本发明属于生物医药领域，具体涉及一种祛痘组合物及其制备方法。
背景技术：
：痤疮(青春痘)是毛囊皮脂腺单位的一种慢性炎症性皮肤病，痤疮的发病因素是多方面的,皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞和细菌感染等因素都会造成痤疮的发生。其中，细菌感染为痤疮发生的最重要的因素。在皮肤表面和皮脂腺毛囊中,存在着一些包括痤疮丙酸杆菌在内的微生物。痤疮丙酸杆菌产生的脂酶分解皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。茶树精油是一种具有祛痘功效的物质，也称互叶白千层油,从桃金娘科互叶白千层属的新鲜枝叶中提取得到,属白千层萜类香料油,具有良好的杀菌抑菌及保健作用。茶树油以一种细菌细胞膜破坏剂的形式发挥作用，通过破坏膜结构达到抑制痤疮丙酸杆菌等细菌增殖的效果。但随着细菌抗性的增强，单用茶树油进行痤疮治疗已经越来越不能满足实际需求，亟需研发出一种能够更为有效地抑制痤疮丙酸杆菌等细菌增殖的药物以满足需求。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种祛痘组合物，该祛痘组合物有效地抑制痤疮丙酸杆菌等细菌增殖，从而实现对痤疮的治疗和预防。为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：一种祛痘组合物，包括以下重量份的原料：茶树精油100-140份、厚朴精油140-180份、厚朴酚100-140份、和厚朴酚80-120份、欧薄荷油60-100份、香薷精油80-120份、永久花精油40-80份和丁香罗勒油30-70份。采用上述技术方案，采用以上重量份的原料制备的祛痘组合物，茶树精油、厚朴精油、厚朴酚、和厚朴酚、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油产生协同作用，对痤疮丙酸杆菌具有抑制作用，能够显著有效地预防和抑制痤疮产生。有益效果：(1)体外抑菌试验表明茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚三者具有协同增效的作用，相对于茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚三者单用，联合使用对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌有更强的抑制作用。相比于现有技术中单用茶树精油进行痤疮的处理的方案，茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚三者联合使用的方案，可增强痤疮预防和治疗类产品对痤疮丙酸杆菌等细菌的抑制作用，有效减少细菌对茶树精油的抗药性增强的风险，有效地预防、缓解和治疗痤疮。(2)厚朴精油、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油等精油可以提高茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚的稳定性,精油成分起到了控释作用，有利于延长茶树油的药效，并同时起到滋润皮肤的功效。其中，厚朴为magnoliaofficinalis，欧薄荷为menthapiperita，香薷为elsholtziaciliata，永久花为helicrysumitalicum，丁香罗勒为ocimumbasilicum。(3)严重的痤疮可能会造成皮肤损伤、皮肤红肿，上述精油成分(厚朴精油、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油)具有驱热散火的功效，可以缓解皮肤损伤、红肿带来的疼痛和灼热感。进一步，一种祛痘组合物，包括以下重量份的原料：茶树精油120份、厚朴精油160份、厚朴酚120份、和厚朴酚100份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份。采用上述技术方案，上述配比的祛痘组合物具有较好的杀菌效果，是一种优化的配比方式。进一步，所述厚朴精油由如下方法提取获得：先通过超临界二氧化碳萃取法提取获得总提物；然后对总提物进行分子蒸馏，收集油相，得厚朴精油。采用上述技术方案，经超临界二氧化碳萃取法提取的厚朴精油不会有溶剂残留，提取过程较为环保。进一步，所述厚朴酚以及所述和厚朴酚由如下方法提取获得：通过超临界二氧化碳萃取法提取获得总提物；将总提物分散于醇溶剂系统，结晶得厚朴总酚结晶物；利用厚朴酚以及和厚朴酚在极性有机溶剂中的溶解度差异，对厚朴酚以及和厚朴酚进行结晶分离，得厚朴酚以及和厚朴酚。采用上述技术方案，通过超临界二氧化碳萃取法进行有效成分的提取，并利用厚朴酚以及和厚朴酚在有机溶剂中的溶解度差异，将二者分离结晶。进一步，所述厚朴精油由如下方法提取获得：(a1)对厚朴进行预处理，得厚朴粉；(a2)在厚朴粉中加入水，使用蒸馏法对厚朴粉进行提取，得蒸馏液和药渣；对蒸馏液进行除水处理，取油相，得厚朴精油。采用上述技术方案，通过蒸馏法提取厚朴中的挥发油，得到的药渣可以用于下一步的厚朴酚以及和厚朴酚的提取。其中，厚朴是指中药饮片厚朴，即木兰科植物厚朴(magnoliaofficinalis)的干燥干皮、根皮或枝皮。进一步，所述厚朴酚以及所述和厚朴酚由如下方法提取获得：(b1)在步骤(a2)中获得的药渣中加入80％碱性乙醇，对药渣进行热回流提取，过滤后取液相，得提取液；浓缩所述提取液，得第一浸膏；(b2)将第一浸膏分散到水中，得第一浸膏溶液；在第一浸膏溶液中加入海藻酸钠，混合均匀后得海藻酸钠-浸膏溶液；加热海藻酸钠-浸膏溶液至80-100℃后，加入氯化钙溶液，待沉淀完全析出后，过滤取液相部分，浓缩液相部分得第二浸膏；(b3)将第二浸膏分散到正己烷中，混合均匀后过滤取液相部分，浓缩液相部分得第三浸膏；烘干第三浸膏后得混合固体；(b4)在混合固体中加入石油醚，使含有混合固体的石油醚处于45-65℃的环境中，搅拌直至混合固体不再溶解，过滤得厚朴酚固相以及和厚朴酚液相；对厚朴酚固相进行减压真空干燥，得厚朴酚；(b5)使和厚朴酚液相静置于20-35℃环境中直至沉淀完全析出，过滤取固相，得和厚朴酚固相；对和厚朴酚固相进行减压真空干燥，得和厚朴酚。采用上述技术方案，可以提取获得纯度高且不含有毒杂质的厚朴酚以及和厚朴酚。厚朴酚以及和厚朴酚为厚朴的主要成分，另外，厚朴中还含有挥发油和生物碱成分。包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分均具有一定毒性，所以在提取纯化厚朴酚以及和厚朴酚时需要将毒性成分去除。在传统中药炮制过程中，往往使用姜制的方法来降低厚朴药材中的生物碱类毒性成分。姜制是指将药材或生片加入定量姜汁(或姜汤)混合,经闷润,使姜汁渗入药材组织内部,再经炒制、煮制等处理的一种炮制方法。但是传统方法不能将厚朴中的生物碱完全除去。在本方案中，海藻酸钠在钙离子的作用下形成沉淀，同时可吸附第一浸膏溶液中的包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分，起到了清除提取物中的毒性成分的作用，增加了本方案的祛痘组合物的安全性。现有技术中，人们通常利用海藻酸钠在钙离子的作用下形成沉淀这一性质制备凝胶材料。发明人发现少量海藻酸钠在钙离子的作用下形成的沉淀对生物碱具有较强的吸附作用，可以在厚朴酚以及和厚朴酚提取纯化过程中，使用上述海藻酸钠形成的沉淀充分吸附生物碱类物质，以提高厚朴酚以及和厚朴酚的纯度。经气相色谱-质谱联用仪分析，使用本法提取的厚朴酚以及和厚朴酚纯度较高，且不含包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分，安全性好。进一步，在步骤(b2)中，第一浸膏和水的用量比为1g:10ml；海藻酸钠在海藻酸钠-浸膏溶液中的终浓度为0.5质量％；将海藻酸钠-浸膏溶液加热至95℃，再缓慢加入1重量％的氯化钙溶液，加入氯化钙的同时搅拌海藻酸钠-浸膏溶液，1重量％的氯化钙溶液的用量为海藻酸钠-浸膏溶液体积的1/20，待沉淀完全析出后，过滤取液相部分，浓缩液相部分得第二浸膏；在步骤(b3)中，第二浸膏和正己烷的体积比为1:5；在步骤(b4)中，混合固体和石油醚的用量比为1g:10ml。采用上述技术方案，步骤(b2)中的参数条件，可以保证充分地将生物碱类毒性物质从海藻酸钠-浸膏溶液中分离出来。第二浸膏和正己烷的体积比为1:5，可以保证从第二浸膏中充分萃取出厚朴酚以及和厚朴酚。在步骤(b4)中，利用厚朴酚以及和厚朴酚在石油醚中的溶解度差异，将两种成分分离。进一步，一种祛痘组合物的制备方法，包括以下步骤：将茶树精油、厚朴精油、厚朴酚、和厚朴酚、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油按比例混合，得混合物；然后将混合物分散到天然植物油中，得祛痘组合物。采用上述技术方案，可获得脂溶性祛痘组合物，优点在于：具有滋润皮肤的功效，特别是冬、春两季使用该脂溶性祛痘组合物，可以防止皮肤干裂；在夏、秋两季使用该脂溶祛痘组合物，可以防止皮肤水分流失，并且对紫外照射具有防护作用。进一步，一种祛痘组合物的制备方法，包括以下步骤：将茶树精油、厚朴精油、厚朴酚、和厚朴酚、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油按比例混合，得混合物；然后将混合物、增溶剂加入到水中，混合均匀后得祛痘组合物。采用上述技术方案，可获得水溶性祛痘组合物，具有以下优点：其生物利用度较之脂溶性祛痘组合物更高；水溶性祛痘组合物具有较好的保湿润肤、不油腻、光滑细腻、吸收快捷等诸多优点。进一步，一种祛痘组合物的制备方法，包括以下步骤：将茶树精油、厚朴精油、厚朴酚、和厚朴酚、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油按比例混合，得混合物；然后将混合物和表面活性剂加入到水中，乳化后得祛痘组合物。采用上述技术方案，可获得乳剂型祛痘组合物，乳剂祛痘组合物为油包水或水包油的乳化体，在使用过程中，该剂型对功效成分具有缓释作用，并且乳剂的膏体性质稳定，保存和携带都较为方便。具体实施方式下面通过具体实施方式进一步详细说明：实施例11.厚朴精油、厚朴酚以及和厚朴酚的制备取厚朴(木兰科植物厚朴(magnoliaofficinalis)的干燥干皮、根皮或枝皮)，粉碎后得厚朴粉，将厚朴粉放入圆底蒸馏瓶中，并在圆底蒸馏瓶中加入去离子水，对厚朴粉进行常压蒸馏。每1g厚朴粉中加入15ml去离子水，常压蒸馏持续2h，结束后从接收器中回收蒸馏液，从圆底蒸馏瓶中回收药渣。使用无水硫酸钠对蒸馏液脱水后，取油相，得厚朴精油。将药渣置于圆底烧瓶中，使用80％碱性乙醇对药渣进行提取(热回流提取)，80％碱性乙醇的加入量为每1g厚朴粉中加入15ml80％碱性乙醇，共提取3次，每次提取时间为1h，提取完成后合并3次提取的提取液。80％碱性乙醇是指在80％乙醇溶液中加入氢氧化钠，调节80％乙醇溶液的ph值至8，得80％碱性乙醇。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩提取液1h，得第一浸膏。将第一浸膏分散到去离子水中，每1ml的第一浸膏用10ml的水溶解，得第一浸膏溶液。在第一浸膏溶液中加入海藻酸钠固体，使海藻酸钠的终浓度为0.5质量％，得海藻酸钠-浸膏溶液，混合均匀后，将海藻酸钠-浸膏溶液加热至95℃，再缓慢加入1重量％的氯化钙溶液，加入氯化钙的同时搅拌海藻酸钠-浸膏溶液，每10ml海藻酸钠-浸膏溶液中加入0.5ml的1重量％的氯化钙溶液。待沉淀完全析出后过滤取液相。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩获得的液相部分2h，得第二浸膏。将第二浸膏分散到正己烷中，每1ml的第二浸膏用5ml正己烷分散，混合均匀后过滤取液相，得滤液。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩滤液2h，得第三浸膏，将第三浸膏烘干后得混合固体，该混合固体中含有厚朴酚以及和厚朴酚。将混合固体置于圆底烧瓶中，并50℃恒温水浴圆底烧瓶，在圆底烧瓶中加入石油醚，每1g混合固体中加入10ml石油醚，搅拌直至混合固体不再溶解，过滤得厚朴酚固相以及和厚朴酚液相。在80℃的条件下对厚朴酚固相进行减压真空干燥，得厚朴酚。将和厚朴酚液相置于圆底烧瓶中，并30℃恒温水浴圆底烧瓶，圆底烧瓶中有大量的固体析出，得和厚朴酚固相。在80℃的条件下对和厚朴酚固相进行减压真空干燥，得和厚朴酚。使用气相色谱-质谱联用仪对本实施例中制备的和厚朴酚以及厚朴酚进行含量分析，和厚朴酚的纯度为91.98％，厚朴酚的纯度为89.20％，在厚朴酚以及和厚朴酚中均不含有包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分。木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分为厚朴药材中的毒性成分，在传统中药炮制过程中，往往使用姜制的方法来降低厚朴药材中的生物碱类毒性成分。姜制是指将药材或生片加入定量姜汁(或姜汤)混合,经闷润,使姜汁渗入药材组织内部,再经炒制、煮制等处理的一种炮制方法。在本方案中，海藻酸钠在钙离子的作用下形成沉淀，同时可吸附第一浸膏溶液中的包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分，达到了清除提取物中的毒性成分的作用，增加了本方案的祛痘组合物的安全性。2.其它原材料：茶树精油、欧薄荷油、香薷精油、永久花精油和丁香罗勒油均购自河南瑞仁生物，有效物质含量大于90％。3.祛痘组合物的制备将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油120份、厚朴精油160份、厚朴酚120份、和厚朴酚100份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份，得混合物，在混合物中加入霍霍巴油，得祛痘组合物，其中，每10g混合物中加入80ml霍霍巴油。实施例2本实施例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油100份、厚朴精油180份、厚朴酚140份、和厚朴酚80份、欧薄荷油60份、香薷精油120份、永久花精油40份和丁香罗勒油70份，得混合物，然后将混合物加入到增溶剂sp－115a中，搅拌均匀，再加入去离子水，混合均匀后得祛痘组合物。其中，每10g混合物中加入50ml去离子水和30mlsp－115a。实施例3本实施例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油140份、厚朴精油140份、厚朴酚100份、和厚朴酚80份、欧薄荷油100份、香薷精油120份、永久花精油80份和丁香罗勒油30份，得混合物。然后将混合物加入到去离子水中，并在水中加入司盘60，在80℃的温度下，强力搅拌乳化后得祛痘组合物。其中，每10g混合物a中加入50ml去离子水和30ml司盘60。实施例4本实施例基本同实施例1，不同点在于厚朴精油、厚朴酚以及和厚朴酚的制备过程。厚朴精油的制备：取厚朴(木兰科植物厚朴(magnoliaofficinalisrehd.etwils.)的干燥干皮、根皮或枝皮)，粉碎后得厚朴粉。采用超临界二氧化碳萃取法进行功效成分的提取，将粉碎后的果实置于萃取釜中，采用超临界二氧化碳萃取法进行提取的条件为：萃取压力40mpa，萃取温度35℃，萃取时间1h，流量为16kg/h。上述提取过程完成之后，将二氧化碳流体通入分离器进行目的成分的分离，二氧化碳流体的流量为7kg/h，分离器压力为3mpa，温度为30℃，分离过程持续1.5h，分离过程结束之后，静置待水油分离，取油相得厚朴精油。厚朴酚以及和厚朴酚的制备：取厚朴(木兰科植物厚朴(magnoliaofficinalis)的干燥干皮、根皮或枝皮)，粉碎后得厚朴粉。在厚朴粉中加入0.5重量％氢氧化钠溶液，没1g厚朴粉中加入20ml氢氧化钠溶液，对厚朴粉进行热回流提取，过滤取液相，得碱提液。向碱提液中加入盐酸，调节溶液ph至3，继续搅拌4小时，静置20小时后，过滤取沉淀。将沉淀置于圆底烧瓶中，并50℃恒温水浴圆底烧瓶，在圆底烧瓶中加入石油醚，每1g沉淀中加入10ml石油醚，搅拌直至沉淀不再溶解，过滤得厚朴酚固相以及和厚朴酚液相。在80℃的条件下对厚朴酚固相进行减压真空干燥，得厚朴酚。将和厚朴酚液相置于圆底烧瓶中，并30℃恒温水浴圆底烧瓶，圆底烧瓶中有大量的固体析出，得和厚朴酚固相。在80℃的条件下对和厚朴酚固相进行减压真空干燥，得和厚朴酚。使用气相色谱-质谱联用仪对本实施例中制备的和厚朴酚以及厚朴酚进行含量分析，和厚朴酚的纯度为71.94％，厚朴酚的纯度为65.36％，在厚朴酚以及和厚朴酚中均含有包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分。对比例1本对比例基本同实施例1，不同点在于，厚朴精油、厚朴酚以及和厚朴酚的制备方法不同，在本方案中没有使用海藻酸钠沉淀来清除生物碱类物质，具体的制备方法如下：取中药厚朴(木兰科植物厚朴(magnoliaofficinalisrehd.etwils.)的干燥干皮、根皮或枝皮)，粉碎后得厚朴粉，将厚朴粉放入圆底蒸馏瓶中，并在圆底蒸馏瓶中加入去离子水，对厚朴粉进行常压蒸馏。每1g厚朴粉中加入15ml去离子水，常压蒸馏持续2h，结束后从接收器中回收蒸馏液，从圆底蒸馏瓶中回收药渣。使用无水硫酸钠对蒸馏液脱水后，取油相，得厚朴精油。将药渣置于圆底烧瓶中，使用80％碱性乙醇对药渣进行提取，80％碱性乙醇的加入量为每1g厚朴粉中加入15ml80％碱性乙醇，共提取3次，每次提取时间为1h，提取完成后合并3次提取的提取液。80％碱性乙醇是指在80％乙醇溶液中加入氢氧化钠，调节80％乙醇溶液的ph值至8，得80％碱性乙醇。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩提取液1h，得第一浸膏。将第一浸膏分散到去离子水中，每1ml的第一浸膏用10ml的水溶解，得第一浸膏溶液。在第一浸膏溶液中加入乙酸乙酯，第一浸膏溶液和乙酸乙酯的体积比为1:2，摇匀后静置，取乙酸乙酯层。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩乙酸乙酯层2h，得第二浸膏。将第二浸膏分散到正己烷中，每1ml的第二浸膏用5ml正己烷分散，混合均匀后过滤取液相，得滤液。用旋转蒸发仪在25℃、真空度为-0.1mpa的条件下浓缩滤液2h，得第三浸膏，将第三浸膏烘干后得混合固体，该混合固体中含有厚朴酚以及和厚朴酚。将混合固体置于圆底烧瓶中，并50℃恒温水浴圆底烧瓶，在圆底烧瓶中加入石油醚，每1g混合固体中加入10ml石油醚，搅拌直至混合固体不再溶解，过滤得厚朴酚固相以及和厚朴酚液相。在80℃的条件下对厚朴酚固相进行减压真空干燥，得厚朴酚。将和厚朴酚液相置于圆底烧瓶中，并30℃恒温水浴圆底烧瓶，圆底烧瓶中有大量的固体析出，得和厚朴酚固相。在80℃的条件下对和厚朴酚固相进行减压真空干燥，得和厚朴酚。使用气相色谱-质谱联用仪对本实施例中制备的和厚朴酚以及厚朴酚进行含量分析，和厚朴酚的纯度为82.11％，厚朴酚的纯度为79.32％，在厚朴酚以及和厚朴酚中，均含有包括木兰剑毒碱和柳叶木兰碱在内的生物碱成分，其中，在厚朴酚中含有5.32％的总生物碱，在和厚朴酚中含有6.11％的总生物碱。对比例2本对比例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油340份、厚朴精油160份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份，得混合物，在混合物中加入霍霍巴油，得祛痘组合物，其中，每10g混合物中加入80ml霍霍巴油。对比例3本对比例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油170份、厚朴精油160份、厚朴酚170份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份，得混合物，在混合物中加入霍霍巴油，得祛痘组合物，其中，每10g混合物中加入80ml霍霍巴油。对比例4本对比例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：茶树精油170份、厚朴精油160份、和厚朴酚170份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份，得混合物，在混合物中加入霍霍巴油，得祛痘组合物，其中，每10g混合物中加入80ml霍霍巴油。对比例5本对比例基本同实施例1，不同点在于祛痘组合物的制备过程：将原材料按照如下重量份数混合：厚朴精油160份、厚朴酚170份、和厚朴酚170份、欧薄荷油80份、香薷精油100份、永久花精油60份和丁香罗勒油50份，得混合物，在混合物中加入霍霍巴油，得祛痘组合物，其中，每10g混合物中加入80ml霍霍巴油。实验例1：抑菌试验抑菌试验参照中华人民共和国国家标准gb15797-2002“一次性使用卫生用品卫生标准”中附录c4“溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能试验方法”进行。1.供试菌种包括：痤疮丙酸杆菌(propionibacteriumacnes，atcc6919)和金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus，atcc6538)。痤疮丙酸杆菌使用葡萄糖营养液培养活化，金黄色葡萄球菌使用液体营养琼脂培养基培养活化；在抑菌性能试验中，两种菌种均采用固体脑心浸液肉汤培养基(bhi培养基)；培养基均购自海博生物。痤疮丙酸杆菌属于革兰氏阳性厌氧杆菌，在痤疮的发生过程中发挥了重要的作用，是造成痤疮的主要细菌。金黄色葡萄球菌也是痤疮发病中经常研究的菌群。2.实验分组组1：待测样品为实施例1制备的祛痘组合物组2：待测样品为实施例2制备的祛痘组合物组3：待测样品为实施例3制备的祛痘组合物组4：待测样品为实施例4制备的祛痘组合物组5：待测样品为对比例1制备的祛痘组合物组6：待测样品为对比例2制备的祛痘组合物组7：待测样品为对比例3制备的祛痘组合物组8：待测样品为对比例4制备的祛痘组合物组9：待测样品为对比例5制备的祛痘组合物组10：空白对照，待测样品为经灭菌处理的去离子水组11：阳性对照，待测样品为红霉素(5mg/ml)3.试验方法将痤疮丙酸杆菌接种于葡萄糖营养液中，37℃厌氧培养24h；将金黄色葡萄球菌接种于液体营养琼脂培养基中，37℃有氧培养24h。此时，痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌均处于对数生长期。取痤疮丙酸杆菌培养物(菌液)和金黄色葡萄球菌培养物(菌液)8000rpm离心2min取菌沉淀，然后使用磷酸盐缓冲液(pbs缓冲液)将两种菌沉淀稀释成105cfu/ml痤疮丙酸杆菌悬液和金黄色葡萄球菌悬液。取1g待测样品(组1-组9)分别置于5ml痤疮丙酸杆菌悬液或5ml金黄色葡萄球菌悬液中，混合均匀后，将含有待测样品的菌液1ml涂布在固体脑心浸液肉汤培养基上，实验设10个重复，同时设空白对照和阳性对照。阳性对照为红霉素，将红霉素分别加入5ml痤疮丙酸杆菌悬液或5ml金黄色葡萄球菌悬液中，混匀后待用，红霉素在菌液中的终浓度为100μg/ml。空白对照为去离子水，将10μl去离子水加入5ml痤疮丙酸杆菌悬液或5ml金黄色葡萄球菌悬液中，混匀后待用。痤疮丙酸杆菌37℃厌氧培养48h,金黄色葡萄球菌37℃有氧培养48h，培养结束后计算抑菌率，计算方法如下：抑菌率(％)＝(空白对照菌落数-实验组菌落数)/空白对照菌落数×100％。实验结果如表1所示。表1：抑菌试验结果(n＝10)供试菌组1组2组3组4组5组6组7组8组9组10组11痤疮杆菌93.4％95.6％90.5％91.8％89.3％75.2％82.3％85.9％56.7％098.5％金葡93.7％96.8％92.7％90.9％93.2％78.9％86.7％83.1％58.2％099.2％组2(待测样品为实施例2制备的祛痘组合物)与组1(待测样品为实施例1制备的祛痘组合物)和组3(待测样品为实施例3制备的祛痘组合物)相比，组2的待测样品的抑菌率较组1和组3高。实施例2制备的祛痘组合物为水溶性的祛痘组合物，而实施例1制备的祛痘组合物为油溶性产品，实施例3制备的祛痘组合物为乳剂产品，说明水溶性产品的祛痘(通过抑菌实现)效果更好。组1-组5(组1-组5使用的待测样品分别为：实施例1制备的祛痘组合物、实施例2制备的祛痘组合物、实施例3制备的祛痘组合物、实施例4制备的祛痘组合物和对比例1制备的祛痘组合物)待测样品的细菌抑制效果，较组6-组9的待测样品的细菌抑制效果好(组6-组9使用的待测样品分别为：对比例2制备的祛痘组合物、对比例3制备的祛痘组合物、对比例4制备的祛痘组合物和对比例5制备的祛痘组合物)。组1-组5的共同点在于均为茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚联合使用，说明茶树精油、厚朴酚以及和厚朴酚三者具有协同加强的作用。以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。当前第1页12