微乳剂组合物的制作方法

微乳剂组合物
1.领域
2.提供了用于配制药物组合物的水包油微乳剂。微乳剂含有尺寸《30nm的分散颗粒。微乳剂是为了有利于眼部适应症。
3.背景
4.对治疗性应用有用的药物活性物质通常在水溶液中是难溶以及不稳定的。这些物质经常被配制成乳剂。siebenbrodt和keipert的工作代表了在眼科领域探索微乳剂来产生用于难溶的活性成分的供应系统的最早的实例之一(siebenbrodt i,keipert s,poloxamer-systems as potential ophthalmics-ii.microemulsions,eur.j.pharm.biopharm,1993,39:25-30)。作者研究了以下微乳剂：基于非离子的聚合物表面活性剂(泊洛沙姆(poloxamer))和丙二醇作为助表面活性剂的三乙酸甘油酯溶液，和水溶性差的成分诸如活性成分(吲哚美辛、双氯芬酸钠和氯霉素)和水，获得表面活性剂的浓度为15％并且丙二醇的浓度为40％的自发稳定的微乳剂。
5.然而，许多乳剂不稳定和/或具有低生物利用度的活性物质。需要特征在于化学稳定性、生物安全性和有利的生物利用度谱的活性物质的制剂。
6.概述
7.提供了用于配制药物活性化合物(特别是具有低水溶性的那些)的水包油微乳剂。该乳剂，可以被配制用于经由各种途径施用和用于各种用途，对眼部应用特别有利。还提供了含有药物活性成分的乳剂。本文提供的微乳剂具有升高的稳定性，允许长期保存，包括在室温长期保存。当掺入的活性成分相对不稳定时，微乳剂中的制剂允许其结构完整性在时间上得到延长。本文的乳剂不仅具有增强的稳定性，而且还赋予液体剂型中的水溶性差的药物增强的生物利用度。
8.因此，提供了用于任何药物活性化合物(特别是不溶于水性组合物的那些)的施用的微乳剂。微乳剂可以制备成通过任何途径施用，包括口服和肠胃外施用，并且特别适合于将活性化合物向眼的施用，并且包括眼用化合物，以用于治疗紊乱，诸如干眼症和年龄相关性黄斑变性(amd)。微乳剂通过组合特定比例的水相和脂质(亲脂)相中的表面活性剂制备，一般，但不限于每一相中两种表面活性剂(表面活性剂和助表面活性剂)。当水相和亲脂相组合时，所得的微乳剂形成。所得的微乳剂具有非常小的颗粒，平均小于30nm，一般小于或等于15nm，并且粒径的分布非常窄，一般约15nm
±
10nm。和现有技术中的类似乳剂相比，所得的乳剂特性包括增加的热稳定性和在乳剂中配制的任何剂的高生物利用度。
9.本文提供的微乳剂由以下产生：脂质相，其含有油组分和表面活性剂和助表面活性剂；和水相，其也含有表面活性剂和助表面活性剂。为了实现有利的特性，包括小的粒径，需要以下标准：
10.1)在形成微乳剂时，脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的重量/体积比为2至10，诸如2.2至9.8或2.4至8.6；和
11.2)脂质相的油组分与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的重量/体积比为0.2至1.0，诸如0.22至0.98或0.24至0.96；和
12.3)在脂质相中，脂质相中的油组分与表面活性剂/助表面活性剂混合物之间的重量/体积比为0.05至1.4，诸如0.07至1.2或0.1至1。
13.当满足至少这些标准中的1)和2)时，所得的微乳剂表现出有利的特性，包括小的粒径和所得的高热力学稳定性。
14.微乳剂用于配制活性物质，诸如活性小分子药物，用于眼部适应症。微乳剂也可以用于配制用于口服施用或其他施用途径的活性物质。
15.表面活性剂/助表面活性剂全部可以是相同的，使得所得的微乳剂含有一种单一的表面活性剂。然而，一般，在制备微乳剂时，每一相将含有至少一种表面活性剂和一种不同于该表面活性剂的助表面活性剂。两相可以都含有相同的表面活性剂和助表面活性剂，使得所得的微乳剂具有一种表面活性剂和一种助表面活性剂。在其他实施方案中，在脂质相和水相中，表面活性剂/助表面活性剂中的两种或三种可以是相同的，使得所得的微乳剂含有两种或三种不同的表面活性剂，或者全部可以是不同的，因此所得的微乳剂含有四种不同的表面活性剂。当产生微乳剂时，微乳剂可以在任一相中含有多于一种表面活性剂和多于一种助表面活性剂。因此，在脂质相和水相中，表面活性剂/助表面活性剂中的两种或三种可以是相同的，使得所得的微乳剂含有两种或三种不同的表面活性剂，或者全部可以是不同，因此所得的微乳剂含有四种不同的表面活性剂。当产生微乳剂时，微乳剂可以在任一相中含有多于两种表面活性剂/助表面活性剂。
16.表面活性剂/助表面活性剂对于两相可以是不同的，使得在第一种情况下，所得的微乳剂可以含有最少一种助表面活性剂(对于两相相同)和对于两相中的每一相不同的表面活性剂。在第二种情况下，脂质相可以含有两种不同的表面活性剂，其中一种表面活性剂可以与水相中含有的表面活性剂相同。因此，例如表面活性剂和助表面活性剂组分可以是：
[0017][0018]
另参见以下表1。
[0019]
为了产生具有本文描述的特性的微乳剂，表面活性剂和助表面活性剂的量必须遵守本文描述的比例。正是所陈述的比例，特别是如以上列出的1)和2)，使微乳剂具有有利的特性，包括小的粒径和窄的粒径分布。表面活性剂/助表面活性剂一般为生物相容性的且适于引入到眼内的非离子表面活性剂。
[0020]
在示例性实施方案中，微乳剂包含0.4％-4.0％(w/v)的来自脂质相的油组分诸如天然植物油，占所得的微乳剂4.0％-36.0％(w/v)的来自脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，以及占所得的微乳剂1.66％-4.15％(w/v)的来自水相的表面活性剂/助表面活性剂。组合物的其余组分是极性或水性成分，诸如水、活性化合物，和包括在药物组合物中的其他组分，诸如增稠剂(诸如胶)、张度调节剂，和生物相容性酸以将ph调节到约以下或以下之间：包括端点的5.0和8，诸如ph 5.4或7.5，或者6至7。所得的微乳剂的最多约5％w/v(0.001mg/ml至50mg/ml)可以是被包括的活性成分。
[0021]
提供了药物组合物，该药物组合物是微乳剂并且含有活性成分，诸如在水性介质
中难溶的药剂。药物活性化合物包括用于眼用用途的那些。活性化合物的量取决于该化合物，以及其所用于的适应症。范围的示例为0.001mg/ml至50mg/ml，或0.01mg/ml至50mg/ml，诸如0.01mg/ml至30mg/ml。
[0022]
药物组合物含有：a)脂质相，该脂质相包含油组分和一种或更多种表面活性剂和一种或更多种助表面活性剂，和b)水相，该水相包含一种或更多种表面活性剂和一种或更多种助表面活性剂，其中：脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为2至10；脂质相中的油组分的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为0.2至1.0；并且在所得的水包油微乳剂中，平均粒径小于30nm。该组合物任选地含有活性成分，诸如用于眼部的活性成分。凭借所述比例和每一相中的表面活性剂/助表面活性剂，所得的微乳剂组合物具有窄的尺寸分布，所得的微乳剂中的颗粒的尺寸分布一般为15nm
±
10nm。多分散指数(pdi)在包括端点的0.02-0.380、或包括端点的0.02至0.2，或包括端点的0.02至0.15的范围内，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1。在一些实施方案中，脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为包括端点的包括端点的2.2至9.8或2.4至8.6。在一些实施方案中，脂质相中的油组分的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为包括端点的0.22至0.98或包括端点的0.24至0.96。在一些实施方案中，油组分与表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.05至1.4，诸如，例如，包括端点的0.07至1.2或包括端点的0.1至1。
[0023]
这些微乳剂组合物的示例为含有以下的微乳剂：油组分，其量占组合物的包括端点的0.4％-4.0％(w/v)之间；脂质相的表面活性剂和表面活性剂，其量占组合物的包括端点的4.0％-36.0％(w/v)；和水相的表面活性剂和助表面活性剂，其量占组合物的包括端点的1.66％-4.15％(w/v)。
[0024]
提供了水包油微乳剂组合物，包含：油组分，其量占组合物的0.4％-4.0％重量/体积(w/v)；表面活性剂或者表面活性剂和助表面活性剂的混合物，其量占组合物的包括端点的5.71％-40.15％w/v；水性组分，其量在组合物的包括端点的55.85％-93.89％w/v之间；和任选地药物活性化合物，其中：组合物的所有组分是生物相容性的；并且微乳剂组合物中的平均粒径小于30nm。如以上，粒径的分布是窄的，一般15nm
±
10nm。多分散指数(pdi)在包括端点的0.02-0.380、或包括端点的0.02至0.2，或包括端点的0.02至0.15的范围内，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1。水包油微乳剂可以含有药物活性化合物。药物活性化合物的量可以取决于该化合物和其意图用于的适应症。一般，浓度为0.001mg/ml至50mg/ml，或0.01mg/ml至50mg/ml，或0.01mg/ml至0mg/ml，诸如0.01mg/ml至30mg/ml。
[0025]
水包油微乳剂组合物由以下形成：脂质相，其包含油组分，和一种或更多种表面活性剂，以及任选地一种或更多种助表面活性剂；和水相，其包含一种或更多种表面活性剂，和一种或更多种助表面活性剂，其中：脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂与水相中的表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的2至10；并且脂质相的油组分与水相中的表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.2至1.0。在一些实施方案中，脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂与水相中的表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的2.2至9.8，或包括端点的2.4至8.6；并且脂质相中的油组分与水相中的表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.22至
0.98或包括端点的0.24至0.96。在其他实施方案中，在脂质相中，油组分与表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.05至1.4，诸如，例如，为包括端点的0.07至1.2或包括端点的0.1至1。一般每一相含有一种表面活性剂和一种助表面活性剂。按本文描述的比例混合后，它们形成其中平均粒径小于30nm的微乳剂。一般颗粒具有15nm
±
10nm的窄的尺寸分布。所得的微乳剂具有一般在包括端点的0.02-0.380，或包括端点的0.02-0.2，或包括端点的0.02-0.15范围内，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1的多分散指数(pdi)。本文提供的组合物包括以下组合物：其中分散相颗粒的胶束尺度为约15nm
±
10nm或为15nm
±
10nm；和多分散指数(pdi)在包括端点的0.02-0.380、或包括端点的0.02至0.2或包括端点的0.02至0.15的范围内，或者小于0.380，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1。
[0026]
本文提供的所有组合物可以用于药剂的配制，该药剂用于治疗疾病和紊乱，诸如眼部状况或紊乱。对于眼用用途，应选择与向眼施用相容的或适于向眼施用的成分。在组合物中，表面活性剂和/或助表面活性剂中的每一种可以是非离子的。在所有组合物中中，每种表面活性剂和助表面活性剂的hlb可以在包括端点的8-16之间，诸如，其中每种表面活性剂和助表面活性剂的hlb可以为至少10，诸如10-16或12-14。在一些实施方案中，组合物含有一种表面活性剂和一种助表面活性剂，或两种表面活性剂和一种助表面活性剂，或两种表面活性剂和两种助表面活性剂。在一些实施方案中，组合物由脂质相和水相形成，其中表面活性剂是相同的，使得所得的微乳剂含有一种表面活性剂，和一般一种或两种助表面活性剂。在其他实施方案中，每一相中的表面活性剂是不同的。在一些实施方案中，组合物由脂质相和水相形成，其中水相含有表面活性剂和助表面活性剂，并且脂质相含有表面活性剂和助表面活性剂。每一相中的助表面活性剂可以是相同的或不同的。
[0027]
一般微乳剂由其形成的每一相含有一种表面活性剂和一种助表面活性剂。表面活性剂和助表面活性剂可以是相同的或不同的。例如，在一种实施方案中，脂质相含有tween 80/丙二醇作为表面活性剂/助表面活性剂，并且水相含有kolliphor rh40/丙二醇。
[0028]
表面活性剂可以选自以下之中：例如泊洛沙姆、peg化脂肪酸、聚氧乙烯、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸衍生物、聚氧乙烯、氢化蓖麻油乙氧基化物、脂肪酸的甘油酯、peg化脂肪酸、聚氧乙烯(polyoxyl)蓖麻油表面活性剂、泊洛沙姆、胺氧化物和醇乙氧基化物(非离子的)。这些的示例是聚乙二醇脱水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20；tween 20)、聚乙二醇脱水山梨醇单油酸酯(聚山梨醇酯80；tween 80)和聚乙二醇脱水山梨醇单棕榈酸酯(聚山梨醇酯40；montanox 40)。在其他实施方案中，表面活性剂选自以下之中：聚氧乙烯35蓖麻油(cremophor el，kolliphor el)、聚氧乙烯40氢化蓖麻油(cremophor rh40；kolliphor rh 40)、peg 40蓖麻油(etocas 40)、peg-60氢化蓖麻油(croduret 60)和聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(kolliphor hs 15)。
[0029]
表面活性剂可以是非离子的。例如，非离子表面活性剂可以选自以下之中：聚山梨醇酯(tweentm)、月桂基二甲基胺氧化物、聚乙氧基醇、聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯蓖麻油、卵磷脂、泊洛沙姆、聚乙二醇、脂肪酸的甘油酯。在一些实施方案中，表面活性剂选自蓖麻油乙氧基化物或氢化蓖麻油乙氧基化物之中。助表面活性剂包括甘油和/或丙二醇。例如，每一相可以包括相同或不同的助表面活性剂。
[0030]
脂质相含有油，油可以选自植物油、动物油或合成矿物油中的一种或更多种之中。在一些实施方案中，油是选自以下之中的植物油或动物油：大豆油、玉米油、亚麻籽油、葵花籽油、磷虾油、鱼肝油、鱼油、鳄梨油、杏仁油、巴巴苏(babassu)油、琉璃苣油、角豆(carob)油、腰果油、葡萄籽油、椰子油、稻糠(oryza sativa bran)油、蓖麻油、工业大麻籽油、霍霍巴(jojoba)油、花生油、罂粟籽油、芝麻油、核桃油、橄榄油、小麦胚芽油、阿甘(argan)油、棉籽油、黑加仑籽油，按比例计大于10％的富含pufa的油。在其他实施方案中，油可以是选自以下的合成来源的矿物油：中链和长链脂肪酸的酯，以及中链和长链甘油三酯。
[0031]
组合物中的其他成分包括以下中的一种或更多种：等渗(张度)剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂、增稠剂、以及支链和直链聚合物。
[0032]
该组合物可以含有一种或更多种药物活性成分。一种或更多种活性成分以对使用或储存适合的浓度存在。浓度范围包括但不限于，包括端点的0.01至50mg/ml或0.01至30mg/ml。
[0033]
组合物可以用药物活性成分配制，如果该成分是非极性的，则配制在脂质相中；或者如果它是极性的，则配制在水相中。药物活性成分的示例为以下的一种或更多种：胃肠道剂、抗痉挛药、血糖调节剂、营养制品/矿物质/电解质、血小板调节剂、凝血药、心血管剂、α-肾上腺素能激动剂/α-肾上腺素能拮抗剂/血管扩张剂/动脉血管扩张剂、碳酸酐酶抑制剂利尿药/循环利尿药/保钾利尿药/噻嗪类利尿药、其他心血管剂、β-肾上腺素能拮抗剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ace)、血脂异常药(dyslipidemics)/hmg coa还原酶抑制剂(他汀类(statins))、抗真菌剂、皮肤用剂、抗组胺药、麻醉药、抗细菌剂、激素刺激剂/替代物/调节物(肾上腺、垂体和性激素)、血糖剂、激素抑制剂(甲状旁腺)、抗分枝杆菌剂、抗病毒剂、抗肿瘤药(anti-neoplastics)、免疫调节剂、抗炎剂、镇痛药、抗惊厥剂、抗帕金森病剂、抗精神病药、抗抑郁药/抗痴呆剂/抗焦虑药物、抗肌无力剂/用于治疗滥用物质的剂/中枢神经系统剂、支气管扩张剂/拟交感神经药/抗胆碱能药/吸入型皮质类固醇/磷酸二酯酶抑制剂/空气传播紊乱、其他呼吸道剂、抗寄生虫剂、抗青光眼眼用剂、其他眼用剂/抗过敏眼用剂、眼用抗炎药、前列腺素类似物和眼用前列腺酰胺(ophthalmic prostamide)、用于酸度相关紊乱的药物(a02)、用于胃肠功能紊乱的药物(a03)、用于糖尿病的药物(a10)、维生素(a11)、矿物质补充剂(a12)、抗血栓剂(b01)、抗出血药(b02)、心脏治疗药物(c01)、抗高血压药(c02)、利尿药(c03)、周围血管扩张剂(c04)、血管保护剂(c05)、β-阻断剂(c07)、钙拮抗剂(c08)、作用于肾素-血管紧张素系统的药物(c09)、降脂药物(c10)、皮肤用抗真菌剂(d01)、润肤剂和保护剂(d02)、用于创伤和溃疡的药物(d03)、止痒药包括抗组胺药、麻醉药(d04)、抗银屑病药物(d05)、皮肤用抗生素和化学治疗剂(d06)、防腐药和消毒剂(d08)、垂体激素、下丘脑激素和类似物(h01)、全身性皮质类固醇(h02)、甲状腺治疗剂(thyroid therapy)(h03)、胰腺激素(h04)、稳态钙(h05)、全身用抗细菌剂(j01)、全身用抗真菌剂(anti-mycotics for systemic use)(j02)、抗分枝杆菌剂(j04)、全身用抗病毒药物(j05)、免疫血清和免疫球蛋白(j06)、抗肿瘤剂(l01)、内分泌治疗剂(endocrine therapy)(l02)、免疫刺激剂(l03)、免疫抑制剂(l04)、抗炎药和抗风湿药(m01)、用于关节和肌肉疼痛的外用产品(m02)、麻醉药(n01)、镇痛药(n02)、抗癫痫药(n03)、抗帕金森病药(n04)、精神抑制药(psycholeptics)(n05)、精神兴奋药(psychoanaleptics)(n06)、其他神经系统药物(n07)、鼻制剂(r01)、用于咽腔的制剂
(r02)、用于呼吸道阻塞性紊乱的药物(r03)、用于咳嗽和感冒的制剂(r05)、全身用抗组胺药(r06)、其他用于呼吸系统的制剂(r07)、抗感染药(s01a)、抗炎剂(s01b)、抗炎剂和抗感染药组合(s01c)、抗青光眼剂和缩瞳药(s01e)、扩瞳药和睫状肌麻痹药(s01f)、解充血药和抗过敏药(s01g)、局部麻醉药(s01h)、诊断剂(s01j)、手术辅助药物(s01k)、眼部血管剂(s01l)、抗感染药(s03a)、皮质类固醇(s03b)、以及与抗感染药的组合的皮质类固醇(s03c)。
[0034]
在特定的实施方案中，组合物被配制用于眼部施用，并且含有一种或更多种用于治疗眼部状况或紊乱的活性成分。这样的状况和紊乱包括但不限于以下之中：干眼症、黄斑变性、青光眼、感染、炎症、过敏和糖尿病性视网膜病变。药物活性剂的示例是前列腺素抑制剂、抗血管生成剂和/或抗氧化剂。这样的剂包括：选自以下之中的前列腺素抑制剂：拉坦前列素、曲伏前列素(travoprost)、比马前列素(bimatoprost)、乌诺前列酮(unoprostone)及其药学上可接受的衍生物、水合物、溶剂化物、代谢物和盐或其多晶型结晶形式；和/或选自以下之中的抗血管生成剂：索拉非尼(sorafenib)、甲苯磺酸索拉非尼、瑞戈非尼(regorafenib)、甲苯磺酸瑞戈非尼、羟乙基磺酸瑞戈非尼、乙磺酸瑞戈非尼、阿普斯特(apremilast)、拉多替尼(radotinib)、螺内酯(spironolactone)及其药学上可接受的衍生物、水合物、溶剂化物、代谢物和盐或其多晶型结晶形式；和/或选自以下之中的抗氧化剂：去甲二氢愈创木酸、内消旋去甲二氢愈创木酸(马索罗酚)及其药学上可接受的衍生物、水合物、溶剂化物、代谢物和盐或其多晶型结晶形式。
[0035]
组合物可以用于通过适合的途径施用组合物来治疗疾病和紊乱的或方法。本文提供的组合物可以用于治疗眼部紊乱。提供了通过向眼施用组合物治疗眼部紊乱的方法。眼部紊乱或状况包括但不限于，干眼症、黄斑变性、青光眼、感染、炎症、过敏和糖尿病性视网膜病变。用于这样的用途的药剂包括，例如，马索罗酚、甲苯磺酸索拉非尼和拉坦前列素。
[0036]
提供了用于制备微乳剂组合物的方法。一种方法包括以下的步骤：a)制备脂质相，其中表面活性剂/助表面活性剂的混合物溶解在油中，每一份油混合1份至10份混合物；b)制备水相，其中一种或更多种表面活性剂和/或助表面活性剂溶解在水中；c)用水相滴定脂质相以获得微乳剂，其中：微乳剂的0.4％-4.0％(w/v)由脂质相的油组分组成；微乳剂的4.0％-36.0％(w/v)由脂质相的表面活性剂/助表面活性剂组成；并且总表面活性剂/助表面活性剂的1.66％-4.15％(w/v)为水相的表面活性剂/助表面活性剂。在另一种方法中，步骤包括：a)制备脂质相，其可以包括药物活性剂，并且其中表面活性剂/助表面活性剂的混合物溶解在油中，每一份油混合1份至10份混合物；b)制备水相，其中一种或更多种表面活性剂和/或助表面活性剂溶解在水中；c)用水相滴定脂质相以获得微乳剂，其中：微乳剂的0.4％-4.0％(w/v)由脂质相的油组分组成；微乳剂的4.0％-36.0％(w/v)由脂质相的表面活性剂/共表面活性剂组成，并且微乳剂的1.66％-4.15％(w/v)由水相的表面活性剂/共表面活性剂组成。药物活性剂以以下量或约以下量被包括在内：最终组合物的0.001mg/ml至50mg/ml，或0.01mg/ml至50mg/ml，诸如0.01mg/ml至30mg/ml。
[0037]
包括或添加到组合物中的药物活性剂包括任何适于治疗特定紊乱的药物，包括本文以上和以下列出的任何。根据这些方法，滴定速率由以等式下描述：v
tit
＝k
×
(v
tot
/1000ml)，其中v
tit
＝以ml
×
min-1
计的滴定速度；k＝2ml
×
min-1
；v
tot
＝以ml计的制剂总体积。所得的微乳剂组合物是其中具有以下的分散颗粒的那些，该分散颗粒在所得的微乳剂
中，平均尺寸≤30nm，一般颗粒的尺寸分布为15nm
±
10nm，和/或多分散指数(pdi)小于0.380，或者在包括端点的0.01-0.380，或包括端点的0.01-0.20、或包括端点的0.01至0.15的范围内、或者小于0.2或0.1。提供了通过以上或以下描述的任何方法制备的微乳剂组合物。
[0038]
在其他方法中，微乳剂药物组合物通过包括以下的方法制备：a)制备脂质相，该脂质相包含油组分和一种或更多种表面活性剂以及一种或更多种助表面活性剂，和b)水相，该水相包含一种或更多种表面活性剂和一种或更多种助表面活性剂，其中：脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为2至10；脂质相中的油组分的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为0.2至1.0；以及，然后c)将脂质相与水相组合以形成水包油微乳剂，其中平均颗粒尺寸小于30nm。步骤c)可以通过用水相滴定脂质相实现，其中滴定速率由以下等式描述：v
tit
＝k
×
(v
tot
/1000ml)，其中v
tit
＝以ml
×
min-1
计的滴定速度；k＝2ml
×
min-1
；v
tot
＝以ml计的制剂总体积。
[0039]
在这些方法中，脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为包括端点的2.2至9.8或包括端点的2.4至8.6。
[0040]
水相可以含有一种表面活性剂和一种助表面活性剂。在一些实施方案中脂质相中的油组分的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为包括端点的0.22至0.98或包括端点的0.24至0.96。在其他实施方案中，在脂质相中，油组分与表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.05至1.4。在其他实施方案中，在脂质相中，油组分与表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.07至1.2或包括端点的0.1至1。所得的微乳剂中的颗粒的尺寸分布一般为15nm
±
10nm，并且多分散指数(pdi)在包括端点的0.02-0.380、或包括端点的0.02至0.2或包括端点的0.02至0.15的范围内，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1。提供了通过本文描述的任何方法制备的微乳剂组合物。
[0041]
附图简述
[0042]
图1是本文提供的微乳剂平台的示意图。
[0043]
图2描绘了用于制备本文提供的微乳剂的方法的图。
[0044]
图3a-3d描绘了对本文提供的微乳剂的说明性制剂进行压力测试(stress test)后的稳定性数据。例如，图3a示出了ph数据。图3b描绘了重量渗透摩尔浓度(osmolality)。图3c描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图3d描绘了ζ电位(pz)。
[0045]
图4a和图4b描绘了制剂1-(a)和5-(b)的平均颗粒分布图。图4a描绘了制剂1-(a)的平均颗粒分布图。图4b描绘了制剂5-(b)的平均颗粒分布图。
[0046]
图5a-5d描绘了本文提供的微乳剂的说明性制剂在6个月的稳定性数据。例如，图5a示出了重量渗透摩尔浓度的数据。图5b描绘了ph数据。图5c描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图5d描绘了ζ电位(pz)。
[0047]
图6a-6c描绘了本文提供的微乳剂的说明性制剂在不同温度和不同时间的平均颗粒分布(尺寸)和多分散指数(pdi)的稳定性数据。图6a描绘了在25℃的稳定性数据。图6b描绘了在40℃的稳定性数据。图6c描绘了在60℃的稳定性数据。
[0048]
图7a-7d描绘了对本文提供的微乳剂的说明性制剂进行压力测试后的稳定性数据。例如，图7a示出了ph数据。图7b描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图7c描绘了多分散指数(pdi)。图7d描绘了ζ电位(pz)。
[0049]
图8a-8e描绘了对本文提供的微乳剂的说明性制剂进行压力测试后的稳定性数据。例如，图8a示出了ph数据。图8b描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图8c描绘了多分散指数(pdi)。图8d描绘了重量渗透摩尔浓度。图8e描绘了ζ电位(pz)。
[0050]
图9a-9e描绘了对含有活性成分(诸如拉坦前列素)的微乳剂的说明性制剂进行压力测试后的稳定性数据。例如，图9a示出了ph数据。图9b描绘了重量渗透摩尔浓度。图9c描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图9d描绘了ζ电位(pz)。图9e描绘了回收率。
[0051]
图10a-10e描绘了含有活性成分(诸如拉坦前列素)的微乳剂的说明性制剂在24个月的稳定性数据。例如，图10a示出了ph数据。图10b描绘了重量渗透摩尔浓度。图10c描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图10d描绘了ζ电位(pz)。图10e描绘了回收率。
[0052]
图11a-11d描绘了含有活性成分(诸如拉坦前列素)的微乳剂的说明性制剂在不同温度和不同时间的平均颗粒分布(尺寸)和多分散指数(pdi)的稳定性数据。图11a描绘了在25℃的稳定性数据。图11b描绘了在40℃的稳定性数据。图11c描绘了在60℃的稳定性数据。图11d描绘了在4℃的稳定性数据。
[0053]
图12a-12e描绘了含有活性成分(诸如马索罗酚)的微乳剂说明性制剂在3个月和9个月的稳定性数据。例如，图12a示出了ph数据。图12b描绘了重量渗透摩尔浓度。图12c描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图12d描绘了ζ电位(pz)。图12e描绘了回收率。
[0054]
图13a-13e描绘了含有活性成分(诸如甲苯磺酸索拉非尼)的本文提供的微乳剂的说明性制剂在3个月和在不同条件(25
±
2℃/60％
±
5％rh和40
±
2℃/75％
±
5％rh)下的稳定性数据。例如，图13a示出了ph数据。图13b描绘了平均颗粒分布(尺寸)。图13c描绘了多分散指数(pdi)。图13d描绘了ζ电位(pz)。图13e描绘了回收率。
[0055]
图14描绘了与拉坦前列素0.005％的标准溶液(溶液)相比，含有拉坦前列素0.005％的微乳剂(制剂03)对evc大鼠进行表面治疗(treat topically)(6天，每天一次，12μl)的功效。使用student t检验进行统计分析。
[0056]
图15a和图15b描绘了缺血再灌注(ir)大鼠视网膜中tnfa(鼠肿瘤坏死因子-a)和inos的基因表达，所述ir大鼠视网膜在诱导ir前2天和1h用单独的微乳剂或含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂1、制剂04；和制剂6或制剂06)进行表面预处理，在缺血发作后6h被处死。图15a描绘了用制剂1或制剂04预处理后的基因表达数据。图15b描绘了用制剂6或制剂06预处理后的基因表达数据。数据代表了相对于校准物(ctrl)的变化倍数的平均值
±
sem。#p≤0.05，##p≤0.01对比制剂1(图15a)和制剂6(图15b)。*p≤0.05，****p≤0.0001对比ctrl(图15a和图15b)。单因素anova，然后进行dunnett事后检验。
[0057]
图16a和图16b描绘了ir大鼠视网膜中tnfa和inos的基因表达，所述ir大鼠在诱导ir前2天和1h用单独的微乳剂或含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂2、制剂05；和制剂7或制剂07)进行表面预处理，在缺血发作后6h后被处死。图16a描绘了用制剂2或制剂05预处理后的基因表达数据。图16b描绘了用制剂7或制剂07预处理后的基因表达数据。数据代表了相对于校准物(ctrl)的变化倍数的平均值
±
sem。#p≤0.05，##p≤
0.01，###p≤0.001对比制剂2(图16a)和制剂7(图16b)。*p≤0.05，***p≤0.0001，****p≤0.0001对比ctrl(图16a和图16b)。单因素anova，然后进行dunnett事后检验。
[0058]
图17描绘了cnv小鼠中的新血管形成区域的分析，所述cnv小鼠在诱导cnv之前的3天内和随后的7天内用制剂1或含有马索罗酚0.302％的制剂04(制剂04)进行表面预处理。数据表示为相对于制剂1的平均值
±
sem。*p＝0.0395对比制剂1。用制剂1或制剂04处理的动物中的脉络膜新血管形成(cnv)的代表性图像显示在侧面。比例尺代表100μm。
[0059]
图18a和图18b描绘了cnv小鼠中的新血管形成区域的分析，所述cnv小鼠在诱导cnv之前的3天内和随后的7天内用单独的微乳剂或用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂2，制剂05；制剂7，制剂07)进行表面预处理。图18a描绘了用制剂2或制剂05预处理后的数据。图18b描绘了用制剂7或制剂07预处理后的数据。数据分别表示为相对于制剂2(图18a)或制剂7(图18b)的平均值
±
sem。*p＝0.0135对比制剂2(图18a)；*p＝0.0001对比制剂7(图18b)。用制剂2、制剂05、制剂7或制剂07处理的动物中的cnv的代表性图像显示在侧面。比例尺代表100μm。
[0060]
图19a-19f描绘了ctrl-大鼠视网膜、糖尿病(stz)大鼠视网膜和用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)或含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)每日两次(b.i.d)表面处理持续21天的糖尿病大鼠视网膜中的tnfa、nfκb、igf1、igfr1、vegfr1和vegfr2的基因表达。图19a描绘了tnfa的基因表达。图19b描绘了nfκb的基因表达。图19c描绘了igf1的基因表达。图19d描绘了igfr1的基因表达。图19e描绘了vegfr1的基因表达。图19f描绘了vegfr2的基因表达。数据代表了相对于校准物(ctrl)的变化倍数的平均值
±
sem。*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001对比ctrl-。###p≤0.001对比stz。anova，然后进行tukey-kramer事后检验。
[0061]
图20a-20h描绘了ctrl-大鼠视网膜、糖尿病(stz)大鼠视网膜和用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)或含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)每日两次表面处理持续21天的糖尿病大鼠视网膜中的tnfa(也被称为tnf-α)、vegfr1和vegfr2的蛋白表达。图20a描绘了用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)处理后tnfa的蛋白表达。图20b描绘了用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)处理后vegfr1的蛋白表达。图20c描绘了用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)处理后vegfr2的蛋白表达。图20d描绘了ctrl-大鼠视网膜、糖尿病(stz)大鼠视网膜和用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)每日两次表面处理持续21天的糖尿病大鼠视网膜中的tnfa、vegfr1和vegfr2的蛋白印迹分析。图20e描绘了用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)处理后tnfa的蛋白表达。图20f描绘了用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)处理后vegfr1的蛋白表达。图20g描绘了用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)处理后vegfr2的蛋白表达。图20h描绘了ctrl-大鼠视网膜、糖尿病(stz)大鼠视网膜和用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)每日两次表面处理持续21天的糖尿病大鼠视网膜中的tnfa、vegfr1和vegfr2的蛋白印迹分析。数据代表了平均值
±
sem。***p《0.001对比ctrl-。##p《0.01，###p《0.001对比stz。anova，然后进行tukey-kramer事后检验。
[0062]
图21描绘了保持未处理的(ctrl+)或者用制剂1或含有马索罗酚0.302％的制剂04(制剂04)表面处理持续3天的干眼症小鼠中t3时通过荧光素染色测量的角膜损伤。分配给每组的分数被绘制成从最小值跨越至最大值的箱线图。单因素anova，然后进行dunnett事
后检验。**p《0.01，****p《0.0001对比ctrl-。#p≤0.05对比ctrl+。
[0063]
图22描绘了保持未处理的(ctrl+)或者用制剂1或含有马索罗酚0.302％的制剂04(制剂04)表面处理持续3天的干眼症小鼠的角膜中tnfa的基因表达。数据代表了相对于校准物(ctrl-)的变化倍数的平均值
±
sem。#p≤0.05对比ctrl+；****p≤0.0001对比ctrl-。单因素anova，然后进行sidak事后检验。
[0064]
详细描述
[0065]
a.定义
[0066]
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。除非另外注明，否则遍及本文整个公开内容提及的所有专利、专利申请、公布的申请和出版物、genbank序列、数据库、网站和其他出版材料均通过引用以其整体并入。在对于本文的术语存在多于一种定义的情况下，以本章节中的那些为准。当参考url或其他这样的标识符或地址时，应当理解，这样的标识符可以变化，并且在因特网上的特定信息可更换，但等效信息可通过检索互联网找到。对其的引用证明这样的信息的可获得性和公共传播。
[0067]
如本文使用的，乳剂是包含两种不混溶的液相(紧密地混合和分散，一种进入另一种)的体系。乳剂是指两种不混溶的液体的胶体分散，例如，油和水(或其他水性液体，例如，极性溶剂)，其中一种是连续相的一部分，并且其中另一种是分散相的一部分。本文的乳剂是水包油，水包油包括分散在任何水相(aqueous phase，也称为水相(water phase))中的任何油溶相，其中油相是分散相并且水相是连续相。乳剂通常由一种或更多种表面活性剂和/或助表面活性剂和/或乳剂稳定剂来稳定。表面活性剂在乳剂的油相和水相之间形成界面膜，提供稳定性。
[0068]
如本文使用的，微乳剂是一种由精细地散布的脂质相和水相组成的两相系统。微乳剂是由表面活性剂(一般与助表面活性剂一起)保持在一起的脂质相和水相的透明、各向同性且稳定的液体混合物。微乳剂是澄清、热力学稳定、各向同性的油、水和表面活性剂以及任选的助表面活性剂的液体混合物。微乳剂在水相和脂质相混合后自发形成。因此，微乳剂是热力学稳定的体系，其中颗粒分散在连续相中。微乳剂中分散相的液滴尺寸小于100nm，一般在包括端点的5nm和50nm之间的范围内。
[0069]
如本文使用的，“表面活性剂”是指合成的和天然存在的具有疏水部分和亲水部分的两亲性分子。表面活性剂含有亲水结构域和疏水结构域，即，两亲性分子。鉴于其性质，表面活性剂促进水包油乳剂的形成，其中胶束为了存在，需要与水相和油相二者相互作用。由于其两亲性(amphiphilic，amphipathic)的性质，表面活性剂和助表面活性剂可以降低两种不混溶液体(例如，乳剂(诸如微乳剂)中的油相和水相)之间的表面张力，从而稳定乳剂。
[0070]
表面活性剂可以基于其相对的疏水性和/或亲水性来表征。例如，相对亲脂性的表面活性剂更易溶于脂肪、油和蜡，通常具有小于10或约10的疏水性-亲脂性平衡(hlb)值，而相对亲水性的表面活性剂更易溶于水性组合物(例如水)，并且通常具有大于10或约10的hlb值。相对两亲性的表面活性剂可溶于基于油和水的液体并且通常具有接近10或约10的hlb值。用于本文的组合物中的表面活性剂是生物相容性的，并且hlb值在8或约8和16或约16之间，一般为10-16或12-14。
[0071]
如本文使用的，助表面活性剂是除了另一种表面活性剂之外起作用以进一步降低
液体的表面张力的表面活性剂。微乳剂含有表面活性剂的陈述是指包括表面活性剂和助表面活性剂。助表面活性剂的性质是亲水性的，并且降低水的表面张力。它们一般被用作润湿剂，例如，通过降低水的表面张力来增加基于水的流体的扩散能力。助表面活性剂也被用来且经常被需要来增加主要表面活性剂的溶解度。
[0072]
如本文使用的，“粒径”和“平均粒径”同义地指所提供的液体中的颗粒的平均直径，例如，乳剂中的液滴直径或胶束直径。
[0073]
如本文使用的，“油相”或“脂质相”用于指组合物的含有一种或更多种亲脂性成分和/或两亲性成分(诸如油)的部分(或相)，诸如本文提供的那些，并且一般为脂质可溶相。在水包油(o/w)微乳剂中，脂质相通常是分散相而水是分散相。
[0074]
如本文使用的，油相成分是指所提供的组合物中在所提供的用于制备组合物的方法中被包含在油相中的组分。典型的油相成分包括非极性化合物，例如，非极性活性成分；至少一种表面活性剂；油，诸如非极性溶剂；防腐剂；以及微乳剂稳定剂。其他亲脂性和/或两亲性成分可以被包含在油相中。
[0075]
如本文使用的，“水相”(“water phase”或“aqueous phase”)是指组合物的包含一种或更多种亲水性成分和/或两亲性成分(水相成分)的部分(相)，诸如本文提供的那些，一般为水可溶相。通常，在所提供的在本文提供的微乳剂组合物中，水相是连续相。“水相”也用于指在制备微乳剂时生成的含有水相成分的液体。
[0076]
如本文使用的，水相成分是指组合物中在所提供的用于制备组合物的方法中被包含在水相中的组分。典型的水相成分可以包括，但不限于，极性溶剂，典型的极性质子溶剂，诸如水和醇，典型的具有多于一个羟基基团的醇，诸如二羟基醇和三羟基醇，诸如甘油和丙二醇；至少一种表面活性剂；防腐剂和乳剂稳定剂。其他亲水性和/或两亲性成分可以被包含在水相中。
[0077]
如本文使用的，微乳剂的热力学稳定性是指使得各相不分离的分散体的稳定性。本文提供的微乳剂表现出高热力学稳定性，如通过其在升高的温度(elevated temperatures)的稳定性所显示的。
[0078]
如本文使用的，受试者包括动物，通常为哺乳动物，通常是人。
[0079]
如本文使用的，室温和环境温度用于描述人类通常所在或居住的一个或更多个封闭空间中的常见温度。室温可以变化，但一般指在19℃或约19℃和25℃或约25℃之间的温度。当组合物在室温储存时，应理解它一般被保持在这个范围内或约在这个范围内的温度。
[0080]
如本文使用的，冷藏温度是指冰箱(例如，家用或餐厅冰箱)中常见的温度，例如，比室温更冷的温度，但通常在水的冰点(0℃或约0℃，或者-19℃或-20℃)以上几度。通常，冷藏温度在10℃或约10℃和0℃或约0℃之间，例如，4℃或约4℃。当组合物在冷藏温度储存时，应理解它被保持在对家用或工业冰箱常见的温度。
[0081]
如本文使用的，冷冻温度是指水的冰点附近或以下的温度，例如，在家庭冰柜中常用的温度，例如，0℃或约0℃，例如，-19℃或约-19℃或-20℃或约-20℃或更冷。
[0082]
如本文使用的，除非上下文另外指明，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述/该(the)”包括复数指代物。
[0083]
如本文使用的，范围和量可以被表示为“约”特定值或范围。约也包括精确的量。因此，“约5克”意指“约5克”并且也意指“5克”。还应理解本文表述的范围包括范围内的整数和
其分数。例如，5克和20克之间的范围包括整数值，诸如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20克，以及该范围内的分数，例如，但不限于，5.25、6.72、8.5和11.95克。
[0084]
如本文使用的，“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形发生或不发生，并且该描述包括所述事件或情形发生的情况和其不发生的情况。例如，任选地变化的部分意指该部分是变化的或非变化的。在另一种实例中，任选的连接步骤意指该过程包括连接步骤或不包括连接步骤。
[0085]
如本文使用的，范围和量可以被表述为“约”特定值或范围。约也包括精确的量。因此，“约10％”意指“约10％”并且也意指“10％”。
[0086]
如本文使用的，“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形或要素发生或不发生，并且该描述包括所述事件或情形或要素发生的情况和其不发生的情况。例如，任选地被取代的基团意指该基团是未被取代的或被取代的。
[0087]
b.概览
[0088]
本文提供了可以用于溶解药物活性化合物的热力学稳定的微乳剂。本文提供的微乳剂有利地可以用于眼部应用。该微乳剂由以下制备：含有油组分、一种或更多种表面活性剂和助表面活性剂的脂质相；以及含有一种或更多种表面活性剂和助表面活性剂的水相。在一些实施方案中，水相含有一种表面活性剂和一种助表面活性剂。还可以包含用于药物用途的乳剂和组合物中使用的另外的成分。
[0089]
如本文描述的，本文提供的微乳剂具有相对均匀尺寸的小颗粒。因此，乳剂非常稳定并且可以用于配制药物活性化合物以产生非常稳定的组合物，其中所述药物活性化合物具有高生物利用度。
[0090]
微乳剂是通过在脂质相中包含油，以及在水相和脂质相中的每一种中以精确的比例包含至少一种表面活性剂和一种助表面活性剂形成的。当使用这些比例时，在混合两相(诸如通过用水相滴定脂质相(将水相加入到脂质相中))后形成的微乳剂具有非常窄分布范围的非常小的颗粒(《30nm)。因此，微乳剂异常稳定，并且，可以用来配制具有有限的水溶性的药物活性化合物。所得的非常稳定的微乳剂组合物使得药物化合物是生物可利用的。
[0091]
在特定的实施方案中，微乳剂由水相和脂质相形成，其中：
[0092]
脂质相中的表面活性剂和助表面活性剂的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为2至10；
[0093]
脂质相中的油组分的量与水相中的表面活性剂和助表面活性剂的量之间的重量/体积比为0.2至1.0。
[0094]
另外，在一些实施方案中，在脂质相中，油组分与表面活性剂和助表面活性剂之间的重量/体积比为包括端点的0.05至1.4。
[0095]
本文描述了微乳剂的组分的进一步的细节，包括表面活性剂、油、药物活性化合物。
[0096]
c.表面活性剂
[0097]
为了制备微乳剂，每一相必须包含至少一种表面活性剂，并且一般包含助表面活性剂。脂质相和水相中的表面活性剂可以是相同或不同的。
[0098]
用于脂质相和用于水相的表面活性剂和助表面活性剂具有以下hlb值：8-16，特别是10-16或12-14。适于药物应用且具有在这些范围中的hlb的任何生物相容性的表面活性
剂/助表面活性剂可以用于微乳剂中。本领域技术人员已知存在许多这样的表面活性剂/助表面活性剂(对于示例性表面活性剂，参见以下表和讨论)。技术人员可以容易地选择用于微乳剂中的表面活性剂和助表面活性剂。选定的表面活性剂将具有在必要范围内的hlb，并且将适合于预期的应用和活性剂。例如，用于眼用用途的表面活性剂应适于向眼施用。适于在药物组合物中使用的表面活性剂包括用于眼部应用的那些。这样的表面活性剂是熟知的(参见，例如，美国专利第6,267,985号)。
[0099]
适合用于本文提供的微乳剂组合物的亲水性表面活性剂包括本领域技术人员已知的任何亲水性表面活性剂，其具有在包括端点的约8至16之间的hlb，并且一般具有大于或等于10的hlb值。表面活性剂包括，但不限于，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸衍生物、聚氧乙烯、氢化蓖麻油乙氧基化物、脂肪酸的甘油酯、peg化脂肪酸、聚氧乙烯蓖麻油表面活性剂、泊洛沙姆、胺氧化物和醇乙氧基化物(非离子表面活性剂)。助表面活性剂包括甘油和/或丙二醇。实例包括，但不限于，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸衍生物，诸如tween 20(聚乙二醇脱水山梨醇单月桂酸酯；聚山梨醇酯20；例如，从sigma-aldrich可得)，tween 80(聚乙二醇脱水山梨醇单油酸酯；聚山梨醇酯80；例如，从sigma-aldrich可得)和montanox 40(聚乙二醇脱水山梨醇单棕榈酸酯；聚山梨醇酯40)。
[0100]
具有所述hlb值的亲水性表面活性剂包括蓖麻油乙氧基化物或氢化蓖麻油乙氧基化物，例如cremophor el(聚氧乙烯35蓖麻油usp，从basf可得)，cremophor rh40(kolliphor rh 40；聚氧乙烯40氢化蓖麻油usp，从basf可得)，etocas 40(peg 40蓖麻油，从croda可得)，croduret 60(peg-60氢化蓖麻油，从croda可得)，和kolliphor hs 15(聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，从sigma-aldrich可得)。
[0101]
下表按类型提供了用于药物应用(包括本文提供的微乳剂)的表面活性剂的通用名和商品名/商标。
[0102]
[0103]
[0104]
[0105][0106]
表用于微乳剂中的示例性表面活性剂和助表面活性剂
[0107]
[0108][0109]
以上表中列出的表面活性剂和hlb值是示例性的。适合用于药物组合物中的任何已知表面活性剂或助表面活性剂可以用于本文提供的乳剂中。
[0110]
1.脂质相中的示例性表面活性剂/助表面活性剂
[0111]
例如，在脂质相中，示例性的表面活性剂是非离子型的，诸如，但不限于，例如：泊洛沙姆(诸如以商标出售的那些)，氢化蓖麻油乙氧基化物(诸如和)，聚山梨醇酯(诸如tweentm)，月桂基二甲胺氧化物，聚乙氧基醇，聚氧乙烯月桂基醚、非离子聚氧乙烯表面活性剂(诸如以商标出售的那些)，聚氧乙烯蓖麻油、卵磷脂、泊洛沙姆、聚乙二醇和脂肪酸的甘油酯。在一些实施方案中，脂质相中的助表面活性剂是丙二醇和/或甘油。
[0112]
2.水相中的示例性表面活性剂/助表面活性剂
[0113]
在水相中，示例性的表面活性剂是非离子型的，诸如，但不限于，例如：泊洛沙姆(诸如以商标出售的那些)，氢化蓖麻油乙氧基化物(诸如和)，聚山梨醇酯(诸如tweentm)，月桂基二甲胺氧化物，聚乙氧基醇，聚氧乙烯月桂基醚、非离子聚氧乙烯表面活性剂(诸如以商标出售的那些)，聚氧乙烯蓖麻油、卵磷脂、聚乙二醇，脂肪酸的甘油酯。在一些实施方案中，水相中的助表面活性剂是丙二醇和/或甘油。
[0114]
d.水相组分
[0115]
水相包括极性质子溶剂，一般是适于眼部应用的那些，诸如水。水相包括所有极性和水溶性成分，并且包括表面活性剂和助表面活性剂。水相中的其他成分可以包括醇和甘油以及其他这样的溶剂。
[0116]
e.脂质相组分
[0117]
脂质相包括至少一种油，以及非极性成分，包括不溶于水性组合物的药物剂/药物。脂质相包括至少一种油。该油可以是天然油或合成油，并且必须是生物相容性的油。适合的天然油包括但不限于植物油或动物油，诸如，举例来说大豆油、玉米油、亚麻籽油、葵花油、磷虾油、鱼肝油、鱼油、鳄梨油、杏仁油、巴巴苏油、琉璃苣油、角豆油、腰果油、葡萄籽油、椰子油、稻糠油、蓖麻油、工业大麻籽油、霍霍巴油、花生油、罂粟籽油、芝麻油、核桃油、橄榄油、小麦胚芽油、阿甘油、棉籽油、黑加仑籽油，和按比例计大于10％的富含pufa的油。合成来源的矿物油，诸如，举例来说中链和长链脂肪酸的酯，中链和长链甘油三酯。
[0118]
f.另外的成分
[0119]
微乳剂可以包括在药物组合物中适合的和有用的另外的成分。以下是这样的成分的示例。所有都应该是生物相容性的以便它们可以，例如，表面应用于眼或注射到眼中或者摄取或肠胃外地施用。
[0120]
1.缓冲剂
[0121]
微乳剂可以包含缓冲剂以保持ph在期望的范围内，一般在约5.0和8之间，诸如在5.2和8之间，诸如7.4或7.5。示例性的生物相容性的适合的缓冲剂包括但不限于：氨丁三醇(tris缓冲剂，2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇)、mcilvaine(柠檬酸盐-磷酸盐缓冲剂)、(0.133m na2hpo40.133m kh2po
4 ph 7.2)、乳酸钠、乙酸钠、硼酸钠、硼酸和咪唑。示例性的缓冲剂是用naoh或hcl调节到ph的组氨酸和柠檬酸。适合的缓冲剂浓度在10-50mm的范围内。
[0122]
2.张度剂
[0123]
微乳剂可以包含等渗剂。这些化合物用于在制备中达到所需的张度。这些的示例是甘油、山梨醇、甘露醇、蔗糖、海藻糖、丙二醇、右旋糖、乙二醇、氯化钠、氯化钾、氯化镁和氯化钙。在一种实施方案中，微乳剂包括赋形剂诸如：稳定剂、抗氧化剂、抗菌剂、增稠剂、支链和直链聚合物。张度剂以保证制剂的重量渗透摩尔浓度(范围例如，在组合物的包括端点的100-400mosmol/kg之间)的浓度使用。
[0124]
3.稳定剂
[0125]
稳定剂选自，举例来说：甘氨酸、脯氨酸、环糊精、杯芳烃、羟丙甲纤维素、组氨酸、甜菜碱、白蛋白、l-肉碱、牛磺酸、单硬脂酸甘油酯、果胶、聚乙烯醇、丙二醇。确定适当的浓
度在本领域的技术之内，适当的浓度取决于，例如，特定的稳定剂和组合物的其他组分。例如，量可以是在包括端点的0.0001％至20％w/v之间。
[0126]
4.增稠剂
[0127]
微乳剂可以包含增稠剂。增稠剂包括但不限于从植物、微生物和动物提取的那些。许多增稠剂是本领域技术人员已知的。从植物提取的增稠剂的示例是胶。增稠剂的示例是胶，诸如从属于以下属的植物提取的胶：瓜儿豆属(cyamopsis)、苹婆属(sterculia)、番薯属(ipomoea)、胡卢巴属(trigonella)、决明属(cassia)、双囊荠属(physaria)、酸豆属(tamarindus)、长角豆属(ceratonia)、云实属(caesalpinia)；植物来源的渗出物，诸如，举例来说与属于以下属的种有关的那些：铁线子属(manilkara)、魔芋属(amorphophallus)、金合欢属(acacia)、榆绿木属(anogeissus)、苹婆属、黄耆属(astragalus)；微生物来源的胶，诸如，举例来说葡聚糖、结冷胶、黄原胶；海洋来源的提取物，诸如，举例来说海藻酸钠、海藻酸、卡拉胶、琼脂-琼脂，以及石莼(ulva lactuca)、海苔(alga nori)、钝项节旋藻(arthrospira platensis)的衍生物；动物来源的衍生物，诸如，举例来说几丁质和壳聚糖、透明质酸；纤维素的衍生物，诸如，举例来说羧甲基纤维素(cmc)、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、甲基纤维素(mc)、微晶纤维素(mcc)。
[0128]
5.抗氧化剂
[0129]
抗氧化剂可以包含在微乳剂组合物中。抗氧化剂的示例是α-生育酚、黄酮类(例如白藜芦醇、表没食子儿茶素-3-没食子酸盐、槲皮素、柚皮素、飞燕草素)辅酶q10、ndga(去甲二氢愈创木酸)、内消旋ndga、抗坏血酸钠、l-抗坏血酸、n-乙酰肌肽、柠檬酸、异抗坏血酸、l-6-抗坏血酸棕榈酸酯、l-肌肽、l-谷胱甘肽、l-半胱氨酸、半胱氨酸抗坏血酸。量可以由技术人员确定。量可以取决于所采用的特定抗氧化剂和组合物的其他组分。示例性的范围是在包括端点的0.0001％和5.0％w/v之间。
[0130]
g.含有活性成分的微乳剂组合物
[0131]
本文提供的微乳剂组合物用作药学上可接受的载体，用于配制生物活性分子，诸如小分子药物和生物制品。本文提供的微乳剂对于配制在水性溶液中具有低溶解度的活性剂是有利的。所提供的微乳剂用于以稳定的且在室温也能够保存的形式配制这样的活性剂。
[0132]
在此提供的微乳剂可以用于口服、胃肠外、表面和局部应用。在特定的实施方案中，乳剂用于眼部施用。微乳剂可以根据适应症来配制，例如用于表面应用，诸如滴眼剂，或用于注射，诸如玻璃体内注射。
[0133]
1.活性成分
[0134]
活性成分包括药学上和生物上有活性的化合物，诸如小分子药物和生物制品，特别是在水性组合物中具有有限溶解度的剂。活性剂一般通过将其添加到脂质相中，并且然后将脂质相与水相混合，诸如通过本文描述的滴定来配制。脂质相和水相含有如本文描述的所需的量和比例的表面活性剂/助表面活性剂和脂质。所形成的微乳剂特征在于具有小的颗粒(《30nm，诸如15nm
±
10nm)，和窄的粒径范围分布诸如pdi《0.2，高热力学稳定性，以及配制的活性剂的良好的生物利用度和活性。
[0135]
微乳剂一般含有少于5％(w/v)的活性剂，但可以含有感兴趣的任何量，诸如0.01mg/ml至50mg/ml，诸如0.01mg/ml至30mg/ml。特定的量取决于药物、其所用于的适应
症、施用途径和受试者。以适当的浓度配制剂完全在本领域的技术之内。
[0136]
活性成分包括任何已知的药物，特别是在水性组合物中具有低溶解度的那些。包括，例如选自由美国药典(united states pharmacopeia，usp)定义的组的任何药物分子。这些包括，但不限于，胃肠道剂、抗痉挛药、血糖调节剂、营养制品/矿物质/电解质、血小板调节剂、凝血药、心血管剂、α-肾上腺素能激动剂/α-肾上腺素能拮抗剂/血管扩张剂/动脉血管扩张剂、碳酸酐酶抑制剂利尿药/循环利尿药/保钾利尿药/噻嗪类利尿药、其他心血管剂、β-肾上腺素能拮抗剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ace)、血脂异常药/hmg coa还原酶抑制剂(他汀类)、抗真菌剂、皮肤用剂、抗组胺药、麻醉药、抗细菌剂、激素刺激剂/替代物/调节物(肾上腺、垂体和性激素)、血糖剂、激素抑制剂(甲状旁腺)、抗分枝杆菌剂、抗病毒剂、抗肿瘤药、免疫调节剂、抗炎剂、镇痛药、抗惊厥剂、抗帕金森病剂、抗精神病药、抗抑郁药/抗痴呆剂/抗焦虑药物、抗肌无力剂/用于治疗滥用物质的剂/中枢神经系统剂、支气管扩张剂/拟交感神经药/抗胆碱能药/吸入型皮质类固醇/磷酸二酯酶抑制剂/空气传播紊乱、其他呼吸道剂、抗寄生虫剂、抗青光眼眼用剂、其他眼用剂/抗过敏眼用剂、眼用抗炎药、前列腺素类似物和眼用前列腺酰胺。
[0137]
活性成分还包括，但不限于，来自由世界卫生组织编制的anatomical therapeutic chemical classification system (atc)定义的组的任何活性成分。这些包括用于酸度相关紊乱的药物(a02)、用于胃肠功能紊乱的药物(a03)、用于糖尿病的药物(a10)、维生素(a11)、矿物质补充剂(a12)、抗血栓剂(b01)、抗出血药(b02)、心脏治疗药物(c01)、抗高血压药(c02)、利尿药(c03)、周围血管扩张剂(c04)、血管保护剂(c05)、β-阻断剂(c07)、钙拮抗剂(c08)、作用于肾素-血管紧张素系统的药物(c09)、降脂药物(c10)、皮肤用抗真菌剂(d01)、润肤剂和保护剂(d02)、用于创伤和溃疡的药物(d03)、止痒药包括抗组胺药、麻醉药(d04)、抗银屑病药物(d05)、皮肤用抗生素和化学治疗剂(d06)、防腐药和消毒剂(d08)、垂体激素、下丘脑激素和类似物(h01)、全身性皮质类固醇(h02)、甲状腺治疗剂(h03)、胰腺激素(h04)、稳态钙(h05)、全身用抗细菌剂(j01)、全身用抗真菌剂(j02)、抗分枝杆菌剂(j04)、全身用抗病毒药物(j05)、免疫血清和免疫球蛋白(j06)、抗肿瘤剂(l01)、内分泌治疗剂(l02)、免疫刺激剂(l03)、免疫抑制剂(l04)、抗炎药和抗风湿药(m01)、用于关节和肌肉疼痛的外用产品(m02)、麻醉药(n01)、镇痛药(n02)、抗癫痫药(n03)、抗帕金森病药(n04)、精神抑制药(n05)、精神兴奋药(n06)、其他神经系统药物(n07)、鼻制剂(r01)、用于咽腔的制剂(r02)、用于呼吸道阻塞性紊乱的药物(r03)、用于咳嗽和感冒的制剂(r05)、全身用抗组胺药(r06)、其他用于呼吸系统的制剂(r07)、抗感染药(s01a)、抗炎剂(s01b)、抗炎剂和抗感染药组合(s01c)、抗青光眼剂和缩瞳药(s01e)、扩瞳药和睫状肌麻痹药(s01f)、解充血药和抗过敏药(s01g)、局部麻醉药(s01h)、诊断剂(s01j)、手术辅助药物(s01k)、眼部血管剂(s01l)、抗感染药(s03a)、皮质类固醇(s03b)、以及与抗感染药组合的皮质类固醇(s03c)。
[0138]
2.眼用剂
[0139]
如本文描述的微乳剂特别适于眼部应用。因此，任何眼用药物都可以配制于该微乳剂中。用于眼部使用的药物包括但不限于，甾体抗炎剂、抗菌药物、抗青光眼剂、抗高血压药、诊断剂、抗病毒剂、抗血管生成剂、神经保护剂和抗氧化剂。这些成分可以单独使用或组合使用。
[0140]
例如，活性成分可以用于治疗高眼压症或青光眼，诸如，例如：前列腺素(拉坦前列素、曲伏前列素、比马前列素)、β-阻断剂(噻吗洛尔、卡替洛尔(carteolol)、左布诺洛尔(levobunolol)、倍他洛尔(betaxolol)、奈必洛尔(nebivolol))、拟副交感神经药(匹鲁卡品(pilocarpine))、α2-激动剂(阿可乐定(apraclonidine)、溴莫尼定(brimonidine))、碳酸酐酶抑制剂cai-(布林佐胺(brinzolamide)、多佐胺(dorzolamide))及其衍生物。在一种示例性实施方案中，微乳剂中的活性成分选自一种或更多种前列腺素类似物，诸如，例如拉坦前列素、曲伏前列素、比马前列素及衍生物。
[0141]
在实施方案中，活性成分是抗血管生成剂，诸如，例如，索拉非尼、甲苯磺酸索拉非尼、瑞戈非尼、甲苯磺酸瑞戈非尼、羟乙基磺酸瑞戈非尼、乙磺酸瑞戈非尼、阿普斯特、拉多替尼、螺内酯，或抗氧化剂诸如去甲二氢愈创木酸、内消旋去甲二氢愈创木酸(马索罗酚)、从制药角度看是可接受的来自这些的水合物、溶剂化物、代谢物或盐，或分子的多晶型结晶形式；或可以是β-阻断剂的分子，诸如噻吗洛尔、倍他洛尔、左布诺洛尔、奈必洛尔和卡替洛尔；或者活性成分是皮质类固醇，诸如地塞米松，或非甾体抗炎药物(nsaid)或两种或更多种活性成分的混合物。
[0142]
微乳剂含有在浓度范围约0.01mg/ml至50mg/ml(诸如0.01mg/ml至30mg/ml)内的活性成分。本文示出和描述的结果展示，微乳剂赋予活性成分以增强的稳定性，而不干扰活性成分的生物作用。例如，实施例6示出，本文提供的微乳剂有效地携带单独或组合的各种活性成分。微乳剂赋予制剂中包含的活性成分以稳定性。例如，实施例11示出，在体内测量中，所得的微乳剂中的拉坦前列素活性至少与使用商业眼用溶液中的拉坦前列素观察到的活性相当。活性成分的化学稳定性在室温被保持。
[0143]
例如，含有马索罗酚或甲苯磺酸索拉非尼的微乳剂在视网膜缺血再灌注、脉络膜新血管形成和糖尿病性视网膜病变的动物模型中有效。如实施例16所示，含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)在干眼症的鼠模型中有效，干眼症是眼的表面的病变。
[0144]
因此，如本文提供的微乳剂允许配制任何已知的药物活性剂，并提供增强的稳定性，同时保留至少与不赋予增强的稳定性的其他制剂相当的活性。
[0145]
h.眼的疾病和状况以及治疗的方法
[0146]
本文提供的微乳剂可用作任何活性剂的施用的媒介物，特别是在水性组合物中低溶解度的那些。微乳剂可通过配制用于治疗眼的紊乱、状况和疾病的活性剂用于治疗眼部紊乱。本文提供的微乳剂特别适用于这些适应症，因为它们含有与眼组织相容的成分，并且因为它们可以以稳定和具有良好生物利用度的形式提供这些剂。这些状况、疾病和紊乱包括眼部状况和病变，诸如但不限于，青光眼、年龄相关性黄斑变性amd、糖尿病性视网膜病变、神经病变、细菌感染、病毒感染、干眼症、眼的过敏和/或炎症。微乳剂可以配制成用于向眼进行表面施用或用于注射或者任何适合的途径。
[0147]
不同类型的疾病影响眼。眼被分为两个部分：(1)前部，其包含角膜、虹膜、瞳孔、结膜、睫状体、前房、房水、小梁网和晶状体；和(2)后部，其包含玻璃体液、巩膜、脉络膜、视网膜、黄斑和视神经。存在许多眼的疾病和状况，和用于治疗这样的疾病和状况的药物活性剂。施用可以通过任何途径(诸如表面使用滴眼剂，和通过注射，诸如玻璃体内注射)来实现。治疗很重要，因为有些疾病最终导致失明。
[0148]
以下是可以治疗的疾病和可以配制于本文提供的微乳剂中的药物的示例。
[0149]
1.青光眼
[0150]
青光眼是一种多方面的紊乱，由视网膜神经节细胞及其轴突的损伤引起，导致进行性视神经退化，并在一些患者中导致不可逆转的失明。青光眼有两个主要类别，其特征在于升高的眼内压(iop)，诸如开角型青光眼(oag)和闭角型青光眼(acg)。oag是一种慢性状况，其中小梁网或施莱姆氏管内有部分堵塞，损害房水(aqh)从眼正常排出的能力，导致增加的iop。acg由前房内的虹膜角膜角关闭定义，并且由将虹膜拉到或推到前房中的因素导致。这种形态上的变化可以通过限制流经虹膜角膜管和小梁网而物理上阻止aqh的排出。此外，存在正常眼压性青光眼(normal-tension glaucoma，ntg)，其是oag的一种形式，特征在于患者的青光眼性视神经病变伴随iop测量持续低于21mmhg。
[0151]
用于治疗青光眼的药物包括前列腺素类似物，诸如拉坦前列素、比马前列腺、曲伏前列素和他氟前列素(tafluprost)；β-阻断剂，诸如噻吗洛尔、卡替洛尔、左布诺洛尔和倍他洛尔，和α-肾上腺素能激动剂诸如溴莫尼丁和阿可乐定，和碳酸酐酶抑制剂诸如多佐胺和布林佐胺，以及其药学上可接受的衍生物、水合物、溶剂化物、代谢物和盐或分子的多晶型结晶形式。此外，自2014年起，已开发了具有新作用机制的新类别药物，诸如一氧化氮(no)供体前列腺素f2-α类似物(拉坦前列素硝酸酯(latanoprostene bunod))、rho激酶抑制剂(瑞舒地尔(ripasudil)和甲磺酸奈妥舒迪(netarsudil mesylate))和前列腺素ep2受体激动剂(de-117)。
[0152]
2.黄斑变性
[0153]
年龄相关性黄斑变性(amd)是一种影响视网膜黄斑区的疾病，导致中心视力的进行性丧失；它是一种多因素的紊乱，其中补体、脂质、血管生成、炎症和细胞外基质途径的失调都牵涉到它的发病机理中。到2020年，全球患有amd的人数预计将为约2亿，到2040年将增加到近3亿。md有两种主要形式，具有不同的预后和治疗：萎缩型或干型md，代表病例总数的约85％-90％，以及新生血管型或湿型md。眼底的最初改变经常由所谓的玻璃疣(drusen)或胶质小体(colloids bodies)代表，其是主要在后极部发现的淡黄色和圆形的变性形成。考虑到诱发慢性视网膜损伤的机制，光感受器细胞(视杆细胞和视锥细胞)和视网膜色素上皮(rpe)的代谢维持的改变被认为取决于炎症过程和血管改变。用于湿性amd的药物包括vegf拮抗剂，以及靶向补体c3或c5的补体激活的抑制剂。通过玻璃体内注射施用的这样的药物的示例是雷珠单抗(ranibizumab，商品名：lucentis)和阿柏西普(aflibercept，eylea)、哌加他尼(pegaptanib，和贝伐单抗(bevacizumab，。具有其他作用机制的药物类别正处于开发中。这些包括，例如，抗补体剂(c3抑制剂)(apl-2)、抗补体剂培戈-阿伐普他(avacincaptad pegol，c5抑制剂；)、α2肾上腺素能受体激动剂(brimo dds)、基于darpin的抗vegf(abicipar pegol)、scfv抗vegf抗体片段(布洛赛珠单抗(brolucizumab))、抗vegf-c和vegf-d(opt-302)。还有处于早期开发阶段的有前景的药物，诸如靶向c5/补体因子f的药物(clg561/lfg316组合)、作为单分子结合ang2/vegf的药物(rg7716)、抗内皮素抗体(de-122)、vegf抑制剂(lha510和pan-90806)、整合素avβ3拮抗剂(sf0166)、pdgf/vegf抑制剂(x-82)、ctgf抑制剂(rxi-109)，vegf、pdgf和bfgf抑制剂(乳酸角鲨胺(squalamine lactate))、ppar-α激动剂(bio-201)、抗氧化剂/nf-kb抑制剂(cpc-551)，mptp开放阻断剂(ocuvia)、30s核糖体亚单位的16s rrna抑制剂(fmx-103)、组织因子抑制剂(icon-1)、masp-2抗体(oms-721)、β-淀粉样蛋白抑制剂(alz-801)和robo4激动剂
(ds-7080)。
[0154]
3.干眼症
[0155]
干眼症是一种多因素的眼表疾病，特征在于泪膜失去稳态，并伴有眼部症状，其中泪膜不稳定性和高渗透压(hyperosmolarity)，眼表炎症和损伤，以及神经感觉异常起着病因学作用。这种眼部疾病的治疗由人工眼泪的广泛使用主导，人工眼泪含有水凝胶聚合物诸如透明质酸钠和甲基纤维素；皮质类固醇诸如氟米龙、泼尼松龙和地塞米松；免疫抑制剂和抗炎剂诸如环孢菌素。此外，已经开发了具有新作用机制的新类别药物，诸如p2y2受体激动剂(地夸磷索四纳(diquafosol tetrasodium))；粘蛋白促分泌素(瑞巴派特(rebamipide))；整合素抑制剂和抗炎剂(立非司特(lifitegrast))；trka激动剂和神经营养因子肽模拟物(他维列胺(tavilermide)；线粒体抗氧化剂(visomitin)和重组人神经生长因子(rh-ngf)。
[0156]
其他处于临床开发的药物。这些包括例如，如胸腺素β4/合成肽(rgn-259)、基于rnai的trpv1抑制剂(tivanisiran)、醛类捕获药(aldehydetrap)(reproxalap)和重组人lubricinprotein(ecf-843)和处于早期开发的有前景的药物诸如催泪蛋白(lacritin)的合成片段(lacripep)、钙调神经磷酸酶抑制剂(伏环孢素(voclosporin))、上皮钠通道阻断剂(p-321)。
[0157]
4.睑板腺功能障碍(mgd)
[0158]
睑板腺功能障碍(mgd)是一种慢性、弥漫性的睑板腺异常，通常特征在于末端管道阻塞和/或腺体分泌物的定性/定量变化。这可以引起泪膜的改变、眼刺激的症状、临床上明显的炎症和眼表疾病。mgd可以导致睑板腺分泌物中正常脂质组成的改变。脂质异常可以导致泪膜组成和功能的异常，导致蒸发性干眼症。已知全身性米诺环素和多西环素在mgd的治疗中产生显著的效果。
[0159]
5.白内障
[0160]
白内障是眼晶状体的浑浊化导致折射率的变化并从而产生视力的损失。根据浑浊化的位置，年龄相关性白内障可以分为皮质性白内障、核性白内障或后囊下白内障。除了衰老之外，眼损伤、感染和手术也可以导致白内障形成。尽管手术治疗已被良好建立且是有效的，但在许多发展中国家，由于缺乏所需的仪器和医疗专业人员，因此无法进行手术。非手术治疗的开发对于预防和逆转白内障至关重要。感兴趣的是，抗氧化剂、分子伴侣、分子伴侣激活剂和蛋白聚集抑制剂都是有前景的药物候选。例如，含有羊毛甾醇的滴眼剂已被显示改善视力。
[0161]
6.糖尿病性视网膜病变和黄斑水肿
[0162]
糖尿病性视网膜病变(dr)和黄斑水肿，是糖尿病最令人担心的并发症，是年龄20-74岁的成年人中失明新病例的最常见的原因(28.5％)。dr在临床上分为非增殖性和增殖性疾病阶段。在非增殖性dr(npdr)中，视网膜内微血管发生变化，包括微动脉瘤、改变的视网膜血管通透性和最终视网膜血管关闭和无灌注。pdr涉及视网膜或视盘上新血管的形成。这些新的异常血管贯穿视网膜表面爆发并增殖到眼的玻璃体腔内，在那里它们可以向玻璃体内出血，导致视力丧失。治疗包括抗炎药和vegf抑制剂。
[0163]
7.感染和过敏
[0164]
眼的感染用适当的抗生素、抗病毒药、抗真菌药、抗炎药及其组合以及与抗生素的
组合治疗。具体治疗取决于感染的类型和感染的位置。
[0165]
i.制备微乳剂的方法
[0166]
微乳剂可以通过以下制备：以本文描述的比例内的量或本文描述的比例的量制备含有表面活性剂/助表面活性剂的水相和亲脂相，并且然后混合各相，其形成微乳剂。用于制备本文的微乳剂的方法的示例是图1和图2中描绘的那些。一种示例性的方法包括以下步骤：
[0167]
制备脂质相，其中一种或更多种表面活性剂/助表面活性剂的混合物溶解在油中，每份油混合1份至10份混合物；
[0168]
制备水相，其中表面活性剂和/或助表面活性剂混合物加上任何赋形剂溶解在水或其他极性质子溶剂中；
[0169]
用水相对脂质相滴定以产生微乳剂，其中微乳剂的0.4％-4.0％(w/v)由脂质相的油组分组成；微乳剂的4.0％-36.0％(w/v)由脂质相的表面活性剂/助表面活性剂组成；并且总表面活性剂/助表面活性剂的1.66％-4.15％(w/v)是来自水相的表面活性剂/助表面活性剂。
[0170]
在一种实施方案中，脂质相和水相通过缓慢的磁力驱动混合来组合。滴定可以以一定的速度进行，该速度由以下等式描述：
[0171]vtit
＝k
×
(v
tot
/1000ml)，
[0172]
其中v
tit
＝以ml
×
min-1
计的滴定速度；k＝2ml
×
min-1
；v
tot
＝以ml计的制剂总体积。
[0173]
所得的组合物中的胶束尺度为约15nm
±
10nm并且多分散指数(pdi)在包括端点的0.02-0.380、或0.02至0.2或0.02至0.15的范围内，或者小于0.2或小于0.12或小于0.1。制备在室温进行。
[0174]
有利地，本文提供的微乳剂，特别是意图用于眼部适应症的那些，不含有任何酒精性质的助表面活性剂。因此，所得的微乳剂是生物相容性的，即，被眼部组织良好耐受。j.实施例
[0175]
仅为了说明性目的而不意图限制本发明的范围，包括以下实施例。
[0176]
实施例1
[0177]
说明性微乳剂
[0178]
制备了一系列微乳剂，该系列微乳剂含有的表面活性剂和助表面活性剂以及脂质相的量符合本文提供的比例和量。一种制剂，命名为制剂5，以在该比例之外的量被制备，以展示比例的影响。还制备了含有活性药物的制剂以评估各种参数和活性。形成具有本文描述的有利特性的微乳剂的比例为例如：
[0179]
脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的重量/体积比为2至10，诸如2.2至9.8或2.4至8.6，和
[0180]
脂质相的油组分与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的重量/体积比为0.2至1.0，诸如0.22至0.98或0.24至0.96。
[0181]
在微乳剂的脂质相中，脂质相的油组分与表面活性剂/助表面活性剂混合物之间的重量/体积比为0.05至1.4，诸如0.07至1.2或0.1至1。
[0182]
使用肉豆蔻酸异丙酯作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂(表面活性剂)，丙二醇(助表面活性剂)作为湿润剂，柠檬酸钠二水合物作为缓冲剂，
以及柠檬酸作为ph调节剂，获得了5种制剂。如以下详述的，乳化剂和润湿剂分别是表面活性剂和助表面活性剂，分别在脂质相和/或水相中。
[0183]
用于眼用用途的微乳剂，制剂1：
[0184]
组分％w/v肉豆蔻酸异丙酯0.400tween 802.700kolliphor rh401.245丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量(q.s.)ph 7.40纯化水适量100ml
[0185]
tween 80和丙二醇是脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂。tween 80和丙二醇的比为2:1。在水相中，表面活性剂和助表面活性剂分别是kolliphor rh40和丙二醇。在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂1中，脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。
[0186]
用于眼用用途的微乳剂，制剂2：
[0187]
组分％w/v肉豆蔻酸异丙酯1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0188]
tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂。在脂质相中，吐温80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5。kolliphor rh40和丙二醇是水相中的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂2中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的18.67％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.15％(w/v)。
[0189]
用于眼用用途的微乳剂，制剂3：
[0190]
组分％w/v肉豆蔻酸异丙酯4.000tween 808.000kolliphor rh4019.110丙二醇13.040柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40
纯化水适量100ml
[0191]
tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂3中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的36％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.15％(w/v)。
[0192]
用于眼用用途的微乳剂，制剂4：
[0193]
组分％w/v肉豆蔻酸异丙酯0.400tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0194]
tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂4中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。
[0195]
制剂5-比较制剂
[0196]
组分％w/v肉豆蔻酸异丙酯0.500tween 803.390kolliphor rh401.965丙二醇2.350柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0197]
以下描述的制剂5中的成分不符合必要的比例。制剂5被特定地组成，使得油组分与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的比，以及脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂与水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的比不落入如本文提供的乳剂的参数内。制剂5被制备用于与本文提供的微乳剂进行比较，以展示本文提供的微乳剂的有利特性来源于该比例。
[0198]
tween 80和丙二醇是脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80和丙二醇的比为2:1；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂5中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的5.08％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的2.62％(w/v)。
[0199]
制剂6-9
[0200]
使用磷虾油或椰子油或3份磷虾油和1份琉璃苣油的混合物作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为润湿剂，柠檬酸钠二水合物作为缓冲剂，以及柠檬酸作为ph调节剂，制备了四种制剂(6、7、8和9)。
[0201]
tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂6中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。在制剂7、8和9中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的18.67％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.15％(w/v)。
[0202]
用于眼用用途的微乳剂，制剂6：
[0203]
组分％w/v磷虾油0.400tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0204]
用于眼用用途的微乳剂，制剂7：
[0205]
组分％w/v椰子油1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0206]
用于眼用用途的微乳剂，制剂8：
[0207]
组分％w/v磷虾油1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0208]
用于眼用用途的微乳剂，制剂9：
[0209]
组分％w/v磷虾油1.060琉璃苣油0.350tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0210]
制剂10-16
[0211]
使用含有3份蓖麻油和1份稻糠油或1份鳄梨油或1份葡萄籽油的混合物作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为润湿剂，柠檬酸钠二水合物作为缓冲剂，以及柠檬酸作为ph调节剂，获得了三种制剂(10、11和12)。
[0212]
使用3份磷虾油和1份琉璃苣油或1份亚麻籽油或1份奇亚油的混合物作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为润湿剂，柠檬酸钠二水合物作为缓冲剂，以及柠檬酸作为ph调节剂，获得了三种制剂(13、14和15)。
[0213]
使用椰子油作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为湿润剂，柠檬酸钠二水合物作为缓冲剂，以及柠檬酸作为ph调节剂，制备了制剂16。
[0214]
在制剂10、11、12、13、14、15和16中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。
[0215]
用于眼用用途的微乳剂，制剂10：
[0216]
组分％w/v蓖麻油0.300鳄梨油0.100tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0217]
用于眼用用途的微乳剂，制剂11：
[0218]
组分％w/v蓖麻油0.300
稻糠油0.100tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0219]
用于眼用用途的微乳剂，制剂12：
[0220]
组分％w/v蓖麻油0.300葡萄籽油0.100tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0221]
用于眼用用途的微乳剂，制剂13：
[0222][0223][0224]
用于眼用用途的微乳剂，制剂14：
[0225]
组分％w/v磷虾油0.300亚麻籽油0.100tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0226]
用于眼用用途的微乳剂，制剂15：
[0227]
组分％w/v磷虾油0.300奇亚油0.100tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 7.40纯化水适量100ml
[0228]
用于眼用用途的微乳剂，制剂16：
[0229][0230][0231]
表1总结了对于本实施例中描述的每种制剂，在脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的比，和在水相中的表面活性剂/助表面活性剂之间的比。例如，在制剂1中，脂质相中有一种表面活性剂(tween 80)和一种助表面活性剂(丙二醇)；tween 80的量/丙二醇的量为2:1。
[0232]
表1：脂质相和水相中表面活性剂/助表面活性剂的比
[0233][0234]
实施例2
[0235]
制剂组成对微乳剂参数和相对化学和物理稳定性的影响
[0236]
对如实施例1中描述的制剂1和本文随后描述的制剂1的变体进行压力测试以确定化学和物理稳定性。
[0237]
使用不同的缓冲剂以表2列出的量和组合来改变制剂1。
[0238]
表2：
[0239][0240]
图3a-3d中示出了在60℃热冲击条件获得的稳定性数据，并且涉及：ph(图3a)、重量渗透摩尔浓度(图3b)、平均粒径(尺寸，图3c)和ζ电位(pz，图3d)。根据研究的参数和结果(图3a-3d)，微乳剂制剂1及其各种变体都显示出良好的稳定性谱。在四种微乳剂变体(即1、1.1、1.2和1.3)中，制剂1由于其较低的柠檬酸盐缓冲剂浓度，被选为最适合眼用用途的制剂并用作进一步开发和比较的基础。
[0241]
将油相与水相之间的比以及油相和水相内表面活性剂与助表面活性剂之间的比改变为在本文描述的比例之外，产生了不具有必要特性(诸如平均粒径小于30nm，或窄的分布15nm
ꢀ±
10nm)的制剂。例如，为了与本文提供的微乳剂进行比较而制备的上述制剂5，不是由含有必要比例的表面活性剂的水相和脂质相形成的，也没有表现出各相中的表面活性剂量符合必要标准的制剂的有利特性。表3总结了微乳剂制剂1和制剂5之间的差异。制剂5不在本文提供的微乳剂的参数范围内；本文描述制剂5是为了比较的目的。
[0242]
表3：
[0243][0244]
特别地，对于制剂1，脂质相的油组分与水相中的表面活性剂-助表面活性剂之间的比等于0.24，其在0.2-1的范围内。对于制剂1，脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂与水相中的表面活性剂/助表面活性剂的比等于2.44，其在2.0-10的范围内。制剂1的特征在于平均粒径《20nm和多分散指数(pdi)《0.10。
[0245]
然而，对于制剂5，油组分/水相中的表面活性剂-助表面活性剂之间的比等于0.19，并且脂质相中的表面活性剂/助表面活性剂/水相中的表面活性剂-助表面活性剂的比等于1.93。制剂5的特征在于平均粒径》30nm和pdi》0.40。
[0246]
制剂1和制剂5的平均颗粒分布图(尺寸)分别在图4a和图4b中示出。制剂5呈现乳白色并且是热力学不稳定的。相比之下，在长达6个月的期间进行的研究中，制剂1及本文描述的它的变体呈现透明并且是热力学稳定的。
[0247]
图5a-5d示出了制剂1在25℃和40℃关于重量渗透摩尔浓度(图5a)、ph(图5b)、平均粒径(nm，图5c)和ζ电位(pz，图5d)随时间(月)的稳定性数据。这些结果显示，从本文描述的必要比例的任何偏离都会导致微乳剂不具备有利的特性。因此，提供了用于制备具有迄今尚未观察到的特性的微乳剂的参数和组分。
[0248]
实施例3
[0249]
制剂4的稳定性
[0250]
图6a-6c示出了本文提供的说明性微乳剂制剂在不同温度[25℃(图6a)、40℃(图b)和60℃(图6c)]关于尺寸和pdi随时间(月)的稳定性数据。在所分析的每种条件下，制剂4总是呈现出分别在15nm
ꢀ±
10nm和0.070
±
0.050内的尺寸和pdi。这样的值在本文提供的范围内，并且在整个研究期间保持不变。
[0251]
实施例4
[0252]
制剂7、8和9的稳定性
[0253]
制剂7、8和9的特征在于：尺寸≤25nm；多分散指数(pdi)≤0.24和ph值在6.0-7.4的范围内。
[0254]
图7a-7d示出了制剂7、8和9在60℃热冲击条件下持续30天，关于ph(图7a)、平均粒径(nm，图7b)、多分散指数(pdi，图7c)和ζ电位(mv，图7d)随时间(周)的稳定性数据。
[0255]
在所分析的条件下，所有制剂总是显示出分别在15nm
ꢀ±
10nm和0.190
±
0.050范围内的尺寸和pdi。这样的值在本文提供的范围内，并且在整个研究期间保持不变。
[0256]
实施例5
[0257]
制剂6、10、11、12、13、14、15和16的稳定性
[0258]
制剂6的特征在于：尺寸《20nm；多分散指数(pdi)《0.10和ph值在指示的5-6的范围内。
[0259]
制剂10、11、12、13、14、15和16的特征在于：尺寸《20nm；多分散指数(pdi)《0.10和ph值在指示的6.5-7.5的范围内。
[0260]
图8a-8e示出了在60℃热冲击条件下持续30天，关于ph(图8a)、平均粒径(nm，图8b)、多分散指数(图8c)、重量渗透摩尔浓度(图8d)和ζ电位(mv，图8e)随时间(周)的稳定性数据。
[0261]
在所分析的条件下，所有制剂总是显示出分别在15nm
ꢀ±
10nm和0.190
±
0.050范围内的尺寸和pdi。
[0262]
这样的值在本文提供的范围内，并且在整个研究期间保持不变。
[0263]
一些示例性微乳剂制剂中的总结表
[0264][0265]
a)
油是肉豆蔻酸异丙酯，除非另有指示
[0266]
b)
n.d.＝未描述，s＝稳定，ns＝不稳定
[0267]
c)
制剂05含有药物-参见实施例6
[0268]
d)
在比例之外
[0269]
实施例6
[0270]
含有拉坦前列素、马索罗酚或甲苯磺酸索拉非尼的示例性微乳剂
[0271]
含有药物活性化合物的制剂在数字前加“0”来命名。如本文所述地制备的命名为01、02、03、04和05的五种制剂含有肉豆蔻酸异丙酯作为油组分，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为润湿剂，以及柠檬酸钠二水合物和/或盐酸组氨酸作为缓冲剂。
[0272]
命名为06、07、08和09的四种制剂含有磷虾油或椰子油或者3份磷虾油和1份琉璃苣油作为油相，水作为分散剂，tween 80和kolliphor rh40作为乳化剂，丙二醇作为润湿剂，柠檬酸钠二水合物和/或盐酸组氨酸作为缓冲剂。
[0273]
下表提供了示例性的包含用于眼用用途的活性剂的微乳剂。
[0274]
用于眼用用途的微乳剂，制剂01：
[0275]
组分％w/v拉坦前列素0.005肉豆蔻酸异丙酯0.400tween 802.700kolliphor rh401.245丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.500
组氨酸hcl0.015纯化水适量100ml
[0276]
用于眼用用途的微乳剂，制剂02：
[0277]
组分％w/v拉坦前列素0.005肉豆蔻酸异丙酯0.400tween 802.700kolliphor rh401.245丙二醇1.765柠檬酸钠二水合物0.700组氨酸hcl0.030纯化水适量100ml
[0278]
用于眼用用途的微乳剂，制剂03：
[0279][0280][0281]
用于眼用用途的微乳剂，制剂04：
[0282]
组分％w/v马索罗酚0.302肉豆蔻酸异丙酯0.400tween 802.700kolliphor rh401.245丙二醇1.765α-生育酚0.100柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 5.50纯化水适量100ml
[0283]
在制剂01、02、03和04中，tween 80和丙二醇是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween80和丙二醇的比为1:2；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在制剂1中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/
助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。
[0284]
用于眼用用途的微乳剂，制剂05：
[0285]
组分％w/v甲苯磺酸索拉非尼0.300肉豆蔻酸异丙酯1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500纯化水适量100ml
[0286]
用于眼用用途的微乳剂，制剂06：
[0287][0288]
组分％w/v磷虾油0.400tween 800.900kolliphor rh403.045丙二醇1.765α-生育酚0.100白藜芦醇0.050柠檬酸钠二水合物0.500柠檬酸0.1n适量ph 5.20纯化水适量100ml
[0289]
在制剂6中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在该制剂中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.05％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的1.66％(w/v)。
[0290]
用于眼用用途的微乳剂，制剂07：
[0291]
组分％w/v甲苯磺酸索拉非尼0.300椰子油1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500纯化水适量100ml
[0292]
用于眼用用途的微乳剂，制剂08：
[0293]
组分％w/v甲苯磺酸索拉非尼0.300磷虾油1.410tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500纯化水适量100ml
[0294]
用于眼用用途的微乳剂，制剂09：
[0295]
组分％w/v甲苯磺酸索拉非尼0.300磷虾油1.060琉璃苣油0.350tween 804.150kolliphor rh4011.410丙二醇7.260柠檬酸钠二水合物0.500纯化水适量100ml
[0296]
在制剂05、07、08和09中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40是脂质相的表面活性剂/助表面活性剂；在脂质相中，tween 80、丙二醇和kolliphor rh40的比为1:2:1.5；kolliphor rh40和丙二醇是水相的表面活性剂/助表面活性剂，其中，在水相中，kolliphor rh40和丙二醇的比为3:1。在这些制剂中，脂质相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的18.67％(w/v)，并且水相的表面活性剂/助表面活性剂为微乳剂的4.15％(w/v)(所得的微乳剂中的总计表面活性剂/助表面活性剂为23.83％)。
[0297]
实施例7
[0298]
实施例6的含有拉坦前列素的制剂01、02和03的稳定性
[0299]
对如实施例6中描述的制剂01、02和03进行了压力测试以评估其化学和物理稳定性。图9a-9e示出了在60℃热冲击条件下持续15天获得的稳定性数据，其示出了：ph(图9a)、重量渗透摩尔浓度(图9b)、尺寸(图9c)、pz(图9d)和拉坦前列素回收率的百分比(图9e)。
[0300]
在整个研究期间，所有测试的制剂都显示出保持规格内的化学-物理参数。制剂03突出了拉坦前列素的低的百分比变化性和更适于眼用用途的重量渗透摩尔浓度值。
[0301]
对制剂03进行了长达24个月的稳定性研究。结果在图10a-10e和图11a-11d中示出。图10a-e示出了在25℃、40℃和5℃获得的稳定性数据，其示出了：ph(图10a)、重量渗透摩尔浓度(图10b)、尺寸(图10c)和pz(图10d)。在图10e中，该图示出了在长期稳定性研究(25℃
±
2℃，rh＝60％
±
5％)中拉坦前列素的浓度，表示为根据不同研究时间的回收率％。在整个分析期间，拉坦前列素的浓度保持在规格限值之内。图11a示出了在长期稳定性研究(25℃
±
2℃，rh＝60％
±
5％)过程中确定的pdi和平均粒径分布。图11b-11d示出了分别在40℃持续6个月、60℃持续3周和4℃持续刚过10个月确定的pdi和平均粒径。在研究期间，测量的参数在预期范围内。
[0302]
实施例8
[0303]
实施例6的含有马索罗酚的制剂04和06的稳定性
[0304]
对如实施例6中描述的制剂04和06进行了长期稳定性研究(25℃
±
2℃，rh＝60％
±
5％，5℃
±
3℃)以评估其稳定性谱。图12a-12e示出了在长期稳定性研究过程中确定的ph(图12a)、重量渗透摩尔浓度(图12b)、尺寸(图12c)、pz(图12d)和马索罗酚回收率的百分比(图12e)。在研究期间，测量的参数保持在预期范围内。
[0305]
实施例9
[0306]
制剂07、08和09的稳定性
[0307]
对如实施例6中描述的含有甲苯磺酸索拉非尼的制剂07、08和09进行了压力测试和长期稳定性测试以评估其稳定性。
[0308]
图13a-13e示出了在长期稳定性研究(25℃
±
2℃，rh＝60％
±
5％)和加速稳定性研究(40℃
±
2℃，rh＝75％
±
5％)过程中确定的ph(图13a)、尺寸(图13b)、多分散指数(图13c)、pz(图13d)和索拉非尼回收率的百分比(图13e)。在两个条件下，所有制剂在整个研究期间都显示出在预期范围内的参数。特别地，在加速条件研究中制剂07表现出非常低的ph值变化性。
[0309]
实施例10
[0310]
丹麦国家血清研究所兔角膜(statens seruminstitut rabbit cornea，sirc)细胞的细胞存活力
[0311]
sirc细胞被允许在37℃、5％co2在完全基础eagle培养基(basal medium eagle，bme)中生长至亚汇合(70％-90％)并且然后重复暴露(6
×
5min)于不同浓度(％)的对照制剂或微乳剂(参见表4)。细胞还暴露于阴性对照(含有无胎牛血清的bme的无菌培养基，ctrl-)和阳性对照(苯扎氯铵0.01％，ctrl+)以检测细胞毒性。细胞存活力的分析通过3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物(mtt)测定使用ecvam方案n
°
17来进行。光密度(o.d.)在微板分光光度计中于570nm处读取。细胞存活力计算为阴性对照的百分比，并且统计分析用单样本t检验对比截止值50％来进行。
[0312]
表4：微乳剂和相对活性成分
[0313][0314]
通过mtt评估的存活力展示，在任何测试的条件中，所有细胞死亡率都与含有或不含活性成分的微乳剂不相关(数据未示出)。含有植物油和/或动物油的微乳剂显示出比含有合成来源的矿物油的微乳剂更好的细胞相容性。
[0315]
实施例11
[0316]
在慢性高眼压症模型中的体内功效
[0317]
对通过大鼠巩膜上静脉烧灼(evc)诱导的慢性高眼压症模型进行了体内药理学研究。通过在持续六天的处理周期过程中每天施用一滴，评估了实施例6中描述的含有拉坦前列素0.005％的微乳剂(制剂03)的降压效果。
[0318]
配制于微乳剂中的拉坦前列素(制剂03)产生了3.3mmhg的眼内压的平均下降[n＝15，95％ci(2.9，3.7)]。如图14中所示，这一效果与使用拉坦前列素0.005％(溶液)的标准溶液处理的眼中的效果[n＝11，3.6mmhg，95％ci(3.2，4.1)]相当(p》0.05，student t检验)。
[0319]
实施例12
[0320]
在视网膜缺血再灌注模型中的功效
[0321]
使用大鼠视网膜缺血再灌注(ir)模型来展示实施例6中所示的含有马索罗酚0.302％的微乳剂(微乳剂制剂04和06)和含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(微乳剂制剂05和07)的体内功效。在诱导ir之前，用以下制剂中的一种：a)制剂1；b)制剂04；c)制剂6；d)制剂06；e)制剂2；f)制剂05；g)制剂7或h)制剂07，对体重200-250g的成年雄性棕色挪威大鼠(brown-norway rat)进行表面处理持续2天(12μl每日两次，右眼)并在受损前进行表面处理持续1小时(12μl，右眼)。将动物麻醉，并且，在用托吡卡胺0.5％引起瞳孔散大后，通过将与生理盐水溶液的容器相连的30号针插入右眼前房中来诱导ir。盐水溶液贮液器被放置在距手术台的一定高度处，确保视平线处约130mmhg的流体静力压。将眼内压升高到诱
导缺血的水平，通过眼后部的“白化(whitening)”来确认。45分钟后，将针取出以恢复视网膜血流。
[0322]
在缺血发作6小时后，处死动物并收集视网膜，并保存在50μl的储存稳定液(从thermofisher scientific可得)中，以便通过实时rt-pcr评估含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04和06)或含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05和07)对促炎基因表达的任何潜在影响。
[0323]
对用含有马索罗酚0.302％的微乳剂处理的大鼠视网膜中的基因表达水平的分析显示：a)与单独用载体(制剂1；参见图15a)处理的动物视网膜中观察到的表达水平相比，用制剂04处理显著降低了tnf-α(28.7％)和inos(130％)表达水平(#p≤0.05，##p≤0.01)；b)与单独用载体(制剂6；参见图15b)处理的动物视网膜中观察到的表达水平相比，用制剂06处理显著降低了tnf-α(49.5％)和inos(82.4％)的表达水平(#p≤0.05，##p≤0.01)。
[0324]
用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂处理缺血大鼠显示：a)与单独用载体(制剂2；参见图16a)处理的动物视网膜中观察到的mrna表达水平相比，制剂05显著降低了tnf-α(20.7％)和inos(87.3％)的mrna表达水平(#p≤0.05，##p≤0.01)；b)与单独用载体(制剂7；参见图16b)处理的动物视网膜中观察到的表达水平相比，用制剂07处理显著降低了tnf-α(45.3％)和inos(96.5％)的表达水平(#p≤0.05，##p≤0.01)。
[0325]
包含植物油的微乳剂(制剂07)和/或包含动物油的微乳剂(制剂06)显示出的功效谱优于包含合成来源的矿物油的微乳剂(制剂04和制剂05)显示出的功效谱。
[0326]
实施例13
[0327]
在鼠脉络膜新血管形成模型中的功效
[0328]
为了评估含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)和含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05和07)在年龄相关性黄斑变性(amd)中的潜在抗血管生成作用，使用了鼠脉络膜新血管形成(cnv)模型。为了该目的，将6-8周龄的雄性小鼠c57bl6/j在诱导cnv之前的3天内和随后的7天内用以下制剂中的一种进行表面预处理(5μl每日两次，双眼)：a)制剂1；b)制剂04；c)制剂2；d)制剂05；e)制剂7或f)制剂07。
[0329]
在激光诱导之前，通过腹膜内注射氯胺酮和赛拉嗪溶液(分别为80mg/kg和10mg/kg)麻醉动物，并通过表面应用0.5％的托吡卡胺进行瞳孔散大。随后，将2.5％的羟丙基甲基纤维素水溶液引入双眼中。用照相机观察眼底并使用图像引导激光系统(micron iv，phoenix research laboratories，pleasanton ca)诱导光凝(photocoagulation)。通过激光脉冲(532nm；持续时间100毫秒；功率200mw)在双眼中离视神经相等距离处产生四个径向斑(radial spot)。通过免疫荧光测试确定新血管形成区域。通过颈部脱位处死动物，并将摘除的眼放在4％的多聚甲醛中，然后将眼的前部去除并且将剩余的部分(称为“眼杯”(巩膜、脉络膜、视网膜色素上皮[rpe]和视网膜))在存在0.7％的fitc-凝丝豆同工凝集素(griffonia simplicifolia isolectin)的条件下孵育16h。每个斑的体积通过相对于rpe细胞从上表面到最深的焦平面沿z轴荧光采集一叠图像(20-25帧，每帧具有1μm的厚度)来获得。用imagej程序(nih,bethesda,md)测量组成单个叠的每一帧的荧光面积，并将其相加，从而获得新血管形成体积的测量值。
[0330]
结果表明，与单独的载体(制剂1)相比，用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)进行表面处理的动物在脉络膜新血管形成中显示出～33％的统计学上显著的减少(p＝
0.0395)(图17)。结果还表明，用含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)进行表面处理的动物显示出脉络膜新血管形成减少54％；这一结果在与单独用载体(制剂2)处理的动物相比时是高度显著的(图18a)。用制剂07进行表面处理的动物得到了相似的结果，当与单独的载体(制剂7)相比时，制剂07使脉络膜新血管形成显著地减少了～61％(p＝0.0001)(图18b)。
[0331]
含有植物油且含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂07)显示出的功效谱优于包含合成来源的矿物油的微乳剂(制剂05)观察到的功效谱。
[0332]
实施例14
[0333]
在链脲佐菌素诱导的糖尿病性视网膜病变模型中的功效
[0334]
设计并进行实验以评估含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)和含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)在链脲佐菌素(stz)诱导的大鼠糖尿病性视网膜病变模型中的功效。为此，将雄性斯普拉格-杜勒大鼠(sprague-dawley rat)(200-250g)注射单剂量的stz(60mg/kg腹膜内注射(i.p.))，并且24h后，测量血糖以便只将血糖水平高于250mg/dl的动物纳入其余程序中。从测量血糖当日开始，对动物进行持续21天的双眼处理，每日两次，并且将其分为以下处理组：
[0335]-阴性对照大鼠(ctrl-)和用12μl的制剂1或制剂2处理的糖尿病大鼠(stz)；和
[0336]-用12μl的制剂04或制剂05处理的糖尿病大鼠。
[0337]
在处理过程结束时，处死动物，摘除眼球并处理视网膜，以用于分别通过实时rt-pcr和蛋白印迹进行基因和蛋白表达测试。
[0338]
通过实时rt-pcr的基因表达分析展示，当与stz处理的动物相比时，用含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)(图19a-19f)或含有甲苯磺酸索拉非尼0.300％的微乳剂(制剂05)(图19a-19f)处理显著地降低了所分析的促炎基因和促血管生成基因(即tnfa、nfκb、igf1、igf1r、vegfr1和vegfr2)的表达水平。
[0339]
通过蛋白印迹进行的蛋白表达分析显示，与stz诱导的动物的视网膜相比，用制剂04(图20a-d)或制剂05(图20e-h)处理显著地降低了tnfα、vegfr1和vegfr2的表达水平，因此证实了如本文描述的两种微乳剂的抗炎和抗血管生成的作用(图20a-h)。
[0340]
实施例15
[0341]
体内的眼部耐受性
[0342]
对新西兰白兔(nzw)进行了长期的耐受性研究，以评估以下微乳剂在28天的表面重复处理过程中的眼部耐受性：a)制剂1，b)制剂04，c)制剂6，d)制剂06，e)制剂2，f)制剂05，g)制剂7，或h)制剂07。
[0343]
使用了48只兔，24只雄性和24只雌性，体重约2kg，并且随机分为8个实验组，每组由6只动物(3只雄性和3只雌性)组成。为了模拟人类的给药方案，将50μl的制剂或媒介物(tris ph 7.4)分别通过滴注到右眼(处理)或左眼(媒介物)的结膜囊中进行每日两次施用。
[0344]
所研究的微乳剂的耐受性通过由mcdonald等人,1987(eye irritation,in dermatotoxicology,ed.marzulli and maibach,hemisphere publishing corporation,3rd edition)修改的draize测试来确定。通过通用线性模型分析和非配对t检验来寻找统计学上的显著差异。使用修改的draize测试分配的评分证明任何处理组中在性别之间没有任何差异。
[0345]
统计显示，在任何处理组中，处理的眼(右眼)和对照眼(左眼)之间没有显著差异。含有药物的微乳剂制剂(即，装载的微乳剂)和相对媒介物(即，未装载的微乳剂)之间没有差异。
[0346]
基于植物油和/或动物油的微乳剂比包含合成来源的矿物油的微乳剂显示出更好的眼部耐受性谱。
[0347]
实施例16
[0348]
在干眼症鼠模型中的功效
[0349]
使用干眼症鼠模型来确定实施例6中描述的含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)的功效。为此，将c57bl/6雌性小鼠(8-12周龄)暴露于低湿度(《20％rh；21℃-22℃)和恒定气流(20l/min)条件下的受控环境室(cec)持续3天。除了环境条件外，皮下注射5mg/ml的东莨菪碱(scopolamine)，每日三次持续3天。同时，将阴性对照动物组(ctrl-)保持在标准环境条件(21℃-23℃；50％-60％rh)。
[0350]
cec内的小鼠被分为三组：i)用制剂1处理；ii)用制剂04处理；和iii)未处理的阳性对照组(ctrl+)。将7微升的测试品滴注到双眼中，每日两次持续3天；cec外的动物(即ctrl-)在整个研究期间保持不处理。
[0351]
在基线(t＝0)和处理之后3天(t3)，用标准化评分系统通过裂隙灯对角膜的荧光素染色进行评估，以评估角膜损伤。在t3时处死动物并切下角膜，并保存用于进一步处理，旨在通过实时rt-pcr来评估处理对促炎基因表达的潜在影响。
[0352]
在t3时的观察显示，相对于ctrl-，ctrl+小鼠的角膜染色情况著恶化(p≤0.0001)。与ctrl+相比，用制剂1处理没有产生任何明显的改善，而制剂04显著地降低了角膜评分(p《0.05，对比ctrl+)(图21)。
[0353]
基因表达分析显示，与ctrl+动物相比，用制剂04处理使tnfa表达水平显著地降低了58％(#p《0.05，对比ctrl+)(图22)。含有马索罗酚0.302％的微乳剂(制剂04)在减少干眼症鼠模型的眼部症状方面有效，干眼症是一种眼表病变。
[0354]
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