本发明涉及一种从植物材料中分离金雀花碱(cytisine)的方法。
背景技术：
金雀花碱-(r,5s)-l,2,3,4,5,6-六氢-5-桥亚甲基-8h-吡啶并[1,2-α](1,5)二氮芳辛-8-酮，具有以下构型：
是有效的烟碱型乙酰胆碱受体激动剂，其显示出类似于烟碱的药理作用。它用于对抗尼古丁和酒精依赖。已经确认它存在于各种植物物种中，如蝶型花亚科(faboideae)，包括金链花属(laburnum)、臭豆属(anagyris)、野决明属(thermopsis)、金雀花属(cytisus)、染料木属(genista)和槐属(sophora)。金雀花碱也存在于肥皂荚属(gymnocladus)(它是云实亚科(caesalpinioideae)的成员)等中。一个多世纪前，已有报道称从金链花种子中提取金雀花碱(1)。金雀花碱之后通过用碱处理磨碎的种子以获得使用索氏器提取数小时的糊状物来提取(2)。在两种类似变型(3)和(4)中建议包括使用二氯甲烷、甲醇和氢氧化铵(25％)的混合物来提取金雀花碱。描述了用0.1nhcl从生物材料的混合物中分离生物碱并随后进行离子交换树脂洗脱的方法(5)。已知从生物材料分离金雀花碱的方法，其包括用植物油(菜子油、葵花油、亚麻油、葡萄油、花生油等)萃取生物材料的碱性水溶液(碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐或氢氧化物或者氢氧化铵)，在酸-水相中再次萃取(优选用硫酸)，通过用二氯甲烷进行碱提取(二氯甲烷加铵)回收金雀花碱，除去水并蒸发溶剂。然而，在上述实例中获得的金雀花碱的纯度非常低(28％)(6)。有一种获得用于治疗cns疾病的金雀花碱的生物碱衍生物的半合成方法，初始阶段包括浸解粉末化红豆属(ormosia)，粉末的根和茎，特别是在甲醇中，然后过滤并蒸发至干；将所获得提取物在盐酸的水溶液和乙酸乙酯之间分配，分离水相和有机相；用碳酸钠将水相碱化至ph10-12；加入二氯甲烷并重复进行相分离和化合物的分离，其随后进行化学反应以获得目标产物(7)。从披针叶野决明(thermopsislanceolata)提取金雀花碱的方法也受到保护(8)。
从概述中可以明显看出，从植物提取金雀花碱的问题虽然已有很长历史，但尚未得到令人满意的解决。已知的分离金雀花碱的途径是多阶段的、劳动密集的、低效率的，并且产生纯度非常低的产品。这决定了非常需要确保具有较高纯度的金雀花碱的良好收率的方法。这是由于对这种生物碱的不断探索和不断扩大的应用范围而产生的需求。
技术实现要素：
已经确认，从含金雀花碱的植物材料采用简便有效的方法，可以获得高收率、高纯度的活性药物成分(api)金雀花碱。根据本发明的方法包括用低级醇(优选甲醇、乙醇)对植物原料进行提取，用无机酸酸化至1.5-3.5范围的ph且温度为20-50℃。将包含50-80％低级醇的合并的醇-水提取物在真空下浓缩以除去醇，并在过滤后以1:1的比率用氯仿、二氯甲烷、乙酸丁酯或正丁醇进行萃取。用碱金属(钠或钾)氢氧化物或氢氧化铵将如此从压载物(ballastsubstance)纯化的酸化的水性浓缩物碱化至ph9-12，并以1:5至1:10的浓缩物与萃取剂的比率用氯仿、二氯甲烷、乙酸丁酯或正丁醇萃取该碱性水性浓缩物至少两次。将合并的有机萃取物蒸发至干，然后加入丙酮或乙酸乙酯以获得允许在5-10℃下完全结晶的悬浮液，然后其过滤并干燥。使用根据本发明的简单而精妙的方法令人惊讶地获得98-99.9％的hplc等级的金雀花碱，且收率为80-85％。
使用根据本发明的简单而精妙的方法令人惊讶地获得了98-99.9％的hplc等级的金雀花碱和80-85％的收率。
具体实施方式
以下实施例说明了根据本发明的方法的实质，但本发明不限于此。
实施例：
实施例1:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树(cytisuslaburnuml.)，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
将15千克磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子提取两次，每次用45升的用0.350升硫酸酸化的70％甲醇在ph2.5-3和30℃的温度下提取5小时。将合并的醇-水酸性提取物在真空下浓缩至初始体积的25升(1/5)的体积，通过过滤除去固体组分，且所获得的浓缩物用10升氯仿萃取两次，每次在2.5-3.0范围的ph下。用30％氢氧化钠溶液将得到的纯化酸水性浓缩物碱化至ph11，然后用氯仿萃取五次，每次25l氯仿。将合并的有机萃取物进行蒸馏直至完全去除氯仿，并向所得残留物中加入2l丙酮以获得丙酮悬浮液，其在5-10℃下静置11小时，然后过滤并干燥。
得到127g金雀花碱，hplc等级为99.15％，且收率为85％。
实施例2:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
如实施例1中，磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用60％甲醇提取，用盐酸酸化。根据实施例1，酸性水性浓缩物用氯仿纯化，用25％氢氧化钠溶液碱化至ph11，和然后用二氯甲烷萃取七次，每次20l二氯甲烷。合并的有机萃取物进行蒸馏直至二氯甲烷完全除去，并向所得残留物中加入2l丙酮以获得丙酮悬浮液，其在5-10℃下静置10小时，然后过滤所得沉淀并将其干燥。
得到121.5g的金雀花碱，hplc等级为98.72％和收率为81％。
实施例3:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
如实施例1中，磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用硫酸酸化的70％乙醇代替酸甲醇进行提取。根据实施例1，用氯仿纯化的酸性水性浓缩物用25％的氢氧化铵溶液碱化至ph11，然后用氯仿萃取六次，每次25l氯仿。如实施例1中进一步对获得的氯仿提取物进行处理(threated)。
获得125g的金雀花碱，具有98.7％的hplc等级和83％的收率。
实施例4:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸乙醇提取制备金雀花碱
如实施例1中，磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用硫酸酸化的70％乙醇代替酸甲醇进行提取。
酸性水性浓缩物用氯仿纯化，使用40％的氢氧化钠溶液使其达到ph11，然后用氯仿提取五次，每次25l。如实施例1中所述对获得的氯仿提取物进一步进行处理。
获得120g的金雀花碱，具有98.3％的hplc等级和80％的收率。
实施例5:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
将15千克磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用以1.09升盐酸酸化的80％乙醇，在ph2.5-3.0和28℃温度下5小时提取三次，每次45升。将合并的醇-水酸性提取物真空下浓缩至20升的体积，过滤酸性浓缩物，然后用二氯甲烷在2.5-3.0的ph范围内萃取两次，每次10升。酸纯化的水性浓缩物用氢氧化钠碱化至ph11，然后用二氯甲烷萃取六次，每次20l。将合并的有机萃取物进行蒸馏直至二氯甲烷完全除去，并向所得残留物中加入2l乙酸乙酯以得到乙酸乙酯悬浮液，在5-10℃下搅拌并使其静置10小时，然后过滤所得沉淀并且干燥。
获得119g的金雀花碱，具有98.8％的hplc等级和79％的收率。
实施例6:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
将15千克磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用以0.350升硫酸酸化的70％甲醇在ph2.5-3和30℃的温度下5小时提取3次，每次45升。将合并的醇-水酸性提取物真空下浓缩至初始体积的25升(1/5)的体积，过滤除去固体组分，且所得浓缩物用乙酸丁酯在2.5-3.0的ph范围内提取2次，每次10升。用30％的氢氧化钠溶液将酸纯化的水性浓缩物碱化至ph11，然后用乙酸丁酯萃取六次，每次25l。将合并的有机萃取物进行蒸馏直至乙酸丁酯完全除去，且向所得残留物中加入2l丙酮，其在5-10℃下静置11小时以得到目标丙酮悬浮液，然后过滤并干燥。
获得125g的金雀花碱，具有99.85％的hplc等级和81％的收率。
实施例7:通过磨碎的金链花树(欧洲金雀花树，金链花)种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
将15kg磨碎的金链花树(欧洲金雀花树)种子用以0.350l硫酸酸化的70％甲醇在ph2.5-3和温度30℃下5小时提取三次，每次45l。将合并的醇-水酸性提取物在真空下浓缩至初始体积的25l(1/5)的体积，通过过滤除去固体组分，且所得浓缩物用正丁醇在2.5-3.0的ph范围内萃取两次，每次10l。酸纯化的水性浓缩物用30％氢氧化钠溶液碱化至ph11，然后用正丁醇萃取六次，每次25l。按照实施例6进一步对合并的正丁醇萃取物进行处理。
获得120g的金雀花碱，具有99.66％的hplc等级和82％的收率。
实施例8:通过磨碎的野决明(披针叶野决明(thermopsislanceolatar.br))种子的酸甲醇提取制备金雀花碱
在ph2.5-3.0和30℃的温度下，15kg粉末状的野决明(披针叶野决明)种子用以0.350升硫酸酸化的70％甲醇5小时提取三次，每次45升。将合并的醇-水酸化提取物在真空下浓缩至初始体积的25升(1/5)的体积，通过过滤除去固体组分，且所得浓缩物用正丁醇在2.5-3.0的ph范围内萃取两次，每次10升。酸纯化的水性浓缩物用30％氢氧化钠溶液碱化至ph11，然后用正丁醇萃取六次，每次25l。如实施例6中所述，进一步对合并的正丁醇萃取物进行处理。
获得121g的金雀花碱，具有99.32％的hplc等级和81％的收率。
实施例9:通过磨碎的野决明(披针叶野决明)种子的酸乙醇提取制备金雀花碱
将15kg磨碎的野决明(披针叶野决明)种子用以1.09升盐酸酸化的80％乙醇在ph2.5-3和温度28℃下5小时提取三次，每次45升。将合并的醇-水酸化提取物真空下浓缩至20升的体积，过滤酸性浓缩物，然后用二氯甲烷在2.5-3.0的ph范围内萃取两次，每次10升。酸纯化的水性浓缩物用氢氧化钠碱化至ph12，然后用二氯甲烷萃取六次，每次20l。将合并的有机萃取物进行蒸馏直至二氯甲烷完全去除，并向所得残留物加入2l乙酸乙酯以得到乙酸乙酯悬浮液，其在5-10℃下搅拌，使其静置12小时，然后过滤并干燥所得沉淀。
获得120g的金雀花碱，具有98.9％的hplc等级和80％的收率。
使用的文献来源:
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