本发明属于外用止血药中的天然产物制剂领域，具体涉及一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物及其应用。
背景技术：
血液从伤口处由体内流向体外的过程称为外出血。一般针对外出血的首要措施为止血，但是在手术操作或创伤，特别是出血，渗血时很难控制，不但失血量会增加，而且还使手术难度增大，甚至危及生命。手术中止血方法的合理选择可以减缓创面出血、渗血，保证手术视野清晰，提高手术效率，缩短手术时间，从而减少失血和输血，术中和术后相关并发症的发病率，加速病人术后恢复，进而减轻病人的痛苦和医疗费用。
每年出血病人数约在900万人以上，其中幼儿鼻出血占绝大多数。儿童流鼻血比较多见，经常在洗耳，低头或轻微触碰鼻子的时候发生，也有许多儿童在睡梦中无预兆的流鼻血。据统计，约有60％的人一生中都曾有过鼻出血史。
鼻出血是鼻科常见的急症之一，它并不是一个独立的疾病，可能是全身或局部许多疾病的一种伴随症状，特发性鼻出血以小儿和青年多见。小儿鼻出血容易贫血，脑供血不足导致小儿记忆力减退、视力下降、免疫力低下，鼻出血过多导致营养流失增多，在12-16岁青春期的突出表现为身材矮小。小儿鼻出血可导致上课注意力不集中、学习成绩下降，并发生溢泪，泪中带有大量血块。小儿鼻出血还会造成恐惧、焦虑的心理，严重影响孩子的身心健康和性格成长。小儿鼻出血如治疗不当或不及时会诱发鼻黏膜萎缩、贫血、血小板减少(甚至白血病)，鼻出血还会引发缺血性休克而危及生命。引起儿童鼻出血的原因众多，当鼻腔粘膜干燥，毛细血管扩张，有鼻腔炎症或收到刺激时，就会引起鼻出血；当气候干燥，气压低，炎热，寒冷，室温过高是也会引起鼻出血；还有许多儿童会有用手抠鼻的不良习惯，鼻粘膜干燥时容易发生鼻出血；儿童挑食，不吃青菜也会发生由于缺少维生素而发生的鼻出血。
儿童鼻出血属于急症，一旦发生就需要及时止血。针对鼻出血的止血方法，主要有指压法、前鼻孔填塞术、后鼻孔填塞术、局部止血药物、烧灼法、经鼻内镜止血法、动脉栓塞、血管结扎术、鼻中隔手术、其他手术等。以上的止血方法在应用过程中或见效慢，或给患者带来更大的痛苦。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物及其应用，以克服现有技术存在的缺陷，本发明成本低、效果显著、有较高的市场价值。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物的新鲜压榨液、干燥粉、水煎液或者通过化学提取方式获得的提取产物。
进一步地，所述新鲜压榨液制备过程如下：将新鲜的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物密封后，在-80℃冰箱里过夜保存，取出后在液氮中研磨，即制得新鲜压榨液。
进一步地，所述干燥粉的制备过程如下：将新鲜的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物阴干后粉碎过40目筛，即制得干燥粉。
进一步地，所述水煎液的制备过程如下：将新鲜的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物洗净后煮沸30-60min，即制得水煎液。
进一步地，所述化学提取方式为醇提法、微波萃取提取法、混合溶剂萃取法、水蒸气蒸馏法或索氏提取法。
垂柳提取物在制备治疗习惯性流鼻血药物上的应用，所述治疗习惯性流鼻血药物为新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物与可药用载体制成的膏剂或喷雾剂，或所述治疗习惯性流鼻血药物为干燥粉。
进一步地，所述膏剂的制备具体为：以质量份数计，取新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物10-20份，加入十八醇70-90份、单硬脂酸甘油酯15-25份、司盘601-3份、液体石蜡90-110份、二甲硅油2-8份，加热至70-90℃，搅拌均匀得到清膏；
另取三乙醇胺8-12份、甘油140-160份、对羟基苯甲酸丙酯0.10-0.15份、羟苯乙酯0.2-0.3份及十二烷基硫酸钠1-2份加热至70-90℃使熔融，将熔融产物与所得清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得膏剂。
进一步地，所述喷雾剂的制备具体为：取新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物10-20份，用10-15倍质量体积分数80％的乙醇浸泡1-2h，回流提取2h，过滤后得到的药渣继续加相对于垂柳提取物5-8倍质量的体积分数80％的乙醇回流1.5h，过滤，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖8-12份，用蒸馏水溶解得到溶液a，取聚维酮12-18份，用体积分数90％的乙醇溶解得到溶液b，分别在搅拌下将溶液a和溶液b加入上述滤液中，继续加入滤液2-3倍质量的蒸馏水、混匀并灭菌，即得喷雾剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明通过动物实验证明了垂柳提取物在制备治疗习惯性流鼻血的药物中的应用，通过志愿者病例可以看出在治疗长期流鼻血病人时，治愈率高，对止鼻血有较好的效果，长期使用可以根治。
本发明主要应用于习惯性流鼻血，制备的治疗习惯性流鼻血的药物是一种安全，高效，廉价的止血新药物，主要成分来自垂柳(拉丁名foliumsalicisbabylonicae)采用提取工艺获得的混合物，对于儿童、青少年习惯性流鼻血有良好的止血作用。本发明是根据药物性能功效与外伤出血特点设计而成的中药，有较好的止血、消毒、杀菌和抗炎作用，本发明成本低、效果显著、有较高的市场价值。
本发明应用于止血药物时，可以有效的减少出血时间，且三种剂型均有止血的作用，其中粉剂的止血作用最佳。
具体实施方式
下面对本发明的实施方式做进一步详细描述：
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，该垂柳提取物包括木犀草素，柯伊利素，芹菜素，芦丁，异槲皮素，儿茶素，异鼠李素，水杨酸，单宁酸，槲皮素，水杨苷，二氢杨梅素。这几种活性成分均具有抗炎，抗氧化作用，其中芦丁，儿茶素，槲皮素，木犀草素有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性的作用，单宁酸则具有促进巨核细胞分化、成熟和血小板生成的作用。这些化合物的相关作用，为垂柳提取物可以用来治疗习惯性流鼻血提供了一定的理论基础。
垂柳提取物为垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物的新鲜压榨液、干燥粉、水煎液或者化学提取方式获得的提取物；其中，新鲜压榨液制备步骤如下，新鲜的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物，用塑封袋包装，在-80℃冰箱里过夜保存，之后取出样品，液氮中研磨，制成新鲜压榨液。干燥粉的制备步骤如下，新鲜的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物，阴干，粉碎过40目筛，制成干燥粉。水煎液的制备步骤如下，垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物洗净后入锅煮沸30-60min，制成水煎液。化学提取方式包括醇提法、微波萃取法提取法、混合溶剂萃取法、水蒸气蒸馏法、索氏提取法。
所述醇提法、微波萃取法提取法、混合溶剂萃取法、水蒸气蒸馏法、索氏提取法的制备步骤如下所述：
醇提液的制备：取干燥垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物，粉碎过20目筛；用5倍量体积分数70％乙醇浸泡过夜后，闪式提取三次，过滤合并提取液，减压浓缩成稠膏，加水混悬，相对于粉碎物料依次用3倍量的石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇分别萃取3次，合并各层萃取液，减压浓缩至干，共得到石油醚萃取物浸膏，乙酸乙酯萃取物浸膏，正丁醇萃取物浸膏；取正丁醇萃取物浸膏经硅胶柱色谱，干法上样，氯仿-甲醇梯度洗脱，20：1→15：1→10：1→7：1→5：1→3：1→1：1→0：100梯度洗脱，合并相同梯度洗脱液，回收溶剂，将各部分浓缩液冻干保存；随后经过多次硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析，获得垂柳提取物。
微波萃取法提取法：干燥的垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物，粉碎后用体积分数70％乙醇微波萃取，微波功率1500-2500w，升温至50-70℃后保温提取30-50min，合并提取液，减压回收得粗提物；将粗提物悬浮于水中，用正丁醇萃取，减压回收溶剂，得正丁醇部分浸膏，经过硅胶柱和甲醇反复柱层析，得垂柳提取物。
混合溶剂萃取法：垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物用乙醇加热回流提取，减压浓缩得浸膏，将其悬浮于水中，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯部分拌入柱色谱硅胶中，加到硅胶柱上，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱，500ml为一馏分依次收集；将第82～100、118～122、157～177、151～101馏分合并，减压浓缩，所得固形物再经凝胶柱及硅胶柱色谱纯化，以甲醇或氯仿-甲醇梯度洗脱，依次得到垂柳叶片，垂柳树皮，垂柳根的主要化合物；
水蒸气蒸馏法：新鲜垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物洗净后，稍微干燥后或干燥垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根的混合物然后稍微浸泡后，切碎，使能通过2～3号筛，入锅与水混匀，置于水蒸气发生器中，蒸馏，收集馏分，一般蒸馏两次即可；
索氏提取法：干燥垂柳枝叶、垂柳树皮和垂柳根中的一种或多种混合物，用滤纸包成小包，将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中；连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在70～80℃之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状，抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止；抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发；待乙醚挥发之后，将滤纸包置于105±2℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止。
将垂柳提取物用于制备治疗习惯性流鼻血药物时，治疗习惯性流鼻血药物为粉剂、膏剂和喷雾剂中的一种，所述粉剂即采用干燥粉，所述膏剂和喷雾剂采用新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物与可药用载体制成。
所述膏剂的制备为取新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物10-20份，加入十八醇70-90份、单硬脂酸甘油酯15-25份、司盘601-3份、液体石蜡90-110份、二甲硅油2-8份，加热至70-90℃，搅拌均匀得到清膏，另取三乙醇胺8-12份、甘油140-160份、对羟基苯甲酸丙酯0.10-0.15份、羟苯乙酯0.2-0.3份、十二烷基硫酸钠1-2份加热(70-90℃)使熔融，与上述清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得软膏；
所述喷雾剂的制备步骤为取新鲜压榨液、水煎液或者化学提取方式获得的提取产物10-20份，10-15倍量80％乙醇浸泡1-2h，回流提取2h，滤过后得到的药渣继续加80％乙醇5-8倍量回流1.5h，滤过，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖8-12份，用适量蒸馏水溶解，聚维酮12-18份，用适量90％乙醇溶解，分别在搅拌下缓缓加入上述滤液中，继续加入滤液2-3倍质量的蒸馏水，混匀后采用1000ml，50ml喷雾瓶分装，灭菌，即得所述喷雾剂。
下面结合实施例对本发明做进一步详细描述：
实施例1
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶的新鲜压榨液，所述新鲜压榨液制备过程如下：将新鲜的垂柳枝叶密封后，在-80℃冰箱里过夜保存，取出后在液氮中研磨，即制得新鲜压榨液。
将垂柳提取物与可药用载体制成膏剂，制备具体为：以质量份数计，取新鲜压榨液10份，加入十八醇70份、单硬脂酸甘油酯15份、司盘601份、液体石蜡90份、二甲硅油2份，加热至70℃，搅拌均匀得到清膏；另取三乙醇胺8份、甘油140份、对羟基苯甲酸丙酯0.10份、羟苯乙酯0.2份及十二烷基硫酸钠1份加热至70℃使熔融，将熔融产物与所得清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得膏剂。
实施例2
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳树皮的水煎液，所述水煎液的制备过程如下：将新鲜的垂柳树皮洗净后煮沸30min，即制得水煎液。
将垂柳提取物与可药用载体制成膏剂，制备具体为：以质量份数计，取水煎液20份，加入十八醇90份、单硬脂酸甘油酯25份、司盘603份、液体石蜡110份、二甲硅油8份，加热至90℃，搅拌均匀得到清膏；另取三乙醇胺12份、甘油160份、对羟基苯甲酸丙酯0.15份、羟苯乙酯0.3份及十二烷基硫酸钠2份加热至90℃使熔融，将熔融产物与所得清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得膏剂。
本实施例中水煎液制备过程中煮沸时间也可以为45min或60min。
实施例3
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳树皮和垂柳枝叶的混合物的水煎液，所述水煎液的制备过程如下：将新鲜的垂柳树皮洗净后煮沸30min，即制得水煎液。
将垂柳提取物与可药用载体制成膏剂，制备具体为：以质量份数计，取垂柳提取物15份，加入十八醇80份、单硬脂酸甘油酯20份、司盘602份、液体石蜡100份、二甲硅油5份，加热至80℃，搅拌均匀得到清膏；另取三乙醇胺10份、甘油150份、对羟基苯甲酸丙酯0.12份、羟苯乙酯0.25份及十二烷基硫酸钠1.5份加热至80℃使熔融，将熔融产物与所得清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得膏剂。
实施例4
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶通过索氏提取法获得的提取产物。
将垂柳提取物与可药用载体制成膏剂，制备具体为：以质量份数计，取垂柳提取物15份，加入十八醇80份、单硬脂酸甘油酯20份、司盘602份、液体石蜡100份、二甲硅油5份，加热至80℃，搅拌均匀得到清膏；另取三乙醇胺10份、甘油150份、对羟基苯甲酸丙酯0.12份、羟苯乙酯0.25份及十二烷基硫酸钠1.5份加热至80℃使熔融，将熔融产物与所得清膏混合，加水至1000份，搅拌均匀即得膏剂。
实施例5
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶通过微波萃取提取法获得的提取产物。
将垂柳提取物与可药用载体制成喷雾剂，制备具体为：取垂柳提取物20份，用15倍量80％乙醇浸泡2h，回流提取2h，过滤后得到的药渣继续加8倍量80％乙醇回流1.5h，过滤，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖12份，用蒸馏水溶解得到溶液a，取聚维酮18份，用90％乙醇溶解得到溶液b，分别在搅拌下将溶液a和溶液b加入上述滤液中，继续加入滤液2倍质量的蒸馏水，混匀后采用50ml喷雾瓶分装，灭菌，即得所述喷雾剂。
实施例6
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳根通过混合溶剂萃取法获得的提取产物。
将垂柳提取物与可药用载体制成喷雾剂，制备具体为：取垂柳提取物15份，用12倍量80％乙醇浸泡1.5h，回流提取2h，过滤后得到的药渣继续加6倍量80％乙醇回流1.5h，过滤，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖10份，用蒸馏水溶解得到溶液a，取聚维酮15份，用90％乙醇溶解得到溶液b，分别在搅拌下将溶液a和溶液b加入上述滤液中，继续加入滤液3倍质量的蒸馏水，混匀后采用1000ml喷雾瓶分装，灭菌，即得所述喷雾剂。
实施例7
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶、垂柳树皮及垂柳根的混合物通过水蒸气蒸馏法获得的提取产物。
将垂柳提取物与可药用载体制成喷雾剂，制备具体为：取垂柳提取物15份，用12倍量80％乙醇浸泡1.5h，回流提取2h，过滤后得到的药渣继续加6倍量80％乙醇回流1.5h，过滤，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖10份，用蒸馏水溶解得到溶液a，取聚维酮15份，用90％乙醇溶解得到溶液b，分别在搅拌下将溶液a和溶液b加入上述滤液中，用蒸馏水调至1000ml喷雾瓶分装，灭菌，即得喷雾剂。
实施例8
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳树皮通过醇提法获得的提取产物。
将垂柳提取物与可药用载体制成喷雾剂，制备具体为：取垂柳提取物10份，用10倍量80％乙醇浸泡1h，回流提取2h，过滤后得到的药渣继续加5倍量80％乙醇回流1.5h，过滤，合并滤液，备用；
另取羧化壳聚糖8份，用蒸馏水溶解得到溶液a，取聚维酮12份，用90％乙醇溶解得到溶液b，分别在搅拌下将溶液a和溶液b加入上述滤液中，继续加入滤液2.5倍质量的蒸馏水，混匀后采用1000ml喷雾瓶分装，灭菌，即得所述喷雾剂。
实施例9
一种用于制备治疗习惯性流鼻血药物的垂柳提取物，所述垂柳提取物为垂柳枝叶、垂柳树皮及垂柳根的混合物的干燥粉，所述干燥粉的制备过程如下：将新鲜垂柳枝叶、垂柳树皮及垂柳根的混合物阴干后粉碎过40目筛，即制得干燥粉，所述干燥粉即为粉剂形式的治疗习惯性流鼻血药物。
动物实验
家兔175只，雌雄均可，每只约2kg。检疫合格后，随机分为35组，包括实验组1-34和空白组35。每组各5只。无菌下在兔耳耳缘静脉处制造0.5cm*0.5cm的创面伤口。空白组压敷消毒纱布；其余各实验组外敷对应的药物，具体用量为均匀覆盖创面伤口。30s后观察止血时间(误差不超过5s)。重复3次，分别使用粉剂，软膏和喷雾剂。粉剂在家兔的左耳处进行实验，具体的实验组安排为：所有实验组皆为实施例9粉剂；软膏在家兔的右耳处进行实验，具体的实验组安排为：实验组1-8为实施例1膏剂,9-16为实施例2膏剂,17-24为实施例3膏剂，25-34为实施例4膏剂；将家兔恢复两周后，进行喷雾剂药物的实验，在家兔的左耳处进行实验，具体的实验组安排为：实验组1-8为实施例5喷雾剂,9-16为实施例2喷雾剂,17-24为实施例3喷雾剂，25-34为实施例4喷雾剂。
实验结果见表1-3。表1为粉剂药物作用疗效；表2为软膏剂型药物的作用疗效，表3为喷雾剂药物的作用效果。由表1-3可以看出，本发明的止血药物可以有效的减少出血时间，且三种剂型均有止血的作用。16，21，27组的软膏，喷雾剂的效果虽然没有其他效果明显，但仍低于空白组。所有剂型中粉剂的止血作用最佳。
表1粉剂药物作用疗效
表2膏剂药物作用疗效
表3喷雾剂药物作用疗效
志愿者病例
来自中医院的8个志愿者，年龄为3-18周岁，均有习惯性流鼻血症状，在中医的嘱咐下开药，粉剂药物每天均匀涂抹鼻腔内，跟踪观察3个月，记录自愿者流鼻血的次数(数据为中医院统计)。
治愈：治疗后跟踪观察3个月非外部原因无流鼻血发生。
显效：治疗后跟踪观察3个月非外部原因，流鼻血发生1-2次。
有效：治疗后跟踪观察3个月非外部原因，流鼻血发生3-5次。
无效：治疗后跟踪观察3个月病情无明显改善。
跟踪观察结果见表4。
由表可以看出，本发明的止血药物在治疗长期流鼻血病人时，治愈率高，对止鼻血有较好的效果，长期使用可以根治。
表4药物的作用效果
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。