本发明涉及药品开发领域。更具体地说，本发明涉及一种提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药及制备方法。
背景技术：
：免疫力低下可见于各种年龄的人群，如儿童、老年人、器官移植术后长期服用免疫抑制剂的人群、接受放化疗的恶性肿瘤患者、营养缺乏引起的免疫力下降人群、长期从事接触传染性疾病几率较大的医务工作者以及深处巨大生活压力下的中年人等，在人群中分布较广。其中，对于深处巨大生活、职场压力的中年人而言，由于人到中年后，中年人的思维和大脑的活动频繁，由此导致压力增大，睡眠越来越少，睡眠质量越来越差，进而导致机体免疫功能过低，容易引起细菌和病毒感染，并且容易感到疲劳、肠胃功能下降、自身保护能力差、易受到传染病的侵袭、精神萎靡、身心憔悴、易发生严重感染等。此外，近年来随着生活方式的改变，睡眠障碍与糖尿病都呈逐渐增长的流行趋势。有研究显示睡眠持续时间与糖耐量受损和糖尿病流行密切相关。睡眠持续障碍者患肥胖、糖尿病、心血管疾病的风险明显升高，而糖尿病患者失眠患病率也显著高于普通人群。长期睡眠不足会引发一系列负性的生理改变，包括交感神经兴奋、应激系统启动，体内皮质醇、肾上腺素等“升血糖激素”分泌增加，拮抗胰岛素作用，引起肥胖和胰岛素抵抗，血糖升高。同时，睡眠时间不足不仅增加糖尿病的发生，而且会增加糖尿病并心脑血管并发症的发病风险。而同样的，伴随糖尿病而生的睡眠障碍也将会带来免疫力下降、心气不足等不良症状。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明提供了一种提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药及其制备方法，其通过特殊提取工艺制备南瓜籽提取物、酵母提取物以及酸枣仁提取物，使其活性成分充分释放，且通过与其他组分(如富硒蛹虫草粉、复合维生素b、色氨酸以及女贞子等中草药成分)的合理配合使用来获得一种小分子多肽植物药，以达到良好的增强免疫力以及安神助眠效果。为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药，按重量份计，其包括：大豆肽粉18-25份、南瓜籽提取物15-20份、富硒蛹虫草粉5-8份、酸枣仁提取物3-5份、酵母提取物1-2份、复合维生素b0.5-0.8份、海藻糖3-6份、大豆低聚糖1-2份、色氨酸0.5-0.8份、大枣5-8份、女贞子3-5份、五味子3-5份、茯苓5-8份、麦冬2-3份。优选的，所述南瓜籽提取物的制备方法包括如下步骤：s11、取新鲜南瓜籽，在25℃下浸泡10-12h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得南瓜籽粉；s12、取南瓜籽粉，并在其中加入其重量10-12倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：第一次酶解：将酶解原料的ph值调节至8.0-9.0，按酶解原料重量的3-4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至3.5-4.5，按第一次酶体系重量的3.5-4.5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至45-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；s13、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得南瓜籽酶解体系；s14、在所述南瓜籽酶解体系中加入其重量0.01％的磷脂酶以及0.02％的胰酶，记录此时南瓜籽酶解体系总体积数值；再对此时的南瓜籽酶解体系进行温度处理，以获得南瓜籽浸提体系；所述温度处理过程包括：升温至35-45℃，保温60-90min，再降温至30-40℃，保温25-35min，并记录此时反应体系的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*65％补入含有去离子水和磷脂酶、胰酶的第一混合液，且按照重量比计，第一混合液中含有去离子水97.5％、磷脂酶1％、胰酶1.5％；补入第一混合液后，升温至45-50℃，保温75-85min，再降温至40-45℃，保温30-35min，并记录此时反应体系的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*45％补入含有去离子水和磷脂酶、胰酶的第二混合液，且按照重量比计，第二混合液中含有去离子水98％、磷脂酶1％、胰酶1％；补入第二混合液后，升温至55-65℃，保温80-90min，再降温至50-60℃，保温40-45min；s15、在所述南瓜籽浸提体系中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后获得南瓜籽粗提液；再将所述南瓜籽粗提液经硅藻土过滤，得到一级南瓜籽清液，且过滤压力为0.25-0.35mpa；再在所述一级南瓜籽清液中按其重量加入3％的活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，以获得二级南瓜籽清液；s16、将所述二级南瓜籽清液经过滤孔径为0.2-1.0μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为50-60℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经截留分子量为120-220kda卷式超滤膜进行过滤，过滤温度为55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经截留分子量为200-1200da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度为30-40℃，以得到所述南瓜籽提取物。优选的，所述胰酶包括胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，且按重量份计，胰蛋白酶：胰淀粉酶：胰脂肪酶＝1:1:2。优选的，所述酵母提取物的制备方法包括：s21、将活性干酵母放入发酵罐中，且所述发酵罐的直径为30-40cm，向其中加入活性干酵母重量3-5倍的水搅拌均匀，以获得酵母原液；s22、采用若干脉冲激光光源对所述酵母原液进行照射，照射时间为20-30min，且照射的同时于200-300转/min的条件下对所述酵母原液进行搅拌，以及同时对酵母原液进行超声处理，超声功率为100kw，超声处理温度为30-35℃；每一脉冲激光在所述酵母原液液面上形成的光斑直径为0.5-1cm，且每一脉冲激光作用于所述酵母原液的激光能量为50mj；s23、对经步骤s22处理后的酵母原液进行酶解处理；且所述酶解处理过程包括：(1)、酶解1：将经步骤s22处理后的酵母原液温度升至20-25℃，再按照15℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持1min，再使所述酵母原液按照10℃/min的速率升至20-25℃；升温至20-25℃后，在所述酵母原液中加入其重量1％的碱性蛋白酶和1.5％的木瓜蛋白酶，调节ph至7.0-8.0以及调节温度至50-60℃，水解反应10-12h；将经碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液温度调节至40-55℃，加入将经碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液重量1％的蜗牛酶以及2.0％的胰酶后调节ph至6.5-7.5，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述酵母原液进行搅拌，水解反应3-4h，以获得第一酶解液；(2)酶解2：将所述第一酶解液温度调整至20-25℃，再按照10℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持0.5min，再使所述第一酶解液按照10℃/min的速率升至20-25℃；升至20-25℃后，在所述第一酶解液中加入其重量0.5％的酸性蛋白酶和1.5％的核酸酶，调节ph至4.5-6.0以及调节温度至45-50℃，反应8-10h；将酸性蛋白酶、核酸酶处理的第一酶解液温度调节至40-55℃，加入将经酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液重量0.5％的蜗牛酶以及1.0％的胰酶后调节ph至6.0-7.5，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述第一酶解液进行搅拌，水解时间为2-3h，以获得第二酶解液；(3)酶解3：将所述第二酶解液温度调整至20-25℃，再按照5℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持0.5min，再使所述第二酶解液按照12℃/min的速率升至20-25℃；升至20-25℃后，在所述第二酶解液中加入其重量0.5％的谷氨酰胺酶与1.0％的脱氨酶，调节ph至5.5-6.0以及调节温度至45-50℃，反应3-4h；将经谷氨酰胺酶、脱氨酶处理的第二酶解液温度调节至40-55℃，加入将经谷氨酰胺酶、脱氨酶处理的第二酶解液重量1％的蜗牛酶以及1％的胰酶后调节ph至6.5-7.5，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述第二酶解液进行搅拌，水解时间为2-3h，以获得第三酶解液；s24、待酶解完成后，对获得的第三酶解液升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得酵母提取物原液；s25、在酵母提取物原液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在55℃下保温60-90min后离心，去沉渣后得到酵母提取物清液，且过滤压力为0.25-0.35mpa；s26、将酵母提取物清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，控制操作温度在40℃以下，得到酵母提取物浓缩液；s27、通过真空冷冻干燥方法对酵母提取物浓缩液进行干燥，以获得酵母提取物。优选的，所述活性干酵母细胞蛋白质含量为40-45％，碳水化合物含量为8-10％，含水量为4-5％。优选的，步骤s14中，对南瓜籽酶解体系进行温度处理的同时进行超声处理，所述超声功率为200-400w，超声处理时间为10-15min。优选的，所述酸枣仁提取物的提取方法包括：s31、取新鲜酸枣仁，在25℃下浸泡12-24h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得酸枣仁粉；s32、取酸枣仁粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：第一次酶解：按酸枣仁粉重量的3％加入胰蛋白酶以及按酸枣仁粉重量的20-25％加入用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液，调节ph值至6.5-7.5，充分搅拌，且搅拌的同时升温至42-45℃，保温30-45min后得到第一酶解体系；所述透性调节液由酸溶液、甘油、氯化钠和溶菌酶组成，且按重量比计，酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：(0.6-1.2)：(0.03-0.05)：(0.04-0.05)；第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-60℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的3％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；s33、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得酸枣仁酶解液；s34、在酸枣仁酶解液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣；再将去沉渣后的酸枣仁酶解液经硅藻土过滤，得到酸枣仁提取液，且过滤压力控制在0.3-0.4mpa；s35、对所述酸枣仁提取液进行浓缩干燥，以获得所述酸枣仁提取物。还提供一种提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药的制备方法，其包括如下步骤：s100、制备南瓜籽提取物、酸枣仁提取物以及酵母提取物；s200、将如权利要求1所述重量份的各原料充分混合，以获得原料混合物，再将所述原料混合物置于一级发酵罐中，加入所述原料混合物重量5-8倍的去离子水以及所述原料混合物重量0.1-0.3倍的黑曲霉菌种，调节ph为6.5-7，且调节至45-65℃进行一级发酵，发酵36-48h后分离出液态的第一发酵液；分离出所述第一发酵液后，向一级发酵罐内的残留物中加入所述一级发酵罐内的残留物重量3-5倍的去离子水以及所述一级发酵罐内的残留物重量0.1-0.3倍的黑曲霉菌种，调节ph为6.5-7，且调节至45-65℃再次进行一级发酵，发酵24-36h后分离出液态的第二发酵液；s300、将所述第一发酵液、第二发酵液合并转移至二级发酵罐中，加入所述第一发酵液与第二发酵液重量总和2-3倍的去离子水以及所述第一发酵液与第二发酵液重量总和0.2-0.3倍的生孢噬纤维菌菌种，调节ph为6.8-7，且调节至30-40℃进行二级发酵，发酵24-36h后获得分离出液态的第三发酵液；s400、分离出所述第三发酵液后，将所述二级发酵罐中的残留物与一级发酵罐中再次进行一级发酵、且分离出液态的第二发酵液后的残留物合并，加入合并后残留物重量总和1-2倍的去离子水、合并后残留物重量总和0.05-0.15倍的黑曲霉菌种以及0.05-0.20倍的生孢噬纤维菌菌种，调节ph为6.8-7，且调节至30-40℃进行再次发酵，发酵24-36h后分离出液态的第四发酵液；s500、将第三发酵液以及第四发酵液合并，以获得合并发酵液，并对所述合并发酵液进行离心，去除沉淀后获得发酵清液；s600、在发酵清液中加入体积分数85％的乙醇，于8-10℃温度条件下按照100-200转/min搅拌20-40min，且按体积比计，所述发酵清液：乙醇＝(2-5)：1；搅拌后将发酵清液与甲醇的混合液依次通过孔径为4-8μm的滤膜、0.2-0.5μm的微滤膜、截流分子量为3000-10000da的超滤膜以及截流分子量为300-800da的纳滤膜进行过滤；其中，通过孔径为4-8μm的滤膜、0.2-0.5μm的微滤膜过滤时的过滤压力均为0.2-0.4mpa，过滤温度均为25-35℃；通过截流分子量为3000-10000da的超滤膜以及截流分子量为300-800da的纳滤膜进行过滤时的过滤压力均为1.5-2.0mpa，过滤温度均为25-35℃；s700、经过纳滤膜过滤后的纯化后的发酵清液置于减压浓缩罐中，加热至45-65℃进行真空减压浓缩，以获得浓缩液；s800、通过真空冷冻干燥方法对浓缩液进行干燥，再将干燥后的原料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8mpa，造粒温度为75-85℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；s900、对所述粗成品进行过筛，最终获得所述降提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药。本发明至少包括以下有益效果：本发明通过阶段性升温、反复酶解结合超声处理、多重过滤的提取工艺，极大提高南瓜籽提取物(包含南瓜籽蛋白等)以及酸枣仁提取物的产量和纯度，同时采用脉冲激光+超声处理+多重酶解的方式促进酵母自溶，使酵母细胞内容物充分释放，进一步的，多种活性成分合理复配使用后，形成的小分子多肽植物药可显著提高糖尿病等代谢性疾病人群、心悸、失眠、神志不安等多种症状人群、中年人人群的机体免疫力，改善睡眠质量及延缓衰老。本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。<实施例1>按重量份计，本实施例中的提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药包括：大豆肽粉18份、南瓜籽提取物15份、富硒蛹虫草粉5份、酸枣仁提取物3份、酵母提取物1份、复合维生素b0.5份、海藻糖3份、大豆低聚糖1份、色氨酸0.5份、女贞子3份、五味子3份、茯苓5份、大枣5份、麦冬2份。进一步的，所述南瓜籽提取物的制备方法包括如下步骤：s11、取新鲜南瓜籽，在25℃下浸泡10-12h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得南瓜籽粉；s12、取南瓜籽粉，并在其中加入其重量10-12倍(优选南瓜籽粉)的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：第一次酶解：将酶解原料的ph值调节至8.0-9.0(优选8.5)，按酶解原料重量的3-4％(优选3.5％)加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃(优选42℃)，保温35-40min后得到第一酶解体系；第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至3.5-4.5(优选4.0)，按第一次酶体系重量的3.5-4.5％(优选4.0％)加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至45-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至4.0-5.5(优选5.0)，按第二次酶解体系重量的2-4％(优选3.0％)加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；s13、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得南瓜籽酶解体系；s14、在所述南瓜籽酶解体系中加入其重量0.01％的磷脂酶以及0.02％的胰酶(所述胰酶包括胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，且按重量份计，胰蛋白酶：胰淀粉酶：胰脂肪酶＝1:1:2)，记录此时南瓜籽酶解体系总体积数值；再对此时的南瓜籽酶解体系进行温度处理，且同时对南瓜籽酶解体系进行超声处理，所述超声功率为200-400w(优选300w)，超声处理时间为10-15min(优选12min)，以获得南瓜籽浸提体系；所述温度处理过程包括：升温至35-45℃(优选40℃)，保温60-90min(优选70min)，再降温至30-40℃(优选35℃)，保温25-35min(优选35min)，并记录此时反应体系的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*65％补入含有去离子水和磷脂酶、胰酶的第一混合液，且按照重量比计，第一混合液中含有去离子水97.5％、磷脂酶1％、胰酶1.5％；补入第一混合液后，升温至45-50℃，保温75-85min(优选80min)，再降温至40-45℃(优选42℃)，保温30-35min，并记录此时反应体系的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*45％补入含有去离子水和磷脂酶、胰酶的第二混合液，且按照重量比计，第二混合液中含有去离子水98％、磷脂酶1％、胰酶1％；补入第二混合液后，升温至55-65℃，保温80-90min(优选85min)，再降温至50-60℃(优选55℃)，保温40-45min；本步骤中，每一升温、保温阶段结束后补充相应比例的水、磷脂酶、胰酶，由此对水蒸发以及部分酶失活后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的酶解环境中，以达到最佳的酶解效果；s15、在所述南瓜籽浸提体系中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min(优选75min)后于8000-1000rpm条件下离心5-8min，去沉渣后获得南瓜籽粗提液；再将所述南瓜籽粗提液经硅藻土过滤，得到一级南瓜籽清液，且过滤压力为0.25-0.35mpa(优选0.3mpa)；再在所述一级南瓜籽清液中按其重量加入3％的活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，以获得二级南瓜籽清液；s16、将所述二级南瓜籽清液经过滤孔径为0.2-1.0μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为50-60℃(优选55℃)，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经截留分子量为120-220kda卷式超滤膜进行过滤，过滤温度为55-65℃(优选60℃)，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经截留分子量为200-1200da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度为30-40℃(优选35℃)，以得到所述南瓜籽提取物；南瓜籽细胞壁组织丰富，而上述果胶酶以及纤维素酶可以破坏细胞壁结构，磷脂酶可以破坏细胞膜结构，胰蛋白酶、胰酶可以分解蛋白质，由此，上述几种酶搭配独立的酶解以及超声处理条件，可使得南瓜籽细胞的细胞壁、细胞膜结构被充分破坏，使其内容物释放，进一步将大分子的蛋白质分解为容易被人体吸收的小分子多肽，以此通过小分子南瓜籽蛋白促进免疫球蛋白的合成，有效增强体液免疫；还可提高t淋巴细胞增殖，增强细胞免疫应答以及促进多种内分泌激素的释放，包括胰岛素、生长激素、催乳素、抗利尿激素和儿茶酚胺等，达到调节免疫的作用，同时，通过阶段性的升温、保温，可使得组分的细胞结构(如细胞膜等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，同时，每一升温、保温阶段结束后补充相应比例的水、胰酶、磷脂酶，由此对水蒸发、酶失活后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的酶解环境中，以达到最佳的酶解效果。进一步的，酵母提取物(yeastextract)是酵母经破壁后将其中蛋白质、核酸、维生素等进行抽提，再经生物酶解形成的富含小分子氨基酸、肽、核苷酸、维生素等天然活性成分的物质。其中，氨基酸是皮肤角质层中自然保湿因子的主要成分，易被皮肤吸收，使老化的表皮恢复弹性，延缓皮肤衰老；核酸及核苷酸是人体的主要遗传物质，具有促进新陈代谢、提高蛋白质合成速度等作用，以此增强免疫机能和sod活性，提高抗衰老能力。为此，本实施例还提供了一种酵母提取物的制备方法，其包括：s21、将活性干酵母放入发酵罐中，且所述发酵罐的直径为30-40cm(优选35cm)，向其中加入活性干酵母重量3-5倍(优选4倍)的水搅拌均匀，以获得酵母原液；所述活性干酵母细胞蛋白质含量为40-45％，碳水化合物含量为8-10％，含水量为4-5％；s22、采用若干(优选8-10个)脉冲激光光源对所述酵母原液进行照射，照射时间为20-30min(优选25cm)，且照射的同时于200-300转/min的条件下对所述酵母原液进行搅拌，以及同时对酵母原液进行超声处理，超声功率为100kw，超声处理温度为30-35℃(优选32℃)；每一脉冲激光在所述酵母原液液面上形成的光斑直径为0.5-1cm，且每一脉冲激光作用于所述酵母原液的激光能量为50mj；脉冲激光和超声波都能在液体内、细胞膜/细胞壁附近及细胞液内产生空泡，空泡溃灭瞬间产生高温、高压(5000k，50mpa)，使其周围酵母细胞的细胞壁和质膜被击穿或改变质膜透性，使得酵母细胞内容物析出；s23、对经步骤s22处理后的酵母原液进行酶解处理；且所述酶解处理过程包括：(1)、酶解1：将经步骤s22处理后的酵母原液温度升至20-25℃，再按照15℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持1min，再使所述酵母原液按照10℃/min的速率升至20-25℃；升温至20-25℃后，在所述酵母原液中加入其重量1％的碱性蛋白酶和1.5％的木瓜蛋白酶，调节ph至7.0-8.0(优选7.5)以及调节温度至50-60℃(优选55℃)，水解反应10-12h(优选10.5h)；将经碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液温度调节至40-55℃(优选45℃)，加入将经碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液重量1％的蜗牛酶以及2.0％的胰酶后调节ph至6.5-7.5(优选7.0)，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述酵母原液进行搅拌，水解反应3-4h(优选3.5h)，以获得第一酶解液；(4)酶解2：将所述第一酶解液温度调整至20-25℃，再按照10℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持0.5min，再使所述第一酶解液按照10℃/min的速率升至20-25℃；升至20-25℃后，在所述第一酶解液中加入其重量0.5％的酸性蛋白酶和1.5％的核酸酶，调节ph至4.5-6.0(优选5.5)以及调节温度至45-50℃(优选48℃)，反应8-10h(优选9h)；将酸性蛋白酶、核酸酶处理的第一酶解液温度调节至40-55℃(优选42℃)，加入将经酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶处理的酵母原液重量0.5％的蜗牛酶以及1.0％的胰酶后调节ph至6.0-7.5(优选7.0)，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述第一酶解液进行搅拌，水解时间为2-3h(优选2.5h)，以获得第二酶解液；(5)酶解3：将所述第二酶解液温度调整至20-25℃，再按照5℃/min的速率降至-45℃，降至-45℃后维持0.5min，再使所述第二酶解液按照12℃/min的速率升至20-25℃；升至20-25℃后，在所述第二酶解液中加入其重量0.5％的谷氨酰胺酶与1.0％的脱氨酶，调节ph至5.5-6.0(优选5.8)以及调节温度至45-50℃(优选42℃)，反应3-4h(优选3.5h)；将经谷氨酰胺酶、脱氨酶处理的第二酶解液温度调节至40-55℃(优选42℃)，加入将经谷氨酰胺酶、脱氨酶处理的第二酶解液重量1％的蜗牛酶以及1％的胰酶后调节ph至6.5-7.5，充入臭氧，且按200-300转/min的条件对所述第二酶解液进行搅拌，水解时间为2-3h，以获得第三酶解液；本步骤中，通过阶段性的温度骤升和骤降，使得酵母细胞内产生冰晶，以此通过冰晶的膨胀和刺穿作用破坏酵母细胞的细胞结构，同时，碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、蜗牛酶、胰酶、谷氨酰胺酶、脱氨酶均可分解蛋白质，以此可进一步破坏细胞膜结构，并将酵母细胞内释放出的大分子蛋白质水解成小分子氨基酸，增强其活性，充分发挥其抗衰老、提高免疫力等功效；此外，臭氧可通过氧化作用破坏细胞膜结构，进一步促进酵母细胞结构的破坏，促进其内容物释放；s24、待酶解完成后，对获得的第三酶解液升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得酵母提取物原液；s25、在酵母提取物原液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在55℃下保温60-90min后离心，去沉渣后得到酵母提取物清液，且过滤压力为0.25-0.35mpa；s26、将酵母提取物清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，控制操作温度在40℃以下，得到酵母提取物浓缩液；s27、通过真空冷冻干燥方法对酵母提取物浓缩液进行干燥，以获得酵母提取物。此外，酸枣仁具有黄酮、皂苷、多糖等多种活性成分，具有宁心安神、平肝理气、治疗失眠、增强免疫等多重功效。因此，本实施例中还提供一种酸枣仁提取物的提取方法，其包括：s31、取新鲜酸枣仁，在25℃下浸泡12-24h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得酸枣仁粉；s32、取酸枣仁粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：第一次酶解：按酸枣仁粉重量的3％加入胰蛋白酶以及按酸枣仁粉重量的20-30％(优选25％)加入用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液，调节ph值至6.5-7.5(优选7.0)，充分搅拌，且搅拌的同时升温至42-45℃(优选为43.5℃)，保温30-45min(优选为35min)后得到第一酶解体系；所述透性调节液由酸溶液、甘油、氯化钠和溶菌酶组成，且按重量比计，1：(0.6-1.2)：(0.03-0.05)：(0.04-0.05)(优选为酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：1：0.04：0.045，且所述酸溶液为柠檬酸溶液)；第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其ph值至3.5-4.5(优选4.0)，按第一次酶解体系重量的3％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-60℃(优选为55℃)，保温30-35min后得到第二酶解体系；第三次酶解：待第二次酶解体系降至20-25℃后，再调整其ph值至4.0-5.5(优选5.0)，按第二次酶解体系重量的3％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃(优选为60℃)，保温25-35min(优选为30min)后得到第三酶解体系；s33、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得酸枣仁酶解液；s34、在酸枣仁酶解液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min(优选为75min)后离心，去沉渣；再将去沉渣后的酸枣仁酶解液经硅藻土过滤，得到酸枣仁提取液，且过滤压力控制在0.3-0.4mpa；s35、对所述酸枣仁提取液进行浓缩干燥，以获得所述酸枣仁提取物。<实施例2>本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药由以下组分组成：大豆肽粉25份、南瓜籽提取物20份、富硒蛹虫草粉8份、酸枣仁提取物5份、酵母提取物2份、复合维生素b0.8份、海藻糖6份、大豆低聚糖2份、色氨酸0.8份、女贞子5份、五味子5份、茯苓8份、麦冬3份、大枣8份、水150份。<实施例3>本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药由以下组分组成：大豆肽粉23份、南瓜籽提取物22份、富硒蛹虫草粉7份、酸枣仁提取物4份、酵母提取物1.5份、复合维生素b0.6份、海藻糖5份、大豆低聚糖1.5份、色氨酸0.7份、女贞子4份、五味子4份、茯苓7份、麦冬2.5份、大枣7份、水120份。<南瓜籽提取物检测结果>采用申请号201810995144.3(“一种南瓜籽蛋白的制备方法”)的专利申请中实施例1所述的方法提取南瓜籽蛋白，以作为对比例1，将其与通过本发明实施例1-3中的南瓜籽提取物制备方法制备获得的南瓜籽提取物进行通过甲醛滴定法测定游离氨基酸含量，以及根据微量凯氏定氮法测定总氮含量，且根据水解度(dh)＝游离氨基酸/总氮×100％计算水解度，其结果如表1所示；以及通过高效凝胶过滤色谱法检测南瓜籽蛋白分子量大小及分布范围，其结果如表2所示。表1南瓜籽提取物水解度测定对比例1实施例1实施例2实施例3水解度(dh)(％)19.7410.479.459.58表2南瓜籽蛋白分子量大小及分布范围从表1-2中可以看出，本发明的南瓜籽提取物制备方法中，可通过胰蛋白酶、胰酶等将大分子蛋白质分解为小分子多肽，其中，本发明制备获得的提取物中，其游离氨基酸含量低(只有对比例1的一半)，但同时，本发明制备的南瓜籽提取物中，蛋白肽平均分子量为800da，1000da以下的多肽占90％，500da以下的多肽占75％，由此可便于人体快速、高效吸收，使其充分发挥其功效。<酵母提取物检测结果>采用申请号201510416294.0(“一种酵母提取物及其制备方法”)的专利申请中实施例1所述的方法制备酵母提取物，以作为对比例2，将其与通过本发明实施例1-3中的酵母提取物制备方法制备获得的酵母提取物进行破壁率、以及内容物蛋白质含量、氨基酸含量、固形物含量、还原糖含量、核苷酸含量的测定，上述各指标的测定均为现有技术，在此不再赘述，测定结果如表3所示。表3酵母提取物指标测定蛋白质含量(％)氨基酸含量(％)固形物含量(％)还原糖含量(％)核苷酸含量(％)破壁率(％)对比例27.58±1.2120.12±1.2142.43±0.7210.15±0.685.79±0.2136.31±1.21实施例110.21±0.8431.33±1.3267.52±0.5815.23±0.587.11±0.3167.24±1.20实施例211.44±0.3429.41±0.9868.71±0.7416.14±0.796.78±0.7871.34±1.58实施例310.54±0.2132.14±1.2470.02±1.3115.98±1.067.34±0.1169.55±2.12从表3中可以看出，本发明中的酵母提取物方法通过脉冲激光和超声波产生的空化效应、温度骤变产生冰晶施加的机械力、臭氧以及各种酶、酶解条件的合理使用，可使得酵母细胞的细胞壁/细胞膜结构被充分破坏，大幅提高破壁率，使酵母细胞充分自溶，以此将其内容物质，如上述蛋白质含量、氨基酸含量、固形物含量、还原糖含量、核苷酸含量的充分释放，具体的，相对对比例2，本发明中的破壁率提高约67％，蛋白质含量、氨基酸含量、固形物含量、还原糖含量、核苷酸含量各自提高约30％、50％、62％、50％、22％，进一步充分挥发其各自在功效。<酸枣仁提取物检测结果>用水浸泡酸枣仁原料0.5小时，上述各原料与水的质量比为1：4；对浸泡过的原料进行加热，至沸腾后转文火煎煮10分钟，随后过滤出提取液，再加入等份量的水，重复上述煎煮过滤步骤1次，将各次煎煮后的提取液全部合并，制得作为对比例3的酸枣仁提取液。将其与通过本发明实施例1-3中的提取方法获得的酸枣仁提取物进行检测，以获得黄酮、皂苷、多糖这几种有效成分的含量，其结果如表4所示。表4酸枣仁提取物中黄酮、皂苷、多糖含量黄酮(mg/g)多糖(mg/g)皂苷(mg/g)对比例33.34±0.753.27±0.3734.36±5.23实施例16.68±0.325.46±0.5260.74±6.35实施例26.82±0.135.51±0.3963.86±5.13实施例36.89±0.475.59±0.1162.17±2.81类似的，本发明中通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对酸枣仁细胞壁进行充分酶解，使细胞壁中的纤维素、果胶等成分破坏殆尽，同时，酸溶液、甘油、氯化钠、溶菌酶可通过改变细胞壁或细胞膜结构来改变两者的通透性，因此本发明中通过采用调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液来调节细胞膜和/或细胞壁透性，可使得细胞壁和/或细胞壁结构被破坏，使其内容的有效成分(如黄酮、皂苷、多糖含量等)得以充分释放，使本发明中的小分子多肽植物药适用于免疫力低下、心悸、失眠、神志不安等多种症状人群。<实施例4>本实施例还提供了一种提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药的制备方法，其包括：s100、按照实施例1-3任一项所述的制备方法制备南瓜籽提取物、酸枣仁提取物以及酵母提取物；s200、将实施例1-3任一项所述重量份的各原料充分混合，以获得原料混合物，再将所述原料混合物置于一级发酵罐中，加入所述原料混合物重量5-8倍(优选7倍)的去离子水以及所述原料混合物重量0.1-0.3倍(优选0.2倍)的黑曲霉菌种，调节ph为6.5-7，且调节至45-65℃(优选为55℃)进行一级发酵，发酵36-48h后分离出液态的第一发酵液；分离出所述第一发酵液后，向一级发酵罐内的残留物中加入所述一级发酵罐内的残留物重量3-5倍(优选4倍)的去离子水以及所述一级发酵罐内的残留物重量0.1-0.3倍(优选0.2倍)的黑曲霉菌种，调节ph为6.5-7，且调节至45-65℃(优选为55℃)再次进行一级发酵，发酵24-36h后分离出液态的第二发酵液；s300、将所述第一发酵液、第二发酵液合并转移至二级发酵罐中，加入所述第一发酵液与第二发酵液重量总和2-3倍的去离子水以及所述第一发酵液与第二发酵液重量总和0.2-0.3倍(优选0.25倍)的生孢噬纤维菌菌种，调节ph为6.8-7，且调节至30-40℃(优选为35℃)进行二级发酵，发酵24-36h后获得分离出液态的第三发酵液；s400、分离出所述第三发酵液后，将所述二级发酵罐中的残留物与一级发酵罐中再次进行一级发酵、且分离出液态的第二发酵液后的残留物合并，加入合并后残留物重量总和1-2倍的去离子水、合并后残留物重量总和0.05-0.15倍(优选0.1倍)的黑曲霉菌种以及0.05-0.20倍(优选0.15倍)的生孢噬纤维菌菌种，调节ph为6.8-7，且调节至30-40℃(优选为35℃)进行再次发酵，发酵24-36h后分离出液态的第四发酵液；s500、将第三发酵液以及第四发酵液合并，以获得合并发酵液，并对所述合并发酵液进行离心，去除沉淀后获得发酵清液；s600、在发酵清液中加入体积分数85％的乙醇，于8-10℃温度条件下按照100-200转/min(优选150转/min)搅拌20-40min(优选30min)，且按体积比计，所述发酵清液：乙醇＝(2-5)：1(优选为3:1)；由此通过乙醇对核酸等杂质进行沉淀，保证产品纯度；搅拌后将发酵清液与乙醇的混合液依次通过孔径为4-8μm的滤膜、0.2-0.5μm的微滤膜、截流分子量为3000-10000da的超滤膜以及截流分子量为300-800da的纳滤膜进行过滤；其中，通过孔径为4-8μm的滤膜、0.2-0.5μm的微滤膜过滤时的过滤压力均为0.2-0.4mpa，过滤温度均为25-35℃；通过截流分子量为3000-10000da的超滤膜以及截流分子量为300-800da的纳滤膜进行过滤时的过滤压力均为1.5-2.0mpa，过滤温度均为25-35℃；s700、经过纳滤膜过滤后的纯化后的发酵清液依次经过sqd-913强碱性阴离子交换树脂、001×16苯乙烯强酸性阳离子交换树脂进行离子交换，并将经离子交换后获得的液体置于减压浓缩罐中，加热至45-65℃(优选55℃)进行真空减压浓缩，以获得浓缩液；s800、通过真空冷冻干燥方法对浓缩液进行干燥，再将干燥后的原料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8mpa(优选为0.6mpa)，造粒温度为75-85℃(优选为80℃)，造粒机的模孔直径为1.5-3mm(优选为2mm)；s900、对所述粗成品进行过筛，最终获得所述降提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药。<提高免疫力功效评价试验>实验选取1月龄雌性小鼠，按体重分为4组。本发明中的提高免疫力及治疗失眠症的小分子多肽植物药(以下简称“小分子多肽植物药”)的人体推荐剂量为0.4kg/d·kg体重的定型产品，小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍。分别以人体推荐剂量5倍、10倍和30倍作为低、中、高剂量组。采取灌胃法，每日灌胃一次，对照组灌蒸馏水。各组小鼠连续给予小分子多肽植物药30天后，测定小鼠胸腺和脾脏质量结果(如表5所示)，以及巨噬细胞碳廓清指数、吞噬细胞吞噬率及吞噬指数(如表6所示)。表5小分子多肽植物药对小鼠胸腺和脾脏质量的影响小鼠数量胸腺/体重(mg/g)脾脏/体重(mg/g)空白对照组202.42±0.465.42±0.36实施例1202.49±0.455.60±0.37实施例2202.50±0.475.61±0.38实施例3202.53±0.525.50±0.28从表5中可以看出，给予本发明的小分子多肽植物药后，小鼠的胸腺和脾脏质量相对于空白对照组而言没有显著差异，说明其安全性良好，对机体无不良刺激。表6小分子多肽植物药对小鼠巨噬细胞碳廓清、吞噬率和吞噬指数的影响由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的小分子多肽植物药30天后，与空白对照组相比，低剂量组、中剂量组以及高剂量组在碳廓清、吞噬率和吞噬指数上均差异明显，尤其是高剂量组，其碳廓清、吞噬率和吞噬指数相对空白对照组分别提高6.7％、48.5％和82％，说明本发明中的小分子多肽植物药可通过提高小鼠吞噬细胞吞噬功能增强机体免疫力。<睡眠改善功效评价试验>选取1月龄雄性小鼠，体重18-22g，按体重随机分为4组，组间体重经t检验无显著性差异(p>0.05)。根据小分子多肽植物药人体推荐剂量为0.4kg/d·kg，小鼠的等效剂量相当于人体推荐剂量的10倍。分别以人体推荐剂量的2倍、5倍和10倍作为低、中、高剂量。采取灌胃法，对照组灌蒸馏水，分别进行下列试验：(1)延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验：动物连续给予小分子多肽植物药26天后，给各组动物腹腔注射30mg/kg的戊巴比妥钠，注射量为0.1ml/10g。以小鼠翻正反射消失为睡眠指标，观察多肽复合营养素能否延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。本试验在夜间进行。(2)阈下剂量戊巴比妥钠睡眠发生率试验：动物连续给予小分子多肽植物药26天后，给各组动物腹腔注射26mg/kg戊巴比妥钠，注射量为0.1ml/10g。以小鼠翻正反射消失为睡眠指标，观察小分子多肽植物药能否延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。本试验在夜间进行。(3)巴比妥钠睡眠潜伏期试验：动物连续给予小分子多肽植物药26天后，给各动物组腹腔注射240mg/kg巴比妥钠，注射量为0.1ml/10g。以小鼠翻正反射消失为睡眠指标，观察小分子多肽植物药能否延长戊巴比妥钠诱导的睡眠时间。试验结束后测定各项指标，其具体结果如表6所示。表6小分子多肽植物药对正常小鼠睡眠的影响由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的小分子多肽植物药26天后，与对照组比较，低、中、高剂量组戊巴比妥钠诱导睡眠时间都有极其显著性提高(p<0.01)，表示小分子多肽植物药与阈剂量戊巴比妥钠有协同睡眠作用；低、中、高剂量组阈下剂量戊巴比妥钠诱导睡眠发生率具有显著性提高，表明小分子多肽植物药能增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠的发生率；同时，低、中、高剂量组巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期均有显著的缩短，表明小分子多肽植物药能够延长巴比妥钠诱导睡眠的潜伏期。需要说明的是，上述实施例1至4中的技术特征可进行任意组合，且组合而成的技术方案均属于本发明的保护范围。综上所述，本发明通过阶段性升温、反复酶解结合超声处理、多重过滤的提取工艺，极大提高南瓜籽提取物(包含南瓜籽蛋白等)的产量和纯度，同时采用脉冲激光+超声处理+多重酶解的方式促进酵母自溶，使酵母细胞内容物充分释放，且通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对酸枣仁细胞壁进行充分酶解，使细胞壁中的纤维素、果胶等成分破坏殆尽，同时，酸溶液、甘油、氯化钠、溶菌酶可通过改变细胞壁或细胞膜结构来改变两者的通透性，因此本发明中通过采用调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液来调节细胞膜和/或细胞壁透性，可使得细胞壁和/或细胞壁结构被破坏，使其内容的有效成分(如黄酮、皂苷、多糖含量等)得以充分释放。进一步的，多种活性成分合理复配使用后，形成的小分子多肽复合营养素可显著增强糖尿病等代谢性疾病人群、心悸、失眠、神志不安等多种症状人群、中年人人群的机体免疫力，改善上述人群的睡眠质量，宁心安神的同时延缓衰老。这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。当前第1页1 2 3