中药益生元组合物、含中药益生元的培养基、中药益生元与益生菌组合的产品及其制备方法与流程

本发明涉及益生菌产品技术领域，尤其涉及一种中药益生元组合物、含中药益生元的培养基、中药益生元与益生菌组合的产品，以及所述中药益生元与益生菌组合的产品的制备方法。

背景技术：

益生菌是一类对宿主有益生作用的微生物总称，主要定植在生物体肠道及生殖系统中，通过抑制致病菌、帮助机体消化吸收营养物质、增强宿主免疫力和产生有益活性物质等协调宿主微生态平衡。益生元(prebiotics)是通过选择性的刺激一种或少数菌落中细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的食品成分(gibsonandroberfroid，1995)，成功的益生元应是在通过上消化道时，大部分不被消化而能被肠道菌群所发酵，并且仅刺激有益菌群的生长，而不刺激具有潜在致病性或腐败活性的有害细菌。随着益生菌产品的开发与利用，为了进一步提升益生菌产品的效益及培养效率，益生元的开发应用已成为重要研究目标之一。

技术实现要素：

本发明针对现有的益生菌产品有待进一步提升其效益及培养效率的问题，提供一种可促进益生菌生长的中药益生元组合物，以及提供一种不仅可促进益生菌生长，同时还为益生菌产品引入中药活性从而使其效益得到进一步提升的含中药益生元的培养基，应用所述含中药益生元的培养基制备的中药益生元与益生菌组合的产品及制备方法。

为实现上述目的，本发明的一个方面，提供一种中药益生元组合物，包括至少一种中药益生元，所述中药益生元选自石斛成分、北虫草成分、六神曲成分、党参成分、红参成分、燕窝成分、枸杞成分、葡萄籽成分和黄精成分。

优选的，所述石斛成分、北虫草成分、六神曲成分、党参成分、红参成分、枸杞成分、葡萄籽成分、黄精成分均为相应中药的水提物，所述燕窝成分为燕窝提取物干粉。

更优选的，所述石斛成分、北虫草成分、六神曲成分、党参成分、红参成分、枸杞成分、葡萄籽成分、黄精成分均是相应中药的生药浓度为2～10g·100ml^-1的水提物。

所述石斛成分、北虫草成分、六神曲成分、党参成分、红参成分、枸杞成分、葡萄籽成分、黄精成分对应的水提物的制备方法均为：按中药的质量与水的体积之比为1g：10～50ml的比例，将中药置于水中回流提取1～3h，然后浓缩提取液至生药浓度为2～10g·100ml^-1，接着离心并取上层清液，得水提物。

燕窝提取物干粉的制备方法为：将干燕窝浸泡于水中3h以上使其吸水，然后过滤取吸水后的燕窝得滤渣，接着向滤渣中加入干燕窝重量25-35倍的水并炖煮6h以上，再接着过滤并取滤液得燕窝提取液，干燥燕窝提取液得燕窝提取物干粉。

本发明的另一个方面，提供一种含中药益生元的培养基，包括mrs培养基和以上任一所述的中药益生元组合物。

优选的，所述的培养基中，所述中药益生元选自石斛成分、北虫草成分、六神曲成分、党参成分、红参成分、枸杞成分、葡萄籽成分、黄精成分时，中药的生药浓度为0.01～20g·l^-1；所述中药益生元选自燕窝成分时，燕窝提取物干粉的浓度为80-120mg·l^-1。

优选的，所述的mrs培养基的配方为：蛋白胨10.0g·l^-1，牛肉浸粉8.0g·l^-1，酵母浸粉4.0g·l^-1，葡萄糖20.0g·l^-1，磷酸氢二钾2.0g·l^-1，柠檬酸氢二铵2.0g·l^-1，乙酸钠5.0g·l^-1，硫酸镁0.2g·l^-1，硫酸锰0.04g·l^-1，吐温801.0ml·l^-1，ph为5.7±0.2。

本发明的再一个方面，提供一种中药益生元与益生菌组合的产品的制备方法，包括以下步骤：在厌氧箱内挑取益生菌单菌落并接种于mrs培养基，在37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养至对数生长期，得种子液；然后将种子液接种于以上任一所述的培养基中，并于37℃，150～180rpm的厌氧环境中培养；根据益生菌生长曲线回收菌液，得到所述中药益生元与益生菌组合的产品；所述厌氧环境中h2:co2:n2的体积比为1:1:8。

优选的，所述益生菌处于指数生长期或稳定生长期时回收菌液。其中，鼠李糖乳杆菌培养约在6～15h时处于指数生长期，16h后进入稳定生长期，唾液乳杆菌培养约在12～20h时处于指数生长期，21h后进入稳定生长期。

优选的，所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌或动物双歧杆菌。

鼠李糖乳杆菌和唾液乳杆菌为sfda发布的《益生菌类保健食品申报与审评规定(试行)》和《化妆品原料目录》以及卫生部监督中心发布的《可用于普通食品的菌种名单》中的两种常用菌种，目前常用于益生菌产品中。因此，在本发明中将鼠李糖乳杆菌和唾液乳杆菌选为重点研究对象，但适用于本发明所述培养基和培养方法的菌种并不局限于这两种益生菌，还有如长双歧杆菌、动物双歧杆菌等。

本发明的再一个方面，提供一种中药益生元与益生菌组合的产品，所述的产品为通过以上任一所述的制备方法培养益生菌时回收的菌液，所述菌液中包括益生菌和中药益生元。

所述的中药益生元可直接与益生菌进行相关产品的制备。

上述的中药益生元与益生菌组合的产品可用于食品、化妆品和药品等相关领域。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

石斛(学名dendrobiumnobile)，具有益胃生津，滋阴清熱的功效，其多糖含量可超过50％的，本发明中以石斛作为益生菌的益生元，可为益生菌培养提供所需碳源并可促进益生菌生长。

北虫草是北冬虫夏草(学名cordycepsmilitaris)的简称，也叫虫草花、蛹虫草或蛹草，是一种富含高蛋白、氨基酸的食用菌类，目前已经人工培植成功，价格便宜；另外，北虫草具有很强的抗炎和抗氧化功效，本发明中将其作为益生元可促进益生菌生长，为益生菌产品提高效益。

六神曲(学名massamedicatafermentata)，又叫神曲、六曲，是六种药材的发酵产品，具有消食化积、健脾和胃和消食调中的功效。用于脾胃虚弱、饮食停滞、胸痞腹胀、小儿食积，具有b族维生素样作用。本发明中将其作为益生元可促进益生菌生长，为益生菌产品提高效益。

党参(学名codonopsispilosula)，具有补中益气、健脾益气、养血生津的功效，其富含单糖、多糖、低聚糖等糖类物质，本发明中将其作为益生元，可为益生菌培养提供所需碳源并促进益生菌生长，同时可为益生菌产品提高效益。

红参(学名radixginsengrubra)是将人参蒸煮后晒干所得。加热过程使红参中精氨酸双糖苷含量增高，使之具有更强的抗氧化、增强免疫力等功能；此外，红参主要功效包括大补元气、固脱生津、安神等，本发明中将其作为益生元可促进益生菌生长，为益生菌产品提高效益。

燕窝(学名cubilose)为雨燕科动物金丝燕的唾液与绒羽等混合凝结所筑成的巢窝，其富含蛋白质和氨基酸，具有养阴润燥，益气补中，化痰止咳之功效，本发明中将其作为益生元可促进益生菌生长，为益生菌产品提高效益。

黄精(学名polygonatumsibiricum)，又名鸡头黄精、黄鸡菜、笔管菜、爪子参、老虎姜、鸡爪参，具有健脾益肾、补气养阴、润肺等功效。黄精富含多糖，本发明中将其作为益生元可为益生菌培养提供所需碳源并可进益生菌生长，同时其抗炎、抗氧化、降血糖血脂等作用可为益生菌产品提高效益。

枸杞(学名lycium)其主要成分是枸杞多糖，具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用，本发明中将其作为益生元可为益生菌培养提供所需碳源，同时可增加益生菌产品的效益。

葡萄籽，葡萄的种子，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得的产物，含有丰富的氨基酸、维生素及矿物质等，另外葡萄籽中所含的花青素具有抗氧化等功效，本发明中将其作为益生元可为益生菌培养提供所需碳源，同时可增加益生菌产品的效益。

本发明通过将至少一种所述的中药益生元作为碳源加入mrs培养基中，用于培养益生菌，不仅可明显促进益生菌的生长，同时还为益生菌产品引入中药活性从而使其效益得到进一步提升。

本发明开发了一种可促进益生菌生长的中药益生元组合物，以及开发了一种含中药益生元的培养基，通过将至少一种所述的中药益生元作为碳源加入mrs培养基中，用于培养益生菌，不仅可促进益生菌生长，同时还为产品引入中药活性从而使产品的效益得到进一步提升，另外还开发了一种应用所述含中药益生元的培养基制备的具有相应中药功效、效益更佳的中药益生元与益生菌组合的产品。

附图说明

图1a为不同浓度石斛-培养基对鼠李糖杆菌生长曲线的影响；

图1b为不同浓度北虫草-培养基对鼠李糖杆菌生长曲线的影响；

图1c为不同浓度六神曲-培养基对鼠李糖杆菌生长曲线的影响；

图2a为不同浓度石斛-培养基对唾液乳杆菌生长曲线的影响；

图2b为不同浓度北虫草-培养基对唾液乳杆菌生长曲线的影响；

图2c为不同浓度六神曲-培养基对唾液乳杆菌生长曲线的影响；

图3a为鼠李糖乳杆菌与石斛-培养基培养12h的菌液浓度增长率；

图3b为鼠李糖乳杆菌与北虫草-培养基培养12h的菌液浓度增长率；

图3c为鼠李糖乳杆菌与六神曲-培养基培养12h的菌液浓度增长率；

图4a为鼠李糖乳杆菌与石斛-培养基培养24h的菌液浓度增长率；

图4b为鼠李糖乳杆菌与北虫草-培养基培养24h的菌液浓度增长率；

图4c为鼠李糖乳杆菌与六神曲-培养基培养24h的菌液浓度增长率；

图5a为唾液乳杆菌与石斛-培养基培养15h的菌液浓度增长率；

图5b为唾液乳杆菌与北虫草-培养基培养15h的菌液浓度增长率；

图5c为唾液乳杆菌与六神曲-培养基培养15h的菌液浓度增长率；

图6a为唾液乳杆菌与石斛-培养基培养21h的菌液浓度增长率；

图6b为唾液乳杆菌与北虫草-培养基培养21h的菌液浓度增长率；

图6c为唾液乳杆菌与六神曲-培养基培养21h的菌液浓度增长率。

具体实施方式

为了更充分的理解本发明的技术内容，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步介绍和说明。

一、中药益生元的制备

本发明的中药益生元为相应中药的水提物，包括以下9种中药分别经水提取得到的对应的水提物：石斛、北虫草、六神曲、党参、红参、燕窝、枸杞、葡萄籽、黄精。

其中，石斛、北虫草、六神曲、党参、红参、枸杞、葡萄籽、黄精这8种中药相应的中药益生元的制备方法如下：按中药的质量与水的体积之比为1g：10ml的比例，取50g相应的中药并置于500ml的水中热回流水提2h，然后浓缩提取液，接着离心并取上层清液，制取生药浓度为10g·100ml^-1的水提物。按此方法，分别制得8种含不同中药成分的水提物，分别为石斛水提物、北虫草水提物、六神曲水提物、党参水提物、红参水提物、枸杞水提物、葡萄籽水提物、黄精水提物，备用。

燕窝提取物干粉的制备方法为：将干燕窝浸泡于其重量100倍的水中，浸泡3h使其吸水，然后过滤取吸水后的燕窝得滤渣，接着向滤渣中加入干燕窝重量30倍的水并炖煮6h，再接着过滤并取滤液得燕窝提取液，干燥燕窝提取液得燕窝提取物干粉，备用。

中药益生元组合物由上述的九种中药益生元任意组合构成。

二、含中药益生元的培养基的制备

按以下配方配制mrs培养基：蛋白胨10.0g·l^-1，牛肉浸粉8.0g·l^-1，酵母浸粉4.0g·l^-1，葡萄糖20.0g·l^-1，磷酸氢二钾2.0g·l^-1，柠檬酸氢二铵2.0g·l^-1，乙酸钠5.0g·l^-1，硫酸镁0.2g·l^-1，硫酸锰0.04g·l^-1，吐温801.0ml·l^-1，ph～5.7±0.2。

由于mrs培养基直接碳源含量高，为在短时间内获得较直观效果，本发明实验中将mrs培养基稀释一倍为1/2mrs培养基，以1/2mrs培养基进行试验。

石斛-培养基(培养基a)：向1/2mrs培养基中加入石斛水提物，配制石斛水提物的含量分别为2ml·l^-1、10ml·l^-1和20ml·l^-1的石斛-培养基，即石斛-培养基中石斛的生药浓度分别为0.2g·l^-1、1g·l^-1和2g·l^-1。具体的，分别取2ml、10ml和20ml石斛水提物并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的石斛-培养基。

北虫草-培养基(培养基b)：向1/2mrs培养基中加入北虫草水提物，配制北虫草水提物的含量分别为4ml·l^-1、20ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1和200ml·l^-1的北虫草-培养基，即北虫草-培养基中北虫草的生药浓度分别为0.4g·l^-1、2g·l^-1、4g·l^-1、8g·l^-1和20g·l^-1。具体的，分别取4ml、20ml、40ml、80ml和200ml北虫草水提物并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的北虫草-培养基。

六神曲-培养基(培养基c)：向1/2mrs培养基中加入六神曲水提物，配制六神曲水提物的含量分别为4ml·l^-1、20ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1和200ml·l^-1的六神曲-培养基，即六神曲-培养基中六神曲的生药浓度分别为0.4g·l^-1、2g·l^-1、4g·l^-1、8g·l^-1和20g·l^-1。具体的，分别取4ml、20ml、40ml、80ml和200ml六神曲水提物并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的六神曲-培养基。

党参-燕窝-培养基(培养基d)：向1/2mrs培养基中加入党参水提物和燕窝提取物干粉，配制党参水提物的含量分别依次为4ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1且燕窝提取物干粉的含量均为100mg·l^-1的党参-燕窝-培养基，即党参-燕窝-培养基中党参的生药浓度分别为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1。具体的，分别取4ml党参水提物+100mg燕窝提取物干粉、40ml党参水提物+100mg燕窝提取物干粉、80ml党参水提物+100mg燕窝提取物干粉，并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的党参-燕窝-培养基。

黄精-石斛-培养基(培养基e)：向1/2mrs培养基中加入黄精水提物和石斛水提物，配制黄精水提物的含量和石斛水提物的含量均分别为4ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1的三种浓度的黄精-石斛-培养基，即黄精-石斛-培养基中黄精的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的石斛的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1。具体的，分别取4ml黄精水提物+4ml石斛水提物、40ml黄精水提物+40ml石斛水提物、80ml黄精水提物+80ml石斛水提物，并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的黄精-石斛-培养基。

六神曲-党参-红参-培养基(培养基f)：向1/2mrs培养基中加入六神曲水提物、党参水提物和红参水提物，配制六神曲水提物的含量、党参水提物的含量和红参水提物的含量均分别为4ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1的三种浓度的六神曲-党参-红参-培养基，即六神曲-党参-红参-培养基中六神曲的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的党参的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的红参的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1。具体的，分别取4ml六神曲水提物+4ml党参水提物+4ml红参水提物、40ml六神曲水提物+40ml党参水提物+40ml红参水提物、80ml六神曲水提物+80ml党参水提物+80ml红参水提物，并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的六神曲+党参+红参-培养基。

枸杞-葡萄籽-六神曲-培养基(g)：向1/2mrs培养基中加入六神曲水提物、枸杞水提物和葡萄籽水提物，配制六神曲水提物的含量、枸杞水提物的含量和葡萄籽水提物的含量均分别为4ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1的三种浓度的枸杞-葡萄籽-六神曲-培养基，即枸杞-葡萄籽-六神曲-培养基中六神曲的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的枸杞的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的葡萄籽的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1。具体的，分别取4ml六神曲水提物+4ml枸杞水提物+4ml葡萄籽水提物、40ml六神曲水提物+40ml枸杞水提物+40ml葡萄籽水提物、80ml六神曲水提物+80ml枸杞水提物+80ml葡萄籽水提物，并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的枸杞-葡萄籽-六神曲-培养基。

石斛-党参-北虫草-培养基(培养基h)：向1/2mrs培养基中加入石斛水提物、党参水提物和北虫草水提物，配制石斛水提物的含量、党参水提物的含量和北虫草水提物的含量均分别为4ml·l^-1、40ml·l^-1、80ml·l^-1的三种浓度的石斛-党参-北虫草-培养基，即石斛-党参-北虫草-培养基中石斛的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的北虫草的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1，对应的党参的生药浓度分别依次为0.4g·l^-1、4g·l^-1和8g·l^-1。具体的，分别取4ml石斛水提物+4ml党参水提物+4ml北虫草水提物、40ml石斛水提物+40ml党参水提物+40ml北虫草水提物、80ml石斛水提物+80ml党参水提物+80ml北虫草水提物，并分别与余量的1/2mrs培养基混合，配制成1l对应浓度的石斛-党参-北虫草-培养基。

三、制备中药益生元与益生菌组合的产品

益生菌：鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌

培养基：1/2mrs培养基、系列浓度的培养基a-h

系列浓度的培养基a培养鼠李糖乳杆菌：

在厌氧箱内(h2:co2:n2体积比为1:1:8)挑取鼠李糖乳杆菌单菌落，接种于1/2mrs培养基(10ml1/2mrs培养基置于50ml的试管内)，37℃，150rpm厌氧环境培养过夜至指数生长期(约12～18h)，得种子液。

在厌氧箱内取菌液于595nm下检测od值，并用1/2mrs培养基稀释种子液至菌液浓度约为1.0×10⁸cfu·ml^-1。

将种子液继续稀释10倍，然后分别吸取300μl稀释后的种子液分别接种于系列浓度的培养基a和1/2mrs培养基中(30ml培养基置于50ml的试管内)，使各组起始菌液浓度均约为1.0×10⁵cfu·ml^-1；将所有试管置于37℃，150rpm的厌氧环境中培养；根据鼠李糖乳杆菌生长曲线取样检测od595；不含中药益生元的1/2mrs培养基设为空白对照组。

菌株处于指数生长期或稳定生长期时回收菌液，菌液中含有益生菌和中药益生元，得到中药益生元与益生菌组合的产品。

按上述培养方法，分别使用系列浓度的培养基b、培养基c、培养基d、培养基e、培养基f、培养基g、培养基h培养鼠李糖乳杆菌，并于菌株处于指数生长期或稳定生长期时回收菌液。

唾液乳杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌的培养方法均与鼠李糖乳杆菌的培养方法相同。

四、测试

1、不同培养基对鼠李糖乳杆菌的生长曲线的影响

石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)对鼠李糖杆菌生长曲线的影响如图1a、1b、1c所示。

鼠李糖乳杆菌在此接种量与培养条件下，培养约在6～15h时处于对数生长期，16h后进入稳定生长期。

2、不同培养基对唾液乳杆菌的生长曲线的影响

石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)对唾液乳杆菌生长曲线的影响如图2a、2b、2c所示。

唾液乳杆菌在此接种量与培养条件下，唾液乳杆菌培养约在12～20h时处于对数生长期，21h后进入稳定生长期。

3、不同培养基对鼠李糖乳杆菌生长的影响

选取培养12h和24h时的菌液浓度分别作为鼠李糖乳杆菌对数生长期(exponentialphase)和稳定生长期(stationaryphase)的数据比较。

鼠李糖乳杆菌分别与石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)培养12h后，菌液浓度增长率如图3a、3b、3c所示。石斛-培养基(培养基a)中，石斛的生药浓度为0.2g·l^-1的效果最好；北虫草-培养基(培养基b)中，北虫草的生药浓度为0.4g·l^-1的效果最好；六神曲-培养基(培养基c)中，六神曲的生药浓度为4.0g·l^-1的效果最好。

鼠李糖乳杆菌分别与石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)培养24h后，菌液浓度增长率如图4a、4b、4c所示。石斛水提物作为益生元，对鼠李糖乳杆菌的生长促进作用不明显；北虫草-培养基(培养基b)中，北虫草的生药浓度为20.0g·l^-1的效果最好；六神曲-培养基(培养基c)中，六神曲的生药浓度为20.0g·l^-1和8.0g·l^-1的效果最好。从上述实验结果可见，石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)这三种培养基中，使用北虫草-培养基的培养效果最好，即北虫草水提物作为鼠李糖杆菌的中药益生元的效果最好。

鼠李糖乳杆菌分别与培养基d-h培养12h和24h后，菌液浓度相对空白对照组的增长率如下表1所示。

表1培养基d-h对鼠李糖乳杆菌生长的影响

表1中，浓度a指培养基中各中药的生药浓度为0.4g·l^-1；浓度b指培养基中各中药的生药浓度为4g·l^-1；浓度c指培养基中各中药的生药浓度为8g·l^-1；“-”指菌液浓度相对空白对照组的增长率不明显，约为0。

4、不同培养基对唾液乳杆菌生长的影响

选取培养15h和21h时的菌液浓度分别作为鼠李糖乳杆菌对数生长期(exponentialphase)和稳定生长期(stationaryphase)的数据比较。

唾液乳杆菌分别与石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)培养15h后，菌液浓度增长率如图5a、5b、5c所示。石斛-培养基(培养基a)中，石斛的生药浓度为1.0g·l^-1的效果最好；北虫草-培养基(培养基b)中，北虫草的生药浓度为0.4g·l^-1的效果最好；六神曲-培养基(培养基c)中，六神曲的生药浓度为4.0g·l^-1和8.0g·l^-1的效果最好。从上述实验结果可见，石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)这三种培养基中，使用六神曲-培养基的培养效果最好，即六神曲水提物作为鼠李糖杆菌的中药益生元的效果最好。

唾液乳杆菌分别与石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)培养24h后，菌液浓度增长率如图6a、6b、6c所示。石斛水提物作为益生元，对唾液乳杆菌的生长促进作用不明显；北虫草-培养基(培养基b)中，北虫草的生药浓度为0.4g·l^-1和4.0g·l^-1、8.0g·l^-1的效果最好；六神曲-培养基(培养基c)中，六神曲水提物作为益生元，对唾液乳杆菌的生长促进作用明显，并呈量效关系。从上述实验结果可见，石斛-培养基(培养基a)、北虫草-培养基(培养基b)、六神曲-培养基(培养基c)这三种培养基中，使用六神曲-培养基的培养效果最好，即六神曲水提物作为唾液乳杆菌的中药益生元的效果最好。

唾液乳杆菌分别与培养基d-h培养12h和24h后，菌液浓度相对空白对照组的增长率如下表2所示。

表2.培养基d-h对唾液乳杆菌生长的影响

表2中，浓度a指培养基中各中药的生药浓度为0.4g·l^-1；浓度b指培养基中各中药的生药浓度为4g·l^-1；浓度c指培养基中各中药的生药浓度为8g·l^-1；“-”指菌液浓度相对空白对照组的增长率不明显，约为0。

分别用培养基a-h培养长双歧杆菌和动物双歧杆菌，指数生长期的菌液浓度均明显增长，培养基a-h中的中药益生元对长双歧杆菌和动物双歧杆菌的生长具有明显的促进作用。

在其它实验中，本发明所述的九种中药益生元以不同的组合方式添加到mrs培养基中，分别用于培养鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌和动物双歧杆菌，指数生长期的菌液浓度均明显增长，培养基中的中药益生元对鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、长双歧杆菌和动物双歧杆菌的生长具有明显的促进作用。

以上所述仅以实施例来进一步说明本发明的技术内容，以便于读者更容易理解，但不代表本发明的实施方式仅限于此，任何依本发明所做的技术延伸或再创造，均受本发明的保护。