本发明属于宠物生物制品技术领域，具体涉及一种猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液制备方法。
背景技术：
猫泛白细胞减少症，是猫的一种急性高度接触性传染病。潜伏期2-9天，临床症状与年龄及病毒毒力有关，幼猫多呈急性发病，体温升高40℃以上，呕吐严重会突然死亡。6个月以上的猫多呈亚急性临床，发热至40℃左右，1-2天后降到常温，3-4天后体温再次升高，即双相热型。病猫精神不振，厌食，顽固性呕吐，呕吐物呈黄绿色，口腔及眼，鼻有粘性分泌物，粪便粘稠样，后期带血，严重脱水，贫血。
卵黄抗体具有性质稳定、特异性强、制备成本低、口服安全等优点在家禽、家畜传染病的防治中已得到广泛的应用，但在宠物中由于保存期短，长途运输不方便等因素导致其应用较为被动，鉴于此，本发明从保护液的角度，帮助卵黄抗体解决现有技术的一些弊端。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液，该制剂成本经济，可以保障抗体质量稳定，使用方便，无生物毒性，有利于环境卫生及食品安全。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶20-40份；马齿苋黄酮20-30份；蔗糖10-30份；乳酸菌5-10份；磷酸缓冲液800-1000份。
一种如权利要求1所述的一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该制备方法的步骤如下：
一、保护液的制备
(1)按照重量配比分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后100-120℃高温高湿灭菌10min，得溶液a；
(2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液b，至2-8℃保存备用；
(3)将溶液a与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经真空冷冻保存。
二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
2、清洗消毒步骤二-1中所得高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
3、对步骤二-2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌0.5～1.5小时，室温放置2～6小时后，以4200～5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌10-20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kd的中空纤维超滤柱进行浓缩3～4倍后再用naoh调整ph值为6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
本发明的优点及有益效果在于：
1.本发明提供了一种方法简单，成本经济，保障抗体质量稳定，使用方便，无生物毒性，有利于环境卫生及食品安全的保护液。
2.本发明制备的保护液具有魔芋胶内含高膳食纤维，可以促进消化，马齿苋黄酮可以抗菌抗肿瘤，避免猫泛白细胞减少症引起的继发感染。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明所涉及的魔芋胶、马齿苋黄酮、蔗糖、乳酸菌、磷酸缓冲液均可以从市场买到。
实施例1
一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶20g、马齿苋黄酮20g、蔗糖10g、乳酸菌5g、磷酸缓冲液800g。
一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液制备方法的步骤如下：
一、保护液的制备
(1)按照重量分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后105℃高温高湿灭菌10min，得溶液a；
(2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液b，至2-8℃保存备用；
(3)将溶液a与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经真空冷冻保存。
二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌0.55小时，室温放置2小时后，以4200r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌10分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kd的中空纤维超滤柱进行浓缩3倍后再用naoh调整ph值为6.8，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
实施例2
一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液包括的组分及其重量份数比分别为：魔芋胶40g、马齿苋黄酮30g、蔗糖30g、乳酸菌10g、磷酸缓冲液1000g。
一种含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液的制备方法，其特征在于：该保护液制备方法的步骤如下：
一、保护液的制备
(1)按照重量分别称取魔芋胶、马齿苋黄酮和蔗糖用加入磷酸缓冲液，搅拌溶解，然后120℃高温高湿灭菌10min，得溶液a；
(2)按照重量配比将乳酸菌配成菌液b，至2-8℃保存备用；
(3)将溶液a与菌液混合均匀，分装后1ml/份，经真空冷冻保存。
二、猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌1.5小时，室温放置6小时后，以5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kd的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用naoh调整ph值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
三、猫泛白细胞减少症卵黄抗体保护液的应用
1、将步骤二-3所述抗体滤液与步骤一得到的保护液在无菌条件下按体积比1:1混合均匀，即用于猫泛白细胞减少症的卵黄抗体保护液。
实施例3
猫泛白细胞减少症卵黄抗体的制备
1、高免蛋的生产：选择健康的未经免疫的产蛋鸡，用泛白细胞减少症疫苗对鸡群进行产蛋前免疫，包括基础免疫、加强免疫、强化免疫，免疫间隔为8天，用量1ml/只/次，检测血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
2、清洗消毒高免蛋，收集并搅拌得卵黄匀浆；
3、对步骤2中所得卵黄匀浆中添加1.5倍体积的生理盐水和浓度为0.1％的正辛酸，边加边搅拌1.5小时，室温放置6小时后，以5500r/min的转速离心30min，丢弃沉淀，在上清液中加入1.2％硫酸酯葡聚糖，搅拌20分钟，用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kd的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用naoh调整ph值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌，得抗体效价1:512的滤液。
临床试验
1、试验方法及处理
本发明的使用方法：
1组：按实施例1制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
2组：按实施例2制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
3组：按实施例3制得猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
2、试验分组及处理
2018年于青岛某宠物医院3只确诊猫泛白细胞减少症的家猫，用药后观察10天，试验结果如下表1。
表1本发明效果试验
试验二
1、实验分组及处理
1组：按实施例1制得含猫泛白细胞减少症卵黄抗体的保护液；
2组：按实施例3制得猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
3组：市售猫泛白细胞减少症卵黄抗体。
将上述三种液体各两瓶，1ml/瓶，分为两组，一组保存于2-8℃，二组保存于20-25℃,分别于6个月和12个月测抗体效价，结果如表2
表2本发明保存期效果试验
结论6
根据表1本发明在协助猫泛白细胞减少症卵黄抗体治疗猫泛白细胞减少症方面效果显著；从表2的保存期抗体效价消减情况来看，有保存液的泛白细胞减少症卵黄抗体的室温下12个月效价还可以维持在1:256。