本发明属于医药技术领域,涉及和厚朴酚的新用途,具体地涉及和厚朴酚在制备用于预防或治疗桥本氏甲状腺炎和/或其并发症的产品中的用途。
背景技术:
甲状腺疾病在中国的发病率相当高,根据各方数据估计,总发病率大约在20%,预计在中国有2亿以上人口患有这类疾病。根据2010年《中国首次十城市社区居民的甲状腺疾病流行病学调查》公布的结果,甲状腺功能亢进症的患病率达1.3%,甲状腺功能减退症的患病率达6.5%,甲状腺结节的患病率达18.6%。另外,在甲状腺结节中有5%-15%是恶性的,也就是甲状腺癌。我国甲状腺疾病知晓率、治疗率都非常低,目前甲状腺疾病的整体治疗率不足5%。
桥本氏甲状腺炎是一种以甲状腺为慢性淋巴细胞性浸润性为特征、甲状腺功能细胞被一系列细胞或抗体介导的免疫功能细胞或分子攻击而导致的自身免疫性疾病,多见于30-50岁中年女性,发病男女比例为1:5.7-1:6。在桥本氏甲状腺炎患者中,每年大概有5%由温和性甲减或甲亢发展成显性甲减或甲亢;部分桥本氏甲状腺炎病人有可能自愈,而部分可发生癌变,癌变率为5%-15%。
桥本氏甲状腺炎具有一定的遗传倾向,10%-15%的患者有家族史,目前已经肯定的遗传学因素包括hla-dr5的表达、hla-dr3的表达以及细胞毒性t淋巴细胞相关抗原-4(ctla-4)的下调。同时,在患有其他自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎、1型糖尿病、红斑狼疮)的人群中,桥本氏甲状腺炎发病率更高。环境因素亦起一定的作用,包括碘、硒及某些病毒和细菌均与本病的发展相关。
桥本氏甲状腺炎发病机制非常复杂,是多因素参与的结果,包括遗传、免疫、病原微生物、饮食、环境及社会因素等。目前人们对甲状腺疾病的致病因素和发病机制仍然了解甚少。
鉴于桥本氏甲状腺炎复杂的发病机制,目前没有明确有效的药物可以使用,而该病通常不会自愈,如果置之不理任其发展,可能会导致永久性甲减,需要终身服甲状腺激素。目前西医的观点是桥本氏甲状腺炎不可治疗,只能在该病发展为甲减时再通过服用甲状腺激素进行对症治疗。
厚朴是一味具有广泛药效作用的中药,在国内外用于多种疾病的治疗。和厚朴酚(honokiol)是厚朴最主要的两个活性组分之一,其化学式为c18h18o2,结构式为
近年来,对和厚朴酚的各种药效学研究更为深入,和厚朴酚的作用机制也更为清晰。已有大量科研报道称,和厚朴酚具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抑制血管生成、抗痉挛、抗抑郁等功能作用。同时,和厚朴酚的毒理学实验、药物动力学实验和药物代谢实验等研究,都证明其适合开发成药。
目前尚未有和厚朴酚用于预防或治疗桥本氏甲状腺炎和/或其并发症的报道。
技术实现要素:
针对上述桥本氏甲状腺炎的临床困境,发明人基于对和厚朴酚的药效、药理及桥本氏甲状腺炎发病机制的深刻认识和理解,利用患有桥本氏甲状腺炎的小鼠做了临床前药效评估,目的在于将和厚朴酚应用于桥本氏甲状腺炎和/或其并发症的预防或治疗,这将极大地改善目前桥本氏甲状腺炎的治疗困境,即无药可用的境况,为新药的开发及老药新用提供了借鉴途径。
本发明第一方面涉及和厚朴酚在制备用于预防或治疗受试者中的桥本氏甲状腺炎和/或其并发症的产品中的用途。
在优选的实施方案中,所述预防或治疗为减少受试者甲状腺组织中的淋巴细胞浸润。
在优选的实施方案中,所述预防或治疗为修复受试者甲状腺组织中由桥本氏甲状腺炎引起的病理性损伤。
在优选的实施方案中,所述受试者为人。
在优选的实施方案中,所述产品包括药物、保健品或食品。
在优选的实施方案中,所述产品的施用量为活性成分和厚朴酚基于受试者体重计20-800mg/kg,优选为40-600mg/kg,更优选为80-400mg/kg,最优选为160-250mg/kg。
在优选的实施方案中,所述药物可以以单位剂量形式给药,给药途径可以为肠道或非肠道,如口服、肌肉注射、皮下、静脉注射或直肠等。施用时,中和厚朴酚的浓度为2-100mg/ml,优选为5-60mg/ml,更优选为10-40mg/ml,最优选为15-25mg/ml。
在优选的实施方案中,所述药物包含活性成分和厚朴酚和一种或多种可药用辅料。其中所述辅料包括稀释剂和吸收剂、湿润剂和粘合剂、崩解剂、崩解抑制剂、吸收促进剂、润滑剂、注射剂稀释剂、等渗剂、助溶剂、缓冲剂、ph调节剂、溶媒、渗透压调节剂、抗氧剂、防腐剂、矫味剂。所述药物的给药剂型可以是片剂、胶囊剂或注射剂等,并且可以是普通制剂、缓释制剂或控释制剂等。为了将药物制成片剂可以广泛使用本领域公知的各种辅料,包括稀释剂和吸收剂,如淀粉、糊精、硫酸钙、干露醇、硅酸铝等;湿润剂和粘合剂,如水、甘油、聚乙二醇、丙醇、糊精、糖浆、甲基纤维素、硫酸钾等;崩解剂,如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、碳酸钙、聚氧乙烯、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂,如蔗糖、可可脂、氢化油等;吸收促进剂,如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂,如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、聚乙二醇等。还可将片剂进一步制成包衣片,如糖包衣片、薄膜包衣片或双层片和多层片。为了将药物制成胶囊剂,可将药物与上述任何一种或多种辅料混合,并将由此得到的混合物置于硬的胶囊或软胶囊中。也可将药物制成微囊剂,混悬于水性介质中制成混悬剂,亦可装入硬胶囊中制成注射剂。为了将药物制成注射剂,如溶液剂、乳剂、冻干粉针和混悬剂等,可以使用本领域公知的各种稀释剂,例如水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇等。另外,为了制备等渗注射剂,可以向注射剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油;此外,还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、ph调节剂等。
在优选的实施方案中,所述药物还包含其他用于预防或治疗桥本氏甲状腺炎和/或其并发症的活性成分。
在优选的实施方案中,所述和厚朴酚还可以用与其具有相同活性基团的和厚朴酚结构类似物代替,所述和厚朴酚的结构类似物的结构式如下所示(详见中国专利申请《和厚朴酚衍生物及其制备分离方法和用途》(cn106278829a),通过引用将其并入本文中):
本发明第二方面涉及一种药物组合物,其包含活性成分和厚朴酚和一种或多种辅料,或者由活性成分和厚朴酚和一种或多种辅料组成。
优选地,一种包含和厚朴酚的药物组合物,其具有如下组成:
和厚朴酚0.005-0.02重量份,优选0.009-0.015重量份
乙醇0.01-0.04重量份,优选0.015-0.025重量份
peg-4000.05-0.22重量份,优选0.08-0.18重量份
余量为水。
附图说明
图1为显微镜下观察的未建模小鼠(正常小鼠)甲状腺的苏木精-伊红(he)染色图。其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺滤泡完整,未见上皮细胞增生以及淋巴细胞浸润。
图2为显微镜下观察的建模七周之后小鼠甲状腺的he染色图。其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生,有淋巴细胞浸润现象,甲状腺滤泡正在逐渐被破坏。
图3中示出了正常小鼠、桥本氏甲状腺炎建模成功之后的小鼠、给予安慰剂(清水)治疗4周的小鼠以及给予hk(和厚朴酚)治疗4周的小鼠血清中的tpo抗体(tpoab)水平(u/ml)。由图中可以看出,相较于安慰剂组,hk(和厚朴酚)治疗组小鼠血清中的tpo抗体(tpoab)水平(u/ml)显著降低。
图4为显微镜下观察的建模成功之后给予清水治疗4周b的小鼠甲状腺的he染色图。其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生,淋巴细胞浸润明显,甲状腺滤泡正在逐渐被破坏,未见好转迹象。
图5为显微镜下观察的建模成功之后继续给予nai刺激4周的小鼠甲状腺的he染色图。其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生加重,淋巴细胞浸润更加明显,甲状腺滤泡被破坏。
图6为显微镜下观察的建模成功之后给予和厚朴酚治疗4周的小鼠甲状腺的he染色图。其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生好转,淋巴细胞浸润情况明显减少,甲状腺滤泡细胞间隙中的淋巴细胞被吸收,逐渐以纤维组织代替。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是示例性的,旨在对本发明提供进一步的解释和说明,而非意图限制本发明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的技术人员通常理解的相同含义。
实施例1—和厚朴酚用于治疗桥本氏甲状腺炎的作用测定
1.材料
1.1药品与试剂
本实施例中使用的和厚朴酚由发明人自行提取纯化得到(纯度大于99.0%),具体提取方法请参见本申请人的专利申请《羟基磷灰石辅助过滤制备和厚朴酚与厚朴酚混合物的方法》(cn106588578a),通过引用将其并入本文中。另外,和厚朴酚还可以采用本领域技术人员公知的其他方法进行提取纯化,如大孔吸附树脂法、硅胶色谱法、梯度ph分离法和逆流色谱法等。另外,也可以通过商购获得纯度大于99.0%的和厚朴酚。
碘化钠(nai):大连美仑生物技术有限公司
乙醇:国药集团化学试剂有限公司
peg-400:天津市科密欧化学试剂有限公司
1.2仪器
移液器:eppendorf;
纯水仪:美国milli-q公司产品,ftsn97007
旋涡混匀器:type16700mixer,thermolyne
电子天平:赛多利斯科学仪器(北京)有限公司,sartoriusbt125d
正置研究级显微镜:olympusbx51trf
1.3实验小鼠
购于美国jackson实验室的nod.cg-h2h4/diltacummj品系小鼠。
在本实施例利用了小鼠nod.cg-h2h4/diltacummj为药效学检测模型。nod.cg-h2h4/diltacummj小鼠模型是桥本氏甲状腺炎领域公认的最接近人类桥本氏甲状腺炎疾病的模型,该小鼠大部分(60-70%)在7-10月龄时会患自发性桥本氏甲状腺炎,并产生自身igg抗体。如果通过饮水喂服0.05%nai,100%的小鼠会在4月龄左右时患桥本氏甲状腺炎(参见braley-mullenh;sharpgc;medlingb;tangh.1999.spontaneousautoimmunethyroiditisinnod.h-2h4mice.jautoimmun12(3):157-65,该参考文献以引用的方式全文纳入本文)。该模型的重要用途之一是药效学检测。在本实施例中,所使用的患桥本氏甲状腺炎小鼠模型为nod.cg-h2h4/diltacummj小鼠经nai诱导出来的类人桥本氏甲状腺炎小鼠模型。
2.方法
2.1小鼠桥本氏甲状腺炎模型的建立
(1)待同一批时间相近出生的新生小鼠长到7-8周时,将小鼠的饮用水换成含0.05%nai的水。诱导7周之后随机抽取6只小鼠,取甲状腺做he染色。显微镜下观察的结果显示,无论雌雄,小鼠均100%发生了甲状腺淋巴细胞浸润,如图2所示,证明建模成功。
(2)诱导8周后(he染色实验需要一周的时间才能出结果,可以认为在这一周的时间中,小鼠的甲状腺病变情况处于加重状态)开始分组给药。
2.2和厚朴酚治疗小鼠甲状腺炎
(1)分组方式如下:
清水组:将小鼠的饮用水换成清水。
nai组:继续给予含0.05%nai的水。
和厚朴酚组:将小鼠的饮用水换成清水,并同时给予和厚朴酚治疗,采用口服给药和厚朴酚溶液的方式。
(2)和厚朴酚溶液的配制:取和厚朴酚粉末200mg,加入500μl乙醇和2mlpeg-400,充分涡旋溶解之后,用双蒸水(ddh2o)稀释到10ml,即配制成浓度为20mg/ml的和厚朴酚溶液,现配现用,避光4℃下保存不超过3天。
(3)给药方式:口服,一周五次
(4)给药剂量:每次200mg/kg,按小鼠体重给药
2.3评价方法与结果判定
(1)给药4周后分别取各实验组小鼠的外周血血清,检测小鼠外周血中tpo抗体(tpoab)的水平。处死小鼠,取小鼠甲状腺做he染色,显微镜下观察小鼠甲状腺的病变情况。
(2)病理检测指标:he染色观察小鼠甲状腺淋巴细胞浸润情况,甲状腺组织纤维修复情况。
3.结果
图3中示出了正常小鼠、桥本氏甲状腺炎建模成功之后的小鼠、给予安慰剂(清水)治疗4周的小鼠以及给予hk(和厚朴酚)治疗4周的小鼠血清中的tpo抗体(tpoab)水平(u/ml)。由图中可以看出,相较于安慰剂组,hk(和厚朴酚)治疗组小鼠血清中的tpo抗体(tpoab)水平(u/ml)显著降低。
如图4至图6所示,清水组和nai组两个对照组的小鼠的甲状腺组织病变情况均没有好转迹象(清水组结果如图3所示,其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生,淋巴细胞浸润明显,甲状腺滤泡正在逐渐被破坏,未见好转迹象;nai组结果如图4所示,其中小鼠的甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生加重,淋巴细胞浸润更加明显,甲状腺滤泡被破坏);而给予和厚朴酚治疗后4周的小鼠,其甲状腺组织中的甲状腺上皮细胞增生好转,淋巴细胞浸润情况明显减少,甲状腺滤泡细胞间隙中的淋巴细胞被吸收,逐渐以纤维组织代替。
4.结论
患桥本氏甲状腺炎小鼠的甲状腺组织的整体病理迹象表明,和厚朴酚对于桥本氏甲状腺炎有治疗作用,对由于桥本氏甲状腺炎引起的病理性损伤有修复作用。
本发明的研究表明,单用和厚朴酚即具备治疗桥本氏甲状腺炎的活性,为桥本氏甲状腺炎的治疗及和厚朴酚的新药理作用研究及潜在应用提供新思路。另外,本发明中将和厚朴酚老药新用,节省了很多安全性方面研究的时间成本和人力成本,有利于加快和厚朴酚用于治疗甲状腺相关疾病的药物研发和临床应用。
实施例2
一种包含和厚朴酚的药物组合物,其具有如下组成:
和厚朴酚0.01重量份
乙醇0.02重量份
peg-4000.11重量份
余量为水。
上述实施例为本发明的探索性实施例,并不代表该药治疗桥本氏甲状腺炎的最佳给药及组合方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。