一种防治畜禽腹泻的中药微生态制剂及其制备方法与流程

本申请涉及畜牧业和生物技术领域，具体地，涉及防治畜禽腹泻的中药微生态制剂及其制备方法。

背景技术：

国家农业部公布在关于2018-2021年开展兽用抗菌药使用减量化行动试点工作的通知中指出药物饲料添加剂将在2020年全部退出，这意味着饲料的“全程无抗”，也就更加突出了种源净化，提高畜禽免疫力的重要性。同时，由于免疫性疾病的普遍存在，使用疫苗免疫使体液免疫和细胞免疫功能遭受到严重损害，这也降低了疫苗的防护作用。

畜禽腹泻主要的病原菌为大肠杆菌和沙门氏菌。由大肠杆菌引起的猪黄白痢、禽大肠杆菌病等是目前危害养殖业严重的疾病，给集约化养鸡生产造成严重的经济损失，有效做好大肠杆菌病的防治工作已经成为集约化养鸡业迫切需要解决的重要问题之一。由沙门氏菌引起的鸡白痢和禽伤寒在养禽业中对鸡群的影响严重，由于密集饲养，导致整个养鸡周期都受到危害。

目前抗生素对于大肠杆菌病的治疗，已导致大肠杆菌的耐药谱不断扩大，防治效果下降，同时抗菌药物在机体内的残留，易引起菌群失调，既降低了肉蛋产品品质，也影响了人类健康和公共卫生安全。而传统的中药复方，由于药效吸收慢，在提高免疫力方面的作用不明显，对突发事件的处理效果也不及时。因此，对于畜禽腹泻的防治，亟待寻找一种能够有效抑制致病菌、替代抗生素的制剂。

技术实现要素：

本公开的目的在于提供一种既能够有效抑制畜禽腹泻的致病菌，又能够替代抗生素的制剂及其制备方法。

为了实现上述目的，本公开提供了一种防治畜禽腹泻的中药微生态制剂的制备方法，该制备方法包括：在培养基中接种种子液进行发酵；所述培养基含有复方中药提取液和基质培养基，所述种子液含有中药发酵菌种；

其中，所述复方中药由穿心莲、白头翁、黄连、黄柏、木香、败酱草和甘草组成；所述中药发酵菌种包括保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、保藏号为cgmccno：2196的粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、商品号为ciccno：10020的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、商品号为ciccno：31170的产朊假丝酵母(candidautilis)、商品号为acccno：20039的植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、商品号为ciccno：24498的丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)和商品号为acccno：10649的沼泽红假单胞菌(rhodosedoseudomouaspadustris)。

可选地，所述复方中药的提取液通过如下操作制备得到：将所述复方中药进行烘干和粉碎后用10～20倍体积的乙醇水溶液进行50～70min的提取，得到复方中药的乙醇提取物，然后将所述提取物进行浓缩，得到浓缩后的物料；所述乙醇水溶液含有65～85体积％的乙醇；所述浓缩后的物料为含有0.5-2g/ml生药量的药液。

可选地，所述发酵为高密度液体深层发酵；发酵的温度为30～37℃，时间为2～5天。

可选地，以重量份计，所述复方中药含有：穿心莲10～25份、白头翁5～25份、黄连4～12份、黄柏5～20份、木香4～12份、败酱草4～20份和甘草4～12份。

可选地，以重量份计，所述复方中药含有：穿心莲15～20份、白头翁10～20份、黄连6～10份、黄柏10～15份、木香6～10份、败酱草10～18份和甘草5～10份

可选地，所述种子液中的所述凝结芽孢杆菌、所述粪肠球菌、所述枯草芽孢杆菌、所述产朊假丝酵母、所述植物乳杆菌、所述丁酸梭菌和所述沼泽红假单胞菌的活菌数量比为(10～25)：(5～15)：(10～25)：(10～25)：(10～20)：(5～15)：(5～15)；优选为(16～20)：(10～13)：(16～20)：(16～20)：(12～15)：(10～13)：(9～12)；所述种子液通过包括如下操作的方法制备得到：将所述凝结芽孢杆菌、所述粪肠球菌、所述枯草芽孢杆菌、所述产朊假丝酵母、所述植物乳杆菌、所述丁酸梭菌和所述沼泽红假单胞菌分别进行培养得到培养液后混合。

可选地，所述培养基含有5-20体积(％)的复方中药的提取液和余量的所述基质培养基；所述基质培养基含有：红糖10～50g/l、葡萄糖10～50g/l、蜂蜜10～50g/l、蛋白胨1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、乙酸钠1～5g/l、硫酸镁0.1～1g/l、l-半胱氨酸0.1～1g/l、硫酸锰0.05～0.3/l、碳酸钙0.1～3g/l；所述基质培养基的ph为6.0～8.0。

另一方面，本公开提供了一种防治畜禽腹泻的中药微生态制剂，该中药微生态制剂根据上述的制备方法制得；所述中药微生态制剂的剂型为散剂、颗粒剂、粉剂和溶液剂中的其中一种。

可选地，相对于1g中药微生态制剂或者1ml中药微生态制剂，活菌总数为(5～10)×10⁸cfu。

再一方面，一种凝结芽胞杆菌，该凝结芽孢杆菌的分类命名为bacilluscoagulans，并且，该凝结芽孢杆菌的保藏号为cctccno：m2019722。

通过上述技术方案，本公开提供了中药微生态制剂及其制备方法，该中药微生态制剂主要用于防治畜禽腹泻，疗效确切，经过微生物的发酵，不仅大大减少了中药的使用量，节省养殖户的管理成本，而且治愈效果能够与抗生素相当，不仅能够替代抗生素治疗细菌性腹泻，而且有提高动物免疫力的能力。本公开还提供了一株凝结芽胞杆菌，该菌株具有良好的耐酸耐胆盐等抗逆性，还能够产生大量的乳酸，协助并提高中药对致病菌的抑制作用，在含药量很高的液体发酵培养基中生长良好，为发酵中药方向提供一株有价值的菌株。

本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

生物材料保藏信息

凝结芽孢杆菌，该凝结芽孢杆菌的分类命名为凝结芽孢杆菌sam-njh-1bacilluscoagulanssam-njh-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为2019年9月16日，菌种保藏号为：cctccno：m2019722。

附图说明

图1为凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)菌落形态及镜检图。

具体实施方式

以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。

本公开提供了一种防治畜禽腹泻的中药微生态制剂的制备方法，该制备方法包括：在培养基中接种种子液进行发酵；所述培养基含有复方中药提取液和基质培养基，所述种子液含有中药发酵菌种；

其中，所述复方中药由穿心莲、白头翁、黄连、黄柏、木香、败酱草和甘草组成；所述中药发酵菌种包括保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、保藏号为cgmccno：2196的粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、商品号为ciccno：10020的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、商品号为ciccno：31170的产朊假丝酵母(candidautilis)、商品号为acccno：20039的植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、商品号为ciccno：24498的丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)和商品号为acccno：10649的沼泽红假单胞菌(rhodosedoseudomouaspadustris)。

可选地，该中药微生态制剂的制备方法具体包括以下步骤：

所述复方中药的提取液通过如下操作制备得到：将所述复方中药进行烘干和粉碎后用10～20倍体积的乙醇水溶液进行50～70min的提取，得到复方中药的乙醇提取物，然后将所述提取物进行浓缩，得到浓缩后的物料。所述乙醇水溶液含有65～85体积％的乙醇；所述浓缩后的物料为含有0.5-2g/ml生药量的药液。

可选地，所述发酵为高密度液体深层发酵；发酵的温度为30～37℃，时间为2～5天。

畜禽腹泻按中兽医理论多属于湿热泄泻症，一般由外感暑湿，疫毒之邪，湿热内侵，致使胃肠运化失调，血瘀气滞，湿热泄泻。本公开从具有抑菌功能的单味中药中筛选出对致病性大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌抑菌能力强的几味中药并做成复方中药。

其中，复方中药的具体筛选方法包括：将具有抑菌功能的单味中药按照不同的组合配比配制成不同的复方中药，将各组合物提取后减压浓缩至1g/ml，待测，在灭菌的平板中倒入15ml营养琼脂固体培养基(成分为：蛋白胨10g、牛肉膏5g、nacl5g、琼脂18g、蒸馏水1000ml，ph7.0)。将过夜培养的致病性大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌菌液与营养琼脂培养基(含1.5％琼脂，w/v)混匀，使其指示菌浓度稀释2×10⁷cfu/ml左右，取5ml倾注于制备好的营养琼脂平板中。将牛津杯用镊子轻轻放置于平板上，将200μl药液加入牛津杯后静置30min，于37℃培养16h，用游标卡尺测量抑菌圈大小。

通过上述筛选方法，最终筛选出的对致病性大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌菌有良好抑制作用的复方中药，采用如下重量份的组分：穿心莲10～25份、白头翁5～25份、黄连4～12份、黄柏5～20份、木香4～12份、败酱草4～20份和甘草4～12份；优选为穿心莲15～20份、白头翁10～20份、黄连6～10份、黄柏10～15份、木香6～10份、败酱草10～18份和甘草5～10份。诸药合用具有清热解毒、燥湿止痢、行气导滞的功效。方中穿心莲和白头翁为君药，穿心莲入肺、胃、大肠、膀胱经，清热解毒、凉血消肿，对大肠杆菌有抑制作用；白头翁能够清热解毒、凉血止痢，其有效成分白头翁皂苷和香豆素类，对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌有很好的抑菌效果；该组合物以黄连之苦，清热解毒、燥湿厚肠，黄柏泻下焦湿热，共奏燥湿止痢之效，黄连和黄柏为臣药，它们的有效成分小檗碱具有良好的抗菌、抗炎、抗病毒等生理活性；方中败酱草归胃、大肠、肝经，清热解毒，对肠黄痢疾有很好作用；该复方中药中木香行气导滞、健脾消食；甘草调和诸药，有解毒作用，缓解病症。

发明人选出多株产酶能力强的芽孢菌、产酸能力强并有一定抑菌作用的乳酸菌、产纤维素酶和蛋白含量高的酵母菌等微生物作为目标菌株分别接种于添加5～20％复方中药提取液的液体培养基培养，以含有中药提取物的液体发酵培养基中菌株的生长情况为指标进行初筛，选择3株芽孢杆菌、3株乳酸菌、2株产朊假丝酵母和1株光合菌作为目标菌种。

将初筛的9株菌做共培养实验，考察相互之间的作用关系。选取菌种间互惠共生、或无关共栖关系的7株菌作为中药发酵菌种，分别为：保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)(本文记载)、保藏号为cgmccno：2196的粪肠球菌(enterococcusfaecalis)(已由cn101220342b公开)、商品号为ciccno：10020的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)(购自cicc)、商品号为ciccno：31170的产朊假丝酵母(candidautilis)(购自cicc)、商品号为acccno：20039的植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)(购自accc)、保藏号为ciccno：24498的丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)(购自cicc)和商品号为acccno：10649的沼泽红假单胞菌(rhodosedoseudomouaspadustris)(购自accc)。

其中，所述种子液中的所述凝结芽孢杆菌、所述粪肠球菌、所述枯草芽孢杆菌、所述产朊假丝酵母、所述植物乳杆菌、所述丁酸梭菌和所述沼泽红假单胞菌的活菌数量比为(10～25)：(5～15)：(10～25)：(10～25)：(10～20)：(5～15)：(5～15)；优选为(16～20)：(10～13)：(16～20)：(16～20)：(12～15)：(10～13)：(9～12)；所述种子液通过包括如下操作的方法制备得到：将所述凝结芽孢杆菌、所述粪肠球菌、所述枯草芽孢杆菌、所述产朊假丝酵母、所述植物乳杆菌、所述丁酸梭菌和所述沼泽红假单胞菌分别进行培养得到培养液后混合。

可选地，所述培养基含有5-20体积％的复方中药提取液和余量的所述基质培养基；所述基质培养基含有：红糖10～50g/l、葡萄糖10～50g/l、蜂蜜10～50g/l、蛋白胨1～5g/l、磷酸氢二钾1～5g/l、乙酸钠1～5g/l、硫酸镁0.1～1g/l、l-半胱氨酸0.1～1g/l、硫酸锰0.05～0.3/l、碳酸钙0.1～3g/l；所述基质培养基的ph为6.0～8.0。

另一方面，本公开还提供了一种防治畜禽腹泻的中药微生态制剂，所述中药微生态制剂的剂型为散剂、颗粒剂、粉剂和溶液剂中的其中一种。

可选地，相对于1g中药微生态制剂或者1ml中药微生态制剂，活菌总数为(5～10)×10⁸cfu。

本公开中的凝结芽胞杆菌、粪肠球菌、植物乳杆菌和丁酸梭菌本身就有降低肠道ph值，抑制腐败菌生长作用，所产生的细菌素抑制或杀死肠道内的病原菌、维持菌群平衡；本公开中的芽孢杆菌、酵母菌所产生的多种酶类，不仅能够增强动物消化酶活性，提高饲料利用率，而且能够拮抗动物机体病原菌，增强机体免疫力和抗病能力，对防治消化系统疾病起到积极作用。各菌种混合发酵中药复方提取物，在发酵过程中产生的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶等物质对中草药的细胞进行破壁使有效物质溶出，同时中药成分经过微生物的转化，大分子物质转变成易吸收的小分子物质，使血液中的有效成分迅速达到有效浓度，使发酵过的中药复方进入动物体后直接起到药效，不存在分解转化过程，改变中药药效慢的说法。

再一方面，本公开还提供了一种凝结芽孢杆菌，该凝结芽孢杆菌的分类命名为bacilluscoagulans，并且，该凝结芽孢杆菌的保藏号为cctccno：m2019722。该菌株代谢产生的乳酸对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出很强的抑制能力。

凝结芽孢杆菌cctccno：m2019722的形态特征(图1)为：菌落扁平、微黄、两端略有拉伸；革兰氏阳性；镜检其芽胞体端生、呈椭圆形，菌体呈细杆状。

对凝结芽孢杆菌cctccno：m2019722的基因组进行16srdna扩增和测序，发现该菌株与10种凝结芽胞杆菌的同源性在99.65％以上，该菌株被鉴定为bacilluscoagulans(凝结芽孢杆菌)，保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctccno：m2019722。

以下结合实施例进一步详细说明本发明，但是本发明的范围并不限制于以下实施例中。

实施例中使用的营养琼脂固体培养基成分包括：蛋白胨10.0g/l、牛肉膏5.0g/l、nacl5.0g/l、琼脂18g/l、ph7.0。

lb培养基成分包括：胰化蛋白胨10.0g/l，酵母提取物5.0g/l，nacl10.0g/l。

mrs培养基成分包括：酪蛋白胨10.0g/l，牛肉膏10.0g/l，酵母粉5.0g/l，葡萄糖5.0g/l，乙酸钠5.0g/l，柠檬酸二铵2.0g/l，tween801.0g/l，k2hpo42.0g/l，mgso4.7h2o0.2g/l，mnso4.h2o0.05g/l，caco320.0g/l，ph6.8。

麦芽汁培养基成分包括：5°bé麦芽汁1.0l，自然ph。

tsa培养基成分包括：胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，ph7.3±0.2。

实施例1

本实施例中使用的培养基成分包括20体积％的复方中药提取液和余量的基质培养基；其中基质培养基含有：红糖30g/l、葡萄糖30g/l、蜂蜜30g/l、蛋白胨3g/l、磷酸氢二钾3g/l、乙酸钠3g/l、硫酸镁0.5g/l、l-半胱氨酸0.5g/l、硫酸锰0.15/l、碳酸钙0.20g/l，ph6.0～8.0。

复方中药为：穿心莲18份、白头翁15份、黄连8份、黄柏12份、木香8份、败酱草15份和甘草6份。将复方中药于55℃下烘干2.5h，粉碎，按照1:15的体积比加入75％乙醇水溶液进行提取，提取2次，每次1h，将中药原料提取产物于4℃静置24h后浓缩成含有1g/ml生药量的药液。得到所述复方中药提取液。

将保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、保藏号为cgmccno：2196的粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、商品号为ciccno：10020的枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、商品号为ciccno：31170的产朊假丝酵母(saccharomycescerevisiae)、商品号为acccno：20039的植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、商品号为ciccno：24498的丁酸梭菌(clostridiumbutyricum)和商品号为acccno：10649的沼泽红假单胞菌(rhodosedoseudomouaspadustris)先于培养基各自扩大培养(枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌培养基为lb培养基；丁酸梭菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌培养基为mrs培养基；产阮假丝酵母培养基为麦芽汁培养基；沼泽红假单胞菌培养基为tsa培养基)至有效活菌数＞15×10⁸cfu/ml，然后按所述凝结芽孢杆菌、所述粪肠球菌、所述枯草芽孢杆菌、所述产朊假丝酵母、所述植物乳杆菌、所述丁酸梭菌和所述沼泽红假单胞菌的活菌数量比为2：1：2：2：1.5：1：1进行混合，得到种子液，在培养基中接种种子液进行发酵，37℃下培养3天，使发酵液中有效活菌数达到5.0×10⁸cfu/ml，即得到所述防治畜禽腹泻的中药微生态制剂，剂型为溶液剂。

对比例1

本对比例按照实施例1的方法制备中药微生态制剂，所不同的是将保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)替换为购自中国工业微生物菌种保藏中心的凝结芽胞杆菌ciccno：10069。

对比例2

本对比例按照实施例1的方法制备中药微生态制剂，所不同的是将保藏号为cctccno：m2019722的凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)替换为购自潍坊易昊生物公司的凝结芽胞杆菌菌粉(市售菌粉)。

对比例3

将18份穿心莲、15份白头翁、8份黄连、12份黄柏、8份木香、15份败酱草和6份甘草混合，得到复方中药。将复方中药于55℃下烘干2.5h，粉碎，按照1:15的体积比加入75％乙醇水溶液进行提取，提取2次，每次1h，将中药原料提取产物于4℃静置24h后进行浓缩，相对于1g的所述复方中药，所述浓缩后的物料的体积为1ml，得到所述复方中药的提取液，将制得的所述复方中药的提取液作为防治畜禽腹泻的中药制剂。

对比例4

本对比例按照对比例3的方法制备中药制剂，所不同的是复方中药包括18份穿心莲、15份白头翁、8份黄连、12份黄柏、8份木香和6份甘草。

对比例5

本对比例按照对比例3的方法制备中药制剂，所不同的是复方中药包括15份白头翁、8份黄连、12份黄柏、8份木香和6份甘草。

对比例6

购自福建宁德乐普生药业有限公司的白头翁散。

对比例7

购自大连三仪动物药品有限公司的硫酸新霉素。

测试例1

将实施例1中的凝结芽胞杆菌cctccno：m2019722、对比例1中的凝结芽胞杆菌ciccno：10069和对比例2中的市售菌粉于lb培养基中各自扩大培养至有效活菌数＞15×10⁸cfu/ml，然后按照3％接种量接入包括20体积％的复方中药提取液和余量的基质培养基中，于50℃下，180r/min摇瓶培养48h后，活菌计数。

将过夜培养的鸡大肠杆菌标准血清型(o78)菌液和金黄色葡萄球菌(金葡)菌液与营养琼脂培养基(含1.5％琼脂，w/v)混匀，将各菌液浓度稀释至2×10⁷cfu/ml左右，取5ml倾注于制备好的营养琼脂平板中。将牛津杯用镊子轻轻放置于接种不同菌株的平板上，分别将200μl经凝结芽胞杆菌cctccno：m2019722、凝结芽胞杆菌ciccno：10069和市售菌粉的菌液发酵的复方中药发酵液加入牛津杯后静置30min，于37℃培养16h，用游标卡尺测量测量其对鸡大肠杆菌标准血清型和金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小，如表1所示。

表1

由表1可以看出，对比例1和对比例2中的凝结芽孢杆菌在本公开的培养基中生长受到抑制，而实施例1中的凝结芽胞杆菌cctccno：m2019722不仅能在本公开的培养基中生长良好，有效活菌数达到1.63×10⁸cfu/ml；还能够增强中药对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制能力。

测试例2

分别将过夜培养的鸡大肠杆菌标准血清型(o78)、鸡大肠杆菌野株(o鸡)、猪大肠杆菌标准血清型(o139)、猪大肠杆菌野株(o猪)、致病性沙门氏菌(沙门)、鸭大肠杆菌野株(o鸭)和金黄色葡萄球菌(金葡)菌液与营养琼脂培养基(含1.5％琼脂，w/v)混匀，使其指示菌浓度稀释为2×10⁷cfu/ml左右，取5ml倾注于制备好的营养琼脂平板中。

将牛津杯用镊子轻轻放置于接种不同菌株的平板上，分别将200μl的中药微生态制剂(1g/ml)和硫酸新霉素原粉稀释液(硫酸新霉素原粉加无菌水稀释成万分之四倍)加入牛津杯后静置30min，于37℃培养16h，用游标卡尺测量抑菌圈大小。

本测试例中使用的待测液为实施例1得到的防治畜禽腹泻的中药微生态制剂和对比例7中购得的硫酸新霉素，每组实验进行两次，取均值，具体结果见表2。

表2

体外抑菌试验是检测药物对各种致病菌的抑菌能力，是进行临床治疗的前提和基础，对大肠杆菌等致病菌的抑菌效果提供了非常有价值的素材与资料，体外抑菌能力从侧面也体现了药物的治疗效果。通过表2数据可以看出，本公开提供的中药微生态制剂的体外抑菌试验与硫酸新霉素的体外抑菌试验比较，对鸡大肠杆菌标准血清型(o78)、鸡大肠杆菌野株(o鸡)、猪大肠杆菌标准血清型(o139)、猪大肠杆菌野株(o猪)、致病性沙门氏菌(沙门)、鸭大肠杆菌野株(o鸭)和金黄色葡萄球菌(金葡)的抑菌能力均显著增大，说明本公开的中药微生态制剂对畜禽腹泻的致病菌抑菌能力非常好。

测试例3

选取山东省烟台市某养鸡场体重、日龄相近的健康aa肉鸡400只，雌雄各半。进行大肠杆菌和沙门氏菌混菌攻毒，待鸡群发病后进行临床疗效验证。

鸡群发病时临床症状主要表现为精神不振、食欲废绝、羽毛松乱、闭眼倒卧，扎堆趴窝；严重腹泻，粪便呈灰白色、水样；肛门周围被粪便黏着、偶有血便等。

试验方法：将鸡只随机分为8组，每组50只：空白对照组(阳性对照)，攻毒不治疗组(阴性对照)，中药微生态制剂组(实施例2)，西药组(对比例7)，对比例3-6。由于鸡只不能自由饮食，故采用灌胃方式，将中药微生态制剂组(0.5g/ml稀释灌胃，0.5ml/次，2次/天)、西药组(按说明书用法用量:1l水0.77～1.15g)、对比例3-6按试验组用法用量(0.5g/ml稀释灌胃，0.5ml/次，2次/天)，对攻毒鸡只灌胃治疗，阳性对照组正常采食和饮水，阴性对照组灌胃生理盐水，连续给药5天，每天观察患鸡的临床变化，统计治愈、有效及无效数，计算治愈率和总有效率，剖检后法氏囊、胸腺、脾脏称重计算免疫器官指数。

疗效判断标准：治愈：试验结束后，病鸡症状消失，精神转好，食欲增长，完全恢复正常，无稀便，剖检心、肝、脾、肠检测无致病菌；有效：试验结束后，鸡病症状、精神、食欲明显好转，无稀便；无效：试验期间出现症状，试验结束后仍不见症状消失甚至死亡。

具体治疗效果见表3。

表3

由表3可见，在56％致死量的攻毒剂量下，实施例2使用本公开的中药微生态制剂试验组对由鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌引起疾病的有效率为88％，治愈率为82％，无效率为12％，其有效率与使用硫酸新霉素的对比例7(西药组)效果相当，但当解剖后涂板验证致病菌后，发现中药微生态制剂试验组的治愈率要比西药组高治愈率提高5.12％、胸腺指数提高17.80％、脾脏指数提高18.63％、法氏囊指数提高29.47％。使用本公开的中药微生态制剂试验组的鸡只免疫器官指数(胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数)高于西药组，从而说明此中药微生态制剂不仅能够替代抗生素治疗细菌性腹泻，而且有提高鸡只免疫力的能力。

由表3也可以看出，与对比例3-6相比，实施例2在鸡只的存活数量、有效率、治愈率上都明显高于对比例。所以从临床数据上进一步证实了本公开的中药微生态制剂的效果。

测试例4

选取山东省烟台市某猪场体重、日龄相近的黄、白痢仔猪共50头。

将病猪随机分成2栏，25只/栏，受试动物饲养管理条件基本一致，分为试验组(实施例2)、对照组(对比例7)。给药方式及用量：注射器沿仔猪口角灌服，在同一时间用药，试验组(实施例2)用量0.2g/ml，5ml/次，对照组(对比例7)用量参考说明书(1kg体重0.75g)，2次/天，连用5天。治疗同时记录黄白痢仔猪发病时平均体重、治愈后体重、治愈情况、60日龄体重以及料肉比。

疗效判断标准：治愈：试验结束后，仔猪黄白痢现象消失，粪便成形，精神状态良好；有效：治疗后仔猪黄白痢次数减少，粪便性状有所恢复；无效：治疗后仔猪黄白痢次数同治疗前无变化甚至死亡。

具体治疗效果见表4。

由表4可见，试验组(实施例2)对仔猪黄白痢的治疗效果显著，有效率为96％，治愈率为92％。与对照组(对比例7)比较：有效率提高4.35％、治愈率提高9.52％、60日均重提高9.34％、料肉比降低0.07。实验结果说明，本发明的中药微生态制剂可以有效治疗由大肠杆菌、沙门氏菌等细菌引起的畜禽腹泻，并且治愈率要高于抗生素治疗组，增重、降低料肉比等指标优化明显，能显著提高经济效益。

以上详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。