本发明涉及公开了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，属中医药制备技术领域。
背景技术：
在已申请专利201710263334.1、201710430087.x、201711031799.0、201711061245.5、201711095136.5、201811120514.5、201910233779.4和201910377552.7的技术背景下，采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的可检测化学成分205个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分类型比较一致，其药理或药效也比较一致，其中橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％洗脱有效部位主要含有生物碱类和黄酮苷类化合物，橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％洗脱有效部位主要含有二萜类和黄酮类化合物，新鲜橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实低温真空冷冻干燥花蕾或花或枝或叶或果实粉末和95％乙醇总提物还含有挥发油类成分(主要含水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯﹑芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇﹑乙酸芳樟酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯等，上述成分大多具有抗焦虑和抗抑郁的功能疗效，与药效功能主治症比较一致)。
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含主要成分为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)；苯丙素类化合物2个：阿魏酸甲酯(34)、绿原酸(35)；三萜类化合物1个：柠檬苦素(36)；倍半萜类化合物1个：corchoionolc(37)；其他类化合物2个：1-phenyl-1,2-ethanediol(38)、3-羟甲基呋喃鼠李糖苷(39)；香豆素类化合物4个：法枝毕苷(40)、滨蒿内酯(41)、东莨菪内酯(42)、吴茱萸内酯(43)；氨基酸类化合物15个：甘氨酸(44)、丙氨酸(45)、l-丝氨酸(46)、l-脯氨酸(47)、l-缬氨酸(48)、l-亮氨酸(49)、l-谷氨酸(50)、l-赖氨酸(51)、l-组氨酸(52)、l-苯丙氨酸(53)、l-精氨酸(54)、l-络氨酸(55)、l-异亮氨酸(56)、l-谷氨酰胺(57)、l-茶氨酸(58)；腺苷类化合物8个：尿嘧啶(59)、腺嘌呤(60)、次黄嘌呤(61)、鸟嘌呤(62)、鸟苷(63)、尿苷(64)、腺苷(65)、肌苷(66)；生物碱类8个：辛弗林(67)、n一甲基酪胺(68)、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸(69)，另有新化合物5个；芳香性挥发类(挥发油或精油)成分57个化合物：具体为α-侧柏烯(70)﹑α-蒎烯(71)﹑苯乙醇(72)﹑β-水芹烯(73)﹑桧烯(74)﹑β-蒎烯(75)﹑β-月桂烯(76)﹑苯乙醛(77)﹑a-水芹烯(78)﹑3-蒈烯(79)﹑2-蒈烯(80)﹑对伞花烃(81)﹑(+)-柠檬烯(82)﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)(83)﹑β-罗勒烯(84)﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)(85)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶(86)﹑异松油烯(萜品油烯)(87)﹑芳樟醇(88)﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯(89)﹑2-氨基-苯甲酸甲酯(90)﹑4-萜烯醇(4-松油醇)(91)﹑橙花醇(92)﹑甲位松油醇(93)﹑香茅醛(94)﹑吲哚(95)﹑香叶醇(牻牛儿醇)(96)﹑乙位松油醇(97)﹑5-苯基戊烯(98)﹑乙酸苯乙酯(99)﹑香叶基丙酮(100)﹑乙酸芳樟酯(101)﹑甲酸香叶酯(102)﹑乙酸橙花酯(103)﹑b-榄香烯(104)﹑1-石竹烯(105)﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)(106)﹑荜澄茄油烯(107)﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)(108)﹑橙花叔醇(109)﹑香茅醇(110)﹑8-十七烷烯(111)﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯(112)﹑金合欢醇(113)﹑2-十五烷-1-醇(114)﹑反式-金合欢醇乙酸酯(115)﹑二十三烷(1116)等。
柑橘属植物的花蕾或花其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)花或花蕾和佛手花或花蕾；柑橘属植物的枝或叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝及叶或芸香科柑橘属所有植物的枝或叶，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝或新鲜叶，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜叶；柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、金橘(金桔)、柑橘(柑桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
本发明公开了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的花蕾或花提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的花蕾或花总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的花蕾或花低温真空冷冻干燥花蕾或花及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的枝或叶制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的枝或叶提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的枝或叶总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的枝或叶冷冻干燥枝或叶及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的果实制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的果实提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的果实总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的果实冷冻干燥的果实及其粉末及其所含的成分，上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的有效部位或有效成分具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠的功能疗效或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或治疗心脑血管系统缺血性疾病的功能疗效或抗抑郁的功能疗效。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的有效部位或有效成分还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
技术实现要素：
本发明目的是提供了或公开了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用。
本发明采用了下述技术方案。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的花蕾或花提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的花蕾或花总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的花蕾或花低温真空冷冻干燥花蕾或花及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的枝或叶制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的枝或叶提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的枝或叶总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的枝或叶冷冻干燥枝或叶及其粉末及其所含的成分；柑橘属植物的果实制备的有效部位或有效成分本身是柑橘属植物的果实提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或柑橘属植物的果实总提取物及其总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或95％乙醇水洗脱部位及其制备的成分或30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物，或新鲜柑橘属植物的果实冷冻干燥的果实及其粉末及其所含的成分。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法如下：
(一)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药材，用0-100％乙醇浸泡0.5-2小时，4-15倍量溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，可选用微波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或超声波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或生物发酵+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或水蒸气蒸馏法+生物发酵+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，提取2-4次，每次1-6小时，过滤，合并滤液。上述滤液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏并用水稀释至0.6-1.5g生药材/ml上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得。
(二)优选新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(三)优选新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(四)优选新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(五)优选新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(六)优选新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(七)优选橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(八)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位提取方法可优选新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实微波辅助提取或超声波辅助提取+低温真空冷冻抽提+脂肪油热冷萃取技术。
(九)优选上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实获得的或所含有的挥发油或精油部位继续应用分馏法、冷冻析晶法、分子蒸馏技术、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ods-c18柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑a-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑b-榄香烯﹑1-石竹烯﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％。
(十)优选上述主要含有总黄酮类化合物部位的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位继续应用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ods-c18柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxy-flavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％。各洗脱部位或单体化合物在45-65℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥法干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得。
(十一)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮的制备，将上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效，或者本身为上述有效部位分离得到的theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxy-flavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效。
(十二)从上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提取物及其各洗脱部位或富集部位分离得到theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydro-xyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种单体化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效。
(十三)上述方法制备得到的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的有效部位或有效成分还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花制备的挥发油或精油本身是柑橘属植物的花蕾或花提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的花蕾或花提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的花蕾或花低温冷冻真空抽提-脂肪油热冷萃取技术提取的挥发油或精油部位及其制备的成分；柑橘属植物的枝或叶制备的挥发油或精油本身是柑橘属植物的枝或叶提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的枝或叶提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的枝或叶低温冷冻真空抽提-脂肪油冷热萃取技术提取的挥发油或精油部位及其制备的成分；柑橘属植物的果实制备的挥发油或精油本身是柑橘属植物的果实提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的果实提取的挥发油或精油部位及其制备的成分，或优选新鲜柑橘属植物的果实低温冷冻真空抽提-脂肪油冷热萃取技术提取的挥发油或精油部位及其制备的成分。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油部位及其制备的成分本身是α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑a-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑b-榄香烯﹑1-石竹烯﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷中的至少一种。优选柑橘属植物的花蕾或花挥发油或精油中总萜烯类约为40％(主要为水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯)，总萜烯醇类约为40％(主要为芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇)，总萜烯酯类约为10％(主要为乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯)，总倍半萜烯醇类约为6％(主要为金合欢烯﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑金合欢醇)，其它类约为4％。或优选柑橘属植物的枝或叶或果实挥发油或精油中总萜烯类约为70％(主要为水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯)，总萜烯醇类约为20％(主要为芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇)，总萜烯酯类约为2％(主要为乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯)，总倍半萜烯醇类约为3％(主要为金合欢烯﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑金合欢醇)，其它类约为5％。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位及其制备的成分本身是棕搁酸﹑8-羟基-十五烷二酸﹑水苏碱﹑辛弗林﹑3,4-二羟基哌啶酸﹑栓翅芹内酯﹑苯乙酸﹑n一甲基酪胺﹑邻羟基苯甲酸﹑2-(甲氨基)苯甲酸甲酯﹑β-d-吡喃半乳糖基-(1→6')-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑莽草酸﹑3-羟基-香草酸﹑丁香酸﹑香柑内酯﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑油酸﹑甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、络氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、茶氨酸中的至少一种。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分本身是十六酸甲酯﹑α-d-吡喃葡萄糖基-(1→1')-3'-氨基-3'-去氧-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑3-羟基哌啶酸﹑东莨菪内酯﹑绿原酸﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑法筚枝苷﹑癸酸﹑辛酸﹑反-α,α-5一三甲基一5一乙烯基四氢化一2-呋喃甲醇﹑2-异丙基-5-甲基茴香醚﹑芦丁﹑3-o-咖啡酰基-4-o-芥子酰基奎宁酸﹑圣草枸橼苷或析圣草枸橼苷﹑槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑柚皮芸香苷﹑去乙酰闹米林﹑橙皮苷﹑橙皮素-7-o-β-d-葡萄糖苷﹑闹米林酸﹑诺米林﹑黄柏酮﹑马尔敏﹑柠檬苦素﹑蜜桔黄素﹑缬草酸﹑油酸﹑亚油酸乙酯﹑尿嘧啶、腺嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤、鸟苷、尿苷、腺苷、肌苷、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸中的至少一种。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分本身是法筚枝苷﹑邻氨基苯甲酸甲酯﹑香柑内酯﹑滨蒿内酯﹑东莨菪内酯﹑野漆树苷﹑福橘素﹑theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimetho-xy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohe-speridoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：柑橘属植物的花蕾或花其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)花或花蕾和佛手花或花蕾；柑橘属植物的枝或叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝及叶或芸香科柑橘属所有植物的枝或叶，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝或新鲜叶，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜叶；柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
上述的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法及其在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，其特征在于：所述的药物或保健食品的制剂剂型为口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂、泡腾片、糖浆剂、丸剂、膏滋剂、软胶囊、软膏剂、乳剂、散剂、缓释剂、控释剂、靶向制剂、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂，所述药物或保健食品还包括各种单方制剂和复方制剂。
本发明的优点是：提供了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法，所得柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分可用于制备改善睡眠或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品。上述方法制备得到的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
提供了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的新的制备工艺及其具体新用途和新功效。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜佛手花的花蕾或花初期的花或花盛期的花或花衰期的花置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥6～24小时，得新鲜佛手花冷冻干燥的花蕾或花，其水分含量小于5％。佛手花的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜佛手花冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类佛手花药物或茶品或饮料或食品。上述佛手花成分可用于评鉴和质量控制佛手花药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得佛手花或花蕾的纯露，进一步纯化精制可得佛手花或花蕾的挥发油或精油，得率为新鲜佛手花或花蕾所含挥发油总量的20％-50％，其品质是佛手花或花蕾挥发油中芳香最佳组分。
实施例2
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜橙花的花蕾或花初期的花或花盛期的花或花衰期的花置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥6～24小时，得新鲜橙花冷冻干燥的花蕾或花，其水分含量小于5％。橙花的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。新鲜橙花冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类橙花药物或茶品或饮料或食品。其上述橙花成分可用于评鉴和质量控制橙花药物或茶品或饮料或食品。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花或花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾和金桔(金橘)花或花蕾；
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得橙花的花或花蕾纯露，进一步纯化精制可得橙花的花或花蕾的挥发油或精油，得率为新鲜橙花的花或花蕾所含挥发油总量的20％-50％，其品质是橙花的花或花蕾挥发油中芳香最佳组分。
实施例3
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜化橘红的花蕾或花初期的花或花盛期的花或花衰期的花置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥6～24小时，得新鲜化橘红冷冻干燥的花蕾或花，其水分含量小于5％。化橘红的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜化橘红冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类化橘红的花或花蕾药物或茶品或饮料或食品。上述化橘红花或花蕾成分可用于评鉴和质量控制化橘红花或花蕾药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得化橘红的花或花蕾纯露，进一步纯化精制可得化橘红的花或花蕾的挥发油或精油，得率为新鲜化橘红的花或花蕾所含挥发油总量的20％-50％，其品质是化橘红的花或花蕾挥发油中芳香最佳组分。
实施例4
采用低温冷冻真空干燥工艺将采摘的新鲜脐橙的花蕾或花初期的花或花盛期的花或花衰期的花置于冰柜温度于零下5℃-零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃-零下25℃，真空度为0.01-999pa的条件下，冷冻真空干燥6-24小时，其水分含量小于5％。脐橙的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜脐橙冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类脐橙花或花蕾药物或茶品或饮料或食品。上述脐橙花或花蕾成分可用于评鉴和质量控制脐橙花或花蕾药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得脐橙的花或花蕾纯露，进一步纯化精制可得脐橙的花或花蕾的挥发油或精油，得率为新鲜脐橙的花或花蕾所含挥发油总量的20％-50％，其品质是脐橙的花或花蕾挥发油中芳香最佳组分。
实施例5
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜佛手果实(佛手柑)洗净，切片1-30毫米，置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥12～48小时，得新鲜佛手冷冻干燥的佛手果实(佛手柑)片，其水分含量小于5％。佛手果实(佛手柑)主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜佛手果实冷冻干燥的佛手果实(佛手柑)所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类佛手(佛手柑)药物或茶品或饮料或食品。上述佛手果实(佛手柑)成分可用于评鉴和质量控制佛手(佛手柑)药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得佛手(佛手柑)的纯露，进一步纯化精制可得佛手(佛手柑)的挥发油或精油，得率为新鲜佛手果实(佛手柑)所含挥发油总量的20％-50％，其品质是佛手(佛手柑)挥发油中芳香最佳组分。
实施例6
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜枳实或枳壳洗净，切片1-30毫米，置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥12～48小时，得新鲜枳实或枳壳冷冻干燥的枳实或枳壳片，其水分含量小于5％。枳实或枳壳主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。新鲜枳实或枳壳冷冻干燥的枳实或枳壳片所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类枳实或枳壳药物或茶品或饮料或食品。其上述枳实或枳壳成分可用于评鉴和质量控制枳实或枳壳药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得枳实或枳壳纯露，进一步纯化精制可得枳实或枳壳的挥发油或精油，得率为新鲜枳实或枳壳所含挥发油总量的20％-50％，其品质是枳实或枳壳挥发油中芳香最佳组分。
实施例7
采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜化橘红的果实洗净，切片1-30毫米，置于冰柜温度于零下5℃～零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃～零下25℃，真空度为0.01～999pa的条件下，冷冻真空干燥12～48小时，得新鲜化橘红果实冷冻干燥的化橘红片，其水分含量小于5％。化橘红主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜化橘红冷冻干燥的果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类化橘红药物或茶品或饮料或食品。上述化橘红果实成分可用于评鉴和质量控制化橘红药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得化橘红的果实纯露，进一步纯化精制可得化橘红的挥发油或精油，得率为新鲜化橘红的果实所含挥发油总量的20％-50％，其品质是化橘红的挥发油中芳香最佳组分。
实施例8
采用低温冷冻真空干燥工艺将采摘的新鲜脐橙的果实洗净，切片1-30毫米，置于冰柜温度于零下5℃-零下20℃硬化结冰后，置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃-零下25℃，真空度为0.01-999pa的条件下，冷冻真空干燥12-48小时，其水分含量小于5％。脐橙的果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜脐橙冷冻干燥的果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、香豆素类活性成分、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备各类脐橙药物或茶品或饮料或食品。上述脐橙果实成分可用于评鉴和质量控制脐橙药物或茶品或饮料或食品。
采用上述低温真空冷冻抽提技术可得脐橙的果实纯露，进一步纯化精制可得脐橙的果实的挥发油或精油，得率为新鲜脐橙的果实所含挥发油总量的20％-50％，其品质是脐橙的果实挥发油中芳香最佳组分。
实施例9
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分的制备方法如下：柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药材，用0-100％乙醇浸泡0.5-2小时，4-15倍量溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，可选用微波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或超声波辅助提取+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或生物发酵+水蒸气蒸馏法+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)﹑或水蒸气蒸馏法+生物发酵+溶剂提取法(主要用0-100％乙醇水为溶剂)，提取2-4次，每次1-6小时，过滤，合并滤液。上述滤液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏并用水稀释至0.6-1.5g生药材/ml上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得。
(一)优选新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜佛手花及花蕾或新鲜佛手枝叶或佛手果实(佛手柑)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(二)优选新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜脐橙花及花蕾或新鲜脐橙枝叶或脐橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(三)优选新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜酸橙花及花蕾或新鲜酸橙枝叶或酸橙果实(主要为枳实或枳壳)药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(四)优选新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜代代花的花及花蕾或新鲜代代花的枝叶或代代花的果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(五)优选新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜甜橙花及花蕾或新鲜甜橙枝叶或甜橙果实药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
(六)优选橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔，用水浸泡0.5-2小时，6-15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取3-6小时，得橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述橘子皮(陈皮)或枳实或枳壳或青檬或血橙或红葡萄柚或绿葡萄柚或粉葡萄柚或绿桔药渣继续用水煎煮1-3次或相应溶剂(主要用0-100％乙醇水为溶剂)提取1-3次，合并上述水提液直接上大孔吸附树脂或45-80℃减压浓缩得浸膏(0.6-1.5g生药材/ml)后再上大孔吸附树脂ab-8型或d-101型或hpd-400或其它各种型号大孔吸附树脂富集，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
1.更具体优选新鲜橙花，用水浸泡1小时，之后用10倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得橙花挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜橙花药渣继续用10倍量的70％乙醇水回流提取2次，合并上述提液浓缩得浸膏，水混悬上ab-8型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花或花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
2.更具体优选新鲜佛手果实(佛手柑)，洗净切片或捣碎，用水浸泡2小时，之后用10倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得佛手果实(佛手柑)挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜佛手果实(佛手柑)药渣继续用15倍量的70％乙醇水回流提取2次，合并上述提液浓缩得浸膏，水混悬上d-101型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
3.更具体优选新鲜佛手花或花蕾，用水浸泡1小时，超声波辅助提取15分钟，之后用10倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得佛手花或花蕾挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜佛手花或花蕾药渣继续用10倍量的70％乙醇水回流提取2次，合并上述提液浓缩得浸膏，水混悬上hpd-400型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
4.更具体优选新鲜化橘红果实，洗净切片或捣碎，用水浸泡2小时，微波辅助提取15分钟，之后用10倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得化橘红果实挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜化橘红果实药渣继续用15倍量的70％乙醇水回流提取2次，合并上述提液浓缩得浸膏，水混悬上hpd300型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
5.更具体优选新鲜枳实或枳壳，洗净切片或捣碎，用水浸泡1小时，超声波辅助提取20分钟，之后用10倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得枳实或枳壳挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜枳实或枳壳药渣继续用15倍量的70％乙醇水回流提取2次，合并上述提液浓缩得浸膏，水混悬上ab-8型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
6.更具体优选新鲜橙叶，用水浸泡0.5小时，超声波辅助提取20分钟，15倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取4小时，得橙叶挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜橙叶药渣继续用10倍量水煎煮2次，合并上述水提液直接上d101型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
新鲜橙叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的叶或芸香科柑橘属所有植物的叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的叶、回青橙的叶、玳玳的叶、代代的叶、枳实的叶、枳壳的叶、苦橙的叶、甜橙的叶、脐橙的叶、橙的叶、柠檬的叶、柑橘的叶、化橘红的叶、柚的叶、金桔(金橘)的叶和佛手的叶。
7.更具体优选新鲜橙枝，用水浸泡2小时，微波辅助提取8分钟，4倍量水作为溶剂水蒸气蒸馏提取5小时，得橙枝挥发油或精油部位。将水蒸气蒸馏提取后的水提液过滤，将上述新鲜橙枝药渣继续用8倍量水煎煮2次，合并上述水提液直接上hpd-400型大孔吸附树脂富集后，依次用水洗脱、30％乙醇水洗脱、70％乙醇水洗脱、95％乙醇水洗脱，得水洗脱部位、30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位、95％乙醇水洗脱部位，各洗脱部位在45-80℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥进行干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得；
新鲜橙枝其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝或芸香科柑橘属所有植物的枝，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝、回青橙的枝、玳玳的枝、代代的枝、枳实的枝、枳壳的枝、苦橙的枝、甜橙的枝、脐橙的枝、橙的枝、柠檬的枝、柑橘的枝、化橘红的枝、柚的枝、金桔(金橘)的枝和佛手的枝。
(七)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位提取方法可优选新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实微波辅助提取或超声波辅助提取+低温真空冷冻抽提+脂肪油热冷萃取技术。
(八)优选上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实获得的或所含有的挥发油或精油部位继续应用分馏法、冷冻析晶法、分子蒸馏技术、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ods-c18柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑a-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑b-榄香烯﹑1-石竹烯﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％。
(九)优选上述主要含有总黄酮类化合物部位的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位继续应用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ods-c18柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％。各洗脱部位或单体化合物在45-65℃减压回收溶剂至乙醇适量浓度，用冷冻干燥法或喷雾干燥法干燥，收集冻干粉或喷雾干燥粉，即得。
(十)柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮的制备，将上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效，或者本身为上述有效部位分离得到的theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-penta-methoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种总含量大于90％的总黄酮类化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效。
(十一)从上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提取物及其各洗脱部位或富集部位分离得到theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydro-xyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮中的至少一种单体化合物并具有治疗血管性老年痴呆或缺血性心脏病或脑缺血疾病的显著疗效。
(十二)上述方法制备得到的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的有效部位或有效成分还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
实施例10
本发明从动物因素诱发性与睡眠障碍生理性脑记忆力减退出发，将睡眠障碍、美加明药物和aβ蛋白等多因素引起的睡眠障碍生理性脑记忆力减退或戒断症状致心神不宁、焦虑紧张不安等相结合，利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射(半数致老年痴呆或ad疾病剂量的aβ淀粉样蛋白致记忆力减退)aβ淀粉样蛋白和美加明药物(半数致戒断症状疾病剂量的美加明可致心神不宁、焦虑紧张不安)的混合孵育物制作睡眠障碍亚健康状态病症模型，主要表现记忆力减退、心神不宁、焦虑紧张不安或轻度抑郁与焦虑。因新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物是所用新鲜栀子花和新鲜橙花所制备的原料为最基础营养价值与活性组分，如新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物的水提取液冷冻干燥粉，或新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物的醇提取液浓缩干膏，或新鲜栀子花和新鲜橙花压榨汁冷冻干燥粉，或新鲜栀子花和新鲜橙花的醇提取液浓缩干膏，或新鲜栀子花和新鲜橙花的水提取液。故本实验应用睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠对实施例2和实施例9新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物的相关制备原料组分进行相关保健食品功效研究，通过行为学(morris水迷宫)测定、自主活动测试仪和生理生化相应指标的测定与检测，新鲜栀子花和新鲜橙花所制备的原料的新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物能使睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数，延长在第四象限逗留时间，能使血清中总抗氧化能力t-aoc的活力恢复，降低tche含量，增强清除自由基的能力，拮抗氧化反应，同时使睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠自主活动减少，从而起到清心除烦，延缓脑衰老，改善睡眠，抗抑郁等多种功能。橙花和栀子花所制备组合物或原料在制备改善睡眠或改善记忆力减退或疏肝理气解郁美容养颜药物或保健食品中的应用其主要还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
spf级健康sd雄性大鼠，体质量260-300g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：scxk(湘)2014-0005。饲养条件：温度20-22℃，喂以大鼠标准饲料，自由饮水；实验室自行制备新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物(栀子花：橙花为1:1)混合粉末、新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物(栀子花：橙花为1:1)的水提物冻干粉、新鲜栀子花和新鲜橙花的冷冻干燥花蕾粉末组合物(栀子花：橙花为1:1)的95％乙醇提取物浓缩干膏。aβ1-40(sigma公司，批号052m4801v)，美加明(sigma公司，批号123m4115v)。t-aoc、tche和gsh-px检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20151012)；睡眠障碍亚健康状态病症模型的建立：各实验组利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周(共21天)得睡眠障碍易发神经病变大鼠。之后，取未死亡状态良好的睡眠障碍易发神经病变大鼠再脑内注射美加明孵育凝聚态aβ1-40(2μ1)得诱发性睡眠障碍亚健康状态病症模型；空白组不予处理；模型组与给药组分别按上述造模方法予以处理；模型组于脑内注射手术前10天开始灌胃2％吐温-80水溶液共14天，每天1次。各给药组手术前10天开始连续灌胃给药共14天，每天1次。
与空白组比较，模型组大鼠潜伏期延长、过台次数减少，在第四象限逗留时间短，差异显著(p＜0.01)；与模型组比较，各实验给保健食品组能缩短潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留时间延长(p＜0.05或p＜0.01)，说明各实验给保健食品组对睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠效果明显，结果提示新鲜栀子花：新鲜橙花(1:1)冷冻干燥花蕾混合粉末-冻干混合粉末组对改善睡眠障碍记忆力减退效果明显，起到改善睡眠或辅助改善记忆功能。结果见表1。
表1各实验组对睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠空间记忆能力的影响
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
与空白组比较，模型组大鼠自主活动次数增加(睡眠障碍、心神不宁、焦虑紧张不安，大鼠毛色凌乱、行为焦躁并有一定攻击性)，体重增加缓慢，差异显著(p＜0.01)；与模型组比较，各实验给保健食品组能使模型动物的活动次数减少(疏肝和胃、理气解郁、改善睡眠功能、缓解疲劳功能，给药后的大鼠毛色光滑平整、性情温和、轻度抑郁与焦虑症状消失)，体重增加明显(p＜0.05或p＜0.01)，说明各实验给保健食品组对睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠效果明显，尤其是新鲜栀子花：新鲜橙花(1:1)冷冻干燥花蕾混合粉末-冻干混合粉末组效果最优，具有改善睡眠障碍、抗抑郁、抗焦虑、改善记忆力减退等药理疗效。结果见表2。
表2各实验组对睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠自主活动行为学试验结果
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
与空白组比较，模型组大鼠血清中t-aoc、gsh-px含量明显降低(p＜0.01)，tche活力增强(p＜0.01)；各实验保健食品组能提高t-aoc的含量，使gsh-px明显上升(p＜0.05或p＜0.01)，降低tche活力，与模型组相比具有显著差异(p＜0.05或p＜0.01)，说明各实验保健食品组效果明显，尤其是新鲜栀子花：新鲜橙花(1:1)冷冻干燥花蕾混合粉末-冻干混合粉末组效果最优。能使模型大鼠血清中t-aoc、gsh-px的活力恢复，降低tche含量，增强清除自由基的能力，同时防止神经递质的减少，起到改善睡眠或辅助改善记忆功效。结果见表3。
表3各实验组对睡眠障碍亚健康状态病症模型大鼠血清中t-aoc、tche、gsh-px含量的影响
注：与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定上述橙花的可检测化学成分168个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。新鲜橙花低温真空冷冻干燥花蕾或花粉末和95％乙醇总提物还含有挥发油类成分(主要含水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯﹑芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇﹑乙酸芳樟酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯等，上述成分大多具有抗焦虑和抗抑郁的功能疗效，与药效功能主治症比较一致)。
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含主要成分具体为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)；苯丙素类化合物2个：阿魏酸甲酯(34)、绿原酸(35)；三萜类化合物1个：柠檬苦素(36)；倍半萜类化合物1个：corchoionolc(37)；其他类化合物2个：1-phenyl-1,2-ethanediol(38)、3-羟甲基呋喃鼠李糖苷(39)；香豆素类化合物4个：法枝毕苷(40)、滨蒿内酯(41)、东莨菪内酯(42)、吴茱萸内酯(43)；氨基酸类化合物15个：甘氨酸(44)、丙氨酸(45)、l-丝氨酸(46)、l-脯氨酸(47)、l-缬氨酸(48)、l-亮氨酸(49)、l-谷氨酸(50)、l-赖氨酸(51)、l-组氨酸(52)、l-苯丙氨酸(53)、l-精氨酸(54)、l-络氨酸(55)、l-异亮氨酸(56)、l-谷氨酰胺(57)、l-茶氨酸(58)；腺苷类化合物8个：尿嘧啶(59)、腺嘌呤(60)、次黄嘌呤(61)、鸟嘌呤(62)、鸟苷(63)、尿苷(64)、腺苷(65)、肌苷(66)；生物碱类8个：辛弗林(67)、n一甲基酪胺(68)、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸(69)，另有新化合物5个；芳香性挥发类(挥发油或精油)成分57个化合物：具体为α-侧柏烯(70)﹑α-蒎烯(71)﹑苯乙醇(72)﹑β-水芹烯(73)﹑桧烯(74)﹑β-蒎烯(75)﹑β-月桂烯(76)﹑苯乙醛(77)﹑a-水芹烯(78)﹑3-蒈烯(79)﹑2-蒈烯(80)﹑对伞花烃(81)﹑(+)-柠檬烯(82)﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)(83)﹑β-罗勒烯(84)﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)(85)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶(86)﹑异松油烯(萜品油烯)(87)﹑芳樟醇(88)﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯(89)﹑2-氨基-苯甲酸甲酯(90)﹑4-萜烯醇(4-松油醇)(91)﹑橙花醇(92)﹑甲位松油醇(93)﹑香茅醛(94)﹑吲哚(95)﹑香叶醇(牻牛儿醇)(96)﹑乙位松油醇(97)﹑5-苯基戊烯(98)﹑乙酸苯乙酯(99)﹑香叶基丙酮(100)﹑乙酸芳樟酯(101)﹑甲酸香叶酯(102)﹑乙酸橙花酯(103)﹑b-榄香烯(104)﹑1-石竹烯(105)﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)(106)﹑荜澄茄油烯(107)﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)(108)﹑橙花叔醇(109)﹑香茅醇(110)﹑8-十七烷烯(111)﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯(112)﹑金合欢醇(113)﹑2-十五烷-1-醇(114)﹑反式-金合欢醇乙酸酯(115)﹑二十三烷(1116)等。
栀子花的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、单萜类活性成分(环烯醚萜类活性成分)、二萜类活性成分和三萜类活性成分。新鲜栀子花冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、单萜类活性成分(环烯醚萜类活性成分)、二萜类活性成分和三萜类活性成分用于制备上述各类栀子花药物或茶品或饮料或食品，上述成分可用于评鉴和质量控制栀子花上述药物或茶品或饮料或食品。
橙花的花蕾或花主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。新鲜橙花冷冻干燥的花蕾或花所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类橙花上述药物或茶品或饮料或食品。上述成分可用于评鉴和质量控制橙花上述药物或茶品或饮料或食品。
橙花和栀子花所制备组合物或原料在制备改善睡眠或改善记忆力减退或疏肝理气解郁美容养颜药物或保健食品中的应用其主要还具有疏肝和胃、理气解郁、和血散瘀、和血调经、美容养颜、助消化功能、增强免疫力功能、减肥功能、辅助改善记忆功能、改善睡眠功能、缓解疲劳功能的传统功效。
实施例11
本发明从动物因素诱发性与ad临床病因病机相结合的异质性及多因性出发，将脑衰老及血管危险因子(缺血性心脏病和短暂性脑缺血疾病等)导致的脑低灌注形成的脑缺血疾病和ad脑病理病变相结合，利用腹腔注射半乳糖促老化与反复结扎双侧颈总动脉致脑缺血及鼠脑室一次性注射β淀粉样蛋白制作血管性老年痴呆(heterogeneitys/multi-factors'alzheimerdisease，h/mad)模型。应用h/mad模型大鼠对实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物及其上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物和实施例9中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物进行药理活性筛选，通过行为学(morris水迷宫)测定和相应生理生化指标的测定与检测，筛选确定上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实治疗血管性老年痴呆(h/mad)的有效部位和橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物为有效成分，其上述有效部位和有效成分均能使h/mad模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数，延长在第四象限逗留时间，能使血清中总抗氧化能力t-aoc的活力恢复，降低tche含量，增强清除自由基的能力，拮抗氧化反应，同时防止神经递质的减少，从而起到防治血管性老年痴呆(ad)的药理作用。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分在制备治疗老年痴呆(阿尔茨海默病)药物中的应用，其所涉及的老年痴呆(阿尔茨海默病)也可是由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病、神经系统疾病、胶质细胞异常导致的淀粉样蛋白aβ沉积或aβ纤丝聚集形成的老年痴呆(阿尔茨海默病)中的任意一种。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花或花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
动物分组和动物模型的建立：将112只健康sd雄性大鼠随机分为空白组、假损伤组、模型组、盐酸多奈哌齐组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位高剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位中剂量组、橙皮苷高剂量组、橙皮苷中剂量组、新橙皮苷高剂量组、新橙皮苷中剂量组、柚皮芸香苷高剂量组、柚皮芸香苷中剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷中剂量组，共14组，每组8只大鼠。spf级健康sd雄性大鼠，体质量350-400g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。盐酸多奈哌齐(卫材药业有限公司)；d-半乳糖(sigma公司)；aβ1-40(sigma公司)；t-aoc、sod、mda、gsh-px和tche检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
缺血性老年痴呆(h/mad)动物模型：各组实验大鼠每天腹腔注射d-半乳糖(50mg·kg-1)，造成亚急性衰老，4w后先进行双侧颈总动脉反复结扎间段性的阻断血流，造成脑缺血性病灶(水合氯醛腹腔注射麻醉，颈正中部切口，分离双侧颈总动脉，套“4”号丝线扣。拉紧丝扣，阻断血流10min，松开丝扣使血液灌注10min后，再次阻断血流10min，第2次再灌注后观察5min，缝合皮肤。)手术完成后，将大鼠喂养3天，取未死亡的状态良好的大鼠再脑内注射凝聚态aβ1-42(水合氯醛麻醉，固定在脑立体定位仪上，头部备皮，在无菌下操作，沿颅中线做长2～3cm的切口，分离骨膜，暴露出“人”字缝和“十”字缝。在前囟后3.0mm，中线右侧旁开2.0mm，用7号针头钻开颅骨，暴露硬脑膜，微量注射器自脑表面垂直进针4.0mm，然后向脑组织内缓慢注射5μ1aβ1-40，注射5min，留针5min，注射后封堵颅骨。消炎后缝合皮肤。
空白组不予处理；模型组与给药组分别按上述造模方法予以处理；假损伤组腹腔注射生理盐水4w，4w后先进行双侧颈总动脉反复结扎(分离颈总动脉，只穿线但不结扎)再脑内注射等量的生理盐水。假损伤组与模型组于脑内注射手术后第3天开始灌胃2％吐温-80水溶液10天，每天1次。各给药组手术后第3天开始连续灌胃给药10天，每天1次。
与空白组和假损伤组比较，模型组大鼠潜伏期延长、过台次减少，在第四象限逗留时间短，差异显著(p＜0.01)；与模型组比较，给药盐酸多奈哌齐组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位组、橙皮苷组、新橙皮苷组、柚皮芸香苷组、柚皮苷组均能缩短潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留时间延长(p＜0.05或p＜0.01)，结果提示柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高剂量组效果均显著，起到防治血管性老年痴呆(h/mad)的药理作用。结果见表4。
表4柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对h/mad大鼠空间记忆能力的影响
注：与h/mad模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
与空白组和假损伤组比较，模型组大鼠血清中t-aoc含量明显降低(p＜0.01)，tche活力增强(p＜0.01)；给药各组能提高t-aoc的含量，降低tche活力，与模型组相比具有显著差异(p＜0.05或p＜0.01)，说明柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高剂量组效果均显著。各给药组均能使h/mad模型大鼠脑内t-aoc的活力恢复，降低tche含量，增强清除自由基的能力，拮抗氧化反应，同时防止神经递质的减少，起到防治血管性老年痴呆(h/mad)的药理作用。结果见表5。
表5柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对h/mad模型大鼠血清中t-aoc和tche含量的影响
注：与h/mad模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的可检测化学成分205个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分类型比较一致，其药理或药效也比较一致，其中橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％洗脱有效部位主要含有生物碱类和黄酮苷类化合物，橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％洗脱有效部位主要含有二萜类和黄酮类化合物，
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位所含黄酮主要成分为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述药物或茶品或饮料或食品。
实施例12
发明人采用冠脉结扎致大鼠心肌缺血实验模型，从心肌梗死范围、血清肌酸激酶(ck)及血清乳酸脱氢酶(ldh)的活力等方面研究证实实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物和实施例9中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物对心肌缺血具有显著的防治作用和较强的生物活性。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花或花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
动物分组及给药：大鼠104只，按体重随机分为假手术组、模型组、阳性组(银杏叶片组)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位高剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位中剂量组、橙皮苷高剂量组、橙皮苷中剂量组、新橙皮苷高剂量组、新橙皮苷中剂量组、柚皮芸香苷高剂量组、柚皮芸香苷中剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷中剂量组，共13组，每组8只大鼠。spf级健康sd雄性大鼠，体质量350-400g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。ck、ldh检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。假手术组、模型组灌予等量蒸馏水，每天1次，连续14天。
模型制备：于末次给药1h后，腹腔注射3％戊巴比妥钠45mg/kg麻醉动物，将动物仰卧位固定于鼠台上，剪开喉部皮肤，钝性分离皮下筋膜、肌肉，找到气管，行气管插管术，并接动物呼吸机辅助呼吸。于胸部去毛、消毒、沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，在第4、5肋间钝性分离肌层，打开胸腔，用自制圆形取心环掏出心脏。在肺动脉圆锥与左心耳下缘可以看见左冠脉前降支起始部，距左心耳下缘1～2mm处，用6/0缝合线结扎。进针深度控制在2mm左右，宽度约为2mm，结扎后将心脏放回胸腔，排除胸腔里的空气后迅速用止血钳关闭胸腔。假手术组只穿线不予结扎。
结果见表6。与假手术组相比较，模型组大鼠心肌梗塞范围显著升高。与模型组相比较，阳性药组(银杏叶片组)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均能显著降低心肌梗塞范围(p<0.01)，说明阳性药组(银杏叶片)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均能增加缺血区血液供应，降低心肌缺血性损害。其中，各给药高剂量组疗效显著。
表6柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对心肌缺血大鼠心肌梗塞范围的影响
注：与假手术组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
结果见表7。与假手术组相比较，模型组大鼠在结扎冠脉后血清中ck、ldh活力显著升高。与模型组相比较，阳性药组(银杏叶片)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均使血清中ck、ldh活性显著降低(p<0.01)，提示阳性药组(银杏叶片)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均对心肌的缺血损伤有保护作用。其中，各给药高剂量组疗效显著。
表7柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对心肌缺血大鼠血清酶ck、ldh活力的影响
注：与假手术组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
本实验研究发现，大鼠左冠脉前降支结扎后，心电图st段、t波均显著升高，心肌梗塞范围显著增加，血清中ck、ldh活力明显升高，提示心肌缺血造模成功。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均能显著降低模型大鼠st段和t波的异常抬高，减少心肌缺血大鼠的心肌梗塞范围，抑制血清中ck、ldh的活力，提示柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对冠脉结扎所致心肌缺血有一定的防治作用。
采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的可检测化学成分205个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分类型比较一致，其药理或药效也比较一致，其中橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％洗脱有效部位主要含有生物碱类和黄酮苷类化合物，橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％洗脱有效部位主要含有二萜类和黄酮类化合物，
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位所含黄酮主要成分为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述药物或茶品或饮料或食品。
实施例13
本发明以实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物和实施例9中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物对由心脑血管系统疾病形成的脑缺血再灌注损伤的大鼠模型进行药效学研究。证实上述实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类化合物和实施例9中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物对脑缺血再灌注损伤疾病均具有显著药理疗效，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类化合物及其中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物具有治疗由心脑血管系统疾病形成的脑缺血再灌注损伤及其心脑血管病后遗症疾病的临床疗效。具有开发一类、二类和五类新药的巨大潜力。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
脑缺血再灌注模型的建立：参考zealonga的方法，采用大脑中动脉阻塞法制备局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠称重，腹腔注射10％水合氯醛(0.35ml/100g)，麻醉后固定。常规消毒手术视野区皮肤，纵向切开颈中部皮肤2cm，钝性分离皮下组织与肌肉，暴露右侧颈总动脉cca，小心剪开包裹颈总动脉及迷走神经的鞘膜，并继续分离右颈内动脉ica及右颈外动脉eca。在cca近心端、远心端分别穿线，近心端系紧，结扎颈总动脉cca，远心端系一松结备用。分离eca、ica，并在eca穿线结扎，用动脉夹夹闭ica。距颈总动脉分叉处约4mm剪一“v”型小口，插入栓线，用备用的丝线打一正结，松开ica的动脉夹，然后调整线栓角度，使线栓弧度水平向外，轻轻将线栓送入颅内，轻缓推进直至感觉到阻力，插入深度在18.0～20.0mm，即完成了大脑中动脉阻塞所致大脑局灶性脑缺血的制备。分层缝合肌肉与皮肤(部分栓线留体外)。于2h后轻轻地向外拔出栓线1cm左右至略感阻力即可进行再灌注4h，剪断皮肤外露的栓线。手术后保温，常规饲养。假损伤组不插入线栓，其余同模型组。
动物分组与给药：实验分为假损伤组，模型组，阳性药组(银杏叶片组)，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位高剂量组，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位中剂量组、橙皮苷高剂量组、橙皮苷中剂量组、新橙皮苷高剂量组、新橙皮苷中剂量组、柚皮芸香苷高剂量组、柚皮芸香苷中剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷中剂量组，共13组，每组8只大鼠。spf级健康sd雄性大鼠，体质量350-400g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。连续灌胃给药8天，第8天灌胃1h后，制备缺血再灌注模型。假损伤组和模型组给予等体积的生理盐水。
假损伤组没有神经功能缺损；模型组神经功能缺损明显；阳性药组(银杏叶片)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组神经功能缺损评分均较模型组显著降低，差异显著(p＜0.01)。见表8。其中，各给药高剂量组疗效显著。
表8柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对大鼠神经功能缺损评分的影响
注：与假损伤组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
ttc染色结果显示(正常脑组织呈玫瑰红色，而梗塞组织呈苍白色，界限清晰)，假损伤组未见梗死灶，模型组出现明显梗死灶。阳性药组(银杏叶片)、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷的高中剂量组均较模型组梗死灶体积缩小，差异显著(p＜0.01)。其中上述各给药高剂量组大鼠脑梗死灶体积显著缩小，差异十分显著(p＜0.01)。见表9。
表9柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位及其中单体化合物对大鼠脑梗死体积的影响
注：与假损伤组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
上述研究证实柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位合并经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物(简称柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位)及其中的橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物对脑缺血再灌注损伤疾病具有显著药理疗效，上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类化合物及其中的橙皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、柚皮苷单体化合物具有治疗由心脑血管系统疾病形成的脑缺血再灌注损伤及其心脑血管病后遗症疾病的临床疗效。具有开发一类、二类和五类新药的巨大潜力。
采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的可检测化学成分205个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分类型比较一致，其药理或药效也比较一致，其中橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％洗脱有效部位主要含有生物碱类和黄酮苷类化合物，橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％洗脱有效部位主要含有二萜类和黄酮类化合物，
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总黄酮类部位所含黄酮主要成分为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述药物或茶品或饮料或食品。
实施例14
本发明利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside，sdpbams,)模型，简称sdad模型。应用睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠对实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的原料组分为新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末及其30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位和95％乙醇水总提取物进行药理活性筛选，通过行为学(morris水迷宫)测定和生理生化相应指标的测定与检测，实验证实新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末及其30％乙醇水洗脱部位、70％乙醇水洗脱部位和95％乙醇水总提取物均能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数，延长在第四象限逗留时间。同时，新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末及其30％乙醇水洗脱部位能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠自主活动增加，从而起到清心除烦，延缓脑衰老，改善睡眠，抗抑郁等多种功能。其对由睡眠障碍和aβ纤丝形成聚集等多因素引起的睡眠障碍生理性脑衰老的记忆力减退(sdad)具有辅助改善记忆功能，进一步证实柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的原料组分具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或改善轻微抑郁与焦虑症状或抗血管性老年痴呆的功能疗效。特别是新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥粉末保留了所有的营养价值成分或活性成分类型，药理疗效十分显著，具有较大的市场前景与应用价值。同时，新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各洗脱部位及其中单体化合物与新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各洗脱部位及其中单体化合物比较一直，故新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各洗脱部位也具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或改善轻微抑郁与焦虑症状或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或抗血管性老年痴呆的功能疗效。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
spf级健康sd雄性大鼠，体质量300-350g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：scxk(湘)2009-0004。饲养条件：温度20-22℃，喂以大鼠标准饲料，自由饮水。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的原料组分与试剂：由实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9得到的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分为100目新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末及柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实95％乙醇水总提取物和95％乙醇水总体物上大孔吸附树脂的30％乙醇水洗脱部位以及70％乙醇水洗脱部位。d-半乳糖(sigma公司，批号lot#slbd5369v)；aβ25-35(sigma公司，批号095m4775v)。
动物分组和动物模型的建立：将110只健康sd雄性大鼠随机分为空白组、睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside，sdad)模型组、盐酸多奈哌齐组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实95％乙醇水总提取物中剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实95％乙醇水总提取物高剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位中剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位高剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％乙醇水洗脱部位中剂量组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％乙醇水洗脱部位高剂量组、新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末中剂量组、新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末高剂量组，共11组，每组10只大鼠。
睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型的建立：各实验组先利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周得睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆力减退大鼠。之后，取未死亡状态良好的睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆力减退病变大鼠再脑内注射凝聚态aβ25-35得睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)整体动物模型。
空白组不予处理；模型组与各给药组分别按上述造模方法予以处理。模型组于脑内注射手术前14天开始灌胃2％吐温-80水溶液至手术后7天截止给药，共21天，每天1次。各给药组于睡眠剥夺第2周开始即手术前14天开始连续灌胃给药至手术后7天截止给药，共给药21天，每天1次。
与空白组比较，模型组大鼠潜伏期延长、过台次数减少，在第四象限逗留时间短，差异显著(p＜0.01)；与模型组比较，给药盐酸多奈哌齐组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分各组能缩短潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留时间和距离延长(p＜0.05或p＜0.01)，说明各给药组治疗有效，提示柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分(尤其是新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位组、柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％乙醇水洗脱部位组)效果明显，具有改善睡眠、改善记忆功能减退、改善抑郁与焦虑轻微症状和治疗阿尔茨海默病的功能疗效。结果见表10。
表10柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各部位对sdad模型大鼠空间探索试验结果
与空白组比较：﹟﹟p<0.01；与sdad模型组比较：*p<0.05，**p<0.01
与空白组比较，模型组大鼠自主活动次数减少(睡眠障碍、心神不宁、过度嗜睡，大鼠毛色凌乱、行为焦躁并有一定攻击性)，体重增加缓慢，差异显著(p＜0.01)；与模型组比较，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分各部位能使模型动物的活动次数增加(疏肝和胃、理气解郁、改善睡眠功能、缓解疲劳功能，给药后的大鼠毛色光滑平整、性情温和、轻微抑郁与焦虑症状消失)，体重增加显著(p＜0.05或p＜0.01)，说明柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组各部位对sdad模型大鼠效果明显，尤其是新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥的粉末和柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位组效果最优。特别是新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实冷冻干燥粉末保留了所用的营养价值成分或活性成分类型，药理疗效十分显著，上述各给药部位具有改善睡眠、抗抑郁、抗焦虑和改善记忆力减退等药理或功能疗效。见结果见表11和表12。
表11柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分各部位对sdad模型大鼠自主活动行为学试验结果
与空白组比较：﹟﹟p<0.01；与sdad模型组比较：*p<0.05，**p<0.01
表12柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实原料组分各部位对sdad模型大鼠体重变化分析结果
与空白组比较：﹟﹟p<0.01；与sdad模型组比较：*p<0.05，**p<0.01
新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各洗脱部位及其中单体化合物比较一直，故新鲜柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实各洗脱部位也具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或改善轻度抑郁与焦虑症状或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或抗血管性老年痴呆的功能疗效。
采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(uplc-q-tof-ms)技术和气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的可检测化学成分205个，主要为挥发油或精油类成分、氨基酸类成分、腺苷类成分、多糖类成分、生物碱类成分、香豆素类成分、二萜类成分、三萜类成分和黄酮类成分等。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分类型比较一致，其药理或药效也比较一致，其中橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％洗脱有效部位主要含有生物碱类和黄酮苷类化合物，橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％洗脱有效部位主要含有二萜类和黄酮类化合物，新鲜橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实低温真空冷冻干燥花蕾或花或枝或叶或果实粉末和95％乙醇总提物还含有挥发油类成分(主要含水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯﹑芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇﹑乙酸芳樟酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯等，上述成分大多具有抗焦虑和抗抑郁的功能疗效，与药效功能主治症比较一致)。
同时，使用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱、ods-c18柱色谱和高效液相制备色谱法等现代分析分离技术对柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的各洗脱部位和有效部位进行分离纯化得到相应单体化合物180多个，并且应用uv、ir、nmr和ms等技术与方法解析鉴定上述130多个单体化合物。初步阐明了柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病的药效物质基础，为更深层次开发柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的药用价值提供坚实的理论基础。橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含主要成分具体为二氢黄酮类化合物12个：theaflavanosideⅱ(1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(2)、theaflavanosideⅲ(3)、橙皮苷(4)、新橙皮苷(5)、柚皮素-7-o-β-d-龙胆二糖苷(6)、2(s)-3′,4′-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(7)、枸橘苷(8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(9)、2(s)-3′-甲氧基-5,7,4′-三羟基黄酮-7-o-新橙皮苷(10)、柚皮芸香苷(11)、柚皮苷(12)；黄酮醇类化合物7个：山柰酚-3-o-β-d-芸香糖苷(13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(15)、槲皮素(16)、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷(17)、芦丁(18)、异橙黄酮(19)；高度甲基化黄酮类化合物14个：6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(20)、5,7-二羟基色原酮(21)、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(22)、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(23)、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮(24)、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮(25)、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮(26)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮(27)、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮(28)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(29)、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮(30)、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮(31)、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮(32)、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(33)；苯丙素类化合物2个：阿魏酸甲酯(34)、绿原酸(35)；三萜类化合物1个：柠檬苦素(36)；倍半萜类化合物1个：corchoionolc(37)；其他类化合物2个：1-phenyl-1,2-ethanediol(38)、3-羟甲基呋喃鼠李糖苷(39)；香豆素类化合物4个：法枝毕苷(40)、滨蒿内酯(41)、东莨菪内酯(42)、吴茱萸内酯(43)；氨基酸类化合物15个：甘氨酸(44)、丙氨酸(45)、l-丝氨酸(46)、l-脯氨酸(47)、l-缬氨酸(48)、l-亮氨酸(49)、l-谷氨酸(50)、l-赖氨酸(51)、l-组氨酸(52)、l-苯丙氨酸(53)、l-精氨酸(54)、l-络氨酸(55)、l-异亮氨酸(56)、l-谷氨酰胺(57)、l-茶氨酸(58)；腺苷类化合物8个：尿嘧啶(59)、腺嘌呤(60)、次黄嘌呤(61)、鸟嘌呤(62)、鸟苷(63)、尿苷(64)、腺苷(65)、肌苷(66)；生物碱类8个：辛弗林(67)、n一甲基酪胺(68)、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸(69)，另有新化合物5个；芳香性挥发类(挥发油或精油)成分57个化合物：具体为α-侧柏烯(70)﹑α-蒎烯(71)﹑苯乙醇(72)﹑β-水芹烯(73)﹑桧烯(74)﹑β-蒎烯(75)﹑β-月桂烯(76)﹑苯乙醛(77)﹑a-水芹烯(78)﹑3-蒈烯(79)﹑2-蒈烯(80)﹑对伞花烃(81)﹑(+)-柠檬烯(82)﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)(83)﹑β-罗勒烯(84)﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)(85)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶(86)﹑异松油烯(萜品油烯)(87)﹑芳樟醇(88)﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯(89)﹑2-氨基-苯甲酸甲酯(90)﹑4-萜烯醇(4-松油醇)(91)﹑橙花醇(92)﹑甲位松油醇(93)﹑香茅醛(94)﹑吲哚(95)﹑香叶醇(牻牛儿醇)(96)﹑乙位松油醇(97)﹑5-苯基戊烯(98)﹑乙酸苯乙酯(99)﹑香叶基丙酮(100)﹑乙酸芳樟酯(101)﹑甲酸香叶酯(102)﹑乙酸橙花酯(103)﹑b-榄香烯(104)﹑1-石竹烯(105)﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)(106)﹑荜澄茄油烯(107)﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)(108)﹑橙花叔醇(109)﹑香茅醇(110)﹑8-十七烷烯(111)﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯(112)﹑金合欢醇(113)﹑2-十五烷-1-醇(114)﹑反式-金合欢醇乙酸酯(115)﹑二十三烷(1116)等。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述药物或茶品或饮料或食品。
实施例15
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述药物或茶品或饮料或食品。
将主要含有黄酮类化合物上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14中有效部位的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位和70％乙醇水洗脱部位的浸膏加入等量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的30倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇为10：1至2：1的洗脱流份，以theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物作为对照品tlc或hplc检测，合并相应流份。上述流份于50℃减压浓缩蒸干，用适量蒸馏水混悬，分别上ods-c18柱色谱、sephadexlh-20柱色谱或制备高效液相色谱技术分离纯化，依次用乙醇水由0-100％进行梯度洗脱，或者用乙醇水0-100％等度洗脱，各洗脱部位或单体化合物流分在50℃减压回收溶剂至适量浓度，用喷雾干燥或冷冻干燥进行干燥，收集喷雾干燥粉或冷冻干燥粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物。采用上述方法制备的黄酮类单体化合物为0.2-21g/kg，上述分离得到的各黄酮类单体化合物经hplc检测纯度为98.5％-99.2％，色谱条件用ods-c18分析色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水(5％-100％梯度洗脱)，检测波长为全波长(主要检测254nm或275nm或325nm或365nm)，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl。上述黄酮类单体化合物的结构确证与波谱数据信息：
化合物1的结构鉴定：淡黄色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.09(3h，d，j＝6.0hz，h-6″′)，[2.71(1h，dd，j＝2.4,16.3hz)，3.17(1h，m)，h-3]，4.24(1h，d，j＝7.6hz，xyl-h-1″″)，4.52(1h，brs，rha-h-1″′)，5.03(1h，d，j＝10.2hz，glc-h-1″)，5.59(1h，dd，j＝2.2,6.2hz，h-2)，6.79,6.81(1heach，bothbrs，h-6,8)，7.33,7.34(2heach，bothd，j＝8.4hz，h-3′,5′and2′,6′)，12.03(1h，brs，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.6(c-2)，42.3(c-3)，197.3(c-4)，163.1(c-5)，96.4(c-6)，165.1(c-7)，95.5(c-8)，162.7(c-9)，103.1(c-10)，128.6(c-1′)，128.4(c-2′)，115.2(c-3′)，157.8(c-4′)，115.2(c-5′)，128.4(c-6′)，100.6(glc-c-1″)，75.6(c-2″)，70.7(c-3″)，70.3(c-4″)，75.6(c-5″)，68.3(c-6″)，103.2(rha-c-1″′)，76.3(c-2″′)，69.6(c-3″′)，72.1(c-4″′)，68.3(c-5″′)，17.8(c-6″′)，103.3(xyl-c-1″″)，73.0(c-2″″)，76.3(c-3″″)，69.6(c-4″″)，65.5(c-5″″)。鉴定化合物1为theaflavanosideⅱ。
化合物2的结构鉴定：淡黄色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.15(3h，d，j＝6.0hz，h-6″′)，[2.72(1h，dd，j＝2.8,8.3hz)，3.43(1h，m)，h-3]，5.10(1h，d，j＝5.2hz，xyl-h-l″″′)，5.14(1h，d，j＝8.2hz，terminal-glc-h-1″″)，5.37(1h，brs，rha-h-1″′)，5.50(1h，d，j＝9.0hz，inner-glc-h-1″)，5.51(1h，dd，j＝2.6,11.6hz，h-2)，6.08，6.11(1heach，bothbrs，h-6,8)，6.80,7.32(2heach，bothd，j＝7.2hz，h-3′,5′and2′,6′)，12.05(1h，brs，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.5(c-2)，42.0(c-3)，197.2(c-4)，162.8(c-5)，96.2(c-6)，164.8(c-7)，95.0(c-8)，162.7(c-9)，103.2(c-10)，128.4(c-1′)，128.3(c-2′)，115.1(c-3′)，157.8(c-4′)，115.1(c-5′)，128.3(c-6′)，97.2(inner-glc-c-1″)，76.1(c-2″)，70.4(c-3″)，70.3(c-4″)，76.0(c-5″)，68.2(c-6″)，97.3(rha-c-1″′)，77.0(c-2″′)，69.5(c-3″′)，71.7(c-4″′)，68.2(c-5″′)，17.9(c-6″′)，100.3(terminal-glc-c-1″″)，72.4(c-2″″)，76.8(c-3″″)，70.3(c-4″″)，76.8(c-5″″)，60.3(c-6″″)，100.3(xyl-c-1″″′)，71.7(c-2″″′)，76.8(c-3″″′)，69.5(c-4″″′)，63.0(c-5″″′)。鉴定化合物2为2(s)-theaflavanosideⅳ。
化合物3的结构鉴定：淡黄色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.11(3h，d，j＝6.4hz，h-6″′)，[2.73(1h，dd，j＝2.8,9.0hz)，3.38(1h，m)，h-3]，4.60(1hd，j＝8hz，inner-glc-h-1″)，5.19(1h，brs，rha-h-1″′)，5.31(1h，d，j＝7.1hz，terminal-glc-h-1″″).5.50(1h，brdd，j＝2.5,12.3hz，h-2)，6.12,6.14(1heach，bothbrs，6,8-h)，6.92,6.96(2heach，bothd，j＝8.6hz，3′,5′and2′,6′-h)，12.01(1h，brs，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.4(c-2)，42.0(c-3)，197.1(c-4)，162.6(c-5)，96.0(c-6)，164.7(c-7)，94.9(c-8)，162.5(c-9)，103.1(c-10)，128.3(c-1′)，128.2(c-2′)，115.0(c-3′)，157.7(c-4′)，115.0(c-5′)，128.2(c-6′)，97.1(inner-glc-c-1″)，75.8(c-2″)，76.5(c-3″)，69.4(c-4″)，76.2(c-5″)，60.2(c-6″)，100.8(rha-c-1″′)，77.0(c-2″′)，69.0(c-3″′)，70.6(c-4″′)，67.8(c-5″′)，17.8(c-6″′)，102.3(terminal-glc-c-1″″)，73.6(c-2″″)，76.5(c-3″″)，69.4(c-4″″)，76.5(c-5″″)，60.5(c-6″″)。鉴定化合物3为theaflavanosideⅲ。
化合物4的结构鉴定：白色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.09(3h，d，j＝6.2hz，h-6″′)，2.76(1h，m，h-3)，3.10～3.41(10h，m，h-sugar)，3.77(3h，s，ch3o-4′)，4.98(1h，d，j＝7.6hz，h-1″)，5.49(1h，dd，j＝12.3,3.5hz，h-2)，6.13(2h，m，h-6,8)，6.94(3h，m，h-2′,5′,6′)，9.13(1h，s，3′-oh)，12.01(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.3(c-2)，39.8(c-3)，196.9(c-4)，162.9(c-5)，96.3(c-6)，165.0(c-7)，95.4(c-8)，162.4(c-9)，103.2(c-10)，130.8(c-1′)，114.0(c-2′)，146.3(c-3′)，147.8(c-4′)，111.9(c-5′)，117.8(c-6′)，55.6(ch3o-4′)，100.5(glc-c-1″)，72.9(c-2″)，76.2(c-3″)，70.2(c-4″)，75.4(c-5″)，68.2(c-6″)，99.3(rha-c-1″′)，70.6(c-2″′)，70.6(c-3″′)，72.0(c-4″′)，69.5(c-5″′)，17.7(c-6″′)。鉴定化合物4为橙皮苷。
化合物5的结构鉴定：白色晶性粉末。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.16(3h，d，j＝6.4hz，h-6″′)，2.74(1h，dd，j＝18.2,1.1hz，h-3β)，3.14(1h，m)，3.18(1h，dd，j＝19.9,10.2hz，h-3α)，3.45(4h，m)，3.68(3h，m)，3.67(3h，s，ch3o-4′)，4.28(1h，d，j＝6.2hz，oh)，4.59(1h，m，oh)，4.67(1h，d，j＝4.3hz，oh)，4.73(1h，d，j＝3.9hz，oh)，5.10(1h，d，j＝2.8hz，h-1″′)，5.14(1h，d，j＝5.2hz，h-1″)，5.45(1h，d，j＝4.5hz，oh)，5.49(1h，dd，j＝12.1,1.2hz，h-2)，6.09(1h，d，j＝0.9hz，h-8)，6.11(1h，d，j＝0.9hz，h-6)，6.87(1h，dd，j＝8.2,2.6hz，h-6′)，6.92(1h，d，j＝2.6hz，h-2′)，6.95(1h，d，j＝8.2hz，h-5′)，9.16(1h，s，3′-oh)，12.04(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.3(c-2)，42.1(c-3)，197.1(c-4)，162.8(c-5)，96.2(c-6)，164.7(c-7)，95.1(c-8)，162.5(c-9)，103.2(c-10)，130.7(c-1′)，114.1(c-2′)，146.4(c-3′)，147.9(c-4′)，111.9(c-5′)，117.7(c-6′)，55.6(ch3o-4′)，100.3(glc-c-1″)，76.0(c-2″)，77.0(c-3″)，69.5(c-4″)，76.8(c-5″)，60.3(c-6″)，97.2(rha-c-1″′)，70.4(c-2″′)，70.3(c-3″′)，71.7(c-4″′)，68.2(c-5″′)，17.9(c-6″′)。鉴定化合物5为新橙皮苷。
化合物6的结构鉴定：1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：2.74(1h，dd，j＝5,18hz，h-3)，3.22(1h，dd，j＝12.4,18.6hz，h-3)，3.31-3.67(12hz，1h-glucose)，4.95-5.10(2h，anomeric1hofglucose)，5.37(1h，dd，j＝12.8,4.2hz，h-2)，6.14(2h，d，j＝2.8hz，h-6,8)，6.80(2h，d，j＝8.5hz，h-3′,5′)，7.33(2h，d，j＝8.5hz，h-2′,6′)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.6(c-2)，42.0(c-3)，197.2(c-4)，163.3(c-5)，96.5(c-6)，165.3(c-7)，95.4(c-8)162.7(c-9)103.2(c-10)128.6(c-1′)，128.4(c-2′)，115.2(c-3′)，157.8(c-4′)，115.2(c-5′)128.4(c-6′)，99.4(inner-glc-c-1″)，73.0(c-2″)，77.0(c-3″)，69.4(c-4″)，76.3(c-5″)，68.2(c-6″)，99.5(glc-c-1″′)，73.0(c-2″′)，77.0(c-3″′)，69.4(c-4″′)，76.3(c-5″′)，60.5(c-6″′)。鉴定化合物6为柚皮素-7-o-龙胆二糖苷。
化合物7的结构鉴定：白色的无定形粉末。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.16(3h，d，j＝6.1hz，rha-h-6″′)，2.77(1h，brd，j＝17.0hz，h-3β)，3.22(1h，brs，glc-h-4″)，3.30(1h，d，j＝8.6hz，rha-h-4″′)，3.31(1h，dd，j＝9.4,14.8hz，h-3α)，3.39(1h，dd，j＝9.0,2.7hz，rha-h-3″′)，3.41(1h，d，j＝9.2hz，glc-h-3″)，3.46(1h，m，glc-h-2″)，3.46(1h，m，glc-h-5″)，3.46(1h，m，glc-h-6″)，3.70(1h，s，rha-h-5″′)，3.71(1h，m，rha-h-2″′)，3.78(3h，s，ch3o-4′)，3.79(3h，s，ch3o-3′)，5.11(1h，d，j＝7.0hz，glc-h-1″)，5.34(1h，brs，rha-h-1″′)，5.56(1h，brd，j＝11.8hz，h-2)，6.09(1h，d，j＝2.1hz，h-6)，6.15(1h，d，j＝2.1hz，h-8)，7.03(1h，d，j＝7.8hz，h-5′)，7.06(1h，dd，j＝2.0,7.8hz，h-6′)，7.14(1h，d，j＝2.0hz，h-2′)，12.05(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.6(c-2)，42.0(c-3)，197.1(c-4)，162.8(c-5)，96.3(c-6)，164.8(c-7)，95.1(c-8)，162.6(c-9)，103.2(c-10)，130.6(c-1′)，110.6(c-2′)，148.6(c-3′)，149.0(c-4′)，111.5(c-5′)，119.4(c-6′)，55.5(ch3o-3′)，55.5(ch3o-4′)，97.3(glc-c-1″)，77.0(c-2″)，76.8(c-3″)，69.5(c-4″)，76.0(c-5″)，60.3(c-6″)，100.3(rha-c-1″′)，70.3(c-2″′)，70.4(c-3″′)，71.7(c-4″′)，68.2(c-5″′)，17.9(c-6″′)。鉴定化合物7为2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside。
化合物8的结构鉴定：白色针状结晶，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：2.76(1h，dd，j＝14.4,6.2hz，h-3β)，3.18(1h，dd，j＝20.1,9.5hz，h-3α)，3.77(3h，s，ch3o-4′)，5.11(1h，d，j＝5.6hz，glc-h-1)，5.14(1h，d，j＝7.2hz，rha-h-1)，5.37(1h，dd，j＝8.0,2.2hz，h-2)，6.09(1h，d，j＝2.2hz，h-6)，6.12(1h，d，j＝2.3hz，h-8)，6.99(2h，d，j＝7.8hz，h-3′,5′)，7.44(2h，d，j＝3.1hz，h-2′,6′)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：77.1(c-2)，48.6(c-3)，197.1(c-4)，164.7(c-5)，97.4(c-6)，164.8(c-7)，97.2(c-8)，162.7(c-9)，103.4(c-10)，128.4(c-1′)，128.3(c-2′)，113.9(c-3′)，159.5(c-4′)，113.9(c-5′)，128.3(c-6′)，55.2(ch3o-4′)，100.4(glc-c-1″)，76.9(c-2″)，76.0(c-3″)，69.5(c-4″)，76.2(c-5″)，60.4(c-6″)，100.3(rha-c-1″′)，70.4(c-2″′)，70.3(c-3″′)，71.8(c-4″′)，68.2(c-5″′)，18.0(c-6″′)。鉴定化合物8为枸橘苷。
化合物9的结构鉴定：白色晶性粉末。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.10(3h，d，j＝6.7hz，h-6″)，2.19(3h，s，ch3-8)，2.22(3h，s，ch3-6)，3.39(4h，m)，3.56(3h，s，ch3o-3′)，3.72(1h，dd，j＝12.0,8.4hz，h-3)，4.53(1h，dd，j＝10.3,3.8hz，h-2)，4.64(1h，d，j＝5.2hz，oh)，4.82(1h，m，oh)，4.95(1h，d，j＝0.8hz，h-1″)，6.92(1h，s，h-2′)，7.30(1h，d，j＝8.2hz，5′-oh)，8.51(1h，s，4′-oh)，11.88(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：79.0(c-2)，42.2(c-3)，197.2(c-4)，162.9(c-5)，96.3(c-6)，164.8(c-7)，95.1(c-8)，162.8(c-9)，103.3(c-10)，24.9(ch3-6)，25.1(ch3-8)，129.1(c-1′)，111.2(c-2′)，147.5(c-3′)，147.1(c-4′)，115.2(c-5′)，119.9(c-6′)，55.7(ch3o-3′)，100.4(glc-c-1″)，77.1(c-2″)，76.8(c-3″)，69.5(c-4″)，76.0(c-5″)，60.4(c-6″)。鉴定化合物9为6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷。
化合物10的结构鉴定：白色晶性粉末。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.15(3h，d，j＝6.2hz，h-6″)，2.73(1h，dd，j＝18.2,1.1hz，h-3β)，3.20(1h，m)，3.22(1h，dd，j＝19.9,10.2hz，h-3a)，3.42(4h，m)，3.68(3h，m)，3.68(3h，s，ch3o-3′)，4.52(1h，d，j＝6.2hz，oh)，4.58(1h，m，oh)，4.67(1h，d，j＝4.3hz，oh)，4.73(1h，d，j＝3.9hz，oh)，5.11(1h，d，j＝2.6hz，h-1″′)，5.15(1h，d，j＝5.2hz，h-1″)，5.46(1h，d，j＝4.6hz，oh)，5.52(1h，dd，j＝12.2,1.2hz，h-2)，6.08(1h，d，j＝0.9hz，h-8)，6.13(1h，d，j＝0.9hz，h-6)，6.80(1h，d，j＝8.0hz，h-5′)，6.92(1h，dd，j＝8.3,1.8hz，h-6′)，7.10(1h，d，j＝1.9hz，h-2′)，9.20(1h，s，4′-oh)，12.04(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：79.0(c-2)，42.2(c-3)，197.2(c-4)，162.9(c-5)，96.3(c-6)，164.8(c-7)，95.1(c-8)，162.8(c-9)，103.3(c-10)，129.1(c-1′)，111.2(c-2′)，147.5(c-3′)，147.1(c-4′)，115.2(c-5′)，119.9(c-6′)，55.7(ch3o-3′)，100.4(glc-c-1″)，77.1(c-2″)，76.8(c-3″)，69.5(c-4″)，76.0(c-5″)，60.4(c-6″)，97.4(rha-c-1″′)，70.3(c-2″′)，70.4(c-3″′)，71.8(c-4″′)，68.2(c-5″′)，18.0(c-6″′)。鉴定化合物10为2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside。
化合物11的结构鉴定：1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.07(3h，d，j＝6.0hz，h-6″′)，2.72(1h，dd，j＝17.4,3.0hz，h-3)，3.26(1h，m，h-3)，3.13～3.69(10h，m，h-2″,3″,4″,5″,6″,2″′,3″′,4″′,5″′)，4.50(1h，s，h-1″′)，4.97(1h，d，j＝7.2hz，h-1″)，5.50(1h，dd，j＝12.6,3.0hz，h-2)，6.10(2h，m，h-6，8)，6.78(2h，d，j＝8.4hz，h-3′,5′)，7.33(2h，d，j＝8.4hz，h-2′,6′)，9.60(1h，s，4′-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.6(c-2)，42.1(c-3)，197.2(c-4)，162.0(c-5)，96.4(c-6)，165.1(c-7)，95.5(c-8)，162.7(c-9)，103.3(c-10)，128.7(c-1′)，128.5(c-2′)，115.2(c-3′)，157.7(c-4′)，115.2(c-5′)，128.5(c-6′)，100.5(glc-c-1″)，72.9(c-2″)，76.2(c-3″)，72.0(c-4″)，75.5(c-5″)，65.9(c-6″)，99.3(rha-c-1″′)，70.7(c-2″′)，70.2(c-3″′)，69.6(c-4″′)，68.3(c-5″′)，17.8(c-6″′)。鉴定化合物11为柚皮芸香苷。
化合物12的结构鉴定：白色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.15(3h，d，j＝5.7hz，ch3-6″′)，2.6(1h，d，j＝9.5hz，h-3)，3.3(1h，d，j＝9.6hz，h-3)，5.06(1h，d，j＝5.0hz，h-1″)，5.34(1h，s，h-1″′)，5.48(1h，d，j＝4.6hz，h-2)，6.08(1h，s，h-8)，6.11(1h，s，h-6)，6.80(2h，d，j＝7.2hz，h-2′,6′)，7.32(2h，d，j＝8.6hz，h-3′,5′)，9.66(1h，s，4′-oh)，12.03(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：78.7(c-2)，42.0(c-3)，197.3(c-4)，164.6(c-5)，96.2(c-6)，164.7(c-7)，95.0(c-8)，162.8(c-9)，103.2(c-10)，128.5(c-1′)，128.4(c-2′)，115.1(c-3′)，157.8(c-4′)，115.1(c-5′)，128.4(c-6′)，100.3(glc-c-1″)，77.0(c-2″)，76.1(c-3″)，69.4(c-4″)，76.8(c-5″)，60.3(c-6″)，97.1(rha-c-1″′)，70.3(c-2″′)，70.3(c-3″′)，71.7(c-4″′)，68.2(c-5″′)，17.9(c-6″′)。确定化合物12为柚皮苷。
化合物13的结构鉴定：淡黄色粉末，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：1.01(3h，d，j＝6.2hz，h-6″′)，4.39(1h，brs，h-1″′)，5.26(1h，d，j＝7.4hz，h-1″)，6.06(1h，d，j＝2hz，h-6)，6.25(1h，d，j＝2hz，h-8)，6.86(2h，d，j＝8.8hz，h-3′,5′)，7.96(2h，d，j＝8.8hz，h-2′,6′)，10.11(1h，s，4′-oh)，10.83(1h，s，7-oh)，12.46(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：156.8(c-2)，133.0(c-3)，176.7(c-4)，160.0(c-5)，99.8(c-6)，160.0(c-7)，94.4(c-8)，156.8(c-9)，102.5(c-10)，120.8(c-1′)，130.7(c-2′)，115.1(c-3′)，156.1(c-4′)，115.1(c-5′)，130.7(c-6′)，100.8(glc-c-1″)，74.1(c-2″)，76.4(c-3″)，70.5(c-4″)，75.6(c-5″)，66.9(c-6″)，101.8(rha-c-1″′)，70.3(c-2″′)，69.8(c-3″′)，71.8(c-4″′)，68.2(c-5″′)，17.7(c-6″′)。鉴定化合物13为山柰酚-3-o-芸香糖苷。
化合物14的结构鉴定：黄色针状结晶，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：0.99(3h，d，j＝6.2hz，h-6″′)，3.70(2h，s，h-6″)，3.83(3h，s，ch3o-3′)，5.04(1h，d，j＝7.4hz，h-1″)，5.29(1h，dd，j＝2.0hz，h-1″′)，6.07(1h，d，j＝2.0hz，h-6)，6.28(1h，d，j＝2.0hz，h-8)，6.90(1h，d，j＝8.4hz，h-5′)，7.84(2h，d，j＝1.9hz，h-2′,6′)，9.80(1h，s，4′-oh)，10.78(1h，s，7-oh)，12.49(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：155.8(c-2)，132.8(c-3)，176.6(c-4)，156.7(c-5)，99.7(c-6)，161.0(c-7)，92.2(c-8)，155.8(c-9)，100.9(c-10)，120.9(c-1′)，115.2(c-2′)，149.6(c-3′)，146.9(c-4′)，113.1(c-5′)，122.1(c-6′)，55.5(ch3o-3′)，101.5(glc-c-1″)，74.3(c-2″)，76.4(c-3″)，70.5(c-4″)，75.8(c-5″)，66.8(c-6″)，100.9(rha-c-1″′)，70.2(c-2″′)，70.0(c-3″′)，72.5(c-4″′)，68.3(c-5″′)，17.7(c-6″′)。鉴定化合物14为异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷。
化合物15的结构鉴定：黄色粉末状结晶，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：3.34-3.45(6h，glc-h)，3.86(3h，s，ch3o-4')，4.59(1h，d，j＝9.8hz，glc-h-1)，6.47(1h，d，j＝10.8hz，h-6)，6.80(1h，d，j＝10.8hz，h-8)，7.08(1h，d，j＝8.7hz，h-5')，7.43(1h，d，j＝2.2hz，h-2')，7.52(1h，dd，j＝8.5，2.1hz，h-6')，8.44(1h，brs，3'-oh)，9.58(1h，brs，7-oh)，13.5(1h，s，5-oh)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：156.8(c-2)，133.5(c-3)，180.5(c-4)，161.3(c-5)，98.8(c-6)，165.2(c-7)，93.7(c-8)，156.7(c-9)，104.2(c-10)，122.1(c-1')，113.6(c-2')，147.2(c-3')，149.8(c-4')，115.4(c-5')，122.2(c-6')，56.8(ch3o-4')，101.3(glc-c-1”)，74.8(c-2”)，76.6(c-3”)，70.2(c-4”)，77.9(c-5”)，60.9(c-6”)。鉴定化合物15为4′-甲氧基-异槲皮苷。
化合物16的结构鉴定：黄绿色粉末(丙酮)，1h-nmr(cd3cocd3,500mhz)δ:6.51(1h,d,j＝2.0hz,h-8)，6.25(1h,d,j＝2.0hz,h-6)，7.81(1h,d,j＝2.0hz,h-2′)，7.68(1h,dd,j＝2.0hz,8.5hz，h-6′)，6.98(1h,d,j＝2.0hz,h-5′)，12.14(1h,5-oh)；13c-nmr(cd3cocd3,125mhz)δ：176.45(c＝o)，146.83(c-2)，136.66(c-3)，157.74(c-5)，98.99(c-6)，164.83(c-7)，94.40(c-8)，162.03(c-9)，104.04(c-10)，123.71(c-1′)，115.64(c-2′)，145.67(c-3′)，148.17(c-4′),116.11(c-5′)，121.41(c-6′)。鉴定化合物16为槲皮素。
化合物17的结构鉴定：淡黄色粉末(丙酮)，1h-nmr(cd3cocd3,400mhz)δ：12.65(1h,s,5-oh)，10.92(1h,s,7-oh)，9.79(1h,brs,3′-oh)，9.24(1h,s,4′-oh)，6.42(1h,d,j＝2.0hz,h-8)，6.21(1h,d,j＝2.0hz,h-6)，7.54(1h,d,j＝2.0hz,h-2′)，7.59(1h,dd,j＝2.0hz,8.4hz，h-6′)，6.83(1h,d,j＝8.4hz,h-5′)，5.48(1h,d,j＝7.6hz,h-1″)。13c-nmr(cd3cocd3,100mhz)δ：156.18(c-2)，133.17(c-3)，177.32(c-4)，161.12(c-5)，100.69(c-6)，163.98(c-7)，93.38(c-8)，156.04(c-9)，103.80(c-10)，120.95(c-1′)，115.07(c-2′)，144.69(c-3′)，148.34(c-4′),115.81(c-5′)，121.49(c-6′)。糖的碳信号δ：100.69(c-1″)，73.96(c-2″)，76.39(c-3″),69.80(c-4″)，77.47(c-5″)及60.84(c-6″)。鉴定化合物17为槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷。
化合物18的结构鉴定：淡黄色粉末(丙酮)，1h-nmr(cd3cocd3，400mhz)δ：12.62(1h,s,5-oh)，10.89(1h,brs,7-oh)，9.73(1h,brs,3′-oh)，9.23(1h,s,4′-oh)，6.41(1h,d,j＝2.0hz,h-8)，6.21(1h,d,j＝2.0hz,h-6)，7.57(1h,d,j＝2.0hz,h-2′)，7.55(1h,dd,j＝2.0hz,8.4hz，h-6′)，6.86(1h,d,j＝8.4hz,h-5′)，5.36(1h,d,j＝7.2hz,glu-h-1)，4.42(1h,d,j＝3.2hz,rha-h-1)；13c-nmr(cd3cocd3，100mhz)δ：177.31(c＝o)，156.57(c-2)，133.23(c-3)，161.15(c-5)，101.16(c-6)，164.00(c-7)，93.55(c-8)，156.36(c-9)，103.96(c-10)，121.12(c-1′)，115.18(c-2′)，144.69(c-3′)，148.35(c-4′),116.22(c-5′)，121.54(c-6′)。糖的碳信号δ：glu100.69(c-1″)，74.01(c-2″)，75.83(c-3″),70.32(c-4″)，76.37(c-5″)及66.94(c-6″)。rha101.11(c-1″′)，69.94(c-2″′)，70.49(c-3″′),71.78(c-4″′)，68.19(c-5″′)及17.68(c-6″′)。鉴定化合物18为芦丁。
化合物19的结构鉴定：1hnmr(dmso-d6)：3.84(h，s，ch3o-5)，3.85(3h，s，ch3o-8)，3.87(3h，s，ch3o-4′)，3.88(3h，s，ch3o-3′)，3.98(3h，s，ch3o-7)，6.68(1h，s，h-6)，6.79(1h，s，h-3)，7.15(1h，d，j＝8.6hz，h-5′)，7.53(1h，brs，h-2′)，7.63(1h，brd，j＝8.5hz，h-6′)；13c-nmr(dmso-d6)：160.2(c-2)，106.3(c-3)，175.6(c-4)，151.7(c-5)，97.2(c-6)，157.3(c-7)，151.4(c-8)，153.8(c-9)，111.6(c-10)，123.0(c-1′)，109.1(c-2′)，148.9(c-3′)，151.5(c-4′)，111.8(c-5′)，119.6(c-6′)，60.9(ch3o-3′)，56.5(ch3o-4′)，55.6(ch3o-5)，61.9(ch3o-7)，55.8(ch3o-8)。鉴定化合物19为异橙黄酮。
化合物20的结构鉴定：深黄色晶体，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：3.77(3h，s，ch3o-8)，3.80(h，s，ch3o-6)，3.85(3h，s，ch3o-4′)，3.89(3h，s，ch3o-3′)，3.96(3h，s，ch3o-7)，6.81(1h，s，h-3)，7.12(1h，d，j＝8.6hz，h-5′)，7.23(1h，s，h-5)，7.55(1h，d，j＝2.1hz，h-2′)，7.67(1h，dd，j＝8.4,2.1hz，h-6′)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：160.2(c-2)，106.3(c-3)，175.6(c-4)，97.3(c-5)，139.6(c-6)，157.3(c-7)，151.4(c-8)，153.9(c-9)，111.5(c-10)，123.0(c-1′)，109.0(c-2′)，148.9(c-3′)，151.6(c-4′)，111.9(c-5′)，119.4(c-6′)，60.9(ch3o-3′)，56.4(ch3o-4′)，55.6(ch3o-6)，61.8(ch3o-7)，55.8(ch3o-8)。鉴定化合物20为6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone。
化合物21的结构鉴定：黄色扇状结晶，1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ：6.19(1h，d，j＝2.0hz，h-6)，6.26(1h，d，j＝6.0hz，h-3)，6.35(1h，d，j＝2.0hz，h-8)，8.17(1h，d，j＝5.9hz，h-2)，8.35(1h，brs，h-7)，12.69(1h，s，h-5)；13c-nmr(100mhz，dmso-d6)δ：157.4(c-2)，110.4(c-3)，181.2(c-4)，161.6(c-5)，99.1(c-6)，164.8(c-7)，94.0(c-8)，157.8(c-9)，104.7(c-10)。鉴定化合物21为5,7-二羟基色原酮。
化合物22的结构鉴定：淡黄色结晶(甲醇)，1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.86(1h，s，5-oh)，7.39(2h，s，h-2′，6′)，7.17(1h，s，h-3)，6.90(1h，d，j＝2.0hz，h-8)，6.41(1h，d，j＝2.0hz，h-6)，3.92(6h，s，3′，5′-och3)，3.90(3h，s，7-och3)，3.76(3h，s，4′-och3)。鉴定化合物22为5-羟基-7，3′，4′，5′-四甲氧基黄酮。
化合物23的结构鉴定：淡黄色结晶(甲醇)，1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.85(1h，s，5-oh)，7.40(2h，s，h-2′，6′)，7.17(1h，s，h-3)，7.04(1h，s，h-8)，3.92(6h，s，3′，5′-och3)，3.90(3h，s，7-och3)，3.75(3h，s，4′-och3)，3.74(3h，s，6-och3)。鉴定化合物23为5-羟基-6，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮。
化合物24的结构鉴定：淡黄色结晶(甲醇)，ei-msm/z：344[m]+。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.87(1h，s，5-oh)，7.21(1h，d，j＝2.0hz，h-2′)，7.20(1h，d，j＝2.0，h-6′)，6.99(1h，s，h-3)，6.78(1h，d，j＝1.8hz，h-8)，6.40(1h，d，j＝1.8hz，h-6)，3.90(3h，s，5′-och3)，3.89(3h，s，7-och3)，3.76(3h，s，4′-och3)。鉴定化合物24为5，3′-二羟基-7，4′，5′-三甲氧基黄酮。
化合物25的结构鉴定：黄棕色粉末(甲醇)，ei-msm/z：344[m]+。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.86(1h，s，5-oh)，10.89(1h，s，7-oh)，7.35(2h，s，h-2′，6′)，7.09(1h，s，h-3)，6.59(1h，d，j＝2.4hz，h-8)，6.23(1h，d，j＝2.4hz，h-6)，3.91(6h，s，3′，5′-och3)，3.75(3h，s，4′-och3)。鉴定化合物25为5，7-二羟基-3′，4′，5′-三甲氧基黄酮。
化合物26的结构鉴定：淡黄色粉末(甲醇)，1h-nmr(meod，400mhz)δ：7.26(2h，s，h-2′，6′)，6.73(1h，s，h-3)，6.48(1h，d，j＝2.1hz，h-8)，6.21(1h，d，j＝2.1hz，h-6)，3.94(6h，s，3′，5′-och3)，3.84(3h，s，7-och3)。鉴定化合物26为5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮。
化合物27的结构鉴定：黄色固体(甲醇)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.94(1h，s，5-oh)，10.84(1h，s，7-oh)，8.08(2h，dd，j＝2.0,8.4hz，h-2′，6′)，7.60(2h，dd，j＝2.0,8.4hz，h-3′，5′)，6.99(1h，s，h-3)，6.65(1h，s，h-8)，3.76(3h，s，6-och3)。鉴定化合物27为5，7，4′-三羟基-6-甲氧基黄酮。
化合物28的结构鉴定：黄色固体(甲醇)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.51(1h，s，5-oh)，8.08(2h，dd，j＝2.0,8.4hz，h-2′，6′)，7.63(2h，dd，j＝2.0,8.4hz，h-3′，5′)，6.98(1h，s，h-3)，6.29(1h，s，h-6)，3.85(3h，s，8-och3)。鉴定化合物28为5，7，4′-三羟基-8-甲氧基黄酮。
化合物29的结构鉴定：淡黄色粉末(甲醇)，ei-msm/z：330[m]+。1h-nmr(cd3od，400mhz)δ：7.25(2h，s，h-2′，6′)，6.78(1h，s，h-3)，6.51(1h，d，j＝2.8hz，h-8)，6.21(1h，d，j＝2.8hz，h-6)，3.94(6h，s，3′，5′-och3)。鉴定化合物29为5，7，4′-三羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮。
化合物30的结构鉴定：黄色固体(甲醇)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.93(1h，s，5-oh)，7.14(2h，d，j＝2.8hz，h-2′，6′)，6.84(1h，s，h-3)，6.45(1h，s，h-6)，3.88(3h，s，5′-och3)，3.74(3h，s，8-och3)，3.73(3h，s，4′-och3)。鉴定化合物30为5，7，3′-三羟基-8，4′，5′-三甲氧基黄酮。
化合物31的结构鉴定：黄色粉末(甲醇)，ei-msm/z：346[m]+。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：12.98(1h，s，5-oh)，10.81(1h，s，7-oh)，6.98(2h，s，h-2′，6′)，6.63(1h，s，h-3)，6.57(1h，s，h-8)，3.75(3h，s，4′-och3)，3.76(3h，s，6-och3)。鉴定化合物31为5，7，3′，5′-四羟基-6，4′-二甲氧基黄酮。
化合物32的结构鉴定：黄色粉末(甲醇)，ei-msm/z：346[m]+。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：9.63(1h，s，3-oh)，7.43(1h，d，j＝8.0hz，h-7)，7.10(2h，s，h-2′，6′)，6.76(1h，d，j＝8.0hz，h-8)，3.79(6h，s，3′，5′-och3)。鉴定化合物32为3，5，6，4′-四羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮。
化合物33的结构鉴定：淡黄色结晶(甲醇)，ei-msm/z：372[m]+。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)δ：7.39(2h，s，h-2′，6′)，7.17(1h，s，h-3)，6.89(1h，s，h-8)，6.41(1h，s，h-6)，3.92(6h，s，3′，5′-och3)，3.89(3h，s，7-och3)，3.88(3h，s，5-och3)，3.76(3h，s，4′-och3)。鉴定化合物33为5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮。
实施例16
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，将上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14中含有柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的水洗脱部位浸膏加入等量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的30倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇为10：1至2：1的洗脱流份，以棕搁酸﹑8-羟基-十五烷二酸﹑水苏碱﹑辛弗林﹑3,4-二羟基哌啶酸﹑栓翅芹内酯﹑苯乙酸﹑n一甲基酪胺﹑邻羟基苯甲酸﹑2-(甲氨基)苯甲酸甲酯﹑β-d-吡喃半乳糖基-(1→6')-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑莽草酸﹑3-羟基-香草酸﹑丁香酸﹑香柑内酯﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑油酸﹑甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、络氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、茶氨酸单体化合物作为对照品tlc或hplc检测，合并相应流份。上述流份于50℃减压浓缩蒸干，用适量蒸馏水混悬，分别上ods-c18柱色谱、sephadexlh-20柱色谱或制备高效液相色谱技术分离纯化，依次用乙醇水由0-100％进行梯度洗脱，或者用乙醇水0-100％等度洗脱，各洗脱部位或单体化合物流分在50℃减压回收溶剂至适量浓度，用喷雾干燥或冷冻干燥进行干燥，收集喷雾干燥粉或冷冻干燥粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得棕搁酸﹑8-羟基-十五烷二酸﹑水苏碱﹑辛弗林﹑3,4-二羟基哌啶酸﹑栓翅芹内酯﹑苯乙酸﹑n一甲基酪胺﹑邻羟基苯甲酸﹑2-(甲氨基)苯甲酸甲酯﹑β-d-吡喃半乳糖基-(1→6')-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑莽草酸﹑3-羟基-香草酸﹑丁香酸﹑香柑内酯﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑油酸﹑甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、络氨酸、异亮氨酸、谷氨酰胺、茶氨酸单体化合物。采用上述方法制备的上述单体化合物为0.1-9g/kg，上述分离得到的各单体化合物经hplc检测纯度为98.5％-99.2％，色谱条件用ods-c18分析色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水(5％-100％梯度洗脱)，检测波长为全波长，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl。
实施例17
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实30％乙醇水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，将上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14中含有柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的30％乙醇水洗脱部位浸膏加入等量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的30倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇为10：1至2：1的洗脱流份，以十六酸甲酯﹑α-d-吡喃葡萄糖基-(1→1')-3'-氨基-3'-去氧-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑3-羟基哌啶酸﹑东莨菪内酯﹑绿原酸﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑法筚枝苷﹑癸酸﹑辛酸﹑反-α,α-5一三甲基一5一乙烯基四氢化一2-呋喃甲醇﹑2-异丙基-5-甲基茴香醚﹑芦丁﹑3-o-咖啡酰基-4-o-芥子酰基奎宁酸﹑圣草枸橼苷或析圣草枸橼苷﹑槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑柚皮芸香苷﹑去乙酰闹米林﹑橙皮苷﹑橙皮素-7-o-β-d-葡萄糖苷﹑闹米林酸﹑诺米林﹑黄柏酮﹑马尔敏﹑柠檬苦素﹑蜜桔黄素﹑缬草酸﹑油酸﹑亚油酸乙酯﹑尿嘧啶、腺嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤、鸟苷、尿苷、腺苷、肌苷、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸单体化合物作为对照品tlc或hplc检测，合并相应流份。上述流份于50℃减压浓缩蒸干，用适量蒸馏水混悬，分别上ods-c18柱色谱、sephadexlh-20柱色谱或制备高效液相色谱技术分离纯化，依次用乙醇水由0-100％进行梯度洗脱，或者用乙醇水0-100％等度洗脱，各洗脱部位或单体化合物流分在50℃减压回收溶剂至适量浓度，用喷雾干燥或冷冻干燥进行干燥，收集喷雾干燥粉或冷冻干燥粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得十六酸甲酯﹑α-d-吡喃葡萄糖基-(1→1')-3'-氨基-3'-去氧-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑3-羟基哌啶酸﹑东莨菪内酯﹑绿原酸﹑4-羟基-肉桂酸甲酯﹑法筚枝苷﹑癸酸﹑辛酸﹑反-α,α-5一三甲基一5一乙烯基四氢化一2-呋喃甲醇﹑2-异丙基-5-甲基茴香醚﹑芦丁﹑3-o-咖啡酰基-4-o-芥子酰基奎宁酸﹑圣草枸橼苷或析圣草枸橼苷﹑槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷﹑柚皮芸香苷﹑去乙酰闹米林﹑橙皮苷﹑橙皮素-7-o-β-d-葡萄糖苷﹑闹米林酸﹑诺米林﹑黄柏酮﹑马尔敏﹑柠檬苦素﹑蜜桔黄素﹑缬草酸﹑油酸﹑亚油酸乙酯﹑尿嘧啶、腺嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤、鸟苷、尿苷、腺苷、肌苷、1，2，3，4-四氢-1-甲基-β-咔啉-3-羧酸单体化合物。采用上述方法制备的上述单体化合物为0.1-26g/kg，上述分离得到的各单体化合物经hplc检测纯度为98.5％-99.2％，色谱条件用ods-c18分析色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水(5％-100％梯度洗脱)，检测波长为全波长，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl。
实施例18
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实70％乙醇水洗脱部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，将上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14中含有柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的总提取物上大孔吸附树脂的70％乙醇水洗脱部位浸膏加入等量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的30倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇为10：1至2：1的洗脱流份，以法筚枝苷﹑邻氨基苯甲酸甲酯﹑香柑内酯﹑滨蒿内酯﹑东莨菪内酯﹑野漆树苷﹑福橘素﹑theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物作为对照品tlc或hplc检测，合并相应流份。上述流份于50℃减压浓缩蒸干，用适量蒸馏水混悬，分别上ods-c18柱色谱、sephadexlh-20柱色谱或制备高效液相色谱技术分离纯化，依次用乙醇水由0-100％进行梯度洗脱，或者用乙醇水0-100％等度洗脱，各洗脱部位或单体化合物流分在50℃减压回收溶剂至适量浓度，用喷雾干燥或冷冻干燥进行干燥，收集喷雾干燥粉或冷冻干燥粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得法筚枝苷﹑邻氨基苯甲酸甲酯﹑香柑内酯﹑滨蒿内酯﹑东莨菪内酯﹑野漆树苷﹑福橘素﹑theaflavanosideⅱ、2(s)-theaflavanosideⅳ、theaflavanosideⅲ、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxy-flavanone-7-o-neohesperidoside、枸橘苷、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside、柚皮芸香苷、柚皮苷、山柰酚-3-o-芸香糖苷、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷、4′-甲氧基-异槲皮苷、槲皮素、槲皮素-3-o-β-d-吡喃葡萄糖苷、芦丁、异橙黄酮、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone、5,7-二羟基色原酮、5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮、5,3′-二羟基-7,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,4′-二羟基-7,3′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′-三羟基-8,4′,5′-三甲氧基黄酮、5,7,3′,5′-四羟基-6,4′-二甲氧基黄酮、3,5,6,4′-四羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮、5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮单体化合物。采用上述方法制备的上述单体化合物为0.1-30g/kg，上述分离得到的各单体化合物经hplc检测纯度为98.5％-99.2％，色谱条件用ods-c18分析色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水(5％-100％梯度洗脱)，检测波长为全波长，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl。
实施例19
阿尔茨海默病(alzheimer'sdisease，ad)是一种神经系统退行性疾病，老年人发病率较高，临床主要表现为记忆力减退、定向障碍和判断推理能力受损等。现在比较公认ad(即老年期痴呆)的分类包括老年性痴呆、血管性痴呆和混合性痴呆。老年斑是ad的主要病理标志，其阿尔茨海默病(ad)的病理特征为大脑皮质和海马出现大量的老年斑(sp)、神经纤维缠结(nft)、神经元大量丢失和痴呆表现，其中aβ聚集是中心环节，也是ad发病的关键性因素和关键性治疗靶点，干扰aβ的产生和阻止其聚集是防治ad的有效途径，开发抑制aβ纤丝形成和聚集的新药对预防和对症治疗ad具有良好的学术与临床应用价值。
本发明利用aβ25-35致pc12细胞损伤模型，采用mtt法检测了各实验组细胞的活力筛选并确证柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物有效部位中各单体化合物theaflavanosideⅱ(ddh1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(ddh2)、theaflavanosideⅲ(ddh3)、橙皮苷(ddh4)、新橙皮苷(ddh5)、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷(ddh6)、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-o-neohesperidoside(ddh7)、枸橘苷(ddh8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷(ddh9)、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside(ddh10)、柚皮芸香苷(ddh11)、柚皮苷(ddh12)、山柰酚-3-o-芸香糖苷(ddh13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(ddh14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(ddh15)、异橙黄酮(ddh16)、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(ddh17)、5,7-二羟基色原酮(ddh18)具有治疗阿尔茨海默病(ad)或辅助改善记忆功效的有效成分(波谱数据祥见实施例15中所述化合物)，为柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药材治疗阿尔茨海默病(ad)药物或辅助改善记忆功能保健食品的研究奠定理论基础。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实有效部位或有效成分在制备治疗老年痴呆(阿尔茨海默病)药物中的应用，其所涉及的老年痴呆(阿尔茨海默病)也可是由衰老、睡眠障碍、心脑血管疾病、神经系统疾病、胶质细胞异常导致的淀粉样蛋白aβ沉积或aβ纤丝聚集形成的老年痴呆(阿尔茨海默病)中的任意一种。
(1)药物制备：1mg的aβ25-35加超纯水4.715ml配成200μmol/l，37℃孵育24小时后，置于2-8℃冰箱中贮存，备用；柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物有效部位中各单体化合物theaflavanosideⅱ(ddh1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(ddh2)、theaflavanosideⅲ(ddh3)、橙皮苷(ddh4)、新橙皮苷(ddh5)、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷(ddh6)、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside(ddh7)、枸橘苷(ddh8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷(ddh9)、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside(ddh10)、柚皮芸香苷(ddh11)、柚皮苷(ddh12)、山柰酚-3-o-芸香糖苷(ddh13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(ddh14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(ddh15)、异橙黄酮(ddh16)、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(ddh17)、5,7-二羟基色原酮(ddh18)的水溶液：将黄酮类化合物单体ddh1～ddh18用蒸馏水配成4mmol/l的贮备液，实验时用无血清的dmem培养液依次稀释成8μmol/l、16μmol/l、24μmol/l的工作液。
(2)实验结果：不同浓度的各黄酮类ddh1～ddh18单体化合物对aβ25-35所致pc12细胞损伤的保护作用
不同浓度的柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实总提物上大孔吸附树脂的30％和70％乙醇洗脱部位经聚酰胺柱色谱纯化得总含量大于90％的总黄酮类化合物有效部位中各单体化合物theaflavanosideⅱ(ddh1)、2(s)-theaflavanosideⅳ(ddh2)、theaflavanosideⅲ(ddh3)、橙皮苷(ddh4)、新橙皮苷(ddh5)、柚皮素-7-o-龙胆二糖苷(ddh6)、2(s)-3′,4′-dimethoxy-5,7-dihydroxyflavanone-7-o-neohesperidoside(ddh7)、枸橘苷(ddh8)、6,8-二甲基-3′-甲氧基-5′-羟基-柚皮素-7-o-葡萄糖苷(ddh9)、2(s)-3′-methoxy-5,7,4′-trihydroxyflavanone-7-neohesperidoside(ddh10)、柚皮芸香苷(ddh11)、柚皮苷(ddh12)、山柰酚-3-o-芸香糖苷(ddh13)、异鼠李素-3-o-β-d-芸香糖苷(ddh14)、4′-甲氧基-异槲皮苷(ddh15)、异橙黄酮(ddh16)、6,7,8,3′4′-pentamethoxyflavone(ddh17)、5,7-二羟基色原酮(ddh18)对aβ25-35所致pc12细胞损伤有保护作用，使其细胞活力增强，表现为a492nm值上升。结果见表13。
表13不同浓度的黄酮类单体化合物ddh1～ddh18对受损的pc12细胞的保护作用(n＝8)
注：与空白对照组比较，##p<0.01；*与aβ模型组比较p<0.05；**与aβ模型组比较p<0.01
实施例20
本发明利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside，sdpbams,)模型，简称sdad模型。应用睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠对实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9中柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油组分或部位进行药理活性筛选，通过行为学(morris水迷宫)测定和生理生化相应指标的测定与检测，实验证实柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油组分或部位均能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数，延长在第四象限逗留时间。同时，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油组分或部位能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sdad)模型大鼠自主活动增加，从而起到清心除烦，延缓脑衰老，改善睡眠，抗抑郁等多种功能。其对由睡眠障碍和aβ纤丝形成聚集等多因素引起的睡眠障碍生理性脑衰老的记忆力减退(sdad)具有辅助改善记忆功能，进一步证实柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油组分或部位具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或改善轻微抑郁与焦虑症状或抗血管性老年痴呆的功能疗效。同时，柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实中挥发油或精油组分或部位及其中单体化合物比较一直，故柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的挥发油或精油组分或部位具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或改善轻微抑郁与焦虑症状或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或抗血管性老年痴呆的功能疗效。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
spf级健康sd雄性大鼠，体质量260-300g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：scxk(湘)2014-0005。饲养条件：温度20-22℃，喂以大鼠标准饲料，自由饮水。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实的挥发油或精油组分或部位和试剂与仪器设备：由实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9自行制备橙花挥发油或精油组分或部位、橙枝叶挥发油或精油组分或部位、佛手(果实)挥发油或精油组分或部位、佛手花挥发油或精油组分或部位、枳实挥发油或精油组分或部位、枳壳挥发油或精油组分或部位、陈皮挥发油或精油组分或部位、柚子皮挥发油或精油组分或部位、橙皮挥发油或精油组分或部位，各挥发油或精油组分或部位用β-环糊精包合后备用。aβ1-40(sigma公司，批号052m4801v)。zs-b型脑立体定位仪、morris水迷宫视频分析系统(北京众实迪创科技发展有限责任公司)，forma-86cult超低温冰箱(美国赛默飞)，allegra64r高速冷冻离心机(美国贝克曼库尔特)，uv-1800型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。
动物分组和动物模型的建立：将96只健康sd雄性大鼠随机分为假损伤组(sham)、睡眠障碍病症模型组(i/r)、盐酸多奈哌齐组(contrast)、橙花挥发油或精油组分或部位给药组(chy)、橙枝叶挥发油或精油组分或部位给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油或精油组分或部位给药组(fsgy)、佛手花挥发油或精油组分或部位给药组(fshy)、枳实挥发油或精油组分或部位给药组(zsgy)、枳壳挥发油或精油组分或部位给药组(zqgy)、陈皮挥发油或精油组分或部位给药组(cpy)、柚子皮挥发油或精油组分或部位给药组(yzy)、橙皮挥发油或精油组分或部位给药组(tcy)，共12组，每组8只大鼠。
睡眠障碍病症模型的建立：各实验组利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周(共21天)得睡眠障碍易发神经病变大鼠。之后，取未死亡状态良好的睡眠障碍易发神经病变大鼠再脑内注射凝聚态aβ1-40(4μ1)得诱发性睡眠障碍病症模型。
假损伤组不予处理；模型组与给药组分别按上述造模方法予以处理；模型组于脑内注射手术前10天开始灌胃β-环糊精水溶液共14天，每天1次。各给药组手术前10天开始连续灌胃给药共14天，每天1次。
morris水迷宫实验：预先在水池里注入清水使水面高出平台1-2cm，水温控制在24士2℃左右。水池内壁涂有黑漆，每次测试前须向水池内加入适量黑色墨水，水池共分为4个象限。将平台放在第四象限中间，在其他三个象限任选一点面向水池池壁将大鼠放入水中，试验历时5天，每天上午每个象限各测试一次，每次测试1min。若大鼠在1min之内尚未找到平台，则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s，若大鼠在lmin之内找到平台，也让其在平台上站15s，方结束一次训练，如此训练4天。在第5天，将平台移走，每只大鼠游lmin，记录每只大鼠第一次经过原平台的时间(潜伏期)，每只大鼠在lmin内经过平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它三个象限内逗留的时间，计算出在第四象限游泳的时间(t4)占整个游泳时间(t总)的百分比。
睡眠障碍病症模型的自主活动测试：将小动物自主活动检测装置与mp-100生理实验信号采集分析系统相连，随机在每个装置内放1只大鼠，每次检测前让动物在装置内适应5min，检测室内保持安静，防止对大鼠的活动产生影响。记录各组大鼠3min内的自主活动次数，并称量大鼠的体重变化。
与假损伤组(sham)相比，模型组(i/r)大鼠的潜伏期明显增加、显著降低过台次数，处于第四象限中的逗留时间和距离相对较短，差异显著(p<0.01)；与模型组(i/r)比较，盐酸多奈哌齐组、橙花挥发油或精油组分或部位给药组(chy)、橙枝叶挥发油或精油组分或部位给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油或精油组分或部位给药组(fsgy)、佛手花挥发油或精油组分或部位给药组(fshy)、枳实挥发油或精油组分或部位给药组(zsgy)、枳壳挥发油或精油组分或部位给药组(zqgy)、陈皮挥发油或精油组分或部位给药组(cpy)、柚子皮挥发油或精油组分或部位给药组(yzy)、橙皮挥发油或精油组分或部位给药组(tcy)等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油给药组均能缩短大鼠潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留距离及时间均增加(p<0.05或p<0.01)，说明各给药组治疗有效，提示橙花挥发油或精油组分或部位给药组(chy)、橙枝叶挥发油或精油组分或部位给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油或精油组分或部位给药组(fsgy)、佛手花挥发油或精油组分或部位给药组(fshy)、枳实挥发油或精油组分或部位给药组(zsgy)、枳壳挥发油或精油组分或部位给药组(zqgy)、陈皮挥发油或精油组分或部位给药组(cpy)、柚子皮挥发油或精油组分或部位给药组(yzy)、橙皮挥发油或精油组分或部位给药组(tcy)等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油各给药组[尤其是橙花挥发油给药组(chy)、橙枝叶挥发油给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油给药组(fsgy)]具有改善记忆功能减退和治疗阿尔茨海默病的功能疗效。结果见表14。
表14橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位对sdad模型大鼠空间探索的影响
注：与假损伤组sham比较：##p<0.01；与sdad模型组i/r比较：*p<0.05，**p<0.01
与假损伤组(sham)相比，模型组(i/r)大鼠自主活动次数减少(睡眠障碍、烦躁不安，大鼠毛色凌乱、有攻击倾向和伴有轻微抑郁与焦虑症状)，体重增加缓慢，差异显著(p<0.01)；与模型组(i/r)比较，盐酸多奈哌齐组，橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油给药组均能使模型大鼠的活动次数增加(p＜0.05或p＜0.01)和体重增加明显(p＜0.05或p＜0.01)，说明橙花挥发油或精油组分或部位给药组(chy)、橙枝叶挥发油或精油组分或部位给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油或精油组分或部位给药组(fsgy)、佛手花挥发油或精油组分或部位给药组(fshy)、枳实挥发油或精油组分或部位给药组(zsgy)、枳壳挥发油或精油组分或部位给药组(zqgy)、陈皮挥发油或精油组分或部位给药组(cpy)、柚子皮挥发油或精油组分或部位给药组(yzy)、橙皮挥发油或精油组分或部位给药组(tcy)等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油各给药组对sdad模型大鼠的自主活动、体重的调节效果明显和具有明显的改善睡眠、抗抑郁、抗焦虑的功能疗效。结果见表15。
表15橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位对sdad模型大鼠自主活动和体重变化的影响
注：与假损伤组sham比较：##p<0.01；与sdad模型组i/r比较：*p<0.05，**p<0.01
记忆力衰减、判断能力受损及睡眠障碍等是ad的症状与表现，并且睡眠障碍既是ad的病因也是病症，并能导致ad患者病情进一步发展，影响ad患者的认知功能，并使记忆力损伤加重。有学者研究发现近一半的ad患者患有失眠，随着年纪的增加，老龄人的昼夜节律、睡眠-觉醒调节系统退化，从而导致脑内中aβ蛋白沉积增多，增加患ad的风险。本实验对成年雄性大鼠进行睡眠剥夺后再脑内注射aβ蛋白，得到睡眠障碍阿尔茨海默病(sdad)大鼠模型，采用morris水迷宫行为学和自主活动测试，结果表明造模成功。
本实验将睡眠障碍(sleepdisorder，sd)和aβ蛋白等多因素引起的生理性脑衰老的记忆力减退相结合，利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍阿尔茨海默病(sdad)模型，应用睡眠障碍阿尔茨海默病模型大鼠对橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位进行药理活性筛选，通过行为学(morris水迷宫)测定和自主活动、体重的变化检测，实验证实橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位给药各组均能使睡眠障碍阿尔茨海默病(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数，延长在第四象限逗留时间和距离。同时，还能提升模型大鼠自主活动次数，从而起到抑制脑衰老、理气解郁、缓解疲劳、改善睡眠和改善轻微抑郁与焦虑症状等功能。本文研究结果表明，sdad模型组(i/r)大鼠学习记忆能力下降，精神萎靡不振，体重增加缓慢；而橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位给药各组能改善试验大鼠的学习记忆功能，改善精神状态，体重变化正常，具有抑制脑衰老、理气解郁、缓解疲劳、改善睡眠和改善轻微抑郁与焦虑症状等功能。可见，橙花、佛手等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位给药各组(尤其是橙花挥发油给药组、橙枝叶挥发油给药组)可有效清除氧自由基，提高机体的抗氧化及神经保护能力来改善睡眠障碍阿尔茨海默病(sdad)模型大鼠的学习记忆功能。
上述研究进一步证实橙花挥发油给药组(chy)、橙枝叶挥发油给药组(czyy)、佛手(果实)挥发油给药组(fsgy)、佛手花挥发油给药组(fshy)、枳实挥发油给药组(zsgy)、枳壳挥发油给药组(zqgy)、陈皮挥发油给药组(cpy)、柚子皮挥发油给药组(yzy)、橙皮挥发油给药组(tcy)等9种柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油组分或部位具有抑制脑衰老、理气解郁、缓解疲劳、改善睡眠、抗抑郁、抗焦虑、改善记忆功能减退和治疗阿尔茨海默病的功能疗效。
实施例21
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实主要含有挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含有的上述挥发油、多糖、氨基酸、微量元素、果胶、黄酮类活性成分、生物碱类活性成分、二萜类活性成分和香豆素类活性成分用于制备各类上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实所含成分可用于评鉴和质量控制上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实药物或茶品或饮料或食品。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，将主要含有挥发油或精油类化合物上述实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10、实施例11、实施例12、实施例13、实施例14、实施例15、实施例16、实施例17、实施例18、实施例19、实施例20中上述柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实获得或所含有的挥发油或精油部位继续应用分馏法、冷冻析晶法、分子蒸馏技术、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ods-c18柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和制备高效液相色谱分离得到α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑a-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑b-榄香烯﹑1-石竹烯﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷单体化合物，上述单体化合物含量大于98.5％。上述得到的各单体化合物经hplc检测纯度为98.5％-99.2％，色谱条件用ods-c18分析色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(5％-100％梯度洗脱)，检测波长为全波长(主要检测205nm或215nm或235nm或254nm)，流速为1.0ml/min，柱温30℃，进样量20μl。或应用气相色谱-质谱联用技术(gc-ms)分析与鉴定芳香性挥发类原料药及其中上述单体化合物。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实挥发油或精油部位及其制备的成分在制备改善睡眠或抗抑郁或改善记忆力减退或治疗阿尔茨海默病或治疗心脑血管系统缺血性疾病药物或保健食品中的应用，优选橙花或橙枝叶制备的挥发油或精油部位及其制备的成分本身是α-侧柏烯﹑α-蒎烯﹑苯乙醇﹑β-水芹烯﹑桧烯﹑β-蒎烯﹑β-月桂烯﹑苯乙醛﹑a-水芹烯﹑3-蒈烯﹑2-蒈烯﹑对伞花烃﹑(+)-柠檬烯﹑(e)b-罗勒烯(反-β-罗勒烯)﹑β-罗勒烯﹑γ-松油烯(gamma-萜品烯)﹑4-(2-甲氨基)乙基-吡啶﹑异松油烯(萜品油烯)﹑芳樟醇﹑(z)-3,7-二甲基-1,3,6-十八烷三烯﹑2-氨基-苯甲酸甲酯﹑苯乙醇﹑4-萜烯醇(4-松油醇)﹑橙花醇﹑甲位松油醇﹑香茅醛﹑吲哚﹑香叶醇(牻牛儿醇)﹑乙位松油醇﹑5-苯基戊烯﹑乙酸苯乙酯﹑香叶基丙酮﹑乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑b-榄香烯﹑1-石竹烯﹑alpha-律草烯(α-石竹烯)﹑荜澄茄油烯﹑α-金合欢烯(α-芹子烯)﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑8-十七烷烯﹑12-甲基1,5.9,11-十三碳烯﹑金合欢醇﹑2-十五烷-1-醇﹑反式-金合欢醇乙酸酯﹑二十三烷中的至少一种。优选橙花挥发油或精油中总萜烯类约为40％(主要为水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯)，总萜烯醇类约为40％(主要为芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇)，总萜烯酯类约为10％(主要为乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯)，总倍半萜烯醇类约为6％(主要为金合欢烯﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑金合欢醇)，其它类约为4％。或优选橙枝叶挥发油或精油中总萜烯类约为70％(主要为水芹烯﹑桧烯﹑蒎烯﹑柠檬烯﹑罗勒烯)，总萜烯醇类约为20％(主要为芳樟醇﹑橙花醇﹑香叶醇﹑松油醇)，总萜烯酯类约为2％(主要为乙酸芳樟酯﹑甲酸香叶酯﹑乙酸橙花酯﹑金合欢醇乙酸酯)，总倍半萜烯醇类约为3％(主要为金合欢烯﹑橙花叔醇﹑香茅醇﹑金合欢醇)，其它类约为5％。
橙花来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的花及花蕾或芸香科柑橘属所有植物的花及花蕾，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾，优选芸香科柑橘属所有植物的新鲜花或花蕾低温真空冷冻干燥花蕾或花，更具体的为酸橙花或花蕾、回青橙花或花蕾、玳玳花或花蕾、代代花或花蕾、枳实花或花蕾、枳壳花或花蕾、苦橙花或花蕾、甜橙花或花蕾、脐橙花或花蕾、橙的花或花蕾、柠檬花或花蕾、柑橘花或花蕾、化橘红花或花蕾、柚的花或花蕾、金桔(金橘)的花或花蕾和佛手花或花蕾；
橙枝叶其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的枝叶或芸香科柑橘属所有植物的枝叶，优选为芸香科柑橘属所有植物的新鲜枝叶，更具体得为芸香科柑橘属所有植物酸橙的枝叶、回青橙的枝叶、玳玳的枝叶、代代的枝叶、枳实的枝叶、枳壳的枝叶、苦橙的枝叶、甜橙的枝叶、脐橙的枝叶、橙的枝叶、柠檬的枝叶、柑橘的枝叶、化橘红的枝叶、柚的枝叶、金桔(金橘)的枝叶和佛手的枝叶。
柑橘属植物的果实其来源主要为芸香科柑橘属及其变种植物的果实或芸香科柑橘属所有植物的果实，具体为芸香科柑橘属所有植物的新鲜果实，优选芸香科柑橘属植物的果实为陈皮、橘皮、桔、柑橘(柑桔)、金橘(金桔)、柚、枳实、枳壳、化橘红和佛手柑(佛手)。
柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实制备的精油或挥发油组分或部位的香气主要为木香﹑花香﹑脂香﹑柑橘香﹑玫瑰香和甜香等香气的混合体。柑橘属植物的花蕾或花或枝或叶或果实精油或挥发油因原料产地来源﹑采摘时间和加工方法等条件不同，精油成分也会有所差异。
表16橙花或橙枝叶挥发油或精油主要成分(％)gc-ms含量表与对照表
表17法国橙花精油与赣南橙花(甜橙)精油主要成分(％)gc-ms对比分析与对照表
表18柑橘属花枝叶果实挥发油或精油主要成分(％)gc-ms含量表与对照表
以上仅就本发明的最佳实施例作了说明，但不能理解为是对权利要求的限制。本发明不仅局限于以上实施例，其具体结构允许有变化。凡在本发明独立权利要求的保护范围内所作的各种变化均在本发明保护范围内。