本发明属于化妆品
技术领域：
，具体涉及一种保湿修复组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：健康柔润的皮肤是每个人尤其是女性一直的追求。健康柔润的皮肤与其所含水分的多少密切相关。1952年相关研究指出，皮肤干燥与角质层缺水情况直接相关，角质层的水合率低于10％时，很容易引发皮肤外观上的干燥粗糙，以及脱屑、瘙痒、炎症等一系列症状。因此，早期研究是将皮肤干燥症状的发生主要归因于角质层水分的缺失。随着皮肤保湿相关研究的深入，更多地发现皮肤干燥并非是简单的水分缺乏，而是皮肤屏障功能紊乱使其水合状态不稳定，导致相关的皮肤生理过程失调，老化角质细胞在表层堆积的结果。而且皮肤发生干燥后，由于表层皮肤的粗糙、不光滑，光线在皮肤表面发生散射，又由于略带红色的皮肤血液微循环被堆积过厚的角化细胞所遮挡，则在外观上会呈现出暗哑，苍白的现象。此外，由于皮肤表面轻度脱水，也使干燥皮肤表现出敏感更易受刺激。干燥皮肤的物理性状也会随之发生改变，被皮肤真皮层中的神经末梢感受后就会发生瘙痒，引发一系列的皮肤问题。近年来，随着现代生活节奏的加快和工作压力的不断增大，加班熬夜、日用化学品频繁使用、物理因素以及环境因素的干扰，越来越多的人群正面临皮肤干燥的困扰，并且干燥皮肤的发生率和严重程度也在日益增加。皮肤保湿能力的降低会导致皮肤屏障功能下降，皮肤屏障功能下降又会进一步降低皮肤的保湿能力，形成一个恶性循环，如此会减低皮肤的耐受度，使健康的肌肤变得易于敏感，过早的衰老松弛。此外，皮肤保湿基础护理不到位，也会影响皮肤对营养成分成分的吸收，影响皮肤的健康。由此可见保湿是维持皮肤生理功能的基础。专利文献cn106727164a公开了一种保湿组合物及其制备方法和应用，该保湿组合物主要由透明质酸钠、羧甲基脱乙酰壳多糖、铁皮石斛提取物和去离子水组成。该保湿组合物能够更好地与皮肤形成一个网状天然仿生膜，透明质酸钠在仿生膜内部补水保湿，羧甲基脱乙酰壳多糖形成仿生无菌膜，有效的封锁住透明质酸钠等天然保湿因子，减少失水率，同时铁皮石斛多糖与天然仿生无菌膜结合进一步提高长期使用的保湿持久性、增强修复效果，可以很好的解决皮肤干燥、过敏的问题。专利文献cn106880513a公开了一种保湿组合物及其在制备化妆品中的应用。该保湿组合物由海藻糖、寡聚透明质酸、燕麦β-葡聚糖、壳寡糖、透明质酸、银耳多糖进行复配，该组合物具有提高皮肤水分含量，降低皮肤水分散失的作用。且该组合物具有良好的成膜特性，既可以防止配方中水分散失，又可以对表皮水分进行水合，从而起到增湿保湿作用。与单独使用各组分相比，该组合物在保湿效果方面具有显著性的提高，其能够在30min内，使皮肤水分含量提高至23.67％，且2h后还能保持皮肤水分含量19.29％以上的增长，具有较好的保湿效果。然而，虽然目前市售的保湿组合物能短时间内提高皮肤的水分，但是持续保湿时间较短，且随着时间延长，其保湿效果越低，而且水分通过水通道运输的能力有限，不利于水分运输到角质层，大大降低了保湿效果。技术实现要素：为了克服现有技术中保湿化妆品存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种保湿修复组合物，该保湿修复组合物保湿效果好、保湿时间长，深层修复，舒缓抗炎、安全无刺激的优点，可以有效解决现有产品存在的缺陷。本发明提供了一种保湿修复组合物，包括以下成分及其重量份数：保湿剂0.1～2.0份、发酵提取物0.5～5.0份、茶叶提取液0.5～5.0份、玫瑰花提取液1.0～10份、活性矿物酵母多肽1.0～5.0份、肌肽0.01～0.2份、舒缓剂0.5～10份和去离子水68～97份。进一步地，所述保湿修复组合物包括以下成分及其重量份数：保湿剂1.0份、发酵提取物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、舒缓剂5.0份和去离子水80份。进一步地，所述保湿剂为出芽短梗酶多糖、透明质酸、酵母β-葡聚糖和海藻糖中的一种或两种以上的组合。进一步地，所述发酵提取物为二裂酵母发酵产物溶胞物、酵母提取液和稻米发酵产物中的一种或两种以上的组合。进一步地，所述舒缓剂为芦荟提取液、金盏花提取液和积雪草提取液中的一种或两种以上的组合。另外，本发明还提供了所述的保湿修复组合物的制备方法，包括以下步骤：s1将保湿剂加入去离子水中，加热至70～90℃，搅拌至完全溶解后，冷却至30～45℃，得混合液i；s2将发酵提取物、茶叶提取液、玫瑰花提取液、活性矿物酵母多肽和肌肽加入到步骤s1得到的混合液i中搅拌至完全溶解，得混合液ii；s3将舒缓剂加入步骤s2得到的混合液ii中，搅拌混合均匀，得混合液iii；s4将大豆卵磷脂加入步骤s3得到的混合液iii中混合均匀，接着加入甘油单酯进行高压均质，得纳米乳液，冷却至常温，即得。所述大豆卵磷脂、甘油单酯与混合物iii的重量百分比为：大豆卵磷脂0.5～2.0％、甘油单酯8～20％、混合物iii78～90％。进一步地，所述步骤s4中的高压均质条件为：压力为：300～800mpa，温度为45～65℃，循环次数为8～10次。进一步地，所述步骤s4中还包括过滤步骤，将纳米乳液进行过滤处理，所述过滤膜为二氧化硅纳米材料膜，所述二氧化硅纳米材料膜的制备方法为：a将n-羧甲基壳聚糖溶于去离子水中搅拌均匀，得质量浓度为3～5％的n-羧甲基壳聚糖溶液；b将笼型介孔二氧化硅纳米材料加入步骤a得到的n-羧甲基壳聚糖溶液，烘干，成膜，即得。进一步地，所述步骤b中笼型介孔二氧化硅纳米材料与n-羧甲基壳聚糖溶液的固液比为1g:4ml。此外，本发明还提供了保湿修复组合物在制备护肤品中的用途。所述护肤品包括洁面乳、爽肤水、乳液、精华、霜和面膜等等。本发明采用的茶叶(camelliasinensis(l.)o.kuntze)提取液、玫瑰花(rosarugosa)提取液、芦荟(aloevera(haw.)berg)提取液、金盏花(calendulaofficinalisl.)提取液或积雪草(centellaasiatica(l.)urban)提取液均采用本发明提供的提取工艺进行提取，所述植物提取液的提取工艺为：a将待提取原料在真空度为0.1～0.5mpa，温度为72～85℃的条件下干燥36～53h，得干燥原料；b将步骤a得到的干燥原料粉碎，过40目筛，加入温度为30～50℃的纯水中提取60～120min，所述干燥原料与纯水的固液比为1g：(10～30)ml，接着放入蝶式离心机中分离，所述蝶式离心机的排渣周期为50～180s，排渣时间为0.2～0.6s，得粗提液；c将步骤b得到的粗提液在温度为12～20℃的条件下进行2级分离，所述第一级分离膜为10000～50000da，所述第二级分离膜为1000～3000da，即得。本发明是采用冷冻干燥及低温提取以最大限度保留植物提取液中的活性物含量，同时采用蝶式离心机进行初分离，能较好的使粗提液中的固液分离，且后续采用低温2级膜分离，有利于大分子水溶性成分的分离、活性物保留以及维持产品颜色的鲜艳，使制得的植物提取液澄清透亮，有一股自然的植物气味，而且与其他成分相容性好，可以有效的提高保湿修复组合物的稳定性。本发明提供的活性矿物酵母多肽是矿物元素与酵母多肽形成的络合物，具体是酵母多肽络合的锌、铜、镁、铁和硅。本发明提供的保湿修复组合物是以微生物多糖与活性矿物酵母多肽形成皮肤的保护屏障，以发酵提取物、茶叶提取液、玫瑰花提取液和肌肽在保护膜内形成密集的修复层，最后以芦荟提取液、金盏花提取液或积雪草提取液在保护膜外形成抗敏、舒缓层，可以有效的维持肌肤健康水润。其具体原理为：微生物多糖在皮肤表面形成一种网状的保护膜，其疏水性端与皮肤粘合，可以锁住皮肤水分流失，同时其轻水性端朝外，可以吸收空气中的水分，在短时间内可以有效的达到很好的保湿效果，但是，多糖的吸水性和水分通过水通道运输的能力是有限的，一旦饱和后多糖保护膜的保湿效果也会不断下降。本发明人经过不断的研究发现，在微生物多糖中加入活性矿物酵母多肽可以提高微生物多糖的吸水性，可以使微生物多糖长时间保持高效的吸水性，可以不断的吸收空气中的水分来维持皮肤所需的水分，而且该活性矿物酵母多肽络合的镁、铁、锌等矿物质离子可以调控开启水通道蛋白，而水通道蛋白是实现水分运输到角质层的最主要的方式，因此，其可以促进水分跨膜运输到角质层，可以不断的提高皮肤的水分含量，从而达到长时间保湿的效果。进一步地，以发酵提取物、茶叶提取液、玫瑰花提取液和肌肽在保护膜内形成密集的修复层，可以保护皮肤免受损伤，促进胶原蛋白再生，修护皮肤屏障。其中发酵提取物中含有皮肤健康生长所需的各种氨基酸、微量元素、小分子肽等营养物质，柔润，促进肌肤再生功能强大，茶叶提取液和玫瑰花提取液中含有许多对肌肤吸收及抗氧化良好的多酚类物质，可有效滋润肌肤；肌肽是具有强大的预防肌肤细胞免受外界损伤的组分，四种组合物复配可以从预防肌肤免受损伤，抗氧化，提供肌肤再生营养物质等全方面修护肌肤。而在保护膜外形成抗敏、舒缓层可以防止外界的紫外线等不利因素对皮肤产生的刺激，过敏等现象，可以进一步地的保护肌肤不受伤害。同时，本发明人将保湿修复组合物在压力为：300～800mpa，温度为45～65℃的条件下循环8～10次，高压均质为特定粒径的纳米乳液，其不仅可以提高保湿修复组合物的稳定性，还可以提高保湿修复组合物与皮肤的相容性，可以促进活性成分扩散透过皮肤角质层，被表皮细胞吸收或溶合，提高保湿修复组合物的保湿和修复作用。目前，在化妆品行业中普通存在的认知是植物提取液或发酵提取物是天然的物质，添加到化妆品中百利而无一害，但是经发明人深入研究后惊奇的发现，由于环境的污染问题，发酵提取物和植物提取液中会含有较多的重金属离子，而且目前的研究大多只注重植物提取物中的抗氧化成分为皮肤带来的抗氧化和修复的作用，但是植物提取液中也存在大量的活性氧，由于植物提取液中的植物细胞在其生命活动过程中，由于叶绿体、线粒体和质膜上每时每刻都发生着电子传递过程中电子的泄露，产生大量的活性氧，或者是进入植物体内的一些分子氧(o2)，可经单电子还原转变为超氧阴离子自由基，其可以衍生为羟自由基、单线态氧、过氧化氢及脂质过氧化物自由基等活性氧，产生的这些活性氧会导致皮肤组织变性水肿，充血，表皮增生，角质层形成，降低水分的进入皮肤，加速皮肤干燥，同时还会增加色素的沉淀，加速皮肤的衰老。为了解决上述问题，本发明人经过大量的摸索试验得出，本发明将自制的过滤膜用于过滤植物提取液和酵母提取物，可以有效去除保湿修复组合物中的重金属和活性氧的含量，其具体的原理是：本发明采用n-羧甲基壳聚糖作为吸附膜的主要成分，其是两性聚电解质，可以高效的吸附带正电荷的重金属离子，同时其还具有抗活性氧的作用，可以保护肌肤不受活性氧的伤害。同时将具有介孔结构，带负电荷性的二氧化硅纳米材料按一定的比例嵌入n-羧甲基壳聚糖膜内，可以极大提高过滤膜对重金属的吸附作用，同时，还可以提高n-羧甲基壳聚糖膜对活性氧的清除作用，可以进一步地的提高保湿修复组合物的安全性。另外，该自制的过滤膜可以用于过滤保湿修复组合物中的微生物，可以有效的延长该保湿修复组合物的保质期。总之，与现有技术相比，本发明提供的保湿修复组合物具有以下优势：(1)本发明提供的保湿修复组合物具有保湿效果好、保湿时间长，深层修复、舒缓抗炎、安全无刺激的优点，是一种纯天然、安全无害的保湿修复组合物；(2)本发明提供的保湿修复组合物中重金属和活性氧含量低，可以避免重金属和活性氧对皮肤的伤害，可以有效的维持肌肤健康，是一种较为理想的保湿修复组合物。具体实施方式以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。本发明所用的成分均为化妆品行业中常规的市售成分，例如：活性矿物酵母多肽是矿物元素与酵母多肽形成的络合物，具体是酵母多肽络合的锌、铜、镁、铁和硅，购自美国艾缇科技公司(activeconcepts)；笼型介孔二氧化硅纳米材料购于西安格润纳米科技有限公司，笼型介孔sio2材料(kit-5)，二裂酵母发酵产物溶胞物为activeconcepts的比菲德氏发酵物(acbphyto-bioticsbifidus)；酵母提取物为activeconcepts的酵母提取物(acyeastextractplus)；稻米发酵产物为日本特科诺宝的本女酒糟产品。实施例1、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法：s1将出芽短梗酶多糖加入去离子水中，加热至80℃，搅拌至完全溶解后，冷却至40℃，得混合液i；s2将二裂酵母发酵产物溶胞物、茶叶提取液、玫瑰花提取液、活性矿物酵母多肽和肌肽加入到步骤s1得到的混合液i中搅拌至完全溶解，得混合液ii；s3将舒缓剂加入步骤s2得到的混合液ii中，搅拌混合均匀，得混合液iii；s4将大豆卵磷脂加入步骤s3得到的混合液iii中混合均匀，接着加入甘油单酯进行高压均质，所述大豆卵磷脂、甘油单酯与混合物iii的重量百分比为：大豆卵磷脂1.0％、甘油单酯14％、混合物iii85％，所述高压均质的条件为：压力为：500mpa，温度为55℃，循环次数为9次，得纳米乳液，冷却至常温，过滤，即得；所述过滤膜为二氧化硅纳米材料膜，所述二氧化硅纳米材料膜的制备方法为：a将n-羧甲基壳聚糖溶于去离子水中搅拌均匀，得质量浓度为4％的n-羧甲基壳聚糖溶液；b将笼型介孔二氧化硅纳米材料加入步骤a得到的n-羧甲基壳聚糖溶液，所述笼型介孔二氧化硅纳米材料与n-羧甲基壳聚糖溶液的固液比为1g:4ml烘干，成膜，即得。实施例2、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：透明质酸0.1份、酵母提取物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽1.0份、肌肽0.01份、芦荟提取液10份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。实施例3、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：酵母β-葡聚糖1.0份、稻米发酵产物0.5份、茶叶提取液0.5份、玫瑰花提取液10份、活性矿物酵母多肽2.0份、肌肽0.01份、积雪草提取液0.5份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。实施例4、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：海藻糖0.1份、稻米发酵产物2.5份、茶叶提取液2.5份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽4.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。实施例5、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖2.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物2.5份、茶叶提取液2.5份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽1.0份、肌肽0.1份、积雪草提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。实施例6、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：酵母β-葡聚糖2.0份、稻米发酵产物0.5份、茶叶提取液0.5份、玫瑰花提取液1.0份、活性矿物酵母多肽5.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液2.5份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例1、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖0.01份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例2、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液0.1份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例3、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖3.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例4、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物8.0份、茶叶提取液8.0份、玫瑰花提取液0.1份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例5、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液15份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例6、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：银耳多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例7、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物8.0份、茶叶提取液2.0份、玫瑰花提取液6.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例8、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物由以下成分及其重量份数组成：出芽短梗酶多糖1.0份、二裂酵母发酵产物溶胞物5.0份、茶叶提取液2.0份、菊花提取液6.0份、活性矿物酵母多肽3.0份、肌肽0.1份、金盏花提取液5.0份和去离子水80份。制备方法与实施例1类似。对比例9、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物的成分及其重量份数如实施例1。制备方法的不同之处在于：所述步骤s4为：将步骤s3得到的混合液iii过滤，所述过滤膜为二氧化硅纳米材料膜，所述二氧化硅纳米材料膜的制备方法为：a将n-羧甲基壳聚糖溶于去离子水中搅拌均匀，得质量浓度为4％的n-羧甲基壳聚糖溶液；b将笼型介孔二氧化硅纳米材料加入步骤a得到的n-羧甲基壳聚糖溶液，所述笼型介孔二氧化硅纳米材料与n-羧甲基壳聚糖溶液的固液比为1g:4ml烘干，成膜，即得。对比例10、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物的成分及其重量份数如实施例1。制备方法的不同之处在于：所述步骤s4中的过滤膜为壳聚糖膜，所述壳聚糖膜的制备方法为：将水溶性壳聚糖溶于去离子中搅拌均匀，得质量浓度为4％的壳聚糖溶液，成膜，即得。对比例11、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物的成分及其重量份数如实施例1。制备方法的不同之处在于：所述步骤s4中的过滤膜为n-羧甲基壳聚糖膜，所述n-羧甲基壳聚糖膜的制备方法为：将n-羧甲基壳聚糖溶于去离子水中搅拌均匀，得质量浓度为4％的n-羧甲基壳聚糖溶液，成膜，即得。对比例12、一种保湿修复组合物所述保湿修复组合物的成分及其重量份数如实施例1。制备方法的不同之处在于：所述步骤s4中的过滤膜为活性炭材料膜，所述活性炭材料膜的制备方法为：a将n-羧甲基壳聚糖溶于去离子水中搅拌均匀，得质量浓度为4％的n-羧甲基壳聚糖溶液；b将活性炭材料加入步骤a得到的n-羧甲基壳聚糖溶液，所述活性炭材料与n-羧甲基壳聚糖溶液的固液比为1g:4ml烘干，成膜，即得。试验例一、保湿修复组合物的成分摸索试验1、试验材料：实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制得的保湿修复组合物。2、试验方法：测定实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制得的保湿修复组合物的保湿活性、修复活性和抗敏活性，其中：2.1、保湿活性的测定(1)吸湿性测定方法：将待测样品置于烘箱中，在105℃下烘干3h至恒重，然后将其放入硅胶干燥器中冷却至室温。准确称取1.0g待测样品，置于氯化钙水溶液维持rh为32％的干燥器内吸湿，24h、72h后称各试样的质量。测试条件为：25℃，相对湿度32％；吸湿率(ra)＝(wn-w0)/w0×100％其中，w0为放置前样品质量，wn为放置后的样品质量。(2)保湿性测定方法：在干燥恒重后的待测样品中加入质量分数为10％的水，然后将其置于rh为32％硅胶干燥器内。24h、72h后称各试样的质量。测试条件为：干燥器内为25℃，相对湿度为81％。保湿率(rr)＝hn/h0×100％h0为放置前水分质量，hn为放置后水分质量。2.2、修复活性的测定：(1)对nih/3t3细胞增殖影响经待测样品采用pbs配制成5mg/ml的贮存液。每次点板前将贮存液用无血清的培养基稀释成6个终浓度(5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml，现配现用。选取对数期生长的nih/3t3细胞，消化及离心、计数后，用含10％胎牛血清的dmem培养基稀释成每毫升3*104个的浓度，用排枪接种在96孔板上，每孔100ul。在5％co2、37℃恒温培养箱中培养4～5h(保证细胞已贴壁)，吸出96孔板内的培养基，用pbs洗两遍后加入含不同浓度样品的培养液，对照组为采用等量的pbs替代样品。每组处理重复6次，继续培养48h后釆用亚甲基蓝法测定对照和不同处理浓度的吸光值。在培养48h后，吸出96孔板内的培养基，用pbs洗两遍后换入50ul亚甲基蓝染液，继续置于5％co2、37℃恒温培养箱中继续培养60min。吸弃亚甲基蓝染液，用蒸馏水轻轻洗6遍，并且要保证每孔洗的次数一样。控干孔板中的蒸馏水(或自然干燥数分钟)后，每孔加入100ul亚甲基蓝洗液，室温下放置于振摇板上振摇，致蓝色结晶全部溶解。使用酶联免疫检测仪检测每孔在570nm处的吸光值(od值)。增殖率按照下面公式计算：(2)对nih/3t3细胞迁移的影响以不同时刻进入划痕内的细胞数为指标，选出的促进细胞增殖率最高对应浓度条件下对细胞迁移的影响。将nih/3t3细胞以每毫升4*105个的浓度接种在24孔培养板内，每孔500ul，加入含10％fbs的dmem培养基，在5％co2、37℃恒温培养箱中培养过夜，形成单层细胞。待细胞覆盖率达80％后，用10ul枪头比着直尺(已灭菌)，尽量垂直，在单细胞层纵向划痕，制造培养细胞的伤口模型。划痕后吸去培养液，用pbs小心清洗3次去除划下的细胞，注意贴壁缓慢加入pbs，以免冲散单层贴壁细胞影响试验拍照结果。清洗后随机分为对照组、空白组和样品组来加样，每组8个复孔；其中，空白组是不添加样品或者缓冲溶液，对照组是添加与样品组同等体积的缓冲溶液。此时在倒置荧光显微镜(*100)下拍摄照片作为0h结果。放入5％co2、37℃恒温培养箱中培养，伤口形成后采用image-proplusversion6.0(ipp)图像分析软件计算24h进入划痕内的细胞数。其中空白组和对照组进入伤口的细胞个数分别为400和500个。2.3、抗敏活性的测定采用透明质酸酶体外抑制法测定抗敏性能(1)试验原理采用透明质酸酶体外抑制法测定化妆品原料及化妆品产品的抗过敏功效。透明质酸酶是过敏反应的参与者，分解体内的透明质酸(ha)，使其变成低分子量的酸性刺激源，引起组胺释放，诱导机体产生敏感症状，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，许多抗过敏药物有强抑制透明质酸酶活性的作用。(2)试剂配制(a)醋酸缓冲溶液(ph＝5.6)：量取1155μl冰乙酸稀释至100ml混匀后取其中4.8ml为a溶液；称取2.72g乙酸钠结晶(1.64g无水乙酸钠)加水溶解并定容至100ml混匀后取其中45.2ml为b溶液；混合溶液a、b，以水定容至100ml混匀。精密测定其ph值，用溶液a或b调至5.6即可。(b)透明质酸酶溶液：称取透明质酸酶0.0100g置于烧杯中加入4ml醋酸缓冲溶液，最终工作浓度为1250u/ml。(c)0.5mg/ml透明质酸钠溶液：称取透明质酸钠0.0050g置于烧杯中加入10ml醋酸缓冲溶液。(d)埃尔利希试剂(ehrlichreagent)：称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇中，可保存两个月。(e)乙酰丙酮溶液：取乙酰丙酮3.5ml溶于50ml1.0mol/l的碳酸钠溶液中，此溶液在用前配制。(3)试验步骤取0.1ml0.25mmol/lcacl2溶液和0.5ml透明质酸酶液37℃保温培养20min；加入样品液0.5ml，继续37℃保温培养20min；加入0.5ml透明质酸钠液37℃保温30min，常温放置5min；加入0.1ml0.4mol/lnaoh溶液和0.5ml乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min后立即用冰水进行冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0ml并用3.0ml无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度值。(4)数据处理式中：a--对照溶液abs值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)b--对照空白溶液abs值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)c--试样溶液abs值d--试样空白溶液abs值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)试验时先对a组试样进行450～700nm范围的波长扫描，以确定最大吸收波长，然后以去离子水作为参比，在该最大吸收波长处分别进行abs值测定。同一样品的两次测定值之差应不超过两次测定平均值的10％。3、试验结果：试验结果如表1所示。表1保湿修复组合物的性能试验数据由表1可知，24h吸湿率和72h吸湿率表明本发明提供的保湿修护组合物具有吸湿作用，而且随着时间延长，其吸湿性能越好；24h保湿率和72h保湿率表明本发明提供的保湿修护组合物具有保湿作用，而且随着时间延长，其保湿性能越好。nih/3t3细胞增殖率和进入伤口的细胞个数表明本发明提供的保湿修护组合物具有修复作用，nih/3t3细胞增殖率越高、24h后进入伤口的细胞个数越多，表示修复作用越好；透明质酸抑制率表明本发明提供的保湿修护组合物具有抗炎作用。经实施例1～6与对比例1～5数据对比发现，保湿修护组合物的保湿、吸湿效果、修复效果及抗炎效果明显优于对比例1～5，说明本发明提供的保湿修护组合物中各成分相互作用起增强保湿、修护、抗炎的作用，而且只有当其添加份数在一定的范围内，即在本发明提供的范围内时，才能得到具有良好保湿修护效果的组合物。试验例二、保湿修复组合物的成分摸索试验1、试验材料：实施例1、对比例6、对比例7、对比例8和对比例9制得的保湿修复组合物。2、试验方法：测定实施例1、对比例6、对比例7、对比例8和对比例9制得的保湿修复组合物的保湿活性、修复活性和抗敏活性，检测方法参考试验例一。3、试验结果：试验结果如表2所示。表2保湿修复组合物的的性能试验数据由表2可知，本发明提供的保湿修复组合物各成分相互作用可以起增加保湿、修复和抗炎效果，延长保湿时间，而采用植物多糖的对比例6，缺少活性矿物酵母多肽的对比例7，采用菊花提取液的对比例8和没有采用高压均质处理的对比例9制备得到的保湿修复组合物的保湿、修复和抗炎效果大大下降，说明本发明提供的保湿修复组合物各成分相互作用可以起增加保湿、修复和抗炎效果。试验例三、保湿修复组合物的重金属与微生物检测试验1、试验材料：实施例1、对比例10、对比例11和对比例12制得的保湿修复组合物。2、试验方法：参考sn/t3479-2013的测定方法检测实施例1、对比例10、对比例11和对比例12制得的保湿修复组合物中汞、砷和铅的含量；参考《化妆品安全技术规范》(2015年版)的测定方法检测实施例1、对比例10、对比例11和对比例12制得的保湿修复组合物的微生物指标。3、试验结果试验结果如表3所示。表3保湿修复组合物的重金属与微生物检测试验实施例1对比例10对比例11对比例12汞(mg/kg)0.0310.80.7砷(mg/kg)0.061.81.51.4铅(mg/kg)0.0532.22.0菌落总数(cfu/ml)≤500≥500≤500≤500霉菌和酵母菌总数(cfu/ml)≤100≥100≥100≥100耐热大肠菌群/ml未检出未检出未检出未检出金黄色葡萄球菌/ml未检出有检出未检出未检出铜绿假单胞菌/ml未检出有检出有检出有检出由表3可知，本发明提供的保湿修复组合物的重金属含量低，远远低于《化妆品安全技术规范》(2015年版)规定的汞的限值为1mg/kg，砷的限值为2mg/kg，铅的限值为10mg/kg，可以更好的保护肌肤不受重金属离子的影响，适合长期使用。另外，本发明制得的保湿修复组合物的微生物含量符合《化妆品安全技术规范》(2015年版)的规定。并且将该保湿修复组合物放置在40～50℃电热恒温培养箱中放置40天，恢复室温后再检测保湿修复组合物的微生物含量仍符合《化妆品安全技术规范》(2015年版)的规定，而对比例10～12制得的保湿修复组合物的微生物的含量超过《化妆品安全技术规范》(2015年版)的规定，说明本发明提供的制备工艺可以延长保湿组合物的保质期，提高稳定性。试验例四、保湿修复组合物清除超氧离子自由基的检测试验1、试验材料：实施例1、对比例10、对比例11和对比例12制得的保湿修复组合物。2、试验方法：采用氯化硝基四氮唑蓝(nbt)法检测清除o2-能力，在称量瓶中依次加入1.7ml6×10-2mol/lph＝8.04磷酸钠缓冲液，0.3ml1.3×10-1mol/l甲硫氨酸溶液，0.3ml7.5×10-4mol/l氮蓝四唑溶液，0.3ml1×10-4mol/ledta溶液，0.3ml6.67x10-5mol/l核黄素溶液。以未采用过滤膜过滤的保湿修复组合物作为空白样品，于406nm处测定吸光度a406，计算清除率。清除率＝a406(空白样品)-a406(待测样品)/a406(空白样品)×100％。3、试验结果：试验结果如表4所示。表4保湿修复组合物清除超氧离子自由基的试验数据a406清除率(％)空白组0.225-实施例10.02290对比例100.07965对比例110.06372对比例120.06173由表4可知，本发明提供的过滤膜可以有效去除保湿修复组合物中产生的超氧离子自由基，可以有效的降低超氧离子自由基对皮肤的影响。试验例五、应用例1、试验材料：配方1：矿物油8.0g，角鲨烷3.0g，甘油5.0g，丙二醇4.0g，卵磷脂3.0g，实施例1制备得到的保湿修护组合物5.0g，加水至100g；配方2：除不添加实施例1制备得到的保湿修护组合物外，其余的原料种类和用料同配方1。配方3：除实施例1制备得到的保湿修护组合物的添加量为0.5g外，其余的原料种类和用料同配方1。配方4：除实施例1制备得到的保湿修护组合物的添加量为10.0g外，其余的原料种类和用料同配方1。采用配方1～4制备的乳液，测试其使用效果。2、保湿效果测试：选用30名志愿受试者在其双手手臂内侧选取4块3*3cm大小的区域，每块区域均涂抹0.2g配方1、配方2、配方3和配方4制得的乳液，左右手涂抹的样品和区域相同。在使用4h、8h、12h、24h后，利用经皮水分流失仪测定涂抹区域水分含量。测试结果如表5所示。表5配方1～4制备的乳液保湿试验从表5中可知，按照配方1和配方3制备的乳液，在使用后皮肤的含水量明显高于未添加保湿修护组合物的配方2。将配方1和配方3、配方4的数据进行比较，可知当保湿修护组合物的添加量太少时，样品有一定的保湿效果，但效果并不明显；但如果保湿修护组合物的添加量过多时，其保湿效果基本上已经达到了最高值，即使添加更多，其保湿效果也较难有更高的提升，而制作成本且大大的增加。因此当保湿修复组合物的添加的质量百分比为0.5～5％时，保湿效果的性价比最佳。当前第1页12