一种桑辛素N在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种桑辛素n在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

癌症是世界严重的公共卫生问题，是严重影响居民健康的危险因素，近十年来全球范围内癌症负担呈持续增长态势，据国际癌症研究机构公布的数据显示，每年全世界约800万人死于癌症。在我国因癌症死亡的患者占全部死因的1/4，位居死亡第一位。严重威胁我国居民健康的癌症主要有肺癌、肝癌、乳腺癌和胃癌等。由于多种因素如环境污染、人口老龄化，及不良生活方式如不健康饮食、身体活动不足、吸烟、酗酒及肥胖等广泛存在，我国癌症发病近十年来呈上升趋势。因此，对癌症的防治任务异常艰巨。

桑辛素是桑叶中重要的次生代谢产物，我们研究发现桑叶经uv-b诱导，次生代谢产物的含量发生变化，其中桑辛素n(moracinn，casno.:135248-05-4)的含量显著增加，本发明首次发现桑辛素n能有效抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞迁移，诱导肿瘤细胞发生凋亡。

技术实现要素：

本发明目的是提供一种桑辛素n在制备抗肿瘤药物中的应用。桑辛素n能有效抑制肿瘤细胞的增殖，抑制肿瘤细胞迁移，诱导肿瘤细胞发生凋亡。

本发明采用以下技术方案实现：

一种桑辛素n在制备抗肿瘤药物中的应用。

上述技术方案中，优选地，所述肿瘤包括以下肿瘤：肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、胶质瘤，桑辛素n可用于上述多种肿瘤药物的制备。

更优选地，所述肿瘤为肺癌。

优选地，在抗肿瘤药物的制备中，桑辛素n经常规的制剂工艺，单独或与其他药物配伍制备可在临床上使用的各种不同剂型的药物，包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、微囊、纳米制剂、颗粒剂、膜剂、栓剂、气雾剂等多种剂型。

本发明的有益效果在于：

本发明提供了桑辛素n作为一种抗肿瘤药物原料或潜药的应用，桑辛素n可通过抑制肿瘤细胞的活力、抑制肿瘤细胞迁移和诱导肿瘤细胞发生凋亡等多种机制发挥作用，具有较好的开发潜力。

附图说明

图1桑辛素n对a549肺癌细胞划痕愈合抑制作用；

图2桑辛素n对pc-9肺癌细胞划痕愈合抑制作用；

图3桑辛素n对a549肺癌细胞凋亡率的影响；

图4桑辛素n对pc-9肺癌细胞凋亡率的影响。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例进一步说明本发明的技术方案。但是本发明不限于所列出的实施例，还应包括在本发明所要求的权利范围内其他任何公知的改变。

本发明所述桑辛素n在制备抗肿瘤药物中的应用。尤其在治疗肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、胶质瘤等各种肿瘤药物的药物制剂中的应用。本发明还提供了桑辛素n单独或与其他药物配伍制备可在临床上使用的各种不同剂型的药物，包括注射剂、片剂、胶囊、软胶囊、微囊、纳米制剂、颗粒剂、膜剂、栓剂、气雾剂等多种剂型。

实施例1桑辛素n对肿瘤细胞活力的影响

人肺癌细胞(a549、pc-9)、人结肠癌细胞(sw620)、人前列腺癌细胞(pc-3)、人胃癌细胞(bgc823)、人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)、人胶质瘤细胞(u251)分别接种于96孔(3000个/孔)培养板中，37℃、5％二氧化碳培养24h；加入不同浓度桑辛素n的工作液，使培养液中桑辛素n的终浓度为12.5、25、50、100μm(n＝3)，工作液加入作用48h后弃去培养液，每孔加入100μl含0.5mg/mlmtt的培养基，置于培养箱中继续培养4h后；终止培养，弃去孔内培养液，每孔加入100μl二甲基亚砜(dmso)，常温下震荡10min，使蓝色结晶完全溶解，利用酶标仪测定每孔溶液在490nm处的吸光度值，不含细胞的孔作为空白对照，计算细胞活力。结果见表1～8，桑辛素n对人肺癌细胞a549、人肺癌细胞pc-9、人结肠癌细胞(sw620)、人前列腺癌细胞(pc-3)、人胃癌细胞(bgc823)、人肝癌细胞(hepg-2)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)和人胶质瘤细胞(u251)的ic50分别为150.77μm、6.6μm、22.45μm、63.28μm、181.6μm、39.86μm、44.95μm和64.61μm，均具有较好抑制作用。

表1桑辛素n对a549细胞活力的影响

表2桑辛素n对pc-9细胞活力的影响

表3桑辛素n对sw620细胞活力的影响

表4桑辛素n对pc-3细胞活力的影响

表5桑辛素n对bgc823细胞活力的影响

表6桑辛素n对hepg2细胞活力的影响

表7桑辛素n对mda-mb-231细胞活力的影响

表8桑辛素n对u251细胞活力的影响

实施例2桑辛素n对a549肺癌细胞划痕愈合抑制作用

a549肺癌细胞接种于6孔板(3*10^5个/孔)，贴壁24h后细胞刚好铺满6孔板底面，加入桑辛素n工作液至终浓度20μm和30μm，培养箱孵育48h后弃培养液，用200μl抢头划痕，pbs清洗两次，拍照记录划痕面积，加入含2.5％fbs培养基，培养一定48h后拍照记录划痕面积。用photoshop软件磁性选框工具计算划痕区域面积，计算划痕愈合面积占初始划痕面积百分比。结果见图1，表明桑辛素n能显著减缓划痕愈合，抑制癌细胞的迁移。

实施例3桑辛素n对pc-9肺癌细胞划痕愈合抑制作用

pc-9肺癌细胞接种于6孔板(3×10⁵个/孔)，贴壁24h后细胞刚好铺满6孔板底面，加入桑辛素n工作液至终浓度6μm和8μm，培养箱孵育48h后弃培养液，用200μl抢头划痕，pbs清洗两次，拍照记录划痕面积，加入含2.5％fbs培养基，培养一定48h后拍照记录划痕面积。用photoshop软件磁性选框工具计算划痕区域面积，计算划痕愈合面积占初始划痕面积百分比。结果见图2，表明桑辛素n能显著减缓划痕愈合，抑制癌细胞的迁移。

实施例4：桑辛素n诱导a549肺癌细胞凋亡的作用

a549肺癌细胞接种于6孔板(2*10^5个/孔)，贴壁24h后，加入桑辛素n工作液至终浓度15μm、30μm和45μm，处理48h后，用无edta胰酶消化细胞，2000rpm离心5min收集细胞，1mlpbs重悬细胞，2000rpm离心5min，丢弃上清液。根据细胞凋亡检测试剂盒说明书，加入500μlbindingbuffer重悬细胞，加入5μlannexinv-fitc和5μlpi染色，上流式细胞仪，选择fitc通道与pe通道检测凋亡率。根据仪器检测得到凋亡率统计凋亡细胞占总细胞比值。实验重复三次。统计结果见图3，表明桑辛素n可浓度依赖地增加a549肺癌细胞凋亡率。

实施例5：桑辛素n诱导pc-9肺癌细胞凋亡的作用

pc-9肺癌细胞接种于6孔板(2*10^5个/孔)，贴壁24h后，加入桑辛素n工作液至终浓度10μm、20μm和30μm，处理48h后，用无edta胰酶消化细胞，2000rpm离心5min收集细胞，1mlpbs重悬细胞，2000rpm离心5min，丢弃上清液。根据细胞凋亡检测试剂盒说明书，加入500μlbindingbuffer重悬细胞，加入5μlannexinv-fitc和5μlpi染色，上流式细胞仪，选择fitc通道与pe通道检测凋亡率。根据仪器检测得到凋亡率统计凋亡细胞占总细胞比值。实验重复三次。统计结果见图4，表明桑辛素n可浓度依赖地增加pc-9肺癌细胞凋亡率。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。