本发明涉及医药保健
技术领域：
，具体涉及一种功能增强人体免疫力、延缓人体衰老的保健口服液及其制备方法。
背景技术：
：免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫力低下者极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病(如感冒、扁桃体炎、哮喘、支气管炎、肺炎、腹泻等)，因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭，每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。而衰老意味着人体各项生理机能的减退从而免疫机能下降，意味着人体内的蛋白质流失严重，意味着钙、铁、锌等微量元素流失严重，进而出现发脱齿摇、耳聋眼花等现象。中国中医认为精气虚衰导致机体衰老，<素问·金匮真言论>有记载：“夫精者，身之本也。”<灵枢·本神>篇记载：“故生之来谓之精”<灵枢·平人绝古>篇记载：“故神者，水谷之精气也”朱丹溪在<格致余论>中列举了老人各种衰老征象，认为原因在于精血俱耗。宋·陈直认为老人气血渐衰，真阳气少，精血耗竭，神气浮弱。现代医学则提出人体衰老是由人体自身代谢产生的自由基和环境中的自由基造成的。世界各国科学家和医学家一直在探索衰老的原因和延缓衰老的方法，认为衰老在很大程度上受遗传控制且有一定的程序，但亦受后天、环境的影响而发生随机变化或提前或加速，从而表现出个体差异。猪胸腺为重要的淋巴器官，其功能与免疫紧密相关，猪胸腺中含有大量的功能小分子多肽，如胸腺肽、胸腺肽α1和胸腺五肽等，其中胸腺肽α1为在20世纪70年代末期从胸腺生成素第5组分(tf5)中分离纯化的一种具有热稳定性的小分子生物活性多肽，其能在发育的各个阶段连续诱导t细胞分化、维持机体免疫平衡状态并增强t细胞对抗原的反应，而胸腺五肽是由5个氨基酸组成的多肽片段，其保留了胸腺生成素的有效生物活性，是一种免疫调节剂，对机体免疫功能具有双向调节作用，从而提高机体抵抗疾病的能力。胸腺肽、胸腺肽α1和胸腺五肽均是胸腺生成素上的活性成分，均具有免疫调节活性，能使过强或受到抑制的免疫反应趋向于正常，同时其对胸腺、肌体免疫功能低下、自身免疫病具有很好的调节作用。然而，目前市场上流通的胸腺肽类药物，广泛应用于医药学领域，如胸腺肽肠溶片、胸腺肽注射液等，医药用胸腺肽类的种类单一，专门针对性治疗某一种疾病，其制作工艺大都以氨基酸为原材料，用化学试剂进行人工嫁接合成出来的单一肽类物质，因有化学试剂残留，不可避免会对人体有一定的毒副作用和不良反应。而羊胚胎在《本草纲目》中记载：性温无毒、主添精、助气、益血、扶虚、治男女虚劳、矢志恍惚，故羊胚胎有强精健体之功效，对气色不好、身体虚弱、气血不足均可以使用。然而目前尚未有将猪胸腺与羊胚胎结合加工制作成保健类产品的报道。技术实现要素：本发明所解决的技术问题在于将猪胸腺提取物与羊胚胎提取物结合，以期得到一种原料来源健康自然、可被人体肠道直接吸收，快速参与人体的正常代谢与调节，且适合工业化推广生产的能增强免疫、延缓衰老的口服液及其制备方法。本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种增强免疫力、延缓衰老的口服液，其原料包括猪胸腺提取液和羊胚胎提取液，其中猪胸腺提取液中多肽含量为10～15mg/ml，羊胚胎提取物中多肽含量为10～15mg/ml。进一步的，制备500重量份所述口服液中，各原料组分的配比如下：猪胸腺提取液1.2～1.4份、羊胚胎提取液1.2～1.4份、蜂蜜14～16份、甜蜜素0.2～0.3份、柠檬酸0.3～0.4份、余量为纯化水，其中猪胸腺提取液及羊胚胎提取液占有的份额以其含有的多肽计。本发明还涉及一种增强免疫力、延缓衰老的口服液的制备方法，包括如下步骤：1)将猪胸腺提取液和羊胚胎提取液分别采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后滤过液；2)分别检测步骤1)中得到的两种滤过液中多肽含量，进而根据配料份额计算所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量，备用；3)将蜂蜜以及3倍于蜂蜜质量的纯化水加入配料罐中，在95～105℃的条件下搅拌30min，冷却至40℃以下后过滤取滤过液备用；4)将甜蜜素和柠檬酸溶解于适量纯化水中，备用；5)将经过上述处理的各原料依次加入配料罐中，用纯化水定量至既定总份额；6)调节ph值为6.5～7.0，搅拌均匀后用0.22μm的滤膜过滤得滤过液；然后灌装、灭菌得到成品。进一步的，蜂蜜的过滤依次通过200目筛网过滤、板框过滤和超滤过滤后取滤过液备用。进一步的，猪胸腺提取液的制备方法包括如下步骤：①将猪胸腺原料绞碎得到猪胸腺碎料、将猪胸腺碎料胶磨后得到匀浆液；②调节匀浆液的ph值至4.5～5.0后进行冻融操作；③冻融操作完成后加热至41～43℃，然后加入胃蛋白酶进行酶解，酶解完成后灭酶，用1000目滤袋进行初步离心过滤；④将离心后的上清液依次采用分子量为100000道尔顿和30000道尔顿的超滤膜进行进一步超滤分离，取滤过液；⑤将滤过液去除酸性蛋白和碱性蛋白，然后灌装、灭菌得到猪胸腺提取液成品，将猪胸腺提取液成品冷冻保存。去除酸性蛋白和碱性蛋白的原理为酶解之后，溶液中存在一些难以酶解的酸性蛋白质和碱性蛋白质，这些蛋白质除了具有普通的增加蛋白质的营养之外，没有保肝护肝的作用，且在储存过程中，因溶液的酸碱度的原因，会慢慢析出而产生沉淀，制成制剂后，营养产品的美观和口感。进一步的，所述步骤③中冻融操作为：将调节好ph的匀浆液放入-10℃以下的冷库中冷冻12～16小时，然后取出在室温下充分解冻，然后继续放入-10℃以下的冷库中冷冻12～16小时，反复操作三次。进一步的，所述步骤③中胃蛋白酶与猪胸腺碎料的质量比为1:400。进一步的，步骤③中，酶解为恒温连续酶解，酶解条件为温度41～43℃、ph值2.0～3.0、时间10～12h，酶解过程中不断搅拌，酶解完成后将匀浆液加热至75～85℃后保温1h而灭酶。灭酶完成后在冷却至30℃以下后自然沉淀6～10h再离心过滤。进一步的，步骤⑤中，所述酸性蛋白和碱性蛋白的去除方法为：将步骤④中得到的滤过液采用30000道尔顿的超滤膜超滤并将该超滤后的滤过液调节ph值为7.3～7.7，然后在95～105的条件下搅拌30min，继续用10000道尔顿的超滤膜超滤并将该超滤后的滤过液调节ph值为7.0～8.0,搅拌10～15min即可。进一步的，所述羊胚胎提取液的制备方法为：①选取怀孕2～8周的羊胚胎，洗净后绞碎成羊胚胎碎料，然后加入羊胚胎重量10～15倍的蒸榴水进行浸泡使胚胎碎料处于膨胀状态：②将步骤1中处理的胚胎碎料置于30℃下速冻，待胚胎碎料完全冻住后取出室温下融化，并在融化后采用用胶体磨在室温条件下研磨成细浆：③研磨完成后加入所处理羊胚胎重量1倍的蒸馏水离心，整个离心过程中溶液温度控15～－10℃的温度范围内：④取离心后的上清液，并依次采用100000道尔顿和10000道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤完成得到的滤过液即为成品。本发明人体口服推荐剂量为0.33ml/mg·bw。将本发明所述的口服液进行延缓衰老效果测试(分别进行抗氧化试验和果蝇试验)抗氧化试验方法：选择15月龄试验雄性小鼠40只，根据人体推荐量，设小鼠低剂量为1.65ml/kg·bw，中剂量为3.30ml/kg·bw，高剂量为9.90ml/kg·bw，分别相当于人口服推荐量的5、10、30倍，实验组每天灌胃一次，对照组以蒸馏水灌胃，灌胃体积为0.2ml/10g·bw，连续30天，于第30天摘眼球采血，离心、取血清，分别测定sod(血清超氧化物歧化酶)和mda(血清过氧化脂质降解产物，丙二醛)含量，实验数据统计用instat软件进行统计分析。结果如下。表一口服液对老龄小鼠体重的影响由表一可知，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，三个剂量组小鼠中期体重、结束体重与对照组相比，差异无显著性(p＞0.05)表二口服液对老龄小鼠血清氧化脂质降解产物mda含量的影响组别动物数mda含量(nmol/ml)p值对照10只6.84±1.14低剂量10只6.72±0.96＞0.05中剂量10只5.92±0.96＞0.05高剂量10只5.43±0.74＜0.05由表二可知，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，高剂量组血清mda含量明显降低，与对照组相比较具有差异显著性。表三口服液对老龄小鼠血清sod活力的影响组别动物数sod活力(nu/ml)p值对照10只169.63±30.47低剂量10只221.02±56.18＞0.05中剂量10只234.10±66.78＞0.05高剂量10只251.03±87.48＜0.05由表三可知，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，高剂量组血清sod活力明显升高，与对照组相比较具有差异显著性。果蝇试验方法：收集八小时内新羽化的果蝇成虫，乙醚麻醉下区分雄雌，随机分为一个对照组和四个实验组，每组用果蝇400只，雌雄各半，对照组给予玉米粉培养基，实验组分别给予含0.4％、1.3％、11.0％口服液的培养基，每四天更换一次培养基，每天记录果蝇生存数和死亡数，直到果蝇全部死亡为止，计算出半数死亡天数、平均寿命和平均最高寿命三个指标。试验数据采用sas软件进行统计分析。表四口服液对果蝇生存试验的影响由寿命最长的20只果蝇计算得出，实验组与对照组相比寿命延长，统计学检验有显著意义(p＜0.05)由表四可见，0.4％和1.3％两个浓度组雄性果蝇的最高寿命、0.4％浓度组雌性果蝇和1.3％雄性果蝇的平均寿命与相应的对照组相比，均显著升高(p＜0.5)；0.4％和1.3％浓度组雄性果蝇的半数死亡时间较相应对照组延长4天。总之，抗氧化试验中，以9.90ml/kg·bw高剂量的口服液给老龄小鼠灌胃30天，可显著降低小鼠血清中mda含量，显著增强sod活力，与对照组相比，差异有显著性，果蝇生存试验中，雌性果蝇的平均寿命、雄性果蝇的平均寿命以及最高寿命较对照组显著延长，表示该口服液有延缓衰老的作用。本发明人体口服推荐剂量为0.33ml/mg·bw。将本发明所述的口服液进行免疫调节作用试验(分别进行抗体生成细胞检测、小鼠碳粒廓清试验)试验方法：选择15月龄试验雄性小鼠40只，根据人体推荐量，设小鼠低剂量为1.65ml/kg·bw，中剂量为3.30ml/kg·bw，高剂量为9.90ml/kg·bw，分别相当于人口服推荐量的5、10、30倍，实验组每天灌胃一次，对照组以蒸馏水灌胃，灌胃体积为0.2ml/10g·bw，连续30天，抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验均采用常规的小鼠试验方法进行，结果通过instat软件进行统计分析，结果统计如下：表五口服液对小鼠抗体生成细胞数的影响组别动物数溶血空斑数(×103/全脾)p值对照10只21.4±7.03低剂量10只25.6±10.52＞0.05中剂量10只35.5±7.46＜0.05高剂量10只36.8±12.26＜0.01由表五可知，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，中剂量组和高剂量组小鼠抗体生成细胞数明显增加，与对照组相比较具有差异显著性。表六口服液对小鼠碳粒廓清的影响组别动物数吞噬指数(a)p值对照10只6.61±0.70低剂量10只6.83±0.29＞0.05中剂量10只7.59±0.86＜0.01高剂量10只7.47±0.54＜0.05由表六可知，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，中剂量组和高剂量组小鼠吞噬指数明显高于对照组，具有差异显著性。总之，经口给予老龄小鼠不同剂量的口服液30天，尤其是中剂量组和高计量组能明显增加小鼠的抗体生成细胞数，增强小鼠单核-巨噬细胞碳粒廓清的能力，提示该口服液能增强小鼠的细胞免疫、体液免疫功能及单核-巨噬细胞的吞噬功能，具有免疫调节作用。有益效果：1)本发明所述的口服液含有丰富的小分子活性肽，经检测，产品中多肽含量大于或等于400mg/ml，去其有效成分能快捷参与到人体正常代谢与调节，在药理学上，针对增强免疫和延缓衰老有更高的生化机制合理性和人体保健有效性，具有调节针对性强、营养价值高、易被人体吸收，无毒副作用的特点。2)本发明首次将猪胸腺提取物和羊胚胎提取物结合并加工成人体保健产品，其中羊胚胎采用现代生物酶解、膜分离技术进行提取后，富含多种生物活性成分，内含表皮生长因子、促表皮生长因子、sod(超氧化物歧化酶)、卵磷脂、脑磷脂、胸腺肽、造血因子、促脑神经细胞生长因子、神经节苷脂、多种氨基酸、微量元素等小分子功能物质，而胸腺采用现代生物酶解、膜分离技术进行提取后，富含多种小分子生物活性成分，胸腺α1及它小分子多肽等，最终制备出来的口服液产品均一度高，色泽淡黄或无色，原料来源健康，可作为日常保健长期饮用，也可以作为相关疾病辅助治疗，具有免疫调节、延缓衰老的功效，显著拓宽了猪胸腺和羊胚胎的应用范围。3)本发明加工过程中原料利用度高，产品生产过程中有效成分提取率高，生产工艺可控，适于工业化批量生产应用。具体实施方式为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。猪胸腺提取液的制备方法如下：①将猪胸腺放入解冻池，在水温≤30℃的饮用水中浸泡解冻，解冻至手可掰开，迅速捞出，沥干水分；将解冻、沥干水分后的猪胸腺去除脂肪、结缔组织以及其他杂物；然后将合格猪胸腺用水温≤30℃的纯化水清洗至无血水，捞出，沥干水分，待用；将清洗沥干水分的猪胸腺用绞肉机绞2次得到猪胸腺碎料，加入猪胸腺质量1.5倍的纯化水，搅拌5分钟使混合均匀，然后用胶体磨研磨4次。②将胶磨后的匀浆液放置于提取罐中，开启搅拌装置，在搅拌状态下，用醋酸调节ph值为4.5～5.0，搅拌15分钟，待用。将调节好ph的匀浆液放入-10℃以下的冷库中冷冻12～16小时，然后取出在室温下充分解冻，然后继续放入-10℃以下的冷库中冷冻12～16小时，反复操作三次。③将上述冷冻的匀浆液在室温下解冻后置提取罐中，开启搅拌装置，在搅拌状态下，按胃蛋白酶：猪胸腺碎料质量为1:400的质量比加入胃蛋白酶进行酶解，酶解为恒温连续酶解，酶解条件为温度41～43℃、ph值2.0～3.0、时间10～12h，酶解过程中不断搅拌，酶解完成后将匀浆液加热至75～85℃后保温1h而灭酶。灭酶完成后冷却至30℃以下后自然沉淀6～10h再用1000目滤袋进行离心过滤；④将离心后的上清液依次采用分子量为100000道尔顿和30000道尔顿的超滤膜进行进一步超滤分离，取滤过液，将滤过液迅速置于-10℃以下的冷库中保存；⑤将放置在-10℃以下冷库中的溶液在室温下解冻后，将步骤④中得到的滤过液采用30000道尔顿的超滤膜超滤并将该超滤后的滤过液调节ph值为7.3～7.7，然后在95～105的条件下搅拌30min，继续用10000道尔顿的超滤膜超滤并将该超滤后的滤过液调节ph值为7.0～8.0,搅拌10～15min即得到猪胸腺提取液成品。羊胚胎提取液的制备方法：①选取怀孕2～8周的羊胚胎，洗净后绞碎成羊胚胎碎料，然后加入羊胚胎重量10～15倍的蒸榴水进行浸泡使胚胎碎料处于膨胀状态：②将步骤1中处理的胚胎碎料置于30℃下速冻，待胚胎碎料完全冻住后取出室温下融化，并在融化后采用用胶体磨在室温条件下研磨成细浆：③研磨完成后加入所处理羊胚胎重量1倍的蒸馏水离心，整个离心过程中溶液温度控15～－10℃的温度范围内：④取离心后的上清液，并依次采用100000道尔顿和10000道尔顿的超滤膜进行超滤，超滤完成得到的滤过液即为羊胚胎提取液成品。用上述方法得到的猪胸腺提取液中多肽含量为10～15mg/ml，羊胚胎提取物中多肽含量为10～15mg/ml。实施例1按总量500kg准备原料：猪胸腺提取液1.35kg、羊胚胎提取液1.35kg、蜂蜜15kg、甜蜜素0.25kg、柠檬酸0.35kg、余量为纯化水；其中猪胸腺提取液及羊胚胎提取液的质量均指的是其含有的多肽质量，由于不同批次生产的猪胸腺提取液或羊胚胎提取液内的多肽含量有所偏差，因此以多肽计的配方其功能成分含量较为稳定。该增强免疫力、延缓衰老的口服液的制备方法为：1)将猪胸腺提取液和羊胚胎提取液分别采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后滤过液；2)分别检测步骤1)中得到的两种滤过液中多肽含量，进而根据配料份额计算所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量，备用；其中多肽采用福林酚方法检测，所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量的计算公式如下：3)将蜂蜜以及3倍于蜂蜜质量的纯化水加入配料罐中，在95～105℃的条件下搅拌30min，冷却至40℃以下后过滤取滤过液备用；蜂蜜的过滤依次通过200目筛网过滤、板框过滤和超滤过滤。4)将甜蜜素和柠檬酸溶解于适量纯化水中，备用；5)将经过上述处理的各原料依次加入配料罐中，加入纯化水定量至500kg；6)调节ph值为6.5～7.0，搅拌均匀后用0.22μm的滤膜过滤得滤过液；然后灌装、灭菌得到口服液成品。实施例2按总量500kg准备原料：猪胸腺提取液1.2kg、羊胚胎提取液1.2kg、蜂蜜16kg、甜蜜素0.2kg、柠檬酸0.4kg、余量为纯化水；其中猪胸腺提取液及羊胚胎提取液的质量均指的是其含有的多肽质量，由于不同批次生产的猪胸腺提取液或羊胚胎提取液内的多肽含量有所偏差，因此以多肽计的配方其功能成分含量较为稳定。该增强免疫力、延缓衰老的口服液的制备方法为：1)将猪胸腺提取液和羊胚胎提取液分别采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后滤过液；2)分别检测步骤1)中得到的两种滤过液中多肽含量，进而根据配料份额计算所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量，备用；其中多肽采用福林酚方法检测，所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量的计算公式如下：3)将蜂蜜以及3倍于蜂蜜质量的纯化水加入配料罐中，在95～105℃的条件下搅拌30min，冷却至40℃以下后过滤取滤过液备用；蜂蜜的过滤依次通过200目筛网过滤、板框过滤和超滤过滤。4)将甜蜜素和柠檬酸溶解于适量纯化水中，备用；5)将经过上述处理的各原料依次加入配料罐中，加入纯化水定量至500kg；6)调节ph值为6.5～7.0，搅拌均匀后用0.22μm的滤膜过滤得滤过液；然后灌装、灭菌得到口服液成品。实施例3按总量500kg准备原料：猪胸腺提取液1.4kg、羊胚胎提取液1.4kg、蜂蜜14kg、甜蜜素0.3kg、柠檬酸0.3kg、余量为纯化水；其中猪胸腺提取液及羊胚胎提取液的质量均指的是其含有的多肽质量，由于不同批次生产的猪胸腺提取液或羊胚胎提取液内的多肽含量有所偏差，因此以多肽计的配方其功能成分含量较为稳定。该增强免疫力、延缓衰老的口服液的制备方法为：1)将猪胸腺提取液和羊胚胎提取液分别采用分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤后滤过液；2)分别检测步骤1)中得到的两种滤过液中多肽含量，进而根据配料份额计算所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量，备用；其中多肽采用福林酚方法检测，所需猪胸腺提取液或羊胚胎提取液的量的计算公式如下：3)将蜂蜜以及3倍于蜂蜜质量的纯化水加入配料罐中，在95～105℃的条件下搅拌30min，冷却至40℃以下后过滤取滤过液备用；蜂蜜的过滤依次通过200目筛网过滤、板框过滤和超滤过滤。4)将甜蜜素和柠檬酸溶解于适量纯化水中，备用；5)将经过上述处理的各原料依次加入配料罐中，加入纯化水定量至500kg；6)调节ph值为6.5～7.0，搅拌均匀后用0.22μm的滤膜过滤得滤过液；然后灌装、灭菌得到口服液成品。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。当前第1页12