止血材料的制作方法

1.本发明涉及止血材料。


背景技术：

2.血小板在止血方面起到关键的作用，血液中的血小板向血管的粘附或血液中的血小板的凝集是止血的重要的契机。为了弥补血小板数的减少或血小板的功能障碍，或者应对大量出血，大量尝试了人工制作模拟血小板(血小板替代物)。作为这样的血小板替代物，例如，尝试制作了担载有存在于血小板膜表面的与向血管壁的粘附或者血小板彼此的凝集相关的蛋白质、血小板彼此凝集时作为其媒介的蛋白质、或者作为这些蛋白质的活性部位的肽的脂质微粒。发挥血小板的粘附或者凝集的关键作用的是存在于膜表面的糖蛋白gpib和作为血浆蛋白的血管性血友病因子(vwf)系、或者gpiib/iii与纤维蛋白原系，因此已知表面具有gpib的脂质颗粒(专利文献1)、表面担载有源自纤维蛋白原的十二肽(h12)的脂质颗粒(专利文献2、非专利文献1和非专利文献2)等可用作血小板的替代物。
3.一方面，已知含有羧酸型脂质、磷脂和胆甾醇、表面不具有h12肽的脂质颗粒、以及含有羧酸型脂质、磷脂和胆甾醇、表面具有h12肽的脂质颗粒均具有血小板凝集促进作用，但是表面不具有h12肽的脂质颗粒与表面具有h12肽的脂质颗粒相比，血小板凝集促进作用小(非专利文献2)。
4.现有技术文献专利文献专利文献1 : 国际公开第01/064743号公报专利文献2 : 日本特开2005
‑
239549号公报非专利文献非专利文献1 : 第32回生物材料学会大会予稿集、324页非专利文献2 : 第33回生物材料学会大会予稿集、319页。


技术实现要素：

5.发明要解决的技术问题本发明的目的在于，提供含有即使不担载gpib、h12等参与血小板的粘附或凝集的蛋白质或作为其活性部位的肽，也可促进血小板的粘附或凝集的脂质的止血材料。
6.用于解决课题的手段为了解决上述课题，本发明提供以下的发明。
7.[1]止血材料，其具有水不溶性的基材和担载于前述基材表面的脂质，前述脂质含有1种或2种以上的阴离子性脂质。
[0008]
[2]根据[1]所述的止血材料，其中，前述基材是多孔基材，前述脂质担载于前述多孔基材的微孔的表面。
[0009]
[3]根据[2]所述的止血材料，其中，前述脂质占据前述多孔基材的微孔的至少一
部分。
[0010]
[4]根据[2]或[3]所述的止血材料，其中，前述多孔基材为纤维基材。
[0011]
[5]根据[4]所述的止血材料，其中，前述脂质相对于前述纤维基材的担载量为相对于前述纤维基材的俯视面积为1~1000g/m 2
。
[0012]
[6]根据[1]~[5]中任一项所述的止血材料，其还具有支撑前述基材的支撑部件。
[0013]
[7]根据[6]所述的止血材料，其中，前述支撑部件具有吸液性。
[0014]
[8]根据[1]~[7]中任一项所述的止血材料，其中，前述1种或2种以上的阴离子性脂质含有选自以下的式(i)~(vi)表示的羧酸型脂质中的1种或2种以上的羧酸型脂质:[化1][化2][化3][化4][化5][化6][式(i)~(vi)中，m表示ho
‑
或m0‑
nh
‑
，m0表示在生理ph下可带负电的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐，r表示烃基，l表示
‑
co
‑
o
‑
、
‑
o
‑
co
‑
、
‑
co
‑
nh
‑
、
‑
nh
‑
co
‑
、
‑
co
‑
s
‑
、
‑
s
‑
co
‑
或
‑
s
‑
s
‑
，x表示烃基、中性氨基酸残基或聚亚烷基二醇残基，p表示0以上的整数，
q表示0以上的整数，y表示由支链主体部和键合于前述支链主体部的以下的式(viii)表示的1个以上的基团y2构成的支链，所述支链主体部由以下的式(vii)表示的1个以上的单元y1构成，或者y表示由1个基团y2构成的直链，[化7][化8]式(vii)和(viii)中，r、l、x、p和q与上述同义，(*b1)、(*b2)和(*b3)表示各单元y1的键合位，(*b4)表示各基团y2的键合位，各单元y1的键合位(*b1)与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合，或者与构成前述支链本体部的别的单元y1的键合位(*b2)或(*b3)键合，各基团y2的键合位(*b4)与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合，或者与构成前述支链本体部的任意的单元y1的键合位(*b2)或(*b3)键合，z表示由支链本体部与键合于前述支链本体部的选自以下的式(x)和(xi)表示的基团中的1个以上的基团z2构成的支链，所述支链本体部由以下的式(ix)表示的1个以上的单元z1构成，或者z表示由1个基团z2构成的直链，[化9][化10][化11]式(ix)、(x)和(xi)中，m、l、x、p和q与上述同义，(*c1)、(*c2)和(*c3)表示各单元z1的键合位，(*c4)和(*c5)表示各基团z2的键合位，各单元z1的键合位(*c1)与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合，或者与构成前述支链本体部的别的单元z1的键合位(*c2)或(*c3)键合，各基团z2的键合位(*c4)或(*c5)与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合，或者与构成前述
支链本体部的任意的单元z1的键合位(*c2)或(*c3)键合。
[0015]
[9]根据[8]所述的止血材料，其中，m0表示的前述氨基酸残基为酸性氨基酸残基或中性氨基酸残基。
[0016]
[10]根据[9]所述的止血材料，其中，前述酸性氨基酸残基为天冬氨酸残基或谷氨酸残基。
[0017]
[11]根据[8]所述的止血材料，其中，m0表示的前述氨基酸衍生物的残基为碱性氨基酸衍生物的残基，导入前述碱性氨基酸衍生物的衍生物化为将碱性氨基酸的侧链的氨基酰胺化成下式:
‑
nh
‑
co
‑
r1[式中，
‑
nh
‑
源自前述碱性氨基酸的侧链的氨基，r1表示烃基]表示的基团。
[0018]
[12]根据[8]所述的止血材料，其中，m0表示的前述肽残基为由2~7个氨基酸残基构成的肽残基。
[0019]
[13]根据[8]或[12]所述的止血材料，其中，m0表示的前述肽残基为含有1个或2个以上的酸性氨基酸残基的肽残基。
[0020]
[14]根据[13]所述的止血材料，其中，m0表示的前述肽残基为含有选自天冬氨酸残基和谷氨酸残基中的2个以上酸性氨基酸残基的肽残基。
[0021]
[15]根据[14]所述的止血材料，其中，m0表示的前述肽残基为以下的式(xii)表示的肽残基:[化12][式中，相同或不同，m表示1或2。][16]根据[8]~[15]中任一项所述的止血材料，其中，前述盐选自钙盐、镁盐、钠盐和钾盐。
[0022]
[17]根据[8]~[16]中任一项所述的止血材料，其中，y选自以下的式(xiii)、(xiv)、(xv)和(xvi)表示的直链和支链:[化13][化14][化15]
[化16][式(xiii)~(xvi)中，y1表示1个单元y1，y2表示1个基团y2，(*b)表示与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合的单元y1的键合位。][18]根据[8]~[17]中任一项所述的止血材料，其中，z选自以下的式(xvii)、(xviii)、(xix)和(xx)表示的直链和支链:[化17][化18][化19][化20][式(xvii)~(xx)中，z1表示1个单元z1，z2表示1个基团z2，(*c)表示与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合的单元z1的键合位。][19]根据[1]~[18]中任一项所述的止血材料，其中，前述1种或2种以上的阴离子性脂质含有选自磷脂和甾醇中的1种或2种以上的脂质。
[0023]
[20]根据[1]~[19]中任一项所述的止血材料，其中，前述脂质以选自脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜中的1种或2种以上的形态担载于前述基材表面。
[0024]
[21]根据[20]所述的止血材料，其中，前述脂质颗粒、前述脂质颗粒的凝集体和前述脂质膜的表面在生理ph下带负电。
[0025]
[22]根据[21]所述的止血材料，其中，前述脂质颗粒或前述脂质颗粒的凝集体在生理条件下具有
‑
12mv以下的zeta 电位。
[0026]
[23]根据[20]~[22]中任一项所述的止血材料，其中，前述脂质颗粒和构成前述脂质颗粒的凝集体的脂质颗粒具有30~5000nm的平均粒径。
[0027]
[24]根据[20]~[23]中任一项所述的止血材料，其中，前述脂质颗粒和构成前述脂质颗粒的凝集体的脂质颗粒为选自脂质体、胶束、纳米球、微球、纳米晶体和微晶中的形态。
[0028]
[25]根据[20]所述的止血材料，其中，前述脂质膜具有10~1000nm的厚度。
[0029]
发明效果根据本发明，提供含有即使不担载gpib、h12等参与血小板的粘附或凝集的蛋白质或作为其活性部位的肽，也可促进血小板的粘附和/或凝集的脂质的止血材料。本发明的脂质含有在生理ph下带负电的阴离子性脂质，在生理ph下带负电。本发明的脂质不担载以往已知的构成gpib
‑
vwf系或gpiib/iii
‑
纤维蛋白原系的蛋白质或作为其活性部位的肽，通过与多个血小板结合，可促进血小板的粘附和/或凝集。这样，本发明的止血材料通过活用本发明的脂质的血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进，可发挥以往的止血材料所没有的强大的止血作用。
附图说明
[0030]
[图1] 图1为示意性地示出本发明的一个实施方式的止血材料的截面图。
[0031]
[图2] 图2是图1中的符号s所示的区域的放大图。
[0032]
[图3a] 图3a是显示血小板凝集块中的荧光标记脂质体的观察结果(使用以did标记了的脂质体分散液得到的血小板凝集块的荧光显微镜照片)的图。
[0033]
[图3b] 图3b是显示血小板凝集块中的荧光标记脂质体的观察结果(使用以dio标记了的脂质体分散液得到的血小板凝集块的荧光显微镜照片))的图。
[0034]
[图3c] 图3c是显示血小板凝集块中的荧光标记脂质体的观察结果(使用以did标记了的脂质体分散液得到的血小板凝集块的荧光显微镜照片)的图。
[0035]
[图4] 图4是显示使用将脂质体担载于胶原蛋白基材而制作的止血材料进行止血的情况下的出血量的图。
[0036]
[图5] 图5是显示使用将脂质体担载于胶原蛋白基材而制作的止血材料进行止血的情况下的止血时间的图。
[0037]
[图6] 图6是使用将脂质体担载于胶原蛋白基材而制作的止血材料进行止血的情况下的血小板附着率的图。
[0038]
[图7] 图7是显示关于止血材料的血小板凝集能力评价(in vitro)的结果的图。
[0039]
[图8] 图8是显示关于止血材料的血小板凝集能力评价(in vitro)的结果的图。
[0040]
[图9] 图9是显示基材的sem观察图像的图。
[0041]
[图10] 图10是显示担载于基材的dppa的sem观察图像的图。
[0042]
[图11] 图11显示担载于基材的dhsg的sem观察图像的图。
[0043]
[图12] 图12是显示担载于基材的asp
‑
dhsg的sem观察图像的图。
[0044]
[图13] 图13是显示担载于基材的glu
‑
dhsg的sem观察图像的图。
[0045]
[图14] 图14是显示担载于基材的ag
‑
dhsg的sem观察图像的图。
[0046]
[图15] 图15是担载于基材的dmps的sem观察图像的图。
[0047]
[图16] 图16是显示担载于基材的dspg的sem观察图像的图。
[0048]
[图17] 图17是显示担载于基材的dhsg的sem观察图像的图(图11的放大图)。
[0049]
[图18] 图18是显示担载于基材的asp
‑
dhsg的sem观察图像的图(图12的放大图)。
[0050]
[图19] 图19是显示担载于基材的glu
‑
dhsg的sem观察图像的图(图13的放大图)。
[0051]
[图20] 图20是显示担载于基材的ag
‑
dhsg的sem观察图像的图(图14的放大图)。
具体实施方式
[0052]
以下详细说明本发明。要说明的是，本说明书中，“数值a~数值b”表示数值a以上且数值b以下。
[0053]
止血材料本发明的止血材料具有水不溶性的基材和担载于该基材表面的脂质，该脂质含有1种或2种以上的阴离子性脂质。本发明的止血材料根据需要可以具有支撑基材的支撑部件。
[0054]
使用本发明的止血材料止血时，例如以基材表面与患部(出血部位)接触的方式将本发明的止血材料贴附于患部。由患部流出的血液与担载于基材表面的脂质接触。如果担载于基材表面的脂质与血液接触，则担载于基材表面的脂质中含有的阴离子性脂质成为带负电的状态。带负电的阴离子性脂质与多个血小板(特别是活化了的血小板)结合，可促进血小板的粘附和/或凝集，进而可促进血液的凝固。由此，本发明的止血材料可促进血液的止血作用。
[0055]
在作为基材使用多孔基材、特别是纤维基材的实施方式中，本发明的止血材料的止血作用可特别有效地发挥。具体而言，通过将具有血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进作用的脂质担载于多孔基材，即，脂质具有血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进作用的同时，通过这样的脂质担载于多孔基材，脂质可高效地作用于渗透至多孔基材的微孔的血液中的血小板，由此，特别有效地发挥本发明的止血材料的止血作用。
[0056]
以往，大多使用作为基材本身采用胶原蛋白、明胶等具有血小板活化作用的物质的止血材料。但是，这样的方法中，患者的血小板数或血小板的功能必须充分。与此相对，本发明的止血材料中，基材和担载于基材的脂质成为血小板的粘附和/或凝集的场所而发挥替代血小板的作用。因此，本发明的止血材料在由于大量出血等血小板数减少的患者、血小板的功能低的患者、相反地生物体内血小板发生过度活化，血液中的正常血小板数减少，难以发生血小板凝集的患者等中也可有效地使用。
[0057]
另外，在作为基材使用多孔基材、特别是纤维基材的实施方式中，多孔基材、特别是纤维基材不仅是担载包括阴离子性脂质的脂质的场所，还是活化了的血小板粘附的场所，同时担负着稳定地保持血小板的凝集块的作用。通过担载于基材的脂质凝集了的血小板的凝集块(血小板血栓)以卷入基材的形式保持，由此可更早期地形成稳定的纤维蛋白血栓，得到以往的基材没有的迅速、强的止血效果。
[0058]
因此，本发明的止血材料在由于压迫困难用以往的止血材料得不到充分的止血効果的腹腔镜手术时、需要使用大量肝素等抗凝剂的体外循环时、或者服用抗血小板药的患者中也有用。
[0059]
≪
基材
≫
本发明的止血材料具有水不溶性的基材。
[0060]
水不溶性的基材具有在与血液接触的状态下优选在5分钟以上、进一步优选10分钟以上、更进一步优选20分钟以上不溶解的性质。
[0061]
基材的材料只要是不溶性的，可担载脂质则没有特别限定。基材的材料优选为生物降解性材料。生物降解性是指在生物体内分解、溶解、被吸收或代谢的性质，或者由生物体内排出至生物体外的性质。作为分解反应，可列举例如水解、酶解、或微生物分解等。作为生物降解性材料，可列举例如生物降解性聚合物等。
[0062]
作为生物降解性聚合物，可列举例如聚乳酸、聚乙二醇、聚乙醇酸、聚己内酯、聚二噁烷酮等的均聚物、乳酸
‑
乙醇酸共聚物、乳酸
‑
己内酯共聚物等的乳酸共聚物、聚甘油癸二酸酯、聚羟基烷酸、聚丁二酸丁二醇酯等的脂肪族聚酯、瓜儿胶、普鲁兰多糖、卡拉胶、琼脂糖、纤维素、氧化纤维素、几丁质、几丁聚糖、葡萄糖胺多糖等多糖类、胶原蛋白、明胶等的蛋白质及其改性物等。这些生物降解性聚合物可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。
[0063]
当然可以在基材上担载促进血液凝固的蛋白质。作为这样的蛋白质的代表，可列举例如纤维蛋白原、vwf、纤连蛋白、玻连蛋白、凝血酶、凝血因子xa等，特别是优选使用纤维蛋白原或凝血酶。
[0064]
聚乳酸和乳酸共聚物中的单体可以是l
‑
乳酸和d
‑
乳酸的任一种，优选为l
‑
乳酸。
[0065]
生物降解性聚合物的重均分子量优选为3000~2000000、进一步优选为30000~1000000。
[0066]
生物降解性聚合物优选纯度高。具体而言，生物降解性聚合物中含有的添加剂、增塑剂、残留催化剂、残留单体、成型加工、后加工中使用的残留溶剂等残留物优选少。特别是，关于在医疗领域中制定了安全性基准值的物质，优选将其含量抑制为小于基准值。
[0067]
为了增加担载于基材表面的脂质的量，基材优选为单位质量的表面积(比表面积)大的基材。作为比表面积大的基材，可列举例如多孔基材等。
[0068]
多孔基材为具有很多微孔的基材。多孔基材表面除了外表面还包括内表面(微孔的表面)。微孔可以为贯通基材的贯通孔，也可以是不贯通基材的非贯通孔。多孔基材可具有贯通孔和非贯通孔的一者或两者。多个微孔可以连通。特别是为贯通孔可带来特别优选的结果。微孔可以为小孔、中孔和大孔的任一种。微孔的大小(微孔直径)只要可将脂质担载于微孔的表面则没有限定，可根据脂质的形态(例如脂质的形态为颗粒时为粒径等、脂质的形态为膜时为膜厚等)适当调节。微孔的大小优选为在多孔基材与血液接触时可产生使血液渗透至多孔基材内部的毛细管现象的程度的大小。以下有时将多孔基材的微孔称为多孔基材的空隙。
[0069]
多孔基材的比表面积优选为0.3~15.0m 2
/g、更优选为0.5~10.0m 2
/g、进一步优选为0.7~7.0m 2
/g。比表面积例如可通过bet法测定。
[0070]
多孔基材的空隙率优选为30~99.9%、更优选为50~99.8%、进一步优选为60~99.7%。空隙率例如可如下测定。通过离子铣装置(例如日立high
ꢀ‑
technologies 公司制im4000型，其同等品等)切出厚度方向的截面，通过扫描型电子显微镜(sem)观察。可将与截面接触的空隙部和非空隙部二值化，将空隙部的面积相对于整体面积的面积率定义为空隙率(%)。
[0071]
作为多孔基材，可列举例如纤维基材、海绵等，这些中优选纤维基材。
[0072]
纤维基材为将纤维材料成型得到的结构物。纤维基材优选为纤维片材。作为纤维基材，可列举例如纸、无纺布、机织布、针织布等。要说明的是，无纺布包括通过针刺、水流等的交缠处理等使纤维交缠得到的无纺布、和没有进行交缠处理的网状的无纺布。作为构成纤维基材的纤维，可列举生物降解性聚合物纤维、合成树脂纤维等。关于构成生物降解性聚合物纤维的生物降解性聚合物的说明与上述相同。作为构成合成树脂纤维的合成树脂，可列举例如聚乙烯树脂、聚丙烯树脂、聚甲基戊烯树脂、烯烃系热塑性弹性体等聚烯烃树脂；聚氯乙烯树脂、聚偏二氯乙烯树脂、聚乙烯醇树脂、氯乙烯
‑
乙酸乙烯酯共聚树脂、乙烯
‑
乙酸乙烯酯共聚树脂、乙烯
‑
乙烯醇共聚树脂等乙烯基系树脂；聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂、聚对苯二甲酸丁二醇酯树脂、聚萘二甲酸间苯二甲酸乙二醇酯共聚树脂、聚酯系热塑性弹性体等聚酯树脂；聚(甲基)丙烯酸甲酯树脂、聚(甲基)丙烯酸乙酯树脂、聚(甲基)丙烯酸丁酯树脂等丙烯酸树脂；尼龙6或尼龙66等为代表的聚酰胺树脂；三乙酸纤维素树脂、赛璐玢等纤维素系树脂；聚苯乙烯树脂；聚碳酸酯树脂；聚丙烯酸树脂；聚酰亚胺树脂等。
[0073]
构成纤维基材的纤维的直径优选为0.2~10μm、更优选为0.3~6.0μm、更进一步优选为0.5~3.0μm。纤维的直径优选为纤维截面的直径。纤维截面的形状不限于圆形，也可以为椭圆形等。纤维截面为椭圆形时，将椭圆形的长轴方向的长度和短轴方向的长度的平均值作为纤维截面的直径。纤维截面不是圆形或椭圆形时，可以近似为圆形或椭圆形算出纤维截面的直径。纤维截面的直径例如可将用扫描型电子显微镜拍摄的照片用图像处理软件(winroof(注册商标))处理而测定。
[0074]
纤维基材例如可通过静电纺丝法、纺粘法、熔喷法等形成。这些中优选使用静电纺丝法(electrospinning法、电喷雾法)或熔喷法。静电纺丝法是向将聚合物溶解于溶剂中得到的聚合物溶液施加高电压，喷出带电的聚合物溶液进行纺丝的方法。作为步骤，包括使聚合物溶解于溶剂而制备聚合物溶液的步骤、向该聚合物溶液施加高电压的步骤、喷出该聚合物溶液的步骤、和由喷出的聚合物溶液蒸发溶剂形成纤维的步骤。
[0075]
纤维基材的坪量(单位面积的重量)优选为5~200g/m 2
、更优选为10~100g/m 2
、更进一步优选为15~50g/m 2
。坪量按照jis l 1913:1998 6.2测定。
[0076]
纤维基材的厚度优选为0.03~10mm、更优选为0.05~5mm、更进一步优选为0.1~3mm。纤维基材的厚度在无负荷下测定。纤维基材的不同部分厚度不同的情况下，优选最小厚度和最大厚度二者在上述范围内。
[0077]
≪
支撑部件
≫
本发明的止血材料可以具有支撑基材的支撑部件。支撑部件是根据需要设置的部件。从提高本发明的止血材料的处理容易性的角度考虑，本发明的止血材料优选具有支撑基材的支撑部件。
[0078]
支撑部件优选为水不溶性的。通过支撑部件为水不溶性的，使用本发明的止血材料时，容易保持本发明的止血材料的形态。水不溶性的支撑部件具有在与血液接触的状态下优选为5分钟以上、更优选为10分钟以上、更进一步优选为20分钟以上不溶解的性质。
[0079]
支撑部件具有吸液性。吸液性优选为除了吸收血液等液体的吸收性以外，还兼备保持所吸收的液体的液体保持性的性质。通过支撑部件具有吸液性，对本发明的止血材料的止血能力的提高有用。
[0080]
本发明的止血材料具有支撑部件的情况下，基材直接或隔着其它层层叠在支撑部
件上。支撑部件具有吸液性的情况下，优选基材和支撑部件连通，以使从基材侧渗透的血液被支撑部件吸收。
[0081]
支撑部件可以为生物降解性的，也可以为非生物降解性的。作为生物降解性材料，可列举例如生物降解性聚合物等。关于生物降解性聚合物的说明与上述相同。作为非生物降解性材料，可列举例如纤维素类、合成树脂等。作为纤维素类，可列举例如纤维素、羧甲基纤维素、纤维素酰化物(例如纤维素三乙酸酯、纤维素二乙酸酯等)、木质纤维素等维素类(纤维素或纤维素衍生物)。关于合成树脂的说明与上述相同。
[0082]
作为支撑部件(特别是具有吸液性的支撑部件)，可列举例如纤维基材、海绵、交联聚丙烯酸钠等的高吸水性树脂等。关于纤维基材的说明与上述相同。
[0083]
当然可以在支撑部件上担载促进血液凝固的蛋白质。作为这样的蛋白质的代表，可列举例如纤维蛋白原、vwf、纤连蛋白、玻连蛋白、凝血酶、凝血因子xa等，特别优选使用纤维蛋白原或凝血酶。
[0084]
支撑部件的厚度优选为0.05~30mm、更优选为0.1~10mm、更进一步优选为0.1~5mm。支撑部件的厚度在无负荷下测定。支撑部件的不同部分厚度不同的情况下，优选最小厚度和最大厚度二者在上述范围内。
[0085]
≪
脂质
≫
本发明的止血材料具有担载在基材表面的脂质，该脂质含有1种或2种以上的阴离子性脂质。如果担载在基材表面的脂质与血液接触，则担载在基材表面的脂质中含有的阴离子性脂质成为带负电的状态。带负电的阴离子性脂质可与多个血小板(特别是活化了的血小板)结合，促进血小板的粘附和/或凝集，进而可促进血液的凝固。由此，本发明的止血材料可促进血液的止血作用。通过具有血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进作用的脂质担载于多孔基材、特别是纤维基材，即通过除了脂质具有血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进作用，脂质还担载于多孔基材、特别是纤维基材，可特别有效地发挥本发明的止血材料的止血作用。
[0086]
血小板粘附促进作用是促进血小板向任意部位或部件(例如担载脂质的基材、特别是多孔基材)粘附的作用。即，阴离子性脂质可促进阴离子性脂质存在的部位或部件中的血小板的粘附。血小板凝集促进作用是促进血小板彼此的粘接(凝集)的作用。即，阴离子性脂质可促进阴离子性脂质存在的部位或部件中的血小板彼此的粘接(凝集)。但是，在实际的血栓形成中，血小板的粘附和凝集几乎同时发生，大多数情况下无法区别。
[0087]
本发明的止血材料中，脂质例如以选自脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜中的1种或2种以上形态担载于基材表面。要说明的是，以下有时将脂质颗粒的凝集体称为脂质颗粒的集合体。
[0088]
基材为多孔基材、特别是纤维基材的情况下，优选脂质例如以选自脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜中的1种或2种以上形态以占据多孔基材的微孔的至少一部分的形式存在。占据多孔基材的微孔的至少一部分的脂质的存在在将高用量的脂质担载在基材上时特别有效。
[0089]
一个实施方式中，脂质以脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体的形态担载于基材表面。例如脂质的一部分以脂质颗粒的形态、脂质的其余部分以脂质颗粒的凝集体的形态担载于基材表面。
[0090]
在另外的实施方式中，脂质以脂质膜的形态担载于基材表面。脂质膜的表面可以形成凹凸。要说明的是，脂质由表面平坦的脂质膜和担载在该脂质膜的平坦表面上的脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体构成的情况下，该脂质属于表面形成凹凸的脂质膜。
[0091]
在又一另外的实施方式中，脂质以脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜的形态担载于基材表面。例如，脂质的一部分以脂质颗粒的形态、脂质的另外一部分以脂质颗粒的凝集体的形态、脂质的其余部分以脂质膜的形态担载在基材表面。
[0092]
脂质的形态为脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体的情况下，可与血小板接触的脂质的表面增加，因此可更有效地发挥上述作用效果。例如，担载于基材表面的脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体的一部分或全部与血液接触后，由基材游离并作用于血小板的情况下，可更有效地发挥上述作用效果。
[0093]
脂质的形态为脂质膜的情况下，脂质膜与血液接触后可以维持膜的形态，也可以不维持膜的形态。脂质膜与血液接触后维持膜的形态的情况下，通过脂质膜中含有的阴离子性脂质发挥上述作用效果。脂质膜与血液接触后不维持膜的形态的情况下，可列举例如脂质膜的一部分或全部被血液中的水分水合，形成脂质颗粒，所形成的脂质颗粒由基材游离的情况。脂质膜的一部分被血液中的水分水合形成脂质颗粒，所形成的脂质颗粒由基材游离的情况下，通过脂质颗粒中含有的阴离子性脂质和残留的脂质膜中含有的阴离子性脂质发挥上述作用効果。脂质膜的全部被血液中的水分水合形成脂质颗粒，所形成的脂质颗粒由基材游离的情况下，通过脂质颗粒中含有的阴离子性脂质发挥上述作用効果。由脂质膜的一部分或全部形成脂质颗粒，所形成的脂质颗粒由基材游离，由此阴离子性脂质作用于血小板的机会增加，因此更有效地发挥上述作用効果。要说明的是，本说明书中关于脂质颗粒的说明除了特别规定的情况，除了担载于基材表面的脂质颗粒，也适用于由担载于基材表面的脂质膜形成的脂质颗粒。
[0094]
脂质以能够与血液接触的方式担载于基材表面。基材为多孔基材的情况下，脂质担载于多孔基材的微孔的表面。基材为纤维基材的情况下，脂质担载于纤维基材的微孔的表面。纤维基材的微孔通过多个纤维交缠而形成，纤维基材的微孔的表面通过多个纤维的表面形成。脂质具有脂质膜的形态的情况下，脂质膜例如以跨多个纤维間的方式担载于纤维基材的微孔的表面。对脂质在基材上的担持方式没有特别限定。作为脂质在基材上的担持方式，可列举例如物理吸附、共价键、氢键、配位键、静电相互作用、疏水性相互作用、范德华力等。要说明的是，本发明的止血材料中含有的脂质没有必要全部直接担载于基材表面(即，与基材表面接触)，脂质通过脂质彼此的相互作用力集合形成颗粒、膜的形态的情况下，脂质的一部分直接担载于基材表面即可。另外，本发明的止血材料可以含有2个以上脂质颗粒结合形成的脂质颗粒的集合体，脂质颗粒的集合体除了以直接担载于基材表面的状态(即与基材表面接触的状态)与其它脂质颗粒结合的脂质颗粒，还可以含有以不直接担载于基材表面的状态(即不与基材表面接触的状态)结合于其它脂质颗粒的脂质颗粒。基材为多孔基材、特别是纤维基材的情况下，脂质颗粒、脂质颗粒的集合体或脂质膜可占据基材的空隙的一部分，占据基材的空隙的一部分的脂质颗粒、脂质颗粒的集合体或脂质膜的存在对在基材上担载高用量的脂质时特别有效。脂质颗粒和/或脂质颗粒的集合体可以担载于在基材表面上担载的脂质膜的表面。
[0095]
脂质在基材上的担载量只要可发挥脂质的血小板粘附作用和/或血小板凝集作用
(进而本发明的止血材料的止血作用)就没有特别限定。要说明的是，脂质在基材上的担载量是直接担载于基材表面的脂质的担载量与通过直接担载于基材表面的脂质间接担载于基材表面的脂质的担载量的总和。例如，脂质具有脂质颗粒的形态的情况下，脂质颗粒在基材上的担载量是直接担载于基材表面的脂质颗粒的担载量与通过1个或2个以上其它脂质颗粒间接担载于基材表面的脂质颗粒的担载量的总和。即，本发明的止血材料包括2个以上脂质颗粒结合形成的脂质颗粒的集合体的情况下，在基材上的脂质颗粒的担载量中也包括在基材上的脂质颗粒的集合体的担载量。基材为多孔基材(特别是纤维片材)的情况下，关于脂质的担载量，相对于多孔基材的俯视面积，优选为1~1000g/m2，更优选为2~500g/m2，更进一步优选为5~100g/m2。要说明的是，俯视面积为俯视下的多孔基材的面积。基材为多孔基材(特别是纤维片材)的情况下，脂质的担载量以多孔基材的重量为基准，优选为0.1~300重量%，更优选为1~200重量%，更进一步优选为5~100重量%。
[0096]
本发明的止血材料具有支撑基材的支撑部件的情况下，本发明的止血材料除了担载于基材表面的脂质，还可以含有担载于支撑部件的表面的脂质。担载于支撑部件的表面的脂质的形态与担载于基材表面的脂质的形态相同。担载于支撑部件的表面的脂质以例如选自脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜中的1种或2种以上的形态担载于支撑部件的表面。关于担载于支撑部件的表面的脂质的说明与关于担载于基材表面的脂质的说明相同。支撑部件为多孔基材的情况下，脂质颗粒、脂质颗粒的集合体或脂质膜能够占据支撑部件的空隙的一部分，占据支撑部件的空隙的一部分的脂质颗粒、脂质颗粒的集合体或脂质膜的存在在将高用量的脂质担载于支撑部件上时特别有效。
[0097]
本发明的止血材料的一个实施方式示于图1和图2。图1是示意性地显示本发明的一个实施方式的止血材料的截面图，图2是图1中的符号s所示的区域的放大图。
[0098]
如图1和图2所示，本发明的一个实施方式的止血材料10具有水不溶性的基材1、担载于基材1的表面的多个脂质颗粒2、支撑基材1的支撑部件3。止血材料10可以含有2个以上脂质颗粒2结合形成的脂质颗粒的集合体。脂质颗粒的集合体除了以直接担载于基材1的表面的状态(即与基材1的表面接触的状态)结合于其它脂质颗粒2的脂质颗粒2，还可以含有以不直接担载于基材1的表面的状态(即不与基材1的表面接触的状态)结合于其它脂质颗粒2的脂质颗粒2。止血材料10具有通过基材1形成的表面和通过支撑部件3形成的表面。使用止血材料10止血时，以通过基材1形成的表面与患部(出血部位)接触的方式将止血材料10贴附于患部。止血材料10中使用纤维片材作为基材1，作为支撑部件3使用水不溶性的支撑部件。纤维片材的一个面在使用止血材料10止血时，作为与患部(出血部位)接触的面使用。纤维片材的另一个面上设置有支撑部件3。支撑部件3是根据需要设置的部件，本发明的止血材料中也包含省略支撑部件3的实施方式。
[0099]
脂质颗粒是含有脂质的颗粒。脂质膜是含有脂质的膜。脂质是具有亲水性部分和疏水性部分的有机分子，脂质包括单纯脂质、复合脂质、衍生脂质等。脂质可以用亲水性高分子等修饰。作为亲水性高分子，可列举例如聚乙二醇(peg)、聚甘油、聚丙二醇、聚乙烯醇、苯乙烯
‑
马来酸酐交替共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、合成聚氨基酸等。
[0100]
脂质(例如构成脂质颗粒的脂质、构成脂质膜的脂质等)含有1种或2种以上的阴离子性脂质。阴离子性脂质作为亲水性部分的一部分具有在生理ph下带负电的基团。因此，阴离子性脂质与血液接触被血液中的水分水合时，成为带负电的状态。作为在生理ph下带负
电的基团，可列举例如磷酸基、羧基、磺基、硝基、它们的盐等。生理ph通常为ph5.5~9.0，优选为ph6.5~8.0，进一步优选为ph7.0~7.8。作为阴离子性脂质，可列举例如羧酸型脂质、酸性磷脂、脂肪酸、神经节苷脂、酸性氨基酸系界面活性剤等。
[0101]
脂质颗粒的形状没有特别限定。作为脂质颗粒的形状，可列举例如球状(真球状、椭圆球状等)、不定形等。脂质颗粒为纳米结晶、微晶等的微晶的情况下，微晶具有定形的结晶形状。
[0102]
脂质颗粒的平均粒径没有特别限定。脂质颗粒的平均粒径优选为30~5000nm、进一步优选为50~1000nm、更进一步优选为70~400nm。在此的平均粒径为通过动态光散射法测定的数值。动态光散射法可使用zetasizer nano(malvern panalytical ltd.制)进行。此时，可使用作为分散介质采用pbs制备的脂质颗粒的浓度为0.1mg/ml的分散液。测定温度例如为25℃。散射角度例如为90度。粒径的调节可使用例如挤出法、弗氏压碎法(french press法)等进行。
[0103]
脂质颗粒可以为单分散颗粒，也可以为多分散颗粒，优选为单分散颗粒。为了得到单分散的脂质颗粒，优选通过均质化、挤出等处理将脂质颗粒的粒径调节至一定的范围。
[0104]
脂质颗粒的形态没有特别限定。作为脂质颗粒的形态，例如可列举脂质体、胶束、纳米球、微球(例如脂质微球)、纳米结晶、微晶等。这些形态中，优选脂质体。作为脂质体，可列举例如多室脂质体(mlv)、小单室脂质体(suv)、大单室脂质体等。脂质颗粒也包括不具有脂质体那样的脂质双分子膜结构(层状结构)、颗粒内部是实心(即粒子内部填充有构成成分)的脂质颗粒。作为这样的形态，可列举例如具有以疏水性聚合物(优选疏水性的生物降解性聚合物)为核、和被覆该核的脂质层的形态。
[0105]
脂质颗粒的形态可通过电子显微镜观察(例如cryo透射型电子显微镜观察(cryotem法))、采用x射线的结构分析(例如x射线小角散射(saxs)测定)等确认。
[0106]
脂质体为由含有脂质分子的脂质双重膜形成的脂质小胞体，具体而言，为具有通过基于脂质分子的疏水性基团和亲水性基团的极性生成的脂质双重膜由外界隔出的空间(内相)的封闭小胞体。脂质体的内相中包括脂质体的制造时使用的分散介质(例如水等的水性介质)。脂质双重膜为1层时，脂质体所具有的脂质双重膜的层数优选为1~4，更优选为1~2。
[0107]
脂质双重膜的层数可通过过滤器的孔径、小胞体的分散介质(ph、温度、离子强度)控制。作为层数的测定方法，可列举冷冻切割法、小角x射线散射法、使用自旋标记脂质的 电子自旋共振(esr)、 使用
31
p
‑
nmr的测定方法、使用6
‑
对甲苯氨基
‑2‑
萘磺酸(tns)的测定方法等。
[0108]
脂质体的内相中可以含有药物。脂质体的内相中含有的药物优选通过聚集于血管损伤部位在生理学上或药学上有效的药物，可列举例如血小板凝集诱导剂 、血液凝固剂、血管收缩剂、抗炎剂等。其中，特别优选使用增强血栓形成的药物(例如血小板凝集诱导剂、血液凝固剂等)。水溶性药物的内包可使用例如水合法、挤出法、乙醇注入法、逆向蒸发法、冷冻熔融法等进行。脂溶性药物的内包可使用例如bangham法、机械化学法、超临界二氧化碳法、膜装载法等进行。解离性药物的内包可使用例如ph梯度(遥控装载)法、反离子浓度梯度法等进行。
[0109]
作为血小板凝集诱导剂，可列举例如二磷酸腺苷(adp)、胶原蛋白、源自胶原蛋白
的肽、惊厥毒素、五羟色胺、肾上腺素、加压素、肾上腺色素缩胺脲、凝血因子(例如fviii、fix)、凝血酶、抗纤溶酶剂(例如ε
‑
氨基己酸、凝血酸)、硫酸鱼精蛋白、酚磺乙胺、叶绿醌、结合态雌激素(例如雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠)等。
[0110]
作为血液凝固促进剂，可列举例如纤维蛋白原、凝血酶、凝血因子(例如fxa)、硫酸鱼精蛋白等。
[0111]
作为血管收缩剂，可列举例如去甲肾上腺素、去甲苯福林、苯肾上腺素、间羟胺、甲氧胺、前列腺素f1α、前列腺素f2α、血栓素a2等。
[0112]
作为抗炎剂，可列举例如甾体系抗炎剂(例如地塞米松、氢化可的松、氢化泼尼松、倍他米松、曲安奈德、甲基泼尼松龙)、非甾体系抗炎剂(例如吲哚美辛、阿西美辛、氟比洛芬、阿司匹林、布洛芬、氟芬那酸、酮洛芬)等。
[0113]
脂质颗粒和脂质膜可以含有脂质以外的1种或2种以上成分。作为其它成分，可列举例如表面活性剂、蛋白质、肽、抗氧化剂、防腐剂、ph调节剂、甘油三酯、聚乳酸等生物降解性聚合物、脂质颗粒或脂质膜的制造中使用的分散介质等。
[0114]
作为表面活性剂，可列举例如阴离子性表面活性剂、两性表面活性剂、非离子性表面活性剂等。
[0115]
作为阴离子性表面活性剂，可列举例如α
‑
酰基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基烯丙基磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基酰胺硫酸盐、聚氧乙烯烷基醚硫酸盐、聚氧乙烯烷基酰胺醚硫酸盐、烷基磷酸盐、烷基酰胺磷酸盐、烷酰基烷基牛磺酸盐、n
‑
酰基氨基酸盐、磺基琥珀酸盐、全氟烷基磷酸酯等。
[0116]
作为两性表面活性剂，可列举例如甘氨酸型、氨基丙酸型、羧基甜菜碱型、磺基甜菜碱型、磺酸型、硫酸型、磷酸型等。具体而言，可列举例如2
‑
烷基
‑
n
‑
羧基甲基
‑
n
‑
羟基乙基咪唑啉鎓甜菜碱、椰子油脂肪酸酰胺丙基甜菜碱等。
[0117]
作为非离子性表面活性剂，可列举例如脂肪酸烷醇酰胺、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酯、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、烷基氧化胺等。
[0118]
作为抗氧化剂，可列举例如抗坏血酸、尿酸、维生素e等的生育酚同族体等。生育酚有α、β、γ、σ的4种异构体，脂质颗粒和脂质膜中可含有任一种。
[0119]
作为防腐剂，可列举例如对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、布罗波尔等。
[0120]
作为ph调节剂，可列举例如磷酸盐缓冲剂等。
[0121]
脂质膜的厚度优选为10~1000nm、更优选为30~500nm、更进一步优选为60~240nm。脂质膜的测定方法如下所述。用扫描型电子显微镜(sem)观察脂质膜，在sem观察图像中测定任意选择的5处的厚度，将其平均值作为脂质膜的厚度。
[0122]
本发明的脂质可以担载也可以不担载gpib、h12等参与血小板的粘附或凝集的蛋白质或作为其活性部位的肽。本发明的脂质即使不担载gpib、h12等参与血小板的粘附或凝集的蛋白质或作为其活性部位的肽，也可促进血小板的粘附和/或凝集。因此，从减少制作步骤、制造成本等的角度考虑，本发明的脂质优选不对表面实施利用gpib、h12等的化学修饰。
[0123]
脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜的表面优选在生理ph下带负电。由此，脂质
颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜的表面在与血液接触而被血液中的水分水合时，成为带负电的状态。
[0124]
在与血液接触前的脂质颗粒中，阴离子性脂质的亲水性部分可位于脂质颗粒的表面侧，也可以不位于脂质颗粒的表面侧。与血液接触前的脂质颗粒中，阴离子性脂质的亲水性部分位于脂质颗粒的表面侧的情况下，与血液接触后的脂质颗粒中，阴离子性脂质的亲水性部分也位于脂质颗粒的表面侧。与血液接触前的脂质颗粒中，即使阴离子性脂质的亲水性部分不位于脂质颗粒的表面侧的情况下，与血液接触后，通过脂质颗粒再构成，阴离子性脂质的亲水性部分也可位于脂质颗粒的表面侧。通过阴离子性脂质的亲水性部分位于脂质颗粒的表面侧，脂质颗粒的表面在生理ph下容易带负电(即，与血液接触而被血液中的水分水合时，容易带负电)。
[0125]
与血液接触前的脂质膜中，阴离子性脂质的亲水性部分可以位于脂质膜的表面侧，也可以不位于脂质膜的表面侧。与血液接触前的脂质膜中，阴离子性脂质的亲水性部分位于脂质膜的表面侧的情况下，在与血液接触后残留的脂质膜中，阴离子性脂质的亲水性部分也位于脂质颗粒的表面侧。与血液接触前的脂质膜中，即使阴离子性脂质的亲水性部分不位于脂质颗粒的表面侧的情况下，与血液接触后，通过脂质膜再构成，阴离子性脂质的亲水性部分也可位于脂质膜的表面侧。通过阴离子性脂质的亲水性部分位于脂质膜的表面侧，脂质膜的表面在生理ph下容易带负电(即与血液接触而被血液中的水分水合时，容易带负电)。要说明的是，与血液接触前的脂质膜中，阴离子性脂质的亲水性部分位于脂质膜的表面侧的情况下和不位于脂质膜的表面侧的情况下，由脂质膜形成的脂质颗粒中，阴离子性脂质的亲水性部分均可位于脂质颗粒的表面侧。
[0126]
脂质颗粒表面或脂质颗粒的凝集体的表面在生理ph下带负电的程度可基于生理条件下脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的zeta 电位(表面电位)评价。生理条件通常ph5.5~9.0、优选ph6.5~8.0、进一步优选ph7.0~7.8，离子强度通常为0.05~0.30、优选为0.10~0.20、进一步优选为0.14~0.16的条件。
[0127]
生理条件下脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的zeta电位(表面电位)优选为
‑
12mv以下、进一步优选为
‑
15mv以下、更进一步优选为
‑
18mv以下。生理条件下脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的zeta电位的下限值没有特别限定。生理条件下脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的zeta 位优选为
‑
80mv以上、进一步优选为
‑
50mv以上、更进一步优选为
‑
45mv以上。在此记载的上限值和下限值可适当组合。在此的zeta电位是通过电泳光散射法测定的情况下的数值。电泳光散射法可使用zetasizer nano(malvern panalytical ltd.制)进行。此时，可采用作为分散介质使用pbs制备的脂质颗粒的浓度为0.1mg/ml的分散液。测定条件为例如ph为7.4、离子强度为0.153、温度为25℃的条件。
[0128]
脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的制造方法可根据脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的形态适当选择。作为脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体的制造方法，可列举例如薄膜法、逆相蒸发法、乙醇注入法、醚注入法、脱水
‑
再水合法、表面活性剂透析法、表面活性剂除去法、水合法、冷冻熔融法、超声法、挤出法、高压乳化法等。
[0129]
制造脂质颗粒或脂质颗粒的凝集体时，作为分散脂质颗粒的分散介质，可列举例如磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲化生理食盐水等的缓冲液、水、生理食盐水、细胞培养用培养基等。
[0130]
脂质膜可通过使适当量的适当浓度的脂质的溶液附着于基材，并干燥形成于止血材料的表面。作为溶解脂质的溶剂，可使用例如乙醇、异丙醇、叔丁醇、二乙基醚等有机溶剂。作为使溶液附着于基材的方法，可使用例如喷雾法、滴加法、浸渍法、涂布法等。作为干燥方法，可使用例如冷冻干燥、自然干燥、加热干燥、减压干燥等。脂质的浓度可在0.1mg/ml至100mg/ml的范围根据在溶剂中的溶解度、所得脂质膜的膜厚选择。附着于基材的溶液量可根据基材表面积(存在支撑部件的情况下包括支撑部件的表面积)、脂质膜的膜厚等适当调整。通常，将阴离子性脂质溶解于有机溶剂时，以酸型溶解。但是，阴离子性脂质为钠盐等盐型的情况下，在有机溶剂中的溶解度大大降低，因此未溶解的脂质以无定形的微粉末或微晶的形态的脂质颗粒形式分散。如果将其与上述方法同样地担载于基材，则在基材的表面担载脂质颗粒，以源自溶解于有机溶剂的脂质的脂质膜共存的状态担载是可以的，进一步以脂质颗粒的凝集体共存的状态担载也可以。
[0131]
脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜的表面可以用亲水性高分子等修饰。作为亲水性高分子，可列举例如聚乙二醇(peg)、聚甘油、聚丙二醇、聚乙烯醇、苯乙烯
‑
马来酸酐交替共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、合成聚氨基酸等。这些亲水性高分子可单独使用1种，也可以将2种以上组合使用。
[0132]
担载于基材表面的脂质中含有的1种或2种以上的阴离子性脂质优选包括选自羧酸型脂质和磷脂中的1种或2种以上脂质。
[0133]
在优选的实施方式中，担载于基材表面的脂质为含有1种或2种以上的羧酸型脂质的脂质(以下称为“第1方式的脂质”)、或含有1种或2种以上的磷脂的脂质(以下称为“第2方式的脂质”)。第1和第2方式的脂质可以使用任一者，也可以组合二者使用。以下，有时将第1和第2方式的脂质总称为“本发明的脂质”。另外，有时将含有第1方式的脂质的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜分别称为第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜，将含有第2方式的脂质的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜分别称为第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜。要说明的是，以下，主要说明第1方式的脂质或第2方式的脂质以选自脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体和脂质膜中的1种或2种以上的形态担载于基材表面的情况，第1方式的脂质或第2方式的脂质可以以其它脂质结构体的形态担载于基材表面，以下的说明也适合于第1方式的脂质或第2方式的脂质以其它脂质结构体的形态担载于基材表面的情况。
[0134]
≪
第1方式
≫
第1方式的脂质含有选自羧酸型脂质(i)~(vi)中的1种或2种以上的羧酸型脂质。以下，有时将羧酸型脂质(i)~(vi)总称为“本发明的羧酸型脂质”。
[0135]
本发明的羧酸型脂质具有亲水性部分和疏水性部分，亲水性部分具有羧基或其盐。本发明的羧酸型脂质为阴离子性脂质，存在于其亲水性部分的羧基或其盐在生理ph下电离，带负电。因此，第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜如果与血液接触而被血液中的水分水合，则第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的表面带负电。由此，第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的至少一部分通过静电相互作用与多个血小板(特别是活化了的血小板)结合，可促进血小板的凝集，进一步可促进血液的凝固。但是，该记载不否定范德华力等静电相互作用以外的相互作用可参与本发明的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜引起的血小板粘附促进作用和/或血小板凝集促进作用。
[0136]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，本发明的羧酸型脂质的含量只要第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的表面在生理ph下带负电则没有特别限定。本发明的羧酸型脂质的含量以第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准，优选为5摩尔%以上、进一步优选为30摩尔%以上、更进一步优选为40摩尔%以上、更进一步优选为50摩尔%以上、更进一步优选为60摩尔%以上、更进一步优选为70摩尔%以上。本发明的羧酸型脂质的含量的上限值以第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准为100摩尔%(此时，第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的全部脂质为本发明的羧酸型脂质)。
[0137]
<羧酸型脂质(i)>羧酸型脂质(i)用以下的式(i)表示。要说明的是，式(i)中，存在2个以上相同符合(例如l、x等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0138]
[化21]式(i)中，m表示oh
‑
或m0‑
nh
‑
。
[0139]
式(i)中，m0表示在生理ph下可带负电的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐。
[0140]
生理ph通常为ph5.5~9.0、优选为ph6.5~8.0、进一步优选为ph7.0~7.8。
[0141]
m0表示的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐在生理ph下可带负电是指m0表示的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐如果与血液接触则可带负电。
[0142]
m0表示的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐只要可在生理ph下整体带负电，则除了在生理ph下可带负电的官能团以外，也可以具有在生理ph下可带正电的官能团。例如，在生理ph下可带负电的官能团(例如羧基或其盐)数比在生理ph下可带正电的官能团(例如氨基)数多时，m0表示的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基、肽残基或它们的盐可在生理ph下整体带负电。
[0143]
氨基酸是在同一分子内具有羧基和氨基的有机化合物。氨基酸优选为脂肪族氨基酸。脂肪族氨基酸可以为α
‑
氨基酸、β
‑
氨基酸、γ
‑
氨基酸、δ
‑
氨基酸和ε
‑
氨基酸的任一种，但优选为α
‑
氨基酸。α
‑
氨基酸可以为d型和l型的任一种，但优选为l型。氨基酸可以为天然型氨基酸，也可以为非天然型氨基酸，但优选为天然型氨基酸。天然型氨基酸优选为蛋白质中含有的20种氨基酸的任一种。作为其它氨基酸，可列举例如胱氨酸、羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、甲状腺素、o
‑
磷酸丝氨酸、锁链素、β
‑
丙氨酸、δ
‑
氨基戊酸、肌氨酸(n
‑
甲基甘氨酸)、γ
‑
氨基丁酸(gaba)、口蘑酸、红藻氨酸、冠瘿氨基酸等。
[0144]
作为α
‑
氨基酸，可列举例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸等，作为β
‑
氨基酸，可列举例如β
‑
丙氨酸等，作为γ
‑
氨基酸，可列举例如γ
‑
氨基正丁酸(gaba)、肉毒碱等，作为δ
‑
氨基酸，可列举例如5
‑
氨基乙酰丙
酸、5
‑
氨基戊酸等，作为ε
‑
氨基酸，可列举例如6
‑
氨基己酸等。
[0145]
作为非天然型氨基酸，可列举例如主链的结构与天然型氨基酸不同的氨基酸(例如α,α
‑
二取代氨基酸(例如α
‑
甲基丙氨酸等)、n
‑
烷基
‑
α
‑
氨基酸、d
‑
氨基酸、β
‑
氨基酸、α
‑
羟基酸等)、侧链的结构与天然型氨基酸不同的氨基酸(例如正亮氨酸、高组氨酸等)、侧链有多余的亚甲基的氨基酸(例如高氨基酸等)、侧链中的官能团(例如硫羟基)被磺酸基取代的氨基酸(例如半胱氨酸等)。另外，同一分子内具有磺酸基和氨基的氨基烷基磺酸(例如氨基乙磺酸(牛磺酸)等)也包括在非天然型氨基酸中。
[0146]
m0表示的氨基酸残基除了特别规定的情况，表示由氨基酸除去氨基得到的部分。由α
‑
氨基酸、β
‑
氨基酸、γ
‑
氨基酸、δ
‑
氨基酸和ε
‑
氨基酸除去的氨基分别可以为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳和ε碳的氨基，也可以为侧链中含有的氨基，优选为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳和ε碳的氨基。要说明的是，m0表示氨基酸残基时，m0‑
nh
‑
co
‑
表示的结构中
‑
nh
‑
源自氨基酸的氨基。因此，m0表示的氨基酸残基定义为由氨基酸除去氨基得到的部分。
[0147]
m0表示的氨基酸残基或其盐只要在生理ph下整体可带负电则没有特别限定。m0表示的氨基酸残基或其盐优选为酸性氨基酸残基、中性氨基酸残基或它们的盐，进一步优选为酸性氨基酸残基或其盐。
[0148]
酸性氨基酸残基或其盐具有2个羧基或其盐，这些羧基或其盐在生理ph下可电离而带负电。因此，酸性氨基酸残基或其盐可在生理ph下整体带负电。酸性氨基酸残基或其盐优选为天冬氨酸残基、谷氨酸残基或它们的盐。
[0149]
中性氨基酸残基或其盐具有1个羧基或其盐，该羧基或其盐可在生理ph下电离而带负电。另一方面，中性氨基酸残基或其盐的侧链中含有的官能团在生理ph下不带电。因此，中性氨基酸残基或其盐在生理ph下可整体带负电。作为中性氨基酸残基，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基、苯基丙氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、缬氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等。作为优选的中性氨基酸残基，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基等。
[0150]
m0表示的氨基酸衍生物可通过在氨基酸的侧链导入化学修饰而制造，除了在侧链导入了化学修饰的点，具有与氨基酸相同的结构。m0表示的氨基酸衍生物的残基除了特别规定的情况，是指由氨基酸衍生物除去氨基得到的部分。由α
‑
氨基酸、β
‑
氨基酸、γ
‑
氨基酸、δ
‑
氨基酸和ε
‑
氨基酸的衍生物除去的氨基分别可以为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳和ε碳的氨基，也可以为侧链中含有的氨基，分别优选为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳和ε碳的氨基。要说明的是，m0表示氨基酸衍生物的残基时，m0‑
nh
‑
co
‑
表示的结构中的
‑
nh
‑
源自氨基酸衍生物的氨基。因此，m0表示的氨基酸衍生物的残基定义为由氨基酸衍生物除去氨基得到的部分。
[0151]
m0表示的氨基酸衍生物的残基只要在生理ph下整体可带负电则没有特别限定。作为m0表示的氨基酸衍生物的残基，可列举例如碱性氨基酸衍生物的残基。作为导入碱性氨基酸衍生物的衍生物化，可列举例如使碱性氨基酸的侧链的氨基酰胺化成下式:
‑
nh
‑
co
‑
r1[式中，
‑
nh
‑
表示源自所述碱性氨基酸的侧链的氨基，r1表示烃基]表示的基团等。碱性氨基酸具有键合于α碳的羧基、键合于α碳的氨基、和键合于α碳的侧链中含有的氨基。侧链的氨基通过衍生化为
‑
nh
‑
co
‑
r1，碱性氨基酸衍生物的残基在生理ph下整体可带负电。
[0152]
作为碱性氨基酸，可列举例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸等。
[0153]
作为用于使碱性氨基酸的侧链的氨基酰胺化的羧酸，可使用例如式:r1‑
cooh(式中，r1与上述同义)表示的脂肪族羧酸。
[0154]
r1表示的烃基优选为脂肪族烃基。脂肪族烃基可以为直链状，也可以为支链状，优选为直链状。脂肪族烃基可以是饱和的，也可以是不饱和的，优选为饱和的。脂肪族烃基的碳数通常为1~10个、优选为1~6个、进一步优选为1~4个、更进一步优选为1~2个。不饱和键可以为碳
‑
碳双键，也可以为碳
‑
碳三键，优选为碳
‑
碳双键。
[0155]
作为r1表示的脂肪族烃基，可列举例如烷基、烯基、炔基等，优选为烷基或烯基，进一步优选为烷基。作为r1表示的脂肪族烃基的具体例，可列举甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基、叔戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、辛基、2
‑
乙基己基、壬基、癸基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、异丁烯基、异戊二烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。作为r1表示的脂肪族烃基的优选具体例，可列举甲基、乙基等。
[0156]
m0表示的肽残基除了特别规定的情况，是指由肽除去氨基得到的部分。由肽除去的氨基可以为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳或ε碳的氨基，也可以为侧链中包含的氨基，优选为键合于α碳、β碳、γ碳、δ碳或ε碳的氨基。要说明的是，m0表示肽残基时，m0‑
nh
‑
co
‑
表示的结构中
‑
nh
‑
源自肽的氨基。因此，m0表示的肽残基定义为由肽除去氨基得到的部分。
[0157]
构成m0表示的肽残基的氨基酸残基的种类和个数只要在生理ph下肽残基整体可带负电则没有特别限定。要说明的是，此处的氨基酸残基为通常的含义(由氨基酸除去氨基的h和/或羧基的oh得到的部分)，与上述含义(由氨基酸除去氨基得到的部分)不同。
[0158]
m0表示的肽残基可由选自酸性氨基酸残基、中性氨基酸残基和碱性氨基酸残基中的1种或2种以上的氨基酸残基构成，优选由选自酸性氨基酸残基和中性氨基酸残基中的1种或2种以上的氨基酸残基构成，进一步优选由选自酸性氨基酸残基中的1种或2种以上的氨基酸残基构成，更进一步优选由选自天冬氨酸和谷氨酸中的1种或2种氨基酸残基构成。
[0159]
m0表示的肽残基中，在生理ph下可带负电的官能团(例如羧基或其盐)数与生理ph下可带正电的官能团(例如氨基)数之差(生理ph下可带负电的官能团数
‑
生理ph下可带正电的官能团数)优选为1以上、进一步优选为2以上、更进一步优选为3以上。对该差的上限值没有特别限定，优选为10、更进一步优选为8、更进一步优选为4。m0表示的肽残基中，在生理ph下可带正电的官能团(例如氨基)数优选为4以下、进一步优选为2以下、更进一步优选为零。
[0160]
构成m0表示的肽残基的氨基酸残基的个数通常为2~12个、优选2~7个、进一步优选为2~5个、更进一步优选为2~4个。
[0161]
m0表示的肽残基优选为含有1个或2个以上酸性氨基酸残基的肽残基，进一步优选为含有2个以上酸性氨基酸残基的肽残基，更进一步优选为含有选自天冬氨酸残基和谷氨酸残基中的2个以上酸性氨基酸残基的肽残基。含有1个或2个以上酸性氨基酸残基的肽残基可以含有中性氨基酸残基，也可以不含中性氨基酸残基。含有1个或2个以上的酸性氨基酸残基的肽残基可以含有碱性氨基酸残基，也可以不含碱性氨基酸残基，优选不含碱性氨基酸残基。即，含有1个或2个以上酸性氨基酸残基的肽残基优选由酸性氨基酸残基和中性氨基酸残基构成，进一步优选由酸性氨基酸残基构成。
[0162]
作为含有选自天冬氨酸残基和谷氨酸残基中的2个以上酸性氨基酸残基的肽残基，可列举例如以下的式(xii)表示的肽残基(以下有时称为“ag残基”)。ag残基为由选自天
冬氨酸残基和谷氨酸残基中的3个酸性氨基酸残基构成的肽残基。
[0163]
[化22]式(xii)中，m表示1或2。式(xii)中存在的多个m所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0164]
m0表示的氨基酸残基、氨基酸衍生物的残基或肽残基的盐通常为羧基形成的盐，作为其具体例，可列举钙盐、镁盐、钾盐等。
[0165]
式(i)中，r表示烃基。要说明的是，r为一价的官能团。
[0166]
r表示的烃基的碳数通常为8~30个、优选为10~24个、进一步优选为12~22个、更进一步优选为14~18个。
[0167]
r表示的烃基优选为脂肪族烃基。脂肪族烃基可以为直链状，也可以为支链状，优选为直链状。脂肪族烃基可以是饱和的，也可以是不饱和的，优选为饱和的。脂肪族烃基的碳数优选为10~24个、进一步优选为12~22个、更进一步优选为14~18个。脂肪族烃基具有不饱和键的情况下，不饱和键数通常为1~6个、优选为1~4个、进一步优选为1~3个、更进一步优选为1~2个。不饱和键可以为碳
‑
碳双键，也可以为碳
‑
碳三键，优选为碳
‑
碳双键。
[0168]
作为r表示的脂肪族烃基，可列举例如烷基、烯基、炔基等，优选为烷基或烯基，进一步优选为烷基。作为r表示的脂肪族烃基的具体例，可列举十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、十二烯基、二十三烷基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、二十一碳烯基、二十二碳烯基、二十三碳烯基、十三碳二烯基、十四碳二烯基、十五碳二烯基、十六碳二烯基、十七碳二烯基、十八碳二烯基、十九碳二烯基、二十碳二烯基、二十一碳二烯基、二十二碳二烯基、十八碳三烯基、二十碳三烯基、二十碳四烯基、二十碳五烯基、二十二碳六烯基、甲基十二烷基、甲基十三烷基、甲基十四烷基、甲基十五烷基、甲基十七烷基、甲基十八烷基、甲基十九烷基、甲基二十烷基、甲基二十一烷基、甲基二十二烷基、乙基十一烷基、乙基十二烷基、乙基十三烷基、乙基十四烷基、乙基十五烷基、乙基十七烷基、乙基十八烷基、乙基十九烷基、乙基二十烷基、乙基二十一烷基、己基庚基、己基壬基、庚基辛基、庚基癸基、辛基壬基、辛基十一烷基、壬基癸基、癸基十一烷基、十一烷基十二烷基、六甲基十一烷基等。作为优选的脂肪族烃基，可列举例如十四烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等。
[0169]
式(i)中，l表示
‑
co
‑
o
‑
、
‑
o
‑
co
‑
、
‑
co
‑
nh
‑
、
‑
nh
‑
co
‑
、
‑
co
‑
s
‑
、
‑
s
‑
co
‑
或
‑
s
‑
s
‑
。l优选表示
‑
co
‑
o
‑
、
‑
o
‑
co
‑
、
‑
co
‑
nh
‑
或
‑
nh
‑
co
‑
。式(i)中存在多个l的情况下(p为1以上的情况下)，这些的多个l的含义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。要说明的是，l
为二价的官能团，l的左右对应于式(i)的左右。即，(*a1)
‑
l
‑
(*a2)通过左侧的键合位(*a1)与式(i)中存在于l的左侧的基团键合，通过右侧的键合位(*a2)与式(i)中存在于l的右侧的基团键合。因此，
‑
co
‑
o
‑
和
‑
o
‑
co
‑
是有区别的，
‑
co
‑
nh
‑
和
‑
nh
‑
co
‑
是有区别的，
‑
co
‑
s
‑
和
‑
s
‑
co
‑
是有区别的。
[0170]
式(i)中，x表示烃基、中性氨基酸残基或聚亚烷基二醇残基。式(i)中存在多个x的情况下(p为1以上的情况下)，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。要说明的是，x为二价的官能团。
[0171]
x表示的烃基的碳数通常为1~6个、优选1~5个、进一步优选为1~4个、更进一步优选为1~2个。
[0172]
x表示的烃基优选为脂肪族烃基。脂肪族烃基可以为直链状，也可以为支链状，优选为直链状。脂肪族烃基可以是饱和的，也可以是不饱和的，优选是饱和的。不饱和键可以是碳
‑
碳双键，也可以是碳
‑
碳三键，优选为碳
‑
碳双键。作为x表示的脂肪族烃基，可列举例如亚烷基、亚烯基、亚炔基等，优选为亚烷基或亚烯基，进一步优选为亚烷基。亚烷基的碳数通常为1~6个、优选为1~5个、进一步优选为1~4个、更进一步优选为1~2个。亚烯基的碳数通常为2~6个、优选为2~5个、进一步优选为2~4个、更进一步优选为2~3个。亚炔基的碳数通常为2~6个、优选为2~5个、进一步优选为2~4个、更进一步优选为2~3个。
[0173]
作为亚烷基，可列举例如
‑
ch2‑
、
‑
(ch2)2‑
、
‑
(ch2)3‑
、
‑
ch(ch3)ch2‑
、
‑
ch2ch(ch3)
‑
、
‑
(ch2) 4
‑
、
‑
ch(ch3)(ch2)2‑
、
‑
(ch2) 2
ch(ch3)
‑
、
‑
c(ch3)2ch2‑
、
‑
ch 2
c(ch3)2‑
、
‑
(ch2) 5
‑
、
‑
ch(ch 3
)(ch 2
) 3
‑
、
‑
(ch2)3ch(ch3)
‑
、
‑
ch(c2h5)(ch2) 2
‑
、
‑
(ch2)2ch(c2h5)
‑
、
‑
ch2ch(ch3)(ch2)2‑
、
‑
(ch2)2ch(ch 3
)ch2‑
、
‑
ch2ch(c2h5)ch2‑
、
‑
c(ch3) 2
(ch2) 2
‑
、
‑
(ch2) 2
c(ch3) 2
‑
、
‑
ch2c(ch3)2ch2‑
、
‑
(ch2)6‑
、
‑
ch(ch3)(ch2)4‑
、
‑
(ch2)4ch(ch3)
‑
、
‑
ch(c2h5)(ch2)3‑
、
‑
ch2ch(ch3)(ch 2
) 3
‑
、
‑
(ch2)3ch(ch3)ch2‑
、
‑
(ch2)2ch(ch3)(ch2)2‑
、
‑
(ch2)3ch(c2h5)
‑
、
‑
c(ch3)2(ch2)3‑
、
‑
(ch2)3c(ch3)2‑
、
‑
ch2c(ch3)2(ch2)2‑
、
‑
(ch2)2c(ch3)2ch2‑
、
‑
c(ch3)2c(ch3)2‑
等。作为优选的亚烷基，可列举例如
‑
ch2‑
、
‑
(ch2)2‑
等。
[0174]
作为亚烯基，可列举例如
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch=ch
‑
、
‑
c(ch 3
)=ch
‑
ch 2
‑
、
‑
ch=c(ch 3
)
‑
ch 2
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch(ch 3
)
‑
、
‑
ch(ch 3
)
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch 2
‑
c(ch 3
)=ch
‑
、
‑
ch 2
‑
ch=c(ch 3
)
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch=ch
‑
等。作为优选的亚烯基，可列举例如
‑
ch=ch
‑
、
‑
ch=ch
‑
ch 2
‑
等。
[0175]
作为亚炔基，可列举例如
‑
c≡c
‑
、
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
、
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
、
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
、
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
、
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
ch 2
‑
c≡c
‑
等。作为优选的亚炔基，可列举例如
‑
c≡c
‑
、
‑
c≡c
‑
ch 2
‑
等。
[0176]
x表示的中性氨基酸残基除了特别规定的情况，表示由中性氨基酸除去羧基和氨基得到的部分。中性氨基酸的羧基和氨基用于形成式(i)中x的相邻部分(
‑
co
‑
或
‑
l
‑
)。例如，羧酸型脂质(i)具有
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构时(例如p为0时)，中性氨基酸残基的羧基用于
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构中
‑
co
‑
的形成，中性氨基酸的氨基用于
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构中
‑
l
‑
的形成。羧酸型脂质(i)具有
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构时(例如p为1以上的整数时)，中性氨基酸残基的羧基用于
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构中一个
‑
l
‑
的形成，中性氨基酸的氨基用于
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构中另一个
‑
l
‑
的形成。因此，x表示的中性氨基酸残基定义为由中性氨基酸除去羧基和氨基得到的部分。
[0177]
x表示的中性氨基酸残基优选为侧链不具有反应性官能团(例如羟基、硫羟基等)的中性氨基酸残基。作为优选的中性氨基酸残基，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基、苯基丙氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等，作为进一步优选的中性氨基酸残基，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等。x表示的中性氨基酸残基是侧链为烃基的中性氨基酸残基时，与x为烃基的情况重合。从排除与x为烃基的情况的重合的角度考虑，x表示的中性氨基酸残基优选是侧链不是烃基的中性氨基酸残基。作为侧链不是烃基的中性氨基酸残基，可列举例如甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等。
[0178]
x表示的聚亚烷基二醇残基除了特别规定的情况，表示由聚亚烷基二醇或聚亚烷基二醇衍生物除去两末端的官能团(例如羧基、氨基、羟基、硫羟基等)得到的部分。要说明的是，聚亚烷基二醇衍生物是聚亚烷基二醇的两末端的羟基中的一个或二个置换为其它官能团(例如羧基、氨基、硫羟基等)的物质。聚亚烷基二醇或聚亚烷基二醇衍生物的两末端的官能团(例如羧基、氨基、羟基、硫羟基等)用于式(i)中x的相邻部分(
‑
co
‑
或
‑
l
‑
)的形成。例如，聚亚烷基二醇衍生物的两末端的官能团为羧基和羟基，羧酸型脂质(i)具有
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构时(例如p为0时)，聚亚烷基二醇衍生物的羧基用于
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构中
‑
co
‑
的形成，聚亚烷基二醇衍生物的羟基用于
‑
co
‑
x
‑
l
‑
的结构中
‑
l
‑
的形成。羧酸型脂质(i)具有
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构时(例如p为1以上的整数时)，聚亚烷基二醇或聚亚烷基二醇衍生物的一个末端的官能团用于
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构中一个
‑
l
‑
的形成，另一个末端官能团用于
‑
l
‑
x
‑
l
‑
的结构中另一个
‑
l
‑
的形成。因此，x表示的聚亚烷基二醇残基定义为由聚亚烷基二醇或聚亚烷基二醇衍生物除去两末端的官能团得到的部分。
[0179]
作为构成聚亚烷基二醇的亚烷基二醇单元，可列举例如乙二醇、丙二醇、丁二醇等。构成聚亚烷基二醇的亚烷基二醇单元可以是1种，也可以是2种以上。
[0180]
作为聚亚烷基二醇，可列举例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚三亚甲基二醇、聚丁二醇、聚四亚甲基二醇、聚氧乙烯氧丙烯二醇等。另外，聚亚烷基二醇的分子量优选为400~40000、进一步优选为1000~10000、更进一步优选为2000~5000。
[0181]
式(i)中，p表示0以上的整数。p通常为0~4的整数、优选为0~3的整数、进一步优选为0~2的整数、更进一步优选为0~1的整数。
[0182]
<羧酸型脂质(ii)>羧酸型脂质(ii)用以下的式(ii)表示。
[0183]
[化23]式(ii)中，m和r与上述同义。
[0184]
<羧酸型脂质(iii)>羧酸型脂质(iii)用以下的式(iii)表示。要说明的是，式(iii)中存在的多个相同
的符号(例如l、x、q、y等)的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0185]
[化24]式(iii)中，m、l、x和p与上述同义。y的意义如后所述。式(iii)中存在多个l时，这些的多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(iii)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0186]
式(iii)中，q表示0以上的整数。q通常为0~8的整数、优选为0~6的整数、进一步优选为0~4的整数、更进一步优选为0~2的整数。式(iii)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。存在于其它式的多个q所表示的整数也同样。
[0187]
<羧酸型脂质(iv)>羧酸型脂质(iv)用以下的式(iv)表示。要说明的是，式(iv)中存在的多个相同符号(例如q、y等)的意义只要在该符号定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0188]
[化25]式(iv)中，m和q与上述同义。y的意义如后所述。式(iv)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0189]
<羧酸型脂质(v)>羧酸型脂质(v)用以下的式(v)表示。要说明的是，式(v)中存在的多个相同的符号(例如l、x、q、z等)的意义只要在该符号定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0190]
[化26]式(v)中，r、l、x、p和q与上述同义。z的意义如后所述。式(v)中存在多个l时，这些的多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(v)中存在多个x时，这些的多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(v)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0191]
<羧酸型脂质(vi)>羧酸型脂质(vi)用以下的式(vi)表示。要说明的是，式(vi)中存在的多个相同的符号(例如l、x、q、y、z等)的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0192]
[化27]式(vi)中，l、x、p和q与上述同义。y和z的意义如后所述。式(vi)中存在多个l时，这
些多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(vi)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(vi)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0193]
<分支部分>式(iii)、(iv)、(v)和(vi)中，以下的式(bp)表示的分支部分例如源自三官能性化合物(即为三官能性化合物的残基)。三官能性化合物的残基除了特别规定的情况，表示由三官能性化合物除去3个反应性官能团得到的部分。要说明的是，三官能性化合物的3个反应性官能团用于与分支部分相邻的部分(
‑
co
‑
或
‑
l
‑
)的形成。因此，三官能性化合物的残基定义为由三官能性化合物除去3个反应性官能团得到的部分。
[0194]
[化28]三官能性化合物具有独立地选自羧基、氨基、羟基和硫羟基中的第1、第2和第3官能团。第1和第2官能团可以相同，也可以不同，优选不同。第3官能团可以与第1和第2官能团的一者或两者相同，也可以不同，优选与第1和第2官能团的一者或两者不同。作为三官能性化合物，可列举例如三官能性氨基酸等。三官能性氨基酸是具有为羧基的第1官能团、为氨基的第2官能团、与选自羧基、氨基、羟基和硫羟基中的第3官能团的氨基酸。第3官能团优选与第1和第2官能团的一者或两者不同。作为三官能性氨基酸，可列举例如具有键合于α碳的羧基和氨基的同时，侧链具有羧基、氨基、羟基或硫羟基的氨基酸。作为这样的氨基酸，可列举例如天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、丝氨酸等。
[0195]
一个实施方式中，分支部分中的3个q全部为0。另一个实施方式中，分支部分中的3个q中的1个q是1以上的整数，例如为1、2、3或4，其余的2个q为0。又一个实施方式中，分支部分中的3个q中的2个q相同或不同，是1以上的整数，例如为1、2、3或4，其余的1个q是0。又一个实施方式中，分支部分中的3个q相同或不同，为1以上的整数，例如为1、2、3或4。
[0196]
分支部分源自天冬氨酸时，3个q中，1个q为1，其余的2个q为0。
[0197]
分支部分源自谷氨酸时，3个q中，1个q为2，其余的2个q为0。
[0198]
分支部分源自赖氨酸时，3个q中，1个q为4，其余的2个q为0。
[0199]
分支部分源自丝氨酸时，3个q中，1个q为1，其余的2个q为0。
[0200]
<y的意义>式(iii)、(iv)和(vi)中，y表示由支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团y2构成的支链，所述支链主体部由1个以上的单元y1构成，或者y表示由1个基团y2构成的直链。式(iii)、(iv)和(vi)的各自中存在的多个y的意义只要在y的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，各个y的结构式中存在多个相同的符号(例如r、l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0201]
各单元y1用以下的式(vii)表示。y包含2个以上单元y1时，这些单元y1的意义只要在y1的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，各y1的结构式中存在多个相同的符号(例如l、x、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0202]
[化29]式(vii)中，l、x、p和q与上述同义。式(vii)中存在多个l时，这些多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(vii)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(vii)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0203]
式(vii)中，(*b1)、(*b2)和(*b3)表示各单元y1的键合位。
[0204]
各基团y2用以下的式(viii)表示。y包含2个以上基团y2时，这些基团y2的意义只要在y2的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，各y2的结构式中存在多个相同的符号(例如l、x等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0205]
[化30]式(viii)中，r、l、x和p与上述同义。式(viii)中存在多个l时，这些多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(viii)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。本发明的羧酸型脂质具有多个基团y2时，多个基团y2中含有的r(式(viii)中的r)的意义只要在r的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0206]
式(viii)中，(*b4)表示各基团y2的键合位。
[0207]
一个实施方式中，y表示由支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团y2构成的支链，所述支链主体部由1个以上单元y1构成。
[0208]
支链主体部由1个单元y1构成时，单元y1的键合位(*b1)与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合。支链主体部由1个单元y1构成时，支链主体部上键合2个基团y2。各基团y2的键合位(*b4)键合于构成支链主体部的单元y1的键合位(*b2)或(*b3)，各基团y2构成y的末端部。
[0209]
支链主体部由2个以上单元y1构成时，各单元y1的键合位(*b1)与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch 2
) q
键合，或者与构成支链主体部的别的单元y1的键合位(*b2)或(*b3)键合。即，支链主体部由2个以上单元y1构成时，支链主体部除了与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合的1个单元y1以外，还包括键合位(*b1)键合在别的单元y1的键合位(*b2)或(*b3)上的1个以上单元y1。支链主体部由2个以上单元y1构成时，支链主体部上键合(单元y1的个数+1)个基团y2。各基团y2的键合位(*b4)与构成支链主体部的任意一个单元y1的键合位(*b2)或(*b3)键合，各基团y2构成y的末端部。
[0210]
y表示由1个以上单元y1构成的支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团y2所构成的支链的实施方式中，y中含有的单元y1的个数只要为1个以上则没有特别限定。y中含有的单元y1的个数通常为1~4个、优选为1~3个、进一步优选为1~2个、更进一步优选为1个。y中含有的基团y2的个数由y中含有的单元y1的个数决定。单元y1的个数为1个以上时，
键合于支链主体部的基团y2的个数为(单元y1的个数+1)个。
[0211]
在别的实施方式中，y表示由1个基团y2构成的直链。该实施方式中，基团y2的键合位(*b4)键合于式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
。
[0212]
y表示由基团y2构成的直链的实施方式中，y不含单元y1(单元y1的个数为零)，y中含有的基团y2的个数为1个。
[0213]
各y例如可选自以下的式(xiii)、(xiv)、(xv)和(xvi)表示的直链和支链。
[0214]
[化31][化32][化33][化34]式(xiii)~(xvi)中，y1表示1个单元y1，y2表示1个基团y2，(*b)表示与式(iii)、(iv)或(vi)中的(ch2)
q
键合的单元y1的键合位。
[0215]
<z的意义>式(v)和(vi)中，z表示由支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团z2构成的支链，所述支链主体部由1个以上的单元z1构成，或者z表示由1个基团z2构成的直链。式(v)和(vi)的各自中存在的多个z的意义只要在z的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，各z的结构式中存在多个相同的符号(例如m、l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0216]
各单元z1用以下的式(ix)表示。z包含2个以上单元z1时，这些单元z1的意义只要在z1的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，各z1的结构式中存在多个相同的符号(例如l、x、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0217]
[化35]式(ix)中，l、x、p和q与上述同义。式(ix)中存在多个l时，这些多个l的意义只要在
l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(ix)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(ix)中存在的多个q所表示的整数可以相同，也可以不同。
[0218]
式(ix)中，(*c1)、(*c2)和(*c3)表示各单元z1的键合位。
[0219]
各基团z2选自以下的式(x)和(xi)表示的基团。
[0220]
[化36][化37]式(x)中，m、l、x和p与上述同义，(*c4)表示各基团z2的键合位。式(xi)中，m与上述同义，(*c5)表示各基团z2的键合位。式(x)中存在多个l时，这些多个l的意义只要在l的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。式(x)中存在多个x时，这些多个x的意义只要在x的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。本发明的羧酸型脂质具有多个基团z2时，多个基团z2中含有的r(式(x)或(xi)中的r)的意义只要在r的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0221]
一个实施方式中，z表示由支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团z2构成的支链，所述支链主体部由1个以上单元z1构成。
[0222]
支链主体部由1个单元z1构成时，单元z1的键合位(*c1)与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合。支链主体部由1个单元z1构成时，支链主体部上键合2个基团z2。各基团z2的键合位(*c4)或(*c5)键合于构成支链主体部的单元z1的键合位(*c2)或(*c3)，各基团z2构成z的末端部。
[0223]
支链主体部由2个以上单元z1构成时，各单元z1的键合位(*c1)与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合，或者与构成支链主体部的别的单元z1的键合位(*c2)或(*c3)键合。即，支链主体部由2个以上单元z1构成时，支链主体部除了与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合的1个单元z1，还包含键合位(*c1)与别的单元z1的键合位(*c2)或(*c3)键合的1个以上单元z1。支链主体部由2个以上单元z1构成时，支链主体部上键合(单元z1的个数+1)个基团z2。各基团z2的键合位(*c4)或(*c5)键合于构成支链主体部的任一单元z1的键合位(*c2)或(*c3)，各基团z2构成z的末端部。
[0224]
z表示由1个以上单元z1构成的支链主体部和键合于该支链主体部的1个以上基团z2所构成的支链的实施方式中，z中含有的单元z1的个数只要为1个以上则没有特别限定。z中含有的单元z1的个数通常为1~4个、优选为1~3个、进一步优选为1~2个、更进一步优选为1个。z中含有的基团z2的个数由z中含有的单元z1的个数决定。单元z1的个数为1个以上时，键合于支链主体部的基团z2的个数为(单元z1的个数+1)个。
[0225]
别的实施方式中，z表示由1个基团z2构成的直链。该实施方式中，基团z2的键合位(*c4)或(*c5)与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合。
[0226]
z表示由基团z2构成的直链的实施方式中，z不含单元z1(单元z1的个数为零)，z中
含有的基团z2的个数为1个。
[0227]
各z例如可选自以下的式(xvii)、(xviii)、(xix)和(xx)表示的直链和支链。
[0228]
[化38][化39][化40][化41]式(xvii)~(xx)中，z1表示1个单元z1，z2表示1个基团z2，(*c)表示与式(v)或(vi)中的(ch2)
q
键合的单元z1的键合位。
[0229]
<羧酸型脂质(i)的制造方法>以下，对羧酸型脂质(i)的制造方法的一个实施方式进行说明。要说明的是，某1个化合物的结构式中存在多个相同的符号(例如l、x等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，2个以上的化合物的结构式中存在相同的符号(例如l、x等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0230]
(步骤1a)m为m0‑
nh
‑
的情况下，准备下式表示的化合物(1):m0‑
nh2[式中，m0与上述同义。]。
[0231]
化合物(1)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(1)可以是市售品。
[0232]
(步骤2a)准备以下的式表示的化合物(2):hooc
‑
x
‑
a 1
[式中，x与上述同义，a1表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0233]
化合物(2)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(2)可以是市售品。
[0234]
x为烃基时，a1选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。
[0235]
x为烃基，a1为羧基时，作为化合物(2)，可列举例如脂肪族二羧酸等。作为脂肪族二羧酸，可列举例如丙二酸、琥珀酸、戊二酸、2
‑
甲基戊二酸、3
‑
甲基戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、十二烷二酸、马来酸、富马酸、柠康酸、甲基富马酸、2
‑
戊烯二酸、衣康酸、烯丙基丙二酸、异亚丙基琥珀酸、2,2,4
‑
三甲基己二酸、2,4,4
‑
三甲基己二酸、2,4
‑
己二烯二酸、乙炔二羧酸等。脂肪族二羧酸可以为酸酐。
[0236]
x为烃基，a1为氨基时，作为化合物(2)，可列举例如侧链为烃基的中性氨基酸等。作为侧链为烃基的中性氨基酸，可列举例如甘氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等。
[0237]
x为烃基，a1为羟基时，作为化合物(2)，可列举例如脂肪族羟基羧酸等。作为脂肪族羟基羧酸，可列举例如乙醇酸、乳酸、羟基丁酸、羟基戊酸、羟基己酸、羟基癸酸等。
[0238]
x为烃基，a1为硫羟基时，作为化合物(2)，可列举例如脂肪族羧酸硫醇等。作为脂肪族羧酸硫醇，可列举例如2
‑
巯基丙酸、3
‑
巯基丙酸、3
‑
巯基丁酸、2
‑
巯基异丁酸、3
‑
巯基异丁酸、3
‑
巯基
‑3‑
甲基丁酸、2
‑
巯基戊酸、3
‑
巯基异戊酸、4
‑
巯基戊酸、3
‑
苯基
‑
3巯基丙酸等。
[0239]
x为中性氨基酸残基时，a 1
为氨基，化合物(2)为中性氨基酸。作为中性氨基酸，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基、苯基丙氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等。从排除与x为烃基的情况下的重合的角度考虑，中性氨基酸优选为侧链不是烃基的中性氨基酸。作为侧链不是烃基的中性氨基酸，可列举例如甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺等。
[0240]
x为聚亚烷基二醇残基时，a1为羧基、氨基、羟基或硫羟基，化合物(2)是一个末端具有羧基，另一个末端具有羧基、羟基、氨基或硫羟基的聚亚烷基二醇衍生物。一个或两个末端导入了各种官能团的聚亚烷基二醇衍生物有市售。
[0241]
(步骤3a)根据需要，准备下式(3)表示的化合物(3) :d 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
e p
ꢀꢀꢀ
(3)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，d1和e
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0242]
官能团d1是可与化合物(2)的官能团a1反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。a1为羧基时，d1为氨基、羟基或硫羟基。a1为氨基时，d1为羧基。a1为羟基时，d1为羧基。a1为硫羟基时，d1为羧基或硫羟基。
[0243]
化合物(3)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(3)可以是市售品。
[0244]
以下说明化合物(3)的制造方法的一个实施方式。
[0245]
根据p所表示的整数，准备式:d1‑
x
‑
e1表示的化合物(3
‑
1)、式:d2‑
x
‑
e2表示的化合物(3
‑
2)、式:d3‑
x
‑
e3表示的化合物(3
‑
3)、
････
、式:d
p
‑
x
‑
e
p
表示的化合物(3
‑
p)。例如，p为1时，准备化合物(3
‑
1)，p为2时，准备化合物(3
‑
1)和化合物(3
‑
2)，p为3时，准备化合物(3
‑
1)、化合物(3
‑
2)和化合物(3
‑
3)。
[0246]
官能团d1和官能团e
p
与上述同义。
[0247]
官能团e1~e
p
‑1各自独立地选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。
[0248]
官能团d2~d
p
分别为可与官能团e1~e
p
‑1反应的官能团，各自独立地选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。例如，官能团d2为可与官能团e1反应的官能团，官能团d3为可与官能团e2反应的官能团，官能团d
p
为可与官能团e
p
‑1反应的官能团。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0249]
以下，将化合物(3
‑
1)~(3
‑
p)用式:d
k
‑
x
‑
e
k
表示的化合物(3
‑
k)通式化(k=1、2、
･･･
、p)，对化合物(3
‑
k)进行说明。
[0250]
x为烃基时，d
k
和e
k
各自独立地选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。
[0251]
x为烃基，d
k
为羧基，e
k
为羧基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族二羧酸等。脂肪族二羧酸的具体例与上述相同。脂肪族二羧酸可以为酸酐。
[0252]
x为烃基，d
k
为羧基，e
k
为氨基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如侧链为烃基的中性氨基酸等。侧链为烃基的中性氨基酸的具体例与上述相同。
[0253]
x为烃基，d
k
为羧基，e
k
为羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羟基羧酸等。脂肪族羟基羧酸的具体例与上述相同。
[0254]
x为烃基，d
k
为羧基，e
k
为硫羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羧酸硫醇等。脂肪族羧酸硫醇的具体例与上述相同。
[0255]
x为烃基，d
k
为氨基，e
k
为羧基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如侧链为烃基的中性氨基酸等。侧链为烃基的中性氨基酸的具体例与上述相同。
[0256]
x为烃基，d
k
为氨基，e
k
为氨基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族二胺等。作为脂肪族二胺，可列举例如1,4
‑
丁二胺、1,5
‑
戊二胺、1,2
‑
乙二胺、1,3
‑
丙二胺、1,6
‑
己二胺等。
[0257]
x为烃基，d
k
为氨基，e
k
为羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羟基胺等。作为脂肪族羟基胺，可列举例如单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、单丙醇胺、二丙醇胺、三丙醇胺、单丁醇胺、二丁醇胺、三丁醇胺、n
‑
甲基
‑
二乙醇胺、n,n
‑
二甲基单乙醇胺、氨基甲基丙醇等。
[0258]
x为烃基，d
k
为氨基，e
k
为硫羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如具有硫羟基的脂肪族胺等。作为具有硫羟基的脂肪族胺，可列举例如半胱胺、n
‑
烷基半胱胺、3
‑
氨基丙硫醇、4
‑
氨基丁硫醇等。
[0259]
x为烃基，d
k
为羟基，e
k
为羧基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羟基羧酸等。脂肪族羟基羧酸的具体例与上述相同。
[0260]
x为烃基，d
k
为羟基，e
k
为氨基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羟基胺等。脂肪族羟基胺的具体例与上述相同。
[0261]
x为烃基，d
k
为羟基，e
k
为羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族二醇等。作为脂肪族二醇，可列举例如乙二醇、1,3
‑
丙二醇、1,2
‑
丙二醇、1,2
‑
丁二醇、1,4
‑
丁二醇、异戊二醇、1,2
‑
戊二醇、1,3
‑
戊二醇、1,4
‑
戊二醇、1,5
‑
戊二醇、1,2
‑
己二醇、1,3
‑
己二醇、1,4
‑
己二醇、1,5
‑
己二醇、1,6
‑
己二醇、3
‑
甲基
‑
1,5
‑
戊二醇、2
‑
甲基
‑
2,4
‑
戊二醇、1,2
‑
庚二醇、1,3
‑
庚二醇、1,4
‑
庚二醇、1,5
‑
庚二醇、1,6
‑
庚二醇、1,7
‑
庚二醇、2,4
‑
庚二醇、3,4
‑
庚二醇、1,2
‑
辛二醇、2,3
‑
辛二醇、2
‑
乙基
‑
1,3
‑
己二醇、2
‑
丁基
‑2‑
乙基
‑
1,3
‑
丙二醇、2,5
‑
二甲基
‑
2,5
‑
己二醇等。
[0262]
x为烃基，d
k
为羟基，e
k
为硫羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如具有硫羟基的脂肪族醇等。作为具有硫羟基的脂肪族醇，可列举例如2
‑
巯基乙醇、3
‑
巯基
‑1‑
丙醇、3
‑
巯基
‑2‑
丙醇、4
‑
巯基
‑1‑
丁醇、4
‑
巯基
‑2‑
丁醇、4
‑
巯基
‑3‑
丁醇、1
‑
巯基
‑
1,1
‑
甲二醇、1
‑
巯基
‑
1,1
‑
乙二醇、3
‑
巯基
‑
1,2
‑
丙二醇(α
‑
硫甘油)、2
‑
巯基
‑
1,2
‑
丙二醇、2
‑
巯基
‑2‑
甲基
‑
1,3
‑
丙二醇、2
‑
巯基
‑2‑
乙基
‑
1,3
‑
丙二醇、1
‑
巯基
‑
2,2
‑
丙二醇、2
‑
巯基乙基
‑2‑
甲基
‑
1,3
‑
丙二醇、2
‑
巯基乙基
‑2‑
乙基
‑
1,3
‑
丙二醇等。
[0263]
x为烃基，d
k
为硫羟基，e
k
为羧基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族羧酸硫醇等。脂肪族羧酸硫醇的具体例与上述相同。
[0264]
x为烃基，d
k
为硫羟基，e
k
为氨基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如具有硫羟基的脂肪族胺等。具有硫羟基的脂肪族胺的具体例与上述相同。
[0265]
x为烃基，d
k
为硫羟基，e
k
为羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如具有硫羟基的脂肪族醇等。具有硫羟基的脂肪族醇的具体例与上述相同。
[0266]
x为烃基，d
k
为硫羟基，e
k
为硫羟基时，作为化合物(3
‑
k)，可列举例如脂肪族二硫醇等。作为脂肪族二硫醇，可列举例如1,4
‑
丁二硫醇、乙二硫醇等。
[0267]
x为中性氨基酸残基时，d
k
和e
k
的一个为羧基，另一个为氨基，化合物(3
‑
k)为中性氨基酸。作为中性氨基酸，可列举例如甘氨酸残基、丙氨酸残基、苯基丙氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、缬氨酸残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基等。从排除与x为烃基的情况下的重合的角度考虑，中性氨基酸优选为侧链不是烃基的中性氨基酸。作为侧链不是烃基的中性氨基酸，可列举例如甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺等。
[0268]
x为聚亚烷基二醇残基时，d
k
和e
k
各自独立地选自羧基、氨基、羟基和硫羟基，化合物(3
‑
k)为两末端具有羟基的聚亚烷基二醇、一个末端具有羟基、另一个末端具有羧基、氨基或硫羟基的聚亚烷基二醇衍生物、或者两末端分别独立地具有羧基、氨基或硫羟基的聚亚烷基二醇衍生物。一个或两个末端导入了各种官能团的聚亚烷基二醇衍生物有市售。
[0269]
使化合物(3
‑
1)的官能团e1与化合物(3
‑
2)的官能团d2按照常规方法反应，制造式:d1‑
x
‑
l
‑
x
‑
e2表示的化合物，接着使所制造的化合物的官能团e2与化合物(3
‑
3)的官能团d3按照常规方法反应，制造式:d1‑
x
‑
l
‑
x
‑
l
‑
x
‑
e3表示的化合物。重复同样的步骤，制造式:d1‑
x
‑
[l
‑
x]
p
‑2‑
e
p
‑1表示的化合物，使所制造的化合物的官能团e
p
‑1与化合物(3
‑
p)的官能团d
p
按照常规方法反应，制造式:d1‑
x
‑
[l
‑
x]
p
‑1‑
e
p
表示的化合物(3)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0270]
e1为羧基，d2为氨基时，通过二者的反应形成的l为
‑
co
‑
nh
‑
。e1为羧基，d2为羟基时，通过二者的反应形成的l为
‑
co
‑
o
‑
。e1为羧基，d2为硫羟基时，通过二者的反应形成的l为
‑
co
‑
s
‑
。e1为氨基，d2为羧基时，通过二者的反应形成的l为
‑
nh
‑
co
‑
。e1为羟基，d2为羧基时，通过二者的反应形成的l为
‑
o
‑
co
‑
。e1为硫羟基，d2为羧基时，通过二者的反应形成的l为
‑
s
‑
co
‑
。e1为硫羟基，d2为硫羟基时，通过二者的反应形成的l为
‑
s
‑
s
‑
。通过其它的2个的官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应形成的l的具体例相同。
[0271]
(步骤4a)准备下式(4)表示的化合物(4):a2‑
r
ꢀꢀꢀ
(4)
[式中，r与上述同义，a2表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。]。
[0272]
官能团a2是可与化合物(2)的官能团a1或化合物(3)的官能团e
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0273]
化合物(4)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(4)可以是市售品。
[0274]
a2为羧基时，作为化合物(4)，可列举例如直链状或支链状的饱和或不饱和的脂肪族羧酸等。作为脂肪族羧酸，可列举例如乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、庚酸、辛酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、山萮酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等。
[0275]
a2为氨基时，作为化合物(4)，可列举例如直链状或支链状的饱和或不饱和的脂肪族胺等。脂肪族胺可以为脂肪族伯胺和脂肪族仲胺的任一种，优选为脂肪族伯胺。作为脂肪族胺，可列举例如十二烷基胺、十三烷基胺、十四烷基胺、十五烷基胺、十六烷基胺、十七烷基胺、十八烷基胺、二十二烷基胺、油胺、n
‑
甲基
‑
十二烷基胺、n
‑
甲基
‑
十四烷基胺、n
‑
甲基
‑
十六烷基胺、n
‑
乙基
‑
十二烷基胺、n
‑
乙基
‑
十四烷基胺、n
‑
乙基
‑
十六烷基胺、n
‑
丙基
‑
十二烷基胺、n
‑
丙基
‑
十四烷基胺、n
‑
丙基
‑
十六烷基胺、二油基胺等。
[0276]
a2为羟基时，作为化合物(4)，可列举例如直链状或支链状的饱和或不饱和的脂肪族醇等。脂肪族醇可以为脂肪族伯醇、脂肪族仲醇和脂肪族叔醇的任一种，优选为脂肪族伯醇。作为脂肪族醇，可列举例如月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、山萮醇、1,1
‑
十二碳烯醇、1
‑
油醇、亚麻醇等。另外，化合物(4)可以是将脂肪族醇通过醚键键合于甘油的1位和3位或1位和2位得到的二烷基甘油。
[0277]
a 2
为硫羟基时，作为化合物(4)，可列举例如直链状或支链状的饱和或不饱和的脂肪族硫醇等。作为脂肪族硫醇，可列举例如甲硫醇、乙硫醇、丙硫醇、丁硫醇、戊硫醇、己硫醇、庚硫醇、辛硫醇、壬硫醇、癸硫醇、十一烷硫醇、十六烷硫醇、十八烷硫醇等。
[0278]
(步骤5a)式(i)中的p为0时，使化合物(2)的官能团a1与化合物(4)的官能团a2按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的羧酸型脂质(i)，使m为ho
‑
的羧酸型脂质(i)的羧基与化合物(1)的氨基反应，或者使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，由此制造式:m0‑
nh
‑
co
‑
x
‑
a1表示的化合物，接着使所制造的化合物的官能团a1与化合物(4)的官能团a2按照常规方法反应，由此制造m为m0‑
nh
‑
的羧酸型脂质(i)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0279]
式(i)中的p为1以上时，使化合物(3)的官能团e
p
与化合物(4)的官能团a2按照常规方法反应，制造式:d 1
‑
x
‑
[l
‑
x]
p
‑1‑
l
‑
r表示的化合物，接着使所制造的化合物的官能团d1与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，或者使化合物(2)的官能团a1与化合物(3)的官能团d1按照常规方法反应，由此制造式:hooc
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑
e
p
表示的化合物，接着，使所制造的化合物的官能团e
p
与化合物(4)的官能团a2按照常规方法反应，由此制造m为ho
‑
的羧酸型脂
质(i)。通过使m为ho
‑
的羧酸型脂质(i)的羧基与化合物(1)的氨基反应，制造m为m0‑
nh
‑
的羧酸型脂质(i)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0280]
如上所述，羧酸型脂质(i)可通过包括步骤1a~步骤5a的方法制造。各步骤中，只要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0281]
<羧酸型脂质(ii)的制造方法>以下，对羧酸型脂质(ii)的制造方法的一个实施方式进行说明。
[0282]
(步骤1b)m为m0‑
nh
‑
的情况下，准备化合物(1)。
[0283]
(步骤2b)准备a2为羧基的化合物(4)。
[0284]
(步骤3b)化合物(4)是m为ho
‑
的羧酸型脂质(ii)。
[0285]
通过使化合物(1)的氨基与a2为羧基的化合物(4)的羧基按照常规方法反应，制造m为m0‑
nh
‑
的羧酸型脂质(ii)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0286]
如上所述，羧酸型脂质(ii)可通过包含步骤1b~步骤3b的方法制造。各步骤中，只要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0287]
<羧酸型脂质(iii)的制造方法>以下，对羧酸型脂质(iii)的制造方法的一个实施方式进行说明。要说明的是，某1个化合物的结构式中存在2个以上相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，2个以上的化合物的结构式中存在相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0288]
(步骤1c)m为m0‑
nh
‑
的情况下，准备化合物(1)。
[0289]
(步骤2c)准备化合物(2)。
[0290]
(步骤3c)根据需要准备化合物(3)。
[0291]
(步骤4c)准备下式(5)表示的化合物(5)。
[0292]
[化42]
式(5)中，q与上述同义。式(5)中存在的多个q可以表示相同的整数，也可以表示不同的整数。
[0293]
式(5)中，q1是可与化合物(2)的官能团a1或化合物(3)的官能团e
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0294]
式(5)中，q 2
和q3各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。q2和q3可以相同，也可以不同。
[0295]
式(5)中，q1可以与q2和q3的一者或两者相同，也可以不同。q1与q2和q3的一者或两者不同时，用于保护q1的保护基团的选择容易。从这一点考虑，优选q1与q2和q3的一者或两者不同。
[0296]
化合物(5)只要是三官能性化合物，则没有特别限定。化合物(5)优选为三官能性氨基酸。三官能性氨基酸是具有为羧基的第1官能团、为氨基的第2官能团、选自羧基、氨基、羟基和硫羟基中的第3官能团的氨基酸。优选第3官能团与第1和第2官能团的一者或两者不同。作为三官能性氨基酸，可列举例如具有键合于α碳的羧基和氨基的同时，侧链具有羧基、氨基、羟基或硫羟基的氨基酸。作为这样的氨基酸，可列举例如赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸等。
[0297]
(步骤5c)根据需要，准备下式(6)表示的化合物(6)。
[0298]
[化43]式(6)中，q与上述同义。式(6)中存在的多个q可以表示相同的整数，也可以表示不同的整数。
[0299]
式(6)中，q4是可与化合物(5)的q2或q3、别的化合物(6)的q5或q6、或者后述的化合物(7)的官能团g
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。作为可反应的官能团的组合的具体例，与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0300]
式(6)中，q5和q6各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。q5和q6可以相同，也可以不同。
[0301]
式(6)中，q4可以与q5和q6的一者或两者相同，也可以不同。q4与q5和q6的一者或两者不同时，用于保护q4的保护基团的选择容易。从这一点考虑，优选q4与q5和q6的一者或两者不同。
[0302]
化合物(6)只要是三官能性化合物，则没有特别限定。化合物(6)优选为三官能性氨基酸。关于三官能性氨基酸的说明与上述相同。
[0303]
(步骤6c)根据需要，准备下式(7)表示的化合物(7):f 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
g p
ꢀꢀꢀ
(7)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，f1和g
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0304]
官能团f1是可与化合物(5)的官能团q2或q3、或者化合物(6)的官能团q5或q6反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。作为可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0305]
化合物(7)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(7)可以是市售品。
[0306]
化合物(7)的制造方法的一个实施方式与化合物(3)的制造方法的一个实施方式相同。
[0307]
(步骤7c)根据需要，准备下式(8)表示的化合物(8):h 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
i p
ꢀꢀꢀ
(8)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，h1和i
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0308]
官能团h1是可与化合物(5)的官能团q2或q3、或者化合物(6)的官能团q5或q6反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。作为可反应的官能团的组合的具体例，与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0309]
化合物(8)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(8)可以是市售品。
[0310]
化合物(8)的制造方法的一个实施方式与化合物(3)的制造方法的一个实施方式相同。
[0311]
(步骤8c)准备下式(9)表示的化合物(9):a3‑
r
ꢀꢀꢀ
(9)[式中，r与上述同义，a3表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0312]
官能团a3是可与化合物(5)的官能团q2或q3、化合物(6)的官能团q5或q6、或者化合物(8)的官能团i
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。作为可反应的官能团的组合的具体例，与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0313]
化合物(9)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(9)可以是市售品。化合物(9)的具体例与化合物(4)的具体例相同。
[0314]
(步骤9c)通过向化合物(5)的官能团q2和q3导入直链或支链，制造以下的式(5
‑
y)表示的化合物(5
‑
y)。式(5
‑
y)中，y与上述同义。
[0315]
[化44]
以下，对向化合物(5)的官能团q2导入直链或支链的情况进行说明，也可向化合物(5)的官能团q3同样地导入直链或支链。
[0316]
向化合物(5)的官能团q2导入直链时，制造以下的式(10)表示的化合物(10)。
[0317]
[化45]式(10)中的p为0时，通过使化合物(5)的官能团q2与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应，制造化合物(10)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0318]
式(10)中的p为1以上时，通过使化合物(5)的官能团q2与化合物(8)的官能团h1按照常规方法反应，接着，使所得到的化合物的官能团i
p
与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应，或者使化合物(8)的官能团i
p
与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应，接着，使所得到的化合物的官能团h1与化合物(5)的官能团q2按照常规方法反应，由此制造化合物(10)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0319]
向化合物(5)的官能团q2导入支链时，制造以下的式(11)表示的化合物(11)。
[0320]
[化46]式(11)中的p为0时，通过使化合物(5)的官能团q2与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，制造化合物(11)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0321]
式(11)中的p为1以上时，通过使化合物(5)的官能团q2与化合物(7)的官能团f1按照常规方法反应，接着使所得到的化合物的官能团g
p
与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，或者使化合物(7)的官能团g
p
与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，接着使所得到的化合物的官能团f1与化合物(5)的官能团q2按照常规方法反应，制造化合物(11)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0322]
向化合物(5)的官能团q2导入支链时，制造化合物(11)后，向化合物(11)的官能团q5和q6导入直链或支链。
[0323]
以下，对向化合物(11)的官能团q5导入直链或支链的情况进行说明，也可向化合
物(11)的官能团q6同样地导入直链或支链。
[0324]
向化合物(11)的官能团q5导入直链时，制造以下的式(12)表示的化合物(12)。
[0325]
[化47]式(12)中的p(
‑
(ch 2
) q
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
r中的p)为0时，通过使化合物(11)的官能团q5与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应而制造化合物(12)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0326]
式(12)中的p(
‑
(ch 2
) q
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
r中的p)为1以上时，通过使化合物(11)的官能团q5与化合物(8)的官能团h1按照常规方法反应，接着使所得到的化合物的官能团i
p
与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应，或者使化合物(8)的官能团i
p
与化合物(9)的官能团a3按照常规方法反应，接着使所得到的化合物的官能团h1与化合物(11)的官能团q5按照常规方法反应，制造化合物(12)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0327]
向化合物(11)的官能团q5导入支链时，制造以下的式(13)表示的化合物(13)。
[0328]
[化48]式(13)中的p(
‑
(ch 2
) q
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
(ch 2
) q
‑
ch(
‑
(ch 2
) q
‑
q 5
)(
‑
(ch 2
) q
‑
q 6
)中p)p为0时，通过使化合物(11)的官能团q5与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，制造化合物(13)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0329]
式(13)中的p(
‑
(ch 2
)
q
‑
[l
‑
x]
p
‑
l
‑
(ch2)
q
‑
ch(
‑
(ch2)
q
‑
q5)(
‑
(ch2)
q
‑
q6)中的p)为1以上时，通过使化合物(11)的官能团q5与化合物(7)的官能团f1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团g
p
与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，或者通过使化合物(7)的官能团g
p
与化合物(6)的官能团q4按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团f1与化合物(11)的官能团q5按照常规方法反应，制造化合物(13)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0330]
向新导入的官能团q5和q6与上述同样地导入直链或支链。通过将其重复所需的次
数，向化合物(5)的官能团q2导入具有所需的支链数的支链。向最后导入的官能团q5和q6与上述同样地导入直链。这样制造化合物(5
‑
y)。
[0331]
(步骤10c)式(iii)中的p为0时，通过使化合物(5
‑
y)的官能团q1与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的羧酸型脂质(iii)。使m为ho
‑
的羧酸型脂质(iii)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者通过使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着使所得到的化合物的官能团a1与化合物(5
‑
y)的官能团q1按照常规方法反应，制造m为m 0
‑
nh
‑
的羧酸型脂质(iii)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0332]
式(iii)中的p为1以上时，通过使化合物(5
‑
y)的官能团q1与化合物(3)的官能团e
p
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团d1与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的羧酸型脂质(iii)。使m为ho
‑
的羧酸型脂质(iii)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团a1与化合物(3)的官能团d1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团e
p
与化合物(5
‑
y)的官能团q1按照常规方法反应，制造m为m 0
‑
nh
‑
的羧酸型脂质(iii)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0333]
如上所述，羧酸型脂质(iii)可通过包含步骤1c~步骤10c的方法制造。各步骤中，只要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0334]
<羧酸型脂质(iv)的制造方法>以下，说明羧酸型脂质(iv)的制造方法的一个实施方式。
[0335]
(步骤1d)在m为m0‑
nh
‑
的情况下，准备化合物(1)。
[0336]
(步骤2d)准备q1为羧基的化合物(5)。
[0337]
(步骤3d)通过与步骤9c同样地向化合物(5)的官能团q2和q3导入直链或支链，制造m为ho
‑
的羧酸型脂质(iv)。接着使m为ho
‑
的羧酸型脂质(iv)的官能团q1(羧基)与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，由此制造羧酸型脂质(iv)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0338]
通过与步骤9c同样地向化合物(5)的官能团q2和q3导入直链或支链，制造官能团q 1
(羧基)的化合物(5
‑
y)(m为ho
‑
的羧酸型脂质(iv))。通过使所制造的化合物(5
‑
y)的官能团q 1
(羧基)与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，制造m为m 0
‑
nh
‑
的羧酸型脂质(iv)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0339]
如上所述，羧酸型脂质(iv)可通过包含步骤1d~步骤3d的方法制造。各步骤中，只要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0340]
<羧酸型脂质(v)的制造方法>以下，说明羧酸型脂质(v)的制造方法的一个实施方式。要说明的是，在某1个化合物的结构式中存在2个以上相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，在2个以上的化合物的结构式中存在相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。
[0341]
(步骤1e)m为m0‑
nh
‑
的情况下，准备化合物(1)。
[0342]
(步骤2e)准备化合物(2)。
[0343]
(步骤3e)根据需要准备化合物(3)。
[0344]
(步骤4e)准备下式(14)表示的化合物(14)。
[0345]
[化49]式(14)中，q与上述同义。式(14)中存在的多个q可以表示相同的整数，也可以表示不同的整数。
[0346]
式(14)中，q7和q8各自独立地为可与化合物(1)的氨基、化合物(2)的官能团a1、化合物(3)的官能团e
p
、后述的化合物(15)的官能团q
12
、或后述的化合物(16)的官能团k
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。q7和q8可以相同，也可以不同。
[0347]
式(14)中，q9表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。
[0348]
式(14)中，q9可以与q7和q8的一者或两者相同，也可以不同。q9与q7和q8的一者或两者不同时，用于保护q9的保护基团的选择容易。从这一点考虑，优选q9与q7和q8的一者或两者不同。
[0349]
化合物(14)只要是三官能性化合物，则没有特别限定。化合物(14)优选为三官能性氨基酸。关于三官能性氨基酸的说明与上述相同。
[0350]
(步骤5e)根据需要准备下式(15)表示的化合物(15)。
[0351]
[化50]式(15)中，q与上述同义。式(15)中存在的多个q可以表示相同的整数，也可以表示
不同的整数。
[0352]
式(15)中，q
10
和q
11
各自独立地为可与化合物(1)的氨基、化合物(2)的官能团a1、化合物(3)的官能团e
p
、别的化合物(15)的官能团q
12
、或后述的化合物(16)的官能团k
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。q
10
和q
11
可以相同，也可以不同。
[0353]
式(15)中，q
12
表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。
[0354]
式(15)中，q
12
可以与q
10
和q
11
的一者或两者相同，也可以不同。q
12
与q
10
和q
11
的一者或两者不同时，用于保护q
12
的保护基团的选择容易。从这一点考虑，优选q
12
与q
10
和q
11
的一者或两者不同。
[0355]
化合物(15)只要是三官能性化合物，则没有特别限定。化合物(15)优选为三官能性氨基酸。关于三官能性氨基酸的说明与上述相同。
[0356]
(步骤6e)根据需要，准备以下的式(16)表示的化合物(16):j 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
k p
ꢀꢀꢀ
(16)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，j1和k
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。]。
[0357]
官能团j1为可与化合物(15)的官能团q
12
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0358]
化合物(16)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(16)可以是市售品。
[0359]
化合物(16)的制造方法的一个实施方式与化合物(3)的制造方法的一个实施方式相同。
[0360]
(步骤7e)根据需要，准备以下的式(17)表示的化合物(17):t 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
u p
ꢀꢀꢀ
(17)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，t1和u
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0361]
官能团t1为可与化合物(14)的官能团q9反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0362]
化合物(17)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(17)可以是市售品。
[0363]
化合物(17)的制造方法的一个实施方式与化合物(3)的制造方法的一个实施方式相同。
[0364]
(步骤8e)准备以下的式(18)表示的化合物(18):a4‑
r
ꢀꢀꢀ
(18)[式中，r与上述同义，a4表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0365]
官能团a4为可与化合物(14)的官能团q9、或化合物(17)的官能团u
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0366]
化合物(18)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(18)可以是市售品，化合物(18)的具体例与化合物(4)的具体例同样。
[0367]
(步骤9e)通过向化合物(14)的官能团q7和q8导入直链或支链，制造以下的式(14
‑
z)表示的化合物(14
‑
z)。式(14
‑
z)中，z与上述同义。
[0368]
[化51]以下，说明向化合物(14)的官能团q7导入直链或支链的情况，也可向化合物(14)的官能团q8同样地导入直链或支链。
[0369]
向化合物(14)的官能团q7导入式(x)表示的直链时，制造以下的式(19)表示的化合物(19)。
[0370]
[化52]式(19)中p为0时，通过使化合物(14)的官能团q7与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的化合物(19)。使m为ho
‑
的化合物(19)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团a1与化合物(14)的官能团q7按照常规方法反应，制造m为m 0
‑
nh
‑
的化合物(19)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0371]
式(19)中的p为1以上时，使化合物(14)的官能团q7与化合物(3)的官能团e
p
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团d1与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的化合物(19)。使m为ho
‑
的化合物(19)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团a1与化合物(3)的官能团d1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团e
p
与化合物(14)的官能团q7按照常规方法反应，由此制造m为m 0
‑
nh
‑
的化合物(19)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0372]
向化合物(14)的官能团q7导入式(xi)表示的直链时，制造以下的式(20)表示的化合物(20)。
[0373]
[化53]向化合物(14)的官能团q7导入式(xi)表示的直链时，化合物(14)的官能团q7为羧基。要说明的是，向化合物(14)的官能团q8导入式(xi)表示的直链时，化合物(14)的官能团q8为羧基。通过使化合物(14)的官能团q7(羧基)与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，制造化合物(20)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0374]
向化合物(14)的官能团q7导入支链时，制造以下的式(21)表示的化合物(21)。
[0375]
[化54]式(21)中的p为0时，通过使化合物(14)的官能团q7与化合物(15)的官能团q 12
反应，制造化合物(21)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0376]
式(21)中的p为1以上时，通过使化合物(14)的官能团q7与化合物(16)的官能团k
p
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团j1与化合物(15)的官能团q
12
按照常规方法反应，或者使化合物(16)的官能团j1与化合物(15)的官能团q
12
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团k
p
与化合物(14)的官能团q7反应，制造化合物(21)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0377]
向化合物(14)的官能团q7导入支链时，制造化合物(21)后，向化合物(21)的官能团q
10
和q
11
导入直链或支链。
[0378]
以下，对向化合物(21)的官能团q
10
导入直链或支链的情况进行说明，可向化合物(21)的官能团q
11
也同样地导入直链或支链。
[0379]
向化合物(21)的官能团q
10
导入式(x)表示的直链时，制造以下的式(22)表示的化合物(22)。
[0380]
[化55]
式(22)中p(m
‑
co
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
中的p)为0时，使化合物(21)的官能团q
10
与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，由此制造m为ho
‑
的化合物(22)。使m为ho
‑
的化合物(22)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着，使得到的化合物的官能团a1与化合物(21)的官能团q
10
按照常规方法反应，由此制造m为m 0
‑
nh
‑
的化合物(22)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0381]
式(22)中的p(m
‑
co
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
中的p)为1以上时，通过使化合物(21)的官能团q
10
与化合物(3)的官能团e
p
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团d1与化合物(2)的官能团a1按照常规方法反应，制造m为ho
‑
的化合物(22)。使m为ho
‑
的化合物(22)的羧基与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，或者，使化合物(1)的氨基与化合物(2)的羧基按照常规方法反应，接着，使得到的化合物的官能团a 1
与化合物(3)的官能团d1按照常规方法反应，接着，使得到的化合物的官能团e p
与化合物(21)的官能团q
10
按照常规方法反应，制造m为m 0
‑
nh
‑
的化合物(22)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0382]
向化合物(21)的官能团q
10
导入式(xi)表示的直链的情况下，制造以下的式(23)表示的化合物(23)。
[0383]
[化56]向化合物(21)的官能团q
10
导入式(xi)表示的直链时，化合物(21)的官能团q
10
为羧基。要说明的是，向化合物(21)的官能团q
11
导入式(xi)表示的直链时，化合物(21)的官能团q
11
为羧基。通过使化合物(21)的官能团q
10
(羧基)与化合物(1)的氨基按照常规方法反应，制造化合物(23)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。
[0384]
向化合物(21)的官能团q
10
导入支链时，制造以下的式(24)表示的化合物(24)。
[0385]
[化57]
式(24)中的p((q 10
‑
(ch 2
) q
‑
)(q 11
‑
(ch 2
) q
‑
)ch
‑
(ch 2
) q
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
中的p)为0时，通过使化合物(21)的官能团q
10
与化合物(15)的官能团q
12
反应，制造化合物(24)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0386]
式(24)中的p((q 10
‑
(ch 2
) q
‑
)(q 11
‑
(ch 2
) q
‑
)ch
‑
(ch 2
) q
‑
[l
‑
x] p
‑
l
‑
中的p)为1以上时，通过使化合物(21)的官能团q
10
与化合物(16)的官能团k
p
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团j1与化合物(15)的官能团q
12
按照常规方法反应，或者使化合物(16)的官能团j1与化合物(15)的官能团q
12
按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团k
p
与化合物(21)的官能团q
10
反应，制造化合物(24)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0387]
向新导入的官能团q
10
和q
11
与上述同样地导入直链或支链。将其重复所需的次数，由此可向化合物(14)的官能团q7导入具有所需的支链数的支链。向最后导入的官能团q
10
和q
11
与上述同样地导入直链。这样制造化合物(14
‑
z)。
[0388]
(步骤10e)式(v)中的p为0时，通过使化合物(14
‑
z)的官能团q9与化合物(18)的官能团a4按照常规方法反应，制造羧酸型脂质(v)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0389]
式(v)中的p为1以上时，通过使化合物(14
‑
z)的官能团q9与化合物(17)的官能团t1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团u
p
与化合物(18)的官能团a4按照常规方法反应，或者使化合物(17)的官能团u
p
与化合物(18)的官能团a4按照常规方法反应，接着，使得到的化合物的官能团t1与化合物(14
‑
z)的官能团q9按照常规方法反应，制造羧酸型脂质(v)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0390]
如上所述，羧酸型脂质(v)可通过包含步骤1e~步骤10e的方法制造。各步骤中，只要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0391]
<羧酸型脂质(vi)的制造方法>以下，说明羧酸型脂质(vi)的制造方法的一个实施方式。要说明的是，某1个化合物的结构式中存在2个以上相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则可以相同，也可以不同。另外，在2个以上化合物的结构式中存在相同的符号(例如l、x、p、q等)时，这些相同的符号的意义只要在该符号的定义的范围内，则
可以相同，也可以不同。
[0392]
(步骤1f)与步骤9c同样地，通过向化合物(5)的官能团q2和q3导入直链或支链，制造化合物(5
‑
y)。
[0393]
步骤1f中制造的化合物(5
‑
y)中，q1是可与步骤2f中制造的化合物(14
‑
z)的q9、或、步骤3f中准备的化合物(25)的官能团w
p
反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0394]
(步骤2f)与步骤9e同样地向化合物(14)的官能团q7或q8导入直链或支链，由此制造化合物(14
‑
z)。
[0395]
(步骤3f)根据需要，准备以下的式(25)表示的化合物(25):v 1
‑
x
‑
[l
‑
x] p
‑1‑
w p
ꢀꢀꢀ
(25)[式中，l和x与上述同义，p表示1以上的整数，v1和w
p
各自独立地表示羧基、氨基、羟基或硫羟基。] 。
[0396]
官能团v1是可与化合物(14
‑
z)的官能团q9反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0397]
官能团w
p
是可与化合物(5
‑
y)的官能团q1反应的官能团，选自羧基、氨基、羟基和硫羟基。可反应的官能团的组合的具体例与官能团a1和官能团d1的组合的具体例相同。
[0398]
化合物(25)可按照常规方法制造。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。化合物(25)可以是市售品。
[0399]
化合物(25)的制造方法的一个实施方式与化合物(3)的制造方法的一个实施方式相同。
[0400]
(步骤4f)式(vi)中的p为0时，通过使化合物(14
‑
z)的官能团q9与化合物(5
‑
y)的官能团q1按照常规方法反应，制造羧酸型脂质(vi)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0401]
式(vi)中的p为1以上时，通过使化合物(14
‑
z)的官能团q9与化合物(25)的官能团v1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团w
p
与化合物(5
‑
y)的官能团q1按照常规方法反应，或者通过使化合物(25)的官能团w
p
与化合物(5
‑
y)的官能团q1按照常规方法反应，接着使得到的化合物的官能团v1与化合物(14
‑
z)的官能团q9按照常规方法反应，制造羧酸型脂质(vi)。此时，不参与反应的官能团可根据需要用保护基团保护，使参与反应的官能团彼此反应后，进行脱保护。利用保护基团的保护和脱保护可按照常规方法进行。通过2个官能团的反应形成的l的具体例与通过官能团e1和官能团d2的反应所形成的l的具体例相同。
[0402]
如上所述，羧酸型脂质(vi)可通过包含步骤1f~步骤4f的方法制造。各步骤中，只
要可制造所需要的化合物，则反应的顺序可适当改变。
[0403]
≪
其它脂质
≫
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜可以含有羧酸型脂质以外的1种或2种以上的脂质。作为羧酸型脂质以外的脂质，可列举例如磷脂、糖脂、甾醇等。以下，说明磷脂、糖脂和甾醇。
[0404]
<磷脂>作为磷脂，可列举例如甘油磷脂、鞘磷脂、心磷脂等。磷脂可以为在生理ph下带负电的磷脂，也可以为在生理ph下为两性离子(即、具有带负电的部分和带正电的部分)的磷脂。磷脂中包括磷脂所具有的磷酸基形成的盐，作为磷酸基的盐，可列举例如钙盐、镁盐、钾盐等。磷脂可以单独使用1种，也可以组合2种以上使用。以下，说明甘油磷脂、鞘磷脂和心磷脂。
[0405]
(甘油磷脂)作为甘油磷脂，可列举例如具有以下的式(i)表示的结构的脂质。甘油磷脂可以为在生理ph下带负电的甘油磷脂，也可以为在生理ph下为两性离子的甘油磷脂。作为在生理ph下带负电的甘油磷脂，可列举例如以下的式(i)中，x1表示的基团为阳离子性基团以外的基团(阴离子性基团或电中性的基团)的甘油磷脂。作为在生理ph下为两性离子的甘油磷脂，可列举例如以下的式(i)中x1表示的基团为阳离子基团的甘油磷脂。
[0406]
[化58]式(i)中，x1表示氢、胆碱残基、丝氨酸残基、肌醇残基、甘油残基或乙醇胺残基。x1表示的基团可以为阳离子性基团，也可以为阳离子性基团以外的基团(阴离子性基或电中性的基团)。胆碱残基是阳离子性基团，丝氨酸残基、肌醇残基和甘油残基是阳离子性基团以外的基团。
[0407]
式(i)中，x2和x3各自独立地表示氢、饱和或不饱和的酰基(
‑
co
‑
r，r为烃基)、或烃基。x2或x3表示的酰基中包含的烃基的具体例、和x2或x3表示的烃基的具体例与上述相同。x2或x3的至少一者优选为饱和或不饱和的酰基，x2或x3的两者进一步优选为饱和或不饱和的酰基。x2或x3的两者为酰基时，2个酰基可以相同，也可以不同。
[0408]
作为甘油磷脂，可列举例如磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺等。这些中，优选磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油。
[0409]
作为磷脂酸，可列举例如二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二油基磷脂酸等。
[0410]
作为磷脂酰胆碱，可列举例如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二癸酰基磷脂酰胆碱、二辛酰基磷脂酰胆碱、二己酰基磷脂酰胆碱、二丁酰基磷脂酰胆碱、二反式油酰基磷脂酰胆碱、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二花生四烯酰基磷脂酰胆碱、二(二十碳烯酰)磷脂酰胆碱、二庚酰
基磷脂酰胆碱、二己酰基磷脂酰胆碱、二（十七烷酰）磷脂酰胆碱、二山萮酰磷脂酰胆碱、十八碳三烯酰磷脂酰胆碱、氢化卵磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰
‑2‑
花生四烯酰磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰
‑2‑
油酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰
‑2‑
亚油酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰
‑2‑
肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰
‑2‑
硬脂酰磷脂酰胆碱、1
‑
硬脂酰
‑2‑
棕榈酰磷脂酰胆碱、1,2
‑
二肉豆蔻酰胺基
‑
1,2
‑
脱氧磷脂酰胆碱、1
‑
肉豆蔻酰
‑2‑
棕榈酰磷脂酰胆碱、1
‑
肉豆蔻酰
‑2‑
硬脂酰磷脂酰胆碱、二
‑
o
‑
十六烷基磷脂酰胆碱、反式二反式油酰基磷脂酰胆碱、二棕榈油酰
‑
磷脂酰胆碱、正十八烷基
‑2‑
甲基磷脂酰胆碱、正十八烷基磷脂酰胆碱、1
‑
月桂酰丙二醇
‑3‑
磷酸胆碱、赤
‑
n
‑
二十四烷酰基鞘磷脂酰胆碱、棕榈酰
‑
(9
‑
顺式
‑
十八碳烯基)
‑3‑
sn
‑
磷脂酰胆碱等。
[0411]
作为磷脂酰丝氨酸，可列举例如二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二月桂酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二油酰基磷脂酰丝氨酸、十八碳三烯酰磷脂酰丝氨酸、1,2
‑
二
‑
(9
‑
顺式
‑
十八碳烯基)
‑3‑
sn
‑
磷脂酰丝氨酸等。
[0412]
作为磷脂酰肌醇，可列举例如二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰肌醇等。
[0413]
作为磷脂酰甘油，可列举例如二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、氢化大豆磷脂酰甘油、氢化卵磷脂酰甘油等。
[0414]
作为磷脂酰乙醇胺，可列举例如二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二癸酰基磷脂酰乙醇胺、n
‑
戊二酰磷脂酰乙醇胺、n
‑
(7
‑
硝基
‑
2,1,3
‑
苯并噁二唑
‑4‑
基)
‑
1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
磷脂酰乙醇胺、十八碳三烯酰磷脂酰乙醇胺、n
‑
琥珀酰二油酰基磷脂酰乙醇胺、1
‑
十六烷基
‑2‑
棕榈酰甘油磷脂酰乙醇胺等。
[0415]
磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺中，x2或x3表示的酰基中包含的烃基的碳数、和x2或x3表示的烃基的碳数优选10~24、进一步优选为12~22、更进一步优选为14~18。
[0416]
甘油磷脂优选为二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺等。
[0417]
(鞘磷脂)作为鞘磷脂，可列举例如具有以下的式(ii)表示的结构的脂质。鞘磷脂可以为在生理ph下带负电的鞘磷脂，也可以为在生理ph下为两性离子的鞘磷脂。作为在生理ph下带负电的鞘磷脂，可列举例如以下的式(ii)中，x4表示的基团为阳离子性基团以外的基团(阴离子性基团或电中性基团)的鞘磷脂。作为在生理ph下为两性离子的鞘磷脂，可列举例如以下的式(ii)中，x4表示的基团为阳离子性基团的鞘磷脂。
[0418]
[化59]
式(ii)中，x4表示氢、胆碱残基、丝氨酸残基、肌醇残基、甘油残基或乙醇胺残基。x4表示的基团可以为阳离子性基团，也可以为阳离子性基团以外的基团(阴离子性基团或电中性的基团)。胆碱残基为阳离子性基团，丝氨酸残基、肌醇残基和甘油残基为阳离子性基团以外的基团。
[0419]
式(ii)中，x5表示氢、或饱和或不饱和的酰基。x5优选表示饱和或不饱和的酰基。酰基中包含的烃基的具体例与上述相同。酰基中包含的烃基的碳数优选为10~24、进一步优选为12~22、更进一步优选为14~18。
[0420]
作为鞘磷脂，可列举例如鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂、神经酰胺氨乙基膦酸、神经酰胺磷酰基乙醇胺、神经酰胺磷酰基甘油等。
[0421]
(心磷脂)作为心磷脂，可列举例如具有以下的式(iii)表示的结构的脂质。心磷脂可以为生理ph下带负电的心磷脂，也可以为在生理ph下为两性离子的心磷脂。
[0422]
[化60]式(iii)中，r6~r9各自独立地表示氢或者饱和或不饱和酰基，r6~r9的至少一个为饱和或不饱和酰基。优选r6~r9中的2~4个为酰基，进一步优选r6~r9中的3~4个为酰基，更进一步优选r6~r9的全部为酰基。r6~r9中的2个以上为酰基时，2个以上的酰基可以相同，也可以不同。酰基中包含的烃基的具体例与上述相同。酰基中包含的烃基的碳数优选为10~24、进一步优选为12~22、更进一步优选为14~18。
[0423]
<糖脂>作为糖脂，可列举例如甘油糖脂、鞘糖脂等。糖脂中含有2个以上酰基的情况下，2个以上酰基可以相同，也可以不同。酰基中含有的烃基的具体例与上述同样。酰基中含有的烃基的碳数优选为1~4、进一步优选为1~2、更进一步优选为2。糖脂可以单独使用1种，也可以组合2种以上使用。
[0424]
作为甘油糖脂，可列举例如二糖基甘油二酯、糖基甘油二酯、双半乳糖基甘油二酯、半乳糖基甘油二酯、磺氧基（
スルホキシ
）核糖基甘油二酯、(1,3)
‑
d
‑
甘露糖基(1,3)甘油二酯、双半乳糖基甘油酯、双半乳糖基二月桂酰甘油酯、双半乳糖基二肉豆蔻酰甘油酯、双半乳糖基二棕榈酰甘油酯、双半乳糖基二硬脂酰甘油酯、半乳糖基甘油酯、半乳糖基二月桂酰甘油酯、半乳糖基二肉豆蔻酰甘油酯、半乳糖基二棕榈酰甘油酯、半乳糖基二硬脂酰甘油酯、双半乳糖基二酰基甘油等。
[0425]
作为鞘糖脂，可列举例如神经酰胺(脑苷脂)、半乳糖基神经酰胺、乳糖基神经酰胺、二半乳糖基神经酰胺、神经节苷脂gm1、神经节苷脂gm2、神经节苷脂gm3、硫苷脂、低聚己糖神经酰胺、红细胞糖苷脂等。
[0426]
<甾醇>作为甾醇，可列举例如胆甾醇、胆甾醇琥珀酸酯、二氢胆甾醇、羊毛甾醇、二氢羊毛甾醇、链甾醇、豆甾醇、谷甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、酵母甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、岩藻甾醇、22
‑
酮甾醇、20
‑
羟基甾醇、7
‑
羟基胆甾醇、19
‑
羟基胆甾醇、22
‑
羟基胆甾醇、25
‑
羟基胆甾醇、7
‑
去氢胆甾醇、5α
‑
胆甾
‑7‑
烯
‑
3β
‑
醇、表胆甾醇、脱氢麦角甾醇、硫酸胆甾醇、半琥珀酸胆甾醇、邻苯二甲酸胆甾醇、磷酸胆甾醇、戊酸胆甾醇、胆甾醇半琥珀酸酯、3βn
‑
(n’,n
’‑
二甲基氨基乙烷)
‑
氨基甲酰基胆甾醇、胆甾醇乙酸酯、胆甾醇油酸酯、胆甾醇亚油酸酯、胆甾醇肉豆蔻酸酯、胆甾醇棕榈酸酯、胆甾醇花生酸酯、粪甾醇、胆甾醇酯、胆甾醇基磷酸胆碱、3,6,9
‑
三氧杂辛烷
‑1‑
醇
‑
胆甾醇基
‑
3e
‑
醇等。甾醇可以单独使用1种，也可以组合2种以上使用。
[0427]
<脂肪酸>第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜可以含有脂肪酸。脂肪酸可以为饱和脂肪酸，也可以为不饱和脂肪酸。脂肪酸的碳数没有特别限定，为10~24，进一步优选为12~22，更进一步优选为14~18。作为脂肪酸，可列举例如辛酸、天竺葵酸、癸酸、十一烯酸、月桂酸、十三碳烯酸、肉豆蔻酸、十五碳烯酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九碳烯酸、花生酸、十二碳烯酸、十四碳烯酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳烯酸、芥酸、二十二碳五烯酸等。脂肪酸可以单独使用1种，也可以组合2种以上使用。
[0428]
磷脂、糖脂、甾醇等其它脂质可以用亲水性高分子等修饰。作为亲水性高分子，可列举例如聚乙二醇(peg)、聚甘油、聚丙二醇、聚乙烯醇、苯乙烯
‑
马来酸酐交替共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、合成聚氨基酸等。这些亲水性高分子可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。
[0429]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，磷脂的含量以第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准，优选为0~95摩尔%、进一步优选为0~50摩尔%、更进一步优选为0~30摩尔%。第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，磷脂的含量相对于本发明的羧酸型脂质的含量的摩尔比(磷脂的含量:本发明的羧酸型脂质的含量)优选为0:1~19:1、进一步优选为0:1~10:1、更进一步优选为0:1~1:1。
[0430]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，甾醇的含量以第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准，优选为0~50摩尔%、进一步优选为0~40摩尔%、更进一步优选为0~30摩尔%。第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，甾醇的含量相对于本发明的羧酸型脂质的含量的摩尔比(甾醇的含量:本发明的羧酸型脂质的含量)优选为0:1~9:1、进一步优选为0:1~5:1、更进一步优选为0:1~1:1。
[0431]
羧酸型脂质、磷脂和甾醇的具体组合可适当选自上述的羧酸型脂质、磷脂和甾醇中。
[0432]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有本发明的羧酸型脂质和磷脂的情况下，优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂为选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺中的至少1种甘油磷脂。进一步优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂为选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘
油中的至少1种甘油磷脂。更进一步优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂是选自二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少1种甘油磷脂。
[0433]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有羧酸型脂质和甾醇的情况下，优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为ho
‑
或m0‑
nh
‑
、m0为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，甾醇为胆甾醇。
[0434]
第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有羧酸型脂质、磷脂和甾醇的情况下，优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m是天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂是选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺中的至少1种甘油磷脂，甾醇为胆甾醇。进一步优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂是选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少1种甘油磷脂，甾醇是胆甾醇。更进一步优选本发明的羧酸型脂质是式(i)~(vi)中的m为天冬氨酸残基、谷氨酸残基、ag残基或它们的盐的羧酸型脂质，磷脂是选自二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少1种甘油磷脂，甾醇是胆甾醇。
[0435]
≪
第2方式
≫
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有在生理ph下带负电的1种或2种以上的磷脂。生理ph通常为ph5.5~9.0、优选为ph6.5~8.0、更优选为ph7.0~7.8。在生理ph下带负电的磷脂优选为在生理ph下带负电的甘油磷脂、鞘磷脂或心磷脂。关于磷脂、甘油磷脂、鞘磷脂和心磷脂的说明与第1方式相同。在生理ph下带负电的甘油磷脂优选为上式(i)中x1表示的基团为阳离子性基团以外的基团(阴离子性团或电中性的基团)的甘油磷脂。在生理ph下带负电的鞘磷脂优选为上式(ii)中x4表示的基团为阳离子性基团以外的基团(阴离子性基团或电中性的基团)的鞘磷脂。
[0436]
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜可以含有在生理ph下不带负电的1种或2种以上的磷脂。作为在生理ph下不带负电的磷脂，可列举例如在生理ph下为两性离子的(即具有带负电的部分和带正电的部分，整体为电中性的)甘油磷脂、鞘磷脂、心磷脂等。作为在生理ph下为两性离子的甘油磷脂，可列举例如上式(i)中x1表示的基团为阳离子性基团的甘油磷脂。作为在生理ph下为两性离子的鞘磷脂，可列举例如上式(ii)中x4表示的基团为阳离子性基团的鞘磷脂。
[0437]
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜从排除与第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的重合方面考虑，优选不含本发明的羧酸型脂质。第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜除了不含本发明的羧酸型脂质的点，可与第1方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜同样地构成。
[0438]
磷脂具有亲水性部分和疏水性部分，亲水性部分具有磷酸基或其盐。磷脂为阴离子性脂质，存在于其亲水性部分的磷酸基或其盐在生理ph下可电离而带负电。因此，第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜如果与血液接触而被血液中的水分水合，则第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的表面可带负电。由此，第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜的至少一部分通过静电相互作用与多个血小板(特别是活化了的血小板)结合，可促进血小板的凝集，进而可促进血液的凝固。但是，该记载不否定范德华
力等静电相互作用以外的相互作用可参与本发明的血小板凝集。
[0439]
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中，在生理ph下带负电的磷脂的含量只要第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜可与多个血小板结合则没有特别限定。在生理ph下带负电的磷脂含量以第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准，优选为5~100摩尔%、更优选为15~100摩尔%、更进一步优选为50~100摩尔%。第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有在生理ph下不带负电的磷脂的情况下，在生理ph下不带负电的磷脂含量相对于在生理ph下带负电的磷脂含量的摩尔比(在生理ph下不带负电的磷脂含量:在生理ph下带负电的磷脂含量)优选为0:1~19:1、更优选为0:1~5:1、更进一步优选为0:1~1:1。
[0440]
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜还可以含有磷脂以外的脂质。作为磷脂以外的脂质，可列举例如糖脂、甾醇等。磷脂以外的脂质可以单独使用1种，也可以将2种以上组合使用。关于磷脂以外的脂质的说明与第1方式相同。
[0441]
第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有甾醇的情况下，甾醇含量以第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜中含有的总脂质量为基准，优选为0~50摩尔%、更优选为0~40摩尔%、更进一步优选为0~30摩尔%。第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有甾醇的情况下，甾醇含量相对于在生理ph下带负电的磷脂的摩尔比(甾醇含量:在生理ph下带负电的磷脂含量)优选为0:1~9:1、更优选为0:1~5:1、更进一步优选为0:1~1:1。
[0442]
一个实施方式中，第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有在生理ph下带负电的磷脂和甾醇。优选在生理ph下带负电的磷脂为选自二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少1种甘油磷脂，甾醇为胆甾醇。
[0443]
另外的实施方式中，第2方式的脂质颗粒、脂质颗粒的凝集体或脂质膜含有在生理ph下带负电的磷脂、在生理ph下不带负电的磷脂和甾醇。优选在生理ph下带负电的磷脂为选自二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少1种甘油磷脂，在生理ph下不带负电的磷脂优选为选自二棕榈酰磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺中的至少1种甘油磷脂，甾醇为胆甾醇。
[0444]
止血材料的制造方法本发明的止血材料可通过例如包含以下步骤的方法制造:(a)准备水不溶性的基材的步骤;(b)准备含有阴离子性脂质的脂质的步骤;和(c)在步骤(a)中准备的基材上担载步骤(b)中准备的脂质的步骤关于步骤(a)中准备的基材的说明与上述相同。
[0445]
关于步骤(b)中准备的脂质的说明与上述相同。
[0446]
基材上担载的脂质的形态为脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体的情况下，在步骤(b)中准备含有阴离子性脂质的脂质颗粒的分散液。
[0447]
基材上担载的脂质的形态为脂质膜的情况下，在步骤(b)中准备含有阴离子性脂质的脂质溶液或脂质分散液。
[0448]
基材上担载的脂质的形态为脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体、脂质膜的情况下，在步骤(c)中在基材上担载脂质颗粒和/或脂质膜的方式没有特别限定，可列举例如物理吸
附、共价键、氢键、配位键、静电相互作用、范德华力、疏水性相互作用等。在基材上担载脂质颗粒和/或脂质膜的方法没有特别限定，可通过例如在脂质颗粒的分散液中浸渍基材后，将基材冷冻干燥来担载脂质颗粒。另外，通过喷雾器等向基材喷脂质颗粒的分散液、脂质溶液后，将基材冷冻干燥，由此可担载脂质颗粒和/或脂质颗粒的凝集体、脂质膜。作为分散介质，可列举例如生理食盐水、磷酸缓冲液、醇类等。作为醇，可列举例如叔丁醇。另外，冷冻干燥通过例如在20~40pa下静置12小时进行。
[0449]
在基材上担载脂质颗粒时使用的脂质颗粒的分散液除了脂质颗粒以外可以含有药学上允许的添加剂。作为添加剂，可列举例如等渗剂、稳定剂、抗氧化剂、ph调节剂、赋形剂、稀释剂、湿润剂、乳化剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增量剂、分散剂、悬浮剂、渗透压调节剂、防腐剂、着色剂、紫外线吸收剂、保湿剂、增稠剂、光亮剂、保存剂、矫味剂、香料、成膜剂、矫臭剂、细菌抑制剂等。这些添加剂可单独使用1种，也可以将2种以上组合使用。
[0450]
使用支撑基材的支撑部件的情况下，基材上的脂质颗粒的担载在将基材和支撑部件组合前或后进行均可，优选在将基材和支撑部件组合后进行。
实施例
[0451]
以下基于实施例更详细地说明本发明。
[0452]
〔脂质的合成〕合成以下的脂质，在实施例中使用。
[0453]
(1)式(a2)所示的羧酸型脂质(dhsg:1,5
‑
二(十六烷基)
‑
n
‑
琥珀酰基
‑
l
‑
谷氨酸酯)的合成按照以下的步骤合成dhsg。要说明的是，dhsg可在合成m为m0‑
nh
‑
的本发明的羧酸型脂质(例如glu
‑
dhsg、asp
‑
dhsg、ag
‑
dhsg等)时作为起始物质使用。
[0454]
将谷氨酸(2.96g、20mmol)、对甲苯磺酸(4.56g、24mmol)和十六烷基醇(10.65g、44mmol)溶解于苯(150ml)中进行混合，将混合物脱水的同时在100℃回流14小时。接着，减压除去溶剂，将得到的残留物再溶解于氯仿，用碳酸氢钠饱和水溶液洗涤3次，进一步用水洗涤3次。接着，将氯仿层用硫酸钠脱水，过滤后，将得到的溶液的溶剂减压除去。将得到的残留物在60℃溶解于甲醇(400ml)，将得到的溶液冷却至4℃，重结晶后，过滤结晶，干燥，得到白色固体形式的下式(a1)表示的谷氨酸衍生物(glu2c16)(9.5g、收率80%)。
[0455]
[化61]将得到的glu2c16(1.49g、2.5mmol)在50ml容量的茄形烧瓶中溶解于氯仿(7.5ml)与thf(7.5ml)的混合溶液(混合比1:1(v/v))进行混合，在混合物中添加琥珀酸酐(0.374g、3.74mmol)，在23℃搅拌12小时得到反应液。将得到的反应液的溶剂减压除去，将残留物溶解于乙醇和丙酮的混合溶液(混合比1:5(v/v))中，将得到的溶液在4℃冷却3小时，重结晶。将得到的结晶用玻璃滤器(g4)过滤，将过滤物溶解于氯仿。将得到的溶液的溶剂减压除去
后，将残留物再溶解于叔丁醇，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(a2)表示的dhsg(1376mg、1.98mmol、收率79%)。
[0456]
[化62](2)式(b2)表示的羧酸型脂质(asp
‑
dhsg)的合成按照以下的步骤向dhsg的亲水性部分(羧基)导入天冬氨酸残基，合成羧酸型脂质(asp
‑
dhsg)。
[0457]
在50ml容量的茄形烧瓶中，在二氯甲烷(4ml)中溶解dhsg(197mg、0.28mmol)、asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
･
hcl(l
‑
天冬氨酸二叔丁酯盐酸盐)(120mg、0.42mmol)、pybop(1h
‑
苯并三唑
‑1‑
基氧三(吡咯烷
‑1‑
基]磷鎓
･
六氟磷酸盐)(177mg、0.34mmol)和tea(三乙基胺)(57.4μl、0.42mmol)，在23℃搅拌24小时，得到反应液。将得到的反应液用二氯甲烷和饱和碳酸钠水溶液分液2次，进一步用二氯甲烷和饱和氯化钠水溶液分液2次，由此除去水溶性的杂质和酸性的杂质，得到粗产物。用硫酸钠将粗产物脱水后，用硅胶柱色谱(洗脱溶剂:己烷/乙酸乙酯=1/1)纯化。将得到的纯化物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(b1)表示的asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
dhsg(160mg，0.17mmol，收率61.8%)。
[0458]
[化63]将得到的asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
dhsg(40mg、0.044mmol)在50ml容量的茄形烧瓶中溶解于三氟乙酸(4ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中，在23℃搅拌3小时，将得到的反应液用耐酸泵减压过滤。将过滤物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(b2)表示的asp
‑
dhsg(32mg、0.040mmol、收率92.4%)。
[0459]
[化64](3)式(c2)表示的羧酸型脂质(glu
‑
dhsg)的合成按照以下的步骤，向dhsg的亲水性部分(羧基)导入谷氨酸残基，合成羧酸型脂质(glu
‑
dhsg)。
[0460]
在50ml容量的茄形烧瓶中，在二氯甲烷(4ml)中溶解dhsg(197mg、0.28mmol)、glu(
‑
otbu)(
‑
otbu)
･
hcl(l
‑
谷氨酸二叔丁酯盐酸盐)(127mg、0.43mmol)、pybop(182mg、
0.35mmol)和tea(58.8μl、0.43mmol)，在23℃搅拌24小时，得到反应液。将得到的反应液用二氯甲烷和饱和碳酸钠水溶液分液2次，进一步用二氯甲烷和饱和氯化钠水溶液分液2次，由此除去水溶性的杂质和酸性的杂质，得到粗产物。用硫酸钠将粗产物脱水后，通过硅胶柱色谱(洗脱溶剂:己烷/乙酸乙酯=1/1)纯化。将得到的纯化物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(c1)表示的glu(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
dhsg(216,4mg、0.23mmol、收率79.8%)[化65]将得到的glu(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
dhsg(40mg、0.043mmol)在50ml容量的茄形烧瓶中溶解于三氟乙酸(4ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中，在23℃搅拌3小时，将得到的反应液用耐酸泵减压过滤。将过滤物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(c2)表示的glu
‑
dhsg(35mg、0.042mmol、收率87.6%)。
[0461]
[化66](4)式(d2)表示的羧酸型脂质(ag
‑
dhsg)的合成按照以下的步骤，向dhsg的亲水性部分(羧基)导入由2个天冬氨酸残基和1个谷氨酸残基构成的肽残基(ag残基)，合成羧酸型脂质(ag
‑
dhsg)。
[0462]
在50ml容量的茄形烧瓶中，在二氯甲烷(4ml)中溶解glu
‑
dhsg(57.4mg、0.069mmol)、asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
･
hcl(58.9mg、0.209mmol)、pybop(86.9mg、0.167mmol)和tea(30μl、0.209mmol)，在23℃搅拌72小时，得到反应液。将得到的反应液用二氯甲烷和饱和碳酸钠水溶液分液2次，进一步用二氯甲烷和饱和氯化钠水溶液分液2次，由此除去水溶性的杂质和酸性的杂质，得到粗产物。用硫酸钠将粗产物脱水后，通过硅胶柱色谱(洗脱溶剂:己烷/乙酸乙酯=1/2)纯化。将得到的纯化物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(d1)表示的asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
glu
‑
dhsg(38.9mg、0.03mmol、收率44.0%)。
[0463]
[化67]
将得到的asp(
‑
otbu)(
‑
otbu)
‑
glu
‑
dhsg(35mg、0.027mmol)在50ml容量的茄形烧瓶中溶解于三氟乙酸(4ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中，在23℃搅拌3小时，将得到的反应液用耐酸泵减压过滤。将过滤物再溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥，得到白色粉末形式的下式(d2)表示的ag
‑
dhsg(23mg、0.021mmol、收率80.0%)。
[0464]
[化68](5)式(e2)表示的羧酸型脂质的合成按照以下的步骤，合成式(e2)表示的羧酸型脂质。要说明的是，该羧酸型脂质在合成m为m0‑
nh
‑
的本发明的羧酸型脂质时可用作起始物质。即，可向该羧酸型脂质的亲水性部分(羧基)与上述同样地导入天冬氨酸残基、谷氨酸残基等的氨基酸残基、ag残基等的肽残基等，合成m为m0‑
nh
‑
的本发明的羧酸型脂质。
[0465]
将l
‑
谷氨酸(1.47g、10mmol)和无水叔丁氧基羰基(2.62g、12mmol)溶解于二噁烷(20ml)、水(10ml)和1n naoh(10ml)的混合溶液中，在25℃下搅拌6小时得到反应液。将得到的反应液在减压下浓缩至10ml，添加5%硫酸氢钾水溶液至ph2.4后，用乙酸乙酯洗涤3次，进而用水洗涤3次。将乙酸乙酯层用硫酸钠脱水后，减压除去溶剂，将残留物溶解于己烷，将得到的溶液在4℃冷却进行重结晶。将得到的结晶过滤，干燥过滤物，得到白色固体形式的氨基被保护基团(叔丁氧基羰基(boc基))保护的支链状化合物1(1.85g、收量75%)。
[0466]
将得到的支链状化合物1(0.49g、2mmol)和n,n
’‑
二环己基碳二亚胺(dcc)(0.82g、4mmol)溶解于氯仿，在4℃搅拌1小时，得到混合物。将得到的混合物滴加到溶解有谷氨酸衍生物(glu2c16)(2.98g、5mmol)和三乙基胺(0.20g、2mmol)的氯仿溶液中，得到反应液。将得到的反应液在25℃搅拌6小时后，用玻璃滤器(g4)过滤，将过滤液减压浓缩，用甲醇使其再沉淀进行纯化。将沉淀物过滤后，通过硅胶柱色谱(洗脱溶剂:氯仿/甲醇=6/1(v/v))纯化，得到支链状化合物2(1.40g、收量50%)。
[0467]
将得到的支链状化合物2(1.40g、1mmol)溶解于三氟乙酸(tfa)，搅拌1小时，除去保护基团(boc基)。将得到的溶液溶解于甲醇，在4℃冷却，重结晶。将得到的结晶过滤，将过滤物干燥，得到下式(e1)表示的支链状化合物3(1.17g、收量90%)。
[0468]
[化69]将得到的支链状化合物3(1.17g、0.9mmol)溶解于氯仿和四氢呋喃的混合溶液(混合比1:1(v/v))中，混合，向混合物中添加琥珀酸酐(130g、1.35mmol)，搅拌5小时，得到反应液。减压除去所得到的反应液的溶剂，将残留物溶解于乙醇和丙酮的混合溶液(混合比1:5(v/v))，将得到的溶液在4℃冷却，重结晶。过滤得到的结晶，将过滤物干燥，得到白色固体形式的下式(e2)表示的羧酸型脂质(0.95g、收率75%)。
[0469]
[化70]〔实施例1~10和比较例1〕(1)脂质体的制备按照以下的步骤制备脂质体。此时，将通过上述合成方法得到的羧酸型脂质与以下的脂质(市售品)一起使用。要说明的是，以下有时将胆甾醇记作“chol”。
[0470]
dppc(1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷脂酰胆碱，日本精化株式会社制)dppg(1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷脂酰甘油，日油产业株式会社制)dpps(1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷脂酰丝氨酸，日油产业株式会社制)胆甾醇(日本精化株式会社制)peg
‑
dspe(1,2
‑
二硬脂酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷脂酰乙醇胺
‑
n
‑
[单甲氧基聚(乙二醇)]，日油株式会社制)将脂质以表1所示的摩尔比混合，得到脂质混合物。将得到的脂质混合物溶解于叔丁醇中，将得到的溶液冷冻干燥12小时，得到脂质粉末。实施例1~8和比较例1中将得到的脂质粉末用dpbs(dulbecco's pbs、3wt%)在25℃水合12小时，通过挤出法(孔径450nm
×
2、孔径220nm
×
2、孔径200nm
×
1)控制脂质体的粒径，得到脂质体分散液。实施例9和10中，将得到的脂质粉末用hepes buffer(20mm)在50℃进行1小时超声处理，得到脂质体分散液。
[0471]
在实施例1中使用dppc、胆甾醇、dhsg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:dhsg:peg
‑
dspe=
5:5:1:0.033(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l551dhsg)。在实施例2中使用dppc、胆甾醇、dhsg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:dhsg:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555dhsg)。在实施例3中使用dhsg(不使用dhsg以外的脂质，得到本发明例的脂质体(ldhsg)。在实施例4中，使用dppc、胆甾醇、asp
‑
dhsg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:asp
‑
dhsg:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555asp
‑
dhsg)。在实施例5中使用dppc、胆甾醇、glu
‑
dhsg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:glu
‑
dhsg:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555glu
‑
dhsg)。在实施例6中使用dppc、胆甾醇、ag
‑
dhsg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:ag
‑
dhsg:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555ag
‑
dhsg)。在实施例7中使用dppc、胆甾醇、dppg和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:dppg:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555dppg)。在实施例8中使用dppc、胆甾醇、dpps和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:dpps:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l555dpps)。在实施例9中使用胆甾醇和asp
‑
dhsg(胆甾醇:asp
‑
dhsg=5:5(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l055(asp))。在实施例10中使用胆甾醇和ag
‑
dhsg(dppc:胆甾醇:ag
‑
dhsg=5:10(摩尔比))，得到本发明例的脂质体(l05[10](ag))。在比较例1中使用dppc、胆甾醇和peg
‑
dspe(dppc:胆甾醇:peg
‑
dspe=5:5:5:0.045(摩尔比))，得到不含羧酸型脂质的比较例的脂质体(l555dhsg)。
[0472]
(2)脂质体的平均粒径的测定按照以下的步骤，测定脂质体的平均粒径。
[0473]
将用0.2μm过滤器过滤了的0.1mg/ml的脂质体分散液1ml加入用空气除尘器除去了灰尘等的样品池（
ディスポセル
）中，使用zetasizer nano(malvern panalytical ltd.制)测定平均粒径(25℃，n=3)。脂质体的平均粒径示于表2。
[0474]
(3)脂质体的zeta电位的测定按照以下的步骤，测定脂质体的zeta电位。
[0475]
在zeta电位测定用小池(folded capillary cells)(dts1061、malvern panalytical ltd.制)中用2.5ml注射器加入0.1mg/ml的脂质体分散液1ml，除去小池内的气泡后，使用zetasizer nano(malvern panalytical ltd.制)，在ph7.4、25℃下测定zeta电位(n=3)。脂质体的zeta电位的平均值示于表2。
[0476]
(4)活化血小板凝集能力的评价按照以下的步骤，制备活化血小板凝集能力的评价中使用的血小板样品。
[0477]
使用18g的蝶形针和20ml注射器，通过心脏穿刺法由豚鼠(hartley、雄性、8周龄、体重450g、日本slc株式会社制)采取约15ml血液，转移至2根14ml管中各相同量。接着，添加并混合3.8%柠檬酸钠，使相对于全血的体积为1/10，使用聚乙烯吸管(poly spuit) 慢慢搅拌2次，得到混合物。接着，将得到的混合物离心分离(600rpm、室温、15分钟)，回收上清的多血小板血浆(prp)。接着，将prp回收后的血液再次离心分离(2000rpm、室温、10分钟)，回收上清的乏血小板血浆(ppp)。使用多项目自动血球计测装置，测定回收的prp和ppp的血小板数，混合prp、ppp和hepes
‑
tyrode缓冲液，使血小板浓度为2.0
×
10 5
/μl，得到血小板样品。
[0478]
使用得到的血小板样品和脂质体分散液，按照以下的步骤，进行血小板凝集块中的荧光标记脂质体的观察和荧光定量。
[0479]
在玻璃底96孔板上，混合通过上述方法制备的源自豚鼠的血小板样品(血小板浓度:2.0
×
10 5
/μl)50μl、含有用荧光物质dio(3,3
’‑
二(十八烷基)氧代羰花青高氯酸盐)或
did(1,1
’‑
二(十八烷基)
‑
3,3,3’,3
’‑
四甲基吲哚二羰花青高氯酸盐)标记了的脂质体的脂质体分散液(200μm、5μl)，在室温静置2分钟。根据需要，添加活化血小板的adp(1μm、5μl)，在室温静置4分钟后，用8%福尔马林(60μl、最终浓度4%)在室温固定30分钟，固定结束后，用hepes
‑
tyrode缓冲液(100μl)洗涤3次，得到血小板凝集块。使用荧光显微镜(20倍或60倍)，观察得到的血小板凝集块中的荧光标记脂质体。使用脂质体分散液得到的血小板凝集块的观察结果(荧光显微镜照片)示于图3a、3b和3c。实施例1(l551dhsg)、实施例3(ldhsg)、实施例5(l555glu
‑
dhsg)、实施例6(l555ag
‑
dhsg)、实施例7(l555dppg)、实施例8(l555dpps)、实施例9(l055(asp))和实施例10(l05[10](ag))中作为标记使用did(图3a，图3c)。实施例2(l555dhsg)中作为标记使用dio和did(图3a，图3b)。实施例4(l555asp
‑
dhsg)中作为标记使用dio(图3b)。另外，使用imagej测定图3a、3b和3c中所示的各血小板凝集块中的荧光标记脂质体的荧光强度。荧光强度的测定结果示于表3。要说明的是，表3中的荧光强度的值为以使用实施例2(l555dhsg)的情况下的荧光强度为1时的相对值。
[0480]
[表3]*与比较例1(l550dhsg)比较荧光强度在统计学上显著高(p<0.05，t检验)**与比较例1(l550dhsg)比较荧光强度在统计学上显著高(p<0.01，t检验)<**>与比较例1(l550dhsg)比较荧光强度在统计学上显著高(p<0.01，配对t检验)a)将1个样品测定3次时的平均
±
标准偏差。
[0481]
如表3所示，实施例1~10的脂质体与比较例1的脂质体相比，血小板凝集块中的荧光强度高。这表明实施例1~10的脂质体与比较例1的脂质体相比，具有优异的血小板凝集促进能力。特别是，实施例2~5、7和8的脂质体与比较例1的脂质体相比，血小板凝集块中的荧光强度显著高。这表明实施例2~5、7和8的脂质体与比较例1的脂质体相比具有显著优异的血小板凝集促进能力。
[0482]
(5)聚
‑
l
‑
乳酸树脂止血材料的止血能力评价按照以下的步骤评价聚
‑
l
‑
乳酸树脂止血材料的止血能力。
[0483]
(基材复合体的制作)按照以下的步骤，制作具有纤维素海绵(支撑部件的一个例子)和在纤维素海绵上
形成的聚
‑
l
‑
乳酸树脂制纤维片材(基材的一个例子)的基材复合体。
[0484]
将含有在80℃真空干燥了24小时的聚
‑
l
‑
乳酸树脂(plla树脂、重均分子量(mw):80000、熔点(tm):169℃、熔体流动速率(mfr):78g/10分)80质量%、聚乙二醇(和光纯药工业制、重均分子量(mw):6000)20质量%的热塑性树脂组合物供给接地的挤出机，在300℃的纺丝温度下熔融混炼，由纺丝喷嘴挤出。此时，向由纺丝喷嘴喷出的树脂流体喷380℃的辅助空气，同时由喷嘴的侧面通过独立的电极施加10kv的电压，将上述热塑性树脂组合物的熔融物向纤维素海绵(toray fine chemicals co.， ltd.制、厚度0.5mm)喷10秒，得到具有纤维素海绵(支撑部件的一个例子)、和在纤维素海绵上形成的plla树脂制纤维片材(基材的一个例子)的基材复合体。
[0485]
(平均纤维直径的测定)按照以下步骤测定构成纤维片材的纤维的平均直径。
[0486]
将由纤维片材采取的5mm见方的样品用扫描型电子显微镜(株式会社日立制作所公司制s
‑
3500n型)以3,000倍的倍率拍摄。使用图像处理软件(winroof(注册商标))，由得到的样品的照片中随机抽取的50根的单纤维直径以μm单位测定至小数的第1位，将小数第1位四舍五入算出纤维直径。取样5回，算出50根各自的单纤维直径，总计250根单纤维直径的和除以总数(250)，以单纯平均值的形式算出平均纤维直径(μm)。所制作的上述纤维片材的平均纤维直径为1.4μm。
[0487]
(坪量的测定)通过按照jis l 1913:1998 6.2的步骤测定纤维片材的坪量。
[0488]
将基材复合体在20℃、相对湿度65%的条件下静置24小时，调湿。接着，由基材复合体的多处采取2cm见方的样品，由样品剥离纤维片材片，测定各纤维片材片的重量(g)，算出各纤维片材片的坪量(每1m2的重量(g/m2))。进行10次取样，算出10个纤维片材片的坪量的平均值，将该平均值作为纤维片材的坪量(g/m2)。纤维片材的坪量为20g/m2。
[0489]
(止血材料的制作)将按照上述步骤制作的基材复合体用金属制冲头冲裁，得到直径13mm的圆柱状基材复合体。向得到的圆柱状的基材复合体的基材部分(纤维片部分)喷浓度30mg/ml的实施例1~4和7~8的叔丁醇溶液各66.7μl，在
‑
40℃冷冻干燥12小时，由此制作止血材料。以下，将使用实施例1~4和7~8的叔丁醇溶液制作的止血材料分别称为本发明例的止血材料a1~a4、a7和a8。另外，代替叔丁醇溶液喷叔丁醇66.7μl，除此以外与上述同样地制作的止血材料作为对照止血材料。 (止血能力的评价)将3%异氟烷麻醉下的豚鼠(slc:hartley、8周龄、雄性、日本slc株式会社制)背位固定，将腹壁正中切开，暴露肝脏左叶。用剪子将切开边缘部的一部分减掉，使切断面的宽度为10mm，使由创面整体出血。贴附止血材料，覆盖创面，用手指压迫止血。每2分钟剥离止血材料，确认血由创面涌出的状况。剥离后5秒以内观察到血涌出的情况下，将剥离的止血材料再次贴附于创面。剥离后5秒观察不到血涌出的时间点作为止血，测量从贴附止血材料到止血的时间(止血时间)。另外，切除肝脏前在肝脏周围铺无纺布，吸收止血过程中涌出的血液，由吸收了血液的止血材料和无纺布的手术前后的重量差算出出血量。止血时间(分钟)示于表4，出血量(mg)示于表5。要说明的是，每个止血材料进行3次止血，将3次的止血时间和出血量的平均值作为各止血材料的止血时间和出血量。
[0490]
如表4所示，使用本发明例的止血材料a1~a4、a7和a8的情况下，与使用对照止血材料的情况相比，止血时间显著缩短(止血材料a2:p<0.05，止血材料a3:p<0.01、止血材料a4:p<0.01、止血材料a7:p<0.01、止血材料a8:p<0.01、均为t检验)。这表面本发明例的止血材料与对照止血材料相比具有优异的止血能力。
[0491]
如表5所示，使用本发明例的止血材料a1~a4、a7和a8的情况下与使用对照止血材料的情况相比，出血量得到抑制。特别是使用本发明例的止血材料a3、a4和a8的情况下与使用对照止血材料的情况相比，出血量显著得到抑制(止血材料a3:p<0.01、止血材料a4:p<0.05、止血材料a8:p<0.01、均为t检验)。这表明本发明例的止血材料与对照止血材料相比具有优异的止血能力。
[0492]
(6)胶原蛋白止血材料的止血能力评价按照以下的步骤评价胶原蛋白止血材料的止血能力。
[0493]
(胶原蛋白止血材料的制作)
按照以下的步骤制作止血材料。
[0494]
将市售的使用胶原蛋白的吸収性局部止血材料
インテグラン
(注册商标)(株式会社高研)用金属制冲头冲裁，得到直径为13mm的圆形的胶原蛋白制纤维片材。向得到的纤维片材喷浓度为20mg/ml的实施例1和2的脂质体分散液、以及比较例1的脂质体分散液各100μl，在
‑
40℃下冷冻干燥12小时，制作具有胶原蛋白制纤维片材(基材的一个例子)和担载于胶原蛋白制纤维片材上的脂质体的止血材料。以下，将使用实施例1的脂质体分散液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料b1”、将使用实施例2的脂质体分散液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料b2”、将使用比较例1的脂质体分散液制作的止血材料称为“比较例的止血材料”。作为对照，使用除了喷dulbecco pbs 100μl代替脂质体分散液以外，与上述同样地制作的止血材料(以下称为“对照止血材料”)。另外，作为对照，使用未处理纱布和未处理胶原蛋白制纤维片材。
[0495]
(止血能力的评价)各止血材料的止血时间和出血量的评价按照与上述同样的步骤进行。各止血材料的出血量和止血时间分别示于图4和图5。要说明的是，关于出血量和止血时间，各止血材料用8只豚鼠进行止血，算出8只豚鼠的止血时间和出血量的平均值。
[0496]
另外，对各止血材料按照以下的步骤评价血小板附着率。
[0497]
血小板附着率的评价如下进行。将止血材料放入片材夹持器，由注射器上部添加血液1.5ml。血液自然落下而通过止血材料后，回收通过的血液。通过多项目自动血球计数装置测定所添加的血液和回收的血液中的血小板数，通过比较通过前后的血小板数算出止血材料的血小板附着率(%)(血小板附着率(%)=(通过前的血小板数
‑
通过后的血小板数/通过前的血小板数)
×
100)。
[0498]
各止血材料的血小板附着率示于图6。要说明的是，血小板的附着率对于各止血材料进行3只豚鼠的止血，作为3只豚鼠的血小板附着率的平均值算出。
[0499]
如图4所示，止血材料b1和b2与未处理纱布、未处理胶原蛋白制纤维片材和比较例的止血材料相比，可抑制出血量。特别是，止血材料b1和b2与未处理胶原蛋白制纤维片材相比，可显著抑制出血量(p<0.05，t检验)。
[0500]
如图5所示，止血材料b1和b2与未处理纱布、未处理胶原蛋白制纤维片材和比较例的止血材料相比，可缩短止血时间。特别是，止血材料b2与未处理胶原蛋白制纤维片材相比，可显著缩短止血时间(p<0.05，t检验)。
[0501]
如图6所示，止血材料b1和b2与未处理纱布、未处理胶原蛋白制纤维片材、对照止血材料和比较例的止血材料相比，可增加血小板附着率。特别是，止血材料b2与未处理胶原蛋白制纤维片材相比，可显著增加血小板附着率(p<0.05，t检验)。
[0502]
〔实施例11和12〕(1)磷脂的入手dppa钠盐(1,2
‑
二棕榈酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷脂酸钠盐、1,2
‑
dipalmitoyl
‑
sn
‑
glycero
‑3‑
phosphatidic acid， sodium salt)由日油产业株式会社购入(coatsome ma
‑
6060ls)。按照下述方法将dppa钠盐中的
‑
o
‑
p(=o)(
‑
oh)(
‑
o ‑
na +
)转化为
‑
p(=o)(
‑
oh)(
‑
oh)，制作酸型dppa。要说明的是，阴离子型dppa比dppa钠盐在叔丁醇中的溶解度高。
[0503]
将dppa钠盐150mg和氯仿与甲醇的混合溶液15ml(氯仿的体积:甲醇的体积=6:4)
混合后，添加4m盐酸56.0μl，在50℃进行30分钟超声处理。超声处理后，蒸发溶剂，添加叔丁醇5ml，通过采用过滤器的过滤除去nacl，得到酸型dppa。要说明的是，通过使dppa钠盐与等摩尔的盐酸反应，得到酸型dppa。
[0504]
(2)止血材料的制作与上述同样地制作具有纤维素海绵和在纤维素海绵上形成的聚
‑
l
‑
乳酸树脂制纤维片材的基材复合体，将所制作的基材复合体用金属制冲头冲裁，得到直径为13mm的圆柱状基材复合体。向得到的圆柱状基材复合体的基材部分(纤维片材部分)喷30mg/ml的dppa钠盐的叔丁醇分散液和30mg/ml的dppa钠盐的酸型dppa的叔丁醇溶液各66.7μl，干燥，由此制作止血材料。实施例11中，使用dppa钠盐的叔丁醇分散液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料c1”)，实施例12中，使用酸型dppa的叔丁醇溶液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料c2”)。
[0505]
(3)使用豚鼠的in vivo止血试验与上述同样地进行采用豚鼠的in vivo止血试验，对止血时间和出血量进行定量，由此评价止血材料c1和c2的止血能力。要说明的是，作为对照，对担载脂质前的基材复合体的止血时间和出血量进行定量。结果示于表6和表7。如表6和表7所示，止血材料c1和c2的止血时间比担载脂质前的基材复合体的止血时间短，止血材料c1和c2的出血量比担载脂质前的基材复合体的出血量少。的基材复合体的出血量少。
[0506]
〔实施例13~16〕(1)脂质的合成与上述同样地合成dhsg，使用所合成的dhsg与上述同样地合成asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg。
[0507]
(2)止血材料的制作与上述同样地制作dhsg、asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg。与上述同样地制作具有纤维素海绵和在纤维素海绵上形成的聚
‑
l
‑
乳酸树脂制纤维片的基材复合体，将所制作的基材复合体用金属制冲头冲裁，得到直径为13mm的圆柱状基材复合体。向得到的圆柱状基
材复合体的基材部分(纤维片部分)喷30mg/ml的dhsg、asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg的叔丁醇溶液各66.7μl，并干燥，由此制作止血材料。实施例13中，使用dhsg的叔丁醇溶液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料d1”)，实施例14中，使用asp
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料d2”)，实施例15中，使用glu
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料d3”)，实施例16中，使用ag
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作止血材料(以下称为“本发明例的止血材料d4”)。
[0508]
(3)止血材料的血小板凝集能力评价(in vitro)由止血材料d1、d2、d3和d4取出分别担载了dhsg、asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg的基材部分(纤维片部分)。向12孔板中添加取出的基材部分(纤维片部分)和通过上述方法制备的源自豚鼠的prp(2.0
×
10 5
/μl) 1ml。然后，添加活化血小板的adp(1μm、100μl)，在室温静置5分钟后，用dpbs 1ml洗涤2次。然后，为了溶解附着于基材部分(纤维片部分)的血小板，添加0.5%triton x 500μl，在室温静置1小时，由此得到血小板溶解溶液。向96孔板添加通过上述方法制备的血小板溶解溶液10μl、和pierce(商标) 660nm protein assay kit 150μl，静置5分钟。使用酶标仪测定660nm的吸光度，定量蛋白质，不洗涤而作为附着于纤维片的血小板数的指标。结果示于图7和图8。要说明的是，图8中的结果是以使用止血材料d1的情况下的血小板数为1时的相对值。图7和图8中，“dhsg”表示关于止血材料d1的结果，“asp
‑
dhsg”表示关于止血材料d2的结果，“glu
‑
dhsg”表示关于止血材料d3的结果，“ag
‑
dhsg”表示关于止血材料d4的结果。
[0509]
如图7和图8所示，担载了asp
‑
dhsg的止血材料d2、担载了glu
‑
dhsg的止血材料d3和担载了ag
‑
dhsg的止血材料d4分别与担载了dhsg的止血材料d1相比，强固地附着的血小板数多。
[0510]
要说明的是，向担载脂质前的基材部分(纤维片部分)添加源自豚鼠的prp的情况和不向担载脂质前的基材部分(纤维片部分)添加源自豚鼠的prp的情况均未检出蛋白质，洗涤的结果未检出血小板。另外，代替dhsg、asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg在基材部分(纤维片部分)担载dppc的情况下，洗涤的结果未检出血小板。认为这是因为dppc在生物体内不显示负电荷。
[0511]
(4)使用豚鼠的in vivo止血试验与上述同样地进行使用豚鼠的in vivo止血试验，通过对止血时间和出血量进行定量，评价止血材料d2、d3和d4的止血能力。要说明的是，作为对照，对担载脂质前的基材复合体的止血时间和出血量也进行了定量。结果示于表8和表9。如表8和表9所示，止血材料d2、d3和d4的止血时间与担载脂质前的基材复合体的止血时间相比显著短，止血材料d2、d3和d4的出血量比担载脂质前的基材复合体的出血量少。
[0512]
〔实施例17~24〕与上述同样地制作具有纤维素海绵和在纤维素海绵上形成的聚
‑
l
‑
乳酸树脂制纤维片的基材复合体，将所制作的基材复合体用金属制冲头冲裁，得到直径13mm的圆柱状的基材复合体。向得到的圆柱状的基材复合体的基材部分(纤维片部分)喷30mg/ml的脂质溶液66.7μl，干燥，由此得到止血材料。作为脂质溶液，使用dppa钠盐的叔丁醇分散液(实施例17)、酸型dppa的叔丁醇溶液(实施例18)、dhsg的叔丁醇溶液(实施例19)、asp
‑
dhsg的叔丁醇溶液(实施例20)、glu
‑
dhsg的叔丁醇溶液(实施例21)、ag
‑
dhsg的叔丁醇溶液(实施例22)、dmps钠盐的叔丁醇分散液(实施例23)和dspg钠盐的叔丁醇分散液(实施例24)。dppa钠盐、酸型dppa、dhsg、asp
‑
dhsg、glu
‑
dhsg和ag
‑
dhsg与上述同样地制备。dmps(1,2
‑
二肉豆蔻酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸
‑
l
‑
丝氨酸钠盐，1,2
‑
dimyristoyl
‑
sn
‑
glycero
‑3‑
phospho
‑
l
‑
serine， sodium salt)使用日油产业株式会社制的，dspg(1,2
‑
二硬脂酰
‑
sn
ー
甘油
‑3‑
[磷酸
‑
rac
‑
(1
‑
甘油)]钠盐)，1,2
‑
disteanoyl
‑
sn
ー
glycero
‑3‑
[phoapho
‑
rac
‑
(1
‑
glycerol)](sodium salt))使用日本精化株式会社制的。以下，将使用dppa钠盐的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e1”、将使用酸型dppa的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e2”、将使用dhsg的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e3”、将使用asp
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e4”、将使用glu
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e5”、将使用ag
‑
dhsg的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e6”、将使用dmps钠盐的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e7”、将使用dspg钠盐的叔丁醇溶液制作的止血材料称为“本发明例的止血材料e8”。
[0513]
将担载脂质前的基材复合体和止血材料e1~e8的基材部分(纤维片部分)进行离子溅射处理(靶:au)，用扫描型电子显微镜(sem)观察发现，止血材料e1中，脂质以直径为几十μm的脂质颗粒的形态担载在基材的间隙，在止血材料e2~e8中，脂质的大部分为跨纤维与纤维间的膜状的形态。担载脂质前的基材复合体的sem观察图像(
×
1000)示于图9，止血材料e2~e8的sem观察图像(
×
1000)分别示于图10~图16。另外，止血材料e3~e6的sem观察图像(
×
5000)分别示于图17~图20。图17~图20所示的sem观察图像分别为图11~图14所示的sem观察图像的部分放大图。由图17所示的sem观察图像算出的脂质膜(dhsg)的厚度为131nm。由图18所示的sem观察图像算出的脂质膜(asp
‑
dhsg)的厚度为153nm。由图19所示的sem观察图像算出的脂质膜(glu
‑
dhsg)的厚度为187nm。由图20所示的sem观察图像算出的脂质膜(ag
‑
dhsg)的厚度为124nm。
[0514]
符号说明
1
･･･
基材2
･･･
脂质颗粒3
･･･
支撑部件10
･･･
止血材料