一种定量阐述诃子炮制草乌精准减毒的技术工艺的制作方法

本发明涉及医药技术领域，是一种定量阐述诃子炮制草乌精准减毒的技术工艺。

背景技术：

很多蒙药处方中使用了诃子汤炮制的草乌药材。蒙成药那如-3和那如-5，其君药为制草乌。据蒙医理论，方中制草乌祛风寒、通络、止痛。用于风湿、类风湿性关节炎，皮肤瘙痒症，湿疹，腰痛症。

草乌为毛茛科植物北乌头(acointumkusnezoffureichb.)的干燥块根加工而成。蒙医认为制草乌具有杀“粘”，止痛，燥“黄水”等功效。中医认为制草乌其性味辛、苦、热，有毒，有祛风除湿，温经止痛之功效，用于风寒湿痹，关节疼痛，跌打损伤疼痛，心腹冷痛等症。

草乌中主要有效成分是乌头类生物碱：乌头碱(aconitine)、新乌头碱(meaconitine)、次乌头碱(hypaconitine)，素馨乌头碱(jesaconitine)、次氧乌头碱(deoxyaconitine)。此外，草乌中还含有北乌头碱(beiwutine)、得姆啶(denudine)等。因产地不同，草乌中的毒性乌头碱型生物碱的种类不同。在吉林和内蒙古产的草乌主要含有乌头碱、新乌头碱、次乌头碱，而在新疆产的草乌主要为乌头碱。

草乌的主要有效成分是乌头类生物碱，乌头类生物碱是一种具有很强生理活性的双酯类生物碱，现代药理学研究证明具有抗炎、镇痛、免疫调节等作用。

目前，已经有几种草乌药材的炮制方法。专利(cn2007101375071及cn200910003515.6)中草乌经水浸泡，108～130℃热干燥3小时得草乌炮制品的技术工艺；专利(cn201110153870.9)涉及等量诃子和草乌一起在水中浸泡5-7天炮制的技术工艺；专利(cn106539895a)涉及到了用水浸泡及水煮制备制草乌的工艺技术；专利(cn201410495316.2)涉及到了用水浸泡及干蒸制备制草乌的工艺技术；专利cn200910167724.4涉及到了用nahco2及na2co2等配置的碱性溶液浸泡草乌药材，然后用蒸、煮的方法炮制草乌。

虽有专利涉及到了草乌的炮制技术，但涉及诃子汤炮制草乌专利只有一项(cn201110153870.9)，该专利涉及到每天换水达到炮制减毒的目的。本研究针对传统蒙药诃子炮制草乌的方法，将草乌制成切片和粗粉，再用诃子粗粉的提取物水溶液浸泡草乌达到减毒的目的。

技术实现要素：

本发明旨在公开了一种定量阐述诃子炮制草乌精准减毒的技术工艺。本工艺中诃子炮制汤每天更换一次，用hplc检测毒性生物碱在炮制过程中的变化；对炮制诃子汤中乌头碱型生物碱的变化进行动力学分析，确定草乌片和草乌粗粉不同的炮制时间，同时检测诃子炮制汤酸度的变化。最终确定不同草乌药材形式及毒性乌头型生物碱含量的炮制时间及替代终点，从而达到蒙药诃子炮制草乌精准减毒，方便制草乌在蒙药制剂领域的安全应用。

考虑到蒙药草乌存在不同方式的炮制处理工艺，因此本工艺只涉及将草乌药材处理成草乌切片和草乌粗粉。

诃子发挥草乌的减毒作用，因此也需要将诃子提取之后处理成诃子汤。

在草乌炮制的过程中，乌头碱型生物碱为草乌减毒的毒性靶标。控制乌头碱型生物碱的含量就间接控制了草乌的炮制品(制草乌)毒性。

建立高效液相色谱法测定炮制诃子汤中乌头碱含量。

高相液相方法学验证包括专属性、检测限、线性范围、精密度、重复性、溶媒量、加样回收、稳定性及溶剂稀释比。

用药代动力学分析软件phoenixwinnonlin6.4对乌头碱型生物碱浓度及诃子汤酸度变化进行非房室模型参数的计算。

用群体药代动力学分析软件nonmem7.3对乌头碱型生物碱浓度及诃子汤酸度变化进行链式动力学模型进行计算分析。模型的实用性用参数的准确性及模型诊断图来说明。

用链式动力学模型区分诃子汤炮制草乌切片和草乌粗粉的不同，乌头碱型生物碱在药材中溶出速率，溶出效率，及清除速率的不同。

以2015版药典规定制草乌药材中乌头碱生物碱的含量不超过0.04％，在蒙药复方那如-3中的含量0.011％为限度。用文献数据验证乌头碱型生物碱链式动力学模型的实用性并预测草乌切片和草乌粗粉的炮制时间，同时预测诃子汤中ph的酸度。

利用链式模型优化诃子汤炮制草乌的传统炮制方案，同时确定诃子汤的酸度变化为制草乌中乌头碱含量(0.04％)的炮制终点来代替传统炮制过程中口尝来确定制草乌达标的不足，即蒙医传统阐述的“麻舌感”程度。

该技术中主要研究新疆草乌中的毒性成分乌头碱的炮制动力学变化，其目的是降低分析的难度，方便模型的建立。

有益效果：

本发明通过建立动力学分析模型，为蒙药草乌诃子汤的精准减毒制提供了定量阐述基础。

附图概要说明

图1优化传统蒙药诃子炮制草乌方案

图2代表性高效液相色谱图(a：空白诃子汤；b：空白诃子汤溶解乌头碱(b)及苯甲酰乌头碱(a)；c：诃子汤炮制草乌片后乌头碱；d：诃子汤炮制草乌粉后乌头碱)

图3乌头碱及诃子汤酸度变化的链式动力学模型(仿生药代动力学及药效动力学)(ac:乌头碱；ph：诃子汤酸度)

图4乌头碱及诃子汤酸度变化的曲线图(a和b：诃子汤炮制草乌粉和草乌片后乌头碱浓度的变化；c和d：诃子汤炮制草乌粉和草乌片后诃子汤酸度的变化)。圆圈表示乌头碱及诃子汤酸度的变化，三角形表示空白诃子汤酸度的变化。

图5乌头碱及诃子汤酸度变化的链式动力学模型拟合曲线(a和b：诃子汤炮制草乌粉和草乌片后乌头碱浓度的变化；c和d：诃子汤炮制草乌粉和草乌片后诃子汤酸度的变化)。圆圈表示乌头碱及诃子汤酸度的变化。

图6模型内部验证(a：加权残差对时间；b：加权残差对实验个体拟合；c：群体拟合对个体拟合；d：个体拟合对实际测得值)。

图7预测制草乌需要的炮制时间(a：制草粗粉；b：制草乌片)。空心方框表示文献值转化之后的乌头碱浓度。

图8预测诃子汤的酸度变化(a：制草粗粉；b：制草乌片)。实心方框表示预测诃子汤的酸度值。

图9优化诃子炮制草乌的方案(a：炮制时间；b：诃子汤的酸度)。三角形代表草乌片，圆圈表示草乌粗粉，0.684％为实验实际测定的乌头碱的含量。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，结合优化传统蒙药诃子炮制草乌方案(图1)及实例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一、实验材料、试剂、仪器

1.实验材料

新疆草乌(lot.2013c1110)，云南诃子(lot.2013h1110)。

草乌药材用水浸泡24h,切制成厚度2mm的切片，晾干备用。

将草乌切片进一步粉碎，制成粒度为过3号筛50目的粉末备用(含量测定)，制成粒度为小于24目的粗粉备用(炮制减毒)。

云南诃子粉碎成小于24目的粉末备用(制备诃子汤)。

2.实验试剂

色谱纯：乙腈(fisher)，冰乙酸、三乙胺(天津市光复科技发展有限公司)；水为超纯水；标准品：乌头碱(宝鸡市辰光生物科技有限公司，批号：20160514，纯度98％以上)，苯甲酰乌头原碱(中药化学对照品，四川省维克奇生物科技有限公司，批号：140316)。

3.实验仪器

milli-q水净化系统(法国millipore公司)，dionexultimate3000型高效液相色谱仪(thermoscienttific)，数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，sevenexcellence多参数测试仪q/sgyn2059(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，电子天平sartoriusbt25s27692202(赛多利斯科学仪器北京有限公司)，离心机heraeusmultifugex1r(thermofisher)，涡旋仪mx-svb3b012780。

二、高效液相色谱法(hplc)

1.色谱条件

色谱柱：agilent(4.6×250mm,5μm)

流动相：乙腈(a)-冰醋酸缓冲盐(2/1000，ph＝6.2，三乙胺)(b)(a:b＝32.5:67.5)

进样体积：20μl

柱温：30℃

紫外检测波长：235nm

流速：1.00ml/min

2.对照品溶液制备

取乌头碱对照品13.50mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加流动相溶解制成每1ml含乌头碱2.70mg的对照品溶液，即得。

3.诃子汤制备

称取500g的诃子(粗粉)，用20％的乙醇8倍量40℃超声提取，每次超声30分钟，提取功率为70％，超声提取3-5次，合并3-5次提取液，浓缩干燥，得干浸膏，浸膏率为15.80％。

诃子汤冻干粉用纯化水溶解，测定ph值为3.34～3.03。

4.供试品溶液制备

取诃子提取物1.58g，加入100ml超纯水溶解，超声(功率500w，频率40khz)助溶5min，离心10min(7000r/min)，过0.45μm的微孔滤膜，即得空白诃子汤。取草乌粉末约1.5g，精密称定，精密加入诃子汤35ml置50ml离心管中，超声20min(功率500w，频率40khz)，冷却，离心10min(7000r/min)，吸取样品溶液200μl加入800μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。

三、实验结果

1.专属性

1.1空白诃子汤

1.2乌头碱+空白诃子汤(0.6mg/ml)

1.3苯甲酰原乌头碱+空白诃子汤(0.70mg/1.5ml)

1.4草乌+诃子汤

取乌头碱和苯甲酰原乌头碱对照品适量，分别以诃子汤和流动相溶解，逐级稀释，即得专属性对照品溶液。取草乌粉末1.5g，精密称定，加入诃子汤10ml，超声5min，过滤，制备专属性供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果显示空白诃子汤对样品相应色谱峰无干扰，且供试品溶液与对照品溶液中乌头碱的保留时间一致。结果见图2。

称取乌头碱标准品12.50mg，加冰醋酸50μl助溶，以流动相定容至5ml的量瓶中，得2500μg/ml的标准品溶液。考察乌头碱在以流动相和诃子汤配置时的浓度变化。结果见表1～3。

表1以诃子汤溶解流程

表2以流动相溶解流程

表3以诃子汤和流动相溶解乌头碱的峰面积

2.检测限

试样中被测物能够被检测的最低浓度或量通常以信噪比(s/n)≧3为标准。吸取标准品储备液(2500μg/ml，以流动相溶解)适量，以流动相逐级稀释成浓度为0.5ng/μl、1.0ng/μl、1.5ng/μl、2.0ng/μl、2.5ng/μl、3.0ng/μl的乌头碱标准溶液，再分别吸取100μl+900μl诃子汤配置成浓度为0.05ng/μl、0.10ng/μl、0.15ng/μl、0.20ng/μl、0.25ng/μl、0.30ng/μl的乌头碱标准溶液，进样体积为20μl。当乌头碱的进样量为2ng时，信噪比为3.5，利用信噪比(s/n)≥3的标准来确定检测限，因此确定乌头碱的检测限为1.75ng。

3.线性范围

指在设计的能达到一定精密度，准确度和线性，测试方法使用的高低浓度或量的区间内，测定结果与试样中被测物浓度直接成正比关系的程度。

精密吸取“2”项下的对照品溶液13.32μl、200μl、400μl、600μl、800μl以流动相加至1ml配置成浓度为36μg/ml、540μg/ml、1080μg/ml、1620μg/ml、2160μg/ml的标准品溶液，再分别吸取100μl上述溶液和原对照品溶液加900μl的诃子汤配置成浓度为3.6μg/ml、54μg/ml、108μg/ml、162μg/ml、216μg/ml、270μg/ml的标准品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果显示乌头碱(y＝0.3874x-0.3262，r²＝0.9998)在3.6μg/ml～270μg/ml范围内与峰面积呈现良好的线性关系。结果见表4。

表4乌头碱标准曲线结果

4.精密度

精密度指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多次取样测定所得的结果之间的接近程度。用标准偏差sd或相对标准偏差rsd来表示。

精密吸取乌头碱对照品溶液(2500μg/ml)100μl、500μl以流动相加至1ml，再分别吸取上述溶液和原对照品溶液100μl+900μl诃子汤配置成低、中、高三种浓度的对照品溶液，按“1”项下的色谱条件进样，在三个连续的工作日内每天进样3次，测定峰面积，计算rsd值，测定日内日间精密度。结果显示乌头碱的rsd值均小于2％，说明精密度良好。结果见表5～8。

表5乌头碱日内精密度试验(第一天)

表6乌头碱日内精密度试验(第二天)

表7乌头碱日内精密度试验(第三天)

表8乌头碱日间精密度试验

5.重复性

5.1取草乌粉末约1.5g，精密称定6份，精密加入诃子汤5ml，浸泡24小时，离心10min(7000r/min)。吸取样品溶液80μl加入920μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果见表9。

表9重复性结果

5.2取草乌粉末约1.5g，精密称定6份，精密加入诃子汤15ml，浸泡24小时，离心10min(7000r/min)。吸取样品溶液80μl加入920μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果见表10。

表10重复性结果

5.3取草乌粉末约1.5g，精密称定6份，精密加入诃子汤35ml，浸泡24小时后，摇匀，超声20min(功率500w，频率40khz)，离心10min(7000r/min)。吸取样品溶液200μl加入800μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果见表11。

表11重复性结果

5.4取草乌粉末约1.5g，精密称定6份，精密加入诃子汤15ml，摇匀，超声提取20min(功率500w，频率40khz)，离心10min(7000r/min)。吸取样品溶液80μl加入920μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果见表12。

表12重复性结果

5.5(选定为方法学)取草乌粉末约1.5g，精密称定6份，精密加入诃子汤35ml，摇匀，超声提取20min(功率500w，频率40khz)，离心10min(7000r/min)。吸取样品溶液200μl加入800μl诃子汤，涡旋30s使混匀，再吸取900μl混合后的样品加入100μl流动相，涡旋30s使混匀，以0.45μm滤膜过滤，制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，结果见表13。

表13重复性结果

6.加样回收率

取草乌粉末约0.75g，精密称定6份，精密加入对照品溶液4.0ml(1.30mg/ml)，加入诃子汤31ml，摇匀，按“3”项下方法制备供试品溶液，按“1”项下的色谱条件进样，记录峰面积，计算回收率。结果显示乌头碱的回收率在96.61％～99.45％之间，表明测定方法的回收率良好。结果见表14。

表14加样回收率结果

7.稳定性

7.1样品在诃子汤中的稳定性

取草乌粉末约1.5g，精密称定至35ml离心管中，精密加入35ml诃子汤，按“3”项下方法制备供试品溶液。在0～24h内每隔2h～4h按“1”项下的色谱条件进样1次，测定峰面积，结果显示rsd值为0.14％，小于＜2％，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。结果见表15。

表15稳定性结果

7.2标准品在诃子汤中的稳定性

精密称取乌头碱标准品25mg，以流动相定容至10ml的容量瓶中，按“4.4”项下“精密度试验方法”制备低、中、高三种浓度的供试品溶液。在0～24h内每隔3h按“1”项下的色谱条件进样1次，测定峰面积，结果显示rsd值均小于＜2％，说明标准品溶液在24h内稳定性良好。结果见表16。

表16稳定性结果

7.360℃和100℃时标准品在诃子汤中的稳定性

精密量取乌头碱标准品(2500μg/ml)溶液2ml，加入18ml诃子汤，配置成浓度为250μg/ml的供试品溶液，混匀，分别于60℃和100℃下加热回流12h，每隔2h按“1”项下的色谱条件进样1次，连续测定三天，记录峰面积，计算rsd值。结果表明，60℃时，乌头碱在诃子汤中稳定性良好；100℃时，乌头碱在诃子汤中含量微有下降，苯甲酰乌头原碱略有升高，结果见表17～18。

表1760℃稳定性结果

表18100℃稳定性结果

7.4标准品在诃子汤中7天的稳定性

精密量取乌头碱标准品(2500μg/ml)溶液1.5ml，加入13.5ml诃子汤，配置成浓度为250μg/ml的供试品溶液，混匀，平行3份，每隔24小时按“1”项下的色谱条件进样，连续测定7天，记录峰面积，计算rsd值，结果见表19。

表197天稳定性结果

8.样品含量测定

取草乌粉末约1.5g，精密称定3份，加入35ml诃子汤，按“3”项下方法制备供试品溶液。按“1”项下的色谱条件进样，计算该样品中乌头碱的含量，结果表明乌头碱％。结果见表20。

表20乌头碱含量测定结果

9.样品稀释比例

取含量测定“4.8.1”项下加入5ml诃子汤中24小时的样品溶液，分别以诃子汤将该溶液稀释5倍和10倍，配置成高、中、低三种浓度的溶液，记录峰面积，结果见表25。

表25样品按比例稀释变化结果

10.诃子炮制草乌片和草乌粗粉

10.1草乌蒙医传统炮制工艺研究

称取草乌片30g，平行3份。诃子提取物1.58g，加水100ml溶解。诃子汤浸泡草乌7天，每天换一次诃子汤，测定诃子汤中乌头碱浓度。

称取草乌粗粉30g，平行3份。诃子提取物1.58g，加水100ml溶解。诃子汤浸泡草乌7天，每天换一次诃子汤，测定诃子汤中乌头碱浓度。

10.2非房室模型参数的计算

用药代动力学分析软件phoenixwinnonlin6.4对乌头碱浓度变化进行非房室模型参数的计算。

10.3乌头碱变化非房室模型参数的计算

达峰时间(tmax)和峰浓度(cmax)，曲线下的面积(aucinforauc0-t)，半衰期(t1/2)，最后一次测定浓度(clast)。

10.4非房室模型参数

经计算，乌头碱在诃子汤炮制草乌粗粉后的aucinf，auclast及cmax明显高于草乌片，乌头碱诃子汤中的半衰期都为2天。结果见表26。

表26草乌片/粗粉在室温情况下乌头碱在诃子汤中的非房室模型参数

10.5诃子汤ph变化非房室模型参数的计算

达峰时间(tmax)和峰值(phmax)，曲线下的面积(auclast)，半衰期(t1/2)，最后一次测定浓度(phlast)。

经计算，对于制草乌粗粉和草乌片，诃子汤酸度变化相似(28.8vs28.7)。然而诃子汤酸度变化的半衰期为12.6及15.0天，结果表明诃子汤炮制草乌片酸度变化更慢一些。结计算果见表27。

表27草乌片/粗粉在室温情况下乌头碱在诃子汤中的非房室模型参数

11.动力学模型软件

由诃子汤炮制草乌片及粗粉末后，由测定乌头碱浓度-诃子汤酸度(ac/ph)来建立动力学模型。非线性混合效应模型软件(nonmem)7.3(icondevelopmentsolutions,md,usa)和perl-speaks-nonmem(psn)4.2.0(uppsalauniversity,uppsala,sweden)软件进行数据的建模与分析。群体动力学方法分析实验间变异及实验内部的误差。相对标准误(rse)评价参数的合理性及准确性。

12.链式动力学模型(ac/ph)

一级溶解速率的二室房室模型描述乌头碱(ac)在诃子汤中的变化。假设诃子汤酸度(ph)的变化由乌头碱的变化引起。ac/ph之间的关系用hill方程来建立。链式动力学模型见图3。

12.1ac在诃子汤变化的微分方程

草乌片及草乌粗粉经诃子汤炮制后，乌头碱(ac)在诃子汤中的动力学变化用方程(1)-(3)描述。

x1,x2和x3表示ac在溶解房室、中央室及周边室的变化水平，kd为溶解速率常数，cl为乌头碱的中央清除率，q为乌头碱在房室之间分布速率，v2及v3为中央室及周边室的表观分布容积。

乌头碱浓度变化的结果见图4a(草乌片)和4b(草乌粗粉)。

12.2ph在诃子汤中变化的微分方程

草乌粗粉及草乌片经诃子汤炮制后，酸度(ph)在诃子汤的动力学变化用方程(4)描述。hill方程为(5)，方程(4)的初始值用方程(6)计算。

kin＝kout·base(6)

x4表示诃子汤酸度的变化水平，kin表示ph的零级产生速率常数，kout为一级消除速率常数。

诃子汤酸度变化的结果见图4c(草乌片)和4d(草乌粗粉)。

12.3实验间参数的变异

溶解速率常数kd在实验之间的变异较大，建模的过程中考虑用指数方程(7)描述实验间的变异。

pi为每一次实验的个体参数，ppop为群体参数，ηkd为实验间的变异。

12.4实验误差

乌头碱(ac)浓度测定的系统误差用比例型误差模型(8)描述，诃子汤酸度(ph)测定的系统误差用加和型误差模型(9)描述。

yac＝fac·(1+εac)(8)

yph＝fph+εph(9)

yac和yph为乌头碱及诃子汤酸度的实际测定值，fac和fph为模型计算值。εac和εph为实测值和模型值之间的误差。

12.5协变量模型

草乌片和草乌粉对模型参数的影响用协变量模型(10)来描述。

tvpop为协变量参数，主要针对草乌片及草乌粉。

12.6动力学参数

经nonmem软件计算，乌头碱在草乌粗粉中的清除率快于草乌片(82.52vs61.74ml/day)。对于草乌粗粉，诃子汤酸度变化的效率高于草乌片(431.9vs602.5μg/ml)，乌头碱在草乌粗粉和草乌片中的溶解速率常数为22.6和7.981/h。诃子汤的基线酸度为3.33，更实际测得值一致。在实验间，只有乌头碱在草乌粗粉中溶解速率(kd)变异较大。乌头碱的比例型误差为8.20％，诃子汤酸度变化的加和型误差为0.097。以上结果表明，动力学模型可以区分草乌粗粉及草乌片炮制的差异。动力学参数见表28，动力学拟合结果见图5。

表28乌头碱/酸度(ac/ph)链式动力学模型参数

13.模型内部验证

模型是否能够准确描述测定数据用内部检验来确定。加权残差(wres)对个体拟合值(ipred)作图，加权残差(wres)对群体拟合值(pred)作图，实测值(dv)对个体拟合值(ipred)及群体拟合值(pred)作图检验模型。

内部验证结果表明该模型可以很好地描述乌头碱及诃子汤酸度的变化，能够提供较准确的动力学参数。模型内部验证结果见图6。

14.数据转化

因乌头碱在草乌中含量很低0.2-0.8％，在炮制的过程中假设草乌药材的重量和制草乌的重量一致。

modeli为草乌片和草乌粗粉诃子汤炮制后乌头碱的动力学模型，为经模型参数获得的曲线下面积，为泡制时间tp下的曲线下面积,和为乌头碱在制草乌和草乌药材中的含量；ki为模型一级清除速率常数。cl/pfi和v2/pfi为乌头碱在中央室的清除率及表观分布容积。ctp_i为草乌片和草乌粗粉炮制tp之后的乌头碱浓度。

那如-3蒙药中乌头碱的含量有文献获得，再通过处方比例换算成制草乌中乌头碱的量。文献数据见表29。

表29文献数据中转化获得的制草乌中乌头碱含量

^a乌头碱总量来源于乌头碱(ac)、新乌头碱(ma)及乌头碱(ha)的量。0.00964,0.00851,0.00739,0.00959％为010309,010402,001212及001016批号那如-3丸中总生物碱的含量

^b内蒙蒙药厂

^c内蒙古库伦蒙药厂

^d内蒙古乌兰浩特中蒙药厂

^e通辽民族大学第一附属医院

15.预测乌头碱在制草乌中的含量

根据炮制时间tp,预测草乌片及草乌粗粉经诃子汤炮制之后达到制草乌的要求时乌头碱的浓度。当乌头碱的诃子汤浓度为90.4ug/ml时，达到制草乌要求时的草乌粗粉和草乌片需要的炮制时间为4.8和6.6天。炮制拟合结果见图7。

ct_mes＝-2245.18×e^-7.98×t+1914.08×e^-1.14×t+331.10×e^-0.302×t(14)

ct_cop＝-2031.17×e^-22.6×t+1547.28×e^-0.986×t+483.89×e^-0.262×t(15)

7.98和22.61/h为诃子汤炮制草乌片和草乌粉之后乌头碱的溶解速率常数(kd项)，1.14和0.986为乌头碱诃子汤炮制草乌片和草乌粉之后乌头碱的分布速率常数(α项)；0.302和0.262为为乌头碱诃子汤炮制草乌片和草乌粉之后乌头碱的清除率常数(β项)。

16.预测诃子汤ph的变化

炮制时间和乌头碱浓度确定之后，预测预测草乌片及草乌粗粉经诃子汤炮制之后达到制草乌的要求时乌头碱的浓度时诃子汤的ph值。因诃子汤的酸度对草乌炮制减毒起到重要的作用。

当草乌粗粉和草乌片需要的炮制时间为4.8和6.6天时，诃子汤的酸度为3.8和3.7。酸度预测结果见图8。

17.优化传统诃子制草乌的蒙药炮制方法

2015版药典(committee,2015)规定制草乌中乌头碱型生物碱的含量不能超过0.04％，0.0111％为乌头碱在蒙药处方那如-3中的含量限度。

因此，诃子汤制草乌的靶目标为乌头碱含量为0.04％。假定30g草乌药材中乌头碱的含量为0.2％，0.4％，0.6％及0.8％。在蒙药的制药实际过程中，草乌的采收季节及产地不同都会影响到乌头碱型生物碱的含量。优化方案见表30。

当乌头碱的含量为0.2％，0.4％，0.6％及0.8％，诃子汤炮制草乌片需要的时间为2.7,4.1,5.3,6.2天，诃子汤炮制草乌粗粉需要的时间为2.0,3.0,3.8,4.4天。此时，诃子汤炮制草乌片和草乌粗粉事的酸度值为3.77和3.95。优化结果见图9。

表30通过动力学模型建立诃子汤炮制草乌的优化方案

^a30g草乌中乌头碱的含量

^b总乌头型生物碱(乌头碱ac，乌头次碱ha及新乌头碱ma)

^c2015版药典规定的乌头碱型生物碱的含量限度为0.04％

^d本次实验过程中乌头碱的实际含量