ado-tastruzumabemtansine)、贝伐单抗(bevacizumab)、拉莫西单抗(ramucirumab)、马格妥昔单抗(margetuximab)、凡迪单抗(vantictumab)、格利贝瑞他汀(glembatumumabvedotin)、西妥昔单抗(cetuximab)、巴维妥单抗(bavituximab)、利妥木单抗(rilotumumab)、尼古鲁单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)和阿特朱单抗(atezolizumab)。癌症疫苗：这些药物通过增强免疫系统对癌细胞的反应来对抗癌症。癌症疫苗的非限制性实例包含奈哌米丁-s、特根普玛特-l和拉考通单抗。非特异性免疫疗法/细胞因子：由身体细胞产生的蛋白质；在身体的正常免疫应答以及免疫系统对癌症的应答能力中发挥重要作用。非限制性实例包含集落刺激因子、干扰素和白细胞介素，如白细胞介素-2和白细胞介素-7。免疫检查点抑制剂/免疫调节剂：解除免疫系统的“制动”，帮助免疫系统识别和攻击癌细胞。非限制性实例包含易普利姆单抗(ipilimumab)、派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)。过继细胞转移/t细胞疗法/细胞疗法：试图增强t细胞对抗癌症的自然能力。非限制性实例包含肿瘤浸润性淋巴细胞、靶向her2的t细胞、cmet蛋白、cea、vegfr-2、mage-a3和表达ny-eso-1癌抗原的肺癌。溶瘤病毒疗法：使用转基因病毒杀死癌细胞。非限制性实例包含呼肠孤病毒。bcg(卡介苗)：引起肺结核的细菌的弱化形式；引起对癌细胞的免疫应答。在一些实施例中，所述免疫治疗剂是单克隆抗体、癌症疫苗、非特异性免疫治疗剂、细胞因子、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、检查点抑制剂、免疫调节剂、过继性细胞转移剂、t细胞治疗剂、细胞治疗剂、溶瘤病毒治疗剂、bcg和/或辅助免疫治疗剂。在一些实施例中，免疫治疗剂是派姆单抗。可用于全身施用的组合物(即本发明的第二种组合物)是包括本文和本公开全文中描述的免疫治疗剂的组合物，并且适用于全身施用，如肠内施用或胃肠外施用。全身施用途径的非限制性实例包含静脉内(iv)、肌肉内、关节内、输注、口服、直肠、口腔和舌下施用。所述组合物可以包括合适的载剂，如药物载剂。在优选的实施例中，组合物是无菌的。iv.施用和治疗方法在本发明的一个方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)向受试者的恶性肿瘤局部施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米。a.局部施用方法将包括抗肿瘤剂颗粒的组合物直接局部(local)施用于肿瘤包含局部(topical)应用、肺部施用、瘤内注射和腹膜内注射。本文和本公开全文中所述的用于局部施用的组合物是适用于各种类型的局部(local)施用(即局部(topical)应用、肺部施用、瘤内注射和腹膜内注射)的组合物。1.局部应用方法在本发明的一个方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者的皮肤肿瘤的受影响区域局部施用包块抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。皮肤肿瘤可以是良性的，例如光化性角化病；或恶性的(皮肤恶性肿瘤)，例如皮肤癌或皮肤转移瘤。在一些实施例中，步骤(a)中的肿瘤是良性肿瘤，并且受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，步骤(a)中的肿瘤是恶性肿瘤，并且是受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，步骤(a)中的肿瘤是恶性肿瘤，并且受试者在身体的其它部位也患有癌症。良性皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤的“受影响区域”可以包含皮肤的至少一部分，其中良性皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤明显存在于皮肤的最外表面上或直接在皮肤表面之下(上皮/皮肤覆盖物)，并且可以包含良性皮肤肿瘤或皮肤恶性肿瘤附近的可能含有明显不可检测的临床前损伤的皮肤区域。皮肤恶性肿瘤可以是皮肤癌或皮肤转移瘤。在一些实施例中，皮肤恶性肿瘤是皮肤转移瘤。在其它实施例中，所述皮肤恶性肿瘤是皮肤癌。皮肤转移瘤可以来自多种原发癌，例如以下非限制性的原发癌实例：乳腺癌、肺癌、鼻癌、鼻窦癌、喉癌、口腔癌、结肠癌(大肠)、直肠癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、阴道癌、甲状腺癌、子宫内膜癌、肾癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤和卡波西肉瘤(包含与aids相关的卡波西肉瘤)。在一些实施例中，皮肤转移瘤来自肺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、卵巢癌、肾癌、食道癌、胃癌或肝癌。在一些实施例中，皮肤转移来自乳腺癌。皮肤癌的非限制性实例包含黑色素瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌。在一些实施例中，所述方法不包含另外的皮肤导向疗法，如电化学疗法(ect)、光动力疗法(pdt)、放射疗法(rt)或病灶内疗法(ilt)。局部应用于皮肤恶性肿瘤受影响区域的组合物的量可以根据受影响区域的大小和组合物中抗肿瘤颗粒的浓度而变化，但是通常可以以大约一角硬币的厚度应用以完全覆盖受影响区域。另一种确定组合物要应用用量的合适方法是“指尖单位”(ftu)法。一ftu是沿着成人指尖从标准管中挤出的局部用组合物的量(这假设管具有标准的5mm喷嘴)。指尖从手指的最末端到手指的第一个折痕。所述组合物可以用手带手套或抹刀或其它局部施用方式施用。在一些实施例中，所述组合物用于具有完整皮肤覆盖物(上皮/真皮覆盖物)的皮肤恶性肿瘤。在一些实施例中，组合物被施用于皮肤恶性病变处于皮肤表面上或者皮肤覆盖物降解并且皮肤恶性病变暴露的溃疡区域。受影响的区域可以用水(如果需要，也可以用温和的肥皂)轻轻清洗，并在应用前干燥。一旦应用了组合物，应用部位可以用封闭敷料(如或)覆盖。组合物的剂量可以变化，但通常可以包含每天应用一次、两次或三次，每天大约在相同的时间应用，直到症状改善或消除。2.肺部施用方法本文公开了一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括：(a)通过肺部施用向所述受试者施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，其中所述受试者患有肺病，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。肺病可以是非癌性的，也可以是癌性的。在一些实施例中，所述肺病是非癌性的，并且所述受试者在身体的除肺部之外的区域中患有癌症。非癌性肺病可以是限制性肺病，如肺纤维化或阻塞性肺病(如慢性阻塞性肺病(copd))。在其它实施例中，所述肺病是癌性的。在一些实施例中，所速癌性肺病是恶性肿瘤或间皮瘤。恶性肺部肿瘤是存在于肺部内的任何肿瘤，可以是原发性或转移性肺部肿瘤。恶性肺肿瘤的非限制性实例包含小细胞肺癌(sclc)和非小细胞肺癌(nsclc)。在一个实施例中，恶性肺部肿瘤是sclc。在另一个实施例中，恶性肺部肿瘤是nsclc。已经表明，根据本发明的方法，紫杉烷颗粒的肺部施用使得紫杉烷在肺部的停留时间比以前使用任何其它紫杉烷调配物可能的时间长得多。如以下实施例所示，紫杉烷在施用后至少96小时(4天)或至少336小时(14天)内在受试者的肺组织中仍可检测到。在各个进一步的实施例中，紫杉烷在施用后至少108、120、132、144、156、168、180、192、204、216、228、240、252、264、276、288、300、312、324或336小时内在受试者的肺组织中仍可检测到。在一些实施例中，癌性肺病是身体中唯一的癌症。在一些实施例中，受试者患有癌性肺病和并在身体其它部位患有癌症。在本发明的一个具体实施例中，肺部施用包括吸入包括抗肿瘤颗粒的第一组合物(如通过鼻腔、口腔吸入或两者兼有)。在此实施例中，包括抗肿瘤颗粒的第一组合物可以配制成气雾剂(即：抗肿瘤颗粒在气体介质中的稳定分散体或悬浮液的液滴)。作为气溶胶组合物递送的抗肿瘤颗粒可通过重力沉降、惯性冲击和/或扩散沉积在气道中。可以使用任何合适的产生气雾剂的装置，包含但不限于加压计量吸入器(pmdi)、喷雾器和软雾吸入器。在一些实施例中，抗肿瘤颗粒可以是干粉形式并用于干粉吸入器(dpi)。药物颗粒通常被放置在dpi装置的胶囊中。致动时，胶囊破裂，干粉云被排出。可以将药物粉末调节到所需的质量中值空气动力学直径(mmad)，但最常见的做法是将小药物粉末与用于肺部施用的载剂(如乳糖)混合。药物颗粒通过静态粘附粘附在乳糖颗粒上。用于肺部递送的乳糖的大小可以被调整到期望的mmad，如约2.5微米。也可以使用其它糖，如甘露醇。在一个具体实施例中，所述方法包括吸入第一组合物，所述第一组合物包括通过雾化而以气溶胶状喷洒的抗肿瘤颗粒。喷雾器通常使用压缩空气或超声波产生包括气溶胶颗粒的组合物的可吸入气溶胶液滴。在此实施例中，雾化使得将包括抗肿瘤颗粒的组合物的气溶胶液滴肺部递送到受试者。在一个优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。在一个进一步优选的实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。合适的喷雾器是hospitak压缩空气喷射喷雾器。在另一个实施例中，所述方法包括吸入包含通过pmdi气溶胶化的抗肿瘤颗粒的第一组合物，其中包括抗肿瘤颗粒的组合物悬浮在用计量阀密封的加压容器中的含有至少一种液化气体的合适的推进剂系统(包含但不限于氢氟烷烃(hfa))中。阀的致动使得递送八廓抗肿瘤颗粒的组合物的气雾剂喷雾的计量剂量。在一个优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。在一个进一步优选的实施例中，紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒。在包括抗肿瘤颗粒的组合物被以气溶胶化喷洒施用的实施例中，包括抗肿瘤颗粒的组合物的气溶胶液滴的质量中值空气动力学直径(mmad)可以是用于本发明的任何合适的直径。在一个实施例中，气溶胶液滴的mmad介于约0.5μm与约6μm直径之间。在各个进一步的实施例中，气溶胶液滴的mmad为0.5μm到约5.5μm直径、约0.5μm到约5μm直径、约0.5μm到约4.5μm直径、约0.5μm到约4μm直径、约0.5μm到约3.5μm直径、约0.5μm到约3μm直径、约0.5μm到约2.5μm直径、约0.5μm到约2μm直径、约1μm到约5.5μm直径、约1μm到约5μm直径、约1μm到约4.5μm直径、约1μm到约4μm直径、约1μm到约3.5μm直径、约1μm到约3μm直径、约1μm到约2.5μm直径、约1μm到约2μm直径、约1.5μm到约5.5μm直径、约1.5μm到约5μm直径、约1.5μm到约4.5μm直径、约1.5μm到约4μm直径、约1.5μm到约3.5μm直径、约1.5μm到约3μm直径、约1.5μm到约2.5μm直径、约1.5μm到约2μm直径、约2μm到约5.5μm直径、约2μm到约5μm直径、约2μm到约4.5μm直径、约2μm到约4μm直径、约2μm到约3.5μm直径、约2μm到约3μm直径、约2μm到约2.5μm直径。在优选的实施例中，抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒，气溶胶液滴的质量中值空气动力学直径(mmad)为介于约0.5μm与约6μm直径之间，或介于约1μm与约3μm直径之间，或介于约2μm与约3μm直径之间。测量气溶胶液滴质量中值空气动力学直径(mmad)和几何标准偏差(gsd)的合适仪器是七级气溶胶采样器，如mercer式级联冲击器。3.肿瘤内(it)注射方法本文公开了一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括：(a)通过瘤内注射将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物直接施用于所述受试者的实体瘤中，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。如本文所用的，“实体瘤”是一种通常不包含囊肿或液体区域的不正常组织块。实体瘤可能是良性的(不是癌症)或恶性的(癌症)。不同类型的实体瘤是根据形成其的细胞类型来命名的。实体恶性肿瘤的实例有肉瘤、癌和淋巴瘤。在一些实施例中，实体瘤是良性肿瘤，并且受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一个特定实施例中，实体瘤是恶性实体瘤。在一些实施例中，恶性实体瘤是受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，受试者在身体的其它区域患有恶性实体瘤和癌症。如本文所用的，“直接注射到肿瘤中”或“瘤内注射(it)”是指将组合物(如混悬液)部分或全部注射到肿瘤块中。如本领域技术人员将理解的，如果组合物或其悬浮液的量太大而不能全部直接注射到固体肿瘤块中，这种直接注射可以包含将组合物(如悬浮液(例如药物))的一些部分注射在固体肿瘤外围(“瘤周”)上。在一个实施例中，组合物或其悬浮液被整体注射到实体瘤块中。如本文所用的，肿瘤包含肿瘤块和肿瘤转移瘤，包含但不限于骨转移瘤和软组织转移瘤。抗肿瘤颗粒的组合物的肿瘤内注射可以通过本领域技术人员已知的任何合适的方法来完成。在非限制性实施例中，注射可以通过磁共振成像-经直肠超声融合(mr-trus)引导(如用于注射前列腺肿瘤)或者通过内窥镜超声引导的细针注射(eus-fni)进行。国际专利申请pct/us17/25718中公开了合适的瘤内注射方法和组合物，该专利申请通过应用并入本人。在各个实施例中，实体瘤选自肉瘤、癌和淋巴瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、头颈部肿瘤、成胶质细胞瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、肝脏肿瘤、卵巢肿瘤、结肠直肠肿瘤、肺肿瘤、皮肤肿瘤、淋巴肿瘤和/或胃肠肿瘤。在一个具体的实施例中，实体瘤是前列腺肿瘤，化疗颗粒是紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒。在另一个具体实施例中，实体瘤是卵巢肿瘤，化疗颗粒是紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒。在另一个具体实施例中，实体瘤是乳腺肿瘤，化疗颗粒是多西紫杉醇颗粒。在另一个具体实施例中，实体瘤是胰腺肿瘤，化疗颗粒是紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒。在这些实施例的任何一个中，肿瘤可以是例如腺癌。4.腹腔内(ip)注射方法本文公开了一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括：(a)通过腹膜内注射向所述受试者的腹膜内器官肿瘤施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在一些实施例中，肿瘤是良性的，并且受试者在身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，肿瘤是恶性的。在一些实施例中，恶性肿瘤是受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，受试者在身体其它部位患有恶性肿瘤和癌症。腹膜内器官包含胃、回肠、空肠、横结肠、阑尾、乙状结肠、脾脏、肝脏、胰腺的尾部、十二指肠的前五厘米和直肠的上三分之一部分。在女性中，因为女性的腹膜腔是开放的并且与女性的生殖器官相通(输卵管促进了这种相通)，所以子宫、卵巢、输卵管和性腺血管都在腹膜腔内，并且处于本公开的目的被包含为腹膜内器官。将抗肿瘤颗粒的组合物腹膜内注射到肿瘤中可以通过本领域技术人员已知的任何合适的方法来完成。美国专利8221779中公开了合适的腹膜内注射方法和组合物，所述专利通过引用并入本文。在一些实施例中，恶性肿瘤是卵巢癌、子宫癌、胃癌、结肠癌、脾癌、肝癌、直肠癌和/或胰腺癌。在一些实施例中，肿瘤是卵巢癌肿瘤。在一些实施例中，良性肿瘤是卵巢、子宫、胃、结肠、脾、肝、直肠和/或胰腺良性肿瘤。在一些实施例中，良性肿瘤是卵巢肿瘤。5.囊内注射方法本文公开了一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括：(a)通过囊内注射将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物直接施用于所述受试者的囊肿中，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在各种实施例中，所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在一些实施例中，所述囊肿是上皮囊肿。在一些实施例中，所述囊肿是良性囊肿，并且所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，所述囊肿是恶性囊肿。在一些实施例中，所述恶性囊肿是所述受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，所述受试者在身体的其它区域患有恶性囊肿和癌症。在一些实施例中，所述囊肿是胰腺囊肿。在其它实施例中，所述抗肿瘤剂是紫杉烷，并且所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。所述紫杉烷颗粒可以包含所述紫杉烷颗粒的药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在一些实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。如本文所用的，术语“囊肿”是指体内可能充满液体或半固体物质的异常囊。“上皮”囊肿具有上皮内衬。在一些实施例中，囊肿是良性的和/或癌前的。在一些实施例中，囊肿是癌性的(恶性的)。上皮囊肿的非限制性实例包含胃肠囊肿，如肝囊肿、胰腺囊肿、脾囊肿、结肠囊肿；泌尿囊肿，如肾囊肿、附睾囊肿、前列腺囊肿；妇科囊肿，如卵巢囊肿和阴道囊肿；头颈囊肿，如甲状腺囊肿、甲状旁腺囊肿和其它头颈囊肿；以及其它囊肿，如贝克囊肿、肺囊肿、淋巴囊肿和心包囊肿。一些实施例中，上皮囊肿是胰腺囊肿。胰腺囊肿可以为导管内乳头状黏液性肿瘤(ipmn)、黏液性囊性肿瘤(mcn)或浆液性囊腺瘤。在一些实施例中，胰腺囊肿是导管内乳头状黏液性肿瘤(ipmn)。在其它实施例中，胰腺囊肿是粘液性囊性肿瘤(mcn)。在其它实施例中，胰腺囊肿是浆液性囊腺瘤。将组合物注射到上皮囊肿中(囊内注射)可以通过使用被称为“内窥镜超声引导的细针注射(eus-fni)”的过程来进行，这是一种将内窥镜检查与超声结合以帮助定位囊肿并促进将组合物注射到囊肿中的过程。将组合物注射到胰腺囊肿中的非限制性示例性过程如下：线性阵列回声内窥镜通过嘴插入并前进到胃或十二指肠(采用提供进入囊肿的最佳途径的一个)。22号细针抽吸(fna)针被鲁尔锁定在回声内窥镜的辅助通道中。针尖在手术过程中一直被保持在囊肿内。使用注射器从囊肿中吸出囊肿液(通常达到囊肿原始体积的80％，但可以吸出超过80％的囊肿液)。确定抽出的囊液体积。然后用组合物填充针头，并直接注射到囊肿内。注射到囊肿中的组合物的体积可以等于所吸出的囊肿液的体积。6.体腔注射方法本文公开的是本发明的另一方面，公开了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括：(a)通过注射到受试者体腔内，将包括抗肿瘤颗粒的第一组合物施用到位于所述体腔内的肿瘤，和(b)向所述受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗所述癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，并且其中步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时执行。在各种实施例中，所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在一些实施例中，所述肿瘤是良性肿瘤，并且所述受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，所述肿瘤是恶性肿瘤。在一些实施例中，所述恶性肿瘤是所述受试者的所述身体内唯一的癌症。在其它实施例中，所述受试者在所述身体的其它区域患有恶性肿瘤和癌症。在其它实施例中，所述抗肿瘤剂是紫杉烷，并且所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。所述紫杉烷颗粒可以包含所述紫杉烷颗粒的药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒、卡巴他赛颗粒或其组合。在一些实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。体腔是除血管(如血管)以外的任何充满液体的空间。人体体腔包含腹侧腔和背侧腔。腹膜腔包含胸腔和腹膜腔及其分支。背腔包含颅腔和脊柱腔。b.系统施用方法全身用组合物(即本发明的第二种组合物)的全身施用方法，包含本领域技术人员已知的合适方法，如肠内施用方法和/或胃肠外施用方法。全身施用途径的非限制性实例包含静脉内(iv)、肌肉内、关节内、输注、口服、直肠、口腔和舌下施用。c.组合治疗方法本文公开了一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括：(a)向受试者的肿瘤或囊肿局部施用包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，和(b)向受试者全身施用包括免疫治疗剂的第二组合物，由此治疗癌症，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米。在优选的实施例中，在所述第二组合物的所述全身施用后，所述第一组合物的所述局部施用刺激所述受试者对所述免疫治疗剂的免疫应答。步骤(a)和(b)能够以任何顺序或同时进行。在一些实施例中，所述第一组合物在所述第二组合物施用前至少一天施用。在一些实施例中，第一组合物在第二组合物施用前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天施用。在其它实施例中，所述第二组合物在所述第一组合物施用前至少一天施用。在一些实施例中，第二组合物在第一组合物施用前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天施用。在仍其它实施例中，所述第一组合物和所述第二组合物在同一天施用。在一些实施例中，受试者患有的癌症和受试者患有的恶性肿瘤是相同的癌症。在一些实施例中，所述第一组合物中抗肿瘤颗粒的量和所述第二组合物中免疫治疗剂的量是治疗所述受试者的癌症和任选地治疗所述受试者的肿瘤的有效量。在一些实施例中，步骤(a)中的肿瘤或囊肿是良性肿瘤，并且受试者在所述身体的其它部位患有癌症。在一些实施例中，步骤(a)中的肿瘤是恶性肿瘤或囊肿，并且是受试者体内唯一的癌症。在其它实施例中，步骤(a)中的肿瘤或囊肿是恶性肿瘤或囊肿，并且受试者在身体的其它部位也患有癌症。在优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。联合治疗方法特别适用于治疗先前的化疗未对癌症显示出积极作用的受试者。在一些实施例中，在接受本发明的联合疗法治疗之前，受试者曾接受至少一种其它形式的化疗治疗，其中癌症在其它形式的化疗治疗期间和/或之后恶化。在一些实施例中，先前的化疗治疗是基于铂的化疗方案。v.试剂盒在本发明的一个方面，公开了一种试剂盒，其包括：(a)包括抗肿瘤颗粒的第一组合物，其中所述抗肿瘤颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到5微米，(b)包括免疫治疗剂的第二组合物，和(c)用于以下的说明书：(i)将所述第一组合物局部施用于受试者的恶性肿瘤，以及(ii)将所述第二组合物全身施用于所述受试者。在优选的实施例中，所述抗肿瘤颗粒是紫杉烷颗粒。在一些实施例中，所述免疫治疗剂是单克隆抗体、癌症疫苗、非特异性免疫治疗剂、细胞因子、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、检查点抑制剂、免疫调节剂、过继性细胞转移剂、t细胞治疗剂、细胞治疗剂、溶瘤病毒治疗剂、bcg和/或辅助免疫治疗剂。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒包括至少95％的所述紫杉烷，并且其中紫杉烷颗粒的平均粒径(数值)为0.1微米到1.5微米。在一些实施例中，所述紫杉烷颗粒是紫杉醇颗粒、多西紫杉醇颗粒或卡巴他赛颗粒。在一些实施例中，所述紫杉醇颗粒或多西紫杉醇颗粒的比表面积(ssa)为至少18m2/g。在一些实施例中，所述紫杉醇颗粒的体积密度(未振实)为0.05g/cm3到0.15g/cm3。在一些实施例中，所述第一组合物是疏水性软膏。在一些实施例中，所述第一组合物是水性悬浮液。实例将通过具体的实例对本发明进行更详细的描述。以下实施例仅用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易认识到各种非关键参数，这些参数可以被改变或修改以产生基本相同的结果。实例1—紫杉醇颗粒的粒径、ssa和体积密度分析表1和表9中所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的颗粒大小通过以下粒径方法使用accusizer780进行了分析：仪器参数：最大浓度：9000个颗粒/毫升，容器号:1，传感器范围：总和，检测下限：0.5μm，流速：30毫升/分钟，分析拉引次数：4，拉引间隔时间：1秒，拉引体积：10ml，皮重体积：1ml，预充体积：1ml，包含首次拉引：未选择。样品制备：将一勺紫杉醇颗粒api放入一个干净的20ml小瓶中，加入约3ml(0.22μm)经过滤的0.1％w/w的sds溶液以润湿api，然后用sds溶液填充小瓶的剩余部分。涡旋5-10分钟，并在一个水批次中超声1分钟。方法：用经过滤(0.22μm)的0.1％w/wsds溶液填充塑料瓶，并分析背景。在搅拌的同时，将少量<100μl的紫杉醇颗粒样品悬浮液液吸到0.1％w/wsds溶液瓶中；将accusizer入口管放入瓶中，让样品通过仪器。如有必要，添加更多的sds溶液或紫杉醇样品悬浮液，以达到6000-8000颗粒计数的所需运行浓度。粒径结果(基于数字加权差异分布)：表1中所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次：平均值:0.861μm。表9中所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次：平均值:0.83μm。表1和表9所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的比表面积(ssa)通过上述brunauer–emmett–teller(bet)等温线方法进行分析。表1所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的ssa为41.24m2/g。表9所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的ssa为26.72m2/g。表1中所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的体积密度(未振实)为0.05g/cm3。表9中所列调配物中使用的紫杉醇颗粒批次的体积密度(未振实)为0.09g/cm3。实例2—具有疏水性载剂的紫杉醇颗粒的无水疏水性局部用组合物表1列出了具有疏水性载剂的紫杉醇颗粒的无水疏水性局部用组合物。表1f4-f13的程序：用一部分环甲硅油(或矿物油(f4)或fomblin(f7))制备紫杉醇颗粒的浆液。将矿脂加热至52±3℃，加入剩余成分，混合直至熔化并均匀。加入紫杉醇浆液并混合直至均匀。混合并使批料冷却到35℃或更低。形成了一种软膏。实例3—具有疏水性载剂的紫杉醇颗粒的无水局部用组合物的物理和化学稳定性无水疏水性局部用组合物样品在25℃和30℃下储存在20ml玻璃闪烁瓶中。紫杉醇的含量测定采用hplc进行。下表2和表3中示出了测定和外观稳定性研究的结果。粘度是在室温下使用带有sc4-14转子和6r室的小样品适配器在5rpm下以2分钟的平衡时间用brookfieldrv粘度计测量的。以下表4中示出了粘度结果。表2—25℃时的稳定性**重复批次表3—30℃时的稳定性**重复批次表4—粘度稳定性实例4—具有疏水性载剂的无水局部用组合物中紫杉醇颗粒的粒径分析使用accusizer770/770a型粒径方法。仪器参数：传感器：le0.5μm-400μm，传感器范围：总和，检测下限：0.5μm，收集时间：60秒，通道数：128，容器流体体积：100ml，流速：60毫升/分钟，最大符合值：8000个颗粒/毫升，样品容器：accusizer容器，样品计算：无，电压检测器：大于10v，颗粒浓度计算：否，浓度范围：5000到8000个颗粒/毫升，自动数据保存：选中，减去背景：是，自动循环次数：1.样品制备：将一份样品调配物加入闪烁瓶中。使用抹刀，沿着小瓶内壁涂抹样品。向小瓶中加入约20ml2％卵磷脂/isopar-gtm(c10-11异链烷烃)溶液。超声处理小瓶1分钟。确保样品在溶液中充分分散。方法：在样品容器中填充经过滤(0.22μm)2％卵磷脂/isopar-g溶液，并分析背景。使用移液管，在搅拌的同时将一部分制备好的样品转移到容器中。根据需要将样品稀释或添加到容器中，以提供5000到8000个颗粒/毫升的符合水平。通过仪器启动分析，并验证分析的符合水平为5000到8000个颗粒/毫升。下表5和表6中示出了粒径分析的结果。表5—25℃下的粒径稳定性**重复批次表6—30℃下的粒径稳定性**重复批次实例5—紫杉醇颗粒的水基局部用组合物表7中示出了紫杉醇颗粒的水基局部用组合物。表7实例6—水基局部用组合物中紫杉醇颗粒的粒径分析使用accusizer770/770a型粒径方法。仪器参数：传感器：le0.5μm-400μm，传感器范围：总和，检测下限：0.5μm，收集时间：60秒，通道数：128，容器流体体积：100ml，流速：60毫升/分钟，最大符合值：8000个颗粒/毫升，样品容器：accusizer容器，样品计算：无，电压检测器：大于10v，颗粒浓度计算：否，浓度范围：5000到8000个颗粒/毫升，自动数据保存：选中，减去背景：是，自动循环次数：1.样品制备：将一份样品调配物加入闪烁瓶中。使用抹刀，沿着小瓶内壁涂抹样品。向小瓶中加入约20ml0.2μm经过滤蒸馏水。超声处理小瓶1分钟。确保样品在溶液中充分分散。方法：用0.2μm经过滤蒸馏水填充样品容器，并分析背景。使用移液管，在搅拌的同时将一部分制备好的样品转移到容器中。根据需要将样品稀释或添加到容器中，以提供5000到8000个颗粒/毫升的符合水平。通过仪器启动分析，并验证分析的符合水平为5000到8000个颗粒/毫升。下表8中示出了粒径分析的结果。表8—水基局部用组合物的粒径实例7—用于局部应用于皮肤恶性肿瘤的紫杉醇颗粒的局部用组合物表9中所示的下列软膏调配物制备用于局部应用于皮肤恶性肿瘤。表9表9中列出的含有紫杉醇颗粒的调配物是以6kg的批量生产的。然后将调配物包装在15gm层压管中。批次f14、f15和f16的制造工艺如下：将矿脂、矿物油、石蜡和一部分环甲硅油加入容器中，加热到52±3℃，同时用螺旋桨式混合器混合，直至熔化并均匀。将紫杉醇颗粒加入到含有另一部分环甲硅油的容器中，首先用刮刀混合以润湿颗粒，然后用ikaultraturrax均化器和s25-25g分散工具混合，直到获得均匀的浆液，同时将容器保持在冰/水浴中。然后将该浆料加入矿脂/石蜡容器中，同时用螺旋桨式混合器混合，随后用剩余部分环甲硅油冲洗并混合，直到该批料在52±3℃下视觉上均匀。然后使用silverson均化器将该批料均化。之后，用螺旋桨式混合器混合该批料，直到形成均匀的软膏，并将该批料冷却至35℃或更低。批次f17的制造工艺如下：将矿脂和石蜡加入容器中，加热到52±3℃，同时用螺旋桨式混合器混合，直至熔化并均匀。将紫杉醇颗粒加入到含有环甲硅油和一部分矿物油的容器中，首先用刮刀混合以润湿颗粒，然后用ikaultraturrax均质器和s25-25g分散工具混合，直到获得均匀的浆液，同时将容器保持在冰/水浴中。然后将该浆料加入矿脂/石蜡容器中，同时用螺旋桨式混合器混合，随后用剩余部分矿物油冲洗并混合，直到该批料在52±3℃下视觉上均匀。然后使用silverson均化器将该批料均化。之后，用螺旋桨式混合器混合该批料，直到形成均匀的软膏，并将该批料冷却至35℃或更低。表10-13中显示了在25℃下t＝0、1个月和3个月时表9中每种调配物的化学和物理分析结果。表10注1：灰白色到黄色软膏注2：在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒。表11注1：灰白色到黄色软膏注2：在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒。表12注1：灰白色到黄色软膏注2：在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒。表13注1：灰白色到黄色软膏注2：在室温下，在helipath接通的情况下，在t-e转子转速为10rpm的情况下，在helipath支架上使用brookfieldrv粘度计持续45秒。实例8—体外皮肤渗透扩散研究使用franz扩散池系统进行了一项用于确定调配物f1至f13在体外皮肤渗透到完整的人尸体皮肤中的速率和程度的研究。在不同时间点在扩散池的受体腔室中对紫杉醇的浓度进行了测量。扩散研究结束后，皮肤被剥离并分成表皮层和真皮层。使用提取溶剂提取表皮和皮肤组织中的紫杉醇，并进行分析。分析方法：建立了分析紫杉醇的质谱方法(ms)。ms条件如下表14所示。表14franz扩散池(fdc)研究—方法皮肤准备：人尸体皮肤从纽约消防员组织库(newyorkfirefighterstissuebank(nfftb))购得。皮肤收集自背部上部，并且组织库将其皮切成约500μm的厚度。从组织库接收皮肤后，将皮肤在-20℃下冷冻保存，直到实验开始。使用前，将皮肤从冰箱中取出，在室温下完全解冻。然后将皮肤短暂浸泡在pbs浴中，以去除任何残留的防冻剂和防腐剂。实验中只使用了视觉上完整的皮肤区域。对于每项研究，使用两个独立的供体，每个供体有相应的三个复制品。受体液体制备：基于初步溶解度数据的结果，选择了ph为7.4的96wt％磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)的受体液体和4wt％羟丙基β环糊精(hpbcd)。活性物质在受体液体中的溶解度(约0.4μg/ml)已被证明足以维持研究过程中的沉降条件。通过在抽真空的同时用0.2μm的zapcaptmcr膜过滤受体流体，使受体流体脱气。将过滤后的受体流体再搅拌了20分钟，同时保持了真空以确保完全脱气。扩散池组件：将尸体皮肤从冰箱中取出，在生物安全罩中解冻30分钟。打开包装前，皮肤被彻底解冻。将尸体皮肤从包装中取出，放在生物安全罩工作台面上，角质层朝上。用kimwipe将皮肤拍干，然后用新鲜pbs喷洒，再拍干。该过程重复3次以上，以去除皮肤上存在的任何残留物。然后用脱气的受体流体填充受体孔。将涂有聚四氟乙烯的搅拌棒添加到每个接收器孔中。检查解冻的尸体皮肤，仅使用厚度均匀且表面无可见损伤的区域。将皮肤切成约2cm×2cm的正方形。将皮肤片置于供体孔的中心，角质(sc)层朝上。将皮肤居中放置，将边缘展平。然后将供体孔和受体孔对齐，并用夹子夹在一起。必要时添加另外的受体液体。通过倾斜样品池去除任何存在的气泡，让空气沿着样品口逸出。然后将扩散池放入搅拌干燥块加热器中，并允许从受体流体中再水合20分钟。在整个实验过程中，连续搅拌下，块状加热器保持在32℃。允许皮肤水合20分钟，并测试每个皮肤部分的屏障完整性。一旦膜完整性检查研究完成，受体液替代整个受体腔室的容积。调配物应用程序：将调配物应用于皮肤角质层。本研究采用一次性给药方案。使用正位移nichiryotm移液器将测试物品以10μl剂量施用于皮肤。然后用玻璃棒将调配物涂抹在皮肤表面。在实验过程中，池不加盖。下表15示出了每个池紫杉醇的理论剂量。表15*重复分析受体液体的取样：在3、6、12和24小时，使用带刻度的hamilton型注射器从受体孔中抽取300μl样品等分试样。加入新鲜的受体培养基来代替300μl的样品等分试样。胶带剥离和热剥离：24小时后，用pbs/乙醇浸泡的kimwipestm将皮肤擦拭干净。将残留的调配物擦拭掉并用kimwipestm干燥皮肤后，用胶带剥离角质层三次，每次胶带剥离包括用均匀的压力将玻璃纸胶带贴在皮肤上并将胶带剥离。收集胶带并冷冻以备将来分析。前三条胶带去除角质层的最上层，作为额外的皮肤清洁步骤。通常认为活性物质在该区域并未被完全吸收。这些胶带通常仅用于质量平衡测定。胶带剥离皮肤后，用镊子或压舌板将每块皮肤的表皮与下面的皮肤组织分离。收集表皮和真皮组织，并将其放置在4ml硼硅酸盐玻璃瓶中。将所有皮肤碎片分离后，向玻璃小瓶中加入一份提取溶剂。该过程包括向小瓶中加入2mldmso，并在32℃下孵育24小时。提取时间结束后，收集并过滤300μl提取液的样品等分试样。样品分析：使用上述分析方法对样品等分试样进行紫杉醇分析。结果：下表16中的结果示出了在调配物f1至f13经过24小时后，在不同时间点(透皮通量)的受体流体中紫杉醇的递送剂量(μg/cm2)和递送到表皮和真皮中的紫杉醇浓度(μg/cm2)(渗透)。图1以图形方式示出了对于调配物f1至f7，递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图2以图形方式示出了对于调配物f6*(重复分析)和f8至f13，递送到表皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图3以图形方式示出了对于调配物f1至f7，递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。图4以图形方式示出了对于调配物f6*(重复分析)和f8至f13，递送到真皮中的紫杉醇的浓度(μg/cm2)。注：调配物f1至f6是在一项体外研究中测试的，调配物f6*和f8至f13至在另一项单独的体外研究中测试的，尸体皮肤批次不同。在第二项研究中重复了对调配物f6的分析(并标注为f6*)，以便在第二项研究中对其进行评估并与其它调配物进行比较。表16*重复分析从表16中的结果可以看出，紫杉醇通过皮肤(表皮和真皮)的透皮通量没有或只有可忽略的量(即小于0.01μg/cm2)。从表16和图1、2、3和4中的结果可以看出，即使水性调配物含有皮肤渗透增强剂dgme(transcutolp)，但紫杉醇对皮肤(表皮和真皮)的渗透远远大于无水疏水性调配物(f4至f13)对皮肤的渗透和含水调配物(f1至f3)对皮肤的渗透。结果还显示，与没有环甲硅油的无水疏水性调配物相比，具有环甲硅油的无水疏水性调配物表现出更大的皮肤渗透性(表皮和真皮)。此外，结果表明，向含有环甲硅油的无水疏水性调配物中加入其它皮肤渗透增强剂对这些组合物的皮肤渗透(表皮和真皮)几乎没有影响。实例9—皮肤转移瘤的1/2期剂量增加、安全性、耐受性和疗效研究上表9中的三种调配物(f14(0.15％)、f16(1.0％)和f17(2.0％))用于fda批准的人体皮肤转移瘤的1/2期剂量增加、安全性、耐受性和有效性研究。这项研究目前正在进行中。这是一项1/2期、开放性、剂量增加的评估表7中三种调配物f14(0.15％)、f16(1.0％)和f17(2.0％)的安全性、耐受性和初步疗效的研究，这三种调配物每天两次局部应用于非黑色素瘤皮肤转移，持续28天。根据recist(版本1.1)对可测量肿瘤(最大直径大于或等于10mm)的定义，在基线时确定躯干或四肢上的包含至少一个符合条件的病变的50cm2的治疗区域。用卡尺测量治疗区域内的所有病变以确认合格性。使用戴手套的手，受试者在28天内每天两次在大约相同的时间将一个指尖单位(ftu)的调配物应用于50cm2的治疗区域。ftu被定义为从成人的远侧皮肤折痕施加到食指尖端的从具有5mm直径喷嘴的管中挤出的软膏调配物的量。受试者在第1天到诊所接受剂量应用培训和第一次治疗应用的观察。第8、15、29和43天进行了另外的访问。最后一次访视在最后一次研究药物剂量后30天完成，以检查不良事件。研究参与分为剂量递增阶段和剂量扩大阶段。剂量递增阶段：在剂量递增阶段，研究遵循了标准的3+3剂量递增设计，第一个组中三名受试者开始使用调配物f14(0.15％)进行治疗。安全监测委员会在每组三名受试者中的最后一名受试者完成15天的治疗后检查了所有可用数据，以确定剂量递增是否可以继续。剂量扩大阶段：在剂量扩大阶段，按照剂量递增阶段确定的剂量水平，招募另外的受试者，使受试者总数达到最多12人。剂量扩大阶段的受试者在同一就诊日到诊所就诊，并接受与上述剂量增加阶段相同的评估。目标：研究的主要目标是确定调配物的初步安全性和耐受性。次要目的是确定调配物的初步疗效，研究治疗区域疼痛的潜在减轻，并描述应用于转移病灶的调配物的药代动力学。人数：至少二到最多24名男性和女性受试者，年龄大于或等于18岁，患有非黑色素瘤皮肤转移。主要终点：安全性和耐受性，由不良事件、实验室评估变化、体检结果和生命体征证明。次要终点：出于以下疗效次要终点的目的，符合条件的病变在基线时由可测量肿瘤的recist(版本1.1)定义确定(其最大直径大于或等于10mm)(eisenhauer等人，“实体肿瘤新反应评估标准：修订recist指南(newresponseevaluationcriteriainsolidtumors:revisedrecistguideline)”(版本1.1))，《欧洲癌症杂志(europeanjournalofcancer.)》2009；45；第228-247页)。目标肿瘤反应，定义为基线和第43天(即剂量递增和扩大阶段最后一次给药后14天，取决于剂量方案)之间治疗区域内一个或多个符合条件的肿瘤直径之和的差异。在所有访问时评估肿瘤表面积和反应。使用美国国家卫生研究院(nationalinstitutesofhealth(nih))提供的校准网格测量系统(imagej免费软件)评估表面积的变化。使用imagej测量和分析病变。目标临床反应被定义为具有完全临床反应(cr)+部分反应(pr)的受试者，进一步被定义为在用调配物进行最后一次治疗后14天达到完全临床反应或部分反应的患者的百分比，并且以在最后一次治疗后14天治疗区域内(多个)符合条件目标病变的(多个)最长直径的总和的变化测量。对治疗的反应被评估为治疗后总直径除以治疗前总直径的函数。最佳总体反应定义为从研究治疗开始到治疗结束(即第43天)记录的最佳反应。完全临床反应(cr)是指在治疗区域内的(多个)符合条件病变中没有任何可检测到的残留疾病；部分反应(pr)是指与基线相比治疗区域内(多个)符合条件病变直径总和至少减少30％；并且进行性疾病(pd)是指将研究中的最小总和作为参考治疗区域内(多个)符合条件病变直径总和增加至少20％。此外，总和还必须证明绝对增加至少5mm。稳定疾病(sd)被定义为介于定义为pr或pd的符合条件的病变直径之间的(多个)符合条件的病变直径之和。参与本研究期间出现新的非靶病变并不构成进行性疾病。治疗区域的疼痛将通过数字等级量表(nrs-11)测量。疼痛的变化将从基线到第43天进行分析。全身暴露由以下因素决定：t最大、c最大、auc。初步结果：正在进行的研究的初步结果包含一名患有4期乳腺癌的妇女胸部皮肤转移性病变的照片。受试者在完成乳腺癌的紫杉醇iv治疗后被纳入研究。一个月后，通过局部应用调配物f14(0.15％)开始治疗。图5是在基线(第1天)时拍摄的照片，示出了覆盖有来自溃疡病变的凝结渗出物的指数病变(箭头)。图6是在每天两次将调配物f14(0.15％)局部治疗应用于同一治疗部位后第8天拍摄的照片。病变的表面包含一个表皮脱落的区域和局限于真皮的假定溃疡。图7是在每天两次将调配物f14(0.15％)局部治疗应用于同一治疗部位后第15天的照片。在病变的中间部分可以看到少量的旧渗出物，也没有明显的表皮溃疡。图8a是粒径在每天两次将调配物f14(0.15％)局部治疗应用于同一治疗部位后第29天的照片。在28天的治疗期间，受试者的皮肤损伤被红斑包围，并扩大而没有产生溃疡，表明发生局部免疫应答(图8a)。治疗结束后十一天，受试者再次接受全身紫杉醇治疗。在用全身性紫杉醇治疗后三天(在研究治疗结束后两周)，受试者的病变在大小和体积上显著减少，如图8b所示。局部用调配物f14(0.15％)的局部治疗使皮肤损伤对iv紫杉醇的后续反应敏感。病变似乎是上皮化的，没有溃疡的迹象。相比之下，溃疡性皮肤乳腺癌转移的自然史是表皮表面被肿瘤破坏后迅速扩张并进一步穿透真皮，通常会导致溃疡。实例10—皮肤毒性研究皮肤毒性研究使用表17所示的局部用组合物进行。表17在哥廷根小型猪中进行了符合glp的研究，以表征连续28天每天局部应用于10％体表面积的调配物的毒性。表17中所示的4种调配物以2ml/kg的最大可行体积施用，与0.0、0.3、1.0和3％的剂量浓度相关，这些剂量浓度分别转化为0、4.9、16.5和49.9mg/kg/天的剂量水平。在2周的恢复期后，还评估了研究结果的可逆性。所评估的参数包含临床观察、死亡率和死亡率检查、皮肤评分、体重、食物消耗量、眼部检查、试验现场照片、心电图、临床病理学、生物分析和毒物动力学评估、器官重量、宏观病理学和组织病理学。对存活率、临床症状、皮肤刺激、体重、体重增加、食物消耗、眼科检查结果或心脏病学参数没有调配物相关影响。在给药阶段，在所有组中都观察到了最小程度的皮肤刺激，并且被认为是媒剂或程序相关的，因为在安慰剂对照组与活性调配物处理组之间结果的频率和严重性是可比较的。因此，调配物中紫杉醇颗粒的存在对皮肤刺激的影响可以忽略不计。实例11—(即：本文公开的紫杉醇颗粒，在这些实施例中约99％的紫杉醇的平均粒径(数值)为0.878微米)吸入安全和功效开发计划—斯普拉-道来氏大鼠的先导药物动力学研究概述该试点研究的目的是确定使用进行完整药代动力学(pk)研究的采样时间点。由于调配物有可能导致肺部滞留量增加，因此对0.5到168小时的九个时间点进行了评估，以确定完整药代动力学研究的适当取样策略。仅通过一次鼻吸入将十六(16)只斯普拉-道来氏大鼠暴露于(紫杉醇；目标剂量为0.37mg/kg)。两只动物(n＝2)在暴露后0.5、6、12、24、48、72、120和168小时的指定时间点被安乐死。采集血液(血浆)和肺组织样本。在暴露的当天，根据赞助商提供的说明制备了悬浮调配物(6mg/ml)。所有动物的总气溶胶暴露时间为63分钟。在整个63分钟的调配物气溶胶暴露过程中，通过测量仅通过鼻子暴露腔室中位于呼吸区的47mmgf/a滤光片上累积的调配物量，来监测气溶胶浓度。气溶胶颗粒大小(液滴大小)是使用mercer风格的级联冲击器从暴露腔室的动物呼吸区测量的。使用两个hospitak压缩空气喷射雾化器(平均紫杉醇气溶胶浓度：目标82.65μg/l)将悬浮调配物雾化。从gf/a滤光片测得的总平均气溶胶浓度为0.24mg/l，平均紫杉醇气溶胶浓度为73.5μg/ml。测得粒径分布为2.0μmmmad，并且gsd为2.2。测得的平均紫杉醇气溶胶浓度为73.5μg/l，比目标平均紫杉醇气溶胶浓度82.65μg/l低约11％(在实施例3中报告的分析测定的准确度/恢复率性能标准±15％内)。在调配物气溶胶暴露的整个过程中监测了氧气和温度。记录的氧气和温度范围分别为19.7％-20.9％和20.4℃-20.8℃。基于紫杉醇平均气溶胶浓度为73.5μg/l、平均啮齿动物体重为326g、假定沉积分数为10％和暴露持续时间为63分钟计算紫杉醇对肺的沉积剂量。平均达到的啮齿动物沉积剂量被确定为0.33mg/kg。平均达到的沉积剂量与0.37mg/kg的目标沉积剂量相比低约11％，但在雾化暴露的预期变化范围内(与目标值相差15％)。所有动物都存活到了指定的尸检时间点。尸检时，几只动物的肺部出现轻微的红色变色。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。根据尸检获得的体重和肺重，动物在所有时间点的平均最终体重(标准差)为346.26g(24.01)；平均肺重量(标准差)为1.60g(0.13)。通过液相色谱-质谱(lcms)测定对全身血液(k2edta的血浆形式)进行分析，并按照章节(生物分析)中的简要描述对肺组织进行测定，以量化紫杉醇的量作为时间的函数。肺组织分析显示，在长达168小时的时间内，肺部暴露于可检测量的紫杉醇。24小时后，全身血液显示没有可检测到的紫杉醇(低于1ng/ml)。根据这些数据，为pk研究建议以下采样时间点：吸入暴露后0.5(±10分钟)、6(±10分钟)、12(±10分钟)、24(±30分钟)、48(±30分钟)、72(±30分钟)、120(±30分钟)、168(±30分钟)、240(±30分钟)和336(±30分钟)。目的该试点研究的目的是确定使用进行完整药代动力学(pk)研究的采样时间点。通过腹膜内(ip)注射给药的的初步数据表明在腹腔内有显著的滞留时间。由于调配物有可能导致肺部滞留量增加，因此对168小时内的九个时间点进行了评估，以确定完整药代动力学研究的适当取样策略。材料和方法测试系统:物种/品种：斯普拉-道来氏大鼠研究开始时的动物年龄：8-10周研究开始时的体重范围：308-353g研究/性别数量：18只雄性(16只研究动物和2只备用)来源：查尔斯河实验室(charlesriverlaboratories)(金斯敦，纽约州)标识：耐久性记号笔尾巴标记测试和控制物品的配制和管理根据赞助商提供的说明制备了炭悬浮调配物(6mg/ml)。简单来说，将5.0ml1％聚山梨醇酯80加入到含有(306mg)的小瓶中。剧烈摇动小瓶并倒置，以确保存在于小瓶中的所有颗粒湿润。摇动后，立即将46ml0.9％的氯化钠加入到中，并且将小瓶摇动至少1分钟，以确保悬浮液的充分混合和适当分散。将所得调配物静置至少5分钟，以减少小瓶中的任何空气/泡沫，然后将其放入喷雾器中进行气溶胶化。最终调配物保持在室温，并在重构后3小时内使用。试验设计仅通过一次鼻吸入将十六(16)只斯普拉-道来氏大鼠暴露于(紫杉醇；目标剂量为0.37mg/kg)。两只动物(n＝2)在暴露后0.5(±10分钟)、6(±10分钟)、12(±10分钟)、24(±30分钟)、48(±30分钟)、72(±30分钟)、120(±30分钟)和168(±30分钟)小时被实施安乐死以收集血液(血浆)和肺组织。没有进行具体的pk建模；相反，数据将定义pk研究中暴露后紫杉醇可检测量的持续时间。饲养、检疫、分配到研究雄性斯普拉-道来氏大鼠(6-8周龄)从查理斯河实验室(金斯敦，纽约州)获得，并隔离14天。在隔离结束时，给动物称重，然后按重量随机分配以进行研究。动物通过尾巴标记和笼子卡片来识别。水、照明、湿度和温度控制使用标准技术进行维护和监控。在非接触时间，随意给大鼠喂食标准的啮齿类食物。体重和每日观察随机收集体重，在整个研究过程中每天收集一次，在安乐死时收集一次。比较医学动物资源(cmar)人员每天观察研究中的每只动物两次，观察是否存在任何异常、衰老或死亡的临床症状。仅鼻暴露于气溶胶调整处理使用标准技术用仅暴露于鼻的试管对动物调整处理长达70分钟。在暴露前的三天里，进行了三次调整处理，第一次持续30分钟，第二次持续60分钟，第三次持续70分钟。在整个调整处理期和暴露期间，对大鼠进行密切监测，以确保其不会经历短暂的痛苦。暴露系统吸入暴露系统由两个压缩空气喷射喷雾器(hospitak)和一个啮齿动物专用鼻吸入暴露腔室组成。在整个暴露过程中监测暴露氧水平(％)。使用一组两个压缩空气喷射雾化器(使用时间最长为40(±1)分钟，然后在剩余暴露时间内用第二组两个压缩空气喷射雾化器替换)在入口压力20psi下产生悬浮气溶胶。通过24英寸不锈钢气雾剂输送管线(直径为1.53cm)将气溶胶导入仅暴露于鼻的腔室。浓度监测气溶胶浓度监测是通过将气溶胶收集到预先称重的gf/a47mm滤光片上进行的。在整个啮齿动物暴露过程中，滤光片是从仅暴露于鼻的腔室的啮齿动物呼吸区取样的。通过gf/a滤光片的气溶胶取样流速保持在1.0±0.5升/分钟。总共收集了六个gf/a滤光片，在整个暴露期间每10分钟收集一个(除最后一个滤光片是在13分钟后收集)。样品收集后，对滤光片进行称重，以确定暴露系统中的总气溶胶浓度。通过高效液相色谱(hplc)提取和分析滤光片来定量每个滤光片上收集的紫杉醇的量。通过用通过滤光片的总气流收集的气溶胶和紫杉醇气溶胶的总量除以每个滤光片的总气溶胶浓度和紫杉醇气溶胶浓度。使用平均紫杉醇气溶胶浓度通过如下所示的公式1计算紫杉醇对啮齿动物肺的平均沉积剂量。气溶胶颗粒(液滴)大小确定气溶胶的颗粒大小分布通过mercer风格的七级级联冲击器(intox产品公司(intoxproducts，inc.)，阿尔伯克基，新墨西哥州)从仅暴露于鼻的腔室的啮齿动物呼吸区测量。根据质量中值空气动力学直径(mmad)和几何标准偏差(gsd)确定粒径分布。以2.0±0.1升/分钟的流速收集级联冲击器样品。剂量的确定使用公式1计算沉积剂量。在该计算中，使用了从暴露中测量的平均气溶胶浓度以及大鼠的平均组体重。以这种方式，使用测得的紫杉醇气溶胶浓度来计算沉积在大鼠肺中的紫杉醇的估计量。其中：沉积剂量＝(dd)μg/kg2呼吸分钟音量(rmv)＝0.608×bw0.852气溶胶暴露浓度(ac)＝紫杉醇气溶胶浓度(μg/l)沉积分数(df)＝假设沉积分数为10％bw＝研究动物平均体重(随机时；第1天)(kg)安乐死和尸检动物在各自的时间点通过ip注射安乐死溶液进行安乐死。在尸检过程中，通过心脏穿刺将血液(血浆)收集到k2edta管中，对肺进行称重，收集肺组织样本，并在液氮中快速冷冻以进行生物分析。此外，由合格的尸检人员进行全面的大体检查。检查身体的外表面、孔口以及颅腔、胸腔和腹腔的内容物。使用一套形态学、数量、形状、颜色、一致性和严重性的术语描述和记录病变。生物分析通过液相色谱-质谱法(lcms)测定全身血液(以k2edta的血浆形式)和肺组织，以定量紫杉醇的量作为时间的函数。简单来说，该分析利用超高效液相色谱串联质谱(uplc-ms/ms)测定来定量紫杉醇。血浆样品通过蛋白质沉淀法提取，分离通过反相色谱法实现。肺样品用水以4:1的比例(水:肺组织)匀浆。然后在lcms分析之前以类似的蛋白质沉淀方法匀浆。用基于矩阵的校准曲线进行定量。没有对这些数据进行药代动力学建模；但是，使用紫杉醇降至测定灵敏度极限(1ng/ml)以下的浓度来定义主要pk研究的采样时间点。结果临床观察结果和存活所有动物都存活到了指定的尸检时间点，体重增加了。在整个研究过程中，没有观察到异常临床现象。暴露气溶胶浓度表18示出了暴露期间通过对每个gf/a取样测量的总气溶胶和紫杉醇气溶胶浓度。吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度为73.5μg/l，比目标平均紫杉醇气溶胶浓度82.65μg/l低约11％。平均暴露气溶胶浓度在雾化吸入暴露预期目标气溶胶浓度的±15％以内。表18吸入暴露期间的气溶胶浓度氧气和温度记录的氧气和温度范围分别为19.7％-20.9％和20.4℃-20.8℃。粒径使用级联冲击器测定的6.0mg/ml调配物气溶胶的mmad(gsd)粒径分布为2.0(2.2)μm。沉积剂量基于紫杉醇平均气溶胶浓度为73.5μg/l、平均啮齿动物第1天(随机)体重为326g、假定沉积分数为10％和暴露持续时间为63分钟；平均达到的啮齿动物沉积剂量被确定为0.33mg/kg。平均达到的沉积剂量与0.37mg/kg的目标沉积剂量相比低约11％，这是由于暴露平均气溶胶浓度的预期可变性(与目标相差15％)。尸体剖检所有动物都存活到了指定的尸检时间点。尸检时，几只动物的肺部出现轻微的红色变色。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。测定个体和平均肺重量、体重和比率。平均最终体重(标准差)为346.26g(24.01)。平均肺重量(标准差)为1.60g(0.13)。器官肺重量和肺重量与体重的比率是用于评估对吸入性物质的潜在毒性反应的常用参数。总的来说，这些数据与历史数据一致，表明这两个端点都没有响应。生物分析结果总结在下表19中。暴露后0.5小时，血浆中紫杉醇的平均浓度为16.705ng/ml，然后在整个24小时时间点逐渐降低，并低于所有后续时间点的定量下限(1ng/ml)。暴露后0.5小时，肺组织中紫杉醇的平均浓度为21940ng/g，到168小时时逐渐降到419.6ng/g。这表明在全身暴露最少的情况下在肺部的滞留量很大。表19肺组织和血浆结果结论仅通过一次鼻吸入将十六(16)只雄性斯普拉-道来氏大鼠暴露于(紫杉醇；目标剂量为0.37mg/kg)。对两只动物(n＝2)在暴露后0.5、6、12、24、48、72、120和168小时进行安乐死以收集血液(血浆)和肺组织。在63分钟的吸入暴露期间，平均紫杉醇气溶胶浓度为73.5μg/l，比目标平均紫杉醇气溶胶浓度82.65μg/l低约11％。平均暴露气溶胶浓度在雾化吸入暴露预期目标气溶胶浓度的±15％以内。使用2.0(2.2)μm的级联冲击器，根据6.0mg/ml调配物气溶胶的mmad(gsd)确定粒径分布。记录的氧气和温度范围分别为19.7％-20.9％和20.4℃-20.8℃。基于紫杉醇平均气溶胶浓度为73.5μg/l、平均啮齿动物体重为326g、假定沉积分数为10％和暴露持续时间为63分钟计算紫杉醇沉积剂量。平均达到的啮齿动物沉积剂量被确定为0.33mg/kg。平均达到的沉积剂量与0.37mg/kg的目标沉积剂量相比低约11％，这是由于预期的可变性(与目标值相差15％)。所有动物都存活到了计划的尸检时间点。尸检时，几只动物的肺部出现轻微的红色变色。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。根据尸检获得的体重和肺重，平均最终体重(标准差)为346.26g(24.01)；平均肺重量(标准差)为1.60g(0.13)。器官肺重量和肺重量与体重的比率是用于评估对吸入性物质的潜在毒性反应的常用参数。总的来说，数据表明这两个终点都没有反应。暴露后0.5小时，血浆中紫杉醇的平均浓度为16.705ng/ml，然后在整个24小时时间点逐渐降低，并在24小时后所有时间点都低于定量下限。暴露后0.5小时，肺组织中紫杉醇的平均浓度为21940ng/g，到168小时时逐渐降到419.6ng/g。这表明在全身暴露最少的情况下在肺部的滞留量很大。为pk研究建议以下采样时间点：暴露后0.5(±10分钟)、6(±10分钟)、12(±10分钟)、24(±30分钟)、48(±30分钟)、72(±30分钟)、120(±30分钟)、168(±30分钟)、240(±30分钟)和336(±30分钟)。实例12—(即：本文公开的紫杉醇颗粒，在这些实施例中约98％的紫杉醇的平均粒径(数值)为0.83微米，ssa为27.9m2/g，体积密度(未振实)为0.0805g/cm3)大鼠吸入研究—低剂量和高剂量概述这项工作的总体目标是用6.0mg/ml和20.0mg/ml的悬浮液调配物对雄性大鼠进行仅经鼻吸入暴露。大鼠吸入暴露各进行65分钟。按照赞助商提供的说明制备了6.0mg/ml和20.0mg/ml的悬浮液调配物。同时使用两个hospitak压缩空气喷射喷雾器以20psi的压力将调配物气溶胶化到啮齿类动物吸入暴露腔室中。在每次暴露期间通过在47mm的gf/a滤光片上以1.0±0.5升/分钟的流速取样从动物呼吸区测量气溶胶浓度。通过使用mercer式级联冲击器以2.0±0.1升/分钟的流速从动物呼吸区取样气溶胶来确定颗粒大小。对滤光片进行重量分析，以确定的总气溶胶浓度，并通过高效液相色谱(hplc)确定每次暴露的紫杉醇气溶胶浓度。在整个吸入暴露过程中，监测并记录了氧气和温度。对于用6.0mg/ml调配物进行的吸入暴露，平均总气溶胶浓度和紫杉醇气溶胶浓度分别测定为0.25mg/l和85.64μg/l，其rsd为7.43％和10.23％。对于6.0mg/ml调配物气溶胶，使用级联冲击器测得的平均质量中值空气动力学直径(几何标准差)为1.8(2.0)μm。对于用20.0mg/ml调配物进行的吸入暴露，平均总气溶胶浓度和紫杉醇气溶胶浓度分别测定为0.46mg/l和262.27μg/l，其rsd为10.95％和11.99％。对于20.0mg/ml调配物气溶胶，使用级联冲击器测得的平均质量中值空气动力学直径(几何标准差)为2.3(1.9)μm。对于分别为6.0mg/ml和20.0mg/ml的调配物的65分钟暴露，使用公式1计算0.38mg/kg和1.18mg/kg的平均紫杉醇沉积剂量。调配物和吸入暴露调配物制备材料测试物品：用于吸入暴露的测试物品如下所示：标识：(无菌纳米紫杉醇)说明：紫杉醇的新型干粉调配物，以306毫克/瓶递送媒剂用于制备调配物的媒剂如下所示：1％聚山梨醇酯80溶液标识：无菌1％聚山梨酯80/注射用0.9％氯化钠溶液说明：透明液体生理盐水稀释剂标识：注射用无菌0.9％氯化钠，usp说明：透明液体调配物和吸入暴露调配物制备如下制备6.0mg/ml的调配物：简单来说，将5.0ml1％聚山梨醇酯80加入到含有(306mg)的小瓶中。剧烈摇动小瓶并倒置，以确保存在于小瓶中的所有颗粒湿润。摇动后，立即将46ml0.9％的氯化钠溶液加入到中，并且将小瓶摇动至少1分钟，以确保悬浮液的充分混合和适当分散。将上述用于6.0mg/ml调配物的调配物程序用于制备20.0mg/ml调配物，但向小瓶中添加了10.3ml的0.9％氯化钠溶液，而不是将46ml所述氯化钠溶液用于6.0mg/ml调配物。将所得调配物静置至少5分钟，以减少小瓶中的任何空气/泡沫，然后将其放入喷雾器中进行气溶胶化。将6.0mg/ml的最终调配物保持在室温，并在重构后2小时内雾化。将20.0mg/ml的最终调配物保持在室温，并在重构后30分钟内雾化。暴露系统设置/气溶胶生成：如实例11中所述气溶胶浓度监测：如实例11中所述粒径分布：如实例11中所述沉积剂量计算：如实例11中所述结果气溶胶浓度和粒径在每次调配物气溶胶暴露过程中使用47mm的gf/a滤光片在仅暴露于鼻的腔室内从动物的呼吸区监测气溶胶浓度。在每次暴露过程中，对七个47mm的gf/a滤光片进行了取样。滤光片fs-1至fs-6各取样10分钟，滤光片fs-7在各低剂量组和高剂量组取样5分钟。使用mercer式级联冲击器从暴露腔室的动物呼吸区测量粒径。表20和表21分别显示了在低剂量和高剂量暴露期间通过对gf/a滤光片取样测量的总气溶胶浓度和紫杉醇气溶胶浓度。表20fy17-008b低剂量吸入暴露期间的气溶胶浓度表21fy17-008b高剂量吸入暴露期间的气溶胶浓度使用级联冲击器按照mmad(空气传播粒子质量分布相对于空气动力学直径的中位数)(gsd；同时进行mmad测量来表征粒径分布的可变性)确定每种调配物气溶胶的粒径(气溶胶液滴大小)分布。对于6.0mg/ml和20.0mg/ml气溶胶，mmad(gsd)测定分别为1.8(2.0)μm和2.3(1.9)μm。图9和10分别示出了6.0mg/ml和20.0mg/ml调配物气溶胶的粒径分布。沉积剂量紫杉醇沉积剂量是基于每次低剂量和高剂量调配物暴露的紫杉醇平均气溶胶浓度、大鼠平均体重、假设沉积分数为10％和暴露持续时间为65分钟通过使用等式1计算的。表22显示了每次暴露的平均紫杉醇气溶胶浓度、平均大鼠体重、暴露时间和沉积剂量。对于6.0mg/kg和20.0mg/kg调配物的暴露，平均达到的啮齿动物沉积剂量分别测定为0.38mg/kg和1.18mg/kg。表22低剂量和高剂量吸入暴露的紫杉醇沉积剂量氧气和温度在调配物气溶胶暴露的整个过程中监测了氧气和温度。对于6.0mg/ml的暴露，记录的氧气和温度范围分别为19.8％-20.9％和20.7℃-20.8℃。对于20.0mg/ml的暴露，在整个暴露过程中记录的氧值为19.8％，温度范围为20.7℃-20.8℃。初步数据：见图11和12。实例13—在裸鼠原位肺癌模型中评估吸入型(即：本文公开的紫杉醇颗粒，约98％的紫杉醇的平均粒径(数值)为0.83微米，ssa为27.9m2/g，体积密度(未振实)为0.0805g/cm3)的功效—研究fy17-095执行概要一百二十七只(127只)nih-rnu裸鼠在第1天接受x射线照射以诱导免疫抑制。在第0天，通过气管内(it)滴注给动物施用calu3肿瘤细胞。动物经历了三周的生长期。在第三周，通过体重分层将动物随机分为5个研究组。从第4周开始，第2组中的动物在第22、29和36天通过静脉(iv)给药(5mg/kg)接受每周一次的剂量。第3组和第4组的动物分别以低(0.5mg/kg)和高(1.0mg/kg)目标剂量每周(星期一)接受一次吸入(inh)剂量。第5组和第6组的动物分别接受每周两次(星期一和星期四)的低剂量(0.50mg/kg)和高剂量(高达1.0mg/kg)的目标吸入剂量。作为正常肿瘤细胞生长的对照组，未对第1组的动物进行处理。所有动物在第8周进行尸检。所有动物都存活到了指定的尸检时间点。与该模型相关的临床观察包含皮疹和呼吸困难。在整个研究过程中，所有组的体重增长速度大致相同。每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为270.51μg/l和263.56μg/l。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为244.82μg/l和245.76μg/l。剂量基于平均气溶胶紫杉醇浓度、最近的平均组体重、假定沉积分数(10％)和暴露持续时间(33分钟(低剂量)或65分钟(高剂量))。在四周的处理期间，每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为0.655mg/kg和0.640mg/kg(1.28mg/kg/周)。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为1.166mg/kg和1.176mg/kg(2.352mg/kg/周)。对于接受iv的组，第22、29和36天的平均剂量分别为4.94、4.64和4.46g/kg。在预定的尸检中，每组的大多数动物肺部都有棕褐色结节和/或红色或棕褐色斑片状变色。其它零星的观察结果包含一只动物的腹疝和另一只动物心包上的结节。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。与未经处理的对照组相比，在用abraxane处理的动物中的肺重量、肺与bw比率和肺与脑重量比率明显较低。每周一次的高剂量组的体重与abraxane组相似，与未经处理的对照组相比，肺重量和肺与脑比率显著降低。在组织结构上，所有组中大多数动物的肺都含有一些肿瘤形成的证据。肿瘤形成的特征是存在随机分布在肺实质内的大小可变的可膨胀小肿块和较大的膨胀和聚结肿块，这些肿块占据了高达75％的肺实质、较小的气道和血管。较大的肿块主要分布在肺门区或并置在轴向气道，较小的肿块通常位于周围。肺肿瘤块的主要形态学细胞特征为从未分化的肺腺癌到分化相当好的肺腺癌不等。主要肿瘤细胞类型显示未分化腺癌形态；这些细胞是多形性较大间变性苍白两性染色，具有类似粘液囊泡的细胞质内液泡，表现出中度至显著的不等核肌病，并且被观察到是个体化的或成片状生长的，并且缺乏向腺癌分化的明显特征。然而，在其它肿块中观察到的或在先前描述的未分化肿块中生长的细胞形态学特征更有组织性，并且与表现出明显腺泡分化的高分化肺腺癌一致。这些嗜两性染色的肿瘤细胞主要排列成由肺泡隔约束的巢状或腺样。在这个肿瘤细胞群中很少观察到有丝分裂像。在这些肿块中较少观察到的是原位癌的病灶区—出现相对较小的原位癌细胞，有少量至中等量的苍白嗜碱性染色细胞质、卵圆形和可变的囊状细胞核，以及中等程度的不等核。观察到这些原始肿瘤细胞呈片状随机生长。在嗜碱性原始肿瘤细胞群中，有丝分裂像和凋亡小体的数量增加最为常见。通常观察到以混合炎性细胞(主要是嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、泡沫状巨噬细胞和偶见的巨细胞)浸润并伴有间质纤维化为特征的炎症。显著的实质坏死是常见的。病理学家认为单个肿瘤块边缘的扇形存在是肿瘤细胞逐渐消失的特征，肿瘤细胞完全消失并伴有肺实质的残余纤维化结缔组织支架和泡沫状巨噬细胞的侵入是肿瘤消退的证据。与阳性对照组1和经abraxane处理比较组2相比，经处理组(第3-6组)的总体肺部肿瘤负荷降低，其特征在于腺癌肿瘤块和原始肿瘤细胞群的严重性降低并且存在肿瘤消退的证据。未观察到其它与处理相关的病变或结果。在通过吸入接受的动物的肺中观察到广泛的单核细胞浸润。由于所用的模型是t细胞缺陷型的，因此细胞很可能是b细胞或nk细胞。据推测，肿瘤对的局部、可能更高浓度的暴露影响了引起环境改变以将单核细胞浸润到肺中的肿瘤。目的本研究的目的是评估吸入性调配物与临床参考剂量的静脉注射abraxane相比在降低肺癌原位模型中的肿瘤负荷方面的功效。材料和方法测试系统abraxane调配物用于iv调配物的临床参考物质是药物产品在给药当天，用生理盐水将药物产品重新配制至5.0mg/ml，并按照制造商的说明进行储存。调配物根据赞助商的建议，制备了20.0mg/ml的用于暴露的配方。具体地说，用1％聚山梨醇酯80重构用手摇动小瓶，直到所有颗粒都被弄湿。加入另外的注射用0.9％氯化钠(至所需浓度目标)，用手再摇动小瓶一分钟。继续摇动，直到看不到大块并且悬浮液被适当分散为止。将所得调配物静置至少5分钟，以减少小瓶中的任何空气/泡沫，然后将其放入喷雾器中进行气溶胶化。将最终调配物保持在室温，并在重构后2小时内雾化。将最终的20.0mg/ml保持在室温，并在重构后30(+5)分钟内雾化。试验设计127只动物被用于研究。在x射线照射和肿瘤细胞给药之前，7只动物被指定为备用动物(备用动物没有照射或细胞系滴注)。在第1天，所有研究动物都接受x射线照射以诱导免疫抑制。在第0天，通过气管内(it)滴注给动物施用calu3肿瘤细胞。动物经历了三周的生长期。在第三周，通过体重分层将动物随机分为下表23中列出的组。从第4周开始，第2组的动物通过静脉注射(iv)给药(5mg/kg)每周接受一次目标剂量的第3组和第4组的动物分别以低(0.5mg/kg)和高(1.0mg/kg)剂量每周(星期一)接受一次吸入(inh)目标剂量。第5组和第6组的动物分别接受每周两次(周一和周四)的低剂量(0.50mg/kg)和高剂量(1.0mg/kg)的吸入目标剂量。作为正常肿瘤细胞生长的对照组，未对第1组的动物进行处理。所有动物在第8周进行尸检。*在第4-8周进行了治疗。在第8周进行了尸检。**目标剂量：5.0mg/kg(基于体重)；目标剂量：不超过250μl，频率：从第4周开始的每个21天周期的第1、8和15天。饲养、检疫、分配到研究隔离后，所有动物称重，并根据体重随机去除7个备用。从第1周到第3周，通过笼卡(lc编号)和尾巴标记标识动物。在第3周，在开始处理之前，对动物进行称重，并根据体重分层将其随机分为上述各组，并分配一个研究id。从这一点开始，动物通过笼卡和sharpie尾巴标记来标识。免疫抑制和辐射在第1天，动物在250kvp、15ma、源到对象的距离100cm下以约500拉德接受了全身x光照射(phillipsrt250x光治疗设备，飞利浦医疗系统公司(phillipsmedicalsystems)，谢尔顿，康涅狄格州)。动物被放在一个馅饼柜设备中，2-3只动物一片馅饼。辐射过程需要约10-15分钟。肿瘤细胞植入在第0天，动物接受了通过it施用的肿瘤细胞(calu3)。简单来说，在诱导室中用3-5％异氟醚麻醉后，将动物放置成上牙钩在倾斜悬挂的滴注平台上。动物的舌头被轻轻固定，同时探针刚好通过喉部插入气管。edta悬浮液中细胞的体积(目标剂量体积：500μl；浓度：每0.5ml大约20×106)通过气管内滴注递送到肺部。滴注后，仔细监测动物的呼吸和运动。肿瘤细胞植入后，动物在处理前经历了约3周的肿瘤生长期，以允许肿瘤细胞植入和肺癌发展。calu3生长和制备在细胞培养瓶中，用5％co2在37℃下培养calu3细胞。这些细胞在含10％胎牛血清(fbs)的罗斯韦尔公园纪念研究所(rpmi)1640培养基中生长，直至80％汇合为止。细胞一直保存到滴注的那天。在滴注之前，通过用pbs洗涤收获细胞，然后加入胰蛋白酶以从烧瓶中除去细胞。用含有10％fbs的rpmi1640培养基中和细胞。然后在100xg下离心5分钟；移去培养基，将细胞重悬于450μl无血清rpmi中，浓度为2000万个细胞。滴注前，向细胞悬液中加入50μl的70μmedta，以使每只大鼠的总it剂量为500μl。体重和每日观察收集体重以进行随机分组，第3周每周一次，从第4周开始至研究结束、以及尸检时每周两次。每天两次观察每只研究动物的任何异常情况、发病或死亡的临床体征。技术人员在给药和体重训练期间对动物进行了观察。abraxane施用iv尾静脉注射在第22、29和36天，通过iv尾静脉注射向组2中的动物施用abraxane(5mg/ml，最大剂量体积为250μl)。施用—气溶胶仅暴露于鼻调整处理用仅暴露于鼻的试管对动物调整处理长达70分钟。在暴露前的三天里，进行了三次调整处理，第一次持续30分钟，第二次持续60分钟，第三次持续70分钟。在整个调整处理期和暴露期间，对大鼠进行密切监测，以确保其不会经历短暂的痛苦。暴露系统用两个压缩空气喷嘴hospitak在20psi的雾化器压力下产生气溶胶。20.0mg/ml的悬浮液调配物用于低剂量和高剂量暴露。通过递送管线将气溶胶引导到32端口仅暴露于鼻的腔室中。啮齿动物吸入暴露进行33或65分钟。使用一组两个hospitak压缩空气喷射喷雾器(使用时间长达40(±1)分钟)产生悬浮液气雾剂，然后在剩余的暴露时间内用第二组两个hospital喷雾器代替。在每次吸入过程中都要监测氧气和温度并记录下来浓度监测气溶胶浓度监测是通过将气溶胶收集到预先称重的gf/a47mm滤光片上进行的。在每次吸入接触暴露中，滤光片都是从仅暴露于鼻的动物呼吸区取样的。通过gf/a滤光片的气溶胶取样流速保持在1.0±0.5升/分钟。除了最后一个滤光片外，滤光片在每次暴露期间每隔10分钟收集一次。由于低剂量暴露(第3组和第5组)持续33分钟，最终滤光片在13分钟后收集，由于高剂量暴露(第4组和第6组)持续65分钟，最终滤光片在15分钟后收集。样品收集后，对滤光片进行称重，以确定暴露系统中的总气溶胶浓度。称重后，将每个滤光片放在一个7ml的玻璃小瓶中。玻璃瓶中的滤光片被提取并通过高效液相色谱(hplc)进行分析，以定量收集到滤光片上的紫杉醇的量。通过用通过滤光片的总气流收集的气溶胶和紫杉醇气溶胶的总量除以每个滤光片的总气溶胶浓度和紫杉醇气溶胶浓度。使用紫杉醇气雾剂的平均浓度通过如下面剂量的确定部分所示的公式1来计算紫杉醇对啮齿类动物肺的平均沉积剂量。剂量的确定沉积剂量使用与实例4相同的等式1计算。安乐死和尸检在预定的尸检中，通过腹腔注射过量的巴比妥类镇静剂对动物实施安乐死。血液和组织采集收集所有尸检的最终体重和脑重量。对于预定的安乐死，通过心脏穿刺将血液(用于血浆)收集到k2edta管中。将肺取出并称重。将含有肿瘤(气管支气管淋巴结)的肺组织切片冷冻在液氮中，以备将来分析。其余的肺被固定以进行潜在的组织病理学检查。组织病理学经固定的左肺叶以“面包”的方式被修剪，并且替代的切片被放置在2个盒子中以产生2个载玻片，每个载玻片具有3个代表性的左肺切片。对组织常规处理，石蜡包埋，在约4μm处切片，固定，用苏木精和伊红(h&e)染色以进行显微镜检查。对研究结果进行主观、半定量分级。从研究中的120只经处理的裸鼠中的60只获得的经纵向修剪的肺切片(1-4个/动物)被加工成h&e染色载玻片以进行光镜评估。在这一检查过程中，显微镜检查结果被记录下来，然后传输到电子病理学报告系统(pds-ascentos-1.2.0，v.1.2)，该系统总结了肺负荷特征数据的发生率和严重性，并将结果制成了表格，并且生成了单个动物数据。对60只裸鼠的肺进行组织学检查：第1组[1001-1010]，第2组[2001-2010]，第3组[3001-3010]，第4组[4001-4010]，第5组[5001-5010]和第6组[6001-6010]。为了评估这些肺中的肿瘤负荷水平，在组织病理学检查中对肺进行评估和评分。对于每个累积的肺负荷特征诊断：1)腺癌(未分化和分化)，2)原始肿瘤细胞(低分化多形性细胞)和3)肿瘤消退，使用如下提供的指示整个肺组织的受累百分比的4分分级标准对肺进行半定量分级：0＝无证据，1＝最小(受累肺切片总面积的约1-25％)，2＝轻度(受累肺切片总面积的约25-50％)，3＝中度(受累肺切片总面积的约50-75％)，4＝显著(受累肺切片总面积的约75-100％)。组织形态计量学使用每组的前10只动物的固定左肺叶进行组织形态计量学分析。使用形态测定法(“面包片”)风格修剪来修剪组织。简单地说，修剪从距肺部颅端2至4mm的任意点开始。每个肺切片被切为约4mm厚。奇数切片放在盒1的尾部，偶数切片放在盒2内。然后处理组织切片，石蜡包埋，在4μm处切片，用苏木精和伊红(h&e)染色以进行检查。使用两种载玻片(奇数和偶数切片)来确定每只动物的平均肿瘤分数。洛夫莱斯生物医学公司(lovelacebiomedical)对来自指定动物的苏木精和伊红(h&e)染色的肺组织进行了形态计量学分析。使用hamamatsunanozoomertm扫描整个载玻片(每只动物2张，包含整个左肺的横切片)。用视觉整合系统软件(visiopharmintegratorsystemsoftware)(vis，版本2017.2.5.3857)对扫描结果进行分析。在graphpadprism5(版本5.04)中进行肿瘤面积分数的统计分析。使用整个载玻片扫描结果对所有左肺组织进行计算机化图像量化，所述图像量化被设计成量化每个载玻片上存在的肿瘤面积的量。基于细胞密度、染色强度、大小和染色强度，将用于量化肺转移瘤区域的visiopharm应用用于区分肿瘤细胞和正常肺组织。注意，这种基于简单h&e染色的定量将不是完美的(即，其不能完全区分肿瘤组织、坏死和存活的肿瘤组织的类型，并且一些正常结构可能被纳入肿瘤)。将这一过程应用于h&e切片的价值在于，其是一种不偏不倚的肿瘤定量方法。确定整块肺的面积，然后将被识别为转移瘤的结构占据的面积表示为总面积的百分比。对要分析的区域进行的以确保排除肺外结构并包括整个肺部的细微调整可以手动执行。避免其它手动操作，以确保所有组之间的一致性，并消除引入偏差的可能性。如果可能的话，发展特异性免疫组织化学染色以仅识别肿瘤组织将增加该分析的特异性。血液采集和处理尸检收集的血液通过在至少1300g、4℃下离心10分钟处理成血浆。血浆样品储存在-70℃至-90℃的温度下，直到分析或装运至赞助商。另外的形态学和免疫组织化学(ihc)研究选择了17只动物的子集以使用苏木精-伊红、马森氏三色、ae1/ae3(泛角蛋白)和cd11b(树突细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞)制备的载玻片来检查形态学和免疫组织化学(ihc)特征。这个子集包含对照动物(n＝2)和来自每个处理组的经处理动物(n＝3)。将大鼠肺块切成4μm厚，收集在带正电的载玻片上。方法根据标准方案进行h&e和马森氏三色染色。对于抗泛细胞角蛋白抗体[ae1/ae3]，将大鼠子宫从组织库中切片作为对照组。使用leicabond自动免疫染色仪和小鼠抗泛细胞角蛋白[ae1/ae3](abcam，#ab27988，批号gr3209978-1)抗体在四种不同稀释度和阴性对照物下对来自组织库的福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)大鼠子宫组织进行了优化：无一级抗体，1:50、1:100、1:200和1:400。使用徕卡键合表位检索缓冲液1(柠檬酸盐缓冲液，ph6.0)进行20分钟的热诱导抗原检索(er1(20))，使用徕卡键合表位检索缓冲液2(edta溶液，ph9.0)进行20分钟的热诱导抗原检索(er2(20))。用啮齿动物块m(biocare公司，#rbm961h，批号#062117)封闭非特异性背景。抗泛细胞角蛋白抗体[ae1/ae3]抗体使用鼠对鼠hrp聚合物(biocare，#mm620h，批号#062016)检测，并用3'3-二氨基联苯胺(dab，棕色)显现。应用苏木精核复染(蓝色)。检查优化载玻片，样品载玻片的最佳染色条件用抗泛细胞角蛋白抗体[ae1/ae3]用er2以1:50稀释度来确定(20)。对于抗cd11b抗体，使用徕卡键合自动免疫染色仪和兔抗cd11b抗体，在四种不同稀释度和阴性对照物下，对来自组织库的福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)大鼠淋巴结组织进行优化：无一级抗体，1:250、1:500、1:1000和1:2000。使用徕卡键合表位检索缓冲液1(柠檬酸盐缓冲液，ph6.0)进行20分钟的热诱导抗原检索(er1(20))，或使用徕卡键合表位检索缓冲液2(edta溶液，ph9.0)进行20分钟的热诱导抗原检索(er2(20))。使用novocastrabond精制聚合物检测法检测抗cd11b抗体，并用3'3-二氨基联苯胺(dab；棕色)显现。应用苏木精核复染(蓝色)。检查优化载玻片，用er2以1:2000稀释度用抗cd11b抗体确定ffpe组织的最佳染色条件(20)。大鼠淋巴结对照物与大鼠肺样本一起使用。研究结果临床观察、存活率和体重所有动物都存活到了指定的尸检时间点。与该模型相关的临床观察包含皮疹和呼吸困难。观察到一只动物有上腹部疝气。根据兽医的建议，将动物换成不进行吸入暴露的第1组(未经处理的对照组)，因此不需要使用暴露管约束。图13显示了研究期间的平均体重。图14显示了从第0天开始平均体重的百分比变化。在整个研究过程中，所有组的体重增长速度大致相同。abraxaneiv尾静脉注射对于接受abraxaneiv注射的组，第22、29和36天的平均剂量分别为4.94、4.64和4.46g/kg。暴露气溶胶浓度和沉积剂量总气溶胶和紫杉醇气溶胶浓度通过在每次暴露期间对gf/a滤光片取样来测量。每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为270.51μg/l和263.56μg/l。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为244.82μg/l和245.76μg/l。在每次暴露过程中监测了氧气和温度水平。剂量基于平均气溶胶紫杉醇浓度、最近的平均组体重、假定沉积分数(10％)和暴露持续时间(33分钟或65分钟)。在四周的处理期间，每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为0.655mg/kg和0.640mg/kg(1.28mg/kg/周)。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为1.166mg/kg和1.176mg/kg(2.352mg/kg/周)。粒径(mmad和gsd)使用级联冲击器根据质量中值空气动力学直径(mmad)和几何标准偏差(gsd)确定每种调配物气溶胶的粒径分布。对于20.0mg/ml的气溶胶，平均mmad为2.01μm，gsd为1.87。尸检观察结果和器官重量所有动物都存活到了指定的尸检时间点。在尸检中，每组的动物肺部都有棕褐色结节和/或红色或棕褐色斑片状变色。其它零星的观察结果包含一只动物的腹疝和另一只动物心包上的结节。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。一只动物在尸检时没有任何可见的肿瘤(结节)。图15、图16和图17通过图形方式示出了单个动物器官重量数据。与未经处理的对照组相比，在用abraxane处理的动物中的肺重量、肺与bw比率和肺与脑重量比率明显较低。每周一次的高剂量组的体重与abraxane组相似，与未经处理的对照组相比，肺重量和肺与脑比率显著降低。每周一次的低剂量组、每周两次的低剂量组和每周两次的高剂量组通常具有相似的平均肺重量和比率。形态测量学与对照组相比，所有处理组的平均肺肿瘤分数均有所下降；然而，各组之间没有统计学上的显著差异。就在横截面肺切片上检查的肿瘤面积分数而言，ivabraxane处理和任何处理方案之间也没有统计学上的显著差异。作为这种模型的典型，在肿瘤分数的所有组中，动物之间有很大的可变性。这些数据应与这个模型中的肺肿瘤负荷的其它指标结合考虑，包含用于最终解读的肺与脑重量比率和标准组织病理学检查结果。值得注意的是，对来自左叶的固定肺组织进行了形态计量分析和组织病理学检查，而对肺组织的其它分析可以对来自右叶的冷冻组织进行。图18和图19示出了平均肿瘤面积。病理学结果图20、21、22、23、24和25中显示了h&e染色的肺切片。对已确定的肿瘤细胞群进行切片检查的结果是，病理学医师确定：(1)在所有经过处理的组中，与未经处理的对照组1(2.1)相比，腺癌(未分化和分化细胞)的总体肺癌负担的严重程度略有下降(组2(1.7)、组3(1.8)、组4(1.7)、组5(1.6)和组6(1.6)。(2)与对应的对照组组1(0.9)、组2(1.0)和组3相比，组3(0.3)、组4(0.3)、组5(0.2)和组6(0.2)的严重程度降低，从而明显减少了原始肿瘤细胞群。与对应的对照组组1(0.0)和组2(0.1)相比，组3(0.6)、组4(1.0)、组5(0.8)和组6(1.0)出现肿瘤消退。肺负荷特性数据的发生率和严重程度总结在表24和图26中。表24累积肺负荷的发生率和严重程度a.严重程度级别基于1到4分的4分分级标准：1＝最低，2＝轻度，3＝中度，4＝显著b.a(0)的存在表明没有关于所述讨论病变的组织病理学证据。图20、21、22、23、24和25中示出了经h&e染色的肺载玻片的观察结果：总体观察结果：对照：大量存活的肿瘤细胞增殖，很少或没有免疫细胞浸润。abraxaneiv：许多存活的出现肿瘤块伴有一些淋巴细胞反应和一些肿瘤消退。1×每周，高：从肺中清除肿瘤，只剩下少量存活的肿瘤细胞。残留的肿块似乎是免疫细胞浸润和纤维化。2×每周，低：一些被免疫细胞浸润包围的残留肿瘤结节，包含巨噬细胞和单核细胞。2×每周，高：少数肿瘤结节具有免疫浸润和间质纤维化替代肿瘤。在通过吸入接受的动物的肺中观察到广泛的单核杀瘤细胞浸润。由于所用的模型是t细胞缺陷型的，因此细胞很可能是b细胞或nk细胞或两者。b细胞负责抗体的产生，并可通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(抗体结合表达fc受体的细胞并增强这些细胞的杀伤能力)参与肿瘤细胞的杀伤。nk细胞是天生的淋巴细胞，对杀死肿瘤细胞至关重要。在患有肿瘤的患者中，nk细胞活性降低，使得肿瘤生长。与t细胞一样，nk细胞也是某些检查点抑制剂用于增加其活性的目标。通过使用能够传递触发或抑制信号的多种表面受体，nk细胞可以监测其环境中的细胞，以确定所述细胞是否异常(肿瘤或病毒感染)并是否应通过细胞毒性消除。nk细胞的细胞毒性和趋化性可以被许多病理过程改变，包含肿瘤细胞及其副产物。响应于某些信号，这些细胞的功能被增强或加强。通过使用不同的toll样受体(tlr)响应几种病原体相关分子模式(pamp)；nk细胞可以增加细胞因子的产生和/或细胞溶解活性。细胞因子，包含il-2、il-15、il-12、il-18和ifnα/β也能改变nk细胞的活性。nk细胞不是仅能够杀死不同肿瘤细胞目标的细胞溶解效应物的简单的细胞；更确切地说，这些细胞代表了一个可以在变化的环境背景下微调这些细胞的活动的异质群体。在用处理的动物的肺中，肿瘤负荷似乎显著降低，并且低于用abraxaneiv处理的动物的肺中的肿瘤负荷。因此，纳米紫杉醇的形式的局部施用提供了另外的效力。这可能是由于随着时间的推移，化疗暴露时间越来越长，以及细胞向肿瘤部位的强烈浸润。后一种反应似乎取决于剂量密度(实际剂量和剂量频率)。特定显微照片的观察结果：图20：受试者1006(对照)腺癌-3，原始-1，消退-0。低倍放大(2×)显示未分化多形性较大间变性肿瘤细胞在肺泡间隙内或排列在肺泡隔内的总体分布。大多数细胞没有腺癌的特征，并出现在相邻的肿瘤片中。许多细胞具有嗜碱性染色胞质，而其它细胞较大且具间变性，并且含有苍白的两性染色。注意肺泡巨噬细胞的预先存在的常驻群体的存在和肿瘤消退的缺乏。图21：受试者2003(ivabraxane)腺癌-1，原始-1，消退-1。低倍放大(4×)显示肿瘤块主要分布在周边，以及多个较小的膨胀性肿瘤块充满肺泡间隙。肿瘤细胞是多形性的、大的、间变性的，并且具有苍白的两性染色，从未分化到分化的腺癌模式不等。肿瘤消退的证据出现在肿块周围，主要表现为巨噬细胞的浸润。图22：受试者2010(ivabraxane)腺癌-3，原始-1，消退-0。低倍放大(2×)显示充满大多数肺泡间隙的较大膨胀性肿瘤块以及周围的肿瘤细胞的总体分布。大多数肿瘤细胞主要是未分化的、多形性的、大的、间变性的，带有苍白的两性染色。原始细胞更小，呈卵圆形，具有更多嗜碱性染色的细胞质(具有可变的囊状细胞核和中度至显著的不等核)。炎性细胞浸润主要是中性粒细胞和巨噬细胞。这张照片显示肿瘤没有消退。图23：受试者4009(ih1×/周，高)腺癌-0，原始-0，消退-4。低倍放大(2×)显示了先前集合的肿瘤块的总体分布，在外周肺泡间隙可见多个面积较小的纤维结缔组织、中央胶原基质和纤维细胞，增厚的肺泡隔支持肿瘤消退的证据。此外，肺泡间隙通常充满了巨噬细胞和淋巴细胞的浸润以及肿瘤消退的另外的证据。图24：受试者5010(ih2×/周，低)腺癌-1，原始-0，消退-3。低倍放大(2×)显示先前填充的肿瘤块的总体分布。正在消退的块可变小且随机分布。可见纤维结缔组织填充/替代肺泡间隙，提示为退化性腺癌病灶。急性坏死、纤维结缔组织支架、巨噬细胞、巨细胞和淋巴细胞在上皮以及间质周围的混合细胞浸润是肿瘤消退的迹象。图25：受试者6005(ih2×/周，高)腺癌-1，原始-0，消退-4。低倍放大(2×)显示先前填充的肿瘤块在填充/替代肺泡间隙的纤维结缔组织的多个小区域中的总体分布，表明先前腺癌细胞浸润的病灶。肿瘤消退的证据是先前填充的肿瘤块的纤维化、中央胶原基质核心和周围填充/替代肺泡空间的纤维结缔组织、隔膜增厚以及存在填充由淋巴细胞和巨噬细胞浸润的肺泡空间的纤维细胞。另外的形态学和免疫组织化学(ihc)研究的结果在检查了研究中所有120只动物的h&e载玻片后，注意到在处理组中观察到可能的免疫应答。为了进一步研究这一发现，从每组动物中选择一个子集用于进一步的免疫组织化学评估。首先，将由病理学医师对所有120只动物进行评估的肿瘤消退趋势与由不同病理学医师对17只动物子集进行评估的肿瘤消退趋势进行比较，以显示样本大小之间的相似趋势。所有120只动物的肿瘤消退程度的初步评估是通过病理学医师使用指示整个肺组织受累百分比的分等级半定量地进行的。分级系统基于以下分级等级：0＝证据，1＝肺切片总面积的1-25％，2＝肺切片总面积的25-50％，3＝肺切片总面积的50-75％，4＝肺切片总面积的75-100％。该评估显示出现肿瘤消退的动物的发生率得分如下：未处理的对照组：0％；ivabraxane：10％；ih低剂量每周一次：55％；ih低剂量每周两次：55％；ih高剂量每周一次：55％；以及ih高剂量每周两次：65％。由单独的病理学家使用相似的半定量分级标准(0＝无证据，1＝肺切片总面积的1-19％，2＝肺切片总面积的11-50％，3＝肺切片总面积的超过50％，4＝完全消退)评估肿瘤消退对17只动物的子集进行检查。该评估显示出现肿瘤消退的动物的发生率得分如下：未处理的对照组：0％；ivabraxane：65-69％；ih低剂量每周一次：100％；ih低剂量每周两次：100％；ih高剂量每周一次：100％；以及ih高剂量每周两次：100％。这一检查(17只动物)呈现了与先前检查(120只动物)相似的模式，其中吸入组显示肿瘤消退的动物百分比最高。在对研究中的17只动物子集进行组织学检查后，发现了肿瘤消退和免疫应答的令人关注的模式。不同组之间的两个主要特征不同，特别是肿瘤消退的存在和程度以及伴随的免疫应答的存在和强度。以下是组织学检查的观察结果和备注。无处理组观察结果：图27：对照病例。顶行：h/e染色部分。底行：免疫组织化学染色。第1列：(a)腺癌的低分化区，由具有多形性细胞核、有丝分裂增加、缺乏腺分化的大细胞片构成。注意肿瘤细胞排列紧密，右下角与周围正常肺分界清晰，肿瘤周围没有纤维化包膜。(d)a显示了来自相同区域的相应角蛋白免疫染色。这表明用全细胞角蛋白对癌细胞进行了敏感和特异的标记(实线箭头)。第2列：(b)腺癌，伴有局灶性未发育的导管形成(右上方的虚线箭头)。注意中心的局部有限免疫细胞组分，其由小淋巴细胞和局部巨噬细胞(中间为实心箭头)组成。(e)cd11b染色显示肿瘤细胞结节(实线箭头)周围的nk细胞和巨噬细胞数量最少。第3列：(c)腺癌，生长在支气管相关淋巴组织(balt)的病灶附近，由密集排列的成熟小淋巴细胞(用实线箭头标记)组成。注意balt与邻近正常支气管内膜(左上角虚线箭头)的密切联系。(f)对应于在c中看到的焦点，用角蛋白染色，在癌细胞中显示阳性染色，而在淋巴细胞中缺乏染色。备注：这两只动物都表现出实体、密集的腺癌集合的均匀生长。肿瘤边缘相对清晰，与周围正常肺实质接壤，没有肿瘤消退和肿瘤细胞生长减弱的迹象。这些动物的淋巴浸润是轻度的，三级淋巴结构是稀疏的。静脉注射(iv)abraxane阳性治疗对照组观察结果：图28：ivabraxane病例(2003)显示了腺癌结节，其中肿瘤消退，包括肿瘤向结节周边分离成逐渐变小的肿瘤细胞簇和单个肿瘤细胞，并且相关的免疫细胞浸润增加。第1列：(a)侵袭性腺癌(用虚线箭头突出显示)结节的低倍视图。注意结节的不规则外周边界，这是由于肿瘤细胞在外周逐渐分离并且免疫细胞反应增强(实线箭头)导致的。(d)a显示了来自相同区域的相应角蛋白免疫染色。这清楚地显示了肿瘤细胞结节向外周(虚线箭头)逐渐变小以及其间间质(实线箭头)增加。第2列：(b)图像a中区域的高倍视图显示肿瘤细胞逐渐变小的簇(虚线箭头)。(e)d显示了角蛋白染色区域的更高倍视图，突出显示了较小的肿瘤细胞结节分离。注意，肿瘤细胞簇的大小从右上角向左下角逐渐减小，肿瘤以单个肿瘤细胞的形式出现(虚线箭头)。实线箭头突出显示免疫细胞的介入间质增加。第3列：(c)在肿瘤结节中心(虚线箭头突出显示肿瘤细胞)发现的免疫细胞(用实线箭头突出显示)。(f)cd11b染色切片的低倍视图，突出显示图像a中所发现的相同区域。这显示在结节周围和肿瘤结节内免疫细胞的密度增加(实心箭头)。虚线箭头突出显示未用cd11b抗体标记的残留癌细胞。备注：所有三只动物都在密集的腺癌集合中出现肿瘤生长，然而，其中两只动物表现出一些与肿瘤消退相一致的特征。这种消退的特征是肿瘤结节周围肿瘤细胞簇的逐渐分离和丢失，与周围正常肺实质边界界限不清。肿瘤消失区域的淋巴浸润显示间质中淋巴浸润增加。吸入性处理组观察结果：图29：吸入性病例。顶行：低剂量，1×/周(ld1x)(病例3006)。(a)h/e染色显示肿瘤消退，在结节中有明显的分离，并在外围失去肿瘤细胞(虚线箭头显示残余肿瘤，实线箭头显示有炎症的介入间质)。(b)角蛋白染色突出显示残留癌(虚线箭头)，肿瘤损失的大的介入区域(实线箭头)由背景间质和淋巴细胞及巨噬细胞构成。(c)cd11b免疫染色突出显示在肿瘤细胞脱落(实线箭头)的区域有明显的淋巴组织细胞免疫细胞浸润。残留的未染色癌用虚线箭头突出显示。第二行：低剂量，2×/周(ld2x)(病例4009)。(d)h/e染色显示无残留的活腺癌。该病例包含分散的病灶，如由背景基质中的小淋巴细胞和巨噬细胞集合构成的病灶。在这些结节中，或者在肺切片的其它位置，看不到有诊断活性的肿瘤细胞。(e)角蛋白染色在与d相同的区域，显示出缺乏染色，因此增加了用于解释无残留的活癌和完全消退的免疫组化证据。(f)cd11b染色显示该病灶有轻中度免疫细胞浸润。第三行：高剂量，1×/周(hd1x)(病例5008)。(g)h/e染色显示在外围发生明显的肿瘤细胞分离和损失的结节中的肿瘤消退(虚线箭头显示残余肿瘤，实线箭头显示有炎症的介入间质)。(h)角蛋白染色突出显示残留癌(虚线箭头)，并且肿瘤损失的大的未染色区域(实线箭头)由背景间质和淋巴细胞及巨噬细胞构成。(i)cd11b免疫染色突出显示在肿瘤细胞脱落(实线箭头)的区域有明显的免疫细胞浸润。未染色的癌残留囊袋用虚线箭头突出显示。第四行：高剂量，2×/周(hd2x)(病例6005)。(j)h/e染色显示许多集合，如含有嗜酸性和泡沫质细胞的集合(低倍)。(k)更高倍的相同区域显示细胞核呈梭形(实心箭头)的细胞，以及罕见的可能的导管样结构或再生的小血管(虚线箭头)。(l)马森三色染色显示与早期胶原纤维化和组织一致的基质蓝色染色。第五行：高剂量，2×/周(hd2x)(病例6005继续)。(m)角蛋白染色显示局灶性单细胞和导管样结构的标记(虚线箭头)。中间的细胞对角蛋白呈阴性(实线箭头)。(n)cd11b免疫染色突出显示在肿瘤细胞脱落(实线箭头)的区域有的免疫细胞浸润。此图像中的放大率与j中的放大率匹配。备注：在12只动物中，有一只动物没有残留腺癌，被解释为完全应答者(相对于非植入)。一只动物表现出难以分类，因为其含有很少的肿瘤阳性染色，很难区分为肿瘤或再生性小血管和/或再生性/萎缩性非肿瘤性肺实质。因此，这第二个病例也被解释为广泛和接近完全的应答者。在这两个病例中，免疫细胞的分散病灶位于先前被认为含有腺癌固体簇的区域。一个病例显示了组织中纤维胶原沉积的证据，其通过马森氏三色染色观察到。其余10只动物均表现出不同程度的明显肿瘤消退的肿瘤结节，10只动物中有8只在>50％的肿瘤结节中表现出肿瘤消退。吸入性组表现为淋巴浸润，这些淋巴浸润不同于具有明确的淋巴滤泡、生发中心、脉管间区和皮质旁区的致密堆积的成熟淋巴细胞的明确组织集合。以及在肿瘤结节的外围和中心的较小的密集淋巴组织集合。三级淋巴结构(tls)的观察次生淋巴器官在胚胎发生过程中作为基因预编程过程的一部分发展，主要用于启动适应性免疫应答，为罕见的抗原特异性幼稚淋巴细胞和从局部组织排出的抗原呈递细胞之间的相互作用提供场所。次级淋巴组织的器官发生也可以在成年期在第三级淋巴结构(tls)的新生淋巴过程中重现，并在受各种病理状况(包含癌症)折磨的发炎组织中形成。粘膜相关淋巴组织(如支气管相关淋巴组织)的器官发生就是这样一个实例。术语tls可以指从简单的淋巴细胞簇到容易联想到次级淋巴器官的复杂的分离结构的不同组织的结构。淋巴结和tls的一个显著区别是，在淋巴结被包裹的情况下，tls代表了局限在一个器官或组织内的免疫细胞和基质细胞的集合。观察结果：图30：处理和未处理病例中的淋巴结构。顶行：吸入性病例显示三级淋巴结构(tls)伴滤泡增生。高剂量，2×/周(hd2x)(病例6007)。(a)h/e染色显示两个相邻的tls(用实线箭头突出显示)。在肺中，这些被称为支气管相关淋巴组织(balt)。注意这些tls的器官样外观，因为其由界限分明的密集淋巴组织集合组成，具有不同的拓扑结构，其包含具有显著生发中心、淋巴滤泡间区和皮质旁区的淋巴滤泡。虚线箭头突出显示肿瘤的邻近病灶，其外围边界不规则，与肿瘤消退一致。(b)来自a中区域的更高倍图像。较小的tls含有淋巴滤泡，其具有突出的生发中心(箭头尖端的浅色区域)。淋巴滤泡中生发中心形成的这一过程被称为滤泡淋巴样增生，是淋巴组织被激活的标志，并且正在对包含外来物质和肿瘤碎片在内的各种抗原产生免疫应答。生发中心特征性地显示出淋巴细胞的亮区和暗区的极化。在这张图像中，生发中心的苍白区指向邻近的肿瘤结节。(c)角蛋白染色显示邻近的癌结节有不规则的外周边界。实线箭头显示tls。与a和b所示h/e染色的切片的tls相比，这种tls在本切片中显得更小，因为这种组织切片来自石蜡包埋组织的更深部分。第二行：对对照物(d)、ivabraxane(e)与(f)病例之间进行比较，以说明不同组中与肿瘤结节相关的较小淋巴集合的数量和密度的差异。这三幅图像的放大率都一样低(4×物镜)。(d)对照病例(1003)显示密集排列的腺癌(虚线箭头)，没有任何离散的淋巴样集合。(e)ivabraxane病例(2009)显示腺癌结节(虚线箭头)，右下方仅有一个罕见的小淋巴样集合(实线箭头)。(f)病例，高剂量2×/周(hd2x)，显示腺癌结节(虚线箭头)，伴有大量相关的中小型小淋巴细胞集合。其排列在肿瘤的外围，也集中在肿瘤(实线箭头)内。备注：与对照组和ivabraxane组(每个低倍视野1个)相比，吸入型组显示出tls的数量和密度增加(每个低倍视野2个)，并且这些tls中更多的显示出尺寸和活性增加，伴有包含显著生发中心的滤泡淋巴样增生。总之，对17只动物的次级检查呈现了一些关于肿瘤消退和免疫应答的引起关注的模式。特别地，用处理的所有动物显示出至少一些与肿瘤消退相容(包含两个动物显示出完全和/或接近完全消退)的特征，而该组中其余10个动物中的8个在>50％的肿瘤结节中显示出与肿瘤消退相容的一些特征。与没有动物显示出反应的对照组和3只动物中有2只在1-10％的肿瘤结节中显示出肿瘤消退的ivabraxane组相比，这是一种增加的反应。相互评估纳米组，较高的剂量和增加的剂量频率(2×/周相对于1×/周)都与对肿瘤反应的更大影响相关。该数据支持基于免疫的与肿瘤消退的关联，与对照组和ivabraxane组(每个低倍视野1个)相比，吸入型组也显示出tls的数量和密度增加(每个低场视野2个)，并且这些tls中更多的显示出尺寸和活性增加，伴有包含显著生发中心的滤泡淋巴样增生。在组的肿瘤结节周围和肿瘤结节内也有较高密度的免疫细胞。结论一百二十七只(127只)nih-rnu裸鼠在第1天接受x射线照射以诱导免疫抑制。在第0天，通过气管内(it)滴注给动物施用calu3肿瘤细胞。动物经历了三周的生长期。在第三周，通过体重分层将动物随机分成组。从第4周开始，第2组中的动物在第22、29和36天通过静脉(iv)给药(5mg/kg)接受每周一次的剂量。第3组和第4组的动物分别以低(0.5mg/kg)和高(1.0mg/kg)目标剂量每周(星期一)接受一次吸入(inh)剂量。第5组和第6组的动物分别接受每周两次(星期一和星期四)的低剂量(0.50mg/kg)和高剂量(1.0mg/kg)的目标吸入剂量。作为正常肿瘤细胞生长的对照组，未对第1组的动物进行处理。所有动物在第8周进行尸检。所有动物都存活到了指定的尸检时间点。与该模型相关的临床观察包含皮疹、呼吸困难。在整个研究过程中，所有组的体重增长速度大致相同。每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为270.51μg/l和263.56μg/l。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的吸入暴露平均紫杉醇气溶胶浓度分别为244.82μg/l和245.76μg/l。剂量基于平均气溶胶紫杉醇浓度、最近的平均组体重、假定沉积分数(10％)和暴露持续时间(33分钟或65分钟)。在四周的处理期间，每周一次低剂量组和每周两次低剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为0.655mg/kg和0.640mg/kg(1.28mg/kg/周)。每周一次高剂量组和每周两次高剂量组的平均达到的啮齿动物沉积剂量分别为1.166mg/kg和1.176mg/kg(2.352mg/kg/周)。对于接受iv注射的组，第22、29和36天的平均剂量分别为4.94、4.64和4.46g/kg。在预定的尸检中，每组的大多数动物肺部都有棕褐色结节和/或红色或棕褐色斑片状变色。其它零星的观察结果包含一只动物的腹疝和另一只动物心包上的结节。尸检中未发现其它异常肉眼观察结果。与未经处理的对照组相比，在用abraxane处理的动物中的肺重量、肺与bw比率和肺与脑重量比率明显较低。每周一次的高剂量组的体重与abraxane组相似，与未经处理的对照组相比，肺重量和肺与脑比率显著降低。与阳性对照组1和经abraxane处理比较组2相比，通过较低的肺/脑重量比和较低的总体肺肿瘤负荷来测量，具有治疗效果，且没有明显的不良事件。用吸入型处理的肺部肿瘤负荷的组织学分析显示肿瘤块减少，原始肿瘤细胞群减少，肿瘤消退增加。在通过吸入接受的动物的肺中观察到广泛的单核细胞浸润。由于所用的模型是t细胞缺陷型的，因此细胞很可能是b细胞或nk细胞。据推测，肿瘤对的局部、可能更高浓度的暴露影响了引起环境改变以将单核细胞浸润到肺中的肿瘤。实例14—人膀胱癌(um-uc-3)小鼠异种移植研究进行了一项研究，以评价瘤内注射(it)施用(如本文所公开的纳米颗粒多西紫杉醇，在该实例中使用的约99％的多西紫杉醇的平均粒径(数)为1.078微米，ssa为37.2m2/g，并且体积密度(未振实)为0.0723g/cm3)悬浮液每周1次、每周2次和每周3次(施用周期)对免疫缺陷(hsd：无胸腺裸鼠-foxn1nu裸)小鼠中皮下(sc)um-uc-3膀胱癌细胞系(atcc-crl-1749)肿瘤生长的影响。肿瘤内注射施用媒剂和静脉(iv)施用多西紫杉醇溶液也作为对照组纳入研究。将1×107个细胞(100μl体积)的肿瘤植入右胁腹(pbs1:1，基质胶：bd356234)中。用卡尺测量肿瘤体积。公式：v＝(r长*r宽*r高)*π*4/3。动物每周称重2×。肿瘤体积在肿瘤植入后每3至4天(总共约20次测量)和安乐死当天测定。在植入后2、3和4周以及安乐死当天获得肿瘤的照片图像。一旦肿瘤达到3,000mm3的大小或达到显著的肿瘤溃疡的程度，就对动物实施安乐死。在安乐死的时候，肿瘤被隔离并分成两半。一半的肿瘤被快速冷冻在在-80℃下储存的ln2中，随后进行分析。第二部分肿瘤固定在福尔马林中。制备了两个h&e染色的载玻片/肿瘤(至多处理了4个肿瘤/组)。在肿瘤植入后的第18天，当平均肿瘤大小在50-325mm3之间时，将动物分成平均肿瘤大小相等的五个组，并如下表25所示进行处理。表25主要研究设计对于it施用(媒剂/)，在肿瘤内的三个部位施用注射(使用27g，1/2"针)(基于40mg/ml原料和25g小鼠＝63μl的总计算注射体积；均匀分布在三个注射位点上)以使测试调配物最大程度的分布在整个肿瘤中。第二次处理(第2周期)在第一次处理(第1周期)后7天进行，第三次处理(第3周期)在第一次处理后14天进行。多西紫杉醇溶液iv通过尾静脉施用。试验调配物如下制备：载剂(对照)：用1.5ml生理盐水(0.9％注射用氯化钠，usp)稀释1ml1％聚山梨醇酯80/8％乙醇的生理盐水(0.9％注射用氯化钠)复溶溶液。媒剂中聚山梨醇酯80的最终浓度为0.4％，乙醇的最终浓度为3.2％。悬浮液：将1ml1％聚山梨酯80/8％乙醇/生理盐水(注射用0.9％氯化钠)复溶溶液加入一小瓶颗粒粉末(100mg/60cc小瓶)。颗粒粉末的平均粒径(数值)为1.0微米。用手用力摇晃小瓶，倒置1分钟。摇动后，立即向小瓶中加入1.5ml生理盐水溶液(注射用0.9％氯化钠(usp))，然后再用手摇动小瓶1分钟，制成40mg/ml悬浮液。使悬浮液静置至少5分钟，以减少夹带的空气和泡沫。多西紫杉醇溶液：在50％乙醇/50％聚山梨酯80中制备20mg/ml多西紫杉醇储备溶液。向储备溶液中加入生理盐水溶液(注射用0.9％氯化钠)，制成最终的3mg/ml多西紫杉醇溶液。涡旋混合。结果：在研究期间(61天)，肿瘤体积每周测定2×。图31、图32、图33、图34、图35、图36、图37、图38、图39和图40中示出了研究结果。如图31所示，对于it2周期和it3周期的剂量，肿瘤体积减小并且肿瘤被有效消除。对于it1周期和多西紫杉醇iv3周期的剂量，肿瘤体积最初减少，但随后增加。图32、图33、图34、图35、图36、图39和图40中也反映了这些观察结果。图37中的散点图示出了处理第1天与研究结束(牺牲日)时每只动物的肿瘤体积。从图37中可以看出，研究结束时给定动物的肿瘤体积不依赖于用it2个周期和it3个周期处理的动物的相同动物的肿瘤的初始大小，因为基本上所有的肿瘤都被有效地消除了。然而，对于用多西紫杉醇iv3个周期处理的动物，研究结束时的肿瘤体积通常取决于给定动物的初始肿瘤体积，即初始肿瘤体积越大，研究结束时的肿瘤体积越大。多西紫杉醇iv3个周期的处理在治疗小肿瘤时有些效果，但在治疗大肿瘤时效果不太好。无论初始肿瘤大小如何，施用it(瘤内)2个周期或3个周期均可有效治疗肿瘤。从图38中可以看出，用多西紫杉醇iv3周期处理的动物的初始动物体重减轻通常大于用it1周期、it2周期和it3周期处理的动物。在所有处理中，体重最终恢复到一定程度。这可能表明多西紫杉醇iv施用比it施用的初始食欲下降的副作用更大。还观察到用多西紫杉醇iv3个周期处理的动物比用it3个周期处理的动物具有更大的周围神经病变迹象，并且在用it1个周期或2个周期处理的动物中没有观察到周围神经病变迹象。在死亡或安乐死的当天，收集肿瘤组织样品并冷冻在ln2中用于多西紫杉醇分析、组织学和免疫组织化学(ihc)观察。在iv多西紫杉醇对照组中，只有1个肿瘤(在7个测量的肿瘤中)的多西紫杉醇水平高于测定的定量限度(1ng/g)。在来自it组的所有肿瘤中发现了可测量水平的多西紫杉醇，其中3周期组倾向于在肿瘤中保留最高浓度的多西紫杉醇(见图41)。图42-52示出了组织学切片、h&e染色的显微照片。图53、图54和图55示出了用f4/80抗体染色剂染色的ihc载玻片的显微照片。图42到52中显微照片的组织学概述总体观察结果：对照：大量存活的肿瘤细胞增殖，很少或没有单核免疫细胞浸润，偶尔出现巨噬细胞。多西紫杉醇溶液：许多存活的出现的肿瘤块伴有一些巨噬细胞和偶见的淋巴细胞反应以及一些肿瘤坏死。2个周期：一些残留的分离肿瘤细胞，小面积皮肤损伤，可见疤痕/纤维化，免疫细胞浸润(包含巨噬细胞和单核细胞)。3个周期：一些残留的分离肿瘤细胞，小面积皮肤损伤，可见疤痕/纤维化，免疫细胞浸润(包含巨噬细胞和单核细胞)。在接受肿瘤内注射的动物中，在皮下空间的肿瘤植入部位观察到广泛的单核细胞浸润。随着周期数量的增加，肿瘤反应增加，但也有一些皮肤损伤，可能是由于裸鼠侧面注射的空间小且面积浅(例如，肿瘤紧靠着紧紧套在肿瘤上的皮肤)。由于所用的模型是t细胞缺陷型的，因此淋巴细胞很可能是b细胞或nk细胞。b细胞负责细胞毒性的产生(抗体结合表达fc受体的细胞并增强这些细胞的杀伤能力)。nk细胞是天生的淋巴细胞，对杀死肿瘤细胞至关重要。在患有肿瘤的患者中，nk细胞活性降低，使得肿瘤生长。与t细胞一样，nk细胞也是某些检查点抑制剂用于增加其活性的目标。在提供的所有组织学样品中，肿瘤中存在巨噬细胞，但数量似乎没有显著增加。通过使用能够传递触发或抑制信号的多种表面受体，nk细胞可以监测其环境中的细胞，以确定所述细胞是否异常(肿瘤或病毒感染)并是否应通过细胞毒性消除。nk细胞的细胞毒性和趋化性可以被许多病理过程改变，包含肿瘤细胞及其副产物。响应于某些信号，这些细胞的功能被增强或加强。通过使用不同的toll样受体(tlr)响应几种病原体相关分子模式(pamp)；nk细胞可以增加细胞因子的产生和/或细胞溶解活性。细胞因子，包含il-2、il-15、il-12、il-18和ifnα/β也能改变nk细胞的活性。nk细胞不是仅能够杀死不同肿瘤细胞目标的细胞溶解效应物的简单的细胞；更确切地说，这些细胞代表了一个可以在变化的环境背景下微调这些细胞的活动的异质群体。在用处理的动物中，异种移植物注射部位的肿瘤负荷显著降低，并且瘤内注射比静脉注射多西紫杉醇更有效。因此，多西紫杉醇的形式的局部施用提供了另外的效力。这可能是由于随着时间的推移，化疗暴露时间越来越长，以及细胞向肿瘤部位的强烈浸润。后一种反应似乎取决于剂量密度(实际剂量和剂量频率)。在解剖学上，巨噬细胞大量存在于肿瘤边缘，在肿瘤内更深的间质中出现的频率降低。图53、图54和图55的免疫组织化学概述图53：大片存活的肿瘤细胞，没有单核免疫细胞(没有棕色染色)。图54：在大量存活的肿瘤细胞中，肿瘤细胞破坏很少，分散的单核免疫细胞很少。图55：几乎没有肿瘤细胞留下，大量单核免疫细胞组织成不同的模式(可能主要是巨噬细胞)。实例15—人肾细胞腺癌大鼠异种移植模型中的药物功效研究进行了一项用于确定在人肾细胞腺癌的大鼠异种移植模型中通过瘤内注射施用的(纳米颗粒紫杉醇)悬浮液和(纳米颗粒多西紫杉醇)悬浮液的药效的非glp研究。目的本研究的目的是在人肾细胞腺癌(786-o细胞系)(crl-1932tm)的斯普拉-道来氏rag2/il2rg裸鼠异种移植模型中研究在一段时间内通过瘤内注射(it)施用的(纳米颗粒紫杉醇)悬浮液和(纳米颗粒多西紫杉醇)悬浮液的潜在功效。将五到七周龄的srg大鼠皮下接种中的500万个786-o细胞进行肿瘤异种移植。一旦肿瘤体积达到150-300mm3，将大鼠在滚动的基础上登记到由测试物品(it施用)、阳性对照物(紫杉醇和多西紫杉醇；静脉(iv)施用)和媒剂对照物(it施用)组成的处理组中，然后监测肿瘤生长或消退。细胞培养细胞系：786-o细胞系(crl-1932tm)。将细胞储存在液氮中。解冻后，将细胞在37℃、5％co2下培养。在将细胞准备用于移植之后，将其保存在冰上直到注射。细胞培养条件：将细胞在rpmi1640(gibco#410491-01)+10％fbs中在37℃、5％co2下在组织培养处理瓶中培养。细胞在接种前扩增2-3周。atcc(www.atcc.org/products/all/crl-1932.aspx)进行细胞解冻、培养和传代。细胞接种：每只大鼠5×106个细胞；皮下左后侧，背侧。接种媒剂：总体积为0.5ml的50％cultrexbme3型(trevigen#3632-001-02；一种基底膜基质(如)，配制用于体内肿瘤生长)50％培养基。细胞悬浮液以1:1与10mg/mlcultrex混合，最终浓度为5mg/mlcultrex。最终接种量为500μl。测试物品的制备(和悬浮液)药物：60ml小瓶306mg(纳米颗粒紫杉醇粉末，在该实例中使用的约98％紫杉醇的平均粒径(数值)为0.878微米，ssa为26.7m2/g，体积密度(未振实)为0.0763g/cm3)；60ml小瓶100mg(纳米颗粒紫杉醇粉末，在该实例中使用的约99％多西紫杉醇的平均粒径(数值)为1.078微米，ssa为37.2m2/g，体积密度(未振实)为0.0723g/cm3)。对于悬浮液(最终浓度：20mg/ml和0.32％聚山梨醇酯80，在生理盐水溶液中—最终体积：15.3毫升/瓶)：使用带有无菌18号针头或更大针头的无菌注射器，将5.0ml无菌的1％聚山梨酯80重构溶液加入60ml粉末小瓶(含有306mg粉末)。用力用手摇动小瓶，并将小瓶倒置，以确保粘附在小瓶和塞子内部的所有颗粒都被弄湿。继续摇动1分钟，并检查悬浮液中是否有任何大的颗粒块。摇动后，立即使用带有18号或更大的无菌针头的无菌注射器向小瓶中添加10.3ml生理盐水溶液(注射用0.9％氯化钠溶液)，并手动摇动小瓶1分钟。定期检查悬浮液中是否有可见的大块物质。如果存在，继续手工混合，直到悬浮液被适当分散。混合后，使悬浮液静置至少5分钟，以减少夹带的空气和泡沫。对于悬浮液(最终浓度：20mg/ml0.20％聚山梨酯80和1.6％乙醇/生理盐水溶液-最终体积：5毫升/瓶)：使用带有无菌18号针头或更大针头的无菌注射器，将1ml无菌的1％聚山梨酯80/8％乙醇重构溶液加入60ml粉末小瓶(含有100mg粉末)。用力用手摇动小瓶，并将小瓶倒置，以确保粘附在小瓶和塞子内部的所有颗粒都被弄湿。继续摇动1分钟，并检查悬浮液中是否有任何大的颗粒块。摇动后，立即使用带有18号或更大的无菌针头的无菌注射器向小瓶中添加4ml生理盐水溶液(注射用0.9％氯化钠)，并手动摇动小瓶1分钟。定期检查悬浮液中是否有可见的大块物质。如果存在，继续手工混合，直到悬浮液被适当分散。混合后，使悬浮液静置至少5分钟，以减少夹带的空气和泡沫。瘤内(it)媒剂：(最终浓度：0.2％聚山梨醇酯80和1.6％乙醇的生理盐水溶液)：每1ml1％聚山梨醇酯/8％乙醇重建溶液用4ml生理盐水溶液(注射用0.9％氯化钠)稀释。阳性对照调配物的制备药物：多西紫杉醇：cas114977-28-5，紫杉醇：cas33069-62-4。纯度>97％对于多西紫杉醇溶液：制备20mg/ml多西紫杉醇/50％乙醇溶液:50％聚山梨酯80中的溶液。涡旋混合。加入生理盐水稀释成3mg/ml多西紫杉醇溶液。对于紫杉醇溶液：使用散装紫杉醇制成50％6mg/ml调配物。乙醇：50％氢化蓖麻油el。根据需要涡旋混合。加入生理盐水稀释成3mg/ml紫杉醇溶液。涡旋混合。测试系统物种/品种：大鼠(褐家鼠)/rag2-i-；在斯普拉-道来氏背景上为112rg-i-。动物数量/大约年龄和体重：六十只健康大鼠(30只雄性和30只雌性)被指定用于该研究，并用于异种移植物发育。当达到所需的肿瘤体积时，总共至少有54只携带肿瘤的动物被登记用于处理(27只雄性和27只雌性)。这些动物在同一天以交错的批次接种了786-0细胞，等待动物的供应。研究开始时，动物大约5-7周大。大约重量是150-275g。当肿瘤大小达到150-300mm3时，以滚动方式将动物纳入处理组。处理组的组织、剂量水平和治疗方案下表26显示了研究小组的安排。表26*每组分配3名雄性大鼠和3名雄性大鼠。**it剂量最多为6次等体积注射，均匀分布在肿瘤部位。治疗方案：所有发展成体积达到150-300mm3的肿瘤的大鼠都被纳入处理。当肿瘤>150mm3时，所有处理将在接种后7天开始。第3、4和5组大鼠接受第7、8和9组大鼠接受第3组和第7组仅在分期日(处理的第一天)接受it注射，第4组和第8组在分期日和处理开始后7天接受it注射，第5组和第9组在分期日、处理开始后7天和14天接受it注射。在第2组(紫杉醇)和第6组(多西紫杉醇)大鼠开始治疗后的第7天和第14天，通过尾静脉注射静脉内施用阳性对照试验物品(紫杉醇和多西紫杉醇)。在分期日、第1组动物开始处理后的第7天和第14天通过it注射施用媒剂对照物。施用方法：根据给药组，使用无菌针头和注射器，通过it注射或iv注射施用试验物品和媒剂。所有iv注射都使用27g针头施用。当肿瘤完整时，将it注射分6次注射分布到整个肿瘤中，如果肿瘤溃疡，则分3次注射。原始数据中记录了所有给药日内每个肿瘤的it注射次数。媒剂、和的剂量体积为1ml/kg，紫杉醇和多西紫杉醇的剂量体积为1.67ml/kg。对于第6组，多西紫杉醇的剂量改为2.5ml/kg，剂量体积减少至0.835ml/kg。在剂量施用时，在剂量去除之前立即将和小瓶轻轻倒置5-10次，以确保悬浮液的均匀性。使用带有无菌18号*针头或更大口径的无菌注射器，倒置小瓶并将针头插入倒置小瓶的隔膜中。抽出刚好超过所需悬浮液的量，从小瓶中取出针头，并调整至所需的体积。重新盖上针头。*注：对于it注射，使用27g针头进行施用。在肿瘤上以z型(穿过顶部、对角穿过、然后穿过底部)施用it注射，并在每次给药后逆转。注射时针头斜面朝下，以尽量减少注射后ta的渗漏。在进针前和注射过程中，皮肤也被稍微向后拉，以最大限度地减少注射后的ta泄漏。已努力确保所有动物和给药日的it注射施用模式一致。重构后1小时内使用24小时内使用阳性对照物和多西紫杉醇被保持在室温，并在配制后8小时内使用，而紫杉醇在重构后被保持在温水中，并在20分钟内使用。观察结果：个体体重：从接种时开始，每周三次(m、w、f)。个体肿瘤体积：从肿瘤接种后的第二天开始，每天对动物进行触诊。用数字卡尺测量肿瘤的长度和宽度，并从肿瘤体积达到50mm3时开始记录，此时每周测量肿瘤三次(m、w、f)并在尸检时进行记录。肿瘤体积(mm3)计算为＝(l×w2)/2，其中‘l’是最大直径。肿瘤成像：在处理开始前的分期日以及处理开始后的第7、14、21、28、35和42天拍摄所有肿瘤的照片。在研究结束前，对所有大鼠(包含到达终点的动物)进行尸检时，还拍摄了另外的肿瘤照片。所有的照片都是在动物前后方向拍摄的，并带有一个说明动物i.d、研究日期和日期的照片标签。用于分析的血样采集：在研究结束时(即开始治疗后50天)，从所有经处理动物的尾部或颈静脉采集200-250μl的血液。预定尸检：所有动物在处理开始后50天进行尸检。第0天为肿瘤接种日。解剖病理学：宏观检查：在开始处理后50天，对所有自然死亡的动物进行尸检，在极端情况下或在预定的尸检中实施安乐死。在极端情况下或研究结束时实施安乐死的动物通过吸入co2进行安乐死。尸检包含检查外表面、所有孔口以及胸腔、腹腔和盆腔(包含内脏)。尸检时，收集最终体重和身体状况评分。组织收集：原发性肿瘤(接种部位)—在切除前进行最终肿瘤测量。切除后将肿瘤称重。每个肿瘤的大约1/2(基于视觉评估)被快速冷冻在干冰上的2-甲基丁烷中，在快速冷冻之前尽可能称重肿瘤块。其余的固定在10％中性缓冲福尔马林中。还从未达到登记量的动物中收集了肿瘤。继发性肿瘤—收集任何肿瘤可见的器官，并将其固定在10％中性缓冲福尔马林中。将福尔马林固定的组织在室温下储存。冷冻组织在-80℃下保存。所有组织保存长达3个月。所有肿瘤的照片；如果存在原发性和继发性肿瘤，则拍照。显微镜检查：用10％nbf固定的组织被包埋在石蜡中。每个肿瘤被切成2-3块、包埋并切片在一起。对于每一个肿瘤，制备了3个载玻片，并用h&e染色。图56、图57、图58和图59中分别显示了未处理、媒剂对照物(it)3个周期、多西紫杉醇(iv)3个周期和(it)3个周期的雌性大鼠的初步组织切片的显微照片。对来自多西紫杉醇组的动物的福尔马林固定的组织进行了另外的h&e评估和免疫组织化学(ihc)评估，如图60和61所示。图57、图58和图59中显微照片的组织学概述媒剂对照物(it)3个周期，图57：显微照片显示被细胞外基质包围的多/双核肿瘤细胞的“包”。多西紫杉醇(iv)3个周期，图58：显微照片显示在媒剂对照物中观察到的形态相似的活肾细胞癌“包”：无差异。(it)3个周期，图59：显微照片显示单核细胞条带代表对肿瘤细胞的强免疫应答。存在一些死亡的肿瘤或垂死的肿瘤，其特征是细胞的“鬼影”(显示在单核免疫细胞带的左侧)。在单核细胞带的右边是被“零星”单核免疫细胞覆盖的“鬼影”。多西紫杉醇组另外的h&e和免疫组织化学(ihc)评估观察结果：图60对照病例。顶行：h&e染色部分。底行：免疫组织化学染色。第1列：(a)肾细胞癌，由紧密排列的内聚性簇和具有多形性细胞核和可见核仁的大型肿瘤细胞索构成。注意含有分散的小血管(左下方虚线箭头)的最小介入基质。请注意图像顶部的多核癌细胞(实心箭头)。(d)角蛋白(ae1/ae3)免疫染色在a所示的相同的肿瘤上进行。这表明用全细胞角蛋白(实心箭头)对癌细胞进行了敏感和特异的标记。第2列：(b)肿瘤细胞坏死的病灶区，由均匀均质的无定形嗜酸性物质构成(虚线箭头)。注意这个病灶的离散性质，它与周围存活的癌细胞(实线箭头)有明显的分界。这是对照组典型的坏死现象。它存在于肿瘤的中心区域，占肿瘤面积的不到5％。(e)cd68染色(巨噬细胞标记)突出显示图像b中显示的相同区域。这显示存活癌中的巨噬细胞数量有限(实线箭头)，并且坏死病灶中的巨噬细胞显著增加(虚线箭头)。后一发现说明了坏死碎片吞噬作用的巨噬细胞特性。第3列：(c)肿瘤周围非肿瘤间质中数量有限的小淋巴细胞(虚线箭头)。注意右上角的上皮癌(实心箭头)。在对照组中，肿瘤本身通常只有很少的淋巴细胞，肿瘤周围的软组织通常含有轻度的淋巴浸润。(f)与图中用cd11b染色的焦点对应的焦点显示淋巴细胞(虚线箭头)中的阳性染色。注意右上角的上皮癌(实心箭头)。备注：两个对照病例在形态学和免疫组化水平上显示了相似的研究结果。两者都包含一个浸润性癌的致密结节，该结节与周围的正常间质组织有明显的分界，并且没有离散的、形态良好的纤维包膜。在肿瘤结节内，癌细胞被排列成小的有组织的肿瘤细胞簇和索，这些细胞被紧密堆积在一起，中间有极少量的气孔，其中含有压缩的小血管(图60-载玻片a)。肿瘤细胞较大，具有多形性细胞核，细胞核内有小泡状染色质和明显的嗜酸性核仁，在100×放大率(10×目镜和10×物镜)下清晰可见。细胞核包含圆形和梭形，并存在散在的多核巨大肿瘤细胞(图60-载玻片a)。肿瘤细胞具有丰富的轻度嗜酸性和透明的细胞质，并且其显示出增加的有丝分裂活性(13个有丝分裂/10个高倍视野[400×hpf])。存在凝固性肿瘤细胞坏死的分散的离散病灶，这些病灶在肿瘤结节的中心部分更常见(图60-载玻片b)。坏死灶由均质的嗜酸性坏死碎片组成，所述碎片与周围存活的肿瘤细胞有较好的分界。坏死灶占肿瘤细胞面积不到5％。全细胞角蛋白(ae1/ae3)的免疫组织化学染色突出了肿瘤细胞，并显示出细胞质和膜的定位(图60-载玻片d)。角蛋白标记是强的、敏感的和特异的，在阳性染色的肿瘤细胞和阴性染色的周围非癌组织之间有明显的分界。在两个对照组动物中没有发现明显的肿瘤消退。肿瘤内没有明显的淋巴浸润，特别是在肿瘤组织或周围的非肿瘤间质组织中没有离散的小淋巴集合或三级淋巴结构(tls)。周围的基质含有由分散的小淋巴细胞构成的斑片状轻度淋巴浸润，这些淋巴细胞主要排列成单细胞(图60-载玻片c)。cd11b(nk细胞和组织细胞的标记)的免疫组织化学染色突出了周围非肿瘤间质中的轻度免疫细胞浸润(图60-载玻片f)；然而，肿瘤内没有明显的淋巴组分。cd68(巨噬细胞的标记)的免疫组织化学染色突出了肿瘤内和肿瘤周围的轻度巨噬细胞浸润，在肿瘤坏死灶内染色密度增加，与含有增加的细胞碎片的区域中巨噬细胞的增加一致(图60-载玻片e)。观察结果：图61：肿瘤内病例(所有组的代表性图像包含：1个周期、2个周期和3个周期)。顶行：单周期(1×)(病例750-258)。(a)低倍h&e染色显示大量的地理肿瘤细胞坏死，包括无活性坏死物质(实线箭头)的均匀嗜酸性染色。注意由坏死碎片和混合免疫细胞的密集带组成的中央垂直线(虚线箭头)。(b)分界线的高倍视图。注意免疫细胞和混合碎片(右侧虚线箭头)的密集集合。在图像的左边，有大量坏死物质，没有存活的肿瘤细胞(实线箭头)。(c)对应于图像a左半部分的坏死中心部分的高倍视图。实线箭头指向坏死肿瘤细胞的重影轮廓。虚线箭头突出显示了退化的小血管。第二行：单周期(1×)(病例750-258)。每张图像都对应于关于其的h&e图像。(d)图像a中所观察到的区域的cd11b免疫染色。这突出了坏死碎片和免疫细胞浸润的中央带中免疫细胞的密集集合。这种染色也突出了右侧周围组织中的免疫细胞反应，但左侧肿瘤坏死的中央区域炎症程度较轻。(e)角蛋白染色显示与b中相同的区域。这表明完全没有染色，因此增加了强有力的免疫组织化学整证据来解释该区域没有残留的活癌。(f)图c所示坏死中心区域的角蛋白染色。这显示坏死的重影细胞轮廓(实线箭头)中退化角蛋白丝的角蛋白标记，这支持了存活的癌随后发生完全退化和坏死的假设；然而，在这个区域没有残留的活的肿瘤细胞(缺少活的细胞核在上面的h&e图像中最清楚)。第三行：两个周期(2×)(病例748-827)。(g)h&e染色显示存活癌(实线箭头的残余病灶为0.9mm，周围有大量坏死物质(虚线箭头)。(h)较高倍镜下相同的癌灶显示有存活的肿瘤细胞，并保留细胞核(实线箭头)。注意存活肿瘤细胞向左下角逐渐消失(虚线箭头)。(i)同一病灶的更高倍视图显示存活肿瘤的前缘(实线箭头)和肿瘤细胞死亡的邻近区域。在这里，处于细胞死亡进行阶段的肿瘤细胞的残余通过细胞核的逐渐丢失和离散的细胞质膜轮廓的丢失来证明(虚线箭头)。第四行：两个周期(2×)(病例748-827)。每张图像都对应于关于其的h&e图像。(j)角蛋白染色的低倍视图，图像左上角为残留的存活癌的焦点(实线箭头)。这个病灶周围缺乏角蛋白染色(虚线箭头)，显示坏死物质的范围。(k)相同的角蛋白染色的肿瘤的更高倍视图，显示了用角蛋白抗体强烈标记的活的有核癌细胞(实线箭头)和角蛋白染色阴性的周围坏死组织(虚线箭头)。(l)相同区域的角蛋白染色，显示从右上角(实线箭头)的有核角蛋白阳性的活癌细胞向左下角(虚线箭头)的不同坏死阶段的肿瘤细胞进行性转变。后者包含肿瘤细胞的清晰的重影轮廓，所述轮廓显示残余退化肿瘤细胞角蛋白中间丝的角蛋白标记；然而，这些细胞是不活的。这支持了这样一种印象，即存活癌周围的坏死物质先前含有存活癌，随后在治疗后死亡。第五行：三个周期(3×)(病例748-822)。(m)低倍h&e染色切片显示右侧致密的无定形坏死(实线箭头)，其与左侧周围退化的纤维脂肪组织区域由坏死碎片和混合的免疫细胞带(虚线箭头)所分界。(n)坏死区域的高倍视图显示没有活的有核癌细胞(实线箭头)。(o)图像n中相同区域的角蛋白染色切片，显示完全没有染色(实线箭头)，因此进一步支持治疗后该区域没有癌。备注：肿瘤内1周期：这一组中的三只动物中有两只含有残留的活的侵袭性癌。当在h/e染色的载玻片上测量时，与对照组、it媒剂组和iv多西紫杉醇组(范围为9-15mm，其中大多数在载玻片上的最大横截面尺寸接近15mm)相比，这些肿瘤尺寸明显较小(载玻片上的最大横截面尺寸高达5mm)。在存在的情况下，这两个it病例中肿瘤细胞的形态与上述非it多西紫杉醇组中所见的形态基本相同。两个it病例都没有足够的无活性肿瘤或非肿瘤间质来评估周围的坏死，尽管其中一个病例确实有一个占提交组织<5％的局灶性周围坏死边缘。与对照组相似，在周围的非肿瘤间质组织(在可评估的情况下)中，仅存在与这些肿瘤相关的轻度免疫细胞浸润，这通过cd11b免疫染色突出。在检查的切片中没有发现三级淋巴结构(tls)。该组中的第三只动物显示没有存活的残余侵袭性癌和大量的地理肿瘤细胞凝固性坏死。大面积坏死与周围的间质纤维、脂肪和骨骼肌组织混合在一起。在某些区域，无定形坏死和邻近退化的纤维脂肪组织之间有一条分界线，这是由坏死碎片和混合免疫细胞组成的密集带(图61-载玻片a和b)。在h/e染色切片检查中未发现诊断活性肿瘤细胞(图61-载玻片b)；然而，在无定形坏死物质的中心部分，有一个小的区域，在该区域注意到核坏死肿瘤细胞的重影轮廓(图61-载玻片c)。这也在角蛋白染色的切片上突出显示，其中角蛋白抗体标记了坏死细胞轮廓中退化的角蛋白丝(图61-载玻片f)。此外，在退化和坏死的纤维脂肪组织中，该动物的角蛋白染色切片显示出与退化角蛋白中间丝的组织细胞吞噬一致的局灶性细胞质标记。重要的是，角蛋白染色没有显示活的癌细胞的离散细胞质膜标记，也没有显示任何角蛋白标记的诊断活肿瘤细胞的集合。在一些区域，大量的蓝色颗粒物质集合成小的均质结构，这暗示了营养不良的钙化。这种颗粒物质很难确定，鉴别诊断包含颗粒坏死碎片和钙、退化的骨骼肌纤维和纳米颗粒。在肿瘤完全消退的动物中，cd11b的免疫组织化学染色通过非肿瘤组织中的适度大噬细胞浸润而突出，cd11b染色也突出了碎片和混合炎症的区域(图61-载玻片d)。cd68(组织细胞的标记)的免疫组织化学染色突出了一种中度的大噬细胞浸润。在三只动物中没有发现tls。肿瘤内2个周期：这一组中的三只动物(750-254和748-827)中有两只含有残留的活的侵袭性癌。当在h&e染色的载玻片上测量时，与对照组、it媒剂组和iv多西紫杉醇组(范围为9-15mm，其中大多数在载玻片上的最大横截面尺寸接近15mm)相比，这些肿瘤尺寸明显较小(载玻片上的最大横截面尺寸分别为3mm和0.9mm)。在两个具有残留癌的it病例中，残留的存活侵袭性癌的小病灶周围存在大量的地理肿瘤细胞坏死(图61-载玻片g、h和i)。对这些残留肿瘤中较小肿瘤的更高倍h&e染色切片和角蛋白染色切片的检查显示从存活癌细胞到坏死癌细胞的进行性转变，坏死癌细胞通过用全细胞角蛋白免疫染色标记其残留的变性角蛋白中间丝来鉴定(图61-载玻片i和l)。在具有两个残留癌的动物中，cd11b的免疫组织化学染色突出了坏死组织中的中度免疫细胞浸润。cd68(组织细胞的标志)的免疫组织化学染色突出了两个病例中坏死区域内中等程度的巨噬细胞浸润。该组中的第三个病例(748-826)显示了大量的地理肿瘤细胞凝固性坏死，在h&e或角蛋白染色切片上未发现残留的存活浸润性癌。cd11b的免疫组织化学染色突出了一种斑片状的中度免疫细胞浸润。cd68(巨噬细胞的标记)的免疫组织化学染色突出了一种斑片状的中度巨噬细胞浸润。在三只动物中没有发现tls。肿瘤内3个周期：该组中的两个病例(748-797和748-822)均显示大量的地理肿瘤细胞凝固性坏死，在h&e或角蛋白染色切片上未发现残留的存活浸润性癌(图61-载玻片m-o)。cd11b的免疫组织化学染色分别在两只动物的坏死组织中突出了中等和显著的免疫细胞浸润。cd68(组织细胞的标记)的免疫组化染色分别在这两个病例中突出了坏死区域内的轻度和显著的巨噬细胞浸润。在这两只动物中没有发现tls。注：处理组的动物患有白色“钙化”区域的肿瘤，可能是由于肿瘤内残留的纳米粒子沉积造成的。另外的观察结果：(无图)it媒剂组：两个肿瘤内媒剂病例在形态学和免疫组化水平上显示了相似的研究结果，并且两者在形态学和免疫组化方面与对照组基本相同。iv多西紫杉醇：两个肿瘤内iv多西紫杉醇病例在形态学和免疫组化水平上显示了相似的研究结果，并且两者的形态学和免疫组化表现与对照组和it媒剂组基本相同。紫杉醇组和多西紫杉醇组的肿瘤体积结果：对动物称重，在58天内和尸检时用数字测径器每周测量肿瘤的长度和宽度三次。肿瘤体积(v)如下计算：v(mm3)＝((l*w2))/2其中，l是肿瘤的最大直径，w是肿瘤的宽度(单位为mm)。使用study进行肿瘤体积和体重的统计分析。图62示出了紫杉醇组的平均肿瘤体积结果。图63示出了多西紫杉醇组的平均肿瘤体积结果。从图中可以看出，it和it都有效地治疗了肿瘤。关于多西紫杉醇组的肿瘤体积结果，在接种后2天观察到雄性动物和雌性动物的第一个可测量肿瘤。未处理和媒剂对照物处理的肿瘤在整个治疗过程中持续生长，雌性大鼠的最终体积为从5656mm3到小于10,000mm3。与媒剂对照物相比，iv多西紫杉醇处理导致部分肿瘤生长抑制。与媒剂和所有其它处理方法相比，it递送的是最有效的处理方法。在大多数动物中，用一个、两个或三个周期的it处理的肿瘤似乎已经完全消退，只有坏死组织保留在原肿瘤部位。尸检发现，处理组的动物患有带有白色“钙化”区域的肿瘤，这可能是由于肿瘤内残留的纳米粒子沉积造成的。多西紫杉醇组结果：组织中多西紫杉醇的浓度：肿瘤组织中多西紫杉醇的浓度通过lc-ms/ms分析使用多西紫杉醇氘代类似物多西紫杉醇-d9作为内标物测定。使用先前通过frontage开发的方法，从通过使用权重为1/x2的线性回归绘制峰面积比(分析物与内标物的比率)与分析物浓度的关系构建的校准曲线中获得多西紫杉醇的浓度。肿瘤组织中多西紫杉醇的标称浓度范围为1.00-2,000ng/g。在每次分析运行的开始和结束时对大鼠对照肿瘤组织匀浆绘制的校准曲线进行了分析。在四个浓度水平(低、中度1、中度2和高)下制备两组质量控制(qc)样品，并用于确保分析的可靠性。在每周三次iv多西紫杉醇(5-2.5毫克/千克)周期的最后一个周期后的三十八天，四只被评估的动物中的一只具有21.8ng/g的可检测多西紫杉醇水平(loq＝1.00ng/g)。qwx1组的所有三只动物在处理后51天具有659ng/g至1.4×105ng/g的可检测多西紫杉醇水平。对来自qwx2组的两只动物进行评估，并在处理后44天的水平为2.49和5.26μg/g。由于在qwx3组中没有可用于分析的肿瘤，因此没有进行分析。动物：在整个处理期间，除了少数例外，所有组的动物与未处理的动物和媒剂对照物相比，表现出相对正常的体重增加。一只接受qwx1的动物在处理第9天体重减轻。尽管给予了补充，但这只动物体重继续减轻，并在处理第16天因达到体重减轻终点而被实施安乐死。一只接受qwx3的动物体重明显减轻，尽管给予了补充，但在处理第39天达到体重减轻终点。其它观察结果包含溃疡和明显的周围神经病变。所有接受的动物在肿瘤表面均出现溃疡或损伤。这些损伤被描述为“痂”，即为干燥、坚硬的组织区域。在大多数情况下，伤口保持完整。接受qwx3的一只动物在处理后第35天表现出后肢无力和活动受限。通过干预，虚弱程度稳定到足以使动物保留在研究中。然而，该只动物由于溃疡覆盖>50％的肿瘤表面而在第49天被实施安乐死。表27示出了六组中残余肿瘤的大小范围(在载玻片上以毫米测量的活癌的最大横截面尺寸)。表27表27中数据的浓缩显示在表28中，其直接比较了三个非组(总共6只动物)和三个组(总共8只动物)中残留癌结节的大小。表28六只非动物中的五只(包含iv多西紫杉醇的动物)具有大于10mm的残余存活癌结节，其中大多数接近15mm。其余动物具有最大尺寸为9mm的存活癌。相比之下，用it处理的动物中有一半(4/8)在载玻片上没有残留的存活癌。it组中所有剩余的4只动物都有残留的存活癌，存活癌结节在载玻片上的最大尺寸为5mm或更小。这包括一例肿瘤测量值为0.9mm的病例，当在显微镜检查前大体测量肿瘤时，这并不明显。表29示出了三个it组在无残留浸润性癌的病例百分比和残留存活癌结节大小方面的比较。表29it1个和2个周期组均有1/3的病例无残留浸润性癌，而it3个周期组有2/2的病例无残留浸润性癌。在患有残留存活癌的病例中，it周期数的逐渐增加与残留存活癌结节大小的减少相关。具体而言，it1个周期组中残余存活癌结节经测量为4mm和5mm，it2个周期组中结节经测量为0.9mm和3mm。在it3个周期组的两个病例中没有残余存活癌可测量。表30示出了坏死组织的百分比。表30组#100％>90％50％-90％5％-50％<5％对照22it媒剂22ivdoce22itnano1312*itnano23111itnano322非组中的所有六只动物显示出<5％的坏死。这包括肿瘤中的较小的、不连续的坏死灶，这些坏死灶很小，占肿瘤面积的<5％，并且其位于肿瘤结节的中心部分，这表明这些坏死灶可能是由于肿瘤生长超出其血液供应而继发于低氧血症。八只动物中的四只显示肿瘤完全坏死。四只患有残余癌的动物中的两只显示出在周围组织存在大量坏死(>组织的50％)。*两个剩余的患有残余癌的动物没有足够的周围组织用于确定性坏死评估，尽管其中一个动物确实含有坏死的病灶边缘(其代表了提交的组织面积的<5％)。表31示出了基于h/e评估和用cd11b免疫组化染色的半定量分级的淋巴组织细胞浸润密度。表31组#轻度中度显著对照22it媒剂22ivdoce22itnano1321itnano233itnano3211非组中的所有六只动物都含有轻度免疫细胞浸润，并且这种浸润存在于肿瘤周围的非肿瘤间质中，在肿瘤内没有任何显著的免疫细胞浸润。相比之下，组的8只动物中有7只含有中等程度的免疫细胞浸润，而其余的动物有明显的免疫细胞浸润。这与通过it处理的动物坏死量增加有关。多西紫杉醇小组结果讨论：对来自旨在评估肿瘤内的功效(该研究总共包含30只动物)的肾细胞癌研究的14只雌性大鼠的子集的形态学和免疫组化特征进行了检查。这一14只动物的子集包含两只对照动物、两只给予肿瘤内媒剂的动物、两只通过静脉注射多西紫杉醇处理的动物(3个周期)和八只通过肿瘤内处理的动物。根据施用周期数，将组分为三组：第1组(1个周期；3只动物)，第2组(2个周期；3只动物)，第3组(3个周期；2只动物)。各个组之间不同的主要特征是肿瘤消退的存在和程度。在肿瘤内组的所有动物中，肿瘤消退显著，而在其它组的所有动物中，肿瘤未消退。非组(即对照组、it媒剂组和iv多西紫杉醇组)的所有六只动物都有残留的存活肿瘤。这包括与周围的正常间质组织有明显的分界的浸润性癌的一个致密结节。癌细胞紧密堆积在一起，虽然存在分散的凝固性肿瘤细胞坏死的离散病灶，但这些病灶体积小，在六只动物中的每一只中总体上占据<5％的肿瘤面积，并且位于肿瘤结节的中心部分内。这些观察结果表明，这些坏死区域可能继发于低氧血症，原因是肿瘤生长超出其血液供应(表10)。角蛋白染色显示肿瘤细胞强烈、敏感和特异的染色。在这六只动物中，在染色载玻片上测得的存活肿瘤结节的最大尺寸为9-15mm，在许多动物中该尺寸更接近15mm(表27和28)。载玻片上的肿瘤大小对应于大体解剖时的肿瘤测量值。相比之下，用瘤内处理的八只动物中的四只没有残留的存活癌，这是通过对h&e和角蛋白染色切片的评估确定的(完全反应)。在剩余的四只动物中，在染色载玻片上测量的残留存活肿瘤明显小于在非组中观察到的肿瘤(表27和28)。具体而言，在用it处理的这四只动物中，残余存活肿瘤结节的最大尺寸为0.9mm至5mm(表29)。在其中三只动物中，载玻片上测量的肿瘤大小与大体解剖时测量的肿瘤大小相关。在剩余的浸润性癌病灶为0.9mm的动物中，这种情况出现在大量的坏死中，在大体解剖时并不明显。在八只动物中的六只中，在一些动物中存在大量的肿瘤细胞凝固性坏死，其延伸到邻近的坏死骨骼肌和纤维组织中。此外，在坏死区域内，坏死的、无活性的、重影肿瘤细胞轮廓的角蛋白染色与坏死肿瘤细胞的退化角蛋白中间丝的标记相一致。这进一步支持了这些区域以前含有对治疗作出完全反应的存活癌。在剩下的两只动物的切片中，用于评估坏死的周围组织非常有限，尽管其中一只在一个区域确实含有坏死的局部边缘。在非组中，有均匀温和的免疫细胞浸润，这主要见于肿瘤周围的非肿瘤组织。没有明显的肿瘤内免疫细胞浸润。相比之下，肿瘤内组包含例轻度免疫细胞浸润、五例中度免疫细胞浸润和一例坏死区内有明显免疫细胞浸润(表31)。与非组一样，没有明显的肿瘤内淋巴浸润。在该研究组的14只动物中，没有发现任何诊断性三级淋巴结构(tls)。总之，这一检查仅限于一项包含30只雌性动物的研究中的14只雌性动物；然而，当将肿瘤内组与非组进行比较时，发现肿瘤对治疗反应的类型和程度存在显著差异。六只非组动物均未显示任何肿瘤消退的明显证据，并且所有动物都有残留的存活癌结节，其在载玻片上测量的大小的范围为9-15mm。然而，肿瘤内组中的所有八只动物都显示出肿瘤反应的证据，并且在所有六只具有足够的周围组织用于评估的动物中都观察到大量坏死。肿瘤反应包含该组中一半(4/8)的完全消退，这通过在检查h&e和角蛋白染色切片时缺乏确定的残余活癌来证明，而其余四只动物包含一个局部小残余活癌结节，其中经测量最大的结节为5mm，最小的结节为0.9mm。在这四只具有残余癌的动物中的两只中，载玻片上存在足够的周围组织用于评估，这显示了大量坏死。类似地，非组的免疫细胞浸润程度较轻，而组的免疫细胞浸润程度从轻微到明显不等，表明与肿瘤反应程度和最终坏死碎片有关。当对三个it组进行相互比较时，注意到随着动物接受肿瘤内治疗周期的增加，其显示出更大程度的肿瘤反应。特别地，在接受1个周期it的组中的3只动物中，三只动物中的一只显示出完全反应，而剩余的两只动物具有4和5mm的残余结节。在接受2个周期it的组中的三只动物中，一只显示出完全反应，而剩余的两只动物具有0.9和3mm的残余结节。最后，接受3周期it的组中的2只动物显示出对治疗的完全反应(所评估两只中的两只)(表29)。总之，在本研究中，用肿瘤内处理的所有八只肾细胞癌动物均显示出显著的组织学反应，包含50％的完全肿瘤消退率，以及其余四只动物中残留肿瘤大小显著减少。相关的大量坏死和增强的免疫应答在组中被发现，坏死区域中的角蛋白标记的透明的、无活性的、重影肿瘤细胞轮廓的病灶区域进一步支持了这些区域先前包含对治疗作出完全反应的活性癌。相比之下，在非处理组中没有这种肿瘤消退。此外，肿瘤内的周期从1个周期增加到3个周期，使得肿瘤消退程度越来越大，在it组中完全消退的比率越来越高。实例16—联合治疗研究—在用派姆单抗处理之前用吸入型对复发性或转移性非小细胞肺癌患者进行预处理的第ii阶段研究概述在该第ii阶段研究中，计划用免疫治疗药物派姆单抗(pembrolizumab)处理的复发性或转移性非小细胞肺癌受试者将在接受派姆单抗处理前2天通过喷雾器接受吸入治疗。该研究将由两个队列组成，1)派姆单抗单药治疗，和2)派姆单抗处理前吸入联合治疗。将通过iv以74mg/m2的剂量施用派姆单抗单药治疗，每3周的30分钟，在派姆单抗治疗前两天，将使用喷射喷雾器以7.08mg/m2的浓度施用吸入型研究药剂说明：测试物品：用于吸入暴露的测试物品如下所示：标识：(无菌纳米紫杉醇)说明：紫杉醇的新型干粉调配物，以306毫克/瓶递送媒剂用于制备调配物的媒剂如下所示：1％聚山梨醇酯80溶液标识：无菌1％聚山梨酯80/注射用0.9％氯化钠溶液说明：透明液体生理盐水稀释剂标识：注射用无菌0.9％氯化钠，usp说明：透明液体试验物品(紫杉醇颗粒、媒剂和稀释剂)的浓度将被制备为5mg/kg以供吸入肺中。人数≥18岁的男性和女性，ecog表现状态为0或1经组织学检查证实在基于铂的化疗期间或之后复发或转移的nsclc。接受了至少1种基于铂的化疗方案。主要目标根据派姆单抗单药治疗和复发性或转移性非小细胞肺癌受试者中使用和派姆单抗的组合中的《非小细胞肿瘤反应评估标准(responseevaluationcriteriainnon-smallcelltumors)(recist)》v.1.1，通过独立检查和综合医学肿瘤医师疾病评估确定总体反应率(orr)。次要目标估计反应持续时间，估计无进展生存率(pfs)和总生存率(os)。由调查人员和独立检查委员会根据免疫介导的反应标准(irrc)确定最佳总体反应和反应率。研究结果将证明联合治疗将比单独全身免疫治疗剂治疗(单一治疗)具有更高的疗效，这由总应答率、无进展生存期和总生存期证明。实例16—在小鼠脑胶质母细胞瘤中瘤内注射紫杉醇颗粒在这项研究中，评估了紫杉醇颗粒对胶质母细胞瘤(gb)的疗效。裸鼠大脑注射gb细胞以建立原发性肿瘤，gb细胞在两周后与紫杉醇颗粒(nanotax)一起注射。对仅接受盐水注射的对照组和接受taxoltm(在克莫泊尔中配制)注射的对照组的生存受益进行了监测。通过直接注射给生长中的肿瘤注射了100mg/m2的剂量。下表32显示了在假设肿瘤为球形的情况下本发明四种不同的肿瘤大小和紫杉醇颗粒的相应剂量。作为对照实验，使用了用克莫泊尔配制并在盐水中稀释至正确浓度的taxoltm。表32*剂量为100mg/m2**5μl注射液；nanotax储备溶液：3,150ng/μl在每次注射5μg紫杉醇的最高剂量下，没有观察到毒性。注射的小鼠存活8至9天，之后未观察到神经症状。9天后，处死小鼠并收获大脑；沿着注射路径解剖大脑并进行分析。紫杉醇颗粒组和taxoltm组均未出现坏死或损伤。在没有进一步准备的情况下使用脑切片，用三种不同的成像技术进行分析，以产生合成图像(数据未显示)：(a)二次谐波产生(shg)：图像显示为蓝色，主要是胶原蛋白和血管以及紫杉醇颗粒。(b)双光子激发荧光(tpef)：图像显示为绿色，主要是反应性细胞、小胶质细胞、巨噬细胞和一些神经元体。(c)相干反斯托克斯-喇曼散射(cars)：图像显示为红色，调谐至-ch2振动以观察脂质-主要是cns中的髓鞘，但也含有称作泡沫细胞的脂质微滴将给出正信号。具有脂质空泡的退化细胞和巨噬细胞也会出现。由于紫杉醇颗粒晶体的非线性光学性质，利用二次谐波产生成像技术可以直接看到晶体。注射后9天，在注射了5μg紫杉醇颗粒且未显示神经症状的小鼠中，在注射部位可清楚地看到紫杉醇颗粒簇(即：在肿瘤内积聚)(数据未显示)。实例17—小鼠腹腔注射后紫杉醇颗粒的药代动力学和组织分布目的：进行该研究是为了确定在腹膜内递送紫杉醇颗粒悬浮液后紫杉醇从腹膜腔吸收到体循环中的水平。还评估了腹膜内施用后紫杉醇颗粒悬浮液中紫杉醇的组织分布。实验细节：用id8卵巢癌细胞接种雌性c57bl6小鼠，并让肿瘤生长45天。这些小鼠用总体积为4ml的紫杉醇颗粒悬浮液(36mg/kg)/0.9％盐水通过腹膜内施用进行处理。血浆和腹膜液样品在时间零小时(给药前)、1、6、24和48小时(每个时间点至少四只小鼠)收集，血浆和腹膜液中的紫杉醇通过lc-ms/ms测定。此外，组织样品在腹膜内施用紫杉醇颗粒后的时间零小时(给药前)、1、6、24和48小时收集。采用lc-ms/ms对施用紫杉醇颗粒的小鼠的腹股沟淋巴结、腹膜壁、卵巢、肝脏、心脏、肺、脑和肿瘤组织样品进行了分析。结果和意义：下表示出了血浆、腹膜液和器官组织样品中紫杉醇水平的结果。血浆紫杉醇在48小时内保持在非常低的水平。腹膜液中的紫杉醇水平要高得多，并且表现出相当大的差异。紫杉醇分析方法的定量限为0.01μg/gm。如卵巢肿瘤、卵巢、腹股沟淋巴结和腹膜的结果显示，腹腔内组织中紫杉醇的水平一直很高。相反，如肝、心、肺和脑组织所示，腹腔外组织中的紫杉醇水平一直较低。这些相同的结果显示在表33中。这一数据意义重大，因为与腹膜液接触的组织(卵巢肿瘤、卵巢、腹股沟淋巴结和腹膜)中紫杉醇含量高得出乎意料，而与腹膜液不接触的组织中紫杉醇含量很少。基于这些和其它研究，紫杉醇从紫杉醇颗粒中的释放持续了几周，并且预期将提供持续高量的紫杉醇，这意味着如果直接注射到肿瘤中，紫杉醇将以非常高的水平积累。表33经化疗颗粒处理的小鼠组织、血浆和腹腔液中紫杉醇的含量(单位：μg/g)(4只动物)实施例18—在含hu-cd34-nsgtm-sgm3的tm00302中与派姆单抗交错给药结合的中试毒性和功效试验项目概述：将使用已植入人cd34+细胞并且在植入后10周或更晚的时间在外周血中具有>25％的人cd45+细胞的雌性hu-cd34nsgtmsgm3小鼠(nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjltg(cmv-il3，csf2，kitlg)1eav/mloyszj)进行研究。将使用移植了来自两个或三个供体的cd34+细胞的hu-cd34nsgtmsgm3小鼠队列(取决于下一阶段)。这些老鼠将被切开耳朵进行识别，并被安置在单独通风的聚砜笼中，笼中有hepa过滤空气，密度高达每笼5只老鼠。笼子将每两周更换一次。动物室完全用人工荧光照明，光照/黑暗周期控制为12小时(光照为早上6点到下午6点)。动物室的正常温度和相对湿度范围分别为20-26℃和30-70％。动物室将被设置为每小时换气15次。将经过滤自来水酸化至ph为2.5至3.0，将随意提供标准实验室食物。1.将来自一个cd34供体的hu-cd34nsgtm小鼠与来自tm00302pdx模型的肿瘤碎片一起植入右侧皮下。2.体重和临床观察结果将每周记录1x到2x。3.当肿瘤变得可触知时，将开始周1x到2x的数字测径仪测量，以确定肿瘤体积。4.当肿瘤体积达到约100-200mm3(研究第1天或研究第0天)时，将根据表34的肿瘤体积对小鼠进行随机分组。5.从研究第0天开始，根据表34给小鼠给药。注：it注射将通过扇形注射技术进行。扇形注射技术将包括单一表皮穿刺的2-5个复合沉积位点。化合物沉积位点的数量将由肿瘤的大小决定。100-200mm3的肿瘤将接受2次沉积，200-400的肿瘤将接受3次沉积，400-600的肿瘤将接受4次沉积，600+的肿瘤将接受5次沉积。6.体重、临床观察结果和数字测径仪测量结果将在剂量开始后每周记录2x。7.将对达到身体状况评分≤2、体重减轻≥20％或肿瘤体积>2000mm3的动物将在研究终点前实施安乐死。患有溃疡肿瘤的动物在研究终点前也将被实施安乐死。注：不会从发现死亡的动物身上收集组织。8.在研究的第35天，将通过co2窒息对所有的动物实施安乐死，并且将收集组织。将收集肿瘤并送去进行流式细胞术鉴定。表34肿瘤生长曲线*将使用1个供体。#it注射不会超过50μl。结果将证明，用和派姆单抗的组合进行处理将比用媒剂进行处理具有更好的疗效，通过以下证明：(a)与用媒剂处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤大小减少更多，或(b)与用媒剂处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤生长减少更多，或(c)与用媒剂处理的动物的无肿瘤消除发生率相比，用和派姆单抗的组合处理的动物具有一种或多种肿瘤消除发生率。实施例19—pdx型号tm00176的生长曲线分析，随后在hu-cd34-nsgtm-sgm3中单独使用和与派姆单抗联合使用进行功效测试项目概述：这项研究将分为2个阶段。第1阶段：在携带tm00302的hu-sgm3小鼠中交错给药的初步药物毒性和功效。(n＝10)第2阶段：对hu-cd34-nsgtm-sgm3小鼠的疗效研究(n＝100)将使用已植入人cd34+细胞并且在植入后10周或更晚的时间在外周血中具有>25％的人cd45+细胞的雌性hu-cd34nsgtmsgm3小鼠(nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjltg(cmv-il3，csf2，kitlg)1eav/mloyszj)进行研究。将使用移植了来自两个或三个供体的cd34+细胞的hu-cd34nsgtmsgm3小鼠队列(取决于下一阶段)。这些老鼠将被切开耳朵进行识别，并被安置在单独通风的聚砜笼中，笼中有hepa过滤空气，密度高达每笼5只老鼠。笼子将每两周更换一次。动物室完全用人工荧光照明，光照/黑暗周期控制为12小时(光照为早上6点到下午6点)。动物室的正常温度和相对湿度范围分别为20-26℃和30-70％。动物室将被设置为每小时换气15次。将经过滤自来水酸化至ph为2.5至3.0，将随意提供标准实验室食物。第1阶段：1.将来自一个cd34供体的hu-cd34nsgtm小鼠与来自tm00302pdx模型的肿瘤碎片一起植入右侧皮下。2.体重和临床观察结果将每周记录1x到2x。3.当肿瘤变得可触知时，将开始周1x到2x的数字测径仪测量，以确定肿瘤体积。4.当肿瘤体积达到约100-200mm3(研究第1天或研究第0天)时，将根据表35的肿瘤体积对小鼠进行随机分组。5.从研究第0天开始，根据表35给小鼠给药。注：it注射将通过扇形注射技术进行。扇形注射技术将包括单一表皮穿刺的2-5个复合沉积位点。化合物沉积位点的数量将由肿瘤的大小决定。100-200mm3的肿瘤将接受2次沉积，200-400的肿瘤将接受3次沉积，400-600的肿瘤将接受4次沉积，600+的肿瘤将接受5次沉积。6.体重、临床观察结果和数字测径仪测量结果将在剂量开始后每周记录2x。7.将对达到身体状况评分≤2、体重减轻≥20％或肿瘤体积>2000mm3的动物将在研究终点前实施安乐死。患有溃疡肿瘤的动物在研究终点前也将被实施安乐死。注：不会从发现死亡的动物身上收集组织。8.在研究的第35天，将通过co2窒息对所有的动物实施安乐死，并且将收集组织。将收集肿瘤并将其分离成碎片。1个碎片将被固定在10％中性缓冲福尔马林(nbf)中并送去进行石蜡包埋(ffpe)。ffpe块将按要求被运送到赞助商或第三方。1个碎片将被快速冻结，并根据要求运送到赞助商或第三方。表35肿瘤生长曲线*将使用1个供体。#it注射不会超过50μl。第2阶段：1.将来自三个cd34供体的hu-cd34nsgtm小鼠与来自待确定的pdx模型的肿瘤碎片一起植入右侧皮下。2.体重和临床观察结果将每周记录1x到2x。3.当肿瘤变得可触知时，将开始周1x到2x的数字测径仪测量，以确定肿瘤体积。4.当肿瘤体积达到约100-200mm3(研究第1天或研究第0天)时，将根据表36的肿瘤体积对小鼠进行随机分组。此外，还将努力将来自不同供体的hu-cd34nsgtmsgm3小鼠平均分配到各个研究组。每个组可以被注册多次以达到期望的组大小。5.从研究第0天开始，根据表36给小鼠给药。6.注：it注射将通过扇形注射技术进行。扇形注射技术将包括单一表皮穿刺的2-5个复合沉积位点。化合物沉积位点的数量将由肿瘤的大小决定。100-200mm3的肿瘤将接受2次沉积，200-400的肿瘤将接受3次沉积，400-600的肿瘤将接受4次沉积，600+的肿瘤将接受5次沉积。7.体重、临床观察结果和数字测径仪测量结果将在剂量开始后每周记录3x。8.将对达到身体状况评分≤2、体重减轻≥20％或肿瘤体积>2000mm3的动物将在研究终点前实施安乐死。患有溃疡肿瘤的动物在研究终点前也将被实施安乐死。注：不会从发现死亡的动物身上收集组织。9.在研究的第41天或第42天，将为每个肿瘤拍照。10.在研究的第42天，将通过co2窒息对所有的动物实施安乐死，并且将收集组织。将收集肿瘤、将其称重并分离成碎片。1个碎片将被置于培养基中，并运送到流动承包现场实验室(fcs)进行流式细胞仪分析。将检查以下标记：cd45、cd3、cd4、cd8、7aad。1个碎片将被固定在10％中性缓冲福尔马林(nbf)中并送去进行石蜡包埋(ffpe)。ffpe块将按要求被运送到赞助商或第三方。1个碎片将被快速冻结，并根据要求运送到赞助商或第三方。注：如果肿瘤太小而不能切成两块(≤400mm3)，将按照赞助商的指示处理单块肿瘤。注：如果必须在周五、周六或周日接收小鼠，不能对样本进行流式细胞术处理，而是将其分成2个碎片，一个用于ffpe，另一个用于速冻。研究结束时将采集全血。约100μl全血将被运送到流动承包现场实验室(fcs)进行流式细胞仪分析。将检查以下标记：cd45、cd3、cd4、cd8、7aad剩余的血液将被加工成血清，速冻，并根据要求运送给赞助商或第三方。注：如果必须在周五、周六或周日接收小鼠，则不能对样本进行流式细胞术处理，全部样本将被处理成血清、速冻，并根据要求运送给赞助商或第三方。表36功效实验设计*将使用5个供体。来自每组登记的每个供体的动物的最终数量将取决于实验时肿瘤体积满足登记标准的动物的可用性。#第4组nanopac给药将在派姆单抗给药后72小时+/-4小时进行。**it注射不会超过50μl。该研究的结果将证明，与单独使用派姆单抗的处理和/或单独使用的处理(单药治疗)相比，使用和派姆单抗的联合处理将具有更好的疗效，这由以下至少一项证明：(a)与单独用派姆单抗处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤大小减少更多，或(b)与单独用派姆单抗处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤生长减少更多，或(c)与单独用派姆单抗处理的动物的无肿瘤消除发生率相比，用和派姆单抗的组合处理的动物具有一种或多种肿瘤消除发生率，或(d)与单独用处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤大小减少更多，或(e)与单独用处理的动物相比，用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤生长减少更多，或(f)与单独用处理的动物的无肿瘤消除发生率相比，用和派姆单抗的组合处理的动物具有一种或多种肿瘤消除发生率，和/或这一研究的结果将证明和派姆单抗的组合对功效具有协同效应，这由以下至少一项证明：(g)用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤大小的减少量大于单独用派姆单抗处理的动物的肿瘤大小的减少量加上单独用处理的动物的肿瘤大小的减少量之和，或(h)用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤生长减少量大于单独用派姆单抗处理的动物的肿瘤生长减少量加上单独用处理的动物的肿瘤生长减少量之和，或(i)用和派姆单抗的组合处理的动物的肿瘤消除发生率的数量大于单独用派姆单抗处理的动物的肿瘤消除发生率的数量加上单独用处理的动物的肿瘤消除发生率的数量的总和。参考文献《阿什盖特抗肿瘤剂手册(ashgatehandbookofantineoplasticagents)》(高尔出版有限公司(gowerpublishinglimited)(2000))，bracci,l.、schiavoni,g.、sistigu,a.和belardelli,f.(2014)。“细胞毒性化疗的免疫机制：对设计新的基于基本原理的抗癌联合疗法的启示(immune-basedmechanismsofcytotoxicchemotherapy:implicationsforthedesignofnovelrationale-basedcombinedtreatmentsagainstcancer)”，《细胞死亡和分化(celldeathanddifferentiation)》,21,15-25。chang,c.l.、hsu,y.t.、wu,c.c.、lai,y.z.、wang,c.、yang,y.c.、……hung,c.f.(2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