心脉安在制备治疗肺动脉高压药物中的应用的制作方法

本发明涉及心脉安的新用途，具体涉及心脉安在制备治疗肺动脉高压药物中的应用。

背景技术：

肺动脉高压(pulmonaryhypertension，ph)是以肺小动脉的收缩、肺血管重塑、血栓形成为主要病理特征的渐进性疾病。血管舒缩因子、血管生长因子、炎性因子、低氧诱导因子等多种细胞因子共同参与肺动脉高压(ph)的发病过程。其血流动力学诊断标准为：在静息状态下，右心导管检测平均肺动脉压(mpap)≥25mmhg。

一般治疗药物分为西药治疗和中药治疗。西药治疗药物包括类前列腺素、内皮素受体拮抗剂、5-型磷酸二酯酶抑制剂、可溶性鸟苷酸环化酶激动剂，或者在罕见情况下使用的某些钙通道阻滞剂。

中药在治疗肺动脉高压上有较大潜力和发展价值，能够在一定程度上缓解肺动脉高压的症状，改善患者心肺功能，在气血方面也能产生有利影响，例如川芎嗪、汉防己甲素、丹参酮a、灯盏花素等中药单体具有活血化瘀、抗炎等功效，其治疗肺动脉高压有一定疗效。当归、白花前胡、黄芪、睡茄等单味中药及复方红景天、通心络、三黄泻心汤、肺心汤等中药复方制剂可明显改善症状，降低肺动脉压，并在一定程度上改善心肺功能。与一些西药相比，安全性更高，副作用较少，且作用温和持久。

心脉安包括人参、黄芪、丹参、赤芍、麦冬、冰片，临床用于心悸气阴两虚兼心血瘀阻证(轻中度冠心病室性早搏)，症见心悸、气短、胸闷胸痛、疲怠乏力、舌红苔少、脉结、代或促。cn100536890c公开了配方为人参40-200份，黄芪100-500份，丹参400-650份，赤芍50-400份，麦冬50-450份和冰片1.5-4.5份的中药组合物在治疗冠心病心率失常的应用。

心脉安在制备治疗肺动脉高压药物中的应用目前并没有报导过。

技术实现要素：

本发明的目的是提供心脉安在制备治疗肺动脉高压药物中的应用。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明保护心脉安的新用途，在制备治疗肺动脉高压药物中的应用。

所述心脉安为中药组合物，按重量份数包括以下原料：人参40-200份，黄芪100-500份，丹参400-650份，赤芍50-400份，麦冬50-450份和冰片1.5-4.5份。

人参，黄芪，丹参，赤芍和麦冬五种药材的水和/或醇提物以及冰片粉末组成本发明心脉安中药组合物的有效成份。

所述心脉安中药组合物的制备方法参考cn100536890c。

在制备治疗肺动脉高压药物时，还包括药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。

本发明意外发现心脉安中药组合物协同作用，对肺损伤具有一定的保护作用，通过降低血中内皮素-1(et-1)含量，提高一氧化氮(no)含量，扩张肺血管，减轻肺循环阻力来改善肺动脉高压。

本发明心脉安中药组合物可改善野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压模型中的肺组织炎症浸润并抑制动脉管腔肥厚、增加血管壁顺应性，并可改善肺动脉高压大鼠心脏重构。

本发明心脉安中药组合物可调节肺动脉高压大鼠的肺动脉压力。

本发明心脉安中药组合物可增加一氧化氮含量，减少内皮素-1的含量，改善内皮功能。

肺血管内皮细胞合成释放的内皮素-1可以引起肺血管收缩并引起肺动脉血管平滑肌的增殖。长期的肺动脉高压常导致右心室结构的改变和重塑，进而导致右心功能降低甚至衰竭，成为大多数患者后期死亡的原因。

本发明的有益效果如下：本发明意外发现了心脉安的新用途，在制备治疗肺动脉高压药物中的应用，疗效确切，服用方便，不含糖，且成本大大降低，适合广大患者。

附图说明：

图1是实施例1中中药组合物对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压模型的组织学观察结果示意图；其中，a模型组(野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压病组)，b空白对照组，c安全对照组(心脉安中药组合物灌胃健康大鼠)，d治疗组(心脉安中药组合物灌胃野百合碱造模大鼠)；

图2是中药组合物对肺动脉高压大鼠血浆内皮素et-1和no水平的影响。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

研究心脉安中药组合物对肺动脉高压大鼠血流动力学的影响，对肺动脉高压大鼠血浆et-1和no水平的影响，对肺动脉高压大鼠心脏重构的影响进行了实验，并对肺动脉管进行了组织学观察，结果如下：

1、心脉安中药组合物对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压模型的组织学观察

健康雄性sd大鼠40只，采用随机数字表法随机分为四组，每组10只，分别为a模型组(野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压病组),b空白对照组、c安全对照组(心脉安中药组合物灌胃健康大鼠)和d治疗组(心脉安中药组合物灌胃野百合碱造模大鼠)。将野百合碱(mct)结晶以生理盐水配成2％的溶液。a模型组：一次性项背部皮下注射mct50mg/kg。b空白对照组：以等量生理盐水一次性项背部皮下注射。c安全对照组：心脉安中药组合物灌胃。d治疗组：一次性项背部皮下注射mct50mg/kg，自由饮水、摄食3周后，心脉安中药组合物灌胃。以上4组均相同等条件下继续饲养；2周后达实验终点。

上述实验动物在同样条件下饲养14d后，于第15天处死，开胸取每只大鼠的肺组织和心脏后立即用体积分数为10％的中性甲醛溶液固定1周，右下肺各取组2块，脱水，石蜡包埋，常规切片后行苏木素伊红(he)染色，光学显微镜下观察肺小动脉形态学改变。

实验组织学观察结果：

如图1所示，a模型组(野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压病组)：血管内皮细胞分布不均匀，连续性差，炎症细胞浸润，肺动脉血管壁厚，血管腔狭窄；

b空白对照组：肺小动脉管腔无狭窄，管壁无增厚，无炎症细胞浸润；

c安全对照组：肺小动脉管腔无狭窄，管壁无增厚，无炎症细胞浸润

d治疗组：肺小动脉血管壁增厚减少，血管腔狭窄缓和，较野百合碱组少炎症细胞浸润，血管内皮细胞连续性较野百合碱组好。

实验结论：光镜下肺动脉he染色，可见空白对照组与安全对照组的大鼠肺小动脉管腔无狭窄，管壁无增厚，无炎症细胞浸润，说明心脉安片对正常健康大鼠是安全的。用野百合碱造模的大鼠血管内皮细胞分布不均匀，连续性差，炎症细胞浸润，肺动脉血管壁厚，血管腔狭窄，而用心脉安中药组合物干预后，肺小动脉血管壁增厚减少，血管腔狭窄缓和，肺动脉病理形态得到改善。

2、心脉安中药组合物对肺动脉高压大鼠心脏重构的影响及对肺动脉高压大鼠血流动力学的影响。

(1)健康雄性sd大鼠40只，采用随机数字表法随机分为四组，每组10只，分别为空白对照组、模型组(野百合碱组)和治疗组，为了更好考察本专利制剂的治疗效果，特设置了同类药(芪苈强心胶囊)作为阳性对照组。将野百合碱(mct)结晶以生理盐水配成2％的溶液。空白对照组：以等量生理盐水一次性项背部皮下注射。模型组：一次性项背部皮下注射mct50mg/kg。治疗组：一次性项背部皮下注射mct50mg/kg，自由饮水、摄食3周后，心脉安中药组合物灌胃。阳性对照组：一次性项背部皮下注射mct50mg/kg，自由饮水、摄食3周后，同类药灌胃。以上4组均相同等条件下继续饲养；2周后达实验终点。

大鼠取血后，取出心脏，去除心房和大血管，分离剪取右心室，剩余左心室加室间隔，用生理盐水冲洗，去掉心腔血液，用滤纸吸取表面水分，电子天平精密称量右心室、左心室加室间隔重量，计算心脏重量、心指数和右心室肥厚指数。右心室肥厚指数＝右心室质量/左心室和室间隔质量。

实验结果如表1所示：表1：心脉安片对肺动脉高压大鼠右心指数及心脏重量的影响

注：与空白对照组比较，#：p<0.05；与模型组比较，*：p<0.05；与治疗组比较，^△：p<0.05。

与对照组比较，造模2周后，模型组的右心指数显著增高(p<0.05),治疗2周后，治疗组的右心指数下降为(0.57±0.00)，阳性对照组下降为(0.61±0.02)，治疗组与模型组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)，治疗组与阳性对照组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)。与对照组比较，造模2周后，模型组的心脏重量显著增高(p<0.05),治疗2周后，治疗组的心脏重量下降为(1.10±0.01)，阳性对照组下降为(1.12±0.02)，治疗组与模型组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)，心脉安中药组合物治疗组与阳性对照组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)。

实验结论：心脉安中药组合具有物抑制动脉管腔肥厚、增加血管壁顺应性作用，并可改善肺动脉高压大鼠心脏重构。同类药对照组选取芪苈强心胶囊(201610666130.8一种中药组合物在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用)，经实验证明，心脉安片对肺动脉高压大鼠右心指数及心脏重量的影响中，心脉安中药组合物治疗组与阳性对照组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)

(2)、心脉安中药组合物对肺动脉高压大鼠血流动力学的影响

将大鼠禁食12h，用水合氯醛麻醉，固定，分离气管并进行插管。

分离右侧颈总静脉进行插管，取中央静脉导管经右侧锁骨下静脉和上腔静脉进入右心室，用压力换能器连接powerlab八导生理记录仪相连，用于检测右心室收缩压(rvsp)。

实验结果如表2所示，与对照组比较，造模2周后，模型组的右心室压力显著增高(p<0.05),治疗2周后，治疗组的右心室压力下降为(54.54±2.05)，阳性对照组下降为(58.84±1.43)，治疗组与模型组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)，治疗组与阳性对照组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)。

表2：心脉安片对肺动脉高压大鼠右心室压力的影响

注：与空白对照组比较，#：p<0.05；与模型组比较，*：p<0.05；与治疗组比较，^△：p<0.05。

实验结论：心脉安中药组合物可调节肺动脉高压大鼠的肺动脉压力。阳性对照组选取芪苈强心胶囊(201610666130.8一种中药组合物在制备治疗肺动脉高压的药物中的应用)，经实验证明，心脉安中药组合物对肺动脉高压大鼠血流动力学的影响中，心脉安中药组合物治疗组与阳性对照治疗组相比，差异具有显著性意义(p<0.05)

3、心脉安中药组合物对肺动脉高压大鼠血浆et-1和no水平的影响

应用westernblot技术分析细胞中诱导型一氧化氮合酶(inos)和eta/etb蛋白水平变化：实验采用westernblot方法，通过比较显色后pvdf膜上各条带的灰度值分析et-1的表达变化。实验过程如下：用bca法定量蛋白含量。电泳：制备电泳凝胶，进行sds-page。其中，分离胶浓度为10％，浓缩胶浓度为4％。采用90v恒压进行电泳。目的蛋白的转移：电泳结束后将胶条割至合适大小，与预先裁好与胶条同样大小的滤纸和pvdf膜，浸入转膜缓冲液中数分钟。按阳极至阴极依次为海绵、3层滤纸、pvdf膜、凝胶、24层滤纸、海绵的顺序放好，每一步去除气泡。接通电源,恒流200ma转移3h。转移结束后，断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。免疫反应：加入封闭液，平稳摇动，室温1hr。弃封闭液，用0.01mtbst略洗膜。加入一抗(抗p-gp抗体)，4℃放置12hr以上。阴性对照，以1％bsa取代一抗，其余步骤与实验组相同。弃一抗和1％bsa，用0.01mtbst分别洗膜，5min×5次。加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01mtbst稀释)，平稳摇动，室温1hr。弃二抗，用0.01mtbst洗膜，5min×5次。加入化学发光底物，避光显色至出现条带时将显色的pvdf膜进行x片曝光后，显影扫描，使用图像分析相关软件测定条带灰度值。

实验结果如图2所示，与空白对照组比较，造模2周后，模型组的et-1与一氧化氮合酶(inos)水平分别升高与降低,治疗2周后，治疗组的et-1水平比模型组降低，差异具有显著性意义(p<0.05)；治疗组的一氧化氮合酶(inos)水平比模型组升高，差异具有显著性意义(p<0.05)；

实验结论：心脉安中药组合物可增加一氧化氮含量，减少et-1的含量，改善内皮功能，通过调节et-1与no体系来调节肺动脉高压发展进程的。