一种羊的驱虫泻火口服液及其制备方法与流程

本发明涉及畜牧业动物疫病防控产品领域领域，具体为一种羊的驱虫泻火口服液及其制备方法。

背景技术：

家畜消化道线虫病是一类严重危害动物养殖业持续健康发展的寄生虫疾病，每年给我国畜牧业造成巨大的经济损失。目前，对家畜消化道线虫病的防治主要依靠化学驱虫药物，但长期使用易使虫体产生抗药性，降低药效；同时，动物性食品中的药物残留不但影响人类的身体健康还会对生态环境造成污染。为了克服化学药物防控带来的弊端促进畜牧业的可持续发展，需要寻求新的家畜线虫病防治方法。狼毒、贯众、大黄、百部来源于天然，与环境相容，可在环境中降解或者代谢为简单的天然化合物。将对天然的中草药有效利用，不但可以降低化学药的使用量，又可降低药物成本。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种羊的驱虫泻火口服液及其制备方法，以解决上述背景技术提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括瑞香狼毒、贯众、大黄和百部，所述瑞香狼毒100g、所述贯众40g、所述大黄30g和所述百部30g。

一种羊的驱虫泻火口服液的制备方法，具体步骤如下；

步骤一：称量好瑞香狼毒100g、贯众40g、大黄30g、百部30g各组份，粉碎到40-80目；

步骤二：将狼毒用6倍量的80％的乙醇浸泡3d；负压过滤得滤液l1；

步骤三：取贯众加10倍水装入平底三角瓶中，加热2h，水煎液过滤，得滤液l2；

步骤四：将l1与l2混合加乙醇使乙醇浓度达到75％，震荡混匀后静置12h后过滤沉淀，将滤液旋转蒸发回收乙醇，达到液体里乙醇含量在1％以下；

步骤五：大黄用8倍量55％乙醇浸泡21h后，旋蒸掉乙醇；

步骤六：百部用80％的乙醇浸泡提取，蒸去乙醇；

步骤七：将以上浸膏浴液体混合加纯净水至1000ml，充分搅拌，过滤，煮沸灭菌，无菌灌装，得到羊的驱虫泻火口服液。

本发明的有益效果是：本发明与现在的驱虫药物相同的是通过灌服达到驱虫效果，不同特征是驱虫泻火口服液采用无休药期无残留的非抗生素物质制作，狼毒、贯众、大黄、百部研制的口服液是从含驱虫泻火物质的植物组织中提取有效成分，经加工后研制的口服药液，具有高效、低毒、无污染、选择性高、不易产生抗药性等优点，符合动物驱虫药从传统的有机化学物质向环境和谐驱虫泻火药物转化发展趋势。驱虫泻火口服液主要成分来源于天然，与环境相容，可在环境中降解或代谢为简单的天然化合物，它的有效成分只含碳、氢、氧三种元素，在环境中消解的最终产物即为二氧化碳和水，这在化学合成驱虫药物中极难达到，还可以达到泻火促生长与不产生药物残留的三重效果。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。

图1是本发明β-谷甾醇色谱图；

图2是本发明十六烷酸色谱图；

图3是本发明十六酸乙酯色谱图；

图4是本发明西瑞香素色谱图；

图5是本发明伞形花内酯色谱图；

图6是本发明东莨菪素色谱图；

具体实施方式：

下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易被本领域人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

本发明提供一种技术方案：一种羊的驱虫泻火口服液，包括瑞香狼毒、贯众、大黄和百部，其特征在于，所述瑞香狼毒100g、所述贯众40g、所述大黄30g和所述百部30g。

一种羊的驱虫泻火口服液的制备方法，具体步骤如下；

步骤一：称量好瑞香狼毒100g、贯众40g、大黄30g、百部30g各组份，粉碎到40-80目；

步骤二：将狼毒用6倍量的80％的乙醇浸泡3d；负压过滤得滤液l1；

步骤三：取贯众加10倍水装入平底三角瓶中，加热2h，水煎液过滤，得滤液l2；

步骤四：将l1与l2混合加乙醇使乙醇浓度达到75％，震荡混匀后静置12h后过滤沉淀，将滤液旋转蒸发回收乙醇，达到液体里乙醇含量在1％以下；

步骤五：大黄用8倍量55％乙醇浸泡21h后，旋蒸掉乙醇；

步骤六：百部用80％的乙醇浸泡提取，蒸去乙醇；

步骤七：将以上浸膏浴液体混合加纯净水至1000ml，充分搅拌，过滤，煮沸灭菌，无菌灌装，得到羊的驱虫泻火口服液。

实施例1：

为了利用内蒙古地区丰富的药用植物资源，为我区绿色畜牧业发展而安全用药，通过走访调查、历史文献资料查阅和检索等方法收集蒙兽药驱虫泻火方剂10多个。其中我们对民间验方“驱虫泻火散”根据长期的临床经验，依据“君、臣、佐、使”组方原则，按照一定比例配伍而确立了更为完善的一种羊的驱虫泻火口服液及其制备方法。

1.处方中君药的有效成分及提取方法：

君药：狼毒，泻水逐饮，破积杀虫。

(1)提取方法：分别以6倍和10倍的95％乙醇、甲醇、丙酮为提取液，采用常温浸泡5d、索氏提取5h、索氏提取3h后常温浸泡15h、在75℃浸泡5d的方法进行提取试验，发现以6倍95％乙醇作为提取液，采用75℃浸泡5d的提取方法提取率高，成分含量多，特别是针对其杀虫效果而言，采用乙醇作为提取液效果更佳。

(2)瑞香狼毒成分分析

我们运用气质联用仪进行了狼毒成分的扫描分析。

色谱条件：色谱柱：hp-5mas。载气：he，流速：1.0μl/min。柱温：初温60℃，保持2min；持续升温以10℃/min升到200℃，保持6min；二次升温以5℃/min升到280℃，保持20min。进样口温度：250℃。

质谱条件：离子化方式：ei；电子加速电压：70ev；离子源温度：230℃；检测方式：全扫描；四级杆温度：150℃；辅助通道温度：280℃。

进样方法：自动进样，不分流，进样量1.0μl；

采用气质联用仪初步扫描分析结果中发现狼毒中β-谷甾醇、伞形花内酯、十六烷酸、东莨菪素、西瑞香素(瑞香亭)、十六酸乙酯等都有抑菌、消炎、杀虫作用，因此我们对狼毒的这些有效成分进行了定量分析确定；如图1-6所示。

(3)有效成分定量分析：

运用高效液相色谱仪对狼毒的有效成分进行定量分析，从而确定一种羊的驱虫泻火口服液的主要成分。

标样的走样条件确定：

不同的标样溶解条件与走样条件不同，β-谷甾醇、伞形花内酯、十六烷酸、东莨菪素、狼毒色原酮、西瑞香素(瑞香亭)都通过超声处理溶解于色谱纯甲醇中，其中β-谷甾醇、西瑞香素(瑞香亭)溶解度小，因此标准液浓度只有0.1000mg/ml，其余有效成分标准液浓度为1.0000mg/ml。用的仪器为岛津高效液相色谱仪反相c18柱。β-谷甾醇色谱条件为：波长210nm，柱温35℃，流动相甲醇，流速1.0ml/min，进样量50μl；伞形花内酯、东莨菪素、西瑞香素(瑞香亭)色谱条件：波长325nm，柱温35℃，流动相为甲醇∶水(80∶20)，流速：1.0ml/min，进样量20μl；十六烷酸色谱条件：波长210nm，柱温35℃，流动相甲醇，流速1.0ml/min，进样量50μl，进样浓度为：10μg/ml，定容加入的溶液为甲醇∶水(80∶20)；

测定物质的配制：将狼毒浸泡液称量溶解与色谱纯甲醇，过筛后定容。

狼毒色原酮在瑞香狼毒提取物中峰波重叠，因此进行了硅胶柱洗脱，二次粗分物的再次采用sephadexlh-20凝胶色谱进行分离，柱子的规格为：高度/直径10∶10sephadexlh-20的粒度为300目，上样量为柱中sephadexlh-20用量的1/50倍。以甲醇为洗脱剂，收集流份，减压浓缩后可获得的产物收集浓缩。产物与狼毒色原酮的液相色谱在同一个峰，认定产物为：瑞香色原酮产物瑞香色原酮的hplc图谱：洗脱剂ch3oh/h2o(v/v)47∶5，watersalc/jpc-201高压液相色谱仪，柱子为nova.pakc18，150mmx4mm(i.d)，粒径4.5um，流速0.7ml/min，紫外检测器，检测波长296nm。

通过瑞香狼毒成分分析与有效成分的定量分析，我们确定狼毒中含有杀虫成分：β-谷甾醇、十六烷酸、十六酸乙酯、西瑞香素(瑞香亭)、伞形花内酯、东莨菪素；每千克瑞香狼毒生药中含有β-谷甾醇、十六烷酸、十六酸乙酯、西瑞香素(瑞香亭)、伞形花内酯、东莨菪素、狼毒色原酮分别为：3.6g、2.1g、1.5g、6.2g、8.5g、1.7g、10.8g。

2.处方中臣、佐、使药的主要有效成分及提取方法：

贯众：为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨的根茎及叶柄残基；

提取工艺：加10倍量的水，水煎提取1-2h；

主要成分：粗茎鳞毛蕨，即东北贯众，根称绵马，含粗绵马精(filicin)49.17％，可作欧绵马dryopterisfilixmas(l.)schott的代用品，驱除绦虫、线虫。

大黄：为蓼科植物大黄rheumofflclnalabai11.、掌叶大黄r.palmatuml.或唐古特大黄(鸡爪大黄)r.tanguiticummaxim.exregl.的干燥根茎。

提取工艺：大黄用8倍量55％乙醇按渗漉法提取，浸泡12h，渗漉9h

主要成分：含蕙醒衍生物(包括大黄酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚)及靴质(主要为葡萄糖没食子蹂甙、儿茶蹂质、游离没食子酸)等。大黄性寒，味苦。药用功效为攻积导滞、泻火凉血、活血祛疲。

百部：百部科百部属百部根。

提取工艺：用80％的乙醇浸泡提取，蒸去乙醇。

主要成分：百部碱，原百部碱，百部定碱，异百部定碱，霍多林碱，直立百部碱。药用功效为止咳、清热解毒。

3.制备方法：

步骤一：称量好瑞香狼毒100g、贯众40g、大黄30g、百部30g各组份，粉碎到40-80目；

步骤二：将狼毒用6倍量的80％的乙醇浸泡3d；负压过滤得滤液l1；

步骤三：取贯众加10倍水装入平底三角瓶中，加热2h，水煎液过滤，得滤液l2；

步骤四：将l1与l2混合加乙醇使乙醇浓度达到75％，震荡混匀后静置12h后过滤沉淀，将滤液旋转蒸发回收乙醇，达到液体里乙醇含量在1％以下；

步骤五：大黄用8倍量55％乙醇浸泡21h后，旋蒸掉乙醇；

步骤六：百部用80％的乙醇浸泡提取，蒸去乙醇；

步骤七：将以上浸膏浴液体混合加纯净水至1000ml，充分搅拌，过滤，煮沸灭菌，无菌灌装，得到羊的驱虫泻火口服液。

4.临床药效

选择内蒙古友联农牧业科技发展有限公司的28只2014年春季未驱虫的体质弱(流鼻涕、咳嗽、有眼屎等症状)的蒙古羊，随机分成4组，分别为口服液组、散剂组、阳性对照组(伊维菌素组)、空白对照组，统一常规饲养。

(3)试验方法

①体重称量、精神状态记录与粪便取样

②用粪便饱和盐水漂浮法，计数epg(每克粪便里的虫卵数量)

③按分组用药，用药剂量散剂为30g/只，口服液为30ml/只，伊维菌素组30g/只，所有制剂均采用人工灌服一次给药

④一周、两周、三周、四周后分别进行称重、取样虫卵检测、羊的精神状态与体重记录。

(4)结果与分析

1：实验前后的体重变化：

表1灌药前后体重变化：

从表1可以看出：与对照组相比，3组用药试验羊体重均有明显增加，而对照组试验羊体重未变。

2：实验前后症状变化：

表2症状观测记录表

从表2可以总结出：

1)驱虫泻火口服液有明显的止咳作用；

2)驱虫泻口服液有明显改善羊的体质，起到一定泻火作用，加强羊的精神食欲功能；

3：实验前后粪便虫卵检查：

表3虫卵检查

通过表3我们可以看到：

1)各组试验羊试验前均检出数量特别多的线虫卵，这与试验羊春季饲养于圈舍内温度高、湿度大，寄生虫易于孽生繁殖有关，因此，在春秋季对细毛羊进行驱虫，非常必要；

2)与对照组相比，3种药物对羊线虫均有明显驱虫效果；而且药效比较长，口服液组效果明显快于散剂组，好于伊维菌素组。

5.口服液的质量标准

(1)物理性状

本品为黄褐色或棕黄色的液体；具有特殊气味

(2)鉴别

本品中在君臣佐使配伍中，贯众、大黄鱼百部为常规使用药品，而君药狼毒成分比较复杂，性状相对难控制，因此我们在本品鉴别检测中专门对狼毒杀虫、抑菌有效成分狼毒色原酮进行了检查。取本品20ml，用加石油醚30ml，振摇提取。分取石油醚液，用水30ml洗涤，弃去水液。石油醚液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取狼毒色原酮对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录vib)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶h薄层板上，以丙酮一甲醇一水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(296nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)ph检查

将研制好的口服液放置15d用酸度计测定各样品的ph值，ph值基本没有变化，稳定于6.53±0.98。

(4)无菌检查

取供试品，以无菌操作将15个供试品分别接种于15个营养琼脂培养基中，第16个营养琼脂培养基接种大肠杆菌作阳性对照，第17个营养琼脂培养基不接种供试品，作阴性对照。置37℃培养箱中培养，24小时后观察结果，可以确定口服液中无菌。

(5)含量测定：

样品在保存12个月内分批用hlcp监测伞形花内酯的含量，色谱条件：波长325nm，柱温35℃，流动相为甲醇∶水(80∶20)，流速：1.0ml//min，进样量20μl；

(6)稳定性试验：

取口服液置65℃，75℃，85℃，95℃的恒温水浴中，按实验设计定时取样，观察颜色、澄明度和测定ph及口服液中伞形花内酯的含量。

依据表中的实验数据，结果表明线性关系极显著，说明伞形花内酯的含量随温度、时间变化不大。

(7)急性毒性实验：

药剂给予小白鼠后，高剂量组(1000mg/kg)小白鼠及早出现了中毒症状，表现为烦躁不安、抽搐、挣扎直至死亡，低剂量组(10mg/kg)与中剂量组(100mg/kg)的小白鼠中毒表现不明显。小白鼠死亡发生在12h内，存活的小白鼠24h后逐渐恢复正常，各剂量组动物死亡情况见表2。根据试验结果计算，口服液急性经口毒性的ld50为1296.15mg/kg，大于500mg/kg。根据国家标准gb15670-1995，初步判定口服液的急性经口毒性属于低毒级。

表1瑞香狼毒涂搽剂各剂量组小鼠死亡情况

本发明与现在的驱虫药物相同的是通过灌服达到驱虫效果，不同特征是驱虫泻火口服液采用无休药期无残留的非抗生素物质制作，狼毒、贯众、大黄、百部研制的口服液是从含驱虫泻火物质的植物组织中提取有效成分，经加工后研制的口服药液，具有高效、低毒、无污染、选择性高、不易产生抗药性等优点，符合动物驱虫药从传统的有机化学物质向环境和谐驱虫泻火药物转化发展趋势。驱虫泻火口服液主要成分来源于天然，与环境相容，可在环境中降解或代谢为简单的天然化合物，它的有效成分只含碳、氢、氧三种元素，在环境中消解的最终产物即为二氧化碳和水，这在化学合成驱虫药物中极难达到，还可以达到泻火促生长与不产生药物残留的三重效果。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护。