锰离子制剂在制备治疗肿瘤药物中的用途的制作方法

本发明涉及药物领域，具体涉及锰离子制剂在制备治疗肿瘤中的用途。

背景技术：

肿瘤是威胁人类生命的主要疾病，并且肿瘤发病率和死亡率每年都在上升，据世界卫生组织预测，2020年全球癌症新发病例将达到2000万，因癌症死亡1200万人。虽然目前治疗肿瘤手段有很多种，比如手术、放疗、化疗以及生物治疗等，但是每种手段都存在不同方面的缺陷，产生不同程度的毒副作用，因此人们迫切希望找到一种不会产生任何明显可见副作用、安全有效的治疗肿瘤的方法。

锰(mn)是人体必需的8种微量元素之一，是维持人和动物健康乃至生命必不可少微量元素。过多摄入或者缺乏mn都会导致疾病发生。srisuchart等发现动物暴露于小于10mgmncl2/kg没有死亡或表现出与mn毒性相关的迹象^[1]。微量的mn可以维持免疫系统功能，调节血糖、细胞能量、骨骼生长、对抗自由基等^[2]。

1983年，rogers等发现给小鼠注射mncl2后，可以增强其体内天然细胞介导的免疫效应细胞功能^[3-5]。例如，给小鼠单次肌肉注射mncl2后，rogers等通过⁵¹cr释放实验测定自然杀伤(nk)细胞活性，发现nk细胞活性显著增强。rogers等用无菌、无热原，0.9％的生理盐水制备氯化锰(mncl2)储液，用25mm2-n-羟乙基-哌嗪-n'-2-乙磺酸(hepes，grandislandbiologicalco.，grandisland，ny)缓冲的盐水中稀释至所需浓度。以下称为hepes-生理盐水。给11周龄和19周龄的cba/j小鼠、9周龄a/j/小鼠、11周龄c57bi/6j小鼠大腿肌肉注射0.1-0.15毫升的hepes-生理盐水、mncl2(40，80或120ug/g)；24小时后取小鼠脾脏，用红细胞裂解液裂解，洗涤，重悬至2×10⁷个/毫升；用铬酸钠(na251cro4)标记小鼠淋巴瘤细胞(yac-1细胞)和小鼠t淋巴瘤细胞(el-4细胞)，洗涤，重悬至2×10⁵个/毫升；脾脏细胞和靶细胞按25:1、50:1、100:1共孵育4小时候；检测细胞培养液上清⁵¹cr，计算nk细胞活性。结果发现，nk细胞活性呈现出剂量相关的增加；80ug/gmncl2处理的小鼠nk细胞活性最高，可持续3天；提高了低免疫应答的c57bi/6j和a/j/小鼠的脾脏细胞杀伤yac-1肿瘤细胞；提高了cba/j小鼠脾脏细胞杀伤el-4肿瘤细胞；提高了老龄cba/j小鼠脾脏细胞杀伤yac-1肿瘤细胞。rogers等还做了体内实验验证。给10周龄和22-24周龄的cba/j和10周龄a/j小鼠大腿肌肉注射0.1-0.15毫升的hepes-生理盐水、mncl2(80ug/g)；24小时后，用碘125-5-氟-2'-脱氧尿苷标记yac-1肿瘤细胞，洗涤后，用不完全rpmi-1640培养基重悬细胞至2×10⁶个/毫升；每只处理过的小鼠尾静脉注射1×10⁷个碘125-5-氟-2'-脱氧尿苷放射物标记的yac-1细胞；30分钟、1小时、2小时和4小时后颈部脱位处死小鼠；取出小鼠脾脏和肺部并置于管中；检测小鼠肺部和脾脏放射性yac-1细胞。发现从肺部回收的放射性从注射后30分钟的约20％降低至4小时后的不到1％。在1，2和4小时时，在mn处理的小鼠的肺中观察到增强的肿瘤细胞清除率；通过回收的放射性百分比降低显示，在4小时时在mn处理的小鼠的脾脏中观察到增强的肿瘤细胞清除率。结果也显示了mncl2增强了低免疫应答的a/j小鼠体内的nk活性。同时mnc12还增强了老龄cba/j的体内nk活性。

目前肿瘤治疗手段包括：手术治疗；放射治疗；化学治疗；生物治疗；中医疗法；中西医结合疗法等。这些治疗方法都存在不同方面的缺陷：①手术治疗风险大，对人体创伤大，使患者免疫力降低，对疾病抵抗力下降。②放射治疗并发症较多，甚至引起部分功能丧失；对于晚期肿瘤患者，放射治疗效果并不完好。不适合体质较差，年龄偏大的患者。③化疗药物的选择性差，在杀死肿瘤细胞的同时杀死了大量的正常细胞，破坏了人体自身的免疫系统功能；抑制骨髓造血干细胞的功能，并易产生耐药性。④生物治疗，成本高，对于晚期带有较多癌组织、特别是带有实体瘤的病人，相对显得无能为力。⑤中医治疗，治疗效果不如化疗，对肿瘤局部的控制作用不好。而本发明在弥补手术、放疗、化疗、生物治疗和中药治疗的不足条件下，为肿瘤治疗提供了一种安全有效方法，且最主要的是该方法没有其它肿瘤治疗方法带来的副作用。

1.srisuchart,b.,m.j.taylor,andr.p.sharma,alterationofhumoralandcellular-immunityinmanganesechloride-treatedmice.journaloftoxicologyandenvironmentalhealth,1987.22(1):p.91-99.

2.erikson,k.m.,etal.,interactionsbetweenexcessivemanganeseexposuresanddietaryiron-deficiencyinneurodegeneration.environmentaltoxicologyandpharmacology,2005.19(3):p.415-421.

3.smialowicz,r.j.,etal.,manganesechlorideenhancesmurinecell-mediatedcytotoxicity:effectsonnaturalkillercells.journalofimmunopharmacology,1984.6(1-2):p.1-23.

4.smialowicz,r.j.,etal.,manganesechlorideenhancesnaturalcell-mediatedimmuneeffectorcell-function-effectsonmacrophages.immunopharmacology,1985.9(1):p.1-11.

5.rogers,r.r.,etal.,augmentationofmurinenatural-killercell-activitybymanganesechloride.toxicologyandappliedpharmacology,1983.70(1):p.7-17.

技术实现要素：

本发明一个方面提供了锰离子制剂在制备治疗肿瘤的药物中的用途，其中，锰离子作为唯一活性成分。

在本发明的技术方案中，所述的锰离子为二价锰离子。

在本发明的技术方案中，二价锰离子优选为氯化锰或硫酸锰、磷酸二氢锰、硝酸锰中的一种或多种的组合。

在本发明的技术方案中，锰离子制剂为溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、冻干粉针剂。

在本发明的技术方案中，锰离子制剂为注射剂，其溶剂选自注射用水、缓冲溶液、生理盐水。

在本发明的技术方案中，所述肿瘤为淋巴瘤选自非霍奇金淋巴瘤的肿瘤或霍奇金淋巴瘤的肿瘤。

在本发明的技术方案中，非霍奇金淋巴瘤选自t细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、外周t细胞淋巴瘤(ptcl)、皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)和其任何组合。

有益效果

①锰离子制剂成本低廉；

②mncl2注射液制作简单；

③无任何明显可见的副作用；

④可激活机体免疫细胞活性，增强免疫细胞抗肿瘤应答功能。

附图说明

图1为空白组和给药组不同时间点肿瘤生长趋势图。

具体实施方式

实施例1配置mncl2注射液

将mncl2粉末溶解于无菌磷酸缓冲盐溶液(pbs)，制备成8m储液，并用孔径为0.25微米滤膜过滤灭菌。用pbs稀释至所需浓度。

实施例2mncl2对淋巴瘤小鼠的体内疗效实验

对c57bl/6小鼠皮下接种小鼠t淋巴癌(rma-s)细胞建立肿瘤模型，取生长状态良好的rma-s细胞，按细胞数2×10⁶/ml，0.1ml接种于6～10周龄c57bl/6小鼠右侧腋下皮下，即给c57bl/6小鼠皮下接种2×10⁵rma-s细胞,建立肿瘤模型，每组5只小鼠；以接种rma-s肿瘤细胞当日为试验第1天，每天给小鼠腹腔注射400ul无菌pbs、或由无菌pbs溶解的mncl2(2mg/kg)1次，连续注射6天；mncl2处理小鼠后的第6天、9天、12天测量肿瘤大小，记录数据，并用下列公式计算肿瘤结节大小：瘤径r(mm)＝(长径+短径)/2，使用下列公式计算肿瘤球体积：肿瘤球体积v(mm³)＝(4/3)πr³；采用graphpadprism软件处理数据，多重t检验(multiplettests)统计学方法分析。通过图1的趋势可以看出在12天时肿瘤体积的明显不同，具有统计学差异，给药组肿瘤体积约为空白组的二分之一。