皮肤复合制剂的制作方法

本发明涉及医药及皮肤护理技术领域，尤其涉及一种皮肤复合制剂。

背景技术：

皮肤覆盖在人体表面，人体的皮肤由表皮、真皮、皮下组织三层组成。表皮各层细胞紧密连接。真皮中含有大量的胶原纤维和弹力纤维，使皮肤既坚韧又柔软，具有一定的抗拉性和弹性。

但即使这样，也会由于各种内在和外源的因素，使人体的皮肤经常面临各种问题，包括外源性创伤、损伤、内源性的炎症、免疫反应等，导致皮肤组织出现老化、损伤、黑斑、皱纹等等各种问题。

技术实现要素：

本发明主要解决的技术问题是提供一种皮肤复合制剂，能够用于皮肤组织以减缓老化、祛斑以及修复受损皮肤。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种皮肤复合制剂，包括：多种细胞因子，所述多种细胞因子包括表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子以及角质细胞生长因子。

其中，所述皮肤复合制剂还包括水。

其中，所述皮肤复合制剂还包括可溶解的盐类。

其中，所述盐类包括钠盐、钾盐、锌盐；所述盐类包括钠盐、锌盐。

其中，所述锌盐包括氯化锌或其水合盐、硫酸锌或其水合盐、硝酸锌或其水合盐；所述钠盐包括氯化钠、肝素钠。

其中，所述表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、水以及盐类的质量比范围是1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶60～80∶1～10；所述质量比是3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶75∶7。

其中，所述皮肤复合制剂通过外敷或者浅表注射的方式作用于皮肤。

为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种治疗或者预防过敏性皮炎的复合制剂，包括抗过敏性皮炎有效剂量的如上任一项所述的皮肤复合制剂以及医药上可接受的载体。

其中，所述复合制剂呈剂量单位形式。

本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明皮肤复合制剂包括多种细胞因子，表皮生长因子能够促进细胞的增殖分化，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞；血管内皮生长因子具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用；血小板衍生因子具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，促进纤维母细胞的生成，从而修复由于衰老和损伤造成的真皮层胶原纤维断裂与变形，促进真皮层生长与弹性提升，使皱纹自然长平；转化生长因子能够促进细胞外基质(ecm)如胶原蛋白、纤粘连蛋白的表达和抑制ecm的降解，对细胞的形态发生、增殖和分化过程起着重要作用，有利于细胞修复；成纤维细胞生长因子有助于弹性纤维、网状纤维、胶原蛋白的合成；神经生长因子能够转化营养，抑制激素的依赖性；角质细胞生长因子能够特异刺激上皮细胞的新陈代谢等生理过程，包括细胞的再生、分化和迁移等。通过上述方式，该皮肤复合制剂能够用于皮肤组织以减缓老化、祛斑以及修复受损皮肤。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。其中：

图1是用于皮肤祛斑的效果实验中选择的3名祛斑患者使用前和使用后的前后对比照片示意图；

图2是用于修复敏感性皮肤的效果实验中选择的1名面部敏感肌肤的患者使用前和使用后的前后对比照片示意图；

图3是用于加速伤口愈合的效果实验中细胞实验的示意图；

图4是用于加速伤口愈合的效果实验中选择的2名面部痤疮的患者使用前和使用后的前后对比照片示意图。

具体实施方式

下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

本发明提供一种皮肤复合制剂，该皮肤复合制剂包括：多种细胞因子，所述多种细胞因子包括表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子以及角质细胞生长因子。

表皮生长因子(egf，epidermalgrowthfactor)，又名人寡肽-1，是人体内的一种活性物质，由53个氨基组成的活性多肽，藉由刺激表皮细胞生长因子受体之酪氨酸磷酸化，达到修补增生肌肤表层细胞。其最大特点是能够促进细胞的增殖分化，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞。egf还能止血，并具有加速皮肤和粘膜创伤愈合、消炎镇痛、防止溃疡的功效。egf的稳定性能极好，在常温下不易失散流动，能与人体内各种酶形成良好的协调效应。egf能促进表皮细胞组织内多种细胞的生长分裂，使表皮细胞变得饱满、恢复年轻状态，它还可以促使胶原蛋白生长能力，修复老化断裂的胶原弹性纤维。在年轻的时候，人体自身能够产生足够多的egf，促使表皮细胞生长，但随着年龄的减退，egf的产生量逐步下降，因此表皮细胞的更新速度就越来越慢了。由于egf为人体本身之组成部分，故没有任何毒副作用，十分安全。

血管内皮生长因子(vegf，vascularendothelialgrowthfactor)，又称血管通透因子(vpf，vascularpermeabilityfactor，)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。vegf是一种血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，在体外可促进血管内皮细胞的生长，在体内可诱导血管增生。尤其是在低氧环境下，vegf与内皮细胞膜上vegf受体结合，引起受体的自身磷酸化，从而激活有丝分裂原活化蛋白激酶(mapk，mitogen-activatedproteinkinase)，实现vegf的有丝分裂原特性，诱导内皮细胞增生。

血小板衍生因子(pdgf，plateletderivedgrowthfactor)，是贮存于血小板α颗粒中的一种碱性蛋白质，是低分子量促细胞分裂素，能刺激停滞于g0/g1期的成纤维细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞等多种细胞进入分裂增殖周期。正常生理状态下pdgf存在于血小板的α颗粒内，当血液凝固时由崩解的血小板释放出来并且被激活，具有刺激特定细胞趋化与促进特定细胞生长的生物活性。pdgf是祛皱抗衰的新秀，作用于真皮层的成纤维母细胞，可以通过真皮层微介术被受体细胞真正吸收，达到很好抗衰除皱效果。pdgf作为祛皱抗衰的顶级产品具有以下几大功效渠道：1、pdgf是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，促进纤维母细胞的生成，从而修复由于衰老和损伤造成的真皮层胶原纤维断裂与变形，促进真皮层生长与弹性提升，使皱纹自然长平。2、pdgf促进胶原蛋白在真皮层直接合成，更有效延缓衰老。通过pdgf促进成纤维母细胞生成的胶原蛋白比直接涂抹或食用胶原蛋白更能有效延缓皮肤衰老。3、pdgf促进皮下毛细血管形成，修复皮下血液微循环系统，为皮肤提供充足营养。pdgf的再生血管功能对于延缓衰老有明显疗效。4、pdgf促进皮肤细胞的生长与更新，提升皮肤组织的生理活性与新陈代谢水平，增强皮肤细胞的免疫力与自我修复能力，修复由于日光、严寒、化学物质与机械磨损伤害造成的红血丝与敏感肌肤，使皮肤细胞更加白皙润泽，鲜活饱满，让面部色斑暗沉、枯黄干燥的衰老面貌焕然一新。

转化生长因子(tgf，transforminggrowthfactor)，是指两类多肽类生长因子：tgf-α和tgf-β。tgf-α是由巨噬细胞、脑细胞和表皮细胞产生，可诱导上皮发育。人类tgf-β有三个亚型：tgf-β1、tgf-β2以及tgf-β3。tgf-β是一多功能蛋白质，可以影响多种细胞的生长、分化、细胞凋亡及免疫调节等功能。tgf-β在治疗伤口愈合、促进软骨和骨修复以及通过免疫抑制治疗自身免疫性疾病和移植排斥等方面有潜在的应用前景。

成纤维细胞生长因子(fgf，fibroblastgrowthfactor)，能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞。具有深层修复作用，在现代临床医学及外科手术和美容手术中发挥着不可估量的巨大作用。

神经生长因子(ngf，nervegrowthfactor)，是一类由神经所支配的组织(如肌肉)和星形胶质细胞产生的且为神经元生长与存活所必需的蛋白质分子。

角质细胞生长因子(kgf，keratinocyegrowthfactor)，是人体皮下的组织细胞分泌的一种碱性蛋白生长因子，能特异刺激上皮细胞的新陈代谢等生理过程，包括细胞的再生、分化和迁移等。kgf有以下的优点：①组织特异性强，稳定，安全性好。kgf只作用于上皮细胞，通过其特异性受体在刺激上皮细胞生长的同时，能启动上皮细胞对皮下间质组织的协调信号反馈，促进新组织的形成，安全性好，无潜在的副作用。②对新生或老化的上皮细胞均有刺激生长分裂作用。③具有明显的除疤痕和抗辐射损伤的作用。④具有独特的育发生发作用。

本发明皮肤复合制剂包括多种细胞因子，表皮生长因子能够促进细胞的增殖分化，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞；血管内皮生长因子具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用；血小板衍生因子具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，促进纤维母细胞的生成，从而修复由于衰老和损伤造成的真皮层胶原纤维断裂与变形，促进真皮层生长与弹性提升，使皱纹自然长平；转化生长因子能够促进细胞外基质(ecm)如胶原蛋白、纤粘连蛋白的表达和抑制ecm的降解，对细胞的形态发生、增殖和分化过程起着重要作用，有利于细胞修复；成纤维细胞生长因子有助于弹性纤维、网状纤维、胶原蛋白的合成；神经生长因子能够转化营养，抑制激素的依赖性；角质细胞生长因子能够特异刺激上皮细胞的新陈代谢等生理过程，包括细胞的再生、分化和迁移等。通过上述方式，该皮肤复合制剂能够用于皮肤组织以减缓老化、祛斑以及修复受损皮肤。

其中，皮肤复合制剂还包括水。上述多种细胞因子均可溶于水中，一方面在水相比其它溶剂，廉价易得且安全，另一方面上述多种细胞因子溶解在水中，更容易被皮肤吸收。另外，多种细胞因子的混合物可以以冻干粉的形式储存和运输，以保证多种细胞因子的混合物的有效期，用水复溶简单方便。

在一实施方式中，皮肤复合制剂还包括可溶解的盐类，可溶解的盐类能够收缩毛孔，同时维持一些蛋白分子的稳定，平衡溶液的渗透压，使皮肤复合制剂中的成分更好渗透入皮肤。进一步，盐类包括钠盐、钾盐、锌盐；盐类包括钠盐、锌盐。

其中，锌盐包括氯化锌或其水合盐、硫酸锌或其水合盐、硝酸锌或其水合盐；钠盐包括氯化钠、肝素钠。

在一实施方式中，表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、水以及盐类的质量比范围是1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶1～5∶60～80∶1～10；例如，1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶60∶1、3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶70∶5、5∶5∶5∶5∶5∶5∶5∶80∶10，等等。在一应用中，质量比是3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶75∶7。

该皮肤复合制剂可以作为保健品或化妆品等产品来使用，在具体制备产品时，可以添加必要的辅料、赋形剂、调香料或其组合。当该皮肤复合制剂作用于皮肤时，能够减缓皮肤组织老化，能够修复受损皮肤，能够去除黑色素细胞，能够祛斑。通常情况下该皮肤复合制剂通过外敷或者浅表注射的方式作用于皮肤。该作用方式，简单方便，便于实施。

本申请还提供一种治疗或者预防过敏性皮炎的复合制剂，该复合制剂包括抗过敏性皮炎有效剂量的如上任一项的皮肤复合制剂以及医药上可接受的载体。

过敏性皮炎是由过敏原引起的皮肤病，主要是指人体接触到某些过敏源而引起皮肤红肿、发痒、风团、脱皮等皮肤病症。

其中，复合制剂呈剂量单位形式。

对于上述治疗用途来说，所施用的剂量当然会随所施用方式、所需治疗以及所指示的疾病而变化。总日剂量可以单次剂量或分次剂量施用。

该治疗或者预防过敏性皮炎的复合制剂可以作为药品产品来使用，在具体制备该药品产品时，可以添加必要的辅料、赋形剂、调香料或其组合。当该药品产品作用于皮肤时，能够减缓皮肤组织老化，能够修复受损皮肤，能够去除黑色素细胞，能够祛斑。通常情况下该药品产品通过外敷或者浅表注射的方式作用于皮肤。该作用方式，简单方便，便于实施。

上述各种细胞因子可以采用干细胞培养的方式，获得各细胞因子，进而制备得到皮肤复合制剂。

具体地，该方法包括如下步骤：

步骤(1)：干细胞培养(按照正常细胞的培养条件，37摄氏度，5％的二氧化碳)24小时后，取其上清液；利用elisa检测各种细胞因子的浓度；

步骤(2)：干细胞培养36小时后，取其上清液；利用elisa检测各种细胞因子的浓度；

步骤(3)：干细胞培养48小时后，取其上清液；利用elisa检测各种细胞因子的浓度；

步骤(4)：干细胞培养72小时后，取其上清液；利用elisa检测各种细胞因子的浓度；

步骤(5)：不同时间的干细胞培养液，离心收集其蛋白成分；溶于匹配的水中；在干细胞培养中，上述七种细胞因子是干细胞培养液中含量最多的成分，由于干细胞培养同一时间，得到的七种细胞因子的浓度是不一样的，本实施例通过不同时间培养干细胞，能够得到各种细胞因子的有效比例。

步骤(6)：使用ph缓冲液调节体系ph值至6.0～7.5；所述的ph缓冲液可以为：柠檬酸钠缓冲液、碳酸氢钠缓冲液、pbs缓冲液等常规缓冲溶液；进一步，所述的ph缓冲液为碳酸氢钠缓冲液。

下面具体说明本实施例的复合制剂用于祛斑、用于修复敏感性皮肤、用于伤口愈合的具体效果。

实施例1、用于皮肤祛斑的效果实验

志愿者入组条件：选取面部雀斑患者；

志愿者数量及具体情况说明选取志愿者100人，男女各50人，年龄20-50岁之间。

产品：将皮肤复合制剂制成面膜的形式，其中，表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、水以及盐类的质量比是3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶75∶7。

使用方式：每日晚上洁面后，敷于面部20分钟，连续14天，可看到雀斑明显减少。具体方法是：采用数格子法来进行雀斑面积测量，具体采用颜色涂抹纸张印取+毫米方格坐标纸记数法。先用记号笔在待测皮肤损伤的轮廓描记，然后将描有标准坐标格子的图纸平铺在上面，通过目测计数格子的数目(覆盖不满一格的以一格算)，再乘以每个小格子的面积，得到皮肤损伤的面积，重复测量3次，取平均值作为最终的雀斑面积测定值。参见图1，图1是用于皮肤祛斑的效果实验中选择的3名祛斑患者使用前和使用后的前后对比照片示意图。从图1可以明显看到，3名患者使用后，雀斑明显减少。

实施例2、用于修复敏感性皮肤的效果实验

志愿者入组条件：选取面部敏感肌肤的患者；

志愿者数量及具体情况说明：选取志愿者50人，男女各25人，年龄20-50岁之间。

产品：将皮肤复合制剂制成面膜的形式，其中，表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、水以及盐类的质量比是3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶75∶7。

使用方式：每日晚上洁面后，敷于面部20分钟，连续14天，可看到敏感肌肤的症状减轻，脸上的红血丝明显改善，皮肤较之前，不容易泛红，一般温度变化，过冷或者过热，皮肤不容易泛红，发热。参见图2，图2是用于修复敏感性皮肤的效果实验中选择的1名面部敏感肌肤的患者使用前和使用后的前后对比照片示意图。从图2可以明显看到，该患者使用后，面部的红血丝明显改善，面部泛红面积减少，症状减轻。

实施例3、用于加速伤口愈合的效果实验，包括细胞实验和痤疮实验：

细胞实验：

(1)表皮细胞株a-431进行细胞培养，5％co2，37℃培养；

(2)细胞贴壁后，进行划痕实验，分成两组，一组为空白对照组(培养基仅为不完全培养基)，一组为细胞因子组(不完全培养基+皮肤复合制剂)，观察细胞的愈合速度：0h、6h、12h、24h、36h、48h。实验结果如图3所示。图3中上面一排是空白组，下面一组是复合制剂组，从图3可以明显看出：复合制剂组从0h到48h，愈合非常明显；而空白组从0h到48h，愈合速度很慢。

痤疮实验：

志愿者入组条件：：选取面部痤疮的患者；

志愿者数量及具体情况说明：选取志愿者100人，男女各50人年龄20-50岁之间。

产品：将皮肤复合制剂制成面膜的形式，其中，表皮生长因子、血管内皮生长因子、血小板衍生因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、水以及盐类的质量比是3∶3∶3∶3∶3∶3∶3∶75∶7。

使用方式：每日晚上清洁面部后，敷于面部20分钟，连续14天，可以看到疮疹消退明显和患者自觉红肿热痛减轻，参见图4，图4是用于加速伤口愈合的效果实验中选择的2名面部痤疮的患者使用前和使用后的前后对比照片示意图。从图4可以明显看到，该2名患者使用后，面部疮疹消退明显。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。