一种激活脂肪酸-G蛋白偶联受体通路的组合物的制作方法

本发明属于医药领域，具体涉及一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物。

背景技术：

宿主肠道内的菌群与宿主间存在着密切的共生关系。近年来的研究显示，肠道菌群在宿主的免疫与代谢方面发挥着重要的作用，一方面肠道菌群可以通过生成特定的抗原而维持宿主免疫功能的稳定，另一方面肠道菌群的代谢产物，如维生素k、脂肪酸(脂肪酸包括长链脂肪酸(碳原子数为大于12的有机脂肪酸)、中链脂肪酸(碳原子数7-12的有机脂肪酸)、以及短链脂肪酸(碳原子数为2-6的有机脂肪酸，具体包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸))等，可以为宿主提供必要的营养支持，且在延缓疾病的发展过程中起到重要作用。然而不平衡的肠道菌群结构往往和许多的疾病相关，现有的证据表明，自闭症、阿尔兹海默病、肥胖、糖尿病，甚至癌症等均与紊乱的肠道菌群结构息息相关。因此，通过调节肠道菌群的结构及其代谢产物的水平，来干预疾病的发生、发展过程，被认为是科学合理的途径，对维护机体健康有重要的作用。

肠道内的脂肪酸，特别是短链脂肪酸，主要是由肠道菌群发酵产生。在机体肠道内，脂肪酸(包括长链、中链与短链脂肪酸)通过与其相应的受体，即g蛋白偶联受体(包括长链、中链以及短链脂肪酸受体)相结合而发挥一系列重要的生物作用。

短链脂肪酸生成菌，是肠道内具有代谢合成短链脂肪酸能力的肠菌的总称。短链脂肪酸生成菌可以将不被宿主降解吸收的大分子物质，如多糖(纤维素)、多酚等，在结肠内通过肠道菌群自身分泌的酶的作用，将其分解代谢并生成短链脂肪酸。短链脂肪酸可以为结肠的上皮细胞提供营养支持，促进结肠上皮细胞的新陈代谢。目前，许多的研究显示，增加肠内短链脂肪酸的水平，可以有效抑制炎性肠病和肠癌的发生与发展。

现有技术中，能改善短链脂肪酸生成菌生成且副作用小，安全性高的药物并不多，作用效果良好且作用机理明确的更是少。例如cn102743420a虽然公开了改善肠道菌群结构的方法及应用，但并未十分清楚揭示肠道菌群结构是如何影响肠道健康的，且所提供的用来改善肠道菌群结构的药物效果有限。

因此，提供一种新的组合物，用来改善肠道菌群结构，特别是显著改善短链脂肪酸生成菌的相对丰度及相关有益物质的含量，以及知晓组合物对保持肠道健康的具体作用机理是十分重要的。

技术实现要素：

针对现有技术的不足，本发明提供一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物。所述组合物可有效地提高宿主肠道内脂肪酸生成菌的数量，激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路，特别是提高短链脂肪酸生成菌的数量，提高短链脂肪酸、g蛋白偶联受体，及其下游信号分子过氧化物酶体增殖剂激活受体与肽酪氨酸酪氨酸的含量；同时降低肠道内组蛋白去乙酰化酶的表达水平，进而为宿主的肠道健康提供重要的帮助。

一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物，包含多糖和/或皂苷；所述多糖来源于药材a的提取物，所述药材a选自灵芝、茯苓、猪苓、牛樟芝、香菇、木耳、冬虫夏草和蛹虫草中的至少一种。

优选的，所述皂苷来源于药材b的提取物，所述药材b选自人参及人参的炮制品、三七和绞股蓝中的至少一种。

所述炮制品包括生晒参、红参、糖参。

其中，生晒参是人参经干燥加工成的；红参是人参经过浸润、清洗、分选、蒸制、晾晒、烘干而成的(所述红参包括高丽参)；糖参是人参经白糖液浸泡后，干燥而成的。

优选的，所述人参还包括西洋参。

所述组合物中，按重量百分数计，多糖的含量为0-100％，皂苷的含量为0-100％，且多糖和皂苷的含量不能同时为0或100％。所述组合物中，多糖与皂苷的含量含量之和为0-100％。

优选的，所述组合物中，按重量百分数计，多糖的含量为20-80％，皂苷的含量为20-80％。

优选的，所述多糖在药材a的提取物中的含量，按重量百分数计，为10-100％。

优选的，所述药材a的提取物中还含有蛋白质和/或生物碱。所述生物碱是水溶性的生物碱。

优选的，所述药材a的提取物中，按重量百分数计，蛋白质的含量为10-20％，生物碱的含量为0.1-1.5％。

进一步优选的，所述药材a的提取物中，按重量百分数计，蛋白质的含量为15％，生物碱的含量为1％。

优选的，所述皂苷在药材b的提取物中的含量，按重量百分数计，为10-100％。

优选的，所述药材b的提取物中还含有黄酮和/或氨基酸。

优选的，所述药材b的提取物中，按重量百分数计，黄酮的含量为2-5％，氨基酸的含量为1-3％。

所述药材a的提取物的制备过程如下：

(1)取药材a，加水，煎煮，过滤，取滤液，浓缩，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，静置，离心，取沉淀，加水使沉淀溶解，再加醇，静置，离心，取沉淀，干燥，制得药材a的提取物。

具体的，所述药材a的提取物的制备过程如下：

(1)取药材a，然后粉碎，加8-10倍重量的水(即水的质量为药材a的质量的8-10倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩至药材a的用量的1-2倍体积，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为60-90％，静置过夜，离心，收取沉淀，加水使沉淀溶解，加入乙醇，静置，离心，取沉淀，干燥后，制得含多糖的药材a的提取物。

优选的，步骤(1)中煎煮的温度为80-120℃，煎煮的时间为1-2小时。

优选的，步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为50-80目。

优选的，步骤(1)和步骤(2)中所述水为去离子水。

优选的，步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为90-99％(体积分数)；进一步优选的，所述乙醇的浓度为95％。

所述药材b的提取物的制备过程如下：

(1)取药材b，加水或醇，煎煮，过滤，取滤液，浓缩，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，离心，弃去沉淀，上清液经浓缩，干燥，制得药材b的提取物。

具体的，所述药材b的提取物的制备过程如下：

(1)取药材b，然后粉碎，加8-10倍重量的水或醇(即水或醇的质量为药材b的质量的8-10倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为70-80％，离心，弃去沉淀，上清液经减压浓缩，减压干燥，即得含皂苷的药材b的提取物。

优选的，步骤(1)中煎煮的温度为80-120℃，煎煮的时间为1-2小时。

优选的，步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为50-80目。

优选的，步骤(1)中的醇为乙醇，乙醇的浓度为50-60％(体积分数)。

优选的，步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为90-99％(体积分数)；进一步优选的，所述乙醇的浓度为95％。

本发明所述组合物可应用于饲料、食品、保健品以及药品中。

本发明所述组合物促进宿主肠道内的脂肪酸，特别是短链脂肪酸与其蛋白受体(例如g蛋白偶联受体，是一大类膜蛋白受体的统称)结合后，特别是激活短链脂肪酸-g蛋白偶联受体通路，促进该通路下游信号分子，如过氧化物酶体增殖剂激活受体(ppar-γ)与肽酪氨酸酪氨酸(pyy)的释放，进而发挥抗癌与抗炎的作用。此外，短链脂肪酸还可抑制机体内组蛋白去乙酰化酶的释放，从而抑制肿瘤的发生或发展。

相对于现有技术，本发明的有益效果如下：

(1)本发明所述组合物所含的多糖和皂苷来源于安全性高的中药材(药材a和药材b)；

(2)本发明所述组合物可有效提高宿主体内短链脂肪酸生成菌的丰度，提高短链脂肪酸、g蛋白偶联受体，及其下游信号分子过氧化物酶体增殖剂激活受体与肽酪氨酸酪氨酸的含量；同时降低肠道内组蛋白去乙酰化酶的表达水平，进而为维护宿主肠道健康提供重要的保障。

附图说明

图1为实施例4中小鼠肠道内短链脂肪酸生成菌的相对丰度的结果测试图；

图2为实施例4中小鼠血清中短链脂肪酸的含量的结果测试图；

图3为实施例4中小鼠肠道内g蛋白偶联受体的含量的结果测试图；

图4为实施例4中小鼠肠道内过氧化物酶体增殖剂激活受体与肽酪氨酸酪氨酸含量的结果测试图；

图5为实施例4中小鼠肠道内组蛋白去乙酰化酶的含量的结果测试图。

具体实施方式

为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。

实施例1(组合物中的多糖来自灵芝的提取物，组合物中不含皂苷)

一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物，包含多糖；所述多糖来源于药材a的提取物，所述药材a为灵芝。

所述组合物中，按重量百分数计，多糖的含量为20％。

所述多糖在药材a的提取物中的含量，按重量百分数计，为50％。

所述药材a的提取物中还含有蛋白质和生物碱。所述生物碱是水溶性的生物碱。

所述药材a的提取物中，按重量百分数计，蛋白质的含量为15％，生物碱的含量为1％。

所述药材a的提取物的制备过程如下：

(1)取药材a，然后粉碎，加9倍重量的水(即水的质量为药材a的质量的9倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩至药材a的用量的2倍体积，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为80％，静置过夜，离心，收取沉淀，加水使沉淀溶解，加入乙醇，静置，离心，取沉淀，干燥后，所得沉淀即为含多糖的药材a的提取物。

步骤(1)中煎煮的温度为100℃，煎煮的时间为1小时。

步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为50目。

步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为95％(体积分数)。

实施例1中的多糖来自灵芝，称之为灵芝多糖，即实施例1所述的组合物含有灵芝多糖。

实施例2(组合物中的皂苷来自绞股蓝的提取物，组合物中不含多糖)

一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物，包含皂苷；所述皂苷来源于药材b的提取物，所述药材b为绞股蓝。

所述组合物中，按重量百分数计，皂苷的含量为50％。

所述皂苷在药材b的提取物中的含量，按重量百分数计，为70％。

所述药材b的提取物中，按重量百分数计，黄酮的含量为3％，氨基酸的含量为2％。

所述药材b的提取物的制备过程如下：

(1)取药材b，然后粉碎，加10倍重量的水或醇(即水或醇的质量为药材b的质量的10倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为80％，离心，弃去沉淀，上清液经减压浓缩，减压干燥，即得含皂苷的药材b的提取物。

步骤(1)中煎煮的温度为100℃，煎煮的时间为1小时。

步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为50目。

步骤(1)中的醇为乙醇，乙醇的浓度为60％(体积分数)。

步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为95％(体积分数)。

实施例2中的皂苷来自绞股蓝，称之为绞股蓝皂苷，即实施例2所述的组合物含有绞股蓝皂苷。

实施例3

一种激活脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的组合物，包含多糖和皂苷；所述多糖来源于药材a的提取物，所述药材a为灵芝。

所述皂苷来源于药材b的提取物，所述药材b为绞股蓝。

所述组合物中，按重量百分数计，多糖的含量为30％，皂苷的含量为40％。

所述多糖在药材a的提取物中的含量，按重量百分数计，为70％。

所述药材a的提取物中，按重量百分数计，蛋白质的含量为15％，生物碱的含量为0.5％。

所述皂苷在药材b的提取物中的含量，按重量百分数计，为50％。

所述药材b的提取物中，按重量百分数计，黄酮的含量为4％，氨基酸的含量为2％。

所述药材a的提取物的制备过程如下：

(1)取药材a，然后粉碎，加10倍重量的去离子水(即水的质量为药材a的质量的10倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩至药材a的用量的1倍体积，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为90％，静置过夜，离心，收取沉淀，加去离子水使沉淀溶解，加入乙醇，静置，离心，取沉淀，干燥后，所得沉淀即为含多糖的药材a的提取物。

步骤(1)中煎煮的温度为110℃，煎煮的时间为1.5小时。

步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为80目。

步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为99％(体积分数)。

所述药材b的提取物的制备过程如下：

(1)取药材b，然后粉碎，加10倍重量的醇(即醇的质量为药材b的质量的10倍)，煎煮，过滤，所得滤液经减压浓缩，制得浓缩液，备用；

(2)向步骤(1)制得的浓缩液中加入醇，制得混合物，混合物中醇的体积分数为80％，离心，弃去沉淀，上清液经减压浓缩，减压干燥，即得含皂苷的药材b的提取物。

步骤(1)中煎煮的温度为110℃，煎煮的时间为1.5小时。

步骤(1)中药材a经粉碎后药材a的目数为80目。

步骤(1)中的醇为乙醇，乙醇的浓度为60％(体积分数)。

步骤(2)中所述醇为乙醇，所述乙醇的浓度为99％(体积分数)。

实施例3中组合物同时含有来自灵芝的多糖和来自绞股蓝的皂苷，即同时含有灵芝多糖和绞股蓝皂苷。

产品效果测试

实施例4

实验：检测实施例1制备的组合物(含灵芝多糖)、实施例2制备的组合物(含绞股蓝皂苷)以及实施例1和实施例2制备的组合物同时存在时对短链脂肪酸生成菌-短链脂肪酸-g蛋白偶联受体通路的激活作用。

实验过程如下：

采用6-8周龄的自发性肠癌(apc^min/+)小鼠为研究对象，设置3个实验组，实验组1给予实施例1制备的组合物(含灵芝多糖，用glp表示)，给予量为750mg/kg(即每kg体重的小鼠给予glp的量为750mg)；实验组2给予实施例2制备的组合物(含绞股蓝皂苷，用gps表示)，给予量为300mg/kg(即每kg体重的小鼠给予gps的量为300mg)；实验组3给予实施例1和实施例2的组合物(同时含灵芝多糖和股蓝皂苷，用glp+gps表示)，给予量为750mg/kg+300mg/kg(即每kg体重的小鼠同时给予glp的量为750mg，gps的量为300mg)，连续灌胃8周。在实验第8周结束后，分别收取每只小鼠的粪便样本约0.2g；小鼠麻醉处理后，分别收取小鼠血清，并刮取小鼠肠道内黏膜层。采用dna提取试剂盒提取粪便中的菌群dna，并采用16srrna二代测序法对肠道内菌群的组成进行测定。采用uhplc-tof/ms(超高效液相色谱-飞行时间质谱仪)对小鼠血清中丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸以及异戊酸的含量进行测定。采用rna提取试剂盒提取小鼠肠道内黏膜层的rna，并采用qrt-pcr(实时荧光定量pcr)法对目的基因进行检测。另设置1个空白对照组，用ctrl表示，空白对照组给小鼠灌胃水，给予量为750mg/kg，其他实验条件与实验组1-3相同。

检测了小鼠肠道内短链脂肪酸生成菌的相对丰度、短链脂肪酸含量(scfas)、g蛋白偶联受体(gprs)、下游信号分子过氧化物酶体增殖剂激活受体(ppar-γ)、肽酪氨酸酪氨酸(pyy)和组蛋白去乙酰化酶的含量水平。

图1为实施例4中小鼠肠道内短链脂肪酸生成菌的相对丰度的结果测试图。

具体的，图1为实施例4中将含灵芝多糖的组合物、含绞股蓝皂苷的组合物以及将含灵芝多糖的组合物和含绞股蓝皂苷的组合物灌胃小鼠后，对小鼠肠道内短链脂肪酸生成菌的相对丰度的影响。如图1所示，与对照组(ctrl)进行比较，采用glp、gps以及glp+gps对apc^min/+小鼠进行治疗后，可以有效提高肠道内短链脂肪酸生成菌的数量。

图2为实施例4中小鼠血清中短链脂肪酸的含量的结果测试图。

具体的，图2为实施例4中将含灵芝多糖的组合物、含绞股蓝皂苷的组合物以及将含灵芝多糖的组合物和含绞股蓝皂苷的组合物灌胃小鼠后，对小鼠血清中短链脂肪酸的含量的影响。如图2所示，与对照组进行比较，glp+gps可以有效地提高apc^min/+小鼠血清中丁酸、异丁酸、戊酸以及异戊酸的含量。数据统计学差异以*表示，*表示p<0.05、**表示p<0.01、***表示p<0.001。

图3为实施例4中小鼠肠道内g蛋白偶联受体的含量的结果测试图。

具体的，图3为实施例4中将含灵芝多糖的组合物、含绞股蓝皂苷的组合物以及将含灵芝多糖的组合物和含绞股蓝皂苷的组合物灌胃小鼠后，对小鼠肠道内g蛋白偶联受体的含量的影响。如图3所示，在采用qrt-pcr法对g蛋白偶联受体gpr41、gpr43、gpr84、gpr109a、gpr119和gpr120进行测定后，与对照组进行比较，采用glp、gps以及glp+gps治疗后，可以不同程度提高上述g蛋白偶联受体的含量水平。数据统计学差异以*表示，*表示p<0.05、**表示p<0.01、***表示p<0.001。

图4为实施例4中小鼠肠道内过氧化物酶体增殖剂激活受体与肽酪氨酸酪氨酸含量的结果测试图。

具体的，图4为实施例4中将含灵芝多糖的组合物、含绞股蓝皂苷的组合物以及将含灵芝多糖的组合物和含绞股蓝皂苷的组合物灌胃小鼠后，对小鼠肠道内过氧化物酶体增殖剂激活受体与肽酪氨酸酪氨酸含量的影响。如图4所示，与对照组进行比较，采用glp、gps以及glp+gps治疗后，可以显着提高短链脂肪酸生成菌-短链脂肪酸-g蛋白偶联受体通路下游信号分子过氧化物酶体增殖剂激活受体(ppar-γ)含量；同时，glp+gps可以显着提高肽酪氨酸酪氨酸(pyy)的含量。数据统计学差异以*表示，*表示p<0.05、**表示p<0.01、***表示p<0.001。

图5为实施例4中小鼠肠道内组蛋白去乙酰化酶的含量的结果测试图。

具体的，图5为实施例4中将含灵芝多糖的组合物、含绞股蓝皂苷的组合物以及将含灵芝多糖的组合物和含绞股蓝皂苷的组合物灌胃小鼠后，对小鼠肠道内组蛋白去乙酰化酶的含量的影响。如图5所示，与对照组进行比较，采用glp、gps以及glp+gps治疗后，可以不同程度降低组蛋白去乙酰化酶的表达量。数据统计学差异以*表示，*表示p<0.05、**表示p<0.01、***表示p<0.001。