羟基红花黄色素A和远志皂苷元的组合物在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用的制作方法

羟基红花黄色素a和远志皂苷元的组合物在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及药物领域，具体地说，涉及羟基红花黄色素a和远志皂苷元的组合物在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。


背景技术：

2.缺血性脑卒中是一种由于脑组织局部供血减少或中断导致的脑血管意外，缺血组织会出现相应区域神经功能缺损症状的表现，引发一系列复杂的生化分子级联反应，如能量代谢紊乱、兴奋性毒性谷氨酸信号通路激活、自由基反应等。这些改变会引发一系列与凋亡坏死有关的炎症级联反应导致细胞完整性的破坏，最终表现为神经元功能损伤。
3.羟基红花黄色素a(hydroxysafflor yellow a，hsya)是具有单查尔酮苷类结构的化合物，是红花药理功效的最有效水溶性部位，分子式c
27
h
32
o
16
，分子量612.53。现代药理学研究证实羟基红花黄色素a具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、改善微循环、矫正受损代谢通路、调控血管平滑肌细胞增殖和迁移等药理作用，能够有效治疗缺血性脑卒中。如文献(秦劭晨.hsya治疗急性缺血性中风(血瘀证)患者生存质量及相关量表的研究[d].广州:广州中医药大学, 2016.)公开了注射用羟基红花黄色素a能改善急性缺血性中风(血瘀证)患者的临床症状，对于血瘀证显示出一定的疗效。
[0004]
远志皂苷元(senegenin)是远志益智作用的主要活性部位，分子式 c
30
h
45
clo6，分子量537.13。现代药理学研究证实远志皂苷元具有抗炎、抗氧化、营养神经、治疗急性肺损伤等多种生物学作用。如文献(皮婷，薛小燕，林炼峰等.远志皂苷元对新生大鼠皮质神经元的营养作用.中国药理学与毒理学杂志.2011,25(1):40-43)公开了远志皂苷元可以促进体外新生24h内sd大鼠皮质神经元的存活，并可促进皮质神经元突起生长。
[0005]
然而目前未见联合使用羟基红花素a和远志皂苷元改善缺血性脑卒中的报道。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供羟基红花黄色素a和远志皂苷元的组合物在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。
[0007]
本发明的再一的目的是，提供一种治疗缺血性脑卒中的组合物。
[0008]
本发明的另一的目的是，提供所述组合物的制备方法。
[0009]
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
[0010]
羟基红花黄色素a和远志皂苷元的组合物在制备治疗缺血性脑卒中的药物中的应用。
[0011]
作为本发明的一种优选实施方式，所述组合物以羟基红花黄色素a和远志皂苷元为治疗缺血性脑卒中的仅有的活性成分。
[0012]
作为本发明的另一种优选实施方式，所述药物还进一步包含不为羟基红花黄色素a和远志皂苷元且能够治疗缺血性脑卒中的活性成分。
[0013]
作为本发明的另一种优选实施方式，所述药物还含有药学上可接受的载体。
[0014]
更优选地，所述药学上可接受的载体选自助溶剂、乳化剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂和着色剂。
[0015]
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
[0016]
一种治疗缺血性脑卒中的组合物，所述组合物以羟基红花黄色素a和远志皂苷元为治疗缺血性脑卒中的仅有的活性成分。
[0017]
作为本发明的一种优选实施方式，所述组合物还进一步包含不为羟基红花黄色素a和远志皂苷元且能够治疗缺血性脑卒中的活性成分。
[0018]
作为本发明的另一种优选实施方式，所述药物还含有药学上可接受的载体。
[0019]
更优选地，所述药学上可接受的载体选自助溶剂、乳化剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂和着色剂。
[0020]
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
[0021]
如上任一所述组合物的制备方法。
[0022]
本发明优点在于：
[0023]
本发明首次研究了羟基红花黄色素a联合远志皂苷元改善缺血性脑卒中的药效，结果表明二者联合使用能够降低脑水肿程度，减少脑梗死体积，对脑水肿改善作用和对脑梗死体积改善作用均显著优于远志皂苷元、羟基红花黄色素a单独用药，表明二者具有协同作用。
附图说明
[0024]
图1.脑缺血3小时，各组大鼠神经功能评分统计图(sham组n＝6,i/r组 n＝8,hsya组n＝7,tgn组n＝7,3mg/kg hsya+3mg/kg tgn组n＝7)。
[0025]
图2.脑缺血3小时，各组大鼠脑组织含水量统计图(sham组n＝6,i/r组 n＝8,6mg/kg hsya组n＝7,6mg/kg tgn组n＝7,3mg/kg hsya+3mg/kg tgn组 n＝7)。
[0026]
图3.脑缺血3小时，各组大鼠脑组织含水量统计图，正常组织呈现鲜红色，梗死部位呈现白色(sham组n＝7,i/r组n＝7,6mg/kg hsya组n＝7,6mg/kg tgn组n＝7,3mg/kg hsya+3mg/kg tgn组n＝7)。
具体实施方式
[0027]
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
[0028]
实施例1
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1.实验目的
[0030]
探究羟基红花黄色素a联合远志皂苷元改善缺血性脑卒中的药效。
[0031]
2.实验材料
[0032]
2.1实验动物
[0033]
健康spf级sd雄性大鼠，鼠龄9-11周，体重250-290g，购自上海斯莱克实验动物公司。饲养和实验过程遵守动物伦理委员会的相关工作操作规定 (动物伦理委员会审查批准号：r20160302)。
[0034]
2.2试剂及耗材
[0035]
水合氯醛(国药集团)，ttc染色剂(北京西浓科技有限公司)，mcao 硅胶线栓(a4)(北京西浓科技有限公司)，颈动脉注射注射器(北京西浓科技有限公司)，不锈钢脑切片刀片(北京西浓科技有限公司)。
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2.3仪器设备
[0037]
不锈钢脑切片模具(北京西浓科技有限公司)，空白固定绑板(北京西浓科技有限公司)，烘箱(上海恒科技有限公司)，电子天平(mettler toledo, 瑞士)，手术器械(医疗器械批发部)。
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3.实验方法
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3.1实验分组
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选取spf级体重为250-290g的雄性sd大鼠，随机分为5组，分别是假手术组(s组)、模型组(i/r组)、颈动脉灌注hsya注射液6mg/kg组(a 组)、颈动脉灌注tgn注射液6mg/kg组(b组)、颈动脉灌注hsya注射液 3mg/kg+tgn注射液3mg/kg组(c组)。
[0041]
3.2模型建立
[0042]
参照longa等建立的mcao模型方法，暴露大鼠右侧的颈总动脉 (cca)，找到血管分叉点y点，在y点下方颈总动脉2-3cm处进行结扎，在此处分离颈内动脉(ica)、颈外动脉(eca)，并将eca结扎，同时在 ica下方穿线备用。在cca上距离y点约4mm处扎一小孔，由cca的扎口处插入线栓，途径大脑的ica，插入深度约为19
±
0.5mm。将穿过ica的线扎紧，大鼠外层皮肤缝合，并标记暴露在外的线栓。线栓在血管中滞留90min后，轻轻拔出带有标记的线栓1-2cm，恢复再灌注。手术过程中维持大鼠的体温在 37-37.5℃，待大鼠苏醒后，单笼饲养。假手术组只进行模型制备流程，线栓不进入大脑血管中。
[0043]
3.3用药方式
[0044]
模型建立后，大鼠随机平均分组。在缺血后3h时进行单次颈动脉给药。药的剂量分为三个剂量：6mg/kg hsya，6mg/kg tgn，3mg/kg hsya+3mg/kg tgn。具体的步骤如下：用无菌的生理盐水配制羟基红花黄色素a(hsya) 溶液，药物浓度为3.3mg/ml。用无菌的生理盐水配制远志皂苷元(tgn)，每毫克tgn，加入15微升1％naoh来增加其溶解性，药物浓度为3.3mg/ml。腹腔注射10％的水合氯醛(3mg/kg-4mg/kg)进行麻醉。大鼠固定，将颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉分离，将颈总动脉的标记线拉直，重复建模过程，将颈内动脉、颈外动脉穿线备用，把颈内动脉结扎的线小心剪开，将剩下的线栓完全拔出。在颈总动脉距离y点1cm处重新扎孔，然后将吸好药的注射器导管尖端由此孔插进颈内动脉，按照0.05ml/min匀速给药。给药结束后，结扎颈内动脉，保温至大鼠苏醒，单笼饲养。模型组大鼠颈动脉注射相应体积无菌生理盐水。
[0045]
3.4神经功能学评分
[0046]
大鼠术后24h，用garcia法进行评估大鼠的神经功能。garcia法从大鼠运动行为的6个方面评估，评分的各项标准详见下表，总评分为18分，损伤的程度越重的大鼠得分越少，反之得分越高。具体方法见下表：
anova进行分析。p<0.05有显著统计学差异(*)，p<0.01 (**)、p<0.001(***)为极显著统计学差异。
[0057]
4.实验结果
[0058]
4.1神经功能评分
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与模型组比，6mg/kg tgn显著改善神经功能评分(p<0.001)，6mg/kg hsya、3mg/kg hsya+3mg/kg tgn与模型组比较无明显统计学差异(p>0.05)。见图1。
[0060]
4.2脑组织含水量测量
[0061]
与模型组比，6mg/kg tgn、6mg/kg hsya、3mg/kg hsya+3mg/kg tgn 三组用药都能够降低脑水肿程度，差异有统计学意义(p<0.01或p<0.001)，并且3mg/kg hsya+3mg/kg tgn联合用药对脑水肿改善作用优于tgn、hsya 单独用药，差异有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。见图2。
[0062]
4.3大鼠脑梗死体积测量
[0063]
与模型组比较，6mg/kg tgn、6mg/kg hsya、3mg/kg hsya+3mg/kg tgn 三组用药都能够减少脑梗死体积，差异有统计学意义(p<0.001)，并且3mg/kg hsya+3mg/kg tgn联合用药对脑梗死体积改善作用优于tgn、hsya单独用药，差异有统计学意义(p<0.001)。见图3。
[0064]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。