构树宁E的医药新用途的制作方法

本发明涉及构树宁e(broussonine)抑制巨噬细胞炎症的用途，属于医药技术领域。

背景技术：

炎症是对病原体和受损细胞的反应的一种防御反应。因此，炎症是先天免疫系统在身体状况中的重要组成部分。然而，无序和过度的炎症反应会攻击身体的健康组织，并被认为是动脉粥样硬化和关节炎等各种疾病的有害因素。脂多糖(lps)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分，在炎症反应的病理生理学中起着至关重要的作用[3]。lps侵袭激活免疫细胞产生大量细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(tnf-α)，白细胞介素-6(il-6)，白细胞介素-8(il-8)，诱导型一氧化氮合酶(inos)和环加氧酶(cox)2。因此，干扰由lps引起的炎症反应已在抗炎药物的开发中得到充分认识。

巨噬细胞是先天免疫的关键细胞成分，是防御病原体和细胞碎片的第一道防线。面对外源性刺激，如lps，巨噬细胞表现出显着的表型可塑性和异质性。响应不同的环境信号，巨噬细胞可以极化为两种表型，包括经典激活的(m1)巨噬细胞和激活的(m2)巨噬细胞，它们在发病机制或组织损伤过程中起着对比作用。巨噬细胞向经典表型(m1)的极化通常由t辅助细胞1(th1)细胞因子如tnf-α和ifnγ刺激。m1巨噬细胞产生高水平的促炎细胞因子，包括tnf-α，il-6，il-1β，il-12和il-23[11,12]。巨噬细胞极化成m2表型被th2细胞因子如il-13和il-14以及巨噬细胞集落刺激因子(m-csf)激活。m2巨噬细胞产生抗炎因子，包括il-10，精氨酸酶-1(arg-1)和cd206，有助于组织愈合和修复。研究表明，m1巨噬细胞和m2巨噬细胞是可以互换的。这种转化使巨噬细胞在疾病的进展中发挥双重作用。

broussonine(cas号：90902-21-9)是一种从broussonetiakanzinoki树皮中分离出来的新型酚类化合物。

技术实现要素：

本发明通过细胞模型筛选，找到了一种全新的可以抑制巨噬细胞炎症的药物，能够促进巨噬细胞向m2抗炎型转变。

本发明提供构树宁e在制备预防和/或治疗巨噬细胞炎症疾病的药物中的应用。

所述构树宁e的化学结构式如下：

进一步的，所述构树宁e能够作为针对减轻脂多糖引起的巨噬细胞炎症的药物，所述巨噬细胞炎症疾病包括外周炎症所致的脓毒血症、肺损伤、支气管哮喘。

另一方面，一种药物组合物，其中含有治疗有效量的构树宁e，所述的药物组合物在制备预防和/或治疗巨噬细胞炎症疾病的药物中的应用。

另一方面，一种药物制剂，其中含有治疗有效量的构树宁e及药学上可接受的载体、佐剂或媒剂，所述的药物制剂在制备预防和/或治疗巨噬细胞炎症疾病的药物中的应用。

本发明中，在给予哺乳动物上述化合物及其药学上可接受的盐，以及这些化合物的溶剂化物(这里统称为“治疗药物”)时，可以单独使用，或者最好是按照规范的制药方法将其与适于药用的载体或稀释剂配合后使用。给药方式可以经各种途径，包括口服、非胃肠道给药或局部给药。这里所指的非胃肠道给药包括但并不限于静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射和透皮给药。

本发明经过实验证明：构树宁e能够显著促进m2抗炎型抗炎细胞因子的表达。

实验过程中，所述构树宁e的药物用量为：细胞5-20μm。

细胞中的实验结果显示：脂多糖明显造成巨噬细胞中炎症因子tnf-α蛋白的表达，并促进促炎细胞因子tnf-α、il-1β、il-6、inos及cox-2的mrna表达上调，20μm构树宁e能够显著抑制tnf-α蛋白及以上促炎细胞因子mrna的表达。并且，构树宁e能够显著促进m2抗炎细胞因子il-10、cd206及arg1mrna的表达，在20μm下未见明显毒性。

本发明的优点在于：

(1)本发明首次发现了构树宁e具有抑制巨噬细胞炎症的作用，并且在有效剂量下无明显毒性。

(2)本发明中首次发现了构树宁e能够促进巨噬细胞向抗炎m2型转变，发挥抗炎作用。

附图说明

图1为实施例中构树宁e对raw264.7的细胞活力影响；

图2为实施例中构树宁e对脂多糖刺激的raw264.7细胞中炎症因子tnf-α蛋白表达的影响。其中^##p<0.01,vscontrol；^*p<0.05,^**p<0.01,vslps,(graphpad6.0,bonferroni'stest)；

图3a至图3e分别为实施例中构树宁e对脂多糖刺激的raw264.7细胞中炎症因子tnf-α、il-1β、il-6、inos及cox-2的mrna表达的影响。其中^##p<0.01，^###p<0.001；^*p<0.05,^***p<0.001vslps,(graphpad6.0,bonferroni'stest)；

图4a至图4c分别为实施例中构树宁e对脂多糖刺激的raw264.7细胞中抗炎细胞因子il-10、cd206及arg1mrna表达的影响。其中^#p<0.05，^##p<0.01；^*p<0.05,^**p<0.01vslps,(graphpad6.0,bonferroni'stest)。

具体实施方式

为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

药物及试剂：本实验所用构树宁e购自云南西力生物技术有限公司，其它试剂为市售的分析纯试剂。

细胞活力测定：构树宁e(5-20μm)处理raw264.7细胞24小时，mtt方法测定细胞活力。

细胞中炎症因子蛋白的表达测定，构树宁e(5-20μm)预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用2小时，依据商品化试剂盒操作说明elisa技术检测细胞上清中炎症因子tnf-α的表达。

促炎细胞因子mrna表达的测定：20μm构树宁e预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用2小时，采用rt-pcr的方法测定细胞中tnf-α、il-1β、il-6、inos及cox-2mrna的表达。

抗炎细胞因子mrna表达的测定：20μm构树宁e预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用12小时，采用rt-pcr的方法测定细胞中il-10、cd206及arg1mrna的表达。

实施例1

细胞活力测定：构树宁e(2.5～20μm)预处理raw264.7细胞24小时，mtt方法测定细胞活力。试验结果如图1所示，由图可见，构树宁e在20μm下对raw264.7细胞未见明显毒性。

实施例2

细胞tnf-α释放量测定：构树宁e(2.5～20μm)预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用2小时后，依据商品化试剂盒操作说明elisa技术检测细胞上清中炎症因子tnf-α的表达。试验结果如图2所示，^##p<0.01,vscontrol；^*p<0.05,^**p<0.01,vslps，(graphpad6.0,bonferroni'stest)。由此可见，脂多糖明显造成巨噬细胞raw264.7中炎症因子tnf-α的表达上调，构树宁e具有良好的抗炎活性，能很好的抑制巨噬细胞中炎症因子tnf-α的表达，有效量为5-20μm，优选20μm。

实施例3

细胞促炎细胞因子mrna表达测定：20μm构树宁e预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用2小时，采用rt-pcr的方法测定细胞中促炎细胞因子tnf-α、il-1β、il-6、inos及cox-2的mrna表达。试验结果如图3a至图3e所示，其中^##p<0.01，^###p<0.001；^*p<0.05,^***p<0.001vslps,(graphpad6.0,bonferroni'stest)。通过结果可以看出，构树宁e能够显著抑制脂多糖lps引起的巨噬细胞促炎细胞因子mrna的增加，发挥抑制外周炎症的作用。

实施例4

细胞抗炎细胞因子mrna表达测定：20μm构树宁e预处理raw264.7细胞3h，加入脂多糖lps(100ng/ml)作用12小时，采用rt-pcr的方法测定细胞中抗炎细胞因子il-10、cd206及arg1mrna的表达。试验结果如图4a至图4c所示，其中^#p<0.05，^##p<0.01；^*p<0.05,^**p<0.01vslps,(graphpad6.0,bonferroni'stest)。通过结果可以看出，构树宁e能够显著促进脂巨噬细胞中抗炎细胞因子mrna的增加，促进局势细胞向抗炎型转型。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。