本发明属于兽用药物领域，具体涉及一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液及其制备方法。
背景技术：
五氯柳胺(oxyclozanide，2,3,5,-三氯-n-(3,5-二氯-2-羟基苯基)-6-羟基苯甲酰胺)是水杨酰苯胺类抗寄生虫类药物，别名氯羟柳胺、羟氯柳苯胺、羟氯扎胺等，是一种氧化磷酸化解偶联剂，可降低寄生虫体内三磷酸腺苷(atp)的合成，从而导致虫体因能量代谢紊乱而最终死亡，五氯柳胺不仅对牛、羊肝片吸虫有较好的驱虫效果，而且对绦虫、线虫也有活性，是一种广谱、低毒、低残留的化学合成药物，且至今为止没有相关耐药性的报道，是临床抗蠕虫感染的首选。国外对于五氯柳胺的研究较早，特别是在印度、英国等寄生虫感染的高发病地区，已有大量研究表明该药具有较好的驱虫效果，应用十分广泛。
阿苯达唑(albendazole，5-(丙硫基)-2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯)是一种苯并咪唑类广谱抗寄生虫药物，别名丙硫咪唑、丙硫苯咪唑等。由葛兰素史克公司的动物健康实验室在1972年发现。在体内代谢为亚砜类或砜类后，抑制寄生虫对葡萄糖的吸收，导致虫体糖原耗竭，或抑制延胡索酸还原酶系统，阻碍atp的产生，使寄生虫无法存活和繁殖。阿苯达唑被广泛用于治疗及预防人和动物所患的钩虫病、蛔虫病、鞭虫病、蛲虫病、旋毛线虫病、绦虫病和囊虫病，也用于治疗粪类圆线虫病。同时，对华支睾吸虫病、肺吸虫病和梨形鞭毛虫病也可能有效，甚至有抗疟原虫的作用。到目前为止，阿苯达唑被认为是苯并咪唑类药物中驱虫谱较广、杀虫作用最强的驱虫药之一。
由于五氯柳胺难溶于水；阿苯达唑既难溶于水，又难溶于有机溶剂，目前，五氯柳胺在国外常用剂型以混悬液为主，在国内未有相关产品上市；阿苯达唑常用剂型以片剂和胶囊剂为主，极大地限制了该药在临床上的应用；同时由于阿苯达唑在临床上的长期大量使用，耐药性问题日益严重。
技术实现要素：
本发明为了解决上述背景技术中提到的不足之处，提供了一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液及其制备方法，将难溶性药物五氯柳胺和阿苯达唑制备成复方混悬液，既解决了五氯柳胺和阿苯达唑在畜牧业使用中的弊端，同时也解决了目前我国所使用的抗寄生虫药物存在的耐药性、副反应大和治疗效果不确实等问题，为国内增加兽用抗寄生虫药物新品种，填补市场空白。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.20g，吐温-803.00ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.15g。
本发明同时一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液制备方法，包括以下步骤：
(1)阿苯达唑、五氯柳胺、黄原胶、聚维酮、吐温-80、柠檬酸、苯甲酸钠分别研磨，过150目筛；
(2)将处方量的黄原胶和聚维酮用水泡制溶胀；
(3)加入处方量的柠檬酸和苯甲酸钠，为溶液a；
(4)取处方量吐温-80至配液容器中，搅拌溶解，加入处方量的阿苯达唑、五氯柳胺，搅拌，使其充分润湿，为溶液b；
(5)在搅拌下，将溶液b加入到溶液a中，再加水定容，即得五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液。
本发明的有益效果在于：本发明的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液是将五氯柳胺和阿苯达唑用润湿剂润湿，利用黄原胶和聚维酮的助悬特性，在机械力的作用下形成均一、稳定的分散体系。本发明的五氯柳胺和阿苯达唑复方混悬液解决了五氯柳胺和阿苯达唑在畜牧业使用中的弊端，同时也解决了目前我国所使用的抗寄生虫药物存在的耐药性、副反应大和治疗效果不确实等问题，并且产品性质稳定、再分散性好、质量可控、安全、有效，有利于工业化生产。
具体实施方式
本发明公开了一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.20g，吐温-803.00ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.15g。
本发明同时公开了一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液制备方法，包括以下步骤：
(1)阿苯达唑、五氯柳胺、黄原胶、聚维酮、吐温-80、柠檬酸、苯甲酸钠分别研磨，过150目筛；
(2)将处方量的黄原胶和聚维酮用水泡制溶胀；
(3)加入处方量的柠檬酸和苯甲酸钠，为溶液a；
(4)取处方量吐温-80至配液容器中，搅拌溶解，加入处方量的阿苯达唑、五氯柳胺，搅拌，使其充分润湿，为溶液b；
(5)在搅拌下，将溶液b加入到溶液a中，再加水定容，即得五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液。
所述的黄原胶和聚维酮为助悬剂，吐温-80为润湿剂，柠檬酸为絮凝剂，苯甲酸钠为抗氧化剂。
五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液的筛选过程如下：
(1)通过单因素筛选确定：黄原胶和聚维酮为助悬剂、吐温-80为润湿剂、柠檬酸为絮凝剂、苯甲酸钠为抗氧化剂。
(2)选择l25(56)正交法进行实验设计，对黄原胶、聚维酮、吐温-80、柠檬酸和苯甲酸钠的用量进行筛选，以混悬液的物理特性、沉降体积比、再分散性、润湿效果和含量等作为指标，比较各处方的稳定性，以确定最优处方。
试验例1
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.05g，聚维酮0.20g，吐温-800.60ml，柠檬酸0.30g，苯甲酸钠0.05g。
其制备方法为：
(1)阿苯达唑、五氯柳胺、黄原胶、聚维酮、吐温-80、柠檬酸、苯甲酸钠分别研磨，过150目筛；
(2)将处方量的黄原胶和聚维酮用水泡制溶胀；
(3)加入处方量的柠檬酸和苯甲酸钠，为溶液a；
(4)取处方量吐温-80至配液容器中，搅拌溶解，加入处方量的阿苯达唑、五氯柳胺，搅拌，使其充分润湿，为溶液b
(5)在搅拌下，将溶液b加入到溶液a中，在加水定容，即得五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液。
试验例2
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.05g，聚维酮0.40g，吐温-801.20ml，柠檬酸0.60g，苯甲酸钠0.10g。
制备过程同试验例1。
试验例3
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液,每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.05g，聚维酮0.60g，吐温-801.8ml，柠檬酸0.90g，苯甲酸钠0.15g。
制备过程同试验例1。
试验例4
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.05g，聚维酮0.80g，吐温-802.40ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.20g。
制备过程同试验例1。
试验例5
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.05，聚维酮1.00，吐温-803.00ml，柠檬酸1.50g，苯甲酸钠0.25g。
制备过程同试验例1。
试验例6
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.10g，聚维酮0.20g，吐温-801.20ml，柠檬酸0.90g，苯甲酸钠0.20g。
制备过程同试验例1。
试验例7
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.10g，聚维酮0.40g，吐温-801.80ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.25g。
制备过程同试验例1。
试验例8
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.10g，聚维酮0.60g，吐温-802.40ml，柠檬酸1.50g，苯甲酸钠0.05g。
制备过程同试验例1。
试验例9
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.10g，聚维酮0.80g，吐温-803.00ml，柠檬酸0.30g，苯甲酸钠0.10g。
制备过程同试验例1。
试验例10
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.10g，聚维酮1.00g，吐温-800.60ml，柠檬酸0.60g，苯甲酸钠0.15g。
制备过程同试验例1。
试验例11
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.15g，聚维酮0.20g，吐温-801.80ml，柠檬酸1.50g，苯甲酸钠0.10g。
制备过程同试验例1。
试验例12
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.15g，聚维酮0.40g，吐温-802.40ml，柠檬酸0.30g，苯甲酸钠0.15g。
制备过程同试验例1。
试验例13
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.15g，聚维酮0.60g，吐温-803.00ml，柠檬酸0.60g，苯甲酸钠0.20g。
制备过程同试验例1。
试验例14
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.15g，聚维酮0.80g，吐温-800.60ml，柠檬酸0.90g，苯甲酸钠0.25g。
制备过程同试验例1。
试验例15
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.15g，聚维酮1.00g，吐温-801.20ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.05g。
制备过程同试验例1。
试验例16
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.20g，聚维酮0.20g，吐温-802.40ml，柠檬酸0.60g，苯甲酸钠0.25g。
制备过程同试验例1。
试验例17
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.20g，聚维酮0.40g，吐温-803.00ml，柠檬酸0.90g，苯甲酸钠0.05g。
制备过程同试验例1。
试验例18
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.20g，聚维酮0.60g，吐温-800.60ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.10g。
制备过程同试验例1。
试验例19
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.20g，聚维酮0.80g，吐温-801.20ml，柠檬酸1.50g，苯甲酸钠0.15g。
制备过程同试验例1。
试验例20
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.20g，聚维酮1.00g，吐温-801.80ml，柠檬酸0.30g，苯甲酸钠0.20g。
制备过程同试验例1。
试验例21
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.20g，吐温-803.00ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.15g。
制备过程同试验例1。
试验例22
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.40g，吐温-800.60ml，柠檬酸1.50g，苯甲酸钠0.20g。
制备过程同试验例1。
试验例23
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.60g，吐温-801.20ml，柠檬酸0.30g，苯甲酸钠0.25g。
制备过程同试验例1。
试验例24
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.80g，吐温-801.80ml，柠檬酸0.60g，苯甲酸钠0.05g。
制备过程同试验例1。
试验例25
一种五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，处方组成为：每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮1.00g，吐温-802.40ml，柠檬酸0.90g，苯甲酸钠0.10g。
制备过程同试验例1。
本发明五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液最佳处方筛选评价指标
1.性状
观察记录试验例1～25制备的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液的外观、色泽等，观察结果表明，所制备的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液均为类白色，静置分层后。上层为无色透明液体，下层为类白色液体。
2.沉降体积比的测定
取试验例1-16制备的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液50ml置于50ml具塞试管中，用力摇振1分钟，记下混悬液的开始高度h0，静置2，4，6,12h和1，3，5，7d，分别记录沉降物的高度h，计算混悬液的沉降体积比(f＝h/h0)。由表1可知，试验例12、15、16的沉降体积比均>0.9。
3.再分散性
将试验例1-16制备的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液静置7d后，翻转量筒，观察混悬液的再分散性、物理性状以及絮凝度。由表1可知。试验例1、2、3、4、5、6、7、11、15再分散性较好。
表1各组混悬液的沉降体积比及再分散性测定结果
混悬液最佳配方组成：通过对实施例1～25的考察，确定实施例21为最佳配方，即每100ml混悬液中含五氯柳胺4.00g，阿苯达唑4.00g，黄原胶0.25g，聚维酮0.20g，吐温-803.00ml，柠檬酸1.20g，苯甲酸钠0.15g。
本发明五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液的含量测定
1.五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液含量测定方法：采用aglient1290高效液相色谱，色谱柱为thermohypersilbdsc18(4.6mm×150mm，5um)；流动相为0.1％的乙酸水-10mmol/l乙酸铵：甲醇＝17：83；流速：1.0ml.min-1；检测波长为300nm；色谱柱温度为30℃；进样量为5μl。
2.样品制备方法
对照品溶液的制备：精密称取五氯柳胺、阿苯达唑标准品各4mg，分别置100ml量瓶中，用适量冰乙酸与甲醇溶解后，并用甲醇定容，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液的配制：取五氯柳胺阿苯达唑复方混悬液适量(约相当于五氯柳胺、阿苯达唑各80mg)，置100ml量瓶中，加冰乙酸、甲醇适量溶解并稀释至刻度，充分混匀，离心，精密量取上清液5ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
本发明五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液含量测定：精密称定五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，置于100ml量瓶中，加入4ml冰乙酸，再加入适量甲醇，超声5min，用甲醇定容至刻度，离心，取上清液5ml于100ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。取续滤液用0.22μm微孔滤膜，进样5μl。结果，三批五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液含量结果见表2。
表2三批五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液含量结果
本发明五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液影响因素试验
高温实验：将五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液置密封容器中，在60℃条件下放置10天，于第5天和第10天取样，检查性状及含量变化，见表3；
光照试验：将五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液置密封容器中，在4500±500lx光照条件下放置10天，于第5天和第10天取样，检查性状及含量变化，见表3。
表3五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液影响因素试验结果
五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液急性毒性试验
小鼠口服急性毒性试验：
spf级昆明系小鼠24只，购自兰州兽医研究所，体重在18～22g之间雌雄各半。试验前环境适应饲养7天。预实验：试验组4只小鼠，雌雄各半，一次性口服10g/kg.bw的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，给药后，连续观察7天，小鼠均未死亡。正式试验：将试验组小鼠增至10只，雌雄各半，一次性口服10g/kg.bw的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，连续观察7天，小鼠均未死亡。按照上述方法重复一次实验，实验结果同上。故将五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液判定为实际无毒物质。
大鼠口服急性毒性试验：
清洁级wistar大鼠，购自兰州兽医研究所雌雄各半，体重180～220g。试验前环境适应饲养7天。预实验：试验组4只大鼠，雌雄各半，一次性口服5g/kg.bw的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，给药后，连续观察7天，大鼠均未死亡。正式试验：将试验组大鼠增至10只，雌雄各半，一次性口服5g/kg.bw的五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液，连续观察7天，大鼠均未死亡。按照上述方法重复一次实验，实验结果同上。故将五氯柳胺、阿苯达唑复方混悬液判定为实际无毒物质。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选试验例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述试验例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各试验例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。