本发明涉及兽药技术领域，特别涉及一种抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄的制备方法及其用途。
背景技术：
畜牧养殖业是我国西部高原牧区，尤其是川西高原三州地区(包括川西北甘孜、阿坝和凉山)和西藏等地的主要农业形式和经济支柱。牧区畜禽的常见病和多发病在酷寒条件下常常肆虐爆发，其中以幼龄牦牛和藏绵羊腹泻性疾病和寄生虫疾病更为猖獗，不仅严重制约着高原牧区畜牧业的快速发展，对当地牧民的生活质量的提高和生活水平的提升也造成不同程度的不良影响。
在川西高原三州地区，当地藏兽医常常利用当地独特的藏兽药资源，通过组方或单独用药来进行畜禽相关疾病的防治，并积累了大量宝贵经验，如原阿坝州若尔盖县红星乡兽防站藏兽医常使用悬钩子属药物(插田泡、针刺悬钩子、树莓、茅梅和凉山悬钩子等)单独用药或配伍组方来防治犊牦牛腹泻病、公畜性欲低下和配种性能下降及母畜胎衣不下等疾病。
马蹄黄(spenceriaramalanatrimen)为蔷薇科马蹄黄属植物，属多年生草本药用植物，本属植物只有马蹄黄一个种，主要分布在四川、西藏和云南等高原地区的草地和灌丛，其中以四川西部、云南西北部和西藏东南部的分布最为广泛，其根、茎、花、叶等全植物均可入药。
到目前为止，马蹄黄用于畜禽常见疾病尚未见报道，而且与其他药用植物配伍用于畜禽疾病尤其是抗炎止泻藏兽药的利用也没有报道。相关资料记载的马蹄黄，实为蓼科大黄属植物马蹄大黄，而非本案药用植物马蹄黄。马蹄黄主产于川西北等西部地区，丰富的藏药马蹄黄植物资源能够保证其持续地开发和利用。然而，川西北牧区等广大藏区目前对复方藏兽药马蹄黄抗炎止泻的开发和利用几乎空白。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的缺陷，提供了一种复方马蹄黄的制备方法及其用途，能有效的解决上述现有技术存在的问题。
为了实现以上发明目的，本发明采取的技术方案如下：
一种复方马蹄黄的制备方法，包括以下步骤：
(1)选用马蹄黄、偏翅唐松草、星状风毛菊和针刺悬钩子作为抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄的组方药材，配方按重量份计，比例为4:2:2:1，并粉碎；
(2)取粉碎的药材，以料液比1:10、1:20、1:30、1:40、1:50和1:60的其中一种，加入乙醇中，乙醇浓度为30％、40％、50％、60％、70％和80％的其中一种；
浸提3次，合并3次浸提上清液，70℃下负压浓缩上清液，得抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取物的浓缩物；
浸提温度为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃和80℃的其中一种；
浸提时间为30min、40min、50min、60min、70min和80min的其中一种；
(3)将步骤(2)得到的浓缩物进行ab-8大孔树脂柱纯化纯化1-5次，如3次。
作为优选，所述料液比为：1:20；乙醇浓度为：70％；浸提温度为：40℃；浸提时间为：50min。
作为优选，所述料液比为：1:20；乙醇浓度为：60％；浸提温度为：50℃；浸提时间为：50min。
作为优选，所述料液比为：1:30；乙醇浓度为：70％；浸提温度为：50℃；浸提时间为：50min。
作为优选，所述料液比为：1:30；乙醇浓度为：60％；浸提温度为：50℃；浸提时间为：40min。
作为优选，所述料液比为：1:30；乙醇浓度为：60％；浸提温度为：50℃；浸提时间为：60min。
进一步地，所述步骤(3)具体为：取步骤(2)制备的总黄酮浓缩物，于水中搅拌均匀，装柱ab-8大孔树脂柱，吸附24h后，用3倍柱体积的水洗脱，收集洗脱液并浓缩；
进一步地，所述步骤(3)具体为：取步骤(2)制备的总黄酮浓缩物，于水中搅拌均匀，装柱ab-8大孔树脂柱，吸附24h后，用3倍柱体积的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩；乙醇溶液浓度为：10％、20％、30％、40％、50％、60％和70％的其中一种。
上述公开的复方马蹄黄用于牦牛和藏绵羊腹泻病中抗菌、消炎和镇痛。
与现有技术相比本发明的优点在于：不仅充分利用川西北等西部地区的藏药植物资源优势，为川西北常见藏药材蔷薇科马蹄黄属植物马蹄黄提供有益的医疗用途，同时为藏区偏翅唐松草及悬钩子属药用植物资源的开发利用提供新的思路和方法。此外，通过药物配伍组方并筛选出良好的药用成分提取制备工艺，以及成功复制抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮在牦牛和藏绵羊腹泻病中抗菌、消炎和镇痛最适的疾病模型，为川西北乃至广大藏区禽畜尤其是牦牛和藏绵羊常见和多发性腹泻病的防治提供了有益的参考和选择，为后续以抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮为重点和核心开发药物，研制防治牦牛和藏绵羊炎症性腹泻病等川西北禽畜疾病奠定良好理论基础和数据支持。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下举实施例，对本发明做进一步详细说明。
抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材中，君药马蹄黄采自偏翅唐松草采自四川省甘孜藏族羌族自治州色达县丹青药王神山，经鉴定为蔷薇科马蹄黄属植物马蹄黄(spenceriaramalanatrimen)的全草。星状风毛菊和针刺悬钩子采自甘孜州康定市，偏翅唐松草采自四川省甘孜藏族羌族自治州泸定县燕子沟。抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g各组方药材也可在中药材市场或药店购买到。
实施例1抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例2抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例3抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例4抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入70％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例5抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入70％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例6抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入70％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例7抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:30的料液比加入60％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例8抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入50％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例9抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例10抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:30的料液比加入50％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例11抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例12抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例13抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入50％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例14抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入50％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例15抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:30的料液比加入70％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例16抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入50％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例17抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入70％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例18抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入60％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例19抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例20抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:30的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例21抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例22抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入60％乙醇，于40℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例23抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例24抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于60℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例25抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例26抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:20的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例27抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入70％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间50分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例28抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:30的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间60分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例29抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取工艺
(1)抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材的粉碎；
(2)取步骤(1)粉碎的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄组方药材10g，按重量比计，以1:10的料液比加入60％乙醇，于50℃浸提3次，每次浸提时间40分钟，将3次浸提的上清液合并，70℃下负压浓缩上清液；
实施例30
响应曲面设计法优化抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取物(粗黄酮)
分别取实施例1-29制备得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮提取物，冷冻干燥机冻制得抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮粗提物。由实施例1-29醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮的浸膏得率见表1。
由实施例1醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物1；由实施例2醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物2；由实施例3醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物3；由实施例4醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物4；由实施例5醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物5；由实施例6醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物6；由实施例7醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物7；由实施例8醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物8；由实施例9醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物9；由实施例10醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物10；由实施例11醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物11；由实施例12醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物12；由实施例13醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物13；由实施例14醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物14；由实施例15醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物15；由实施例16醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物16；由实施例17醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物17；由实施例18醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物18；由实施例19醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物19；由实施例20醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物20；由实施例21醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物21；由实施例22醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物22；由实施例23醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物23；由实施例24醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物24；由实施例25醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物25；由实施例26醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物26；由实施例27醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物27；由实施例28醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物28；由实施例29醇提分离得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮称复方马蹄黄总黄酮提取物29。
表1实施例1-29醇提醇提分离得到的复方马蹄黄总黄酮的浸膏得率
实施例31复方马蹄黄总黄酮提取物ab-8大孔树脂纯化后总黄酮含量测定
以芦丁为标准品，采用不同浓度梯度(0,30,60,90,120,150,180μg/ml)绘制标准曲线，根据吸光光度法测定抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮经ab-8大孔树脂纯化后总黄酮的含量。将ab-8大孔树脂纯化后待测定的的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮用乙醇溶解，用全波段酶标仪测定其在510nm左右的吸光度。将吸光度度值代入绘制的芦丁标准曲线，换算经ab-8大孔树脂纯化不同提取工艺得到的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮的相对含量，平行做3次重复。
取实施例制备的复方马蹄黄总黄酮提取物1-29，按本实施例方法分别测定其总黄酮含量，含量测定结果见表2。
表2复方马蹄黄总黄酮提取物ab-8大孔树脂纯化总黄酮的含量
实施例32抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮抗炎、镇痛和止泻作用
分别采用角叉莱胶致小鼠足跖肿胀试验和二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验评价抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮抗炎作用；醋酸致小鼠扭体反应试验和小鼠热板法镇痛试验评价抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮镇痛作用；蓖麻油致小鼠腹泻试验评价抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮止泻作用。实验数据graphpadprism5.0软件进行统计分析处理。
①抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮稀释液的制备：取实施例15制备的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮，用乙醇溶解后去离子水定容至所需浓度。
②抗炎作用
角叉莱胶致小鼠足跖肿胀试验：取icr小鼠40只，雌雄兼用，随机分为5组，分别灌胃给予高(800mg/kg·bw)、中(400mg/kg·bw)、低(200mg/kg·bw)剂量的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮稀释液，阳性和阴性对照组分别给予云南白药(50mg/kg·bw)和等量生理盐水，1次/d，连续7天。末次给药后30min，于每只小鼠右后肢足跖部皮下注射1％角叉莱胶50μl/只，3h后颈椎脱臼处死，于踝关节处剪下左右后肢并称重，以两肢重量之差作为足跖肿胀度。
二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验：按照“角叉莱胶致小鼠足跖肿胀试验”项的分组和给药方法，于末次给药前用测厚仪测量每只小鼠右耳厚度作为正常值，末次给药后0.5h，在每只小鼠右耳背涂20μl二甲苯，1h后，测量每只小鼠右耳的厚度。致炎前后的厚度差即为肿胀值，肿胀抑制率＝(对照组肿胀值－给药组肿胀值)/对照组肿胀值×100％。
③镇痛作用
醋酸致小鼠扭体反应试验：按照“角叉莱胶致小鼠足跖肿胀试验”项的分组和给药方法，于末次给药2h后向每只小鼠腹腔内注射0.8％醋酸溶液0.1ml/10g·bw，观察小鼠15min内出现扭体反应(腹部内凹，躯干与后腿伸展、臀部高起、蠕行)次数，计算镇痛率。镇痛率＝(空白对照组平均扭体反应次数－给药组平均扭体反应次数)/对照组平均扭体反应次数。
小鼠热板法镇痛试验：按照“角叉莱胶致小鼠足跖肿胀试验”项的分组和给药方法，于给药前将每只小鼠放在智能热板仪上，温度控制在55±0.5℃，记录小鼠自放置热板到出现舔舐后足所需时间作为该鼠的痛域值。于末次给药前和末次给药后15min，30min，60min后分别记录每只小鼠的痛阈值。若小鼠在热板上60s无舔舐后足行为则立即取出，以免烫伤小鼠，其痛阈值按60s计算。
④止泻作用
蓖麻油致小鼠腹泻试验：取icr小鼠40只，雌雄兼用，禁食不禁水18h后，平均分为5组，每组8只，每只小鼠放入单独的、垫有报纸的笼子中，分别灌胃给予高(800mg/kg·bw)、中(400mg/kg·bw)、低(200mg/kg·bw)剂量的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮稀释液，阳性和阴性对照组分别给药次碳酸铋(300mg/kg·bw)和等量生理盐水。灌服1h后，各组均灌服0.2ml蓖麻油，每隔1h更换报纸，观察并记录1h、2h、3h、4h后每只小鼠的腹泻次数，计算每组4h内的平均腹泻次数和腹泻抑制率。腹泻抑制率(％)＝(空白组腹泻次数－给药组腹泻次数)/空白组腹泻次数x100％。
⑤抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮抗炎作用
抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮低、中、高3个剂量组对角叉莱胶致小鼠足跖肿胀均有明显的抑制作用，且中、高剂量组的抑制率优于阳性组，对小鼠足跖肿胀抑制率分别为8.40％、31.77％、44.14％，具有明显的剂量依赖效应(表3)。
表3抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对角叉莱胶致小鼠足跖肿胀的影响
注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，下同
各剂量组的抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮均能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀且具有剂量依赖效应，但只有高剂量组和阳性组与空白对照组比较有差异显著性，且高剂量组的抑制作用低于阿司匹林阳性对照组(表4)。
表4抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
⑥抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮镇痛作用
与空白对照组比较，抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮各个剂量组均能减少小鼠醋酸所致扭体反应次数，其中阳性(阿司匹林组)和高剂量组差异显著(p＜0.05)，其镇痛率分别为37.54％和28.04％。提示抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮具有一定的镇痛作用，且具有具有明显的剂量依赖效应(表5)。
表5抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮3个剂量组均能延长热板法镇痛试验中各小鼠出现舔舐后足所需的时间，中剂量组在30min、60min处的痛阈值具有显著差异性(p＜0.05)，其高剂量组在30min、60min处的痛阈值具有极显著差异性(p＜0.01)，且在30min处痛阈值达到峰值，明显优于阿司匹林阳性对照组，提示抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮具有一定的镇痛作用(表6)。
表6抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对小鼠热板法镇痛作用的影响
⑦抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮止泻作用
抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮各个剂量组在4h内均能减少蓖麻油致小鼠腹泻的次数，且在1h、3h时马蹄黄总黄酮低、中、高剂量组均显著减少腹泻次数，与高剂量组达到极显著(p＜0.01)。从给药组和空白对照组4h平均腹泻次数和腹泻抑制率可以看出，抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对蓖麻油诱导的腹泻具有抑制作用，并呈现一定的量效相关性(表7)。
表7抗炎止泻藏兽药复方马蹄黄总黄酮对小鼠蓖麻油性腹泻的影响
本领域的普通技术人员将会意识到，这里所述的实施例是为了帮助读者理解本发明的实施方法，应被理解为本发明的保护范围并不局限于这样的特别陈述和实施例。本领域的普通技术人员可以根据本发明公开的这些技术启示做出各种不脱离本发明实质的其它各种具体变形和组合，这些变形和组合仍然在本发明的保护范围内。