染料木素-铜配合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用的制作方法

本发明属于医药
技术领域：
，具体涉及染料木素-铜配合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。
背景技术：
：染料木素(又名染料木黄酮、金雀异黄素)是一种植物雌激素，主要存在于豆科植物中，是豆科植物鸡血藤中的主要异黄酮类成分，具有抑菌、抗氧化、抗衰老、抗炎、抗肿瘤等功能，可以治疗骨质疏松症、妇女更年期综合症、心血管疾病等多种疾病，具有很好的应用前景。针对染料木素的抗肿瘤功能，现有研究表明，染料木素可以通过下调topoiiα和sp1mrna的表达，上调sp3mrna的表达促进细胞凋亡，并使细胞停滞于g2/m期，达到抑制肿瘤细胞生长的作用。但是在实践中发现，单独使用染料木素治疗癌症时，常需要与其他活性成分组合使用，才能达到显著抑制癌症细胞生长的作用。如中国专利申请cn1535689a公开了一种用于治疗肿瘤的药物组合物，该药物组合物包括染料木素、大豆甙元、鸡豆黄素等活性成分和辅料，对乳腺癌、胃癌、肝癌等传代细胞系具有明显的抑制作用，并且能够一直肿瘤细胞的转移，效果显著，但该药物组合物需要配以大豆甙元、鸡豆黄素等活性成分协同作用才能达到相应的抗肿瘤效果，可见，染料木素的抗肿瘤活性还无法满足制备治疗癌症药物的需求。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有技术染料木素抗肿瘤活性不高的缺陷和不足，提供一种具有显著抑制人乳腺癌细胞mcf-7生长的染料木素-铜配合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种染料木素-铜配合物在制备治疗乳腺癌药物中的应用，所述染料木素-铜配合物的结构如下：染料木素结构为：其具有很好的超离域和大π键共轨体系，氧原子也具有较强配位能力，再加上其分子的空间结构，非常有利于配合物的形成。将染料木素与金属元素配合，能够有效改善染料木素的理化性质，促进人体吸收利用，还可以通过协同作用，增强其生理生化功能。申请人在实践中惊喜的发现，本发明将染料木素与铜元素配合，制备得到的染料木素-铜配合物对对人乳腺癌细胞mcf-7的生长具有显著的抑制效果，同时对人脐静脉内皮细huvec的生长抑制作用较小，具有显著的选择性抑制作用，安全性高，可应用于制备治疗乳腺癌的药物。进一步地，所述治疗乳腺癌是指抑制乳腺癌细胞的生长。更进一步地，所述乳腺癌细胞为人乳腺癌细胞mcf-7。进一步地，所述药物为口服制剂或注射剂。更进一步地，所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂和混悬剂。进一步地，所述注射剂包括粉针剂和水针剂。本发明具有以下有益效果：本发明中的染料木素-铜配合物经试验证明，对人乳腺癌细胞mcf-7的生长具有显著的抑制效果，且与染料木素或5-氟尿嘧啶相比都具有显著的提高，同时对人脐静脉内皮细huvec的生长抑制作用较小，具有显著的选择性抑制作用，安全性更高，可应用于制备治疗乳腺癌的药物。附图说明图1为本发明染料木素-铜配合物的分子结构图。图2为本发明染料木素、染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物的紫外吸收光谱图。图3为本发明染料木素的红外光谱图。图4为本发明染料木素-铜配合物的红外光谱图。图5为本发明染料木素-锌配合物的红外光谱图。图6为本发明染料木素的热重分析图。图7为本发明染料木素-铜配合物的热重分析图。图8为本发明染料木素-锌配合物的热重分析图。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。1、染料木素-铜配合物的制备称取5.40g染料木素(0.02mol)，加入170ml无水乙醇，加热至染料木素完全溶解，用氨水调节ph＝8，ph值稳定后加入4.12gcucl2·2h2o(0.024mol)，60℃恒温水浴加热回流7h；反应结束后，将反应液冷却至室温，3000转/分钟离心2分钟，沉淀用50％乙醇溶液洗涤三次后，50℃真空干燥，得4.878g草绿色粉末，收率为81％。2、染料木素-锌配合物的制备称取5.40g染料木素(0.02mol)，加入170ml无水乙醇，加热至染料木素完全溶解，用氨水调节ph＝8，ph值稳定后加入4.39g醋酸锌(0.024mol)，60℃恒温水浴加热回流7h；反应结束后，将反应液冷却至室温，3000转/分钟离心2分钟，沉淀用50％乙醇溶液洗涤三次后，50℃真空干燥，得4.017g淡黄色粉末，收率为66.5％。3、配合物的表征(1)将制备得到的染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物和染料木素分别进行紫外光谱检测，得到图2。由图2可见，在dmso溶剂中，染料木素在266nm和326nm存在两个特征紫外吸收峰；染料木素-铜配合物的两个吸收峰均向长波方向移动至270nm和388nm；染料木素-锌配合物的吸收峰也向长波方向移动至266nm、352nm和444nm。可见，吸收带i和带ii均发生了红移，表明染料木素分子中4位羰基和5位羟基确实参与了配位反应。(2)将制备得到的染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物和染料木素分别进行红外光谱检测，得到图3～5和表1。表1染料木素及其金属配合物的红外光谱数据化合物ν-oh(cm-1)ν-c＝o(cm-1)ν-c-o-c(cm-1)ν-m-o(cm-1)染料木素3412,310416651263-染料木素-铜配合物3448,333816251261457染料木素-锌配合物338416411264456由表1和图3～5可知：①染料木素的羟基吸收峰在3412cm-1和3104cm-1，羟基出现两个峰的原因可能由于游离态和缔合态羰基引起的；铜配合物的羟基吸收峰在3448cm-1和3338cm-1左右，均往波数大的方向发生了移动，尤其是缔合态的羟基峰发生了较大的移动，这很可能是羟基与金属发生络合破坏了之前的分子内氢键引起的；锌配合物的羟基吸收峰在3384cm-1出一个峰，原因可能是5-oh参与配位后分子内氢键完全消失引起的；②染料木素的4位羰基峰在1655cm-1左右，而铜、锌配合物的4位羰基峰在1625cm-1和1641cm-1左右，均向低波数移动，可能是由于4位羰基也参与了配位；③与染料木素相比，铜配合物在457cm-1左右新增加了一个吸收峰，该峰可能是金属cu与o形成的cu-o键伸缩振动引起的，锌配合物在456cm-1左右新增加了一个吸收峰，该峰可能是金属zn与o形成的zn-o键伸缩振动引起的；④染料木素的c-o-c的位置和配合物比较无显著差异，说明1位氧没有参与配位反应。(3)将制备得到的染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物和染料木素分别进行热重分析，得到图6～8。由图可见，染料木素在100℃处没有峰，而铜、锌配合物有峰，说明染料木素分子中没有结晶水，配合物均含有结晶水；染料木素在接近440℃后基本稳定，总失重为75.01％，而配合物在200-600℃之间失重速率快，之后失重速率逐渐减慢，但仍有失重，当温度升至800℃时，铜和锌配合物总失重分别为55.50％、33.39％。由表征实验结果分析可知染料木素-铜配合物和染料木素-锌配合物的分子结构为：实施例1染料木素-铜配合物对对人乳腺癌细胞mcf-7生长的影响将人乳腺癌细胞mcf-7采用dmem+10％胎牛血清+1％青霉素、链霉素双抗于5％co2、37℃的饱和湿度培养箱中培养，2～3天传代一次，细胞复苏后培养两代细胞，取对数生长期的细胞，用含10％fbs的培养基制成浓度为5×104/ml的细胞悬液，接种到96孔培养板中，每孔加入100μl，在5％co2、37℃的饱和湿度培养箱中继续培养24h；将染料木素、染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物、5-氟尿嘧啶(阳性对照)分别用dmso配制成的最终浓度为16、32、64、128μm，每孔加入200μl，以等体积的dmso做空白对照，各组均平行设置3个副孔，继续培养48h；在药物作用48h后，每孔加入20μlmtt，放入培养箱培养4h，小心弃去培养基，每孔加入150uldmso，置摇床上低速、避光振摇10min使结晶溶解完全；把处理好的板放到酶标仪里面，于490nm波长处测定吸光度值(od)，平行重复3次。待测化合物原始数据oddrug与dmso对照组oddmso进行预处理，即扣除背景值odbackground，然后进行归一化，细胞存活率(cellviability)计算公式如下：cellviability＝(oddrug-odblank)/(odcontrol-odblank)×100％采用graphpadprismversion7.0.计算待测化合物的单个浓度的细胞抑制率，然后进行非线性回归曲线拟合，得出ic50值，试验结果参见表2。表2染料木素-铜配合物对人乳腺癌细胞mcf-7生长的影响由表2可见，染料木素和5-氟尿嘧啶对mcf-7细胞均有一定的生长抑制作用，而染料木素形成金属配合物后，对mcf-7细胞的生长抑制作用显著提高，并且抑制效果显著优于阳性对照药5-氟尿嘧啶，其中，染料木素-铜配合物的效果最好。实施例2染料木素-铜配合物对人脐静脉内皮细胞huvec生长的影响将人脐静脉内皮细胞huvec采用dmem+10％胎牛血清+1％青霉素、链霉素双抗于5％co2、37℃的饱和湿度培养箱中培养，2～3天传代一次，细胞复苏后培养两代细胞，取对数生长期的细胞，用含10％fbs的培养基制成浓度为5×104/ml的细胞悬液，接种到96孔培养板中，每孔加入100μl，在5％co2、37℃的饱和湿度培养箱中继续培养24h；将染料木素、染料木素-铜配合物、染料木素-锌配合物、5-氟尿嘧啶(阳性对照)分别用dmso配制成的最终浓度为16、32、64、128μm，每孔加入200μl，以等体积的dmso做空白对照，各组均平行设置3个副孔，继续培养48h；在药物作用48h后，每孔加入20μlmtt，放入培养箱培养4h，小心弃去培养基，每孔加入150uldmso，置摇床上低速、避光振摇10min使结晶溶解完全；把处理好的板放到酶标仪里面，于490nm波长处测定吸光度值(od)，平行重复3次。待测化合物原始数据oddrug与dmso对照组oddmso进行预处理，即扣除背景值odbackground，然后进行归一化，细胞存活率(cellviability)计算公式如下：cellviability＝(oddrug-odblank)/(odcontrol-odblank)×100％采用graphpadprismversion7.0.计算待测化合物的单个浓度的细胞抑制率，然后进行非线性回归曲线拟合，得出ic50值，试验结果参见表3。表3染料木素-铜配合物对人脐静脉内皮细胞huvec生长的影响由表3可知，染料木素金属配合物最高试验浓度128μmol/l对huvec细胞的生长有一定影响，但抑制作用不大，其中染料木素-铜配合物对huvec细胞的生长抑制作用较小，与阳性对照5-氟尿嘧啶的抑制作用相当。结合对mcf-7细胞生长抑制的影响对比，说明相对于人正常脐静脉内皮细胞huvec，染料木素-铜配合物对人乳腺癌细胞mcf-7的生长抑制效果与染料木素或5-氟尿嘧啶相比都具有显著的提高，且具有选择性抑制作用，安全性更高。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12