用于吸入式给药含反义分子的组合物的气溶胶产生装置的制作方法

本发明涉及一种气溶胶产生装置的应用，其用于产生含反义分子的组合物的气溶胶、用于所述组合物的吸入式给药。本发明特别涉及根据权利要求1的应用。
背景技术：
：如果没有其它说明，在下文中术语“表达”和“基因表达”的使用是同义的。此外，在下文中术语“气溶胶”描述的是气体或空气中由固体或液体颗粒构成的混合物，而术语“气雾”描述的是空气中细分布的液滴。呼吸道炎症是最为常见的呼吸道疾病。其经常导致慢性炎症。这样的炎症的一个实例是过敏，其由对人类通常无害的过敏原如花粉、动物毛发、食物、螨虫、防腐剂、着色剂、清洁剂等的过度免疫应答引起。导致慢性炎症的其它典型呼吸道疾病例如是自身免疫疾病如哮喘或慢性阻塞性肺疾病(copd)。在初始炎症反应至慢性炎症的进程中发生结构破坏和改造过程。结果失去了耐受性，即不攻击自生细胞、共生病原体或无关紧要的过敏原的能力。先天和后天的免疫系统的组成部分参与了免疫应答。在此主要是th1-特异性细胞转录因子tbet(其调节th1-细胞的特异性发展)和th2-细胞特异性转录因子gata-3(其调节th2-细胞的特异性发展)起到重要作用。在健康身体中保持着th1细胞与th2细胞之间的平衡。这种平衡可被某些影响打破。就此例如在慢性炎症的情况下，th1细胞与th2细胞之间的平衡通过gata-3的表达或通过tbet的抑制向th2细胞推移。这导致th2细胞占优势，其转而对于许多后期中的慢性炎性疾病是典型的。在其它情况下，如果出现了gata-3的抑制或导致th1细胞水平增加的tbet的表达，存在着th1细胞优势。当前有一种疗法在于，一旦出现th1细胞优势或th2细胞优势，就特异性抑制或“关闭”转录因子gata-3或tbet。以此方式能够重新建立这两种细胞类型之间的平衡。在此的一种可能是，比方通过适宜的反义分子的应用，靶向抑制转录因子gata-3或tbet的基因表达。在wo2005/033314a2中描述了dna酶(dnazym)形式的各种gata-3特异性或tbet特异性反义分子的作用方式。wo2005/033314的公开内容因此被视为本发明的技术背景。特别是在呼吸道疾病的情况下，各种活性物质是吸入式给药的，其中“吸入”描述的是气溶胶或气态活性物质的吸入。吸入是经验证的方法并能实现抵达肺的不同区域的直接途径。以这种方式，活性物质的肺内或经肺给药是可能的。通过吸入使得药剂经肺或经肺内的靶细胞被摄入的可能性，可以成为药剂有效性的重要因素。在此尤其是待吸入颗粒的大小是重要的，其由mmd(质量中值直径)或由mmad(质量中值气动学直径)表征。数目众多的吸入器是已知的，其中通常使用三种器具类型，其分别以它们的操作方式相区别：定量吸入器、粉末吸入器以及特别是气溶胶产生装置。原则上，台式仪器是有缺点的，因为在使用台式仪器的情况下，肺中不能实现靶向的雾化。能吸入多少小液滴，更多地取决于患者的呼吸技巧。气溶胶产生装置(也称为雾化器)从液体容器或溶液中分离出细小的微滴(下文也称为液滴或颗粒)。经此产生能被患者吸入的气溶胶。根据已知三种作用原理划分雾化器。在喷头雾化器的情况下，在一个喷头上强烈的气流产生负压并从毛细管系统中抽出微滴。由于微滴具有不同的大小，使用挡板用以挡住大的微滴。在超声波雾化器的情况下，通过超声波产生微滴。超声波的频率越高，则微滴越细小。膜雾化器的特征在于带有许多微孔或透孔的非常薄的膜，其中膜可具有远多于千个这种透孔。使所述膜发生振荡，经此每个透孔起到泵的作用，且产生具有限定的mmad的微滴。通常反义分子被理解为这样的分子，其或者由大多是单链的rna寡核苷酸和/或dna寡核苷酸构成或者至少具有这样的寡核苷酸成分。寡核苷酸又是由少量核苷酸构成的分子，例如用于聚合酶链反应(pcr)的引物。反义分子具有的大多数核苷酸，其碱基序列与细胞、病毒或合成rna分子或dna分子是互补的，并且可通过watson-crick-碱基配对结合到这些分子上。这种情况例如可用于抑制任意靶向mrna的功能，一般通过反义分子与靶向mrna的特异性结合。不仅在研究中，而且在治疗应用中，使用反义分子，以靶向削弱或完全抑制基因表达。近年来还已知不基于核酸构造的反义分子。这类分子通常具有就其碱基配对能力而言与真的核酸相符的核酸类似物。目前，对于含反义分子的组合物而言，没有借助用于吸入式治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的气溶胶产生装置使用这种组合物的适宜的框架条件或参数。在应用含反义分子的组合物的情况下更多地观察到，各种所使用的气溶胶产生装置的膜在短时间后会被堵塞，因为含反义分子的组合物或溶液是高度粘稠的。技术实现要素：本发明的任务因此在于，实现一种气溶胶产生装置的应用，采用所述装置能够吸入式给药用于治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的含反义分子的组合物。特别是，借助于气溶胶产生装置，所述含反义分子的组合物应当是简单地、可靠地且可重复性施用的并经设定地雾化。根据本发明，该任务通过一种用于产生气溶胶的气溶胶产生装置和相应匹配的用于吸入式给药的组合物而解决，其中所述组合物包含至少一种反义分子，其中使得所述用于产生气溶胶的组合物与膜接触并使所述气溶胶产生装置的膜发生振荡，其中至少一组透孔形成穿孔，其中一组的每个透孔在其最狭窄处具有至少3μm且至多5μm的直径，并且其中所述至少一组透孔具有最多500个透孔每mm2膜。所述含反义分子的组合物特别是液体或溶液。优选所述膜的每个透孔在其最狭窄处具有至少3μm且至多5μm的直径。所述透孔或微孔在此可具有不同的几何形状。它们可以例如是裂口状、多角形或椭圆形或具有孔洞几何形状。现有的孔洞主要以膜的微孔形式使用，其中每块膜具有至少100个微孔或透孔。此外，所述膜通过压电元件激活并使之振动。所述反义分子选自包含dna酶、sirna、asdna或核酶的组。在本申请中优选使用dna酶作为反义分子。然而可选地，所述反义分子也可选自包括以下分子的组：硫代磷酸酯-寡核苷酸(pto)、2′-氟代-rna,fana、2′-o-甲基-寡核苷酸、2′-o-甲氧乙基-寡核苷酸、“约束的乙基寡核苷酸”(cet)、“锁核酸”(lna)、“2′-o,4′-c-亚乙基桥联核酸”(ena)、肽核酸(pna)、吗啉基、ugimere、三环-dna、dna-引物或适体。来自根据本发明的气溶胶产生装置的应用的一项显著优点在于，能够使所述含反义分子的组合物转化为气溶胶，其颗粒具有约4μm的vmdmv(“体积中值直径”)。由于较大颗粒的冲击力，具有小于5μm的颗粒的气溶胶，才能抵达在中呼吸道和下呼吸道中的慢性炎症，以使相应的反义分子，特别是dna酶抵达作用位点并在那里有效地治疗。由此，为粘稠的含反义分子的组合物通过吸入法提供了有效、简便且安全的给药可能性。采用根据本发明的具有振荡膜的气溶胶产生装置的应用，所述膜的微孔分别具有3μm至5μm的直径，能够将通常高粘度的含反义分子的组合物可靠地转化成治疗有效的并可吸入的气溶胶。根据本发明的应用此外允许患者在每次气溶胶产生装置的激活事件下或每个吸入阶段下始终获得设定的活性物质剂量。由此能够安全、可靠并可重复性地给药含反义分子的组合物。透孔的组具有至多500个透孔每mm2膜的特征支持具有至少3μm且至多5μm直径的透孔在微滴成形上的有利效果，即所述含反义分子的组合物被转化成颗粒具有约4μm的vmdmv的气溶胶。就此具有孔密度高于500个透孔每mm2的膜可导致所产生的微滴或颗粒从膜的透孔中出来后直接融合、聚集或合并成较大的颗粒。这另一方面导致所述颗粒或液滴由于冲击力不能或者至少以减少的方式抵达相应的作用位点的缺点。结果所述反义分子或特别是dna酶不能在有慢性炎症的位点发挥其治疗效果。相反，通过根据本发明的具有至多500个透孔每mm2的膜的气溶胶产生装置的应用，为粘稠的含反义分子的组合物通过吸入法提供了有效、简便和安全的给药可能性。此外，通过膜的振荡加强了所述组合物的粉碎而形成具有优选大小的微粒的气溶胶。所述气溶胶产生装置在此优选可携且易控的器具，其也可在紧急情况下使用。装置的能量驱动在此通过电线、通过一个或多个电池或以感应方式而实现。此外通过根据本发明的应用，所述含反义分子的组合物所产生的气溶胶不含有害的驱动气体。所述应用降低了在机体的其它部分中的副作用风险，此外通过反义分子的靶位作用，相比非特异性给药形式，每次给药需要较少的活性物质剂量。此外，所述气溶胶产生装置可提供有芯片技术，例如用以一般性监控患者的状况和顺应性。根据有利的进一步实施方案还可设计使得所述膜接合到压电晶体或压电转换器上，其使所述膜发生振荡。通过该构造，可使所述膜发生振荡，其中优选振荡频率为10khz至150khz。通过振荡，所述膜上下运动数微米并由此如“微泵”起作用，以此其将含反义分子的组合物作为气溶胶沿气溶胶产生装置出口的方向挤压。根据本发明可设计使所述透孔呈锥形构造，其中每个锥形构造的透孔在透孔区域的方向上的直径减小，在所述透孔区域上气溶胶从透孔中逸出。该构造用以在气溶胶中提供尽可能一致大小的微滴。还有利的是，如果膜的穿孔具有至少两组透孔。作为特别优选的变体方案是，在所述气溶胶产生装置的应用下设计使得所述膜具有1mm至8mm的直径，其中特别是设计具有直径为6mm至8mm的膜。另一个有利的实施形式是，所述膜由一种材料制成，其含硅和/或至少一种金属，其中所述金属特别是选自下组的元素：优质钢、镍、钯、钴、不锈钢，和/或是至少两种所述元素的合金。在此特别优选由不锈钢或由镍制成的膜。此外，所述气溶胶产生装置的穿孔膜是圆形、椭圆形或多角形构造的。源自这类材料的膜的应用具有膜的高度稳定性结果。同时这种膜制造便宜。具有这种膜的气溶胶产生装置此外结实并因此耐用。此外有利的是，如果所述组合物具有低于75mg/ml的反义分子浓度。由此在患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者治疗中，使得所述组合物理想地用于吸入式给药。这主要是由于，具有超过75mg/ml反义分子浓度的组合物如此粘稠，使得用气溶胶产生装置不能或很差地以气溶胶给药，因为所述膜穿孔的透孔由于所述组合物的高粘度容易阻塞。具有超过75mg/ml反义分子浓度的组合物此外显示约6％的活性物质损失。这是由于反义分子的三维结构，其易于彼此结块并由此形成聚合物结构。这种特性在dna酶的情况下特别容易观察到。因此特别有利的是，所述组合物具有20mg/ml至50mg/ml的反义分子浓度。在根据本发明施用气溶胶产生装置的应用下，具有20mg/ml至50mg/ml的反义分子浓度的组合物表现出最佳的作用效果。此外可设计的是，所述组合物具有低于3.5mpa·s的粘度。在具有粘度超过3.5mpa·s的组合物的情况下，气溶胶产生装置不容易产生用于粉碎或雾化所述组合物所必要的压力。这转而导致所述膜的透孔或孔洞被阻塞或被填平。通过反义分子浓度低于75mg/ml的组合物显著降低了这种风险。具有这种粘度的组合物借助根据本发明的应用毫无问题地且无显著活性物质损失地可进行吸入式给药。作为优选的变体方案，在根据本发明的应用下设计一种气溶胶产生装置，使得所述透孔的组具有最多200个透孔每mm2膜。作为特别优选的变体方案设计所述透孔的组具有最多50个透孔每mm2膜。将孔洞密度限制到200或甚至50个透孔每mm2加强了孔洞密度的有利效果，以此防止从所述透孔中出来的微滴的融合、聚集或合并。根据本发明具有最多200或最多50个透孔每mm2膜的气溶胶产生装置的应用，使得粘稠的含反义分子组合物据此有效、简便且安全的通过吸入法的给药可能性成为可能。根据所述应用的一种有利构造设计组合物包含至少一种反义分子，所述反义分子选自包含dna酶、sirna、asdna或核酶的组。在此特别是可以设计至少一种特异性下调gata-3表达或特异性下调tbet表达的反义分子。优选在反义分子的情况下涉及dna酶。在此，所述特异性反义分子活体内结合并切割转录因子gata-3和/或tbet的mrna，而它们的蛋白是产生th1依赖性或th2依赖性慢性炎症疾病的中心关键分子。通过这种mrna的切割，mrna不能再转录出功能性蛋白。结果显著最小化gata-3或tbet蛋白水平。根据优选的实施变体方案的设计，所述至少一种反义分子是dna酶。优选所述dna酶选自包含dna酶hdg1至hdg70的组或选自包含dna酶td1至td78的组。在此特别是设计，所述dna酶具有序列hdg40(gtggatggaggctagctacaacgagtcttggag)。这类序列表现出特别高的酶活性并以高特异性以及高效性切割gata-3-mrna。结果是具有序列hgd40(seqidno.40)的dna酶突出地适用于靶向且有效治疗相应于升高的gata-3-水平的th2依赖型呼吸道疾病。根据有利的其它方案，所述组合物可具有至少一种核酸酶抑制剂，其中至少一种核酸酶抑制剂特别地特异性灭活脱氧核糖核酸酶，即一种dnase抑制剂。通过这种核酸酶抑制剂针对dnase的酶促降解保护了至少一种dna酶。含反义分子的组合物的实例列于下表：物质[％w/w]反义分子(dna酶)0.01–0.75核酸酶抑制剂(例如dnase抑制剂)可变量此外可能的是，所述组合物包含至少一种盐和/或至少一种阳离子。这类组合物以有利的方式和方法适用于患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的治疗，因为所述组合物由此具有生理学有利的环境并由此对患者而言是易于耐受的。在此特别是磷酸盐缓冲的盐溶液(pbs)。可替代地也可以使用其它缓冲溶液，其中核酸溶解地存在于生理学有利的环境中，例如te缓冲液。相应地提供无机和/或有机添加剂，其中所述添加剂优选选自包含以下物质的组：氯化钠(nacl)、氯化钾(kcl)、磷酸氢二钠(na2hpo4)、磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钾(kh2po4)、tris和edta。在此阳离子可选自包含na、mg、k、li、ca、fe、cu和ag的组。可替代地还可以提供有机阳离子，例如mg(n(so2cf3)2)2或mg(oso2cf3)2。可替代地使用二价阳离子。这类缓冲的组合物特别适用于反义分子的保护，因为反义分子被无机和/或有机添加剂稳定并针对酶促降解得到保护。此外，所述盐使所述组合物能被良好摄入靶细胞中。所述二价阳离子可以作为反义分子的辅助因子提高反义分子的活性，因为所述反义分子具有一个依赖二价阳离子(优选mg2+)的催化域。由此二价阳离子作为“增强子”或加强剂起作用。根据一个有利的进一步的实施方案，所述组合物可以包含至少一种无机和/或有机添加剂和/或增溶剂和/或防腐剂。所述增溶剂在此主要服务于复合物形成。此外，其改善所述组合物的溶剂特性。作为增溶剂可优选设计有甘油衍生物和/或聚乙二醇或还有卵磷脂。所述防腐剂可例如是对羟基苯甲酸酯。所述含反义分子的组合物可能的额外组分是：此外可提供添加剂，其例如起到改变所述组合物的表面张力或降低所述组合物的粘度的作用。特别是在应用气溶胶产生装置以产生组合物的气溶胶用于吸入法给药以治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的情况下，表现出上述优点和效果。本发明的其它特征、细节和优点由权利要求的字句以及实施例和附图的以下描述加以说明。具体实施方式下表1显示gata-3特异性dna酶hgd1-70，带有根据序列协议的序列-id：下表2显示了根据序列表的tbet-特异性dna酶td1-78及其序列-id：在现有的经测试的气溶胶产生装置中，分别使用具有反义分子浓度低于75mg/ml的组合物。随即测定所产生的气溶胶液滴或微滴的大小。在第一测试阶段，测试带有穿孔的膜而无压电转换器的气溶胶产生装置。用这种气溶胶产生装置不能够雾化用于治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的含反义分子的组合物。在此令人惊奇地发现，通过与具有振荡膜(其中所述膜的透孔具有至少3μm至至多5μm的直径且所述膜具有6mm至8mm的直径)的气溶胶产生装置一起应用具有反义分子浓度低于75mg/ml的组合物，产生具有vmdmv约为4μm的微滴的气溶胶。所述膜的透孔在此不被阻塞。特别是在反义分子浓度介于20mg/ml和50mg/ml之间时观察到这种现象。测试具有不同穿孔膜材料的气溶胶产生装置：不锈钢、优质钢、镍、钯、钴或它们的合金。这些材料表明其相比例如硅、二氧化硅或氮化硅，用于制备所述膜是成本更低廉的。测试具有不同膜透孔/孔洞几何形状的气溶胶产生装置，例如漏斗形钻孔。在此特别是圆柱形和锥形透孔显示很好的液滴形成。用于在膜中钻孔的方法(例如蚀刻技术、激光切割或类似工艺)是技术人员所熟知的。附图说明图1显示含反义分子的组合物的粘度与其浓度的关系的图示。图2显示含反义分子的组合物的粘度测试结果与其浓度的关系。图3显示具有含反义分子的组合物不同反义分子浓度的组合物的fat(“工厂验收测试”)测试结果。图4显示具有反义分子浓度为20mg/ml以及50mg/ml的含反义分子的组合物的fat测试结果。图5显示含反义分子的组合物的测试结果，其通过具有不同穿孔的膜的各种气溶胶产生装置。图1显示含反义分子的组合物的粘度与其浓度的关系的图示。在所展示的实例中，所述反义分子涉及dna酶。所述dna酶在此能特异性下调gata-3的表达和/或tbet的表达。根据优选的实施形式，首先设计反义分子选自包含dna酶hdg1至hdg70的组或选自包含dna酶td1至td78的组。优选使用具有序列gtggatggaggctagctacaacgagtcttggag的dna酶hgd40。hdg40特异性抑制gata-3的表达。在图1中示例性图示含hgd40的组合物的粘度。沿着图1中图示的y轴，所述组合物的粘度以mpa·s记录；x轴以mg/ml给出所述组合物的dna酶浓度。由该图示表明，含dna酶的组合物的粘度基本上指数式增长。在此特别是从浓度为50mg/ml及其以上观察到粘度的剧烈上升。在浓度为约75mg/ml时已经观察到3.5mpa·s的粘度。图2显示含反义分子的组合物的粘度测试结果与其浓度的关系，其中所研究的反义分子是dna酶。表格所示结果证明具有介于50mg/ml和100mg/ml之间的反义分子浓度的含反义分子的组合物的粘度的指数式升高。在此所显示的核酸浓度与粘度之间的相互关系对于其它的、双链dna分子而言不是类似表现的；此外含双链dna的溶液的粘度基本上基于升高的dna浓度是线性升高的。在超过3.5mpa·s的粘度下，气溶胶产生装置所必须达到的压强太高。这可能导致，所述膜的透孔或孔洞被阻塞或填平。该风险通过反义分子浓度低于75mg/ml的组合物被显著最小化，因为这类含反义分子的组合物的粘度低于3.5mpa·s。在图3中展示具有表格中不同反义分子浓度的组合物的fat(“工厂验收测试”)测试结果，其中所述反义分子涉及dna酶，特别是dna酶hgd40。fat可与厂内验收相当，其中应测试一个产品的可应用性。该表格显示，具有反义分子浓度超过75mg/ml的组合物不再能通过测试中的气溶胶产生装置被雾化(为此对比图3表格的第3行)。如果具有反义分子浓度为75mg/ml的组合物在测试的准备阶段经无菌过滤，则反义分子浓度会降低到低于75mg/ml。具有这类dna酶浓度的组合物可以用测试中所使用的气溶胶产生装置雾化(为此对比图3表格的第5和6行)。fat以百分比(dp/ml)给出粘度。通过在此进行的fat，所述粘度必须低于5％。在图3表格第2和第4行中的缩写“wfi”表示“注射用水”并表示测试对照(相应地，所述“wfi”-对照对应于1dp/ml的浓度)。在图4中显示具有反义分子浓度为20mg/ml以及50mg/ml的组合物的fat测试结果。在此所研究的反义分子特别是包括dna酶。结果显示，这类组合物能通过fat并能借助本发明的应用被雾化(为此对比图4表格第3、4、6和7行中的“通过”)。图3和图4的测试结果表明，具有dna酶浓度低于75mg/ml的含反义分子的组合物且在此特别是含dna酶的组合物，借助按照前述特征的气溶胶产生装置，可作为气溶胶使用。由此根据本发明的应用理想地适用于治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者。在此优选使用20mg/ml至50mg/ml的反义分子浓度或dna酶浓度。图5显示一些经测试的气溶胶产生装置的测试结果。测试结果显示，具有根据本发明特征的气溶胶产生装置最佳地适用于产生含反义分子的组合物的气溶胶(图5的b-d列)。在图5中所示的实例，反义分子涉及的是dna酶。通过使组合物与气溶胶产生装置处于振荡中的膜接触的方式，在b-d列的器具的情况下产生气溶胶。根据本发明证明由至少一组透孔形成穿孔的膜，其中所述透孔在其最狭窄处具有介于3μm和5μm的直径(图5，b5、c5和d5格)，并且其中所述透孔的组具有最多500个透孔每mm2膜(图5，b6、c6和d6格)。在此产生具有约4μm大小的微滴或颗粒(图5，b11-13、c14、d12和d14格)，其被视为最佳的用于治疗患有伴随慢性炎症的呼吸道疾病的患者的含反义分子的组合物的气溶胶产生。具有优选大小的微滴的形成将通过膜的振荡而加强。透孔在其最狭窄处具有小于3μm的直径(图5，5a格)或具有超过500个透孔每mm2的膜(图5，6a格)的器具，导致具有大于5μmvmdmv大小的微滴的气溶胶(图12a、13a和14a)。这种大小的微滴具有缺点，即它们由于冲击力不能或至少仅以大幅减少的方式抵达它们相应的作用位点。结果是，所述反义分子或特别是dna酶不能在存在慢性炎症的所述位点发挥其治疗效果。对此原因尤其是孔洞密度：在超过500个透孔每mm2膜的孔洞密度下可导致所产生的微滴或颗粒从透孔中出来后直接融合、聚集或合并成较大的颗粒。序列表<110>燕鸥生物制剂有限两合公司<120>用于吸入式给药含反义分子的组合物的气溶胶产生装置<140>ep2018<141>2018-07-30<160>148<170>bissap1.3.5<210>1<211>33<212>dna<213>智人<400>1tcggtcagaggctagctacaacgatgcgttgct33<210>2<211>33<212>dna<213>智人<400>2ggcgtacgaggctagctacaacgactgctcggt33<210>3<211>33<212>dna<213>智人<400>3ggcggcgtaggctagctacaacgagacctgctc33<210>4<211>33<212>dna<213>智人<400>4ctcgggtcaggctagctacaacgactgggtagc33<210>5<211>33<212>dna<213>智人<400>5tcctctgcaggctagctacaacgacggggtcct33<210>6<211>33<212>dna<213>智人<400>6actctgcaaggctagctacaacgatctgcgagc33<210>7<211>33<212>dna<213>智人<400>7gggcgacgaggctagctacaacgatctgcaatt33<210>8<211>33<212>dna<213>智人<400>8aaggggcgaggctagctacaacgagactctgca33<210>9<211>33<212>dna<213>智人<400>9aaaacgggaggctagctacaacgacaggttgta33<210>10<211>33<212>dna<213>智人<400>10agaataaaaggctagctacaacgagggaccagg33<210>11<211>33<212>dna<213>智人<400>11atggcagaaggctagctacaacgaaaaacggga33<210>12<211>33<212>dna<213>智人<400>12aactgggtaggctagctacaacgaggcagaata33<210>13<211>33<212>dna<213>智人<400>13atccaaaaaggctagctacaacgatgggtatgg33<210>14<211>33<212>dna<213>智人<400>14aggggaagaggctagctacaacgaaaaaatcca33<210>15<211>33<212>dna<213>智人<400>15ttttaaaaaggctagctaca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