一种治疗烧伤烫伤的药物组合物及其制备方法与流程

本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种治疗烧伤烫伤的药物组合物及其制备方法。

背景技术：

烧烫伤是生活中常见的一种意外性外伤性疾病，近年来烧烫伤发病率呈明显上升趋势，因此加强对烧烫伤的临床及实验研究，具有重要的现实意义，且烧烫伤是目前所有疾病中痛苦最大，治疗难度较高的疾病之一。轻者损伤患者皮肤，重者会危及患者生命：严重的烧烫伤可引起大面积的皮肤缺损，引发全身性的感染，导致水电解质紊乱、多脏器功能衰竭，甚至死亡。据统计，我国烧烫伤发生率约占总人口的2％，其中大面积烧烫伤的致残率达到48％，瘢痕的发病率高达91％，严重影响烧伤患者创面愈合后的外观及皮肤正常功能。此外，皮肤创伤引起的剧痛、坏死、感染、疤痕遗留等以及昂贵的修复治疗费用给患者造成严重的生理和心理负担。

此外，大面积烧伤死亡率高，深度烧伤病致残率高，以及高昂的医疗费用是目前烧伤治疗中的三大特点。而在烧烫伤治疗过程中将面临的四大难题是创面疼痛、进行性坏死、感染、疤痕愈合。因此，急需开发高效治疗烧烫伤的新药，利用药物促进创面愈合和加快愈合速度，特别是促进创伤皮肤的无瘢痕修复。

现代医学认为高温的气体、液体、固体、电、化学物质或放射性物质接触人体可能引起烧伤，将沸水所致组织损伤称为烫伤，主要是皮肤损害，严重者可伤及皮下组织、肌肉、骨骼、血管甚至内脏。根据皮肤损伤程度，一般将烧烫伤分为“三度”，ⅰ度烧烫伤一般指表皮角质层、透明层和颗粒层的损伤，偶尔可伤及棘层，但基底层完好。ⅱ度烧烫伤又可分为两种，一种是浅度烧烫伤，另一种是深度烧烫伤；浅ⅱ度烧烫伤会伤及全层表皮和真皮乳头层，可残存部分基底细胞；深ⅱ度烧烫伤伤及真皮深层，但仍残存部分真皮网织层和皮肤附件，坏死表皮与真皮形成痴皮。ⅲ度烧伤为皮肤全层烧伤，形成焦痴，有的可伤及皮下脂肪、肌肉甚至骨关节、内脏等。伤口感染常常是烧烫伤常见的并发症之一，有效地控制创面感染，加速伤口愈合，对治疗烧烫伤有着重要的意义。

西医常采用抗生素和局部手术治疗，虽有较好的治疗效果，但患者通常呈现创面恢复慢、易留下瘢痕、产生抗生素耐药性、肝肾功能受损以及机体免疫功能下降等问题，且治疗费用高，严重影响患者心理与身体的康复，也给患者家庭带来严重的经济负担。重组人表皮生长因子治疗烧烫伤创面，能减少瘢痕形成，提高创面愈合质量，但有些病人使用时会引起过敏反应，此外，这两类药长期使用会改变皮肤组织的生长环境，可能引起继发性细菌感染或疤痕等副作用。

而中医药治疗烧伤和烫伤有悠久的历史，《黄帝内经》关于烧伤烫伤“疏砭之，涂以豕膏”，针对烫伤后出现的水疱，以治病用的石针戳破，并且涂上膏药进行治疗处理的记载。现代药理研究发现清热解毒药具有抑制多种病原微生物、抗炎、镇痛等作用，在烧烫伤治疗方面，中药外用制剂有着一定的优势，且疗效确切，越来越受到关注和青睐。因此，有必要设计一种中药外用的治疗烧伤烫伤的药物组合物及其制备方法，以解决现有西医治疗烧烫伤中的问题。

技术实现要素：

为了克服上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物及其制备方法，具有给药时间短，用药方便，疗效确切，安全可靠，且无明显疤痕产生等副作用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄230-280份、当归70-130份、党参70-130份、细辛3-6份、通草7-11份、冰片50-150份、轻粉0.2-0.8份。

进一步地，上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄240-260份、当归90-110份、党参90-110份、细辛4-6份、通草9-11份、冰片70-130份、轻粉0.4-0.6份。

优选地，上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄250份、当归100份、党参100份、细辛5份、通草10份、冰片100份、轻粉0.5份。

优选地，上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄250份、当归100份、党参100份、细辛5份、通草10份、冰片80份、轻粉0.5份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500-600份。

本发明还提供上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)将大黄、当归、党参、细辛和通草按处方量称好，并混合均匀，然后加入菜籽油煎煮，加热至沸腾，保沸30min，过滤，得滤液和滤渣；

2)向步骤1)得到的滤渣中加入菜籽油，煎煮20min，至大黄呈棕褐色，停止加热，并过滤，得滤液；

3)将步骤1)中得到的滤液与步骤2)中的得到的滤液混合，加入固体石蜡500-600份及处方量的冰片和轻粉混合均匀，10分钟后，过滤，分装，即得。

进一步地，步骤1)中，菜籽油的加入量是该处方中中药饮片总重量的12倍。

进一步地，步骤2)中，菜籽油的加入量是该处方中中药饮片总重量的8倍。

与现有技术相比，本发明具有以下较好效果：

(1)本发明提供的药物组合物可以明显抑制角叉菜胶所致小鼠足趾肿；可以明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀；可以明显提高热板所致小鼠痛阈值；明显促进小鼠刀伤所致伤口的愈合；可以明显促进大鼠烫伤伤口的愈合，且无感染；

(2)本发明提供的药物组合物对外界引起的深ⅱ度烫伤具有一定的抗炎、镇痛、抑菌、促伤口愈合及疤痕修复的作用；

(3)本发明提供的药物组合物具有给药时间短，给药方便，疗效确切，安全可靠，无明显疤痕产生等副作用的优点；

(4)本发明提供的药物组合物主要通过激活pi3k/akt/mtor信号通路，来促进ⅰ型胶原蛋白vegf因子的释放，从而加快新皮肤的生成。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为本发明实施例1的角叉菜胶所致小鼠足趾肿造模前后足趾的比较图；

图2为本发明实施例1的药物组合物膏药对角叉菜胶所致小鼠足趾肿的影响；

图3为本发明实施例1的二甲苯所致小鼠耳廓肿胀造模前后比较图；

图4为本发明实施例1的药物组合物膏药对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响；

图5为本发明实施例1的药物组合物膏药对小鼠刀伤所致伤口的愈合的影响；

图6为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤伤口的愈合的影响；

图7为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤伤口的愈合的影响；

图8为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤伤口组织he染色观察烫伤愈合影响；

图9为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤伤口组织免疫组化染色观察烫伤愈合影响；

图10为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤后血清中tnf-α的影响；

图11为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤后血清中vegf因子的影响；

图12为本发明实施例1的药物组合物膏药对大鼠烫伤后伤口组织中pi3k/akt/mtor蛋白表达的影响；

图13为本发明实施例1的药物组合物膏药对皮肤的刺激性影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄230-280份、当归70-130份、党参70-130份、细辛3-6份、通草7-11份、冰片50-150份、轻粉0.2-0.8份。

进一步地，上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄240-260份、当归90-110份、党参90-110份、细辛4-6份、通草9-11份、冰片70-130份、轻粉0.4-0.6份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500-600份。

本发明还提供上述的治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：

1)将大黄、当归、党参、细辛和通草按处方量称好，并混合均匀，然后加入菜籽油煎煮，加热至沸腾，保沸30min，过滤，得滤液和滤渣；

2)向步骤1)得到的滤渣中加入菜籽油，煎煮20min，至大黄呈棕褐色，停止加热，并过滤，得滤液；

3)将步骤1)中得到的滤液与步骤2)中的得到的滤液混合，加入固体石蜡500-600份及处方量的冰片和轻粉混合均匀，10分钟后，过滤，分装，即得。

本发明的治疗烧伤烫伤的药物组合物由大黄、当归、党参、通草、细辛、冰片等中药原料制备，具有清热泻火，凉血解毒，敛疮生肌，消肿止痛之功效。该的药物组合物中各组分的作用如下：大黄具抗病原微生物及抗炎、解热，抑制血小板聚集、保护创面，化瘀生肌，抑制疤痕增生，保护脏器等作用；当归活血化瘀，对人体自由基具有清除作用，具有促进皮肤细胞活性，并能清除皮肤色素沉着，可有效增加皮肤含水量，提高小鼠皮肤细胞sod活性，增加hyp含量，从而增加皮肤胶原蛋白含量；石蜡和党参促进皮肤形成，此外，党参还具有抑菌，抗溃疡，调节免疫和促进生长功能，外用具止痛消炎止痒的作用；通草具防止硬块生成，促进毛孔生成作用；细辛芳香走窍善于止痛，能清热消肿，具拔毒，祛湿，温经止痛作用；且细辛具“消死疮肉”作用，可治疗水疮，与冰片同用，挥发油中的甲基丁香酚还有一定的局麻效果。此外，细辛还具有抗菌抗炎及提高机体新陈代谢功能，抑制皮肤被动过敏反应；冰片性辛苦、凉，具有消肿止痛、清热解毒的功效，可治疗热毒、溃疡、疮疥等病症，冰片还具有抗溃疡及抑菌作用；轻粉具杀菌，防止感染，祛腐、生肌作用，用于治疗化脓性皮肤感染性疾病，如疮疡、疥癣等，与冰片配伍外擦患处，以促进生肌收口，加速伤口愈合。

本发明的药物组合物是中药复方制剂，是在民间祖传秘方的基础上，由几味中药经现代工艺制成。以菜籽油作为基质，采用烧伤湿性医疗技术，将油膏直接调敷患处，治疗烧、伤烫伤效果好，且患者易于接受。此外，本发明的油剂固定效果较好，可使创面润滑，无板硬粘着的感觉，有助于痴皮的脱落；因其无刺激性，止痛效果佳，特别适用于儿童面部及四肢小面积烧伤烫伤患者。已对300多例i度至深ⅱ度烧烫伤患者进行了治疗，临床观察发现：i度烧伤烫伤患者使用烫伤膏时均感伤处凉爽、疼痛很快消失，幼儿换药也无哭闹现象；深ⅱ度大面积烧烫伤患者使用2个月基本痊愈，用药过程中未发现创面感染，愈合后无明显疤痕产生，且有毛发新生。

本发明的药物组合物的良好治疗效果可归因于：大黄和当归消炎，促进肌肉生成，且当归活血化瘀而止痛，共同为君药；党参促进皮肤形成，通草防止硬块生成，促进毛孔生成，共同为臣药；细辛拔毒，祛湿；轻粉：杀菌，防止感染共同为佐药；石蜡和菜籽油能使烧伤烫伤部位保持润滑，湿润，防止结痂；冰片防腐生肌，调和诸药共凑解毒生肌之功，共同为使药。

实施例1

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄250份、当归100份、党参100份、细辛5份、通草10份、冰片100份、轻粉0.5份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法如下：

1)将大黄、当归、党参、细辛和通草按处方量称好，并混合均匀，然后加入该处方中中药饮片总重量12倍的菜籽油煎煮，加热至沸腾，保沸30min，过滤，得滤液和滤渣；

2)向步骤1)得到的滤渣中加入该处方中中药饮片总重量8倍的菜籽油，煎煮20min，至大黄呈棕褐色，停止加热，并过滤，得滤液；

3)将步骤1)中得到的滤液与步骤2)中的得到的滤液混合，加入固体石蜡500份及处方量的冰片和轻粉混合均匀，10分钟后，过滤，分装，即得药物组合物。

实施例2

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄250份、当归100份、党参100份、细辛5份、通草10份、冰片80份、轻粉0.5份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法与实施例1相同。

实施例3

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄230份、当归130份、党参70份、细辛3份、通草7份、冰片50份、轻粉0.8份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡600份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法与实施例1相同。

实施例4

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄280份、当归70份、党参130份、细辛5份、通草10份、冰片150份、轻粉0.2份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡600份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法与实施例1相同。

实施例5

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄240份、当归110份、党参90份、细辛4份、通草9份、冰片70份、轻粉0.4份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法与实施例1相同。

实施例6

本实施例提供一种治疗烧伤烫伤的药物组合物，其药效成分由如下重量份数的中药原料制成：大黄260份、当归90份、党参110份、细辛4份、通草8份、冰片130份、轻粉0.6份。

进一步地，所述药物组合物还包括固体石蜡500份。

上述治疗烧伤烫伤的药物组合物的制备方法与实施例1相同。

第一部分本发明的药物组合物的药效及作用机制实验研究

以下采用动物实验试验，对本实施例1的药物组合物的抗炎、镇痛、促进刀伤伤口愈合药效、烫伤伤口愈合药效及作用机制抗菌等行了研究。

1.1、剂量

sd大鼠和昆明种小鼠：膏药组采用本发明实施例1制备的药物组合物，剂量0.15ml/cm²；阳性组采用美宝湿润烧伤膏(美宝)(阳性药)，剂量0.15ml/cm²；对照组采用植物油，批号whndl04，剂量0.15ml/cm²。

1.2、实验方法

1.2.1大鼠足趾肿胀度

将30只雌雄大鼠(180～220g)随机分为3组：对照组、膏药组、阳性组。涂药剂量为0.15ml/cm²，3次/天，连续5天；第六天，在各鼠右后足踝关节处作记号，用足容积测定仪测定致炎前后容积变化差，连续测三次取平均值；各组大鼠右后足皮下注射1％的角叉菜胶0.1ml产生炎症现象，分别测定0.5、1、2、3、4、5h后的致炎足容积，每次测完体积后，继续给其足部涂药。根据下列公式，计算足趾肿胀度：

足趾肿胀度(△v)＝肿胀后足趾肿胀体积(v2)－注射角叉菜胶前足趾体积(v1)，以观察药物组合物烫伤膏药抗炎情况。

1.2.2小鼠耳廓肿实验

将30只雌雄小鼠(18～22g)随机分为3组：对照组、膏药组、阳性组。造模前，首先分别测量并记录各组小鼠耳廓初始厚度，于各组小鼠右耳两面均匀涂抹二甲苯0.1ml致肿胀，建立小鼠肿胀炎症模型，左耳不涂二甲苯作为正常对照。造模成功后，采用局部涂抹的给药方式给药，用棉签在耳两侧涂抹各药物，剂量为0.15ml/cm²，3次/天，对照组局部涂抹等剂量生理盐水，连续涂药5天，于第六天处死小鼠，用手术剪沿耳根部分别剪下左右耳，随即用打孔器打孔，称取其重量。计算耳廓肿胀程度，以观察药物组合物烫伤膏药抗炎药效。

耳肿胀度△m＝右耳重量m1－左耳重量m2

1.2.3热板所致小鼠疼痛实验

选用昆明种雌性小鼠，按照热板法(54±1℃)中小鼠舔后足所需时间(为其正常的痛阈值)，检测3次，每次间隔30min，筛选出痛阈值为5s～40s的小鼠30只。随机分组：对照组、膏药组、阳性组，首先测定3个实验组的基础痛阈值：将小鼠放在55℃的热板上，给药前测两次(每次间隔10min)，取其平均值。然后各组分别足底涂药方式给药，涂抹各药物0.15ml/cm²，对照组局部涂抹等量的生理盐水，3次/天，持续7天。给药一周后测定痛小鼠阈值(小鼠在热板上停留超过60s仍无反应者，以60s计)，测3次，每次间隔30min，取平均值，观察小鼠痛觉敏感度变化。按如下公式计算给药后痛阈提高的百分率：

痛阈值＝投药后痛阈值－投药前痛阈值。

1.2.4小鼠刀伤实验

将20小鼠随机分为两组，分为对照组、膏药组，2％的水合氯醛麻醉，宠物剪剃毛，注意力度，以防皮肤产生损伤，单面刀片切割皮肤，产生约1cm的伤口大小。进行涂药方式给药，剂量为0.15ml/cm²，给药后，观察伤口愈合情况。

1.2.5大鼠烫伤实验

取35只sd大鼠，10％水合氯醛进行麻醉，宠物剪剃去背部毛发，将烧红的铁块(1.5cm×1.5cm)在脊柱两侧各烫一块伤口(持续10s)造成深ⅱ度烫伤模型；将造模后的大鼠随机分组，对照组、膏药组、阳性组，半小时后动物全部苏醒，按不同分组进行涂药，3次/天，剂量为0.15ml/cm²；造模后第1天、第7天、第14天、第28天，分别用记号笔隔着透明胶布(将透明胶布有粘性的一侧对折，以第1天的伤口大小为基值)描摹同等伤口大小。采用描记称重法，用a4纸，剪下与伤口同等面积纸片大小，置于天平上称重。按照：伤口愈合(△m)＝初始伤口制片质量(m1)-对应时间点伤口质量(m2)

以观察伤口愈合情况。并分别按组取其背部伤口皮肤(4％多聚甲醛固定)，并腹主动脉取血，离心(3000rpm，共10分钟)，－80℃保存上清液，以便后续实验。

1.2.6he组织染色观察大鼠烫伤愈合情况

通过he组织染色，可直接观察到真皮层向表皮层的分化、附属器的修复情况。分别取上述“烫伤模型”给药后第1天、第7天、第14天、第28天大鼠，分别按组取其背部伤口皮肤，用手术刀将目的部位组织修平整，将新鲜组织浸泡于4％多聚甲醛按顺序标签，进行he染色，观察皮肤组织愈合情况。

1.2.7免疫组化实验

通过免疫组化实验，可以观察烫伤治疗后新生皮肤生长状况。取上述烫伤实验中的大鼠动物模型，分别按组取其背部伤口皮肤，用手术刀将目的部位组织修平整，做好石蜡组织切片，进行免疫组化实验，观察染色情况，记录实验结果。

1.2.8血清中tnf-α/vegf因子的测定

取上述“大鼠烫伤实验”的各模型组大鼠，其中部分大鼠腹主动脉取血，离心(3000rpm，10分钟)，－80℃保存上清液。用elisa试剂盒测定血清中tnf-α和vegf含量，观察实验结果，并进行统计分析。

1.2.9westernblot法检测pi3k/akt/mtor蛋白表达

将上述“大鼠烫伤实验”的各模型组大鼠组织标本剪切成细小的碎片，放入研钵中，加入液氮研磨至粉末状，按照每20mg组织加入200μl裂解液，使组织充分裂解，离心(12000转/分钟，5分钟)，取上清，即得样本，westernblot法检测其中蛋白含量。

1.3、结果与分析

1.3.1大鼠足趾肿胀实验结果

实验结果如图1、图2和表1所示，可以看出：造模后，足体积逐渐增大，在第3h时，足部肿胀达到最大程度；在第4h到5h时，肿胀逐渐消失。与造模前相比，足部偏红，皮肤有皱缩倾向。在第3h时，膏药组足趾肿胀程度明显小于对照组；在第4h到5h过程中，膏药组足趾肿胀减小速度明显快于对照组。实验结果表明，采用本发明的药物组合物膏药能够减轻角叉菜胶引起的炎症反应，具有减轻炎症的作用，如图1所示。

表1足趾肿胀度的变化结果

注：对照组相比，*，p<0.05，**，p<0.01

1.3.2小鼠耳廓肿实验结果

实验结果如图3、图4和表2所示，可以看出：与对照组比较，膏药组耳廓肿胀度明显减轻，直至肿胀消失，说明采用本发明的药物组合物膏药具有抑制二甲苯所致的急性炎症反应，且本发明的药物组合物效好于阳性对照药物。

表2耳廓肿胀实验的结果

注：与对照组对比，**p<0.01

1.3.3热板所致小鼠疼痛实验结果

足底疼痛造模成功后，采用局部涂抹给药的方式进行给药，实验结果如表3所示，可以看出：与对照组比较，膏药组可以明显提高小鼠的痛阈值，在12h时达到对照组的120％，表明本发明的药物组合物具有较好的镇痛作用。

表3镇痛实验结果

注：*p<0.05

1.3.4小鼠刀伤实验结果

造模成功后，按照分组进行涂药，分为对照组、膏药组两组。结果如图5所示，发现涂药后第5天，与对照组相比，膏药组中伤口面积减小并结痂，对照组与膏药组均未出现感染，两组无明显差异；第10天，对照组动物主要为结痂，膏药组已出现疤痕逐渐消失的倾向；第16天，对照组仍主要以疤痕为主，膏药组疤痕消失，伤口处长出新毛、且完全覆盖表皮。说明本发明的药物组合物具有促进伤口恢复与祛除疤痕的作用。

1.3.5烫伤实验结果

造模成功后，观察28天内的实验结果，结果如图6和图7所示：造模后第一天，各组表面微黄呈焦痂状，触摸伤口有硬块。第7天，对照组创面肿胀发硬，膏药组焦痂减少。第14天，对照组伤口红肿，有分泌物溢出，焦痂出现不同程度的脱落；膏药组无分泌物溢出，焦痂全部脱落。第28天，与对照组相比，膏药组主要以疤痕的形式展现，且疤痕处已经长出新的皮毛。从伤口恢复和毛发生长情况看，膏药组效果好于阳性对照美宝湿润烧伤膏组，说明本发明的药物组合物烫伤膏能促进烫伤伤口的愈合。

为了便于统计分析，分别于第1天、7天、14天、28天，用记号笔隔着透明胶布(将透明胶布有粘性的一侧对折，以第1天的伤口大小为基值)描摹同等伤口大小。采用描记称重法，用a4纸，剪下与伤口同等面积纸片大小，置于天平上称重。结果如表4所示。

表4伤口愈合结果

注：与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01分别表示具有显著性差异和极显著性差异。

由结果可知：随着时间的延长，膏药组纸片质量减小，伤口面积减小，伤口逐渐愈合。该结果进一步说明，采用本发明的药物组合物对烫伤伤口的愈合可起到促进作用。

1.3.6he组织染色结果

从实验结果可以看出：造模后第1天，表皮破碎，真皮层受损，血管、皮下组织细胞出现损坏，细胞缺失、出现大片空白区域。第7天，对照组表皮层破损严重，真皮层出现较多空白区域，为细胞受损缺失；膏药组与阳性组，较对照组而言，皮肤破损处减少；第14天，对照组表皮层与真皮层间仍存在空白，真皮层内仍有大量空泡；膏药组真皮层细胞逐渐向表皮层推进，形成表皮细胞，且膏药组较阳性药组，边缘处颜色更深，角质化倾向更明显，真皮层内空泡相对较少。第28天，均出现边缘表皮角质化的倾向，与对照组比，膏药组边缘整洁，表皮层与真皮层接合处紧密、无缝隙，说明本发明的药物组合物具有促进真皮层向表皮层分化的作用。结果见图8所示。

1.3.7免疫组化实验结果

由实验结果可知：造模后第一天，皮肤组织被破坏的较严重，细胞(黑色代表细胞核)之间缝隙较大，间质部分(灰色代表胶原蛋白)分布稀疏；涂药后，于第7、14、28天，细胞间开始出现不规则的胶原蛋白棕黄色区域，与对照组相比，膏药组和阳性组胶原蛋白不规则区域面积增多；在给药周期内，同组药物，随时间的延长，细胞间胶原蛋白增加，排列紧密、均匀。说明本发明的药物组合物具有促进细胞间ⅰ型胶原蛋白增加的作用，结果如图9所示。

1.3.8血清中tnf-α因子的测定结果

急性炎症模型造模成功后，取小鼠血清进行tnf-α和vegf因子含量测定，结果如下所示：与对照组相比，膏药组血清中tnf-α因子含量有显著下降，且药物组的药物组合物效果好于阳性组的阳性对照药，说明本发明的药物组合物具有抗炎作用，结果见图10。

1.3.9血清中vegf因子的测定结果

从实验结果可知：与对照组相比，各膏药组在第14和28天，膏药组血清中vegf含量为显著性增加，从而加快血管的形成，而促进新的皮肤组织形成。在第14天，与阳性组相比，膏药组血清中vegf显著性增加，甚至高于阳性对照药。基于此结果推测，本发明的药物组合物可加快体内vegf的释放，而且效果好于阳性组的阳性对照药，结果见图11。

1.3.10westernblot法检测pi3k/akt/mtor蛋白表达情况

正常情况下，组织内pi3k/akt/mtor通路中多种蛋白的含量保持稳定，当机体受到外界刺激，会产生一系列的自我防御与免疫功能，释放相关炎症因子和生长因子，在这些因子的作用下，pi3k/akt/mtor信号通路被启动，机体皮肤开始修复。实验结果表明：在造模后的第1到7天内，受外界伤口的刺激，组织内pi3k/akt/mtor蛋白的表达均增加，但膏药组蛋白表达量增加更明显。如图12所示：本发明的药物组合物给药后，皮肤组织内蛋白pi3k/akt/mtor的表达明显增加。说明本发明的药物组合物具有促进pi3k/akt/mtor蛋白的表达，从而促进皮肤的修复功能。

烫伤、烧伤一般并随着炎症和疼痛反应，针对烫伤和烧伤临床症状，本研究对其药效学进行了相关研究，结果显示，本发明的药物组合物膏药具有抗炎、镇痛、促伤口愈合及疤痕修复的功效；且通过模型动物皮肤组织he染色，可清楚发现受损皮肤的修复是由于真皮层向表皮层分化，产生了新的表皮细胞；胶原蛋白为生物大分子，由小分子氨基酸进行多种结构的整合而形成的，为动物结缔组织的主要成分，具有保护细胞抵抗外界压力与弹性的作用，根据其体内的分布与功能特点，可分为间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。在整个机体中，间质型胶原占绝大部分，具体为胶原ⅰ/ⅱ/ⅲ型，分布于皮肤中的主要为ⅰ型胶原。通过免疫组化实验发现本发明的药物组合物烫伤膏具有促进细胞间ⅰ型胶原蛋白合成，ⅰ型胶原蛋白主要存在于细胞的组织间隙，能抵抗外界的压力与弹力损伤。pi3k/akt/mtor蛋白通路可直接刺激相关生长因子(vegf)的激活，有益于成纤维细胞的增殖，而促进ⅰ型胶原蛋白的合成与分泌。本研究初步揭示了本发明的药物组合物膏药组主要通过激活pi3k/akt/mtor信号通路，来促进ⅰ型胶原蛋白vegf因子的释放，从而加快新皮肤的生成的相关机制。

第二部分本发明的药物组合物的安全性实验研究

本发明的药物组合物试验表明该品有抗炎、抗菌，促进伤口愈合及促进新皮肤生成作用。为了观察该膏药的安全性，对其进行了安全性评价相关实验研究。

2.1、实验部分

2.1.1试药与动物

本发明实施例1制备的药物组合物；植物油，批号whndl04；0.9％生理盐水，武汉滨湖双鹤药业有限责任公司，批号1703020803；美宝湿润烧伤膏(阳性对照)；其中膏药组采用本发明实施例1制备的药物组合物，对照组采用植物油；

sd大鼠，spf级，雌雄各半，体重200±20g，由湖北省实验动物研究中心提供，合格证书：scxk(鄂)2016-0089

2.1.2方法

2.1.2.1皮肤刺激性实验

取20只sd大鼠，雌雄各半。造模前一天，先用剪刀剪去动物毛，接着用电动宠物剃毛剪将大鼠背部脊椎部分的毛剃干净，注意不要弄伤动物皮肤，去毛范围约4x2cm，然后用生理盐水少量多次，反复冲洗背部剃毛部分。随机分为两组即对照组、膏药组。对照组涂植物油，膏药组涂本发明的药物组合物烫伤膏，连续给药7天(3次/日)。于第3天涂药1h后，用干净脱脂棉擦去脱毛部分的药物并用清水冲洗干净，观察皮肤情况，连续观察7天，记录其发生的异常反应情况，按表5和表6评价标准进行评估和评分。并随时观察动物全身的突然的、异常的反应情况，并记录动物体重、皮肤毛发、眼和黏膜变化，呼吸、中枢神经系统、四肢活动等中毒表现，如果有死亡动物应进行尸检和肉眼观察，当有肉眼可见病变时，应进行病理组织学检查。

表5肌肤刺激反应的评分标准

表6皮肤刺激反应程度的评价规范

2.1.2.2经皮给药急性毒性实验

取健康大鼠20只，随机分2组各10只，雌雄各半，实验前24h将大鼠背部脊柱两侧用脱毛剂脱毛40cm²，实验当日将植物油和本发明实施例1的药物组合物分别涂于对照组和膏药组的脱毛区，24h后用温水洗去残留物，随时观察动物全身的突然的、异常的反应情况，并记录动物体重、皮肤毛发、眼和黏膜变化，呼吸中枢神经系统、四肢活动等中毒表现，如果有死亡动物应进行尸检和肉眼观察，当有肉眼可见病变时，应进行病理组织学检查。

2.1.2.3经皮给药长期毒性实验

取健康大鼠20只，实验前24h将大鼠背部脊柱两侧用脱毛剂脱毛40cm²，脱毛24h后将符合要求的大鼠随机分为两组，雌雄各半，分别为阴性对照组和膏药组，每组10只。植物油、药物组合物分别涂于脱毛区部位，并根据动物体质量调整给药量，每天两次，连续给药28d，观察大鼠进食量、外观体征、行为活动、皮肤光泽、皮肤反应、粪便性状及体质量改变，第一周称体质量2次，以后每周1次。

2.2、实验结果

2.2.1皮肤刺激性实验结果

观察连续涂药7天期间与之后，动物的行为活动、外观、体征表现、呼吸、精神状态、饮食及体重并未出现异常。对照组和膏药组在给药期间均未出现红斑、水肿等刺激性表现。表明：本发明的药物组合物对皮肤无刺激性，具有较强的安全性，结果见表7和图13。

表7皮肤刺激性结果

2.2.2急性试验毒性结果

给药结束后随机取动物，进行血液生化指标(血红蛋白、白细胞、尿素氮)检查，并迅速剖取心、肝、脾、肺、肾、胃测定脏器质量，计算脏器系数，并对对照组、膏药组的血液生化指标和脏器进行病理组织学检查，结果见表8和表9。

表8大鼠皮肤急性毒性实验结果

表9大鼠给药前后体重测定结果

2.2.3长期毒性实验结果

给药4周后，用xn9000型血液分析仪和au-2400型生化分析仪进行血液常规及生化指标测定，然后处死大鼠立即取重要脏器称湿重，计算脏器系数并进行组织学检查。数据以士sd表示，用组间t检验进行统计分析。

体重的变化：给药四周后，对照组和膏药组大鼠体重都有所增加，结果见表10。

外周血象：用药4周，大鼠各项血象指标均未见异常，各组间及与对照组间比较，均无显著性差异(p>0.05)，见表11。

生化指标：用药4周，大鼠各项血液生化指标均在正常范围内，各组间及与对照组间比较，均无显著性差异(p>0.05)，见表12。

脏器系数：实验末期、恢复期大鼠病理组织形态学检查结果表明，对照组动物各脏器组织均无异常组织学改变，高剂量组动物各脏器组织均无药物所致异常组织学改变，与对照组间比较，均无显著性差异(p>0.05)，见表13和表14。

表10大鼠实验前后体重测定结果

表11给药28d对大鼠外周血常规影响

表12给药28d对大鼠外周血生化影响

表13给药28d对雄大鼠脏器系数的影响

表14给药28d对雌大鼠脏器系数的影响

通过对大鼠的皮肤刺激性考察与用药前后肝肾功能指标检测，可推测本发明的药物组合物对皮肤无刺激性、脏器功能无危害性，符合外用药的安全性要求。

第三部分本发明的药物组合物的临床检验效果

使用方法如下：外用涂抹本发明实施例1制备的药物组合物给药，每日3次，剂量0.15ml/cm²。

初诊病人应彻底清创，用0.9％生理盐水反复冲洗创面，彻底清除坏死组织及分泌物。若遇化学烧伤，应用消毒灭菌蒸馏水反复冲洗创面。清创后创面用消毒药棉或纱布擦干后方可用药。敷药时用软膏刀将药膏均匀涂于消毒后的敷料上，且涂药敷料应大于创面1cm。然后将涂有药膏的敷料贴于创面，再用药棉加垫，最后用绷带包扎，使创面与外界隔离。在坏死组织溶解分离时因渗出物较多，敷料和药棉应厚些，以后隔日换药直至创面愈合。换药时应将已分离的坏死组织轻轻剪除，以不出血为原则，再以生理盐药棉或纱布轻轻擦净分泌物，然后重新敷药包扎。

疗效标准：

治愈：无瘢痕，无功能障碍，肌肉恢复弹性；

好转：有瘢痕，无功能障碍；

无效：创面不愈或加重，有瘢痕及功能障碍。

治疗结果：基本治愈，无1例感染，无1例施行植皮手术，深ⅱ度、ⅲ度创面愈后无瘢痕，肌肉光滑柔软，无功能障碍。

临床观察愈合过程：用药3～5min疼痛消失，病人情绪稳定；用药1～2d，局部红肿消退，炎症得到控制；用药7天左右，坏死组织开始溶解脱落，渗出物多且粘稠，未见新生肉芽；用药10天后可见部分肉芽组织生长，渗出物质稠，色微黄；用药20天后，新生肉芽组织生长迅速，上皮由边缘自行向中心延伸，生长加快，大部分创面愈合，未愈合的创面收缩明显；用药1个月-1.5个月，深ⅱ度、ⅲ度烧伤创面可全部愈合。

某患者10岁，女孩，汽油烧伤，诊断为ⅱ度烧伤，面容痛苦，颜面肿胀，双耳肿胀透明，有水疱形成，部分已溃破，基底苍白，颈及下颌呈焦碳样，嘴肿胀呈凸状，功能受限，双目水肿不能视物。诊断为ⅱ度烧伤，面积5.2％。治疗：当即给予清创，外涂烧烫伤膏2小时/次，经25d治疗后痊愈，无任何后遗症。

患者38岁和40岁，男性，做油漆时，不小心被明火烧伤，诊断为深ⅲ度，烧伤面积大72％和68％，患者面容痛苦，颜面肿胀，处于昏迷状态，外涂烧烫伤膏2小时/次，经42d治疗后基本痊愈，仅在手上留下少许花纹，脸上无任何疤痕和痕迹(疤痕有硬块，痕迹无硬块)。

某甘肃患者2岁半，脸部，手和胸部烧伤，诊断为深ⅲ度，甘肃省人民医院担心小患者手部感染控制不住，建议拒掉手腕至手指部位，以保胳膊进行治疗，患者慕名要求用烫伤膏治疗，治疗1.5月后，基本治愈，仅脸部留下少许疤痕，其余地方痊愈。

甘肃兰州金华驾校校长哥哥烧伤，诊断为深ⅲ度，烧伤面积达62％，22％深ⅱ度，在医院治疗29天后还处于昏迷状态，后慕名要求用烫伤膏治疗，治疗35天后，患者基本治愈，留下硬块，后继续用药，硬块消失，脸部无任何痕迹，仅在身体部位留下少许疤痕。

某烫伤患者，5岁，男孩，不小心腿部严重烫伤，诊断为深ⅱ度，面积为20％，烫伤膏治疗，治疗37天后，患者基本治愈。

某烫伤患者，出生33天，男孩，烫伤面积20％，诊断深ⅱ度，烫伤膏治疗，治疗22天后，患者痊愈，没有留下任何疤痕。

某患者3岁，男，脸部烫伤，烫伤面积近50％(脸部)，经烫伤膏治疗15天后，痊愈，没有留下任何后遗症。

某患者18岁，外伤，缝合3000多针，烫伤膏涂外伤部位，配合治疗，治疗17天后，患者痊愈，没有留下任何疤痕。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。