用于治疗癌症的硫氧还蛋白还原酶抑制剂的制作方法

文档序号：22755442发布日期：2020-10-31 09:51阅读：1010来源：国知局

本发明总体上涉及硫氧还蛋白还原酶(trxr)抑制剂，具体地涉及sectrap形成剂。更具体地说，本发明涉及用于治疗癌症的此类药剂。

癌症治疗仍是最大的未满足的医疗需求之一。虽然在过去几十年期间癌症疗法已取得进展，但是癌症仍是死亡的主要原因。因此，对新的癌症疗法的需求不断增加。

癌症的标志之一是试图逃避抗肿瘤免疫应答。

本领域所需要的是能够利用被治疗的受试者的免疫系统(例如，与被治疗的受试者的免疫系统协同作用)以做出或增强临床上有益的抗癌免疫应答的新的癌症疗法。

哺乳动物硫氧还蛋白还原酶(trxr，e.c.1.8.1.9)是硒蛋白，即，所述哺乳动物硫氧还蛋白还原酶属于含有硒代半胱氨酸(sec，单字母代码u)残基的蛋白质的唯一家族。trxr与主要的底物硫氧还蛋白(trx)一起在细胞中具有广泛的功能，如dna合成的主要还原系统、氧化还原调节功能和抗氧化防御。trxr家族酶是吡啶核苷酸氧化还原酶。已经鉴定出trxr的三种哺乳动物同功酶，即，最丰富的主要是胞质trxr1、线粒体trxr2和tgr(硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶)，后者主要在睾丸中表达。应当注意，其它生物体(如细菌、古细菌、植物或昆虫)的trxr蛋白通常不是硒蛋白。对trxr的命名法也缺乏共识，其有时缩写为tr或txnrd，还会出现另外的缩写，例如，线粒体trxr2与tr3是相同的酶并且tgr也被称为tr2。

sectrap(硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白可以被描述为具有(i)受损的sec残基(硒代半胱氨酸残基)(ii)减少的或抑制的(或消除的)硫氧还蛋白还原能力以及(iii)通过功能获得而诱导细胞死亡的能力的硫氧还蛋白还原酶(trxr)的衍生物(等人,《公共科学图书馆：综合(plosone)》,(2008)第3卷(4),e1846)。sectrap可以被认为是细胞的助氧化杀伤剂，其触发的机制超过仅仅损失硫氧还蛋白还原酶活性的那些机制(等人,同上)。

anestal等人(同上)描述了具有受损的sec残基的trxr如何像sectrap一样显示出细胞毒性特性以及所观察到的细胞死亡具有凋亡和坏死特性。anestal等人描述了trxr在其转化成sectrap时对助氧化酶的功能改变，这据称可以使用靶向trxr的亲电子化合物来完成。

因此，经典地，sectrap形成剂的抗癌细胞活性被认为通过直接由凋亡和/或坏死诱导细胞死亡来发生。本发明人已经惊奇地发现，sectrap形成剂另外地以不同的且间接的、治疗有益的方式发挥抗癌活性。在这方面，本发明人已经发现，sectrap形成剂可以引发治疗有益的抗癌免疫应答。因此，本发明人已经惊奇地发现，sectrap形成剂具有在癌症治疗的背景下的双重作用模式、由直接细胞毒性/细胞溶解作用引起的直接细胞死亡效应以及利用患者的免疫系统来靶向癌症的间接效应。因此，已经发现sectrap形成物具有免疫活性和/或在对抗癌症中具有与免疫系统的加和或协同作用。这个令人惊讶的发现为改进癌症治疗开辟了前景。另外，利用本发明，还可以鉴定出应答者并且对较大患者人群中的患者进行分层以从所述治疗中产生最大的治疗益处。

因此，在一个方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生针对所述癌症的免疫应答。

所述药剂通过sectrap的形成而具有免疫刺激活性。本文其它地方描述了sectrap。

可替代地来看，本发明提供了一种用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，所述药剂刺激(或引起或引发或增强)抗癌免疫应答。

根据本发明的供使用的sectrap形成剂(或trxr抑制剂)可以通过以下三个主要特征表征：(i)化合物(或药剂)在c端活性位点sec残基处与trxr结合(c端活性位点通过表面暴露的硒代半胱氨酸(sec)残基表征)；(ii)化合物抑制(例如，显著抑制或部分抑制或完全抑制)trxr还原c端活性位点处的trx(c端活性位点的正常细胞底物)或其它底物(例如，dtnb)的能力(例如，在存在nadph的情况下以nadph依赖性方式)；(iii)trxr仍然能够在完整的n端氧化还原活性位点处具有活性(或保持或维持活性)(例如，胡桃醌(juglone)还原活性)。

在用sectrap形成剂进行治疗时，trxr通常保持氧化能力并且变成自由基产生剂。在用sectrap形成剂进行治疗时，尽管trxr已经减少或消除了还原trx的能力(由于c端活性位点处的抑制)，但是trxr可以仍具有氧化还原活性(氧化还原酶)(例如，在n端活性位点处)。用sectrap形成剂进行治疗可以被认为将trxr转化成助氧化酶。

酶trxr通过使用来自nadph的还原等同物来进行直接的抗氧化剂活性以及将还原等同物转移到细胞内的其它氧化还原酶来起作用。因此，trxr提供了涉及抗氧化剂活性、细胞死亡调节、dna合成等的蛋白质的还原等同物。

硫氧还蛋白还原酶(trxr)蛋白是吡啶核苷酸二硫键氧化还原酶家族的成员。与大多数蛋白质不同，所述trxr蛋白含有除在所有生物体的蛋白质中发现的常见的20种氨基酸之外的另外的氨基酸。这种氨基酸被称为硒代半胱氨酸(sec)并且已经称为第21个氨基酸。trxr蛋白支持多种细胞信号传导过程并且直接进行抗氧化活性。trxr通过nadph还原(通过给电子)，然后trxr还原许多细胞底物，主要底物是硫氧还蛋白(trx)。然后，呈还原形式的trx通过几种途径在细胞中发挥抗氧化活性、细胞死亡和增殖作用。

位于trxr中的蛋白质序列中的倒数第二个残基处的sec氨基酸与相邻的cys形成硒基硫醇键并且在酶还原时充当主要的催化残基。还原trxr(例如，trxr1)的过程通过电子流发生，所述电子流从氧化还原辅因子黄素腺嘌呤二核苷酸(fad)到二聚体中的一个亚基的n端，然后最终到另一个亚基的c端。更具体地说，trxr的还原以nadph与二聚体亚基之一结合并且将电子转移到fad开始。然后，将来自fadh2的电子转移到同一trxr亚基的n端的二硫醇基序。然后，这个经还原的部分还原二聚体内的另一个亚基的c端中的硒基硫醇基序，从而完全激活酶复合物以进行催化。

trxr抑制的分子特异性效应是酶形成硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)的能力。为了形成sectrap，小分子抑制剂必须与sec氨基酸所在的trxr的经还原的c端氧化还原基序结合，同时使酶的其它氧化还原活性部分(fad和n端二硫醇基序)保持完整。

当小分子抑制sec残基而不抑制酶的其它部分时，酶可以仍与nadph反应并且在n端处变得还原。以这种形式，trxr无法与trx和酶的其它典型底物反应，从而导致氧化的trx和pdi(蛋白质二硫键异构酶)的形成或产生。这通常还将导致下游氧化底物(如过氧化物等)的累积。酶在n端活性位点处保持氧化还原活性，从而维持nadph消耗，从而产生主动产生氧化应激的sectrap。据信非抑制酶中的n端活性位点的唯一功能是将电子从fad部分转移到c端硒醇-硫醇活性基序。

在正常条件下(例如，在不存在sectrap形成剂的情况下)，因为从trxr到trx的完全电子转移可以发生，所以trxr的助氧化活性不存在，从而产生净的抗氧化效应。因此，未抑制的trxr促进细胞存活和增殖。trxr的抑制理论上会导致细胞氧化的净增加，因为其无法活化trx，并且其抗氧化特性丢失。然而，sectrap形成使得可以有效产生助氧化剂单元而仅仅损失trxr特异性抗氧化活性。作为sectrap，trxr不能还原trx，但其nadph氧化酶活性保持完整。尽管阻止sectrap向其天然底物供给电子，但是sectrap基本上显示出持续的nadph氧化酶活性。在没有其典型的接受电子的底物(例如，氧化的trx)的情况下，sectrap形成导致癌细胞内的h2o2的产生增加。在细胞环境中，h2o2的这种主动增加显示出trxr如何从抗氧化酶转化成助氧化酶。细胞上的氧化张力通过sectrap形成而主动增加引起细胞死亡的被动启动和主动启动两者。

给定的药剂(或化合物)是否具有sectrap形成活性(即，能够产生sectrap)可以通过任何适当的方式来确定并且技术人员熟悉要使用的适当的方法和测定。

例如，可以使用以下方法在体外确定给定的药剂(或化合物)是否为sectrap形成剂：

trxr的c端活性(c端活性位点活性)可以根据以下程序(测定)确定：

1)用nadph还原trxr

2)将经还原的trxr与正在研究的化合物混合，从而允许化合物结合

3)在孵育之后，使用旋转柱将混合物脱盐以去除未结合的化合物

4)向混合物添加模型底物

5)通过确定模型底物的还原来测量c端还原活性。

在本文中的实例部分描述了特别优选的c端活性测定。典型的模型底物是dtnb(5,5'-二硫代-双(2-二硝基苯甲酸))。还原dtnb之后使用分光光度计监测tnb产生。为了确认化合物不可逆地结合，在添加模型底物之前，使酶化合物混合物通过旋转柱(步骤3)以去除未结合的化合物。如果模型底物还原在化合物去除之后被阻断，则结合事件是不可逆的。底物的还原应当仅在trxr首先通过nadph还原时才发生。

使用胡桃醌还原测定确定n端活性(n端活性位点活性)，在所述胡桃醌还原测定中：

1)将nadph还原的、化合物处理的trxr与胡桃醌混合

2)基于nadph消耗间接测量胡桃醌的还原。

在本文中的实例部分描述了特别优选n端活性测定。选择胡桃醌(5-羟基-1,4-萘醌)是基于以下发现的：与主要或仅通过c端硒醇硫醇基序还原的其它底物不同，胡桃醌主要通过n端活性位点二硫醇基序还原。

使用以上两种方法(即，评估c端活性和n端活性)，可以确定给定的化合物(药剂)是否为sectrap形成剂。如果c端活性被抑制(或减少或消除)(例如，如通过以上类型的c端活性测定所评估的)，但是n端活性没有被显著抑制(或没有被完全或彻底抑制)(例如，如在以上类型的n端活性测定中所评估的)，则给定的化合物(药剂)通常将被分类为sectrap形成剂。

优选的sectrap形成剂是在测定中所使用的sectrap形成剂(或trxr抑制剂)的浓度是引起(或实现)如上文所描述的c端活性测定中的100％抑制(或接近100％抑制)的浓度(优选地最小浓度)时例如在上文所提到的n端活性测定中表现出胡桃醌还原活性的至少10％、至少20％、至少30％、更优选地至少40％、优选地至少50％或至少60％、更优选地至少70％、至少80％、至少90％或至少100％的那些sectrap形成剂。上文所提到的％活性是胡桃醌还原活性与在不存在sectrap形成剂(或trxr抑制剂)的情况下进行的测定中观察到的胡桃醌还原活性相比的％。换句话说，在不存在任何化合物(sectrap形成剂或trxr抑制剂)的情况下，胡桃醌还原活性将表示“100％”值(或“100％”对照值)。可以在不存在化合物的情况下测量(或定量)胡桃醌还原活性水平，然后测量(或定量)在存在sectrap形成剂或trxr抑制剂的情况下的活性，并且完成归一化到％。通过举例的方式，表现出(或保持或维持)至少50％胡桃醌还原活性意指表现出(或保持或维持)在不存在sectrap形成剂(或trxr抑制剂)的情况下表现出(或观察到)的活性的至少50％。

优选地，c端活性测定和n端活性测定中使用的trxr是重组trxr、优选地重组人trxr或重组大鼠trxr。在一些实施例中，c端活性测定和n端活性测定中使用的trxr是重组人trxr。在一些实施例中，c端活性测定和n端活性测定中使用的trxr是重组大鼠trxr。

因此，进一步可替代地来看，本发明提供了一种用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症的酶硫氧还蛋白还原酶(trxr，例如，trxr1)的抑制剂，所述抑制剂抑制(或减少(reduce/diminish)或消除)c端活性位点(其可以通过sec残基的存在表征)处的还原酶活性但不抑制或减少(或没有显著抑制或减少)n端活性位点(或n端氧化还原活性位点或n端活性位点二硫醇基序)处的氧化还原活性，其中所述抑制剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生针对所述癌症的免疫应答。可替代地来看，此类trx抑制剂用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症，其中所述抑制剂刺激(或引起或引发)抗癌免疫应答。在一些实施例中，此类trxr抑制剂可以通过抑制(或阻断或消除或减少)、优选地显著抑制trxr(例如，trxr1)减少硫氧还蛋白(trx，例如，trx1)或其它底物(例如，dtnb)(通常或正常在trxrc端活性位点处还原或可还原的底物)但不抑制(或没有显著抑制、减少或消除)例如胡桃醌(5-羟基-1,4-萘醌)(通常或正常在trxrn端活性位点处还原或可还原的底物)的还原的能力的能力表征。

在一些实施例中，ic50(硫氧还蛋白还原酶(trxr)活性的50％被抑制的浓度)为1×10^-4m到1×10^-11m(例如，如在如本文中所描述的c端活性测定中所评估的)。在一些实施例中，ic50小于1×10^-4m、小于1×10^-5m、小于1×10^-6m、小于1×10^-7m、小于1×10^-8m、小于1×10^-9m、小于1×10^-10m(例如，低至1×10^-11m)。在本文中的实例部分中给出了示例性ic50值。

通常，根据本发明的所使用的sectrap形成剂引起(或引发)细胞中(例如，癌细胞中或癌细胞系(例如，细胞系mda-mb-231)中)的细胞内硫氧还蛋白(trx)的水平(或浓度)的降低。硫氧还蛋白(在本文中也被称为trx)是trxr(例如，trxr1)的c端活性位点的通常的(或正常的)细胞底物。trxr的c端活性位点对硫氧还蛋白具有还原酶活性，即，其还原硫氧还蛋白。在一些优选实施例中，根据本发明的所使用的sectrap形成剂引起(或引发)细胞中的细胞内经还原的硫氧还蛋白(trx)的水平(或浓度)的降低(例如，如上文所描述的)(即，trx的还原形式相对于氧化形式的减少)。提取物和细胞中的trx的氧化态(还原形式和氧化形式占总量的百分比)可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳和酶活性的组合来确定(例如，如通过holmgren,a.和fagerstedt,m.,1982《生物化学杂志(thejournalofbiologicalchemistry)》257(12),第6926-6930页.1982所描述的)。

在一些实施例中，根据本发明的所使用的sectrap形成剂(或trxr抑制剂)可以使细胞中(例如，癌细胞中或癌细胞系(例如，如细胞系mda-mb-231等乳腺癌细胞系)中)的细胞内硫氧还蛋白(trx)的水平降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。此类％降低与未经处理的对照细胞中的细胞内硫氧还蛋白(trx)的水平有关。在一些优选实施例中，根据本发明的所使用的sectrap形成剂引起(或引发)细胞中的细胞内经还原的硫氧还蛋白(trx)的水平(或浓度)的降低(例如，如上文所描述的)(即，trx的还原形式相对于氧化形式的减少)。通过举例的方式，在一些实施例中，根据本发明的所使用的sectrap形成剂(或trxr抑制剂)可以使mda-mb-231细胞(乳腺癌细胞系)中的细胞内硫氧还蛋白(trx)水平(例如，trx的还原形式)的水平与未经处理的对照细胞相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％至少80％或至少90％，其中在开始用所述药剂进行治疗之后的96小时对trx的细胞内水平进行测量(例如，按ng/ml计)并且其中按10μm使用所述药剂。在一些其它实施例中，sectrap形成剂杀灭富trxr/trx的癌细胞并且因此减少癌组织中的trxr和trx的总量(和/或如蛋白质二硫键异构酶(pdi)和过氧化物等另外的底物的总量)。

可以使用任何适当的方法来测量trx的细胞内水平并且技术人员将熟悉此类方法。在一些实施例中，使用elisa。例如，在一些实施例中，对癌细胞系(例如，mda-mb-231细胞)中的trx的细胞内水平进行评估，并且在给定的采样时间(例如，开始治疗之后的96小时)时，将细胞上清液从细胞中去除，将细胞洗涤并裂解，并且使用elisa确定细胞裂解物中的来自所有细胞的trx的总量(或trx浓度)。在本文中的实例部分中提供了用于测量trx的细胞内水平(或浓度)的特别优选的方法。

trx是酶trxr的c端活性位点的天然底物。trx的作用是减少(或促进减少)细胞中的其它蛋白质。

通常，抑制trxr(或形成sectrap)会导致氧化应激，并且导致细胞内trx水平降低。

通常，根据本发明的所使用的sectrap形成剂被认为引起(或引发)trxr酶的功能的改变，从而使其从抗氧化酶转化成助氧化酶。通常，这种转化是不可逆的。

在不希望受理论束缚的情况下，认为对硫氧还蛋白还原酶的抑制是通过利用小分子抑制剂的强亲电性与nadph还原但未氧化的硫氧还蛋白还原酶(trxr)的显著内在亲核性组合获得的，从而使得在没有主要靶向其它细胞途径或酶的情况下对所述酶进行选择性的且有效的抑制。

在一些实施例中，本发明中的供使用的sectrap形成剂(或trxr抑制剂)是如本文所描述的式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x或xi的化合物。

式i的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式i的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)2-；

n表示0到5；

r¹、r²和r³各自独立地表示h、卤基、r^a1、-cn、-a^a1-c(q^a1)r^b1、-a^b1-c(q^b1)n(r^c1)r^d1、-a^c1-c(q^c1)or^e1、-a^d1-s(o)pr^f1、-a^e1-s(o)pn(r^g1)r^h1、-a^f1-s(o)porⁱ¹、-n3、-n(r^j1)r^k1、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l1或-sr^m1；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个r^a1和r^f1独立地表示任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基或任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

每个r^p1独立地表示h或任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基；

每个r^b1、r^c1、r^d1、r^e1、r^g1、r^h1、rⁱ¹、r^j1、r^k1、r^l1、r^m1、rⁿ¹和r^o1独立地表示h、任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环烷基；或

r^c1和r^d1、r^g1和r^h1和/或r^j1和r^k1中的任何一个连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个r⁴独立地表示卤基、r^a2、-cn、-a^a2-c(q^a2)r^b2、-a^b2-c(q^b2)n(r^c2)r^d2、-a^c2-c(q^c2)or^e2、-a^d2-s(o)qr^f2、-a^e2-s(o)qn(r^g2)r^h2、-a^f2-s(o)qorⁱ²、-n3、-n(r^j2)r^k2、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l2或-sr^m2；

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ²或＝n(or^o2)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p2)-或-o-；

每个r^a2和r^f2独立地表示任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基或任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

每个r^p2独立地表示h或任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基；

每个r^b2、r^c2、r^d2、r^e2、r^g2、r^h2、rⁱ²、r^j2、r^k2、r^l2、r^m2、rⁿ²和r^o2独立地表示h、任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环烷基；或

任何两个r^c2和r^d2、r^g2和r^h2和/或r^j2和r^k2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤素、任选地被一个或多个卤素取代的c1-3烷基以及＝o；

每个g^1a、g^1b、g^2a和g^2b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a3)r^b3、-or^c3、-sr^d3或＝o；

每个r^a3、r^b3、r^c3和r^d3独立地表示h或任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基；

或r^a3和r^b3连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基、任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基以及＝o；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式i的化合物，其中r3和/或r2(优选地r3和r2)表示h。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式i的化合物，其中r1是or^l1，优选地，r^l1表示c1-6烷基、更优选地c1烷基。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式i的化合物，其中r4表示卤基、优选地氯基，并且优选地，n表示1。

特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式i的化合物：

这种化合物在本文中还被称为2-((4-氯苯基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶和obt-1000。

在一些实施例中，式i的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

(1)6-甲氧基-3-硝基-2-(苯基磺酰基)吡啶；

(2)6-甲氧基-3-硝基-2-甲苯磺酰基吡啶；

(3)5-甲基-3-硝基-2-(苯基磺酰基)吡啶；

(4)3-硝基-2-甲苯磺酰基吡啶；

(5)2-((4-氯苯基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶；

(6)3-硝基-2-(苯基磺酰基)吡啶；

(7)2-甲基-3,5-二硝基-6-(苯基磺酰基)吡啶；以及

(8)n-(2-((5-氯-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)苯基)乙酰胺。

式ii的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式ii的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

x表示任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-12烷基、任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^1c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^1d的一个或多个基团取代的杂芳基；

y表示任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-12烷基、任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

z表示o、s、nr^a或n(or^b)；

r¹和r²独立地表示h或c1-6烷基，后一个基团任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基和任选地被一个或多个卤基取代的-oc1-6烷基；

每个g^1a、g^1b、g^1c和g^1d独立地表示卤基、r^a1、-cn、-a^a1-c(q^a1)r^b1、-a^b1-c(q^b1)n(r^c1)r^d1、-a^c1-c(q^c1)or^e1、-a^d1-s(o)nr^f1、-a^e1-s(o)nc(o)r^g1、-a^f1-s(o)nn(r^h1)rⁱ¹、-a^g1-s(o)nor^j1、-n3、-n(r^k1)r^l1、-n(h)cn、-no2、-or^m1、-srⁿ¹或＝q^d1；

每个a^a1到a^g1独立地表示单键、-n(r^o1)-、-c(q^e1)n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^e1独立地表示＝o、＝s、＝nr^q1或＝n(or^r1)；

r^a和r^b各自独立地表示h或c1-6烷基，后一个基团任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基和任选地被一个或多个卤基取代的-oc1-6烷基；

每个r^a1和r^f1独立地表示任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^3c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^3d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b1、r^c1、r^d1、r^e1、r^g1、r^h1、rⁱ¹、r^j1、r^k1、r^l1、r^m1、rⁿ¹、r^q1和r^r1独立地表示h、任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^3c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^3d的一个或多个基团取代的杂芳基；

或任何两个r^c1和r^d1、r^h1和rⁱ¹和/或r^k1和r^l1连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个r^o1和r^p1独立地表示h或任选地被一个或多个卤基取代的c1-6烷基；

每个g^2a、g^2b、g^2c和g^2d独立地表示卤基、r^a2、-cn、-a^a2-c(q^a2)r^b2、-a^b2-c(q^b2)n(r^c2)r^d2、-a^c2-c(q^c2)or^e、-a^d2-s(o)pr^f2、-a^e2-s(o)pc(o)r^g2、-a^f2-s(o)pn(r^h2)rⁱ²、-a^g2-s(o)por^j2、-n3、-n(r^k2)r^l2、-n(h)cn、-no2、-or^m2、-srⁿ²或＝q^d2；

每个a^a2到a^g2独立地表示单键、-n(r^o2)-、-c(q^e2)n(r^p2)-或-o-；

每个q^a2到q^e3独立地表示＝o、＝s、＝nr^q2或＝n(or^r2)；

每个r^a2独立地表示任选地被独立地选自g^4b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^4c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^4d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^f2独立地表示任选地被独立地选自g^4a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^4b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^4c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^4d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b2、r^c2、r^d2、r^e2、r^g2、r^h2、rⁱ²、r^j2、r^k2、r^l2、r^m2、rⁿ²、r^q2和r^r2独立地表示h、任选地被独立地选自g^4a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^4b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^4c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^4d的一个或多个基团取代的杂芳基；

或任何两个r^c2和r^d2、r^h2和rⁱ²和/或r^k2和r^l2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个r^o2和r^p2独立地表示h或任选地被一个或多个卤基取代的c1-6烷基；

每个g^3a独立地表示卤基、-cn、-a^a3-c(q^a3)r^b3、-a^b3-c(q^b3)n(r^c3)r^d3、-a^c3-c(q^c3)or^e3、-a^d3-s(o)qr^f3、-a^e3-s(o)qc(o)r^g3、-a^f3-s(o)qn(r^h3)rⁱ³、-a^g3-s(o)qor^j3、-n3、-n(r^k3)r^l3、-n(h)cn、-no2、-or^m3、-srⁿ³或＝q^d3；

每个g^3b、g^3c和g^3d独立地表示卤基、r^a3、-cn、-a³-c(q^a3)r^b3、-a^b3-c(q^b3)n(r^c3)r^d3、-a^c3-c(q^c3)or^e3、-a^d3-s(o)qr^f3、-a^e3-s(o)qc(o)r^g3、-a^f3-s(o)qn(r^h3)rⁱ³、-a^g3-s(o)qor^j3、-n3、-n(r^k3)r^l3、-n(h)cn、-no2、-or^m3、-srⁿ³或＝q^d3；

每个a^a3到a^g3独立地表示单键、-n(r^o3)-、-c(q^e3)n(r^p3)-或-o-；

每个q^a3到q^e3独立地表示＝o、＝s、＝nr^q3或＝n(or^r3)；

每个r^a3和r^f3独立地表示任选地被独立地选自g^5a的一个或多个基团取代的c1-6烷基或任选地被独立地选自g^5b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

每个r^b3、r^c3、r^d3、r^e3、r^g3、r^h3、rⁱ³、r^j3、r^k3、r^l3、r^m3、rⁿ³、r^q3和r^r3独立地表示h、任选地被独立地选自g^5a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^5b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

或任何两个r^c3和r^d3、r^h3和rⁱ³和/或r^k3和r^l3连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个r^o3和r^p3独立地表示h或任选地被一个或多个卤基取代的c1-6烷基；

每个g^4a独立地表示卤素、-cn、-a^a4-c(q^a4)r^b4、-a^b4-c(q^b4)n(r^c4)r^d4、-a^c4-c(q^c4)or^e4、-a^d4-s(o)rr^f4、-a^e4-s(o)rc(o)r^g4、-a^f4-s(o)rn(r^h4)rⁱ⁴、-a^g4-s(o)ror^j4、-n3、-n(r^k4)r^l4、-n(h)cn、-no2、-or^m4、-srⁿ⁴或＝q^d4；

每个g^4b、g^4c和g^4d独立地表示卤基、r^a4、-cn、-a^a4-c(q^a4)r^b4、-a^b4-c(q^b4)n(r^c4)r^d4、-a^c4-c(q^c4)or^e4、-a^d4-s(o)rr^f4、-a^e4-s(o)rc(o)r^g4、-a^f4-s(o)rn(r^h4)rⁱ⁴、-a^g4-s(o)ror^j4、-n3、-n(r^k4)r^l4、-n(h)cn、-no2、-or^m4、-srⁿ⁴或＝q^d4；

每个a^a4到a^g4独立地表示单键、-n(r^o4)-、-c(q^e4)n(r^p4)-或-o-；

每个q^a4到q^e4独立地表示＝o、＝s、＝nr^q4或＝n(or^r4)；

每个r^a4和r^f4独立地表示任选地被独立地选自g^6a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^6b的一个或多个基团取代的杂环烷基、或任选地被独立地选自g^6c的一个或多个基团取代的芳香基；

每个r^b4、r^c4、r^d4、r^e4、r^g4、r^h4、rⁱ⁴、r^j4、r^k4、r^l4、r^m4、rⁿ⁴、r^q4和r^r4独立地表示h、任选地被独立地选自g^6a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^6b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

或任何两个r^c4和r^d4、r^h4和rⁱ⁴和/或r^k4和r^l4连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个r^o4和r^p4独立地表示h或任选地被一个或多个卤基取代的c1-6烷基；

每个g^5a和g^6a独立地表示卤基或任选地被一个或多个卤基取代的-oc1-6烷基；

每个g^5b、g^6b和g^6c表示卤基、任选地被一个或多个卤素取代的c1-6烷基、或任选地被一个或多个卤基取代的-oc1-6烷基；

每个n独立地表示1或2；

每个p独立地表示1或2；

每个q独立地表示1或2；并且

每个r独立地表示1或2。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ii的化合物，其中x是由g^1a取代的c1-12烷基(优选地c1烷基)，优选地，g^1a是r^a1，并且优选地，r^a1是芳香基(优选地苯基)。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ii的化合物，其中r1和/或r2(优选地r1和r2)表示h。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ii的化合物，其中z表示o。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ii的化合物，其中y是由g^2a取代的c1-12烷基(优选地c1烷基)，优选地，g^2a是r^a2，并且优选地，r^a2是芳香基(优选地苯基)。

特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式ii的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(外-4,11-二苄基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮)和obt-2056。

在一些实施例中，式ii的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

外-11-甲基-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

11-甲基-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-3,5,10-三氧-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-8-烯-11-羧酸甲酯；

外-3,5,10-三氧-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-8-烯-11-羧酸甲酯；

外-4,11-二苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4,11-二苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

二苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

11-(4-溴苄基)-4-甲基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-苯基-11-(4-吡啶基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-苯基-11-(2-吡啶基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(2-碘苄基)-4-甲基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(2-碘苄基)-4-甲基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-苄基-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

11-苄基-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-4-甲基-11-(2-乙烯基苯基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-甲基-11-(2-乙烯基苯基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-4-苯基-11-(2-吡啶基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(3-氧代环己烯-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-(3,5,10-三氧-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-8-烯-11-基)吡啶-1-氧化物；

外-4-苯基-11-苯乙烯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(6,6-二甲基-3--氧代环己烯-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

11-(4-叔丁基卞基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(2-碘苄基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(4,6-二甲基嘧啶-2-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(4,6-二甲基嘧啶-2-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(4,4-二甲基-3-氧代戊-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0²^,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-4-(4-乙基苯基)-11-(2-碘苄基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(6-氯哒嗪-3-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(6-氯哒嗪-3-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0²^,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(2-吡啶基甲基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(2,4-二硝基苯基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-苯基-11-(6-苯基哒嗪-3-基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(4,6-二苯基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-4-(2,6-二异丙基苯基)-11-(2-碘苄基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-4-(2,6-二异丙基苯基)-11-(2-碘苄基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-((e)-3-(4-溴苯基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-((e)-3-(4-氯苯基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-((e)-3-(2,4-二硝基苯基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外,外-1,2-双-(4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮-11-基)乙烷；

内,外-1,2-双-(4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮-11-基)乙烷；

外,外-1,3-双-(4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮-11-基)丙烷；

内,外-1,3-双-(4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮-11-基)丙烷；

4-苯基-11-(3-苯基-1,2,4-噻二唑-5-基)-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

外-11-(5,6-二苯基-1,2,4-三嗪-3-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；

内-11-(5,6-二苯基-1,2,4-三嗪-3-基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮；和

内-11-(1,2-双(3-硝基苯基)乙烯基)-4-苯基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮。

式iii的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式iii的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

w表示任选地被独立地选自r⁴的一个或多个基团取代的c1亚烷基；

x表示o或s；

y表示任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环烷基、任选地被独立地选自g^1c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^1d的一个或多个基团取代的杂芳基；

z表示o、s或nr⁵；

r¹表示h、卤基、r^a1、-cn、-c(q^a1)r^b1、-c(q^b1)n(r^c1)r^d1、-c(q^c1)or^e1、-s(o)nr^f1、-s(o)pn(r^g1)r^h1、-s(o)porⁱ¹或-no2；

r²表示h、卤基、-cn或-n3；

r³表示h、卤基或r^j1；

r⁴表示卤基或任选地被独立地选自g^1e的一个或多个基团取代的c1-6烷基；

r⁵表示h、r^k1、-or^l1或-n(r^m1)rⁿ¹；

q^a1到q^c1各自独立地表示＝o、＝s、＝nr^o1或＝n(or^p1)；

每个r^a1、r^f1、r^j1和r^k1独立地表示任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基或任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

每个r^b1、r^c1、r^d1、r^e1、r^g1、r^h1、rⁱ¹、r^l1、r^m1、rⁿ¹、r^o1和r^p1独立地表示h、任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

或任何两个r^c1和r^d1、r^g1和r^h1和/或r^m1和rⁿ¹连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤素、任选地被一个或多个卤素取代的c1-3烷基以及＝o；

每个g^1a、g^1b、g^1c和g^1d表示卤素、r^a2、-cn、-a^a1-c(q^a2)r^b2、-a^b1-c(q^b2)n(r^c2)r^d2、-a^c1-c(q^c2)or^e2、-a^d1-s(o)qr^f2、-a^e1-s(o)qc(o)r^g2、-a^f1-s(o)qn(r^h2)rⁱ²、-a^g1-s(o)qor^j2、-n3、-n(r^k2)r^l2、-n(h)cn、-no2、-or^m2、-srⁿ²或＝q^d2；

a^a1到a^g1各自独立地表示单键、-n(r⁶)-、-c(q^e2)n(r⁷)-或-o-；

q^a2到q^e2各自独立地表示＝o、＝s、＝nr^o2或＝n(or^p2)；

每个r⁶和r⁷独立地表示h或任选地被一个或多个f取代的c1-6烷基；

每个r^a2和r^f2独立地表示任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基或任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环烷基；

每个r^b2、r^c2、r^d2、r^e2、r^g2、r^h2、rⁱ²、r^j2、r^k2、r^l2、r^m2、rⁿ²、r^o2和r^p2独立地表示h、任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、或任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环烷基；或

任何两个r^c2和r^d2、r^h2和rⁱ²和/或r^k2和r^l2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤素、任选地被一个或多个卤素取代的c1-3烷基以及＝o；

每个g^1e独立地表示卤基、r^a2、-cn、-n(r^a3)r^b3、-or^c3或-sr^d3；

r^a3、r^b3、r^c3和r^d3各自独立地表示h或任选地被一个或多个f取代的c1-6烷基；

或r^a3和r^b3连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基、任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个g^2a和g^2b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a4)r^b4、-or^c4、-sr^d4或＝o；

每个r^a4、r^b4、r^c4和r^d4独立地表示h或任选地被一个或多个f取代的c1-6烷基；

或r^a4和r^b4连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基、任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a5)r^b5、-or^c5、-sr^d5或＝o；

每个r^a5、r^b5、r^c5和r^d5独立地表示h或任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基；

或r^a5和r^b5连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基、任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基以及＝o；

每个n独立地表示0、1或2，

每个p独立地表示1或2，

每个q独立地表示1或2。

在一些实施例中，式iii的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

4,5-二氯-2-((5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-苯基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-(正丁基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-(1-(5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)丙基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-(1-(5-苯基-1,3,4-恶二唑-2-基)丙基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-(1-(5-(正丁基)-1,3,4-恶二唑-2-基)丙基)哒嗪-3(2h)-酮，和

4,5-二氯-2-(1-(5-(4-甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)丙基)哒嗪-3(2h)-酮；

2-((5-(噻吩-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二溴-2-((5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

5-碘-2-((5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-乙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-5-碘哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-乙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二溴-2-((5-乙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(叔丁基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4,5-二氯哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-异丙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

6-(叔丁基)-2-((5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(3-甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-甲基哒嗪-3(2h)-酮，

6-甲基-2-((5-(4-硝基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

5,6-二乙基-2-((5-异丙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

2-((5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-5,6-二乙基-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

4,5-二氯-2-((5-(4-硝基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-环丙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-5,6-二乙基-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

6-环丙基-2-((5-乙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(叔丁基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-环丙基-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

6-环丙基-2-((5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

6-环丙基-2-((5-环丙基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

5,6-二甲基-2-((5-(4-硝基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

5,6-二甲基-3-氧代-2-((5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

2-((5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-环丙基-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-6-环丙基-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

6-环丙基-4-(三氟甲基)-2-((5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(3-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4,5-二氯哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-(4-甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(5-溴呋喃-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4,5-二氯哒嗪-3(2h)-酮，

5,6-二甲基-3-氧代-2-((5-苯基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

2-((5-(4-甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-5,6-二甲基-3-氧代-2,3-二氢哒嗪-4-腈，

2-((5-(4-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4,5-二氯哒嗪-3(2h)-酮，

4,5-二氯-2-((5-(噻吩-2-基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)哒嗪-3(2h)-酮，

2-((5-(2-溴苯基)-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-4,5-二氯哒嗪-3(2h)-酮。

式iv的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式iv的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)2-；

x表示杂芳基，所述杂芳基通过碳原子附接到l，任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个r^a1和r^f1独立地表示各自任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，或任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环基；

r^c1和r^d1、r^g1和r^h1和/或r^j1和r^k1中的任何一个连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤基、各自任选地被一个或多个卤基取代的c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基以及＝o；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

r^a2和r^b2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基和各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基；

每个y独立地表示卤基、r^a3、-cn、-a^a2-c(q^a2)r^b3、-a^b2-c(q^b2)n(r^c3)r^d3、-a^c2-c(q^c2)or^e3、-a^d2-s(o)qr^f3、-a^e2-s(o)qn(r^g3)r^h3、-a^f2-s(o)qorⁱ³、-n3、-n(r^j3)r^k3、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l3或-sr^m3；

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个r^a3和r^f3独立地表示各自任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基，任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基，或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b3、r^c3、r^d3、r^e3、r^g3、r^h3、rⁱ³、r^j3、r^k3、r^l3、r^m3、rⁿ³、r^o3和r^p3独立地表示h，各自任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基，任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基，或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；或

任何两个r^c3和r^d3、r^g3和r^h3和/或r^j3和r^k3连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基以及＝o；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2c和g^2d独立地表示卤基、r^a4、-cn、-a^a3-c(q^a4)r^b4、-a^b3-c(q^b3)n(r^c4)r^d4、-a^c3-c(q^c3)or^e4、-a^d3-s(o)qr^f4、-a^e3-s(o)qn(r^g4)r^h4、-a^f3-s(o)qorⁱ⁴、-n3、-n(r^j4)r^k4、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l4或-sr^m4；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个r^a4和r^f4独立地表示各自任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环基；任选地被独立地选自g^3c的一个或多个基团取代的芳香基；或任选地被独立地选自g^3d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b4、r^c4、r^d4、r^e4、r^g4、r^h4、rⁱ⁴、r^j4、r^k4、r^l4、r^m4、rⁿ⁴、r^o4和r^p4独立地表示h，各自任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，或任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环基，任选地被独立地选自g^3c的一个或多个基团取代的芳香基，或任选地被独立地选自g^3d的一个或多个基团取代的杂芳基；或

r^c4和r^d4、r^g4和r^h4和/或r^j4和r^k4中的任何一个连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个g^3c和g^3d独立地表示卤基、r^a5、-cn、-a^a4-c(q^a4)r^b5、-a^b4-c(q^b4)n(r^c5)r^d5、-a^c4-c(q^c4)or^e5、-a^d5-s(o)qr^f5、-a^e4-s(o)qn(r^g5)r^h5、-a^f4-s(o)qorⁱ⁵、-n3、-n(r^j5)r^k5、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l5或-sr^m5，

每个q^a4到q^c4独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁵或＝n(or^o5)；

每个a^a4到a^f4独立地表示单键、-n(r^p5)-或-o-；

其中每个r^f5到r^p5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，或其中每个r^g5和r^h5、以及r^j5和r^k5连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个r^b5和r^c5连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代；

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式iv的化合物，其中r3和/或r2(优选地r3和r2)表示h。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式iv的化合物，其中r1是or^l1，优选地，r^l1表示c1-6烷基、更优选地c1烷基。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式iv的化合物，其中x是吡啶环，优选地未被取代的吡啶环。

特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式iv的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(6-甲氧基-3-硝基-2-(吡啶-2-基磺酰基)吡啶)和ot-1012。

在一些实施例中，式iv的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

3-硝基-2-(吡啶-2-基磺酰基)吡啶，

2-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)嘧啶，或

n-(6-氯-2-((5-氯-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)吡啶-3-基)乙酰胺。

式v的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)2-；

x表示各自任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代的c1-12烷基、c2-12烯基或c2-12炔基；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个r^b1、r^c1、r^d1、r^e1、r^g1、r^h1、rⁱ¹、r^j1、r^k1、r^l1、r^m1、rⁿ¹、r^o1和r^p1独立地表示h，各自任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，或任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环基；或

r^c1和r^d1、r^g1和r^h1和/或r^j1和r^k1中的任何一个连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：g^1b、各自任选地被一个或多个g^1a取代的c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基以及＝o；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个r^a3独立地表示任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^f3独立地表示任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b3、r^c3、r^d3、r^e3、r^g3、r^h3、rⁱ³、r^j3、r^k3、r^l3、r^m3、rⁿ³、r^o3和r^p3独立地表示h、任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；或

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个r^a4和r^f4独立地表示任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^3c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^3d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个q^a4到q^c4独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁵或＝n(or^o5)；

每个a^a4到a^f4独立地表示单键、-n(r^p5)-或-o-；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中r3和/或r2(优选地r3和r2)表示h。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中r1是or^l1，优选地，r^l1表示c1-6烷基、更优选地c1烷基。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中r1是卤基(例如，氯基)或or^l1(优选地，r^l1表示c1-6烷基、更优选地c1烷基)或n(r^j1)r^k1(优选地，r^j1和r^k1是h或n(r^j1)r^k1是n(ch3)2)或sr^m1。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是c1-12烷基。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是c1-12烷基(优选地c2烷基)或x是由y取代的c1-12烷基(优选地c1烷基)，其中y是r^a3并且r^a3是芳香基(优选地苯基)，或x是由y取代的c1-12烷基(优选地c2烷基)，其中y是-a^c2-c(q^c2)or^e3(优选地，a^c2是单键，q^c2是＝o并且r^e3是c1-6烷基(优选地c1烷基)，或x是c1-12烷基，优选地c1-10烷基或c1-8烷基(优选地c8烷基)。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是c1-12烷基(优选地c2烷基)。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是由y取代的c1-12烷基(优选地c1烷基)，优选地，y是ra3，并且优选地，ra3是芳香基(优选地苯基)。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是由y取代的c1-12烷基(优选地c2烷基)，其中y是-a^c2-c(q^c2)or^e3(优选地，a^c2是单键，q^c2是＝o并且r^e3是c1-6烷基(优选地c1烷基)。

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是c1-12烷基，优选地c1-10烷基或c1-8烷基。在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式v的化合物，其中x是

c8烷基。在一些实施例中，此类烷基是未被取代的并且优选地是无支链的。

特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式v的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(2-苄基磺酰基-6-甲氧基-3-硝基吡啶)和ot-1011。

另一种特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式v的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(3-((6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)丙酸甲酯)和ot-1113。

另一种特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式v的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(2-(乙基磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶)和ot-1129。

另一种特别优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式v的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(6-甲氧基-3-硝基-2-(辛基磺酰基)吡啶)和ot-1096。

因此，在一些实施例中，所述sectrap形成剂是选自由ot-1011、ot-1113、ot-1129和ot-1096组成或包括ot-1011、ot-1113、ot-1129和ot-1096的组的式v的化合物。

式vi的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式vi的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)2-；

x表示杂环基，所述杂环基通过碳原子连接到l，并且任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个r^a4和r^f4独立地表示各自任选地被独立地选自g^3a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，或任选地被独立地选自g^3b的一个或多个基团取代的杂环基；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

式vii的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式vii的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)-；

n表示0到5；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个r^a1和r^f1独立地表示各自任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环基；任选地被独立地选自g^1c的一个或多个基团取代的芳香基；或任选地被独立地选自g^1d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b1、r^c1、r^d1、r^e1、r^g1、r^h1、rⁱ¹、r^j1、r^k1、r^l1、r^m1、rⁿ¹、r^o1和r^p1独立地表示h，各自任选地被独立地选自g^1a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，任选地被独立地选自g^1b的一个或多个基团取代的杂环基，任选地被独立地选自g^1c的一个或多个基团取代的芳香基，或任选地被独立地选自g^1d的一个或多个基团取代的杂芳基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ²或＝n(or^o2)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p2)-或-o-；

每个r^a2和r^f2独立地表示各自任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基；任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基；或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个r^b2、r^c2、r^d2、r^e2、r^g2、r^h2、rⁱ²、r^j2、r^k2、r^l2、r^m2、rⁿ²、r^o2和r^p2独立地表示h；各自任选地被独立地选自g^2a的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基，任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基，任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基，或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；或

任何两个r^c2和r^d2、r^g2和r^h2和/或r^j2和r^k2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤素、各自任选地被一个或多个卤素取代的c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基以及＝o；

每个g^1a、g^1b、g^1c、g^1d、g^2a、g^2b、g^2c和g^2d独立地表示卤基、-cn、-n(r^a3)r^b3、-or^c3、-sr^d3或＝o；

每个r^a3、r^b3、r^c3和r^d3独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个p和q独立地表示1或2。

在一些实施例中，式vii的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

3-硝基-2-(苯基亚磺酰基)吡啶，

3-硝基-2-(p-甲苯基亚磺酰基)吡啶，

2-((4-溴苯基)亚磺酰基)-3-硝基吡啶，

2-((3-氯苯基)亚磺酰基)-3-硝基吡啶，或

3-硝基-2-((3-(三氟甲基)苯基)-亚磺酰基)吡啶。

式viii的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式viii的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)n-；

n表示2或1；

x表示杂芳基，所述杂芳基通过碳原子附接到l，任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

r^c1和r^d1、r^g1和r^h1和/或r^j1和r^k1中的任何一个连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自卤基的一个或多个基团取代，并且c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基各自任选地被一个或多个卤基和＝o取代；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个g^1c和g^1d独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2或-sr^d2；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

r^a2和r^b2连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：氟基，各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-3烷基、c2-3烯基或c2-3炔基；

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个q^a4到q^c4独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁵或＝n(or^o5)；

每个a^a4到a^f4独立地表示单键、-n(r^p5)-或-o-；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式viii的化合物，其中n＝1。

在一些实施例中，式viii的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

3-硝基-2-(吡啶-2-基磺酰基)吡啶，

2-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)嘧啶，

n-(6-氯-2-((5-氯-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)吡啶-3-基)乙酰胺，或

3-硝基-2-[(3-硝基-2-噻吩基)亚磺酰基]-吡啶。

式ix的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式ix的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)n-；

n表示2或1；

x表示各自任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代的c1-12烷基、c2-12烯基或c2-12炔基；

r¹表示卤基、-n(r^j1)r^k1、-or^l1或-sr^m1；

r²和r³各自独立地表示h、卤基、r^a1、-cn、-a^a1-c(q^a1)r^b1、-a^b1-c(q^b1)n(r^c1)r^d1、-a^c1-c(q^c1)or^e1、-a^d1-s(o)pr^f1、-a^e1-s(o)pn(r^g1)r^h1、-a^f1-s(o)porⁱ¹、-n3、-n(r^j1)r^k1、-n(h)cn、-no2、-ono2、-or^l1或-sr^m1；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个q^a4到q^c4独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁵或＝n(or^o5)；

每个a^a4到a^f4独立地表示单键、-n(r^p5)-或-o-；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些实施例中，式ix的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

2-((1-氯丙烷-2-基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶，

2-((6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)乙烷-1-磺酰胺，

2-((2-氯乙基l)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶，

2-((4-氯丁烷-2-基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶，

2-((6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)乙烷-1-磺酰基氯化物，

2-((3-氯-2-甲基丙)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶，

2-((3-氯丙基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶，

6-甲氧基-3-硝基-2-(乙烯磺酰基)吡啶，

6-甲氧基-2-(甲基磺酰基)-3-硝基吡啶，

6-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯氧基)-2-(甲基磺酰基)-3-硝基吡啶，

6-(2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯氧基)-2-(甲基磺酰基)-3-硝基吡啶，

6-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯氧基)-2-(乙基磺酰基)-3-硝基吡啶；

2-(丁基亚磺酰基)-3-硝基-吡啶，

3-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-2-丙烯酸甲酯，

3-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-2-丙烯酸乙酯，

6-[(2-甲基丙)亚磺酰基]-5-硝基-2-甲磺酸盐-2-羟基吡啶，

3-氯-2-[(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-苯甲酸乙酯，

3-硝基-2-[(4-哌啶基甲基)亚磺酰基]-吡啶，

3-硝基-2-[(3-吡咯烷基甲基)亚磺酰基]-吡啶，

3-硝基-2-[(3-哌啶基甲基)亚磺酰基]-吡啶，

3-硝基-2-[(2-吡咯烷基甲基)亚磺酰基]-吡啶，

3-硝基-2-[(2-哌啶基甲基)亚磺酰基]-吡啶，

4-[[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]甲基]-1-哌啶羧酸1,1-二甲基乙基酯，

3-[[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]甲基]-1-哌啶羧酸1,1-二甲基乙基酯，

3-[[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]甲基]-1-吡咯烷羧酸1,1-二甲基乙基酯，

2-[[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]甲基]-1-吡咯烷羧酸1,1-二甲基乙基酯，

2-[[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]甲基]-1-哌啶羧酸1,1-二甲基乙基酯，

6-[2,6-二氯-4-(三氟甲氧基)苯氧基]-2-(甲基亚磺酰基)-3-硝基-吡啶，或

6-[2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-2-(乙基亚磺酰基)-3-硝基-吡啶。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ix的化合物，其中r3和/或r2(优选地r3和r2)表示h。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ix的化合物，其中n表示1。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ix的化合物，其中r1是or^l1，优选地，r^l1表示c1-6烷基、更优选地c1烷基。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂是式ix的化合物，其中x是c1-12烷基，优选地c2烷基。

优选的sectrap形成剂是具有以下结构的式ix的化合物：

这种化合物在本文中还被称为(2-(乙基亚磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶)和ot-1131。

式x的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式x的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)n-；

n表示2或1；

x表示杂环基，所述杂环基通过碳原子连接到l，并且任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式x的化合物，其中n＝1。

在一些实施例中，式x的化合物不是选自由以下化合物组成的列表的化合物：

3-硝基-2-(哌啶-4-基磺酰基)吡啶，

3-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，

(r)-3-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，

(s)-3-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，

3-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯；

4-((3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯；

3-硝基-2-(4-哌啶基亚磺酰基)-吡啶，

3-硝基-2-(3-吡咯烷基亚磺酰基)-吡啶，

3-硝基-2-(3-哌啶基亚磺酰基)-吡啶，

4-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-1-哌啶羧酸1,1-二甲基乙基酯，

3-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-1-吡咯烷羧酸1,1-二甲基乙基酯，

3-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-1-哌啶羧酸1,1-二甲基乙基酯，或

3-[(3-硝基-2-吡啶基)亚磺酰基]-7-氧杂双环基[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸乙基酯。

式xi的化合物

在一些实施例中，所述sectrap形成剂是式xi的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

l表示-s(o)2-或-s(o)-

x表示通过碳原子连接到l的杂芳基或杂环基或各自任选地被独立地选自y的一个或多个基团取代的c1-12烷基、c2-12烯基、c2-12炔基或苯基；

每个a^a1到a^f1独立地表示单键、-n(r^p1)-或-o-；

每个q^a1到q^c1独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ¹或＝n(or^o1)；

每个g^1a和g^1b独立地表示卤基、-cn、-n(r^a2)r^b2、-or^c2、-sr^d2或＝o；

每个r^a2、r^b2、r^c2和r^d2独立地表示h或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个q^a2到q^c2独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ³或＝n(or^o3)；

每个a^a2到a^f2独立地表示单键、-n(r^p3)-或-o-；

任何两个r^c3和r^d3、r^g3和r^h3和/或r^j3和r^k3连接在一起以与它们所附接的氮原子一起形成3元到6元环，所述环任选地含有一个另外的杂原子，并且所述环任选地被独立地选自以下基团的一个或多个基团取代：卤素、任选地被一个或多个卤素取代的c1-3烷基、＝o、任选地被独立地选自g^2b的一个或多个基团取代的杂环基、任选地被独立地选自g^2c的一个或多个基团取代的芳香基、或任选地被独立地选自g^2d的一个或多个基团取代的杂芳基；

每个g^2a独立地表示卤基、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个g^2b独立地表示卤基、r^a4、-cn、-n(r^j4)r^k4、-or^l4、-sr^m4或＝o；

每个q^a3到q^c3独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁴或＝n(or^o4)；

每个a^a3到a^f3独立地表示单键、-n(r^p4)-或-o-；

每个g^3a和g^3b独立地表示卤基、r^a5、-cn、-n(r^b5)r^c5、-or^d5、-sr^e5或＝o；

每个q^a4到q^c4独立地表示＝o、＝s、＝nrⁿ⁵或＝n(or^o5)；

每个a^a4到a^f4独立地表示单键、-n(r^p5)-或-o-；

每个r^a5独立地表示各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b5、r^c5、r^d5和r^e5独立地表示h、或各自任选地被独立地选自g⁴的一个或多个基团取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；或

每个g⁴独立地表示卤基、r^a6、-cn、-n(r^b6)r^c6、-or^d6或＝o；

每个r^a6独立地表示各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；

每个r^b6、r^c6和r^d6独立地表示h、或各自任选地被一个或多个氟基取代的c1-6烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；并且

每个p和q独立地表示1或2。

式xi包含式i、iv、v和vi的化合物。在本文其它地方描述了用于制备此类化合物的方法。

所制备的式xi的化合物可以选自由以下组成(或包括以下)的组：ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129和ot-1131。

在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂选自由ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131和ot-2056组成(或包括ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131和ot-2056)的组。

在优选实施例中，所述sectrap形成剂是ot-1000、ot-1129、ot-1096或ot-2056。

在一个优选实施例中，所述sectrap形成剂是ot-1000。

在一个优选实施例中，所述sectrap形成剂是ot-1129。

在一个优选实施例中，所述sectrap形成剂是ot-1096。

在一个优的实施例中，所述sectrap形成剂是ot-2056。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式i的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式ii的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式iii的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式i、ii或iii的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1000。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-2056。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1000或ot-2056。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式iv的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式v的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式iv或v的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1012。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1011。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1113。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1129。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1096。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1012、ot-1011、ot-1113、ot-1129或ot-1096。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式viii的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式ix的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是化合物ot-1131。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式viii或ix的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式iv或v或viii或ix的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式vi的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式vii的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是式x的化合物。

在一个实施例中，所述sectrap形成剂选自由以下组成的组的化合物：

在一个实施例中，所述sectrap形成剂不是选自由以上13种化合物组成的组的化合物。

药学上可接受的盐包含酸加成盐和碱加成盐。可以通过常规途径形成这种盐，例如通过任选地在溶剂或盐不可溶的培养基中，使游离酸或游离碱形式的本发明的供使用的化合物(sectrap形成剂)与一种或多种当量的适当的酸或碱反应，然后使用标准技术(例如在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)去除所述溶剂或所述培养基来形成这种盐。还可以通过例如使用适当的离子交换树脂将呈盐形式的本发明的供使用的化合物的抗衡离子与另一种抗衡离子交换来制备盐。

可以被提及的特定酸加成盐包含羧酸盐(例如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、庚酸盐、癸酸盐、癸酸盐、辛酸盐、硬脂酸盐、丙烯酸盐、己酸盐、丙酸盐、抗坏血酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖醛酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、α-羟基丁酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苯基乙酸盐、扁桃酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、水杨酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、肉桂酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、马尿酸盐、邻苯二甲酸盐或对苯二甲酸盐)、卤化物盐(例如氯化物盐、溴化物盐或碘化物盐)、磺酸盐(例如苯磺酸盐、甲基-苯磺酸盐、溴-苯磺酸盐或氯-苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、丙磺酸盐、羟基乙磺酸盐、1-或2-萘磺酸盐或1,5-萘二磺酸盐)或硫酸盐、焦硫酸盐、亚硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐或硝酸盐等。

可以被提及的特定碱加成盐包含用碱金属(如na盐和k盐)、碱土金属(如mg盐和ca盐)、有机碱(如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇和赖氨酸)和无机碱(如氨和氢氧化铝)形成的盐。更具体地，可提及的碱加成盐包含mg盐、ca盐，以及最特别地，k盐和na盐。

为避免疑义，本发明中的供使用的化合物可以以固体形式存在，并且因此本发明的范围包含其所有无定形形式、结晶形式和部分结晶形式，并且还可以以油形式存在。当本发明中的供使用的化合物以结晶形式和部分结晶形式存在时，此类形式可以包含溶剂化物，所述溶剂化物包含在本发明的范围内。本发明中的供使用的化合物还可以以溶液形式存在。

本发明中的供使用的化合物可以含有双键，并且因此可以以关于每个单独双键的e(异侧)和z(同侧)几何异构体形式存在。所有此类异构体和其混合物都包含在本发明的范围内。

本发明的供使用的化合物还可以表现出互变异构现象。所有互变异构形式和其混合物都包含在本发明的范围内。

本发明的供使用的化合物还可以含有一个或多个不对称碳原子，并且因此可以表现出旋光和/或非对映异构现象。可以使用常规技术(例如色谱法或分级结晶)分离非对映异构体。可以通过使用常规技术，例如分步结晶或hplc，对外消旋或化合物的其它混合物进行分离来隔离各种立体异构体。可替代地，期望的旋光异构体可以通过以下来制备：在不会引起外消旋化或差向异构化的条件下使适当的光学活性起始材料反应(即“手性池”法)，使适当的起始材料与可以随后在适当阶段通过衍生化(即归结，包含动态归结)去除的“手性助剂”反应；例如，在技术人员已知的条件下，用纯手性酸，然后通过如色谱法等常规方法或通过与适当的手性试剂或手性催化剂反应分离非对映异构衍生物。所有立体异构体和其混合物都包含在本发明的范围内。

如本文所使用的，对卤基和/或卤素的提及将独立地指氟基、氯基、溴基和碘基(例如，氟基和氯基)。

除非另外指明，否则本文所定义的c1-z烷基(其中z是范围的上限)可以是直链的，或当存在足够数量(即，最少两个或三个，如果适当的话)的碳原子时，其可以是支链的、和/或环状(因此形成c3-z环烷基)。当存在足够数量(即，最少四个)的碳原子时，此类基团还可以是部分环状的。可提及的部分环状的烷基包含环丙基甲基和环己基乙基。当存在足够数量的碳原子时，此类基团还可以是多环的(例如双环或三环)或螺环的。此类烷基还可以是饱和的，或当存在足够数量(即，最少两个)的碳原子时，其可以是不饱和的(例如，形成c2-z烯基或c2-z炔基)。

除非另外指明，否则本文所定义的c1-z亚烷基(其中z是范围的上限)可以(以与定义c1-z烷基的方式类似)是直链的，或当存在足够数量(即，最少两个或三个，如果适当的话)的碳原子时，其可以是支链的、和/或环状(因此形成c3-t环亚烷基)。当存在足够数量(即，最少四个)的碳原子时，此类基团还可以是部分环状的。当存在足够数量的碳原子时，此类基团还可以是多环的(例如双环或三环)或螺环的。此类亚烷基还可以是饱和的，或当存在足够数量(即，最少两个)的碳原子时，其可以是不饱和的(例如，形成c2-z亚烯基或c2-z炔基)。可以被提及的特定亚烷基包含是直链的或环状的且饱和的那些亚烷基。

除非另外指明，否则本文所定义的c2-z炔基(其中z是范围的上限)可以是直链的，或当存在足够数量(即，最少四个)的碳原子时，可以是支链的。

为避免疑义，技术人员将理解术语烷基是指饱和烃部分，而术语烯基将指含有至少一个碳-碳双键的不饱和烃部分，并且术语炔基将指含有至少一个碳-碳三键的不饱和烃部分，所述烷基、烯基和炔基可以统称为烃基。进一步，此类不饱和烃部分将参考其中包括的最高不饱和度来指代(例如，包括至少一个碳-碳双键和至少一个碳-碳三键的烃部分将被称为炔基，尽管此类部分还可以使用如“烯基炔基”等术语来进行指代)。

如本文所使用的，术语杂环烷基可以指非芳香族单环和双环杂环烷基(所述基团可以进一步桥接)，其中环系统中的原子中的至少一个(例如，一个到四个)原子不是碳(即，杂原子)，并且其中环系统中的原子总数在三个与十二个之间(例如，在五个与十个之间，并且最优选地，在三个与八个之间，例如5元或6元杂环烷基)。进一步，此类杂环烷基可以是饱和的或不饱和的，其含有一个或多个双键和/或三键，从而形成例如c2-z(例如，c4-z)杂环烯基(其中z是范围的上限)或c7-z杂环炔基。可以被提及的c2-z杂环烷基包含7-氮杂双环-[2.2.1]庚基、6-氮杂双环[3.1.1]庚基、6-氮杂双环[3.2.1]-辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、吖丙啶基、氮丙啶基、2,3-二氢异噻唑基、二氢吡喃基、二氢吡啶基、二氢吡咯基(包含2,5-二氢吡咯基)、二氧戊环基(包含1,3-二氧戊环基)、二恶烷基(包含1,3-二恶烷基和1,4-二恶烷基)、二噻烷基(包含1,4-二噻烷基)、二硫杂环戊基(包含1,3-二硫杂环戊基)、咪唑烷基、咪唑啉基、异噻唑烷基、吗啉基、7-氧杂双环基[2.2.1]庚基、6-氧杂二环[3.2.1]-辛基、氧杂环丁烷基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、磺酰基、3-磺酰基、吡喃阿霉素、四氢呋喃基、四氢吡啶基(如1,2,3,4-四氢吡啶基和1,2,3,6-四氢吡啶基)、硫杂环丁烷基、硫杂环丁基、硫代乙酰基、四氢噻喃基、硫代吗啉基、三硫杂环己烷(包含1,3,5-三硫杂环戊烷基)、托烷基等。在适当的情况下，杂环烷基上的取代基可以定位于包含杂原子的环系统中的任何原子上。进一步，在取代基是另一种环状化合物的情况下，然后环状化合物可以通过杂环烷基上的单个原子附接，从而形成所谓的“螺”化合物。杂环烷基的附接点可以通过包含(在适当的情况下)另外的杂原子(如氮原子)的环系统中的任何原子或可以作为环系统的一部分存在的任何融合碳环上的原子。杂环烷基还可以呈n-或s-氧化形式。

在本文提及每次出现时，可以被提及的特定杂环烷基包含3元到8元杂环烷基(例如，4元到6元杂环烷基)。

如本文所使用的，术语芳香基包含对c6-14(例如，c6-10)芳香族基团的提及。此类基团可以是单环或双环，并且当是双环时，其可以是全部或部分芳香族的。可以被提及的c6-10芳香基包含苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、茚满基等(例如苯基、萘基等，如苯基)。为避免疑义，取代基在芳香基上的附接点可以通过环系统的任何碳原子。

如本文可以使用的，术语杂芳基(或杂芳香族)包含提及含有选自氧、氮和/或硫的一个或多个杂原子的5元到14元(例如，5元到10元)杂芳香族基团。此类杂芳基可以包括一个、两个或三个环，其中至少一个是芳香族的。在适当的情况下，杂芳基/杂芳香族基团上的取代基可以定位于包含杂原子的环系统中的任何原子上。杂芳基/杂芳香族基团的附接点可以通过包含(在适当的情况下)杂原子的环系统中的任何原子。双环杂芳基/杂芳香族基团可以包括与一个或多个另外的芳香族或非芳香族杂环融合的苯环，在这种情况下，多环杂芳基/杂芳香族基团的附接点可以通过包含苯环或杂芳基/杂芳香族或杂环烷基环的任何环。可以被提及的杂芳基/杂芳香族基团的实例包含吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、咪唑并嘧啶基、咪唑并噻唑基、噻吩并噻吩基、嘧啶基、呋喃基、吲哚基、氮杂吲哚基、吡嗪基、吡唑并嘧啶基、吲唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基和嘌呤基。杂芳基/杂芳香族基团的氧化物还涵盖在本发明的范围内(例如，n-氧化物)。如上所述，杂芳基包含多环(例如双环)基团，其中一个环是芳香族的(并且另一个可以是或可以不是芳香族的)。因此，可以被提及的其它杂芳基包含例如，苯并[1,3]二氧杂环戊链烯基、苯并[1,4]二噁英基、二氢苯并[d]异噻唑、3,4-二氢苯并[1,4]噁嗪、二氢苯并噻吩、二氢吲哚、5h,6h,7h-吡咯烷[1,2-b]嘧啶基、1,2,3,4-四氢喹啉基、硫代苯并二氢吡喃基等。

为避免疑义，如本文所使用的，对杂原子的提及将采用本领域技术人员所理解的正常含义。可提及的特定杂原子包含磷、硒、碲、硅、硼、氧、氮和硫(例如氧、氮和硫)。

为避免疑义，对多环(例如，双环)基团的提及(例如，当在杂环烷基的背景中使用时)将指环系统，其中将此类环转化成直链需要两次以上的断裂，此类断裂的最小数量对应于所定义的环的数量(例如，术语双环可以指示将环转化成直链需要最少两次断裂)。为避免疑义，术语双环(例如，当在杂环烷基的背景中使用时)可以指其中双环系统的第二环形成于第一环的两个相邻原子之间的基团，并且还可以指其中两个不相邻的原子通过亚烷基或杂亚烷基链(如果适当)连接的基团，后面的基团可以被称为桥接的。

为避免疑义，当芳香基或杂芳基通过如＝o等双键被基团取代时，应理解芳香基或杂芳基是部分芳香族的，即，芳香基或杂芳基由至少两个环组成，其中至少一个环不是芳香族的。

如本文所使用的，术语杂环基可以指非芳香族单环和双环杂环基(所述基团可以进一步桥接)，其中环系统中原子中的至少一个(例如，一个到四个)原子不是碳(即，杂原子)，并且其中环系统中的原子总数在三个与十二个之间(例如，在五个与十个之间，并且最优选地，在三个与八个之间，例如5元或6元杂环基)。进一步，此类杂环基可以是饱和的(从而形成杂环烷基)或不饱和的，其含有一个或多个碳-碳或(在可能的情况下)碳-杂原子或杂原子-杂原子双键和/或三键，从而形成例如c2-z(例如，c4-z)杂环烯基(其中z是范围的上限)或c7-z杂环炔基。可以被提及的c2-z杂环基包含7-氮杂双环-[2.2.1]庚基、6-氮杂双环[3.1.1]庚基、6-氮杂双环[3.2.1]-辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、吖丙啶基、氮丙啶基、2,3-二氢异噻唑基、二氢吡喃基、二氢吡啶基、二氢吡咯基(包含2,5-二氢吡咯基)、二氧戊环基(包含1,3-二氧戊环基)、二恶烷基(包含1,3-二恶烷基和1,4-二恶烷基)、二噻烷基(包含1,4-二噻烷基)、二硫杂环戊基(包含1,3-二硫杂环戊基)、咪唑烷基、咪唑啉基、异噻唑烷基、吗啉基、7-氧杂双环基[2.2.1]庚基、6-氧杂二环[3.2.1]-辛基、氧杂环丁烷基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、磺酰基、3-磺酰基、吡喃阿霉素、四氢呋喃基、四氢吡啶基(如1,2,3,4-四氢吡啶基和1,2,3,6-四氢吡啶基)、硫杂环丁烷基、硫杂环丁基、硫代乙酰基、四氢噻喃基、硫代吗啉基、三硫杂环己烷(包含1,3,5-三硫杂环戊烷基)、托烷基等。在适当的情况下，杂环基上的取代基可以定位于包含杂原子的环系统中的任何原子上。进一步，在取代基是另一种环状化合物的情况下，然后环状化合物可以通过杂环基上的单个原子附接，从而形成所谓的“螺”化合物。杂环基的附接点可以通过包含(在适当的情况下)另外的杂原子(如氮原子)的环系统中的任何原子或可以作为环系统的一部分存在的任何融合碳环上的原子。杂环基还可以是n-或s-氧化形式。

在本文提及每次出现时，可以被提及的特定杂环基包含3元到8元杂环基(例如，4元到6元杂环基)。

本发明还涵盖本发明中的供使用的同位素标记的化合物，所述同位素标记的化合物与本文中所叙述的那些化合物相同，除了一个或多个原子被原子质量或质量数不同于通常在自然界中发现(或在自然界中发现最丰富的)的原子质量或质量数的原子取代之外。设想了本文所说明的任何具体原子或元素的所有同位素都在本发明的化合物的范围内。因此，本发明的化合物还包含氘代化合物，即，其中一个或多个氢原子被氢同位素氘取代。

为避免疑义，在本发明的化合物中两个或更多个取代基的同一性可能相同的情况下，各个取代基的实际同一性不以任何方式相互依赖。例如，在存在两个或更多个r⁴基团的情况下，那些r⁴基团可以是相同的或不同的。类似地，当存在两个或更多个r⁴基团并且各自表示r^a2时，所讨论的r^2a基团可以是相同的或不同的。同样地，当存在多于一个r^a1并且各自独立地表示被一个或多个g^1a基团取代的c1-6烷基时，每个g^1a的同一性决不是相互依赖的。

为避免疑义，当本文采用如“a^a1到a^f1”等术语时，本领域技术人员将此理解为包含a^a1、a^b1、a^c1、a^d1、a^e1和a^f1。除非另外说明，否则同样的推理将适用于本文所使用的其它此类术语。

可以用作根据本发明的sectrap形成剂的其它药剂包含下表中的那些药剂：

可以用作根据本发明的sectrap形成剂的其它药剂可以包含下表中的那些药剂：

在一些实施例中，根据本发明的供使用的所述sectrap形成剂是亚甲基奎宁环酮(mq)。在一些实施例中，mq可以以其前药(apr-246)的形式提供。mq是apr-246的转化产物。

apr-246可从apreaab(瑞典斯德哥尔摩)获得。在一些实施例中，因为对apr-246的热处理可以产生mq，所以可以使用热处理的apr-246(例如，在90℃下热处理15分钟)。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131、ot-2056、金诺芬和伊尼帕利布组成(或包括ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131、ot-2056、金诺芬和伊尼帕利布)的组。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131和ot-2056组成(或包括ot-1000、ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129、ot-1131和ot-2056)的组。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129和ot-1131组成(或包括ot-1011、ot-1012、ot-1096、ot-1113、ot-1129和ot-1131)的组。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由ot-1000、ot-1129、金诺芬或伊尼帕利布组成的组。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由ot-1000和ot-1129组成(或包括ot-1000和ot-1129)的组。

在一些特别优选实施例中，本发明中的供使用的化合物是ot-1096。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物选自由金诺芬或伊尼帕利布组成的组。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物是金诺芬。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物是伊尼帕利布。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物不是伊尼帕利布。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物不是顺铂(cisplatin)。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物不是三氧化二砷(也被称为ato)。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物不是金诺芬。

在一些优选实施例中，本发明中的供使用的化合物不是顺铂、三氧化二砷、金诺芬或伊尼帕利布。

在一些实施例中，单个(即，一种)sectrap形成剂用于治疗癌症(例如，t细胞浸润性癌症)。然而，在一些实施例中，多于一种sectrap形成剂(例如，2种、3种、4种或5种不同的sectrap形成剂)用于治疗癌症(例如，t细胞浸润性癌症)。在一些实施例中，使用两种不同的sectrap形成剂。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，优选地，所述sectrap形成剂中的至少一种sectrap形成剂是式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，优选地，所述sectrap形成剂中的两种或更多种sectrap形成剂是式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，优选地，所述sectrap形成剂中的至少一种sectrap形成剂是式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，所述sectrap形成剂之一是ot-1096。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，所述sectrap形成剂之一是伊尼帕利布。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，所述sectrap形成剂中的至少一种sectrap形成剂是式i、ii、iii、iv、v、vi、vii、viii、ix、x或xi的化合物并且化合物之一是伊尼帕利布。在使用多于一种sectrap形成剂的一些实施例中，所述sectrap形成剂之一是ot-1096并且所述sectrap形成剂之一是伊尼帕利布。在使用两种sectrap形成剂的一些实施例中，所述sectrap形成剂之一是ot-1096并且另一个是伊尼帕利布。在使用单个sectrap形成剂或多种不同的(例如，2种、3种、4种或5种)sectrap形成剂的情况下，在一些实施例中，癌症的治疗(或治疗方案)可以另外地包括使用(或施用)一种或多种另外的非sectrap形成剂。

技术人员将理解，作为本发明的主题的本发明的化合物包含稳定的化合物。也就是说，本发明的化合物包含足够坚固以在分离中存活下来的那些化合物，例如，从反应混合物到有用的纯度。

如本文所描述的本发明中的供使用的化合物(例如，式i到xi的化合物)可以根据本领域技术人员熟知的技术(如以下所描述的那些技术)制备。

制备式i的化合物

用于制备如上文所定义的式i的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式ia的化合物与式ib的化合物反应，式ia如下：

其中r¹、r²和r³是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ib如下：

其中r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且m表示碱金属离子(如na离子)，

在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(ii)使式ic的化合物(特别地，其中存在至少一个r⁴并且其表示吸电子基团(如-no2))与式id的化合物反应，式ic如下：

其中r¹、r²和r³是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且m表示碱金属离子(如na离子)，式id如下：

其中r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)使如上文所定义的式ia的化合物与如上文所定义的式ib的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式ia的化合物和/或式ib的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)使如上文所定义的式ic的化合物(特别地，其中存在至少一个r⁴并且其表示吸电子基团(如-no2))与如上文所定义的式id的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式ic的化合物和/或式id的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式ie的化合物

其中r¹到r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，与适当的氧化剂(如次氯酸盐(例如，次氯酸钠)、过氧单硫酸盐(例如，过氧单硫酸钾(oxone))、过羧酸(例如，间氯过氧苯甲酸(mcpba))或高锰酸钾)在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下并且任选地在存在水的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(vi)使式if的化合物与式ig的化合物反应，式if如下：

其中r¹、r²和r³是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ig如下：

其中r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例；特别地，其中存在一个或多个r⁴并且其表示供电子基团(如烷基))中所定义的，在存在适当的路易斯酸(如alcl3)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的情况下进行所述反应；

(vii)使如本文所定义的式if的化合物与如本文所定义的式ig的化合物(例如，其中在邻位中存在一个或多个r⁴并且其表示适当的引导基团)在存在适当的催化剂(如钯(ii)乙酸盐)和适当的碱(如碱金属碳酸盐，例如碳酸钾)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷)的情况下反应；

(viii)使如本文所定义的式if的化合物与式ih的化合物反应

其中r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg⁴表示适当的离去基团(如硼酸)，在存在适当的催化剂(如适当的金属卤化物，例如cubr或邻二氮杂菲)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的情况下进行所述反应；

(ix)使如本文所定义的式ic的化合物与(a)如本文所定义的具有至少一个r⁴基团的式ig的化合物或(b)如本文所定义的但是具有可以转化成r⁴基团的基团的式ig的化合物的在存在适当的催化剂和/或氧化剂(如铜(ii)乙酸盐和/或碳酸银)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯乙烷)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应，其中r⁴基团或可以转化成r⁴基团的基团存在于必需的h取代基的邻位并且表示适当的引导基团(如适当的酰胺，例如-c(o)n(h)c(ch3)2-2-吡啶基)，所述步骤可以进一步包括将可以转化成r⁴基团的基团转化成所需的r⁴基团。

式ia、ic、ib、id、ie、if、ig和ih的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成(comprehensiveorganicsynthesis)》,佩加蒙出版社(pergamonpress),1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学(heterocyclicchemistry)》第3版,由查普曼和霍尔公司(chapman&hall)出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii(comprehensiveheterocyclicchemistryii)》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学(scienceofsynthesis)》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社(georgthiemeverlag),2006。

具体地，式ie的化合物可以通过以下来制备：使式ij的化合物

其中r⁴和n是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，与如上文所定义的式ia的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式ie的化合物(特别地，其中存在至少一个r4并且其表示吸电子基团(如-no2))可以通过以下来制备：使式ik的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，与如上文所定义的式id的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式id的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式ij和ik化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r⁴可以通过本领域技术人员熟知的方法在上文所描述的用于制备式i的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式i中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换(comprehensiveorganicfunctionalgrouptransformations)》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换(comprehensiveorganictransformations)》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式i的化合物)作为最终步骤。

本领域技术人员将了解，在上文和下文所描述的过程中，中间体化合物的官能团可能需要由保护基团保护。对官能团的保护和脱保护可以在上文提到的方案中的反应之前或之后发生。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团(protectivegroupsinorganicsynthesis)》,第3版,威利国际科学(wiley-interscience)(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式ii的化合物

用于制备如上文所定义的式ii的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式iia的化合物与式iib的化合物反应，式iia如下：

其中x是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，式iib如下：

其中r¹、r²和y是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如四氢呋喃或甲苯)的情况下并且(在某些情况下，任选地)在存在适当的碱(例如，三乙胺或k2co3)的情况下进行所述反应(w^-表示呈阴离子的形式的抗衡离子)；

(ii)使如本文所定义的式iia的化合物与式iic的化合物反应

其中r¹、r²和y是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如四氢呋喃或甲苯)的情况下进行所述反应；

(iii)使如本文所定义的式iia的化合物与式iid的化合物反应

其中r¹、r²和y是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例；特别地，其中r¹和r²是h)中所定义的，pg¹是适当的保护基团(如c1-6烷基，例如甲基)并且lm是适当的金属复合物(如(氢三(1-吡唑基)硼酸钼)(co)2)，在存在适当的催化剂(如路易斯酸催化剂，例如etalcl2)和适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯)的情况下进行所述反应，然后在适当的溶剂(例如，有机溶剂(例如，四氢呋喃)和水的混合物)中用适当的氧化剂(如硝酸铈铵)进行处理；

(iv)在z表示nr^a的情况下，使式ii的化合物(其中z表示o)与式iie的化合物反应

hn-r^a(iie)

其中r^a是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如甲苯)并且任选地在适于去除水的条件下(如在存在分子筛(例如，分子筛)的情况下或使用迪安-斯达克(dean-stark)装置)进行所述反应；

(v)在z表示nor^b的情况下，使式ii的化合物(其中z表示o)与式iif的化合物反应

hn-or^b(iif)

或与其适当的盐(例如，hcl或h2so4盐)反应，其中是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如甲苯)的情况下并在存在适当的碱(如氢氧化钠或乙酸钠)的情况下进行所述反应；

(vi)在z表示s的情况下，使式ii的化合物(其中z表示o)与适当的试剂(即，适于形成硫代羰基的试剂，如劳森(lawesson)试剂)并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如甲苯或吡啶)的情况下反应；或

(vii)使对应于式ii的化合物的化合物(但是其中y表示h)与式iig的化合物反应

y-lg²(iig)

其中y是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg²是适当的离去基团(例如，当y是烷基、氯基或溴基时，或当y是芳香族、溴基，或特别地碘基、硼酸或酯时)，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如四氢呋喃或二氯甲烷)和(在某些情况下，任选地)适当的碱(并且在某些情况下，任选地，在存在适当的催化剂(如cu(oac)2)的情况下)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应。

式iia、iib、iic、iid、iie、iif和iig的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

例如，式iia的化合物可以通过以下制备：

(a)使式iih的化合物与式iij的化合物反应，式iih如下：

式iij如下：

x-nh2(iij)

其中x是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在适当的溶剂体系(例如，四氢呋喃或甲苯)中进行所述反应，然后用例如以下进行处理：

(a)乙酸酐，任选地在存在碱(三乙胺或乙酸钠)的情况下，

(b)乙酰氯、乙二酰氯等，然后用适当的碱(例如，三乙胺)进行处理，或

(c)六甲基二硅烷和znbr2，

在本领域技术人员已知的条件下；或

(b)使式iik的化合物与式iil的化合物反应，式iik如下：

式iil如下：

x-lg³(iil)

其中y是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg³是适当的离去基团(例如，当x是烷基、氯基或溴基，或x是芳香族、碘基或硼酸或酯时)，在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如四氢呋喃或二氯甲烷)和适当的碱的情况下并且任选地(例如，当x是芳香族时)在存在适当的催化剂(如cu(oac)2的情况下、在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应。

进一步，式iib的化合物可以通过以下来制备：使式iim的化合物与式iin的化合物反应，式iim如下：

其中r¹和r²是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，式iin如下：

y-lg³(iin)

其中y是如本文在式ii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg³是适当的离去基团(如氯基或溴基)，在存在适当的溶剂(例如，三氟乙酸、乙酸、甲苯、四氢呋喃或其混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应。

类似地，式iic的化合物可以通过以下来制备：使如本文所定义的式iim的化合物与如本文所定义的式iin的化合物在存在适当的溶剂(如乙腈、丙醇、甲苯或四氢呋喃)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应，然后用适当的碱(如三乙胺或naoh)或阴离子交换树脂(如ira-401(oh))进行处理。

进一步，式iid的化合物(例如，当式iid中的lm是(氢三(1-吡唑基)硼酸钼)(co)2)时)可以通过以下来制备：使式iio的化合物

顺序地与以下反应：(a)mo(co)3(dmf)3和叔丁基二甲基氯硅烷；(b)(氢三(1-吡唑基)硼酸钾)(co)2)；(c)四丁基氟化铵；(d)甲基碘；(e)三苯基六氟磷酸碳；和(f)三乙胺，例如，根据malinakova,h.c.andliebeskind,l.s.,《有机化学通讯(orgletters)》,2,3909(2000)中所描述的条件(所述文献的内容通过引用并入本文)或在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应，其中技术人员还将理解可能需要对在顺序的反应(a)到(e)中形成的中间体进行分离和纯化。

类似地，式iih、iik、iij、iil、iim、iin和iio的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹、r²、w、x和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在上文所描述的用于制备式ii的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式ii中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式ii的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式iii的化合物

用于制备如上文所定义的式iii的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式iiia的化合物与式iiib的化合物反应，式iiia如下：

其中w、x和y是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如cl)，式iiib如下：

其中r¹到r³和z是如本文在式iii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，在存在适当的碱(如金属碳酸盐，例如碳酸钠)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基甲酰胺)的情况下进行所述反应；或

(ii)使式iiic的化合物与式iiid的化合物反应，式iiic如下：

其中w、x、z和r¹到r³是如本文在式i(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如cl)，式iiid如下：

y-b¹(iiid)

其中y是如本文在式iii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且b¹表示适于参与偶联(例如，pd催化的偶联)反应的基团(如硼酸，例如从而形成-b(oh)2基团)，在存在适当的催化剂(如pd催化剂，例如pd(0)催化剂，例如四(三苯基膦)钯(0))的情况下(例如，在存在催化量的所述适当的催化剂的情况下)并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如四氢呋喃)的情况下进行所述反应。

式iiia、iiib、iiic和iiid的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

进一步，式iiia的化合物(其中x表示o)可以通过使式iiie的化合物反应来制备

其中w和y是如本文在式iii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg¹是如本文在式iiia中所定义的，在存在适于进行闭环的试剂(如磷酰氯(pocl3，例如在纯净的pocl3中))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应。

类似地，式iiia的化合物(其中x表示s)可以通过使如上文所定义的式iiie的化合物在存在五硫化磷或劳森试剂的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应来制备。

进一步，式iiib的化合物(其中z表示o并且r³表示h)可以通过以下来制备：使式iiif的化合物

其中r¹和r²是如本文在式iii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，与肼或其盐(例如，硫酸肼或氯化肼)在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式iiie和iiif的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³、w、x、y、z、b¹、lg¹和lg²可以通过本领域技术人员熟知的方法在上文所描述的用于制备式iii的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式iii中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的供使用的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式iii的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式iv的化合物

用于制备如上文所定义的式iv的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式iva的化合物与式ivb的化合物反应，式iva如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ivb如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(ii)特别地在存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2)的情况下，使式ivc的化合物与式ivd的化合物反应，式ivc如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式ivd如下：

其中x是如本文在式iv中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)使如上文所定义的式iva的化合物与如上文所定义的式ivb的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式iva的化合物和/或式ivb的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)使如上文所定义的式ivc的化合物(特别地，其中存在至少一个r⁴并且其表示吸电子基团(如-no2))与如上文所定义的式ivd的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碱化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式ivc的化合物和/或式ivd的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式ive的化合物

其中r¹到r³和x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与适当的氧化剂(如次氯酸盐(例如，次氯酸钠)、过氧单硫酸盐(例如，过氧单硫酸钾(oxone))、过羧酸(例如，间氯过氧苯甲酸(mcpba))或高锰酸钾)在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下并且任选地在存在水的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(vi)特别地，在存在一个或多个y并且其表示供电子基团(如烷基)的情况下，使式ivf化合物与式ivg的化合物反应，式ivf如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ivg如下：

其中x是如所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，在存在适当的路易斯酸(如alcl3)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的情况下进行所述反应；

(vii)使如本文所定义的式ivf的化合物与如本文所定义的式ivg的化合物(例如，其中在相对于磺酰基的附接点的α位置中存在一个或多个y基团并且其表示适当的引导基团)在存在适当的催化剂(如钯(ii)乙酸盐)和适当的碱(如碱金属碳酸盐，例如碳酸钾)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷)的情况下反应；

(viii)使如本文所定义的式v的化合物与式ivh的化合物反应

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg⁴表示适当的离去基团(如硼酸)，在存在适当的催化剂(如适当的金属卤化物，例如cubr或邻二氮杂菲)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的情况下进行所述反应；或

(ix)使如本文所定义的式ivc的化合物与(a)如本文所定义的具有至少一个y基团的式ivg的化合物或(b)如本文所定义的但是具有可以转化成y基团的基团的式ivg的化合物的在存在适当的催化剂和/或氧化剂(如铜(ii)乙酸盐和/或碳酸银)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯乙烷)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应，其中y基团或可以转化成y基团的基团存在于相对于必需的h取代基的α位置中并且表示适当的引导基团(如适当的酰胺，例如-c(o)n(h)c(ch3)2-2-吡啶基)，所述步骤可以进一步包括将可以转化成y基团的基团转化成所需的y基团。

式iva、ivc、ivb、ivd、ive、ivf、ivg和ivh的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式ive的化合物可以通过以下来制备：使式ivj的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式iva的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式ive的化合物(特别地，其中存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2))可以通过以下来制备：使式ivk的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式ivd的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式ivd的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式ivj和ivk的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式iv的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式i中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的方法可以包含本发明的化合物的分离和任选地纯化作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式v的化合物

用于制备如上文所定义的式v的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式va的化合物与式vb的化合物反应，式va如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式vb如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，

在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(ii)使式vc的化合物与式vd的化合物反应，式vc如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式vd如下：

其中x是如本文在式v中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)使如上文所定义的式va的化合物与如上文所定义的式vb的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式va的化合物和/或式vb的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)使如上文所定义的式vc的化合物与如上文所定义的式vd的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式vc的化合物和/或式vd的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式ve的化合物

(vi)使式vf的化合物与式vg的化合物反应，式vf如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式vg如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg⁴表示适当的离去基团(如硼酸)，在存在适当的催化剂(如适当的金属卤化物，例如cubr或邻二氮杂菲)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的情况下进行所述反应。

式va、vc、vb、vd、ve、vf和vg的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式ve的化合物可以通过以下来制备：使式vh的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式va的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式ve的化合物可以通过以下来制备：使式vj的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式vd的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式vd的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式vh和vj的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式v的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式v中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的供使用的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式v的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式vi的化合物

用于制备如上文所定义的式vi的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式via的化合物与式vib的化合物反应，式via如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式vib如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，

(ii)使式vic的化合物与式vid的化合物反应，式vic如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式vid如下：

其中x是如本文在式vi中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)使如上文所定义的式via的化合物与如上文所定义的式vib的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式via的化合物和/或式vib的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)使如上文所定义的式vic的化合物与如上文所定义的式vid的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式vicb的化合物和/或式vid的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式vie的化合物

(vi)使式vif的化合物与式vig的化合物反应，式vif如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式vig如下：

其中x如所定义(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，在适当的路易斯酸(如alcl3)的存在下，并且在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷或二氯乙烷)的存在下反应。

式via、vic、vib、vid、vie、vif和vig的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式vie的化合物可以通过以下来制备：使式vih的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式via的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式vie的化合物可以通过以下来制备：使式vij的化合物

类似地，式vie的化合物(特别地，其中存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2))可以通过以下来制备：使式vik的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式vid的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式vid的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式vij和vik的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式vi的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式vi中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式vi的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式vii的化合物

用于制备如上文所定义的式vii的化合物的适当的过程可以包括：

(i)使式viia的化合物

其中r¹到r⁴和n是如本文在式vii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，与适当的氧化剂(如间氯过氧苯甲酸(mcpba))在存在适当的溶剂(如二氯甲烷(dcm))的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

式viia化合物可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式viia的化合物可以通过使式viib的化合物与式viic的化合物反应来制备，式viib如下：

其中r⁴和n是如本文在式vii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的，式viic如下：

其中r¹、r²和r³是如本文在式vii(或其任何特定特征或实施例)中所定义的并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在本领域技术人员已知的条件下，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下进行所述反应。

式viib和viic的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r⁴可以通过本领域技术人员熟知的方法在上文所描述的用于制备式i的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式i中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式vii的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式viii的化合物

用于制备如上文所定义的式viii的化合物的适当的过程可以包括：

(i)在n表示2的情况下，使式viiia的化合物与式viiib的化合物反应，式viiia如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式viiib如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，

在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(ii)在n表示2的情况下，特别地，在存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2)的情况下，使式viiic的化合物与式viiid的化合物反应，式viiic如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式viiid如下：

其中x是如本文在式viii中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式viiia的化合物与如上文所定义的式viiib的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式viiia的化合物和/或式viiib的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式viiic的化合物(特别地，其中存在至少一个r⁴并且其表示吸电子基团(如-no2))与如上文所定义的式viiid的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式viiic的化合物和/或式viiid的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式viiie的化合物

其中r¹到r³和x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与适当的氧化剂(即，以达到期望的氧化程度所需的方式选择和使用的氧化剂；如次氯酸盐(例如，次氯酸钠)、过氧单硫酸盐(例如，过氧单硫酸钾(oxone))、过羧酸(例如，间氯过氧苯甲酸(mcpba))或高锰酸钾)在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下并且任选地在存在水的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(vi)在n表示2的情况下，特别地，在存在一个或多个y并且其表示供电子基团(如烷基)的情况下，使式viiif的化合物与式viiig的化合物反应，式viiif如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式viiig如下：

(vii)在n表示2的情况下，使如本文所定义的式viiif的化合物与如本文所定义的式viiiig的化合物(例如，其中在相对于磺酰基的附接点的α位置中存在一个或多个y基团并且其表示适当的引导基团)在存在适当的催化剂(如钯(ii)乙酸盐)和适当的碱(如碱金属碳酸盐，例如碳酸钾)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯甲烷)的情况下反应；

(viii)在n表示2的情况下，使如本文所定义的式v的化合物与式viiih的化合物反应

(ix)在n表示2的情况下，使如本文所定义的式viiic的化合物与(a)如本文所定义的具有至少一个y基团的式viiig的化合物或(b)如本文所定义的但是具有可以转化成y基团的基团的式viiig的化合物的在存在适当的催化剂和/或氧化剂(如铜(ii)乙酸盐和/或碳酸银)的情况下并且在存在适当的溶剂(如有机溶剂，例如二氯乙烷)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应，其中y基团或可以转化成y基团的基团存在于相对于必需的h取代基的α位置中并且表示适当的引导基团(如适当的酰胺，例如-c(o)n(h)c(ch3)2-2-吡啶基)，所述步骤可以进一步包括将可以转化成y基团的基团转化成所需的y基团。

式viiia、viib、viiic、viiid、viiie、viiif、viiig和viiih的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式viiie的化合物可以通过以下来制备：使式viiij的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式viiia的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式viiie的化合物(特别地，其中存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2))可以通过以下来制备：使式viiik的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式viiid的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式viiid的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式viiij和viiik的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式viii的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式viii中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式ix的化合物

用于制备如上文所定义的式ix的化合物的适当的过程可以包括：

(i)在n表示2的情况下，使式ixa的化合物与式ixb的化合物反应，式ixa如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ixb如下：

其中x如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(ii)在n表示2的情况下，使式ixc的化合物与式ixd的化合物反应，式ixc如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式ixd如下：

其中x是如本文在式ix中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式ixa的化合物与如上文所定义的式ixb的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式ixa的化合物和/或式ixb的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式ixc的化合物与如上文所定义的式ixd的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式ixc的化合物和/或式ixd的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式ixe的化合物

(vi)在n表示2的情况下，使式ixf的化合物与式ixg的化合物反应，式ixf如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式ixg如下：

式ixa、iib、ixc、ixd、ixe、ixf和ixg的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式ixe的化合物可以通过以下来制备：使式ixh的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式ixa的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式ixe的化合物可以通过以下来制备：使式ixj的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式ixd的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式ixd的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式ixh和ixj的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式ix的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式ix中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式ix的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

制备式x的化合物

用于制备如上文所定义的式x的化合物的适当的过程可以包括：

(i)在n表示2的情况下，使式xa的化合物与式xb的化合物反应，式xa如下：

其中r¹、r²和r³是如本文中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg¹表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式xb如下：

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，

(ii)在n表示2的情况下，使式xc的化合物与式xd的化合物反应，式xc如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且m表示碱金属离子(如na离子)，式xd如下：

其中x是如本文在式x中所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg²表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，在存在适当的酸(如浓酸，例如浓无机酸，例如浓hcl，例如浓hcl水溶液)的情况下，并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)的情况下，并且任选地在存在适当的相转移催化剂(如季铵盐，例如四丁基氯化铵)的情况下进行所述反应；

(iii)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式xa的化合物与如上文所定义的式xb的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式xa的化合物和/或式xb的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(iv)在n表示2的情况下，使如上文所定义的式xc的化合物与如上文所定义的式xd的化合物在存在适当的金属卤化物(如适当的金属碘化物(例如，cui)或适当的金属溴化物(例如，cubr)；所述金属卤化物可能过量存在，如以对应于至少2摩尔当量的式xc的化合物和/或式xd的化合物的量计)的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂，例如n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺、四氢呋喃或3-二甲基-2-咪唑啉酮)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应；

(v)使式xe的化合物

(vi)在n表示2的情况下，使式xf的化合物与式xg的化合物反应，式xf如下：

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)并且lg³表示适当的离去基团(如卤基，例如氯基)，式xg如下：

式xa、xb、xc、xd、xe、xf和xg的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。在这方面，技术人员尤其可以参考b.m.trost和i.fleming的《综合有机合成》,佩加蒙出版社,1991。可以采用的另外的参考文献包含j.a.joule,k.mills和g.f.smith的《杂环化学》第3版,由查普曼和霍尔公司出版；a.r.katritzky,c.w.rees和e.f.v.scriven的《综合杂环化学ii》,佩加蒙出版社,1996；以及《合成科学》,第9-17卷(hetarenes和相关的环系统),乔治·泰米出版社,2006。

具体地，式iv的化合物可以通过以下来制备：使式xh的化合物

其中x是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式xa的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应，如在存在适当的碱(如金属碳酸盐(例如，碳酸钾)、金属氢氧化物(例如，氢氧化钠)或胺碱(例如，三乙胺))的情况下并且在存在适当的溶剂(如极性有机溶剂(例如，n,n'-二甲基乙酰胺、n,n'-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)或极性有机溶剂和水的混合物)的情况下、在本领域技术人员已知的条件下反应。

类似地，式xe的化合物可以通过以下来制备：使式xj的化合物

类似地，式xe的化合物(特别地，其中存在至少一个y并且其表示吸电子基团(如-no2))可以通过以下来制备：使式xk的化合物

其中r¹、r²和r³是如本文所定义的(即，用于本发明或其任何特定特征或实施例的化合物)，与如上文所定义的式xd的化合物在本领域技术人员已知的条件下反应(例如，在存在于式xd的化合物中的r⁴基团不足以吸电子的情况下，所述反应可以在存在适当的催化剂(如乙酸钯(ii)或氧化铜)的情况下进行，在这种情况下，适当的碱可以是碱金属叔丁醇(如kt-obu))。

类似地，式xj和xk的化合物可商购获得、在文献中是已知的、或可以通过类似于本文所描述的过程或通过常规合成程序、根据标准技术、使用适当的试剂和反应条件从可用的起始材料中获得。

如上文所定义的，取代基r¹到r³和y可以通过本领域技术人员熟知的方法在以上所描述的用于制备式x的化合物的过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的实例包含取代、还原、氧化、脱氢、烷基化、脱烷基、酰化、水解、酯化、醚化、卤化和硝化。在反应顺序期间的任何时间，前体基团可以改变成不同的此种基团或改变成式x中所定义的基团。技术人员还可以参考a.r.katritzky,o.meth-cohn和c.w.rees的《综合有机官能团变换》,佩加蒙出版社,1995和/或r.c.larock的《综合有机变换》,wiley-vch出版社,1999。

本发明的化合物可以从其反应混合物中分离并且(如果需要的话)可以使用本领域技术人员已知的常规技术对其进行纯化。因此，用于制备如本文所描述的本发明的化合物的过程可以包含分离和任选地纯化本发明的化合物(例如，分离和任选地纯化式x的化合物)作为最终步骤。

可以根据本领域技术人员熟知的且如下文所描述的技术来施加保护基团和去除保护基团。例如，可以使用标准的脱保护技术，将本文所描述的受保护的化合物/中间体以化学方法转化成未保护的化合物。所涉及的化学类型将指示保护基团的需求和类型，以及用于完成合成的顺序。在t.w.greene和p.g.m.wutz的《有机合成中的保护基团》,第3版,威利国际科学(1999)中充分地描述了保护基团的用途。

如上文所讨论的，在一个方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或增强或引发)针对(所述受试者的)所述癌症的免疫应答。

在不希望受理论的束缚的情况下，据信本发明中的供使用的sectrap形成剂抑制酶trxr的c端活性位点(但没有消除或没有显著抑制trxr的n端活性位点处的活性)，从而引起反应性氧物种的水平提高、硫氧还蛋白(trx)产生和释放降低(例如，降低经还原的trx的浓度)(并且可能降低pdi的浓度和/或降低经还原的氧化还原活性蛋白和体系的浓度)，并且因此减小(例如，肿瘤微环境中的)treg细胞(调节性t细胞)群的大小，这会引起(或刺激或增强)抗癌免疫应答。进一步并且不希望受到理论的束缚，作为对富trxr/trx的细胞的sectrap作用的结果，细胞毒性t细胞可以在所述富trxr/trx的细胞已经裂解于肿瘤组织中之后被吸引以浸润肿瘤微环境。

t细胞浸润性癌症(或t细胞浸润性肿瘤)是根据本发明的有待治疗的优选癌症。在不希望受理论的束缚的情况下，鉴于发明人的惊人发现：sectrap形成剂可以刺激抗癌免疫应答，根据本发明，t细胞浸润性癌症对于治疗特别有吸引力，因为此类癌症可能已经具有“设置好的(set-up)”或“准备好的(poised/primed)”肿瘤微环境(例如，就t细胞群存在方面)以对由sectrap形成剂赋予的免疫刺激活性做出反应。

t细胞浸润性癌症是在肿瘤微环境(或肿瘤内空间)中具有t细胞(免疫细胞)群(或重要的或生理上相关的群体)的癌症(或肿瘤)。通常，t细胞浸润性癌症通过cd8+细胞毒性t细胞、cd4+辅助细胞和cd4+调节性t细胞(treg)表征。cd8+t细胞是介导有效抗癌活性的关键效应细胞群。treg在肿瘤微环境中具有免疫抑制作用。本领域技术人员将能够容易地确定给定的癌症(或肿瘤)是否是t细胞浸润性的(以及浸润程度)。例如，可以例如基于t细胞的细胞表面标志物谱，针对t细胞的存在(或不存在)或t细胞浸润的程度对肿瘤组织进行活检，并且对所述活检进行分析。例如，可以基于标志物谱cd4+cd25+foxp3+鉴定treg细胞。

t细胞浸润性肿瘤还可以包括b细胞、巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞、nk细胞、中性粒细胞和/或肥大细胞。

在肿瘤微环境中，通常被认为抗肿瘤的免疫细胞是细胞毒性t淋巴细胞(cd8+)和自然杀伤细胞(nk)。被认为促进肿瘤生成的免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞(tam)、中性粒细胞和肥大细胞。一些免疫细胞类型(例如，调节性t细胞(treg)和骨髓源性抑制细胞(mdsc))可以抑制针对肿瘤细胞的免疫反应。通常，肿瘤细胞与相关的基质一起将指示哪些免疫细胞在tme内占主导。

如上文所提及的，本领域技术人员将能够容易地确定给定的癌症(或肿瘤)是否是t细胞浸润性的(以及浸润程度)。存在本领域已知的用于确定肿瘤组织内的各种免疫细胞的水平和类型(并且因此确定给定的癌症是否是t细胞浸润性的或浸润程度)的各种方法。供临床使用的多种肿瘤组织生物标志物测定方法和推荐的指南在(masucci等人2016)中进行了评论。

可以通过针芯活检得到样品(例如，肿瘤样品)。评估t细胞浸润的一种方法涉及对肿瘤组织样品进行苏木精和伊红染色(h&e)。使用h&e，通常可以基于淋巴细胞的密度和分布对免疫浸润进行评分。另一种方法使用免疫组织化学(ihc)技术，其中对某些免疫细胞表达的标志物进行评价。可以单独地或组合地使用cd3、cd4、cd8+、foxp3+进行ihc染色。可以使用cd3和cd4的组合来确定t细胞浸润的程度。基于流式细胞术的免疫表型分型测定可以用于来自活检物的活细胞上。另一种方法是使用免疫标志物的基因表达。肿瘤t细胞标志物包含颗粒酶a、颗粒酶b、穿孔素、脱中胚蛋白、ifn-γ、tnf、cxcl9、cxcl10、cd8a、cd4、foxp3、icos和ctla4。可以用于评估t细胞浸润的其它标志物和标志物组包含选自由cd45、cd3、cd4、cd8、ki67、ctla-4、pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、icos、cd25、ox40、icos、t-bet、cd25、foxp3、cd127、ki67、cd45ra、ctla-4、gitr、cd103、神经毡蛋白-1、helios、cd45ra、cd45ro、cd16、cd56、cd69、cd19、cd20和cd27组成的组的标志物中的一个或多个标志物。

所有白细胞的一个标志物是cd45。cd45在除成熟红细胞之外的几乎所有造血细胞上表达。

所有t细胞的一个标志物是cd3。

t细胞的标志物包含cd3、cd4、cd8、ki67、ctla-4、pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3和icos。

t细胞活化的标志物包含cd25、ox40、icos和ctla4。

cd4+th1细胞的标志物包含t-bet。

treg细胞的标志物包含cd3、cd4、cd25、foxp3、cd127、ki67、cd45ra、ctla-4、gitr、cd103、神经毡蛋白-1和helios。

treg细胞的一个标志物组是cd4+cd25+foxp3+。cd25是很大程度上由淋巴细胞并且特别强烈的程度上由treg表达的基因。因此，treg(treg细胞)可以通过cd4、cd25和foxp3的表达表征。treg细胞的另一个标志物组是cd3+、cd4+、cd25+、foxp3+和cd45+。因此，treg(treg细胞)可以通过cd3、cd4、cd25、foxp3和cd45的表达表征。

未处理t细胞的标志物包含cd45ra。

记忆t细胞的标志物包含cd45ro。

未处理cd4+细胞对记忆cd4+细胞可以表达为比率cd4+cd45ro+/cd4+。

未处理cd8+细胞对记忆cd8+细胞可以表达为比率cd8+cd45ro+/cd8+。

活化的自然杀伤(nk)细胞的标志物包含cd16、cd56和cd69。

b细胞的标志物包含cd19、cd20和cd27。

组织中的全部b细胞的一个标志物是cd20，并且使用流式细胞术是cd19。

未处理b细胞对记忆b细胞可以表达为比率cd19+cd27+/cd19+。

在一些实施例中，本发明的用途和方法可以包括确定(或评估)癌症(肿瘤)是否是免疫细胞浸润性(例如，t细胞浸润性)(以及任选地，浸润程度)的步骤。在一些实施例中，此步骤是在开始用sectrap形成剂进行治疗之前执行的。如本文其它地方所讨论的，此步骤可以允许选择根据本发明的有待治疗的受试者。例如，在一些实施例中，患有已经被确定(或分类)为是免疫细胞浸润性(例如，t细胞浸润性)的癌症的受试者是根据本发明的进行治疗的优选受试者。

在一些实施例中，评估癌症是否是t细胞浸润性(或t细胞浸润的程度)可以通过肿瘤活检、然后基于细胞表面标志物谱(或其它标志物谱，例如基于基因表达)对存在的细胞进行检查或分析来进行。适当的标志物谱是技术人员已知的并且在本文中进行了讨论。用于分析细胞标志物谱(例如，细胞表面标志物谱)的一种适当的方法是流式细胞术。技术人员熟悉流式细胞术方法并且可以容易地选择例如本文在实例部分所描述的用于在此类方法中使用的适当的试剂(例如，针对给定标志物的抗体)。

在一些实施例中，评估癌症是否是t细胞浸润性(或t细胞浸润的程度)可以通过分析样品(例如，肿瘤样品)中的一个或多个细胞因子(例如，细胞因子谱)(例如，其存在或不存在或水平)来进行。

在t细胞浸润性肿瘤中，通常存在特征性细胞因子谱，这取决于哪种类型的细胞存在以及哪种细胞占主导。例如，cd4+t辅助细胞亚群已经基于其特征性细胞因子谱被定义(golubovskaya和wu2016)。cd4+t细胞在通过抗原呈递细胞(apc)活化之后分化成表达细胞因子的效应辅助t(th)细胞，所述表达细胞因子的效应th细胞基于其细胞因子分泌和免疫调节功能分类为th1、th2、th17和t卵泡辅助(tfh)细胞亚群。另一个实例是t效应细胞，其中中央记忆t细胞，效应记忆t细胞和效应记忆rat细胞具有可区分的细胞因子信号传导特征(willinger等人2005)。

如本文其它地方所描述的，可以在癌症(或肿瘤)样品(或标本)中评估t细胞浸润(例如，其存在、不存在或程度)。肿瘤样品可以呈芯活检物或肿瘤切片的形式。肿瘤切片比芯活检物宽并且可以提供更加准确的浸润图片。通常在苏木精和伊红染色(h&e)样品上(例如，由病理学医师和/或生物学家)对til水平进行评分。还可以使用对免疫基因特征进行的免疫组织化学和/或分析。样品通常含有在(或存在于)载玻片上。使用h&e，通常基于淋巴细胞的密度和分布对免疫浸润进行评分。使用高功率场(hpf)在视觉上进行计数。可以单独地或组合地使用cd3、cd4、cd8+、foxp3+进行ihc染色。已经使用cd3和cd4的组合来确定t细胞浸润的程度。肿瘤浸润淋巴细胞通常通过其位置被定义为肿瘤内淋巴细胞或基质淋巴细胞。肿瘤内淋巴细胞的％通常基于由与单个肿瘤细胞直接接触的上皮内单核细胞或单核细胞所占据的总面积或肿瘤巢。基质淋巴细胞的％通常基于由单核细胞所占据的基质的总面积。对于个体患者，由于同一肿瘤的不同切片之间的浸润水平有差异，因此浸润的百分比通常基于所评估的所有样品的平均值。

外周血和肿瘤的免疫学变化可以潜在地反映肿瘤对患者的治疗的应答。免疫生物标志物可以是肿瘤源性的和/或免疫细胞源性的。在肿瘤部位处测量到的参数可以包含治疗之前和之后的特异性肿瘤和免疫变化。可以通过ihc和基于流式细胞术的免疫表型分型测定针对淋巴细胞浸润对治疗前和治疗后的活检物进行分析。可以通过蛋白质测定、基因组学(例如，下一代测序)、转录组学和蛋白质功能对肿瘤标本进行分析。淋巴细胞的肿瘤浸润主要使用标志物组通过ihc来测量。可以使用复合染色(其中多达七种荧光染料)。供临床使用的多种方法和推荐的指南在(masucci等人2016)中进行了评论。例如，在肿瘤标本上使用ihc示出对应答患者进行抗pd-1阻断会导致侵入性肿瘤边缘中的和肿瘤中心内部的cd8+t细胞的水平提高。可以使用下一代测序或全基因组测序(wes)来评估肿瘤部位处的肿瘤突变负荷和肿瘤抗原特异性t细胞积累(通过所谓的t细胞受体序列使用)。可以使用福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)组织、使用可商购的试剂盒对pd-l1在免疫细胞或肿瘤细胞上的基线表达进行定性评分。

可以指示对抗pd-l1的应答的肿瘤t细胞标志物的组可以包含颗粒酶a、颗粒酶b、穿孔素、脱中胚蛋白、ifn-γ、tnf、cxcl9、cxcl10、cd8a、cd4、foxp3、icos和ctla4。参考基因可以是sp2、gusb、tmem55b和vps33b(herbst等人2014)。

存在可以用于进行肿瘤组织基因表达谱分析的可商购的系统。例如，ncountergx泛癌症免疫谱分析组是一组全面的770个基因，其组合了24种不同免疫细胞类型和群的标志物、30种常见癌症抗原和表示所有类别的免疫应答的基因(包含关键检查点阻断基因)。ncounter泛癌症进展组是帮助评估癌症进展的组。所述组具有来自促成肿瘤生长增加和侵入性的四个主要生物学过程(包含血管生成、上皮向间质转化、细胞外基质重塑和转移(nanostring技术))的770个基因。

在一些优选实施例中，存在高等级(或高水平)的癌症(肿瘤)t细胞浸润。可以使用h&e染色或其它适当的方法(例如，本文所描述的其它方法)来确定这个。技术人员能够确定什么表示高等级浸润。在一些实施例中，高等级浸润是肿瘤浸润淋巴细胞(til)表示肿瘤内的总细胞的≥40％或≥50％(或更多)的情形。例如，在lpbc(淋巴细胞为主的乳腺癌)中，已经针对til包括肿瘤内的超过一半的细胞的情形定义了高等级浸润的一种度量(pruneri等人2016)。

为了报告淋巴细胞(例如，t细胞)的肿瘤浸润的程度，可以使用某些阈值来定义最小浸润、适度浸润和广泛浸润。仅通过举例的方式，最小浸润可以表示肿瘤内淋巴细胞小于5％并且基质淋巴细胞小于10％(相对于肿瘤中的细胞总数)的情况。适度浸润可以表示肿瘤内淋巴细胞大于5％或基质淋巴细胞多于10％(相对于肿瘤或基质中的细胞总数)的情况。然而，可以以不同方式评估浸润的临界值和程度。

在一些实施例中，t细胞浸润性癌症(或肿瘤)是其中的浸润淋巴细胞(til)(例如，肿瘤内淋巴细胞)表示肿瘤内的总细胞的≥5％、或≥10％、≥15％、≥20％、≥25％、≥30％、≥40％或≥50％(或更多)的肿瘤。在一些实施例中，t细胞浸润性癌症(或肿瘤)是其中的浸润淋巴细胞(til)(例如，基质淋巴细胞)表示肿瘤或基质内的总细胞的≥10％、≥15％、≥20％、≥25％、≥30％、≥40％或≥50％(或更多)的肿瘤。

肿瘤微环境(tme)可以被免疫细胞浸润到某个程度，这取决于肿瘤类型和阶段。

当讨论浸润的等级时，这通常涉及正常组织与肿瘤组织之间的比较，其中高等级指示肿瘤微环境中的免疫细胞的频率显著高于肿瘤周围组织(富集肿瘤)中的免疫细胞的频率。高等级浸润还可以是指不同肿瘤类型之间、某种肿瘤类型内的亚型之间以及特定肿瘤类型的肿瘤阶段之间的比较。例如，在乳腺癌的情况下，据报道某些乳腺癌亚型中的浸润高于其它亚型并且因患者而异(pruneri等人2016)。基质区域中的(例如，在乳腺癌中)浸润可以高于肿瘤床中的浸润。与其它乳腺癌亚型相比，三阴性乳腺癌是与高度浸润相关的一种亚型。

肿瘤浸润免疫细胞具有促进抗致瘤性作用和促致瘤性作用的功能能力，其中作用的方向性和程度部分地由肿瘤微环境中的在同一肿瘤类型内以及不同肿瘤类型之间有差异的细胞成分和分子成分来控制。仅通过举例的方式，在乳腺癌、黑素瘤、头颈癌、结肠直肠癌(和其它癌症)中，tme可以被免疫细胞浸润。基质区域中的浸润高于肿瘤床中的浸润。tnbc(三阴性乳腺癌)是与高度浸润相关的一种亚型。til的存在可以指示肿瘤特异性免疫应答的存在，但是似乎免疫系统对原发性肿瘤控制的作用相对无效，因为这些抗原性原发癌仍可以成功生长。可以通过增强免疫细胞功能的各种抗体来帮助免疫细胞浸润到肿瘤中并且识别和杀死肿瘤细胞。鉴于本发明，可以通过刺激抗癌免疫应答将sectrap形成剂添加到临床医师的用于治疗癌症的工具包。

肿瘤微环境(tme)的组合物影响肿瘤的生长。tme包括肿瘤床、基质、细胞外基质和脉管(淋巴管和血管)。基质由内皮细胞、间充质干细胞、癌症相关成纤维细胞、周细胞组成，并且可以与肿瘤细胞和免疫细胞两者相互作用。基质的细胞可以促进肿瘤进展、转移和化学抗性。肿瘤细胞可以通过细胞与细胞的接触并且通过分泌因子将浸润免疫细胞和基质成分重新编程为促致瘤性的作用模式。

肿瘤(例如，根据本发明的经历抗癌免疫应答的肿瘤)可以表现出t细胞发炎的表型。这种表型通过高(或更高)的til(肿瘤浸润淋巴细胞)水平(例如，与正常水平或对照水平(例如，正常组织或肿瘤周围组织中的水平)相比)、t细胞活化标志物的表达增加、募集t细胞的趋化因子表征，并且还可以通过负性免疫调节因子(包含foxp3+treg细胞和ido(吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶))表征。还可以存在i型ifn特征。相比之下，非t细胞发炎的表型通过缺乏(或较少数量的)til(例如，与正常水平或对照水平(例如，在正常组织或肿瘤周围组织中)相比)表征，但是富含抑制性th2细胞因子和趋化因子(tam和msdc)。后一种表型也被称为慢性炎症。

在tme内，通常被认为抗肿瘤的免疫细胞是细胞毒性t淋巴细胞(cd8+)和自然杀伤细胞(nk)。因此，在本发明的一些实施例中，抗癌免疫应答可以通过细胞毒性t淋巴细胞(cd8+)和/或自然杀伤细胞(nk)的存在(或其的水平例如与非癌组织或正常组织或肿瘤周围组织相比有所提高)表征。被认为促进肿瘤生成的免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞(tam)、中性粒细胞和肥大细胞。一些免疫细胞类型(例如，调节性t细胞(treg)和骨髓源性抑制细胞(mdsc))可以抑制针对肿瘤细胞的免疫反应。通常，肿瘤细胞与相关的基质一起将指示哪些免疫细胞在tme内占主导。

三种主要类型的淋巴细胞是t细胞、b细胞和自然杀伤(nk)细胞。t细胞在细胞介导的细胞毒性适应性免疫中起作用。nk细胞在细胞介导的细胞毒性先天免疫中起作用，并且b细胞在抗体驱动的适应性免疫中起作用。t细胞被分为cd8+组和cd4+组，其中cd8+具有细胞毒性活性，而cd4+是辅助细胞。记忆t细胞是循环的抗原经历的t细胞，其可以在靶组织中遇到呈递的抗原之后迅速扩增。

效应t细胞是包含对刺激(如共刺激)做出积极应答的各种t细胞类型的广泛类别。这包含辅助t细胞、细胞毒性(杀伤)t细胞、调节性t细胞以及其它可能的t细胞类型。细胞毒性cd8+效应细胞是对肿瘤细胞进行主动清除的细胞群。

t辅助细胞(th细胞)在免疫过程中协助其它白细胞，包含使b细胞成熟为浆细胞和记忆b细胞，以及细胞毒性t细胞和巨噬细胞的活化。因为这些细胞在其表面上表达cd4糖蛋白，所以这些细胞也被称为cd4+t细胞。当辅助t细胞由mhc类ii分子呈递抗原肽时，所述辅助t细胞被活化，在抗原呈递细胞(apc)的表面上表达抗原肽。一旦活化，它们就会快速分开并分泌调节或协助活化的免疫应答的细胞因子。th细胞可以分化为几种亚型之一，其包含分泌不同的细胞因子以促进不同类型的免疫应答的th1、th2、th3、th17、th9或tfh。来自apc的信号引导t细胞进入特定亚型。

调节性t细胞(treg)分成两种主要类别：从未成熟t细胞与胸腺上皮基质细胞之间的相互作用发展出来的胸腺源性天然treg(ntregs)和由于cd4+foxp3-t细胞转化成表达foxp3的细胞而产生的可诱导treg(itreg)。若干出版物已经示出foxp3基因座中的调节元件的cpg去甲基化支持foxp3的稳定表达和抑制性表型。通常，这些treg亚群通过维持自身抗原的耐受性来补充彼此的作用，从而抑制自身免疫。treg通常仅占所有循环cd4+t细胞的5-10％。可以通过foxp3的表达来鉴定treg，并且已知treg可以通过分泌特定的抑制性细胞因子(如il-10、il-35和tgf-β)或通过直接的细胞-细胞的接触来抑制任何类型的效应t细胞。抑制是通过在效应t细胞中的il-2和/或干扰素-γ(ifn-γ)产生的下调而观察到的。treg失调可以导致自身免疫性疾病，而功能获得可以导致癌变。在大多数情况下，cd4+cd25+treg细胞在以下2个方面抑制抗肿瘤免疫应答：一种模式是通过肿瘤引流区域性淋巴结中的细胞；另一种模式是通过肿瘤组织。在肿瘤引流区域性淋巴结细胞中，许多增殖性cd4+cd25+treg细胞抑制同一淋巴结内的效应细胞的增殖。在肿瘤组织中，cd4+cd25+treg细胞阻止效应t细胞杀死肿瘤细胞。

mdsc通过促进免疫赦免(在不引发炎性免疫应答的情况下耐受抗原的引入的能力)、肿瘤微环境重塑、建立转移前的龛(非癌细胞促进未来转移的场景)以及与肿瘤相互作用以促进分化、侵入和血管生成而在肿瘤生长和转移中发挥作用。骨髓源性抑制细胞在许多人癌症和动物肿瘤模型的血液、淋巴结、骨髓中以及在肿瘤部位处积聚，并且抑制适应性免疫和先天免疫两者。它们显著地具有通过不同机制(主要通过其产生一氧化氮和自由基氧物种的能力)抑制cd8+t细胞抗原特异性反应性的能力，并且其在肿瘤内的存在有利于肿瘤进展。mdsc与促进血管生成、肿瘤细胞侵入和转移有关。mdsc的存在与人癌症(包含乳腺癌和结肠直肠癌)的生存期缩短有关。人mdsc表达如cd11b+和cd33+等标志物，但是通常对hla-dr和谱系特异性抗原(lin)(包含cd3、cd19和cd57)呈阴性。单核mdsc是hla-dr、cd11b+、cd33+和cd14+，并且粒细胞mdsc是hla-dr-、cd11b+、cd33+、cd15+。成熟msdc表达hla-dr。

tnbc肿瘤中的肿瘤相关巨噬细胞(tam)的高水平浸润通常与不良预后相关。体内tam表型取决于位置、肿瘤类型和基质相互作用。表型是在从单核细胞分化期间确定的。m1型tam通常被认为是促炎性的并且促进抗肿瘤免疫应答，而m2型是抗炎性的并且已知具有免疫抑制特性(包含低抗原呈递能力和低细胞毒性功能)。来自人侵入性乳腺癌样品的临床数据示出，tam的丰度与高肿瘤级别、低激素受体状态以及降低的无复发生存期和总生存期相关。m1巨噬细胞和m2巨噬细胞可以基于转录因子和表面分子的差异表达以及它们的细胞因子谱和代谢差异来区分。报告表明巨噬细胞可以通过pd-l1直接抑制t细胞应答。pd-l1在巨噬细胞上显著地表达。

根据体外共培养研究，tnbc细胞系mda-mb-231可以促进单核细胞分化成m2型巨噬细胞。在m1型巨噬细胞中，硫氧还蛋白活化途径被显著下调。已经表明，细胞外trx1可以与巨噬细胞的表面结合并且被内化。trx1促进分化成m2表型(hadri等人,2012)，所述m2表型是与肿瘤促进相关的表型。

中性粒细胞是粒细胞最丰富的类型，也是白细胞最丰富的类型。中性粒细胞是一种吞噬细胞并且通常在血流中发现。在炎症的开始(急性)阶段，特别是由于细菌感染、环境暴露和某些癌症，中性粒细胞是炎症细胞向炎症部位迁移的第一应答者之一。所述炎症细胞按照化学信号(如白介素8(il-8)、c5a、fmlp、白三烯b4和h2o2)通过趋化性迁移穿过血管，然后穿过间质组织。

在优选实施例中，根据本发明的有待治疗的t细胞浸润性癌症在肿瘤微环境中具有高水平的treg(cd4+cd25+foxp3+)(高水平的肿瘤内treg)。

高水平的treg通常意指肿瘤微环境中的treg的频率(或数量或患病率)显著高于肿瘤周围组织(富集肿瘤)中的treg的频率(或数量或患病率)。具体地，对高水平(或高级别)t细胞浸润的讨论可以加上必要的变更而应用于treg。

肿瘤内的一个重要比率是cd8+细胞与treg细胞的比率。除一般的高水平浸润之外，较高水平的treg将意指较低的cd8+/treg比率(例如，与正常组织或肿瘤周围组织相比)，这已被证明对各种肿瘤类型都是有害的。因此，在一些实施例中，治疗具有低cd8+/treg比率的癌症是优选的。

在一些实施例中，t细胞浸润性癌症在肿瘤微环境中具有高水平的th2cd4+t细胞、骨髓源性抑制细胞、m2巨噬细胞和/或中性粒细胞(高水平的肿瘤内treg)。

在一些实施例中，有待治疗的t细胞浸润性癌症具有treg与cd8+t细胞的高(或更高)的比率。

在许多癌症类型中，肿瘤微环境中的高水平的treg已经与恶化的疾病结果相关。因此，特别是在肿瘤微环境内，消耗treg群体或抑制treg活性是令人期望的。在不希望受到理论的束缚的情况下，据信根据本发明的治疗减小treg细胞群的大小(和/或活性)并且例如使得treg与cd8+t细胞的比率降低。据信这会是治疗有益的，因为在肿瘤微环境中会存在更多的抗癌效应t细胞活性。

因此，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过treg的水平的降低表征。如下文所讨论的，treg的水平可以是treg的相对水平或treg的绝对水平(或数量)。通常，treg的水平的降低是肿瘤(或癌症)内或肿瘤微环境(或癌症微环境)中或已经从肿瘤(或癌症)或肿瘤微环境(或癌症微环境)获得的样品(如活检物或细胞悬浮液)中的降低。在一些实施例中，可以对此种样品进行处理(例如，在分析之前)例如以从肿瘤(或癌症)或肿瘤微环境(或癌症微环境)获得细胞悬浮液。

可以基于细胞的标志物谱(例如，细胞表面标志物谱)将细胞分类(或鉴定或指定)为treg。本文在其它地方描述了treg细胞标志物和标志物谱。如果细胞表达cd4、cd25和foxp3(即，对cd4、cd25和foxp3呈阳性)，则可以将所述细胞分类(或鉴定或指定)为treg。换句话说，如果细胞是cd4+、cd25+和foxp3+，则可以将所述细胞分类(或鉴定或指定)为treg。如果细胞表达cd45、cd3、cd4、cd25和foxp3(即，对cd45、cd3、cd4、cd25和foxp3呈阳性)，则可以将所述细胞分类(或鉴定或指定)为treg。换句话说，如果细胞是cd45+、cd3+、cd4+、cd25+和foxp3+，则可以将所述细胞分类(或鉴定或指定)为treg可以通过采用适当的抗体的流式细胞术方法(如本文在实例2中所描述的方法)来评估标志物谱。

例如，当与对照水平相比时，treg的水平的降低可以是任何可测量的降低或减少。优选地，与适当的对照样品或受试者或群体(例如，健康或正常受试者或群体、或来自其的样品、或被治疗的受试者的“基线”水平)中发现的水平相比，所述水平显著降低。更优选地，显著降低的水平在统计学上是显著的，优选地，概率值为<0.05或<0.01。本领域技术人员可以容易地选择适当的对照水平(或对照样品或值)。还可以例如通过参考正常受试者的范围和/或通过参考被治疗的受试者的“基线”水平容易地确定适当的对照“值”，而无需在每次测试中都运行对照“样品”。

对照水平可以对应于在较早时间点处测量到的同一个体受试者或来自所述受试者的样品(例如，肿瘤活检物)中的treg的水平(例如，与所述受试者的“基线”水平(例如，在根据本发明的治疗的开始之前的受试者中的水平)或在治疗方案期间的较早时间点处的水平相比)。这种类型的对照水平(即，来自个体受试者的对照水平)对于本发明的对健康个体或疾病个体中的treg进行连续或定期测量以寻找treg的水平的变化的实施例特别有用。在这个方面，适当的对照水平将是个体自身的基线值、稳定值、零值、先前值或干态值(视情况而定)，而不是一般群体中发现的对照或临界水平。对照水平也可以被称为“正常”水平或“参考”水平。对照水平可以是离散数字或范围。

在一些实施例中，treg的水平的降低是例如与对照水平相比的至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或甚至100％的降低。

treg的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以表达为cd45+细胞群中(例如，如肿瘤活检物等样品中)的treg(例如，如通过表达cd45、cd3、cd4、cd25和foxp3所表征的)的百分比。可替代地来看，treg的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以被视为来自总cd45阳性(cd45+)细胞群内(例如，如肿瘤活检物等样品中)的treg(例如，如通过表达cd45、cd3、cd4、cd25和foxp3所表征的)的亚群的大小，其可以表达为总cd45+细胞的百分比。可替代地来看，treg的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以被视为是treg(例如，如通过表达cd45、cd3、cd4、cd25和foxp3所表征的)的总cd45+细胞群(例如，如肿瘤活检物等样品中)的比例，其可以表达为总cd45+细胞的百分比。

因此，在一些实施例中，treg的水平是treg的相对水平或treg的相对群体大小或treg的相对比例(例如，相对于总cd45+细胞水平或总cd45+群大小)。因此，在一些实施例中，treg的相对水平(或treg的相对群体大小)例如相对于总cd45+细胞水平或总cd45+群大小有所降低。在一些实施例中，treg的绝对数量(例如，在肿瘤或肿瘤微环境内)减少。

在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过cd8+t细胞(或cd8+效应t细胞或cd8+细胞毒性t细胞)和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的提高(优选地，cd8+t细胞的水平的提高)表征。如下文所讨论的，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平可以是cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对水平或cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的绝对水平(或数量)。通常，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的提高是肿瘤或癌症内或肿瘤微环境或癌症微环境中或已经从肿瘤(或癌症)或肿瘤微环境(或癌症微环境)获得的样品(如活检物或细胞悬浮液)中的提高。在一些实施例中，可以对此种样品进行处理(例如，在分析之前)例如以从肿瘤或肿瘤微环境获得细胞悬浮液。

可以基于细胞的标志物谱(例如，细胞表面标志物谱)，通常当然基于cd8的表达将cd8+t细胞分类(或鉴定或指定)为treg。cd8+t细胞标志物谱是本领域已知的(例如，包括cd8+和cd45+的标志物组或包括cd8+和cd45+和cd3+的标志物组)。cd8+效应t细胞的另外的标志物是cd27、cd28、cd45ra和ccr7。因此，cd8+t细胞(cd8+效应t细胞)可以通过表达通常当然除cd8(并且任选地还有cd3)之外的cd27、cd28、cd45ra和ccr7中的一个或多个(或全部)表征。可以通过采用适当的抗体的流式细胞术方法(如本文在实例4中所描述的方法)来评估标志物谱(例如，cd8表达状态)。其它细胞毒性免疫细胞的标志物谱是本领域已知的。

例如，当与对照水平相比时，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的提高(优选地，cd8+t细胞的水平的提高)可以是任何可测量的提高或升高。优选地，与适当的对照样品或受试者或群体(例如，健康或正常受试者或群体、或来自其的样品、或被治疗的受试者的“基线”水平)中发现的水平相比，所述水平显著提高。更优选地，显著提高的水平在统计学上是显著的，优选地，概率值为<0.05或<0.01。本领域技术人员可以容易地选择适当的对照水平(或对照样品或值)。还可以例如通过参考正常受试者的范围和/或通过参考被治疗的受试者的“基线”水平容易地确定适当的对照“值”，而无需在每次测试中都运行对照“样品”。

对照水平可以对应于在较早时间点处测量到的同一个体受试者或来自所述受试者的样品(例如，肿瘤活检物)中的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平(例如，与所述受试者的“基线”水平(例如，在根据本发明的治疗的开始之前的受试者中的水平)或在治疗方案期间的较早时间点处的水平相比)。这种类型的对照水平(即，来自个体受试者的对照水平)对于本发明的对健康个体或疾病个体中的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞进行连续或定期测量以寻找cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的变化的实施例特别有用。在这个方面，适当的对照水平将是个体自身的基线值、稳定值、零值、先前值或干态值(视情况而定)，而不是一般群体中发现的对照或临界水平。对照水平也可以被称为“正常”水平或“参考”水平。对照水平可以是离散数字或范围。

在一些实施例中，找cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的提高(优选地，cd8+t细胞的水平的提高)是例如与对照水平相比的至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％或至少500％(例如，高达10％、高达50％、高达100％、高达200％、高达300％、高达400％或高达500％)的提高。

cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以表达为cd45+细胞群中(例如，如肿瘤活检物等样品中)的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的百分比。可替代地来看，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以被视为来自总cd45阳性(cd45+)细胞群内(例如，如肿瘤活检物等样品中)的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的亚群的大小，其可以表达为总cd45+细胞的百分比。可替代地来看，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)可以被视为是cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的总cd45+细胞群(例如，如肿瘤活检物等样品中)的比例，其可以表达为总cd45+细胞的百分比。

因此，在一些实施例中，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平是cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对水平或cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对群体大小或cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对比例(例如，相对于总cd45+细胞水平或总cd45+群大小)。因此，在一些实施例中，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对水平(或cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的相对群体大小)例如相对于总cd45+细胞水平或总cd45+群大小有所提高。在一些实施例中，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的绝对数量(例如，在肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境内)增加。

在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过treg与cd8+t细胞(或cd8+效应t细胞或cd8+细胞毒性t细胞)和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的降低表征。

可替代地来看，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的降低表征。

因此，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答通过treg的水平相对于cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的降低表征。

优选地，针对癌症的免疫应答通过treg与cd8+t细胞的比率的降低表征。因此，优选地，针对癌症的免疫应答通过treg/cd8+t细胞的比率的降低表征。因此，优选地，针对癌症的免疫应答通过treg的水平相对于cd8+t细胞的水平的降低表征。

相反，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过cd8+t细胞(或cd8+效应t细胞或cd8+细胞毒性t细胞)和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率的提高表征。可替代地来看，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答通过cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞/treg的比率的提高表征。因此，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答通过cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平相对于treg的水平的提高表征。

优选地，针对癌症的免疫应答通过cd8+t细胞与treg的比率的提高表征。因此，优选地，针对癌症的免疫应答通过cd8+t细胞/treg的比率的提高表征。因此，优选地，针对癌症的免疫应答通过cd8+t细胞的水平相对于treg的水平的提高表征。

通常，treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率(treg/cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞)的降低是肿瘤或癌症内或肿瘤微环境或癌症微环境中或已经从肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境获得的样品(如活检物或细胞悬浮液)中的这种比率的降低。在一些实施例中，可以对此种样品进行处理(例如，在分析之前)例如以从肿瘤或癌症或肿瘤微环境或癌症微环境获得细胞悬浮液。

例如，当与对照比率相比时，treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的降低可以是任何可测量的降低或减少。优选地，与适当的对照样品或受试者或群体(例如，健康或正常受试者或群体、或来自其的样品、或被治疗的受试者的“基线”比率)中发现的比率相比，所述比率显著降低。更优选地，显著降低的比率在统计学上是显著的，优选地，概率值为<0.05或<0.01。本领域技术人员可以容易地选择适当的对照比率(或对照样品或值)。还可以例如通过参考正常受试者的范围和/或通过参考被治疗的受试者的“基线”比率容易地确定适当的对照“值”，而无需在每次测试中都运行对照“样品”。

对照比率可以对应于在较早时间点处测量到的同一个体受试者或来自所述受试者的样品(例如，肿瘤活检物)中的treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率(例如，与所述受试者的“基线”比率(例如，在根据本发明的治疗的开始之前的受试者中的比率)或在治疗方案期间的较早时间点处的比率相比)。这种类型的对照比率(即，来自个体受试者的对照比率)对于本发明的对健康个体或疾病个体中的这种比率进行连续或定期测量以寻找treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的变化的实施例特别有用。在这个方面，适当的对照比率将是个体自身的基线值、稳定值、零值、先前值或干态值(视情况而定)，而不是一般群体中发现的对照或临界比率。对照比率也可以被称为“正常”比率或“参考”比率。对照比率是离散数字或范围。

在一些实施例中，treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的降低可以是例如与对照比率相比的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍(例如，1.5到5倍或1.5到10倍或2到5倍或2到10倍)的降低。仅通过举例的方式，如果treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的对照比率为1比1(1:1)，则treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率降低2倍将使得treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率为1比2(1:2)。

上文关于treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率“降低”或“减小”的讨论可以反过来(加上必要的变更)适用于cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率的“提高”。

因此，在一些实施例中，cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率的提高可以是例如与对照比率相比的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍(例如，1.5到5倍或1.5到10倍或2到5倍或2到10倍)的提高。仅通过举例的方式，如果cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的对照比率为1比1(1:1)，则cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率提高2倍将使得cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率为2比1(2:1)。

在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过cd8+免疫细胞(例如，cd45+cd8+免疫细胞)的水平的提高表征。上文关于cd8+t细胞的水平的提高的讨论可以加上必要的变更而适用于cd8+免疫细胞的水平的提高。

在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过treg与cd8+免疫细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的降低表征。相反，在一些实施例中，针对癌症的免疫应答(或抗癌应答或抗癌免疫应答)通过cd8+免疫细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率的提高表征。上文关于涉及cd8+t细胞的比率的讨论可以加上必要的变更而适用于涉及cd8+免疫细胞的比率。

treg涉及对患有多种不同恶性肿瘤(包含卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌和食道癌)的患者的免疫抑制进行介导。许多肿瘤类型的被treg浸润，并且来自肿瘤微环境的treg细胞的消耗可以增强或恢复抗肿瘤免疫。treg在肿瘤部位处积聚的原因之一可能是由于肿瘤细胞和基质在肿瘤微环境中产生趋化因子，从而介导treg流入肿瘤组织内。此外，在存在tgf-β或treg的增殖增加的情况下，foxp3-细胞转化成foxp3+细胞可以导致其扩增。据报道，foxp3+在肿瘤浸润淋巴细胞(til)群中的存在与多种癌症类型(包含前列腺癌、肺癌、肝细胞癌和肾细胞癌)的不良临床预后相关。foxp3+treg的抑制功能可以通过不同因素(如helios、ctla-4和pd-1)的存在来调节。

对25项已公开的研究进行了荟萃分析，这些研究包括超过22000名患者，示出免疫浸润与tnbc的总生存期(os)相关。表达foxp3的淋巴细胞与较差的无疾病生存期和总生存期相关(mao等人2016)。

在神经胶质瘤微环境中，抗肿瘤效应t细胞可以被treg严重抑制和/或压倒。在神经胶质瘤患者组织中，肿瘤浸润cd8+t细胞在表型上为cd8+和cd25-，这指示这些效应细胞没有活化或增殖。在神经胶质瘤内，cd4+t细胞数量多于cd8+t细胞，并且如foxp3的阳性细胞内染色所证明的，大多数cd4+t细胞是treg。在另一项研究中，仅在神经胶质瘤中发现了cd4+cd25+foxp3+t细胞，而对照脑组织标本中不存在treg(humphries等人2010)。神经胶质瘤患者的全身性treg的部分增加，这对应于降低的t细胞效应子活性以及从促炎性th1细胞因子到抗炎性th2环境的转移。除了全身性treg增加之外，肿瘤内treg数量在低级别和高级别星形细胞瘤中也显著增加。免疫检查点蛋白ctla-4的表达在携带神经胶质瘤的小鼠中的treg上增加。用抗ctla-4mab治疗小鼠会诱导从foxp3+treg细胞密集群到产生促炎性ifn-γ的cd4+细胞密集群的肿瘤内转移(gedeon等人2014)。

一些卵巢肿瘤会引起免疫应答，这可以通过肿瘤浸润淋巴细胞(til)进行评估。肿瘤内til和基质til两者的水平提高与较好预后相关。还已经示出免疫浸润富集于卵巢癌的一些分子亚型中，并且分子亚型显示出独特的生存特征。在总生存期较低的高风险亚型中鉴定出肿瘤内cd3+t细胞数量的数量较低(tothill等人2008)。treg存在于卵巢肿瘤组织中并且可以具有免疫病理学作用。肿瘤treg细胞的数量的增加是卵巢癌的死亡风险增加和存活期降低的重要预测因子。根据一项研究，人肿瘤treg细胞抑制了肿瘤特异性t细胞免疫并且促成了人肿瘤在体内的生长。人treg细胞优先移动到肿瘤和腹水并在其中积聚，但在晚期癌症阶段很少进入引流淋巴结。在患有卵巢癌的个体中，cd4+cd25+t细胞积聚在恶性腹水和肿瘤组织中，而在来自未患有癌症的五个对照受试者的正常卵巢组织中未检测到cd4+cd25+t细胞。在肿瘤块中，所有(100％)肿瘤浸润foxp3+细胞是cd25+t细胞，并且90％的cd25+t细胞是foxp3+细胞。80％的foxp3+cd25+细胞与cd8+t细胞紧密接触。在体内将treg细胞运输到肿瘤是通过源自于肿瘤组织、肿瘤细胞和巨噬细胞的ccl22信号传导介导的。treg通过抑制il-12和ifn-γ的产生来抑制肿瘤浸润t细胞的功能(curiel等人2004)。

crc(结肠直肠癌)主要是炎症相关癌症，并且treg在肿瘤微环境(tme)中扩增并且在crc的发病机制中发挥重要作用。结肠直肠肿瘤组织内存在cd45+cd3+细胞的大量积聚，其中大多数为cd4⁺。这表明了浸润cd4+t细胞在crc患者中的促致瘤性作用。这些肿瘤浸润cd4+t细胞表达高cd25，这指示存在treg。多项研究证实，crc患者中的cd4⁺cd25⁺foxp3⁺treg能够抑制肿瘤相关的抗原特异性免疫应答，并且treg富集于患有crc的患者中(clarke等人2006)。研究示出，与正常组织和外周血相比，cd4+foxp3+helios+treg在crc患者的tme中扩增，并且cd4+foxp3+helios+treg亚群表达指示有效的免疫抑制潜力的更高水平的免疫检查点受体。在crc肿瘤组织中，与foxp3-helios+treg和foxp3+helios-treg相比，foxp3+helios+treg的频率升高。helios示出是t细胞活化和增殖的标志物，并且其表达对于稳定的treg抑制活性至关重要。helios也是表达免疫抑制分子garp/潜伏期相关肽(lap)的活化的treg的标志物。

与健康对照相比，胃癌患者不仅在组织中而且在血液中具有更高数量的treg。肿瘤已经去除的胃癌患者的cd4+cd25高t细胞的水平显著降低。胃肿瘤粘膜具有提高的treg与cd8比率。示出了胃肿瘤粘膜中的90％的cd4+cd25高细胞表达高水平的foxp3并且这种细胞群是抑制性的(kindlund等人2017)。cd4+cd25+cd127低/-调节性t细胞表达foxp3，并且抑制效应t细胞增殖并且促成胃癌进展(shen等人2009)。

炎症似乎在pdac(胰腺导管腺癌)的发病机制中起作用，并且在慢性炎症的背景下不断发展的免疫应答可能会促进随后的侵入和转移。treg细胞浸润是胰腺导管腺癌的突出特征。pdac肿瘤内cd8+t细胞表达高水平的免疫检查点分子编程的细胞死亡1，从而提供了另外机制，通过所述机制，t细胞活化可以由肿瘤细胞或免疫抑制性髓样细胞来调节(pillarisetty2014)。在pdac中，treg细胞在肿瘤微环境中的积聚在疾病的侵入前阶段期间发生并且与不良预后和降低的存活期相关。抑制性免疫细胞的早期积聚在抗肿瘤细胞免疫之前并且胜过所述抗肿瘤细胞免疫。在鼠模型中，treg细胞消融足以在早期胰腺发展和晚期胰腺发展中诱导有效的抗肿瘤免疫应答。treg细胞通过抑制cd8⁺t细胞活化所需的共刺激配体的表达与肿瘤相关的cd11c+树突状细胞(dc)进行广泛的相互作用并且限制其免疫原性功能。treg细胞限制肿瘤相关的cd11c+dc的扩增以及其向t细胞提供共刺激的能力。神经毡蛋白-1在胰腺肿瘤进展的所有阶段均在肿瘤内treg细胞中大量表达。胰腺tme的免疫耐受性可以部分地由前馈机制来驱动，所述前馈机制涉及dc与treg细胞之间的相互加强其免疫抑制活性的双向相互作用(jang等人2017)。

全面的荟萃分析发现hcc(肝癌)肿瘤微环境中的treg的频率显著高于肿瘤周围组织和来自健康肝脏的活检标本中的treg的频率，并且treg与hcc的发病机制之间存在明显关联(zhao等人2014)。hcc患者的cd4+cd25+foxp3+treg细胞的外周血水平显著高于对照组的cd4+cd25+foxp3+treg细胞的外周血水平，并且晚期(iii-iv期)hcc患者的外周血中的cd4+cd25+foxp3+treg细胞的水平高于早期(i-ii期)hcc患者的外周血中的cd4+cd25+foxp3+treg细胞的水平，这表明cd4+cd25+treg细胞的存在与肿瘤进展密切相关(lan等人2017)。

在一项对超过86000名患者进行的29项试验的荟萃分析中，浸润肿瘤的或在非小细胞肺癌(nsclc)标本的肿瘤基质中的高水平的表达cd8的细胞与较好os相关，而肿瘤基质中的表达foxp3的treg细胞与较差的无进展生存期和总生存期相关(geng等人2015)。

浸润免疫细胞对黑色素瘤的预后影响大多呈阳性。高til水平通常与提高的总生存期相关。较高密度的cd8+t细胞与生存期最佳相关，较高密度的cd45+白细胞、t细胞和b细胞也与提高的生存期相关。淋巴结中的高foxp3表达预示iii期黑色素瘤患者的较差的无进展生存期，但并不影响总生存期(knol等人2011)。gyorki等人报道了进行性肿瘤中cd4+foxp3+t调节性细胞比例提高，并且与血液相比，肿瘤中的cd8+/cd4+foxp3+比率降低2.8倍，这表明免疫逃逸的可能机制(gyorki等人2013)。高百分比的肿瘤内神经毡蛋白-1阳性(nrp1)treg与黑色素瘤的不良预后相关。使用可以在竞争环境中对nrp1缺陷型(nrp1^–/–)treg和野生型(nrp1^+/+)treg进行评估的黑色素瘤小鼠模型，发现高比例的肿瘤内nrp1^–/–treg会产生干扰素-γ(ifn-γ)，这会驱动周围野生型treg的脆性，增强抗肿瘤免疫并且促进肿瘤清除(overacre-delgoffe等人2017)。

高百分比的肿瘤内神经毡蛋白-1阳性treg与头颈部鳞状细胞癌的不良预后相关。为了维持肿瘤内treg稳定性和功能，需要神经毡蛋白-1(nrp1)(tgf-β1的受体)(overacre-delgoffe等人2017)。

根据本发明的进行治疗的癌症表达trxr(例如，trxr1)和trx(例如，trx1)，并且优选地，表达高(或提高)水平的trxr和trx。trxr和trx在许多癌症类型中表达并且实际上可以在许多癌症类型中过表达(例如，在脑癌和乳腺癌(如转移性乳腺癌)中)。根据本发明的进行治疗的癌症可以另外地(或可替代地)过表达(或具有更高水平的)其它氧化还原活性蛋白(如pdi(蛋白质二硫键异构酶))和过氧化物(作为非限制性实例)。因此，在一些实施例中，根据本发明的进行治疗的癌症可以过表达硫氧还蛋白还原酶(trxr)和/或硫氧还蛋白和/或pdi。在一些实施例中，根据本发明的用于治疗的癌症可以过表达硫氧还蛋白还原酶(trxr)和硫氧还蛋白和pdi。trxr和/或trx(和/或其它氧化还原活性蛋白)的水平可以由技术人员通过任何适当的方式进行评估。

trxr和trx的高水平(或过表达或提高的水平)通常意指相对于癌症(或肿瘤)周围组织中的或正常组织中的trxr和trx的水平为高(或过表达的或提高的)(即，相比更高，优选地，相比显著更高)(例如，如果所讨论的癌症是乳腺癌，则trxr或trx的高水平(或过表达的水平)可以是比正常或健康乳腺组织高的水平)。

根据本发明的有待治疗的优选癌症是(i)例如如上文所讨论的t细胞浸润性(优选地，高度t细胞浸润性)并且(ii)例如如上文所讨论的表达高水平(或过表达或具有提高的水平)的trxr和trx(并且可以另外地表达高水平的、或过表达或具有更高水平的一种或多种下游ros活性蛋白)。

可替代地，根据本发明的有待治疗的癌症具有t细胞浸润到肿瘤组织的高容量并且可以在血浆中显示出高cd8+/treg比率。肿瘤中的trxr/trx水平高的受试者可以根据从肿瘤组织中取得活检标本或/和可替代地通过测量trxr和trx的血浆水平来鉴定。有时，将sectrap抑制剂与免疫刺激剂组合使用可能是有利的，并且有时，将sectrap抑制剂与可以另外地降低肿瘤微环境中的细胞外trx水平的trx抗体组合使用可能是有利。

发明人已经发现转移性癌症和晚期癌症经常过表达trxr和trx并且通常是高度免疫细胞浸润性。因此，在一些实施例中，治疗转移性癌症或晚期癌症是优选的。

根据本发明的进行治疗的优选癌症包含乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、胰腺癌、结肠癌、头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌)、前列腺癌、脑肿瘤(例如，星形细胞脑肿瘤)、黑色素瘤、卵巢癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、肺癌、胃癌、肾癌、肝细胞癌、食道癌、急性早幼粒细胞白血病(apl)和脑癌(例如，神经胶质瘤(如恶性神经胶质瘤))。

优选地，癌症是实体(或大块)瘤。因此，在一些实施例中，癌症不是血液癌(例如，不是白血病)。

在优选实施例中，有待治疗的癌症是乳腺癌(优选地，三阴性乳腺癌)或脑癌(优选地，恶性神经胶质瘤)。

在特别优选实施例中，有待治疗的癌症是乳腺癌，具体地，三阴性乳腺癌。在一些实施例中，三阴性乳腺癌是浸润性导管癌。

在优选实施例中，有待治疗的癌症是脑癌。

在一些实施例中，有待治疗的癌症是转移性癌症。在一些实施例中，癌症是进行性癌症或晚期癌症。具体地，高度表达(或过表达)trxr和trx并且是t细胞浸润性(优选地，高度t细胞浸润性)的转移性癌症、进行性癌症或晚期癌症是优选的。

在一些实施例中，有待治疗的癌症选自由以下组成(或包括以下)的组：

软组织癌，如肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；

肺癌，如支气管肺癌(例如鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡(或支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤错构瘤、间皮瘤，包含非小细胞肺癌；

胃肠道癌：如食道癌(例如，鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(例如，癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌(例如，导管腺癌、胰岛瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤)、小肠癌(例如，腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(例如，腺癌、肾小管腺瘤、绒毛腺瘤、绒毛状腺瘤、平滑肌瘤)；

泌尿生殖道癌症，肾癌(例如，腺癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道癌(例如，鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(例如，腺癌、肉瘤)、睾丸癌(例如，精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌性细胞、畸胎癌、绒膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；

肝癌，如肝细胞瘤(例如，肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；

骨癌，如骨原性肉瘤(例如，骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(例如，网状细胞肉瘤)、多发骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(例如，骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；

头部和/或神经系统的癌症，头骨癌(例如，骨瘤、血管瘤、肉芽肿瘤、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜癌(例如，脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质过多)、脑癌(例如，星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓癌(例如，脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)；

妇科癌，如子宫癌(例如，子宫内膜癌)、宫颈癌(例如，宫颈癌、前肿瘤子宫颈非典型增生)、卵巢癌(例如，卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌症)、粒膜细胞肿瘤、塞-莱二氏细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴癌(例如，鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道癌(例如，透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)；

血液癌，如血液癌和骨髓癌(例如，骨髓性白血病(急性和慢性)、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤(恶性淋巴瘤)；

皮肤癌，如恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、角化棘皮瘤、发育不良性痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤；神经纤维瘤病和肾上腺；和

神经母细胞瘤。

可以被提及的更多特定的癌症包含与本文所提供的实例中使用的细胞系相对应的那些癌症。

可以被提及的更多特定的癌症包含：

头颈癌(如咽喉癌，例如，咽鳞状细胞癌)；

结肠癌(如结肠直肠癌)；

皮肤癌(如表皮样(皮肤)癌)；

胃肠道癌症(如胰腺癌，例如，胰腺导管癌)；

乳腺癌(如乳腺癌，例如，转移性乳腺癌)；

肺癌(如癌)；和

血液癌症(如白血病，例如，急性单核细胞白血病)。

在一些实施例中，癌症选自胰腺癌、卵巢癌和结肠直肠癌。

例如，在某些实施例中，癌症选自结肠直肠癌(包含处理ras突变的那些癌症)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)和神经胶质瘤。

在其它实施例中，癌症选自非小细胞肺癌、卵巢癌、转移性乳腺癌、胰腺癌、肝胆癌(包含肝细胞癌、胆管癌和胆管细胞癌)和胃癌。

在另外的实施例中，癌症选自结肠直肠癌(包含ras突变)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、肝胆癌(包含肝细胞癌、胆管癌和胆管细胞癌)、胃癌、睾丸癌和头颈部鳞状细胞癌。

在本发明的某些实施例中，癌症选自白血病(包含急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病和慢性淋巴性白血病)、淋巴瘤(包含套细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)和前列腺癌。

根据本发明的被治疗的受试者优选地是人。还设想了兽医治疗(例如，对牛、绵羊、猪、狗、猫、马进行治疗)。通常，当然，根据本发明的受试者是患有癌症的受试者。本文在其它地方描述了优选癌症类型。

在优选实施例中，根据本发明的被治疗的受试者具有活性(或功能性)免疫系统，更优选地，完全活性(或完全功能性)免疫系统。因此，优选地，根据本发明的被治疗的受试者能够引起有效的免疫应答。因此，优选地，因为受试者可能无法引起有效的免疫应答，所以此类受试者通常并且优选地不暴露于(并且优选地尚未暴露于)任何免疫抑制剂。因此，优选地，受试者通常并且优选地不服用(并且优选地尚未服用)免疫抑制剂。优选地，受试者尚未以其它方式被诊断为具有受损的免疫系统。因此，优选受试者不具有受损的免疫系统(或不是免疫缺陷的)，因为据信此类受试者将无法引起有效的免疫应答。

在一些实施例中，受试者是对其没有替代性治疗选择(例如，没有有效的替代性治疗选择)的受试者。

术语“治疗”或“疗法”包含使得患者的健康或病状或其所患有的癌症的症状改善的任何治疗或疗法。“治疗”不限于治愈性疗法(例如，使得癌细胞或肿瘤消除或从患者转移的那些疗法)，但是包含对癌症或患者具有有益效果(例如，肿瘤消退或减少、转移潜能降低、总生存期提高、生命加长或延长或缓解、诱导缓解、疾病进展或疾病进展速率或肿瘤发展的减慢或降低、生活质量的主观改善、疼痛或与疾病有关的其它症状减轻、食欲改善、恶心减轻或癌症的任何症状缓解)的任何疗法。

在根据本发明的有待治疗的优选受试者中，受试者的trx的血清水平通常提高(例如，与对照水平相比)。在正常个体中，trx的血清水平通常在10ng到80ng/ml(0.8-6.6nm)的范围内。在优选实施例中，根据本发明的有待治疗的受试者具有提高的血清trx水平，例如高于80ng/ml(例如，≥100ng/ml或≥120ng/ml)。例如当与对照水平相比时，trx水平的“提高”可以是任何可测量的提高或升高(例如，提高的水平可以是高于80ng/ml或≥100ng/ml或≥120ng/ml的血清trx水平)。优选地，与适当的对照样品或受试者(例如，健康或正常受试者或来自其的样品)中发现的水平相比，所述水平显著提高。更优选地，显著提高的水平在统计学上是显著的，优选地，概率值为<0.05或<0.01。本领域技术人员可以容易地选择适当的对照水平(或对照样品或值)。还可以例如通过参考正常受试者的范围容易地确定适当的对照“值”，而无需在每次测试中都运行对照“样品”。

如本文在其它地方所讨论的，本发明人发现sectrap发泡剂可以利用受试者自身的免疫系统来靶向癌症。这个发现开辟了预期地鉴定可以受益于用根据本发明的sectrap形成剂进行的治疗的受试者(患者)的有用可能性。考虑用于癌症患者的治疗选择、现已知晓sectrap形成剂会引发抗癌免疫应答的临床医师现在可以预期性地和特定地选择最有可能受益于治疗的那些患者。在这个方面，在一些实施例中，临床医师可以选择治疗已知具有活性(例如，完全活性)免疫系统的受试者。

临床医师还可以选择治疗已知(或疑似)患有t细胞浸润性肿瘤并且且已知表达trxr/trx(例如，高水平的trxr和/或trx或过表达水平的trxr和/或trx，或例如，高水平的trxr和/或trx和其它氧化还原蛋白或过表达水平的trxr和/或trx和其它氧化还原蛋白)的那些患者。临床医师还可以选择治疗已知(或疑似)患有t细胞浸润性肿瘤并且且已知表达(或过表达)其它氧化还原蛋白和/或基因(例如，pdi(蛋白质二硫键异构酶)，其是trxr和/或过氧化物的底物)的那些患者。因此，在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者(或受试者)可以过表达trxr和/或trx和/或pdi。在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者可以过表达trxr和trx和pdi。可以在基于血液或基于活检物的测定(或诊断)中(例如，在血液样品或血清样品中)对trxr和/或trx(或其它氧化还原蛋白和/或基因)的水平进行评估。在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者(受试者)具有过表达水平的trxr和/或trx和/或pdi，所述水平是如在血液样品或血清样品中所确定的。在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者(或受试者)具有过表达水平的trxr和trx和pdi，所述水平是如在血液样品或血清样品中所确定的。

在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者(受试者)在血液或血清中具有过表达水平的trxr和/或trx和/或pdi。在一些实施例中，有待治疗的患有癌症(例如，t细胞浸润性肿瘤)的患者(或受试者)在血液或血清中具有过表达水平的trxr和trx和pdi。

可以与任何适当的对照(例如，对照水平或对照样品或活检物)相比来确定过表达(或提高的水平或更高水平)。例如，对照水平可以是来自健康受试者(例如，未患有癌症的受试者)的样品(例如，血液样品或血清样品或组织样品或活检物)中的水平。本领域技术人员可以容易地选择适当的对照水平(或对照样品或值)。还可以例如通过参考正常受试者的范围容易地确定适当的对照“值”，而无需在每次测试中都运行对照“样品”。

优选地，过表达(或过表达水平)、更高水平或提高的水平是显着的，优选地，在统计学上是显着的，优选地，概率值为<0.05或<0.01。在一些实施例中，提高的水平可以是至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％或至少100％的提高(例如，与对照水平相比)。

因此，鉴于支持本发明的发现，当决定是否用sectrap形成剂治疗给定的癌症受试者(患者)时，临床医师可以做出更加深思熟虑的选择。在一些实施例中，本发明的方法和用途可以包括选择有待用sectrap形成剂治疗的癌症患者的初始步骤，其中所述步骤包括确定癌症是否是免疫细胞浸润性的(例如，t细胞浸润性的)(或浸润程度)。被选择进行治疗的受试者可以是患有根据本发明的免疫细胞浸润性癌症(例如，t细胞浸润性癌症)(例如，高度免疫细胞浸润性癌症或高度t细胞浸润性癌症)的受试者。在一些实施例中，本发明的方法和用途可以包括选择有待用sectrap形成剂治疗的癌症患者的初始步骤，其中所述步骤包括确定癌症是否是t细胞浸润性的(或浸润程度)以及癌症中的trxr/trx表达水平(和/或例如如本文在其它地方所描述的氧化还原蛋白和/或基因的水平)。被选择进行治疗的受试者可以是患有根据本发明的t细胞浸润性癌症(例如，高度t细胞浸润性癌症)并且表达(优选地，高度表达或过表达)trxr和/或trx的受试者。

在一些实施例中，根据本发明的治疗可以用于处于癌症复发或再发或转移风险中的受试者。因此，可替代地来看，在一些实施例中，sectrap形成剂用于预防癌症复发或再发或转移。进一步可替代地来看，在一些实施例中，sectrap形成剂保护(例如，提供长期保护)避免再发和/或转移的癌症。因此，sectrap形成剂可以提供抗癌或抗肿瘤免疫，例如提供长期保护避免癌症复发、再发和/或转移。

在一个方面，本发明提供了一种筛选(例如，诊断或预后)癌症(包含预后筛选和预测结果生物标志物筛选)的方法，所述方法包括确定trxr和/或trx(优选地，trxr和/或trx(例如，还原形式的trx或总trx))的水平(和/或活性)以及任选地确定已经从受试者获得的样品(例如，血液样品或活检物)中的下游氧化还原活性蛋白的水平。通常，所述样品中的trxr和/或trx(优选地，trxr和trx)与对照水平或活性(例如，正常或健康组织中的水平或活性)相比提高的水平(和/或活性)指示所述受试者中的癌症。

在一些实施例中，筛选是预后筛选或预测结果生物标志物筛选。

此种方法可以用于确定受试者的癌症或疾病进展的临床严重程度。在此类方法中，样品中的trxr和/或trx(优选地，trxr和trx)的水平(和/或活性)示出与癌症的严重程度(或疾病的进展或预后)的关联。因此，trxr和/或trx(优选地，trxr和trx(例如，还原形式的trx))的水平(和/或活性)可以指示具有高(或更高)水平或活性的癌症的严重程度(或预后)(例如，与适当的对照样品相比)，通常指示更严重的疾病(或不良或较差预后)。在一些实施例中，trxr和/或trx(优选trxr和trx)的水平(或活性)与对照相比增加得越多，则更严重的癌症形式的可能性越大(例如，更具侵袭性的癌症形式的可能性越大)。可以使用任何适当的对照(或对照样品)，并且技术人员将能够选择适当的对照(例如，在已知严重程度预后的癌症中的对照水平或活性)。因此，在一些实施例中，本发明的方法可以用于选择进行疗法的患者。例如，例如基于trxr和/或trx(和/或另外的氧化还原蛋白(包含pdi))的水平被鉴定为患有严重的癌症形式(或不良预后)的患者可以被选择用根据本发明的sectrap形成剂进行治疗。因此，用于筛选(例如，用于诊断或预后或用于确定癌症的临床严重程度或疾病进展)的方法可以进一步包括用sectrap形成剂治疗受试者的步骤。

因此，trxr/trx可以用作疾病进展的生物标志物并且通常以各种癌症形式在肿瘤和血液中升高。可以使用例如mrna表达分析、ihc、elisa和酶法测定在肿瘤组织和血液中确定trxr和trx。

蛋白质二硫键异构酶(pdi)是可以通过trxr和经还原的trx还原的含硫醇蛋白质，其在各种癌症类型(包含肾肿瘤、肺肿瘤、脑肿瘤、卵巢肿瘤、黑色素瘤、前列腺肿瘤和雄性生殖细胞肿瘤)中被高度上调。pdi可以与trxr/trx一起用作生物标志物。pdi可以用作癌症(包含乳腺癌、神经胶质细胞癌和结肠直肠癌)的生物标志物。

对trxr和/或trx(优选地，trxr和trx)的水平(和/或pdi和/或另外的氧化还原蛋白的水平或活性)的连续(定期)测量也可以用于监测癌症的严重程度以便寻找随时间的变化水平。在亚临床疾病的环境中(即，在“警惕等待”(也被称为“主动监视”)的环境中)以及在治疗或手术之前(例如，在开始药物疗法之前)或在治疗期间或之后观察改变的水平(视情况而提高或降低)也可以用于指导和监测疗法以评价治疗的效果并且寻找疗法失败的迹象。

如上文所提到的，根据本发明，除细胞毒性活性之外，sectrap形成剂还具有免疫刺激活性，从而使得被治疗的受试者产生(或刺激或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。换句话说，它们可以(通过形成sectrap)引发受试者的抗癌免疫应答。

抗癌免疫应答的存在或发生(或化合物引发抗癌免疫应答的能力)可以通过任何适当的方式来确定并且本领域技术人员熟悉这些方式。例如，可以通过向免疫缺陷动物(例如，小鼠)癌症模型和免疫活性动物(例如，小鼠)癌症模型施用化合物来针对给定的化合物是否引发(或引起)抗癌免疫应答对其进行测试，其中免疫活性模型中的相对于免疫缺陷模型有所改善(或增加)的抗癌活性指示化合物的抗癌免疫应答(或免疫刺激活性)。在一些实施例中，抗癌活性可以表达为％tgi(肿瘤生长抑制)。％tgi计算如下：1-(被治疗的动物的中值肿瘤体积/媒剂对照的中值肿瘤体积)×100。在一些实施例中，化合物在免疫活性动物(例如，小鼠)癌症模型中产生的％tgi比其在免疫缺陷动物(例如，小鼠)癌症模型中产生的％tgi高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、220％、240％、260％、280％、300％、350％、400％、450％或500％，例如高200％、300％、400％、500％或1000％或更多。

众所周知，免疫系统可以自然地或在治疗干预之后识别并且应答肿瘤细胞。对肿瘤的免疫应答(抗癌免疫应答)已经得到充分研究并且通常通过被称为癌症-免疫周期的逐步程序进行了说明(chen和mellman2013,《免疫(immunity)》,39(1),1-10)。已经提出，为了产生有效的抗肿瘤免疫，癌症-免疫周期必须发生。所述周期包括以下步骤：1)肿瘤细胞释放肿瘤抗原；2)将抗原呈递给免疫系统；3)t细胞引发和活化；4)将t细胞运输到肿瘤部位；5)由t细胞浸润肿瘤；6)通过t细胞识别肿瘤细胞；7)通过t细胞杀死肿瘤细胞。通常，所述周期是肿瘤部位处持续进行的过程，并且持续直到肿瘤被破坏或肿瘤成功逃避免疫系统。逃避机制包含逃避t细胞识别，干扰t细胞运输、代谢和功能，诱导对t细胞杀伤的抗性以及使t细胞凋亡。利用(或刺激)免疫系统对抗肿瘤组织的治疗剂的效应可以取决于若干因素。这些因素包含肿瘤微环境(tme)中的免疫浸润相对于肿瘤细胞的水平、促致瘤性免疫亚群与抗致瘤性免疫亚群的比率以及治疗靶标在存在于肿瘤中的各种亚型之上的表达水平。

抗癌免疫应答可以通过t细胞浸润的癌症(或肿瘤)表征或在其中发生(例如，如本文在其它地方所描述的)。

在另一个方面(或在某些实施例中)，本发明提供了一种用于治疗受试者的癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂使得所述受试者产生(或增加)肿瘤浸润t细胞的数量和针对所述癌症的免疫应答。这从而提供了治疗益处。

在又另一个方面(或在某些实施例中)，本发明提供了一种用于治疗在血浆中具有例如较高的cd8+(细胞毒性t细胞)与调节性t细胞的比率的受试者的癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生针对所述癌症的免疫应答。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的t细胞浸润性癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂与被治疗的所述受试者的免疫系统一起工作或协同工作，以便产生或增强抗癌应答(具体地，临床上有益的抗癌应答)。

在本发明的一些优选实施例中，所述sectrap形成剂用作唯一活性剂(治疗方案中的唯一活性剂)。因此，在一些优选实施例中，所述治疗是单一疗法。单一疗法是指使用单个药物来治疗疾病或病状(在这种情况下为t细胞浸润性癌症)。因此，在一些优选实施例中，所述sectrap形成剂单独使用。“唯一活性剂”(或唯一活性成分)是指具有治疗活性(或生物活性)的唯一药剂或成分。因此，与被治疗的疾病无关的组分(如防腐剂或赋形剂或药剂)均不被视为活性剂。

特别优选地，根据本发明的癌症治疗是在不存在免疫抑制剂(不存在抑制(suppresse/inhibit)被治疗的受试者产生免疫应答的能力的试剂)的情况下进行的。换句话说，优选地，所述治疗方案不包含免疫抑制剂。

如上文所提到的，在一些实施例中，sectrap形成剂可以用作癌症治疗方案中的唯一活性剂(如本文在其它地方所讨论的)。然而，在一些实施例中，所述sectrap形成剂与一种或多种其它(另外的)活性剂组合。例如，在一些实施例中，根据本发明的癌症疗法可以通过施用免疫刺激剂(刺激或增强受试者的免疫系统或免疫应答的药剂)表征。

因此，在一个方面，本发明提供了：

一种组合，其具有：

(i)硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂；以及

(ii)免疫刺激剂，

所述组合用于治疗受试者的癌症。

对于此种组合治疗，有待治疗的癌症不一定是t细胞浸润性癌症，尽管在一些实施例中，t细胞浸润性癌症的治疗是优选的。免疫刺激剂(immunostimulatoryagent/immunostimulant)可以将治疗上有用的t细胞(例如，细胞毒性t细胞)刺激和/或募集到癌组织，并且因此可能没有必要使被治疗的癌症在组合治疗之前已经被t细胞浸润。

一般而言，免疫刺激剂可以与sectrap形成剂基本上同时施用于受试者，如通过单个药物组合物或通过紧密一起(在同一或类似的时间)施用的两种药物组合物。可替代地，免疫刺激剂可以在施用sectrap形成剂之前或之后的时间施用于受试者。如本文所使用的，“在之前或之后的时间”意指“交错的”，使得免疫刺激剂是在与施用sectrap形成剂不同的时间施用于受试者的。通常，两种药剂可以在有效间隔开的时间施用，以允许两种药剂发挥其相应的治疗效果，即，它们以“生物有效的时间间隔”施用。

在一些优选实施例中，所述免疫刺激剂是直接或间接靶向t细胞并且优选地刺激(或促成)t细胞免疫应答的药剂。

在一些实施例中，所述免疫刺激剂是t细胞激动剂，例如ox-40。

在一些优选实施例中，所述免疫刺激剂是检查点抑制剂(或免疫检查点抑制剂)。检查点抑制剂是一类众所周知的抗癌剂，其可以例如在肿瘤微环境中促进免疫活性。检查点抑制剂是阻断(或抑制)某些类型的免疫系统细胞(如t细胞)或某些癌细胞上的某些蛋白质的一种药物。这些蛋白质通常帮助抑制免疫应答并且可以帮助防止t细胞杀死癌细胞。当这些蛋白质被检查点抑制剂阻断(或抑制)时，免疫系统可以从抑制状态释放并且t细胞能够更好地杀死癌细胞。考虑到根据本发明的所使用的sectrap形成剂可以诱导抗癌免疫应答，为了使这种效应最大化，重要的是被治疗的受试者能够产生免疫应答(具有活性免疫系统)。因此，与免疫刺激剂(例如，检查点抑制剂)进行组合治疗将是有益的，因为它们可以促进免疫活性。

在一些优选实施例中，所述检查点抑制剂是(或包括)抗体，例如，与pd-l1、pd-1、ctla-4、tim-3或lag-3结合的抗体(例如，单克隆抗体)或其抗原结合片段。在特别优选实施例中，所述检查点抑制剂是(或包括)与pd-l1结合的抗体(例如，单克隆抗体)。在另一个优选实施例中，所述检查点抑制剂是(或包括)与pd-1结合的抗体(例如，单克隆抗体)。因此，在一些优选实施例中，所述检查点抑制剂是抗pd-l1抗体或抗pd-1抗体。在一些优选实施例中，所述抗pd-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)。因此，在一些优选实施例中，本发明提供了一种组合，其具有：(i)硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂以及(ii)抗pd-1抗体(优选地，派姆单抗)，所述组合用于治疗受试者的癌症。在一些优选实施例中，本发明提供了一种组合，其具有：(i)化合物ot-1096以及(ii)抗pd-1抗体(优选地，派姆单抗)，所述组合用于治疗受试者的癌症。

在一些实施例中，所述检查点抑制剂可以是基于非抗体的分子(例如，小分子)抑制剂。

在一些实施例中，所述免疫刺激剂是ido(吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶)抑制剂。

在其它实施例中，所述免疫刺激剂是化学治疗药物。

在一些实施例中，所述免疫刺激剂不是化学治疗药物(例如，不是吉西他滨(gemcitabine)或卡铂(carboplatin)或环磷酰胺(cyclophosphamide))。

上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这种组合疗法方面。

在另一个方面，本发明提供了：

一种组合，其具有：

(i)硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂；以及

(ii)硫氧还蛋白抗体，

所述组合用于治疗受试者的癌症。

硫氧还蛋白抗体意指与硫氧还蛋白(或抗硫氧还蛋白抗体)结合的抗体(例如，单克隆抗体)或其抗原结合片段。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这种组合疗法方面。

在不希望受到理论的束缚的情况下，据信从肿瘤中分泌的trx(硫氧还蛋白)高于正常水平并且所分泌的trx将treg细胞吸引(或引导)朝向肿瘤，从而导致较差结果。在此，在不希望受到理论的束缚的情况下，据信可以施用(例如，全身性地)直接靶向trx的抗体以与肿瘤分泌的trx结合，从而帮助减少或防止treg细胞迁移到肿瘤。

在一些实施例中，有待用根据本发明的sectrap形成剂治疗的受试者也可能正在接受用化疗治疗药物和/或放射疗法进行的治疗或可能已经接受过用化疗治疗药物和/或放射疗法进行的治疗。在一些实施例中，在用根据本发明的sectrap形成剂治疗之前，受试者可能已经接受过用化疗治疗药物和/或放射疗法进行的多线疗法(例如，2或3线疗法)。在不希望受到理论的束缚的情况下，化学疗法和/或放射疗法(例如，用化学疗法和/或放射疗法进行的先前治疗)可以刺激和/或募集细胞毒性t细胞到癌组织并且这意指癌症已经被t细胞浸润(例如，高度t细胞浸润)或处于被t细胞浸润的过程中。在本领域中已经建立：化学疗法和放射疗法可以导致t细胞浸润到癌症中。如果受试者在用sectrap形成剂进行治疗之前已经接受过化学疗法和/或放射疗法，则他们可以被认为在用sectrap形成剂进行治疗之前已经被诱导(已经进行了用于刺激t细胞浸润的诱导治疗)。如果需要的话，可以在开始sectrap形成剂治疗之前对在化学疗法和/或放射疗法之后(或期间)的癌症中的t细胞浸润(例如，所评估的t细胞浸润的程度)进行评估。在一些实施例中，sectrap形成剂治疗会在被鉴定为患有t细胞浸润性肿瘤(例如，高度t细胞浸润性肿瘤)的那些受试者中开始。

化学疗法和/或放射疗法可以用于增强抗癌免疫应答。化学疗法可以增加trxr表达(例如，通过nrf2活化)和肿瘤中的t细胞浸润。

技术人员将熟悉适当的化学治疗药物(和方案)和放射疗法。在一些实施例中，化学治疗药物是蒽环类(例如，阿霉素(doxorubicin))、环磷酰胺或铂药剂(例如，顺铂)。

由于根据本发明的所使用的sectrap形成剂可以引发受试者的抗癌免疫应答(通过形成sectrap)，因此据信如果这些药剂的唯一作用模式是通过直接的细胞毒性效应，则可以向受试者施用较低的剂量和/或较低频率的剂量(即，与可能已经给予的相比较低的剂量和/或较低频率的剂量)。因此，临床医师可以在考虑给药方案时采取更加深思熟虑的方法并且可以在知道sectrap形成剂将利用患者的免疫系统赋予抗癌效应(以及直接的细胞毒性效应不是唯一的癌细胞杀死模式)的情况下选择较低剂量和/或较低频率的剂量。

本发明的供使用的sectrap形成剂可以包含在调配物(或组合物)中。此类调配物可以供药物或兽医使用。在此类调配物中使用的适当的稀释剂、赋形剂和载剂是技术人员已知的。

根据本发明的供使用的sectrap形成剂(或调配物)可以通过任何适当的途径向受试者施用。

sectrap形成剂(或调配物)可以例如呈适合于口服施用、鼻腔施用、肠胃外施用、静脉内施用、局部施用、直肠施用或鞘内施用的形式存在。优选地，组合物呈适合于全身(例如，静脉内)施用的形式存在。

药物组合物(调配物)可以肠胃外施用。肠胃外施用可以例如通过注射器通过皮下注射、肌内注射或静脉内注射进行。可替代地，肠胃外施用(例如，i.v.输注)可以通过输注泵进行。在一些实施例中，可以使用腹膜内(i.p.)施用或肿瘤内施用(例如，注射)。在一些实施例中，可以使用鞘内施用(例如，通过注射到脊柱中)。

在优选实施例中，sectrap形成剂全身性施用。在特别优选实施例中，sectrap形成剂(或调配物)静脉内(i.v.)施用或腹膜内(i.p.)施用。

在本发明的一些优选实施例中，受试者是人受试者(优选地，具有活性免疫系统)，施用是全身性施用(例如，i.v.施用或i.p.施用)，并且癌症是t细胞浸润性癌症。

在一些实施例中，sectrap形成剂(或调配物)肿瘤内施用(例如，通过直接注射到肿瘤中)。

在一些实施例中，sectrap形成剂(或调配物)，鞘内施用(例如，通过直接注射到脊柱中)。

本文所定义的活性化合物可以呈常规的药理施用形式(例如，片剂、包衣片剂、鼻用喷雾、溶液、乳剂、脂质体、粉末、胶囊或缓释形式)存在。常规药物赋形剂以及通常的生产方法可以用于制备这些形式。

注射溶液可以例如以常规方式生产，如通过添加防腐剂(如对-羟基苯甲酸酯)或稳定剂(如edta)。溶液然后填充到注射小瓶或安瓿中。

剂量和剂量方案可以基于如受试者的年龄、体重和性别等参数而变化。适当的剂量可以容易地建立。适当的剂量单位可以容易地制备。

本发明的供使用的药物组合物可以另外地包括如上文在共同-施用(或组合)方案的背景下所描述的另外的治疗活性成分。然而，如本文在其它地方所讨论的，在一些优选实施例中，在本发明中的供使用的组合物中，sectrap形成剂是存在的唯一活性剂。

本发明还提供了一种治疗受试者的t细胞浸润性癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

可以基于临床评估确定治疗有效量并且可以容易地对其进行监测。

本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于治疗t细胞浸润性癌症的药物中的用途，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

本发明还提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和免疫刺激剂的组合。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述治疗进一步包括施用免疫刺激剂。本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和免疫刺激剂的组合在制造用于治疗癌症的药物中的用途。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

本发明还提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和硫氧还蛋白抗体的组合。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述治疗进一步包括施用硫氧还蛋白抗体。本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和硫氧还蛋白抗体的组合在制造用于治疗癌症的药物中的用途。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在另一方面，本发明提供了一种用于刺激(或增强或活化)受试者(优选地，患有癌症的受试者)的免疫系统的sectrap形成剂。可替代地来看，本发明提供了一种用于刺激(或引发或增加)受试者的免疫应答的sectrap形成剂。可替代地来看，本发明提供了一种用于刺激(或引发或增加)受试者的抗癌免疫应答的sectrap形成剂。可替代地来看，本发明提供了一种用于增强受试者的免疫系统(或刺激免疫应答(具体地，抗癌免疫应答))的方法，所述方法包括向所述受试者施用sectrap形成剂。本发明还提供了一种sectrap形成剂在制造用于增强受试者的免疫系统(或刺激受试者的免疫应答(例如，抗癌免疫应答))的药物中的用途。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这些方面。

可替代地来看，本发明提供了一种用于减少肿瘤中(例如，肿瘤微环境中)的treg的数量(或水平)和/或增加肿瘤中(例如，肿瘤微环境中)的cd8+t细胞的数量或降低(例如，肿瘤微环境中的)treg与cd8+t细胞的比率的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。

可替代地来看，本发明提供了一种用于减少肿瘤中(例如，肿瘤微环境中)的treg的数量(或水平)和/或增加肿瘤中(例如，肿瘤微环境中)的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的数量或降低(例如，肿瘤微环境中的)treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的sectrap形成剂。

在一个方面，本发明提供了一种用于降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。例如，本文在其它地方讨论了“调节性t细胞(treg)的水平”的含义。

在一个方面，本发明提供了一种用于提高受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的cd8+t细胞(或cd8+效应t细胞或cd8+细胞毒性t细胞)和/或其它细胞毒性免疫细胞的水平的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在一个方面，本发明提供了一种用于降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的treg与cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞的比率的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

相反，在另一个方面，本发明提供了一种用于提高受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的cd8+t细胞和/或其它细胞毒性免疫细胞与treg的比率的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在另一个方面，本发明还提供了一种用于降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和免疫刺激剂的组合。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。例如，本文在其它地方讨论了“调节性t细胞(treg)的水平”的含义。

可替代地来看，本发明提供了一种降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。例如，本文在其它地方讨论了“调节性t细胞(treg)的水平”的含义。

本发明还提供了一种提高受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和免疫刺激剂的组合。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。例如，本文在其它地方讨论了“调节性t细胞(treg)的水平”的含义。

本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的药物中的用途。此种治疗可以进一步包括施用免疫刺激剂。本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和免疫刺激剂的组合在制造用于降低受试者(例如，受试者的肿瘤或肿瘤微环境中)的调节性t细胞(treg)的水平的药物中的用途。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。例如，本文在其它地方讨论了“调节性t细胞(treg)的水平”的含义。

在一些实施例中，本文中未明确与组合疗法(例如，与免疫刺激剂或硫氧还蛋白抗体)结合讨论的本发明的任何方面或实施例可以进一步包括使用(或施用)其它治疗剂(例如，免疫刺激剂或硫氧还蛋白抗体)，并且本发明的方面或实施例的任何特征可以加上必要的变更而适用于此类组合疗法。

在另一个方面，本发明提供了一种组合，其具有：硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂以及靶向治疗剂或细胞毒性治疗剂，所述组合用于治疗受试者的癌症。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。靶向治疗剂是通过干扰(或抑制)癌症生长或增殖所需要(或所涉及)的特异性分子(例如，蛋白质(如酶或受体))(而不是例如按照传统的化学疗法简单地干扰所有快速分裂细胞)阻断(或抑制)癌细胞的生长的那些药剂。靶向治疗剂包含但不限于格列卫(gleevec)(伊马替尼(imatinib))、阿瓦斯丁(avastin)(贝伐单抗(bevacizumab))和依维莫司(everolimus)。细胞毒性治疗剂包含但不限于卡铂、紫杉醇(taxol)或长春花生物碱(vincaalkaloid)。

在另一个方面，本发明提供了一种治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂和靶向治疗剂或细胞毒性治疗剂的组合。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在另一个方面，本发明提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述治疗进一步包括施用靶向治疗剂或细胞毒性治疗剂。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的免疫细胞浸润性癌症的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或引起或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。而且，根据本发明的这个方面，可以浸润癌的免疫细胞的类型也从本文在其它地方的讨论中显而易见。此类免疫细胞包含例如t细胞(例如，cd8+t细胞和treg)、自然杀伤(nk)细胞、肿瘤相关巨噬细胞(tam)、中性粒细胞、肥大细胞和骨髓源性抑制细胞(mdsc)。本文在其它地方关于t细胞浸润(和t细胞浸润性癌症)(例如，浸润的程度)以及确定或选择t细胞浸润性癌症的方法的讨论可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面(所述方面涉及治疗免疫细胞浸润性癌症)。

本发明还提供了一种治疗受试者的免疫细胞浸润性癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或引起或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

本发明还提供了一种硒受损的硫氧还蛋白还原酶衍生的凋亡蛋白(sectrap)形成剂在制造用于治疗免疫细胞浸润性癌症的药物中的用途，其中所述药剂具有免疫刺激活性，从而使得所述受试者产生(或刺激或增强或引发)针对所述癌症的免疫应答。上文所描述的本发明的用途的实施例可以加上必要的变更而适用于本发明的这个方面。

在另外的方面，本发明提供了试剂盒，其包括根据本分明的供使用的如上文所定义的sectrap形成剂或调配物中一种或多种sectrap形成剂或调配物。本文在其它地方描述了优选sectrap形成剂。所述试剂盒包括另外的组分(例如，另外的免疫刺激剂和/或化学治疗剂)。每个组分可以提供在单独的隔室或容器中。在方便和实用的情况下，可以提供组分的混合物。所述组分可以呈干燥(例如，结晶、冷冻干燥或冻干)形式或呈溶液(通常此类液体组合物将是水性的并且用如tris、hepes等标准缓冲液缓冲)提供。

此类试剂盒可以包括另外的组分(例如，如上文所描述的)。

优选地，所述试剂盒用于治疗癌症(如t细胞浸润性癌症)，例如用于如本文所描述的本发明的方法或用途。

在一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括sectrap形成剂和免疫刺激剂(例如，检查点抑制剂，如抗pd-l1抗体或抗pd-1抗体(例如，派姆单抗))。

在一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括sectrap形成剂和抗硫氧还蛋白抗体。

试剂盒还可以设置具有针对使用根据本发明的试剂盒的说明书或设置具有针对如何获得此类说明书的指引。

将参考以下非限制性实施例并且参考以下附图进一步描述本发明，其中：

图1：(a)在存在nadph还原的trxr的情况下，将化合物孵育4小时。在孵育之后，通过添加dtnb确定sec依赖性的c端trxr活性。将活性相对于仅含dmso的媒剂对照和缺乏trxr的空白对照进行归一化。(b)在存在nadph还原的trxr的情况下，在各个时间点将ot-1000和伊尼帕利布在旨在完全抑制sec依赖性的c端trxr活性的浓度下孵育。通过添加胡桃醌以及随后的nadph消耗来确定n端底物(sectrap)活性。

图2：乳腺癌细胞系mda-mb-231(a)和mda-mb-453(b)对ot-1000的敏感性。在存在多种浓度的伊尼帕利布或ot-1000的情况下，将细胞孵育24小时、48小时或72小时。然后，使用cellquanti测定对细胞活力进行评估。使用仅含dmso的对照和空白对照确定相对细胞活力。应用线性回归分析来确定针对对照的50％的抑制浓度(ic50)。

图3：(a)ot-1000；(b)ot-1129；(c)ot-1011；(d)ot-1131；(e)ot-2056；(f)ot-1012；(g)ot-1096；(h)ot-1113。通过96小时的处理，与未经处理的细胞相比，在用各种浓度的所陈述的化合物进行处理期间mda-mb-231肿瘤细胞中的细胞内trx水平。在每个采样时间，将细胞上清液从细胞中去除，将细胞洗涤并裂解，并且使用elisa确定细胞裂解物中的来自所有细胞的trx的总量。

图4：通过96小时的处理，与未经处理的细胞相比，在用各种浓度的金诺芬进行处理期间mda-mb-231肿瘤细胞中的细胞内trx水平。在每个采样时间，将细胞上清液从细胞中去除，将细胞洗涤并裂解，并且使用elisa确定细胞裂解物中的trx的量。

图5：(a)通过96小时的处理，与未经处理的细胞相比，在用各种浓度的伊尼帕利布进行处理期间mda-mb-231肿瘤细胞中的细胞内trx水平。在每个采样时间，将细胞上清液从细胞中去除，将细胞洗涤并裂解，并且使用elisa确定细胞裂解物中的trx的量。(b)通过96小时的处理，与未经处理的细胞相比，在用各种浓度的ato进行处理期间mda-mb-231肿瘤细胞中的细胞内trx水平。在每个采样时间，将细胞上清液从细胞中去除，将细胞洗涤并裂解，并且使用elisa确定细胞裂解物中的trx的量。

图6：(a)对照.用媒剂对照(i.v.)处理的免疫缺陷型无胸腺小鼠中的mda-mb-231异种移植物的单独肿瘤生长。5/2(5天给药，2天不给药)，然后每周三次，持续两周。(b)ot-1000.用10mg/kgot-1000i.v.处理的免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物的单独肿瘤生长。5/2，然后每周三次，持续两周。总生长抑制(tgi)表示ot-1000处理的组的中值肿瘤体积相较于媒剂对照组中的中值肿瘤体积的百分比。

图7：在用ot-1000或媒剂对照处理22天之后，免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231癌细胞的最终异种移植瘤体积的瀑布图。瀑布图展现了单独测量的肿瘤大小，从而实现可视化分布。

图8：(a)对照.用媒剂对照处理的免疫缺陷型无胸腺小鼠中的mda-mb-231异种移植物的单独肿瘤生长。(b)ot-1129.用ot-1129处理的免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物的单独肿瘤生长。总生长抑制(tgi)表示ot-1000处理的组的中值肿瘤体积相较于媒剂对照组中的中值肿瘤体积的百分比。(c)伊尼帕利布.用伊尼帕利布处理的免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物的单独肿瘤生长。总生长抑制(tgi)表示伊尼帕利布处理的组的中值肿瘤体积相较于媒剂对照组中的中值肿瘤体积的百分比。(d)在用ot-1129、伊尼帕利布或媒剂对照处理25天之后，免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231癌细胞的最终异种移植瘤体积的瀑布图。

图9：用ot-1096或媒剂对照处理的免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植瘤生长。

将无胸腺裸鼠用5×10⁶个mda-mb-231乳腺癌细胞原位接种到乳腺脂肪垫中并且在肿瘤达到平均体积80-120mm³(每组n＝12)时随机化以供处理。在实验持续时间内，通过i.v.注射或i.v.使用媒剂用10mg/kgot-1096对小鼠进行处理，使用5天给药、两天不给药(5/2)的给药方案，每天处理一次。使用卡尺测量对异种移植瘤体积进行评估，持续25天。将数据表示为平均肿瘤体积±sem。用sidak的多重比较测试使用双向重复测量anova确定统计学意义(p<0.05)。与第25天的媒剂相比，用ot-1096处理的小鼠的平均肿瘤体积具有统计学意义。

图10：植入到免疫活性balb/c小鼠的乳腺脂肪垫中并且用ot-1096或媒剂对照处理的原发性4t1-luc2肿瘤中的相对发光通量。将每个小鼠中的发光通量相对于在第1天成像时确定的基线值进行归一化。

将雌性balb/c免疫活性小鼠用1×10⁵个4t1-luc2鼠肿瘤细胞植入到乳腺脂肪垫中。当肿瘤生长介于60mm³与90mm³之间时，选择动物进行成像。基于成像通量值将小鼠随机化并纳入以供处理。使用5/2(五天给药、两天不给药)的给药方案用5mg/kg的ot-1096或媒剂对照对小鼠进行处理，每天一次。在第1、8和15天时，对小鼠进行全身成像以跟踪肿瘤细胞发光。分析由小鼠的原发性肿瘤发光组成。从第1天起，将每只小鼠相对于其自身的基线发光进行归一化。将在成像的第一天没有出现转移的小鼠纳入研究(n＝9)。将数据表示为平均值±sem。使用mann-whitney测试确定统计学意义(p<0.05)。与第15天的媒剂相比，用ot-1096处理的小鼠的相对发光通量具有意义。

图11：在用ot-1096或媒剂对照处理的人源化免疫活性nsg小鼠(hu-cd34-nsg)中的源自tm00098患者的三阴性乳腺癌异种移植物的原发性肿瘤生长。a)人源化nsg小鼠(hu-cd34-nsg)移植了来自供体5243的cd34+细胞，并且然后植入了tnbcpdxtm00098。b)人源化nsg小鼠(hu-cd34-nsg)移植了来自供体5252的cd34+细胞，并且然后植入了tnbcpdxtm00098。

图12：人源化免疫活性nsg小鼠(hu-cd34-nsg)中的源自tm00098患者的三阴性乳腺癌异种移植物的treg水平，ot-1096处理与其它处理的比较。已经对用ot-1096单独或用ot-1096与派姆单抗组合处理的所有动物进行了分组(ot-1096处理)。已经对用pbs、ot-1096的媒剂或派姆单抗单独处理的所有动物进行了分组(其它处理)。将数据呈现为cd45+细胞的平均值％treg±sem。ot-1096处理(供体5243n＝5，供体5252n＝11)其它处理(供体5243n＝7，供体5252n＝6)。使用mann-whitney测试确定统计学意义(p<0.05，*)。

图13：用ot-1096处理24小时之后从人血液供体中分离的免疫细胞的活力。将数据呈现为平均细胞毒性±sem。n＝3。

图14：用ot-1096、伊尼帕利布或ot-1096和伊尼帕利布的组合处理之后的移植肿瘤的肿瘤内免疫细胞群。图(a)示出了cd8+细胞水平。图(b)示出了cd8+细胞与treg细胞的比率。

实例1

通用化学方法

所有试剂均商购获得并且按原样使用。在氮气气氛下运行所有反应。通过薄层色谱法(tlc)以及使用适当的染色试剂进行检测或通过esi-lcms(正离子模式，uv检测为254nm)监测反应。将所有¹hnmr在适当的溶剂中记录在具有多核探针的brukeradvance400mhz光谱仪上。将¹hnmr和¹³cnmr光谱记录在brukeravance400上(¹hnmr：400mhz；¹³cnmr：100mhz)，使用四甲基硅烷作为用于cdcl3中的¹hnmr光谱的内标进行上述记录。针对¹³cnmr光谱，dmso-d6(39.43ppm)或cdcl3(77.00ppm)的残留溶剂峰。dmso-d6在¹hnmr中的残留溶剂峰为2.5ppm。所使用的缩写为：s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；m，多重峰；br，宽单峰。耦合常数以hz表达。

对于所有反应，均使用分析级溶剂。所有湿度敏感反应均在烘箱干燥的玻璃器皿(70℃)中进行。

对于粗lcms监测，用来自应用生物系统公司(appliedbiosystems)的api2000质谱仪获得质谱图。按2ul/分钟输注样品，并且以正电离模式或负电离模式获得光谱。

将预涂铝板(默克(merck)，254nm)用于tlc。在swambe硅胶(100-200目)上进行柱色谱法。

材料与方法

确定sec依赖性trxr活性(dtnb测定)

使用5'-5-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)(dtnb)测定对sec依赖性trxr活性进行评估。在各个时间点将多种浓度的化合物在反应缓冲液中孵育，所述反应缓冲液由具有2mmedta的50mmtrisph7.5和0.1mg/ml牛血清白蛋白组成并且含有重组大鼠trxr和250μmnadph。将2.5mmdtnb添加到每个孔并且在od412处跟踪tnb^-产生。根据tnb^-随时间的变化确定活性，并且将其相对于仅dmso(媒剂)和缺乏trxr(空白)对照进行归一化。大鼠trxr1的氨基酸序列可以在genbank中获得，登录号为aaf32362.1。

谷胱甘肽还原酶(gr)活性测定

将各种浓度的化合物与来自贝克酵母的gr和250μmnadph一起孵育15分钟来确定gr活性，然后将10mm氧化型谷胱甘肽(gssg)添加到每个孔并且在od340处跟踪nadph消耗。根据nadph随时间的消耗确定活性，并且将其相对于仅dmso(媒剂)和缺乏gr(空白)对照进行归一化。

确定sec依赖性sectrap活性(胡桃醌测定)

使用胡桃醌测定确定具有trxr的化合物的sectrap形成能力。在存在重组trxr的情况下，将化合物与250μmnadph在完全抑制dtnb测定中的酶活性的浓度下孵育15分钟。然后将100μm胡桃醌添加到每个孔，并且在od340处跟踪nadph消耗，以确定trxr的n端处的持续还原能力(sectrap活性)。根据nadph随时间的消耗确定活性，并且将其相对于仅dmso(媒剂)和缺乏trxr(空白)对照进行归一化。

nadph依赖性trxr活性

通过在存在重组trxr的情况下将化合物与或不与250μmnadph孵育90分钟来确定trxr的不可逆抑制。将等分试样用于dtnb测定中以确定酶活性的抑制。如使用dtnb测定所证实的，在存在trxr的情况下，将化合物与250μmnadph在用于完全抑制sec依赖性trxr活性的浓度下孵育。然后将孵育样品添加到含有250μmnadph和100μm胡桃醌的反应缓冲液，然后在od340处跟踪nadph消耗以确定持续的sectrap活性。

细胞测定

细胞培养

在37℃下在5％co2中将细胞培养物维持在含有20mg/ml青霉素/链霉素、2mml-谷氨酰胺和10％胎牛血清(fbs)的培养基中。在含有10％fbs和25nm亚硒酸钠的培养基中以一式三份进行实验。将所有化合物稀释于dmso中，最终浓度为0.01％。

细胞培养培养基

使mda-mb-453(atcchtb-131)细胞在含有丙酮酸钠的培养基中生长。使mda-mb-231细胞(atcchtb-26)在dmem培养基或补充有glutamax(1x)的l-15中生长。将u87-mg(atcchtb-14)和mda-mb-468(atcchtb-132)细胞在补充有glutamax(1x)的dmem中培养。将nb-4(dsmzacc-207)细胞在rpmi1640中培养。

cellquanti-blue细胞活力测定

将细胞以2000细胞/孔铺板到含有10％fbs的培养基中的96孔板中。次日，将化合物添加到每个孔并且孵育72小时。将cellquanti-blue细胞活力试剂添加到每个孔并且然后将板在37℃下孵育3小时。使用enspire读板仪(g.e.医疗，美国)通过荧光测定法确定活力，激发：530nm，发射：590nm。将活力相对于dmso对照和具有培养基的空白孔进行归一化。

alamar-blue细胞活力测定

在存在含有25nm亚硒酸盐的10％fbs培养基的情况下，将mda-mb-231细胞以2000细胞/孔铺板在96孔黑色光学板中。次日，用各种浓度的化合物(0.1％dmso最终浓度)处理细胞，并且孵育72小时。在孵育之后，将alamarblue试剂添加到每个孔，并且孵育另外3小时。读取荧光ex:530nm/em:590nm，并且使用dmso媒剂和无细胞(空白)对照确定活力百分比。

mtt细胞活力测定

在存在10％fbs培养基的情况下，将乳腺癌和成胶质细胞瘤细胞系以4000细胞/孔铺板在96孔板中。次日，用各种浓度的示例化合物(0.1％dmso最终浓度)处理细胞，并且孵育72小时。在孵育之后，进行mtt测定以评估细胞活力。使用dmso媒剂和无细胞(空白)对照确定活力百分比。

确定trx细胞内和细胞外水平

人乳腺癌细胞系mda-mb-231是从美国典型培养物保藏中心(atcc；马纳萨斯，维吉尼亚州(va))获得的，并且在37℃下在5％co2气氛中将其在补充有10％(v/v)热灭活的胎牛血清(赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific)，美国)、10mmhepes(西格玛(sigma))、25mm碳酸氢钠(西格玛)、1xglutamax(西格玛)、100iu/ml青霉素和100μg/ml链霉素(西格玛)的leibovitz的l-15培养基(赛默飞世尔科技公司，美国)中培养。简言之，将细胞以7500细胞/孔接种在96孔板中。24小时之后，分别用不同浓度的测试化合物或dmso(0.5％；媒剂对照)对细胞进行处理，并且在37℃下在co2培养箱中对其进行进一步孵育。在不同时间点收集培养上清液，例如在细胞铺板后立即(-24h)、0小时(化合物添加的时间)以及化合物添加后的1小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时和96小时。然后，用0.1％tritonx-100从对应的孔中裂解细胞，并且对裂解物进行收集。按照制造商说明书使用txn(人)elisa试剂盒[abnova；目录号：ka0535]通过elisa测量培养上清液和细胞裂解物两者中的trx水平。借助graphpadprism软件(5.0版本；美国加利福尼亚州拉荷亚市)使用不同浓度的trx标准品(在试剂盒中提供)制备标准曲线。根据标准曲线计算未知样品的trx浓度。将数据表达为三个复制品的平均值。

体内测定

ot-1000对抑制无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植瘤生长的功效

将无胸腺裸鼠用5x10⁶个mda-mb-231乳腺癌细胞原位接种到乳腺脂肪垫中，并且在肿瘤达到平均体积80-120mm³(每组n＝12)时随机化以供处理。通过i.v.注射或i.v使用媒剂用10mg/kgot-1000对小鼠进行处理，前五天每天一次，然后两天不处理，并且然后每周三次，持续两周。使用卡尺测量对异种移植瘤体积进行评估，持续22天。通过richmonda和suy.的《疾病模式和机制(diseasemodels&mechanisms)》2008；1(2-3):78-82描述了无胸腺裸鼠模型。

ot-1129和伊尼帕利布对抑制无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植瘤生长的功效

将无胸腺裸鼠用5x10⁶个mda-mb-231乳腺癌细胞原位接种到乳腺脂肪垫中，并且在肿瘤达到平均体积80-120mm³(每组n＝12)时随机化以供处理。通过i.v.注射用25mg/kgot-1129、通过i.p.注射用25mg/kg伊尼帕利布或i.v.使用媒剂对小鼠进行处理，前五天每天一次，然后两天不处理，然后每周三次，持续两周零四天，共12剂。使用卡尺测量对异种移植瘤体积进行评估，持续25天。

用ot-1096或媒剂对照处理的免疫缺陷型无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植瘤生长。

植入到balb/c小鼠的乳腺脂肪垫中并且用ot-1096或媒剂对照处理的原发性4t1-luc2免疫活性肿瘤中的相对发光通量。

在用ot-1096或媒剂对照处理的免疫活性人源化nsg小鼠(hu-cd34-nsg)中的源自tm00098患者的三阴性乳腺癌异种移植物的原发性肿瘤生长。

化合物的合成

ot-1000(2-((4-氯苯基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶)的合成

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(1；5.0g，26.596mmol)于二甲基乙酰胺(75ml)中的搅拌溶液添加4-氯苯-亚磺酸钠(2；7.92g，39.894mmol)和四正丁基氯化铵(2.22g，7.979mmol)和浓缩hcl0.75ml。将反应混合物在80℃下搅拌1小时。通过lcms监测反应进程。将整个反应混合物倒入在碎冰上以得到固体。将这个固体化合物通过烧结漏斗过滤，并且在真空下彻底干燥以分离出2-((4-氯苯基)磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶作为期望的产物(7.1g，81.21％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝8.6hz,1h),8.0(d,j＝7.9hz,2h),7.56(d,j＝7.9hz,2h),6.95(d,j＝8.7hz,1h),3.69(s,3h)。lcms[m/z(m+h)+＝(c12h9n2o5scl+h的计算值：329)测量值：329]，λ＝220nm下的纯度：98.73％

ot-1011(2-苄基磺酰基-6-甲氧基-3-硝基吡啶)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(1；5.0g，26.596mmol)于二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液添加碳酸钾(4.441g，32.181mmol)和苄硫醇(3.595g，28.989mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(30ml)淬灭，并且用乙酸乙酯(300ml)萃取。将有机层用水(3×50ml)洗涤，然后用盐水(1×50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含2％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的步骤-1化合物(3.2g，43.55％)。

步骤-2

在室温下向步骤-1化合物(步骤-1；15.0g，54.348mmol)于二氯甲烷(200ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(32.71g，190.17mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(500ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×100ml)洗涤，然后用盐水(1×200ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含10％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈灰白色固体状的标题化合物ot-1011(8.0g，92.15％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.06(d,j＝8.6hz,1h),7.38(m,5h),6.99(d,j＝8.7hz,1h),4.82(s,2h),3.96(s,3h)。lcms[m/z(m+h)+＝(c13h12n2o5s+h的计算值：309)测量值：309]，λ＝220nm下的纯度：100％

ot-1012(6-甲氧基-3-硝基-2-(吡啶-2-基磺酰基)吡啶)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(1；5.0g，26.596mmol)于二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液添加碳酸钾(4.441g，32.181mmol)和2-巯基吡啶(3.22g，28.989mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(30ml)淬灭，并且用乙酸乙酯(300ml)萃取。将有机层用水(3×50ml)洗涤，然后用盐水(1×50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含5％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的步骤-1化合物(2.5g，35.7％)。

步骤-2

在室温下步骤-1化合物(6.36g，24.183mmol)于二氯甲烷(150ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(14.55g，84.639mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(300ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×50ml)洗涤，然后用盐水(1×50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含5％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈灰白色固体状的标题化合物ot-1012(2.5g，36％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.70-8.69(m,1h),8.29-8.26(m,2h),8.05-8.01(m,1h),7.57-7.54(m,1h),6.98(d,j＝8.8hz,1h),3.66(s,3h)。lcms[m/z(m+h)+＝(c11h9n3o5s+h的计算值：296)测量值：296]，λ＝220nm下的纯度：98.76％

ot-1096(6-甲氧基-3-硝基-2-(辛基磺酰基)吡啶)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(1；250mg，0.1.33mmol)于二甲基甲酰胺(5ml)的溶液中添加碳酸钾(220mg，1.596mmol)和辛烷-1-硫醇(213mg，1.463mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(10ml)淬灭，并且用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用水(3×10ml)洗涤，然后用盐水(1×10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含4％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的步骤-1化合物(150mg，37.8％)。

步骤-2

在室温下向步骤-1化合物(150mg，0.798mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(494mg，2.872mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×20ml)洗涤，然后用盐水(1×20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含20％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈灰白色固体状的标题化合物ot-1096(46mg，27.69％)。¹h-nmr[cdcl3,δ8.13(d,j＝9hz,1h),7.04(d,j＝8hz,1h),4.07(s,3h),3.56(t,j＝8hz,2h),1.89-1.86(m,2h),1.46-1.44(m,2h),1.27-1.25(m,8h),0.86(m,3h)]。lcms[m/z(m+h)+＝(c14h22n2o5s+h的计算值：331)测量值：331]，λ＝220nm下的纯度：100％

ot-1113((3-((6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)磺酰基)丙酸甲酯)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(250mg，1.33mmol)于二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液添加碳酸钾(220mg，1.59mmol)和3-巯基-丙酸甲酯(175mg，1.46mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(10ml)淬灭，并且用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用水(3×10ml)洗涤，然后用盐水(1×10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含5％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的步骤-1化合物(148mg，43.42％)。

步骤-2

在室温下向步骤-1化合物(148mg，0.54mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(477.65mg，2.72mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×20ml)洗涤，随后用盐水(1×20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含8％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈灰白色固体状的标题化合物ot-1113(104mg，62.87％)。¹h-nmr[dmso-d6,δ8.49(d,j＝9hz,1h),7.37(d,j＝9hz,1h),4.01-3.97(m,5h),3.59(s,3h),2.84(t,j＝7hz,2h)]。lcms[m/z(m+h)+＝(c10h12n2o7s+h的计算值：305)测量值：305]，λ＝220nm下的纯度：98.40％

ot-1129(2-(乙基磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(250mg，1.33mmol)于二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液添加碳酸钾(220mg，1.59mmol)和乙烷硫醇(1.33mg，2.66mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(10ml)淬灭，并且用乙酸乙酯(20ml)萃取。将有机层用水(3×10ml)洗涤，然后用盐水(1×10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含2％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的步骤-1化合物(187mg，69.73％)。

步骤-2

在室温下向步骤-1化合物3(187mg，1.16mmol)于二氯甲烷(10ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(602mg，3.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×20ml)洗涤，随后用盐水(1×20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含12％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈灰白色固体状的标题化合物ot-1129(108mg，50.18％)。¹h-nmr[dmso-d6,δ8.48(d,j＝9hz,1h),7.36(d,j＝9hz,1h),4.02(s,3h),3.72-3.67(m,2h),1.26(t,j＝7hz,3h)]。lcms[m/z(m+h)+＝(c8h10n2o5s+h的计算值：247)测量值：247]，λ＝220nm下的纯度：100％

ot-1131((2-(乙基亚磺酰基)-6-甲氧基-3-硝基吡啶)的合成

步骤-1

在室温下向6-甲氧基-2-氯-3-硝基吡啶(1；5g，26.59mmol)于二甲基甲酰胺(50ml)中的溶液添加碳酸钾(4.44g，31.95mmol)和乙烷硫醇(2，1.81g，29.25mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用冰冷的水(35ml)淬火，其中从反应混合物中沉淀出固体。过滤固体，并且用冰冷的水(3×30ml)洗涤，并且在减压下干燥，得到呈黄色固体的化合物-3(4.8g，84.24％)。

步骤-2

在室温下向化合物-3(4.8g，22.42mmol)于二氯甲烷(100ml)中的溶液添加间氯过氧苯甲酸(8.84g，51.40mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过lcms监测反应进程。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，并且用饱和亚硫酸钠溶液(2×80ml)洗涤，然后用盐水(1×80ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下蒸发以得到粗产物，将所述粗产物通过柱色谱法纯化：用含80％乙酸乙酯的己烷洗脱，从而得到呈黄色固体状的标题化合物ot-1131(2.6g，60.61％)。¹hnmr(dmso-d6,400mhz)δ8.55(d,j＝8.9hz,1h),7.16(d,j＝8.9hz,1h),4.08(s,3h),3.26-3.18(m,1h),2.97-2.88(m,1h),1.23(t,j＝7.3hz,3h)。lcms[m/z(m+h)+＝(c8h10n2o4s+h的计算值：231)测量值：231]，λ＝220nm下的纯度：99.38％。

ot-2056(外-4,11-二苄基-4,11-二氮杂三环[5.3.1.0^2,6]十一碳-9-烯-3,5,8-三酮)的合成

是如公开的pct专利申请wo2017027358a1中所描述的。

例如，可以如wo1994026730a2中所描述的合成伊尼帕利布。

例如，可以如美国4200738a中所描述的合成金诺芬。

结果

化合物的sectrap形成活性

如果如通过dtnb测定所评估的trxr的c端活性被抑制，但是如通过胡桃醌测定所评估的trxr的n端活性没有被显著抑制(或没有被完全抑制或没有被消除)，则可以将化合物(药剂)分类为sectrap形成剂。

确定在dtnb测定中观察到100％抑制的化合物的最低浓度，并且然后使用给定化合物的所述浓度评估在胡桃醌测定中对胡桃醌降低的影响。在这个测定中，胡桃醌活性(胡桃醌还原活性)的较高％值指示较强的助氧化活性。

各种化合物的sectrap形成活性总结于下表a中。trxric50是如dtnb测定中所评估的50％的硫氧还蛋白还原酶活性被抑制的浓度(摩尔浓度)。如通过gr活性测定所评估的50％的谷胱甘肽还原酶活性被抑制的gric50浓度(摩尔浓度)。胡桃醌活性(％@100％dtnb抑制)意指在dtnb测定中以达到100％抑制trxr的浓度使用化合物时在胡桃醌测定中观察到的％活性。

表a

示出了所测试的各种化合物的示例sectrap数据(以上表a)。数据示出了每种化合物的trxric50值，并且在trxr在c端活性位点处被化合物100％抑制以及化合物的浓度等于获得100％抑制所需的浓度的情况下保留trxr的胡桃醌活性(n端二硫醇基序活性)。

如通过ic50值所示出的，通过gr，化合物对trxr也具有特异性，这是靶特异性的证明(表a)。在gr表示所讨论的化合物的主要脱靶候选物的意义上，gr是相关的。trxr的ic50值通常显著低于gr的ic50值，这意味着抑制trxr所需的化合物的量与gr相比低得多。gr抑制可能会损伤正常细胞。

已经发现伊尼帕利布是sectrap形成化合物。据信在临床试验中，伊尼帕利布在trxr/trx过表达并且存在肿瘤内免疫细胞浸润的癌症(三阴性乳腺癌)中表现良好。在第2线和第3线环境中，即在用伊尼帕利布治疗之前已经接受过用化学疗法进行的诱导治疗的患者中，伊尼帕利布与对照相比已经示出临床益处。

如上文所提到的，已经发现伊尼帕利布是sectrap形成化合物。如本文中也描述的，已经令人惊讶地发现，除直接的细胞毒性效应之外，sectrap形成剂还具有赋予抗癌免疫应答的能力。已经发现的事实是伊尼帕利布是sectrap形成剂并且sectrap形成剂可以赋予抗癌免疫应答，这与浸润性肿瘤的临床试验中的阳性结果相符。

ato(三氧化二砷，as2o3)可以通过若干靶标增加ros的细胞水平并且引起细胞凋亡。此处已经发现并且提供了明确的证据：ato也是trxrsectrap形成化合物。

金诺芬与反应性氧物种的产生以及trxr的细胞内水平有关。此处已经示出金诺芬是sectrap形成剂。

抑制trxr的c端活性位点的化合物将降低或阻止底物trx的还原，这是trxr的正常细胞还原活性。这将导致氧化的trx的堆积。需要经还原的trx以维持细胞中的低水平的反应性氧物种。硫氧还蛋白系统直接充当反应性氧物种清除剂(das,k.c.和das,c.k.(2000)《生物化学与生物物理研究通讯(biochem.biophys.res.commun.)》277,443–447)并且还维持其它细胞内途径也产生此作用。例如，经还原的trx是过氧化物或硫氧还蛋白过氧化物酶(其是通常保持细胞中反应性氧物种的水平处于控制下的主要的过氧化氢清除酶)的直接电子供体(fangj等人(《生物化学杂志(j.biol.chem.)》2005年7月1日；280(26):25284-90)。此外，如果n端二硫醇基序在抑制c端活性位点之后仍然具有活性，则通过n端活性位点在细胞中产生呈反应性氧物种的形式的毒性。

在抑制c端活性和保留的n端活性方面将ot-1000与伊尼帕利布进行了比较。在一个实例中，用4小时的结合时间在各种浓度下对ot-1000和伊尼帕利布进行测定。两种化合物均抑制trxrc端活性，并且在这个测定中，ot-1000(ic50＝27μm)的效力比伊尼帕利布(ic50＝9.6nm)高1000倍(图1a)。

在同一实验中进行了头对头比较，还示出了1mm的伊尼帕利布的n端胡桃醌还原活性保持与针对1μm的ot-1000所获得的n端胡桃醌还原活性处于同一水平(图1b)。

确定了各种sectrap形成化合物对癌细胞系mda-mb-231(乳腺癌细胞系)、mda-mb-468(乳腺癌细胞系)、nb-4(白血病细胞系)和u-87mg(胶质母细胞瘤细胞系)的细胞毒性或细胞杀伤作用(表x和y)。表x中的数据是使用alamarblue细胞活力测定获得的。表y中的数据是使用mtt细胞活力测定获得的。

表x

表y

还示出，mda-mb-231和mda-mb-453培养的乳腺癌细胞随时间对ot-1000暴露越来越敏感。mda-mb-231和mda-mb-453是三阴性乳腺癌的模型细胞系并且通过基底样表征，所述基底样特性进而与临床环境中的侵略性相关。这种时间依赖性功效意指氧化应激的机械诱导不是由于化合物的混杂反应性，而是由于sectrap形成而产生的活性功能(图2a和2b)。在存在多种浓度的伊尼帕利布或ot-1000的情况下，将细胞孵育24小时、48小时或72小时。然后，使用cellquanti-blue测定对细胞活力进行评估。使用仅含dmso的对照和空白对照确定相对细胞活力。应用线性回归分析来确定针对对照的50％的抑制浓度(ic50)。在这些条件下，ot-1000在mda-mb-231细胞中的效力比伊尼帕利布高100倍，并且ot-1000在mda-mb-453细胞中的效力比伊尼帕利布更高。

在用本文所描述的化合物进行的肿瘤细胞杀死过程中，已经示出体外使用mda-mb-231肿瘤细胞使得trx的细胞内量减少。这以ot-1000和ot-1129为实例示出。对于ot-1000和ot-1129处理(0.1μm、1μm和10μm)，细胞内trx在mba-md-231肿瘤细胞的处理期间似乎下降。随着化合物的浓度增加，效果更大(图3a和3b)。

实验结束时，与未经处理的细胞培养物相比，ot-1000和ot-1129处理的细胞培养物中的总细胞内trx较低。在这些实验中，ot-1129比ot-1000更快起效。

在用ot-1011、ot-1131、ot-2056、ot-1012、ot-1096和ot-1013处理期间也对细胞内trx水平进行了评估(图3c、3d、3e、3f、3g和3h)。

在1μm和10μmot-1011处，trx的细胞内水平在6-12小时之内与对照细胞相比有所降低，然后保持低于对照。在1μm和10μmot-1131处，trx的细胞内水平在6小时之内与对照细胞相比有所降低，并且然后保持低于对照。在1μm和10μmot-2056处，trx的细胞内水平分别在24小时和6小时之后与对照细胞相比有所降低，并且然后保持低于对照。在所有剂量的ot-1012处，trx的细胞内水平在12小时之后与对照细胞相比有所降低，并且然后保持低于对照。在10μm的ot-1096处，trx的细胞内水平在24小时之内与对照细胞相比有所降低，并且然后保持低于对照。

在1μm和10μm的ot-1113处，trx的细胞内水平分别在48小时和65小时之后与对照细胞相比有所降低，并且然后保持低于对照。

金诺芬具有与ot化合物(0.1μm、1μm和10μm)相似的作用(图4a和4b)。

与用未经处理的细胞所观察到的水平相比，例如在96小时时间点，伊尼帕利布也降低了细胞内trx水平(图5a)。

与用未经处理的细胞所观察到的水平相比，例如在96小时的时间点，ato也降低了细胞内trx水平(图5b)。

最终，肿瘤细胞死亡并且停止产生trx。在细胞死亡期间，肿瘤治疗期间的细胞外trx可能会出现短暂的局部增加，此后trx水平将降低到零。在不希望受到理论的束缚的情况下，在用本文的化合物体内治疗肿瘤的情况下，在一定量的时间之后，肿瘤细胞衍生的trx将减少，结果是肿瘤中的treg抑制活性将降低。随着treg活性降低，抗肿瘤t细胞活性应当增加。在肿瘤细胞破坏期间，肿瘤细胞特异性材料将在引发阶段被免疫系统处理以进一步增强适应性抗肿瘤应答。进一步，在不受理论的束缚的情况下，在溶细胞破裂期间释放的trx将吸引迁移到具有有利组合物(例如，具有将触发抗肿瘤应答的高cd8+/treg比率)的肿瘤微环境中的新的t细胞群是可能的。

此处示出了包含ot-1000的化合物在无免疫活性(或换句话说，免疫缺陷或免疫受损)的小鼠中的抗癌效应。在一个实例中，ot-1000证实了静脉内(iv)用10mg/kgot-1000处理的携带mda-mb-231异种移植物的无胸腺裸鼠中的肿瘤生长抑制率(tgi)为37％，其中施用化合物在22天的过程内发生11次(图6a和6b，媒剂和ot-1000iv)。图描绘了单独的肿瘤体积。总生长抑制(tgi)表示ot-1000处理的组的中值肿瘤体积相较于媒剂中的中值肿瘤体积的百分比。

数据还以瀑布图可视化，所述瀑布图示出了实验结束时单独测量的肿瘤大小，以可视化肿瘤大小在治疗组内的分布。观察到ot-1000处理的动物的大小较小的肿瘤与媒剂处理的动物相比更多，这指示抗肿瘤功效(图7)。也就是说，ot-1000处理的肿瘤的大小通常小于媒剂处理的肿瘤的大小。

在相同的模型系统(携带mda-mb-231异种移植物的免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠)中，ot-1129在静脉给予时实现25％的tgi，伊尼帕利布在腹膜给予时实现为9％的tgi。图示出了单独的肿瘤生产的曲线图(图8a、8b和8c)。

在瀑布图(图8d)中也可以可视化用ot-1129、伊尼帕利布或媒剂进行处理之后的最终肿瘤体积(免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物)。媒剂处理的肿瘤体积偏向较大的大小。在ot-1129组中，肿瘤体积偏向较小的体积。也就是说，ot-1129处理的肿瘤的大小通常小于媒剂处理的肿瘤的大小。

sectrap形成化合物ot-1096在处理植入有mda-mb-231异种移植物的免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠时的％tgi为19％。使用5天给药、两天不给药(5/2)的给药方案按10mg/kgiv施用ot-1096。％tgi等于1-(被治疗的动物的中值肿瘤体积/媒剂对照的中值肿瘤体积)×100。(图9)

令人惊讶地，与无免疫活性(即，免疫缺陷或免疫受损)的小鼠相比，sectrap形成化合物ot-1096在免疫活性小鼠中表现出显著增加的功效。在具有完整免疫系统和4t1-luc2乳腺肿瘤(表示tnbc鼠类肿瘤)的balb/c小鼠中，ot-1096在仅用5mg/kgot-1096按5/2处理15天时实现54％的％tgi。％tgi等于1-(被治疗的动物的中值肿瘤体积/媒剂对照的中值肿瘤体积)×100。通过荧光素酶生物发光测量肿瘤体积。(图10)

此外，在具有人源化免疫系统和源自患者的tnbc肿瘤异种移植物的hu-cd34-nsg小鼠中，ot-1096在携带来自两个单独供体的人免疫细胞的小鼠中引发的％tgi为45％和55％。与无免疫活性(即，免疫缺陷或免疫受损)的小鼠相比，这再次在免疫活性小鼠中展现出显著增加的功效。％tgi等于1-(被治疗的动物的中值肿瘤体积/媒剂对照的中值肿瘤体积)×100。用卡尺测量肿瘤体积(图11a和11b)。

在比较无免疫活性小鼠和免疫活性小鼠中进行的用ot-1096进行的处理时得出的一个重要结论是，与免疫缺陷或免疫受损的模型(免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物)相比，免疫活性模型中的％tgi高出好几倍(如通过具有完整免疫系统和4t1-luc2乳腺肿瘤的balb/c小鼠以及具有人源化免疫系统和源自患者的tnbc肿瘤异种移植物的hu-cd34-nsg小鼠中所例证的)。进一步令人惊讶地，这是用较低剂量的ot-1096(在具有4t1-luc2肿瘤的免疫活性balb/c小鼠(图10)的研究中使用的剂量与免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物(图9)相比较低)或用较低的给药频率(在具有人源化免疫系统和源自患者的tnbc肿瘤异种移植的hu-cd34-nsg小鼠(图11)的研究中使用的给药频率与免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物(图9)相比较低)实现的。两种免疫活性模型(具有完整免疫系统和4t1-luc2乳腺肿瘤的balb/c小鼠和具有人源化免疫系统和源自患者的tnbc肿瘤异种移植物的hu-cd34-nsg小鼠)中的两种给药差异均导致药物暴露于小鼠相对于免疫缺陷或免疫受损的经过处理的小鼠(免疫缺陷或免疫受损的无胸腺裸鼠中的mda-mb-231异种移植物)净降低。这些较低剂量或较低给药频率导致ot-1096的效力显著增加，其中两种不同的免疫活性模型中的化合物的量减少，这示出与免疫系统之间存在内在相互作用，其中sectrap形成化合物与免疫系统协同作用以增加抗癌功效。因此，存在sectrap形成化合物的新功效，其与免疫系统协同作用(或刺激)以对抗癌细胞生长。sectrap形成剂除具有直接的细胞毒性作用之外还能够刺激(或增强)抗癌免疫应答的发现令人惊讶并且据信这个发现会转化成临床益处。仅通过举例的方式，作为发现sectrap形成剂能够刺激(或增强)抗癌免疫应答的结果，已经开辟了新的临床机会和考虑，例如，较低频率和/或较低剂量的可能性和/或对治疗敏感的癌症类型以及可能特别受益于用sectrap形成剂进行治疗的那些受试者(例如，患有t细胞浸润性肿瘤的那些受试者)(患者分层)进行选择的能力。

实例2

用ot-1096单独或与派姆单抗组合处理的免疫活性的人源化nsg小鼠(hu-cd34-nsg)中的源自tm00098患者的异种移植物-三阴性乳腺癌–treg水平的分析。

扩充了本文在实例1中所描述的对免疫活性人源化nsg小鼠(hu-cd34-nsg)的研究，并且对ot-1096单独或ot-1096与派姆单抗(抗pd1抗体)组合的treg水平的影响。

材料与方法

将雌性nsg小鼠植入来自多个供体的人cd34+造血干细胞，并在移植后12周测量外周血中的人cd45+细胞的水平。外周血中的人cd45+细胞>25％的小鼠被确定为具有人源化免疫系统(hu-cd34-nsg^tm)小鼠并且被纳入研究。在hu-cd34-nsg小鼠的右胁腹皮下植入源自tm00098患者的异种移植物(pdx)。tm00098pdx癌细胞起源于患有3级tnbc浸润性导管癌的患者的原发性肿瘤。当肿瘤体积达到60mm³与120mm³之间时，用以下对小鼠进行处理：每周三次静脉内用10mg/kgot-1096(供体5243n＝5，供体5252n＝7)；或每周三次静脉内用ot-1096的媒剂(供体5243n＝3，供体5252n＝2)；或初始剂量为10mg/kg，此后每周两次腹膜内用5mg/kg派姆单抗(供体5243n＝3，供体5252n＝3)；或每周两次腹膜内用pbs(派姆单抗媒剂)(供体5243n＝1，供体5252n＝3)；或用ot-1096和派姆单抗的组合使用其相应的处理方案(供体5243n＝3，供体5252n＝6)。如果尾静脉肿胀，则在无法静脉内施用测试物质或媒剂时，可以应用腹膜内注射。在研究终点前，对达到身体状况评分≤2、体重减轻≥20％或肿瘤体积>2000mm³的动物实施安乐死。在研究终点前，患有溃疡肿瘤的动物也被实施安乐死。在研究期间，使用数字卡尺测量肿瘤体积，每周两次。进行处理直到第41天处死。收集来自其余动物的肿瘤，并对其浸润的treg水平进行流式细胞术测量。将肿瘤处理成单细胞悬液，并且以10×10⁶细胞/ml的浓度重新悬浮。在art(环境室温)下将肿瘤悬浮液(50μl)与以下抗体在黑暗中孵育15-20分钟：人(hu)cd45fitc克隆hi30(biolegend)、hucd4pecy7克隆sk3(biolegend)、foxp3pe克隆259d(biolegend)、hucd25apc克隆m-a251(biolegend)、hucd3v605克隆okt3(biolegend)、7-aad(biolegend)。使用facscantoii流式细胞仪进行流式细胞仪数据获取。使用bdfacsdiva软件获取数据。基于前向对侧向散射，通过电子门控(p1＝总白细胞)确定细胞群。将流式细胞仪设置成收集100,000个p1事件。计算cd45+细胞的treg的百分比。treg通过可存活的cd45+细胞、cd4+细胞、foxp3+细胞、cd25+细胞、cd3+细胞表征。在流式细胞仪分析中，使用7-aad试剂排除非活细胞。将第38天之前处死的动物和接受多于2个ip剂量的动物从分析中排除。将数据呈现为cd45+细胞的平均值％treg±sem。使用mann-whitney测试确定统计学意义(p<0.05)。

结果和讨论

两种供体的ot-1096处理的肿瘤的肿瘤浸润性treg的水平在第41天均降低(图12)。这通过对肿瘤内的浸润treg进行的流式细胞术测量示出，这揭示已经用ot-1096处理的肿瘤中的treg水平降低(图12)。与媒剂对照相比，用ot-1096单独的处理和ot-1096+派姆单抗组合的处理的treg水平均降低(数据未示出)。

因此，这个实例中的数据进一步证实存在sectrap形成化合物的新功效，其与免疫系统协同作用(或刺激)以对抗癌细胞生长。如本文在其它地方所讨论的，treg在肿瘤微环境中具有免疫抑制作用，并且因此可以抑制抗癌免疫应答。因此，特别是在肿瘤微环境内，消耗treg群体或抑制treg活性是令人期望的。

实例3

用ot-1096进行处理之后分离出的免疫细胞的活力

材料与方法

使用来自以下供体的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的中性粒细胞的活力进行评估：健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)，年龄：27岁(血液采集日期：2017年6月1日)，其中使用葡聚糖沉降分离出中性粒细胞，然后对其进行低渗裂解并且通过histopaque1077(西格玛奥德里奇(sigma-aldrich))进行最终分离。使用mtt测定评估了活力。

使用来自两个不同供体的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的pbmc(外周血单核细胞)的活力进行评估。供体-1：健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)，年龄：23岁(血液采集日期：2017年6月1日)。供体-2：健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)，年龄：40岁(血液采集日期：2017年6月8日)。使用histopaque1077(西格玛奥德里奇)分离出pbmc。使用mtt测定评估了活力。

使用来自以下供体的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的单核细胞的活力进行评估：健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)，年龄：38岁(血液采集日期：2017年6月8日)，其中通过histopaque1077(西格玛奥德里奇)分离出单核细胞，然后使用cd14微珠(目录号130-050-201)用“美天旎生物技术公司(miltenyibiotec)”的minimacs系统对其进行纯化。使用mtt测定评估了活力。

使用来自以下供体的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的cd8+细胞的活力进行评估：健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)，年龄：38岁(血液采集日期：2017年6月21日)，其中通过histopaque1077(西格玛奥德里奇)分离出cd8+细胞，然后使用cd8+t细胞分离剂(目录号130-096-495)用“美天旎生物技术公司”的minimacs系统对其进行纯化。使用mtt测定评估了活力。

使用来自健康男性志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的cd4+细胞的活力进行评估，其中通过histopaque1077(西格玛奥德里奇)分离出cd4+细胞，然后使用cd4+t细胞分离剂(目录号130-096-533)用“美天旎生物技术公司”的minimacs系统对其进行纯化。使用mtt测定评估了活力。

使用来自健康人志愿者(hbsag，hivi&ii阴性)的捐献血液对用ot-1096处理24小时之后的treg(cd4+cd25+foxp3)的活力进行评估，其中通过histopaque1077(西格玛奥德里奇)分离出treg，然后使用cd4+cd25+调节性t细胞分离剂(130-091-301)用“美天旎生物技术公司”的minimacs系统对其进行纯化。使用mtt测定评估了活力。

结果

对用ot-1096处理24小时之后的各种分离出的免疫细胞群的村护理进行评估(图13)。在高达33μm的ot-1096处理下，在任何分离出的免疫细胞群中均未观察到细胞毒性(或细胞毒性较低)。

实例4

用ot-1096、伊尼帕利布或ot-1096和伊尼帕利布的组合之后的移植肿瘤细胞的肿瘤内免疫细胞群

材料与方法

balb/c小鼠的移植4t1细胞内的肿瘤内免疫细胞群。4t1细胞是鼠类乳腺癌细胞系。balb/c小鼠具有免疫活性。将0％基质胶中的1×10⁶个4t1肿瘤细胞原位植入到乳腺脂肪垫中。当肿瘤达到175mm³与200mm³之间的平均体积时，开始将小鼠纳入治疗组中。纳入之后，每天两次瘤内用媒剂、1mg/kg伊尼帕利布、1mg/kgot-1096或ot-1096和伊尼帕利布的组合对小鼠进行bid处理，持续5天(每组n＝10)。在研究的第1天、第3天和第6天使用数字卡尺测量肿瘤体积。在第6天，对小鼠实施安乐死并且切除肿瘤以进行fac分析。对包含cd45+、cd4+、cd8+和treg的鼠类免疫细胞群进行分析。将cd45+阳性细胞分析为活细胞的百分比。将cd4+、cd8+和treg细胞分析为cd45+阳性细胞的百分比。使用mann-whitney测试确定未处理组与处理组之间的统计学意义差异(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001)。

结果

相对于未处理对照，直接注射伊尼帕利布、ot-1096或伊尼帕利布和ot-1096的组合显著提高cd8+水平(图14a)。这示出，与未处理或媒剂对照相比，ot-1096处理之后(或用伊尼帕利布和ot-1096的组合进行处理之后)的肿瘤中的cd8+细胞的浸润增加。相对于未处理对照，cd8+细胞与treg细胞的比率也在统计学上显著提高(图14b)。这示出，与未处理或媒剂对照相比，ot-1096处理之后(或用伊尼帕利布和ot-1096的组合进行处理之后)的肿瘤中的cd8+细胞与treg细胞的比率提高。

数据还指示，与未处理或媒剂对照相比，用伊尼帕利布单独进行处理提高肿瘤中的cd8+水平(图14a)，并且与未处理或媒剂对照相比，用伊尼帕利布单独进行处理提高肿瘤中的cd8+细胞与treg细胞的比率(图14b)。

本领域中已知的是癌症中cd8+/treg比率的增加与较好存活概率相关，并且因此用ot-1096、伊尼帕利布或伊尼帕利布和ot-1096的组合进行处理提高肿瘤中的cd8+细胞与treg细胞的比率这个发现指示此类处理(和用其它sectrap形成剂进行的处理)是有用的癌症疗法并且此类化合物引发抗癌免疫活性并且因此可以在治疗癌症(例如，免疫细胞浸润性癌症，如t细胞浸润性癌症)中特别有用。

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