本发明涉及一种缓解体力疲复方制剂及其制备方法。
背景技术：
疲劳(fatigue)是一种日常普遍存在的、涉及多种生理生化因素的疾病状态，是机体脑力或体力到达一定程度必然出现的生理现象。主要表现为运动能力降低、工作效率下降、差错事故增多、战斗力减退等。随着现代生活节奏的加快、工作压力的增大，疲劳越来越成为影响人们生活质量的重要因素。据who统计显示，全球约有超过35％以上的人群处于疲劳状态，其中中年男性人群疲劳状态达到60％。机体产生疲劳后如不及时恢复，随着疲劳程度的累积，则会进一步导致“过劳”、“慢性疲劳综合症”、“过度训练综合症”等症状的出现。并最终引起机体内分泌紊乱、免疫力下降，甚至出现器质性疾病。
疲劳产生的机制尚不清楚，主要有能源物质耗竭学说、代谢产物堆积学说、离子代谢紊乱学说、氧自由基-脂质过氧化学说、大脑皮层保护性指令学说、机体内环境失调等多种学说。已上市的抗疲劳药物或保健食品均是在上述学说基础上开发研制的。目前抗疲劳药物或保健品多为大脑皮层兴奋类，如咖啡因、牛磺酸、苯丙胺、哌甲酯等，此类药物或保健食品抗疲劳作用明显，但多具有潜在成瘾性和不良反应。目前具有抗疲劳作用的中药组合物由于副作用相对较小，越来越为人们所推崇。但是中药组合物的缓解体力疲劳产品较少，不能满足现代社会的需求，部分组合物疗效不显著、不稳定或服用量较大，亟待质量可靠、疗效显著的缓解体力疲劳组合物。
技术实现要素：
本发明目的在于，提供了一种缓解体力疲劳复方制剂及其制备方法，该复方制剂以1000g为基数是由按质量百分比的干姜、黑胡椒、荜茇、肉桂、余甘子、毛诃子肉、白花丹、广防己、中亚白及、奶桃、白皮松子仁、洋甘菊和红葡萄干，加上医学上可接受的辅料制成片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂或膏剂。实验证明，本发明所述的缓解体力疲劳复方制剂具有协同缓解体力疲劳的作用，提高机体抗病能力。
本发明所述的一种缓解体力疲劳复方制剂，该复方制剂以1000g为基数是由按质量百分比的干姜1-5份、黑胡椒1-5份、荜茇1-5份、肉桂1-5份、余甘子1-5份、毛诃子肉1-5份、白花丹1-5份、广防己1-5份、中亚白及1-5份、奶桃1-5份、白皮松子仁1-5份、洋甘菊3-8份、红葡萄干5-10份，加上医学上可接受的辅料制成片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂或丸剂。
所述一种缓解体力疲劳复方制剂的制备方法，取干姜1-5份、黑胡椒1-5份、荜茇1-5份、肉桂1-5份、余甘子1-5份、毛诃子肉1-5份、白花丹1-5份、广防己1-5份、中亚白及1-5份、奶桃1-5份、白皮松子仁1-5份、洋甘菊3-8份、红葡萄干5-10份分别粉碎后混合，加入8-12倍体积的水，浸泡20-40min，回流提取1-3次，每次1-4h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料制成片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂或丸剂。
具体实施方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1
以1000g为基数制备片剂：
取干姜1份、黑胡椒1份、荜茇1份、肉桂1份、余甘子1份、毛诃子肉1份、白花丹1份、广防己1份、中亚白及1份、奶桃1份、白皮松子仁1份、洋甘菊3份、红葡萄干5份分别粉碎后混合，加入8倍体积的水，浸泡20min，回流提取1次，时间4h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成片剂。
实施例2
以1000g为基数制备片剂：
取干姜3份、黑胡椒3份、荜茇3份、肉桂3份、余甘子3份、毛诃子肉3份、白花丹3份、广防己3份、中亚白及3份、奶桃3份、白皮松子仁3份、洋甘菊5份、红葡萄干8份分别粉碎后混合，加入10倍体积的水，浸泡30min，回流提取2次，每次2h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成片剂。
实施例3
以1000g为基数制备片剂：
取干姜5份、黑胡椒5份、荜茇5份、肉桂5份、余甘子5份、毛诃子肉5份、白花丹5份、广防己5份、中亚白及5份、奶桃5份、白皮松子仁5份、洋甘菊8份、红葡萄干10份分别粉碎后混合，加入12倍体积的水，浸泡40min，回流提取3次，每次1h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成片剂。
实施例4
以1000g为基数制备胶囊剂：
取干姜2份、黑胡椒2份、荜茇2份、肉桂2份、余甘子2份、毛诃子肉2份、白花丹2份、广防己2份、中亚白及2份、奶桃2份、白皮松子仁2份、洋甘菊4份、红葡萄干6份分别粉碎后混合，加入9倍体积的水，浸泡25min，回流提取1次，时间2h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成胶囊剂。
实施例5
以1000g为基数制备胶囊剂：
取干姜1份、黑胡椒3份、荜茇2份、肉桂1份、余甘子3份、毛诃子肉2份、白花丹1份、广防己5份、中亚白及4份、奶桃1份、白皮松子仁2份、洋甘菊3份、红葡萄干5份分别粉碎后混合，加入8倍体积的水，浸泡20min，回流提取2次，每次1h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成胶囊剂。
实施例6
以1000g为基数制备胶囊剂：
取干姜3份、黑胡椒5份、荜茇2份、肉桂3份、余甘子4份、毛诃子肉5份、白花丹3份、广防己1份、中亚白及2份、奶桃5份、白皮松子仁4份、洋甘菊5份、红葡萄干7份分别粉碎后混合，加入9倍体积的水，浸泡35min，回流提取3次，每次1h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成胶囊剂。
实施例7
以1000g为基数制备口服液：
取干姜3份、黑胡椒3份、荜茇3份、肉桂3份、余甘子3份、毛诃子肉3份、白花丹3份、广防己3份、中亚白及3份、奶桃3份、白皮松子仁3份、洋甘菊4份、红葡萄干7份分别粉碎后混合，加入8倍体积的水，浸泡20min，回流提取2次，每次3h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成口服液。
实施例8
以1000g为基数制备口服液：
取干姜1份、黑胡椒1份、荜茇3份、肉桂3份、余甘子1份、毛诃子肉5份、白花丹3份、广防己5份、中亚白及5份、奶桃5份、白皮松子仁1份、洋甘菊3份、红葡萄干5份分别粉碎后混合，加入9倍体积的水，浸泡30min，回流提取2次，每次2h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成口服液。
实施例9
以1000g为基数制备口服液：
取干姜5份、黑胡椒1份、荜茇1份、肉桂5份、余甘子3份、毛诃子肉4份、白花丹1份、广防己5份、中亚白及5份、奶桃2份、白皮松子仁4份、洋甘菊6份、红葡萄干8份分别粉碎后混合，加入10倍体积的水，浸泡35min，回流提取3次，每次1h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成口服液。
实施例10
以1000g为基数制备颗粒剂：
取干姜5份、黑胡椒5份、荜茇5份、肉桂5份、余甘子5份、毛诃子肉5份、白花丹5份、广防己5份、中亚白及5份、奶桃5份、白皮松子仁5份、洋甘菊8份、红葡萄干10份分别粉碎后混合，加入12倍体积的水，浸泡40min，回流提取3次，每次1.5h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成颗粒剂。
实施例11
以1000g为基数制备颗粒剂：
取干姜4份、黑胡椒3份、荜茇2份、肉桂5份、余甘子3份、毛诃子肉2份、白花丹1份、广防己2份、中亚白及3份、奶桃1份、白皮松子仁4份、洋甘菊7份、红葡萄干9份分别粉碎后混合，加入11倍体积的水，浸泡38min，回流提取2次，每次3h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成颗粒剂。
实施例12
以1000g为基数制备丸剂：
取干姜4份、黑胡椒4份、荜茇4份、肉桂4份、余甘子4份、毛诃子肉4份、白花丹4份、广防己4份、中亚白及4份、奶桃4份、白皮松子仁4份、洋甘菊6份、红葡萄干8份分别粉碎后混合，加入12倍体积的水，浸泡40min，回流提取3次，每次1h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成丸剂。
实施例13
以1000g为基数制备丸剂：
取干姜3份、黑胡椒1份、荜茇2份、肉桂5份、余甘子2份、毛诃子肉4份、白花丹1份、广防己2份、中亚白及5份、奶桃1份、白皮松子仁3份、洋甘菊4份、红葡萄干5份分别粉碎后混合，加入8倍体积的水，浸泡20min，回流提取1次，时间3h，减压浓缩，真空干燥，加上医学上可接受的辅料按常规方法制成丸剂。
实施例14
为验证应用效果，将实施例1-13任意一种缓解体力疲劳复方制剂一步展开大量专项试验：
1实验材料
实施例1-13任意一种缓解体力疲劳复方制剂，诺迪康胶囊为四川诺迪康威光制药有限公司；氰化高铁血红蛋白测试盒、糖原测试盒、乳酸(ld)测试盒、血尿素氮(bun)测试盒均购自南京建成生物工程研究所，其余在试验过程中使用到的试剂均为分析纯；icr小鼠，雄性，体重16-20g，由新疆医科大学实验动物中心提供(合格证号：65000700000630)，置于温度为20-22℃，光照/黑暗(12h/12h)条件下适应性饲养2-3d；
2实验方法
2.1动物分组及给药
选取60只icr小鼠按体重随机分为正常组，阴性对照组，诺迪康组，复方制剂低、中、高剂量组，每组均为10只；正常组不做处理，阴性对照组以0.2ml/10g的蒸馏水灌胃，诺迪康组以0.28g/kg的诺迪康灌胃，复方制剂低、中、高剂量组分别以0.1082、0.541和1.082g/kg的组合物灌胃，1次/天，连续灌胃14天。给药期间每隔2d称取小鼠体重；
2.2疲劳转棒检测
在阴性对照组、诺迪康组和复方制剂给药组等各组icr小鼠灌胃第13天开始疲劳转棒检测，给药30min后，除正常组外，将其余各组小鼠置于疲劳转棒仪上以20rpm训练3min，然后仍以20rpm的转速检测小鼠掉落时间，即为疲劳潜伏期(s)；
2.3负重游泳检测
小鼠末次灌胃30min后，除正常组外，其余小鼠均在距尾根部1cm处负荷5％体重的铅皮，然后将小鼠置于体积为37×37×50cm，水深40cm，水温为25±1℃的游泳箱中游泳；放于水中后立即计时，至小鼠头部没入水面10s不能浮出，即为小鼠力竭时间(min)；
2.4对小鼠心脏、肝脏、肾脏、胸腺和脾脏质量的影响
负重游泳检测完成并摘眼球取血后，小鼠脱劲处死，常规解剖取小鼠心脏、肝脏、肾脏、胸腺和脾脏，计算脏体比值；
2.5对小鼠血红蛋白、肝糖原、肌糖原、乳酸和血尿素氮的影响
负重游泳检测完成后，小鼠休息30min后摘眼球取血，置于肝素钠抗凝管和非抗凝管。肝素钠抗凝血用于测定血红蛋白，然后其余血样以3500rpm离心10min，分离血清或血浆，测定血乳酸和血尿素氮；取完血后的小鼠，取肝脏和腓肠肌经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏、肌肉，测定肝糖原和肌糖原含量；
2.6数据处理：数据均以
3结果与分析
3.1对小鼠体重的影响
由表1可知，与正常组和阴性对照组比较，诺迪康和复方制剂给药组灌胃给药后0d、3d、6d、9d、12d和14d，小鼠体重无显著性差异(p＞0.05)；
表1小鼠体重变化(
注：与正常组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01；与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.2对小鼠心脏、肝脏、肾脏、胸腺和脾脏质量的影响：
由表2可知，与正常组和阴性对照组比较，诺迪康和复方制剂给药组连续灌胃给药14d后，小鼠心脏指数、肝脏指数、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数均无显著性差异(p＞0.05)；
表2小鼠心脏、肝脏、肾脏、脾脏和胸腺指数(
注：与正常组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01；与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.3对小鼠疲劳转棒和负重游泳力竭时间的影响：
由表3可知，与阴性对照组比较，组合物和诺迪康给药组可显著性延长小鼠负重游泳时间及疲劳转棒时间；
表3小鼠负重游泳和疲劳转棒时间(
注：与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.4对小鼠血红蛋白、肝糖原、肌糖原、乳酸和血尿素氮的影响：
由表4可知，与正常组比较，阴性对照组小鼠经负重游泳后，其血红蛋白、肝糖原和肌糖原含量明显降低，而乳酸和血尿素氮含量显著升高。与阴性对照组比较，组合物和诺迪康给药组小鼠血红蛋白、肝糖原和肌糖原含量显著升高，乳酸和血尿素氮含量明显降低；
表4小鼠血红蛋白、肝糖原、肌糖原、血乳酸和血尿素氮含量(
注：与正常组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01；与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01。
实施例3
1实验材料
缓解体力疲劳复方制剂；诺迪康胶囊为四川诺迪康威光制药有限公司；氰化高铁血红蛋白测试盒购自南京建成生物工程研究所，其余在试验过程中使用到的试剂均为分析纯；icr小鼠，雄性，体重16-20g，由新疆医科大学实验动物中心提供(合格证号：65000700000630)，置于温度为20-22℃，光照/黑暗(12h/12h)条件下适应性饲养2-3d；
2实验方法
2.1动物分组及给药：
选取150只icr小鼠按体重随机分为阴性对照组，诺迪康组，复方制剂低、中、高剂量组，每组均为30只。阴性对照组以0.2ml/10g的蒸馏水灌胃，诺迪康组以0.28g/kg的诺迪康灌胃，组合物低、中、高剂量组分别以0.1082、0.541和1.082g/kg的组合物灌胃，1次/天，连续灌胃14天；
2.2小鼠常压耐缺氧实验：
小鼠末次给药30min后，每组选取其中10只，将小鼠放于盛有15g钠石灰的250ml广口瓶中，立即用涂有白凡士林的橡胶塞盖紧瓶口开始计时后，再在瓶口与橡胶塞交接处迅速均匀的涂上凡士林，以保证其密闭性，以小鼠呼吸停止时为截点，记录其存活时间(min)；
2.3小鼠亚硝酸钠中毒缺氧实验：
小鼠末次给药30min后，每组另选10只，腹腔注射400mg/kg的亚硝酸钠溶液，并立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠存活时间(min)；
2.4小鼠全血血红蛋白含量测定：
小鼠末次给药30min后，将每组剩余的10只小鼠摘眼球取血，置于肝素钠抗凝管中。吸取全血10μl，加入2.5mlhb稀释应用液，充分混匀并静止5min后，于540nm波长测定吸光度值。计算血红蛋白含量(g/l)＝(测定od-空白od)×367.7；
2.5数据处理：数据均以
3结果与分析
3.1对小鼠常压耐缺氧的影响：
由表5可知，icr小鼠经连续灌胃组合物和诺迪康14d后，其缺氧存活时间较阴性对照显著增加(p﹤0.05或p﹤0.01)；
表5小鼠常压缺氧存活时间(
注：与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.2对小鼠亚硝酸钠中毒缺氧的影响：
由表6可知，连续灌胃组合物和诺迪康14d后，小鼠亚硝酸钠中毒缺氧后的存活时间较阴性对照显著增加(p﹤0.05或p﹤0.01)；
表6小鼠亚硝酸钠中毒缺氧存活时间(
注：与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.3对正常小鼠血红蛋白的影响：
由表7可知，icr小鼠经连续灌胃组合物和诺迪康14d后，其血红蛋白含量较阴性对照组有显著升高(p﹤0.05或p﹤0.01)；
表7小鼠血红蛋白含量
注：与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01。
实施例4
1实验材料
缓解体力疲劳复方制剂；dmem培养基为gibco的产品，胎牛血清为hyclone的产品，氨苄青霉素钠和硫酸链霉素均购自sigma公司，ratroselisakit购自武汉基因美公司，乳酸脱氢酶(ldh)测试盒、超氧化物歧化酶(sod)测定试剂盒、丙二醛(mda)测定试剂盒、bca蛋白含量测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；细胞株：a-673人横纹肌肉瘤细胞购自于中国科学院细胞库；
2实验方法
2.1a-673细胞的培养：
将a-673细胞以5×105个/ml接种于含10％胎牛血清、1.5g/l的nahco3、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素的dmem培养基中，置于温度37℃，体积分数5％的co2培养箱中培养，每隔3天换一次液；
2.2细胞氧化损伤模型建立及细胞给药：
当培养瓶中a-673细胞融合率达到80％左右时，用含10％胎牛血清(fbs)的rpmidmem培养基吹打下来，调节细胞密度至5×104个/ml，以100μl/孔铺至96孔培养板。培养48h后分组给药，分别设定：正常对照组，模型组，阳性药组，复方制剂低、中、高剂量组；模型组用400μm/l的h2o2诱导；阳性药为4.3mg/l(10μm/l)的vitmine溶液；复方制剂给药浓度为：10、100、1000mg/l；各给药组作用24h后，加入mtt，继续培养4h，吸弃培养液，加入dmso震荡溶解后，于multiskango1510酶标仪测定490nm处吸光度值；
2.3对细胞ldh、ros、mda、sod的影响：
细胞给药处理后，收集细胞培养上清液，参照试剂盒说明书测定培养液中ldh酶活性、ros含量、mda含量和sod活性；
2.4数据处理：数据均以
3结果与分析
3.1对细胞ldh、ros、mda、sod的影响：
由表8可知，a-673细胞经400μm/l的h2o2诱导24h后，细胞ldh、ros和mda明显升高，sod活性降低。而复方制剂和vite作用后细胞ldh、ros和mda显著降低，sod活性明显升高；
表8a-673细胞上清液中ldh、sod活性和ros、mda含量
注：与正常组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01；与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；
3.2对细胞凋亡的影响：
由表9可知，a-673细胞经400μm/l的h2o2诱导24h后，早期细胞凋亡比率较正常组升高，而组合物和vite作用后细胞早期细胞凋亡比率较阴性对照组显著降低；
表9a673细胞凋亡变化
注：与正常组比较，△p﹤0.05，△△p﹤0.01；与阴性对照组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01。