一种组合活性物及其在制备舒缓皮肤过敏产品或药物中的应用的制作方法

本发明涉及药物领域，尤其涉及一种组合活性物及其在制备舒缓皮肤过敏产品或药物中的应用。

背景技术：

皮肤敏感的外在表现为面部毛细血管扩张、与血管反应相关的颜面潮红以及光敏感和接触性皮炎等。kamsteeg团队通过临床实验研究了不同皮肤敏感人群(如过敏性皮炎，接触性皮炎，银屑病等)后发现，在过敏性皮炎患者皮肤中，caii，nell2以及炎症因子白介素-8(il-8)的表达量显著升高¹。进一步研究表明，th2细胞在皮肤过敏反应中发挥重要功能，其中炎症因子白介素-4(il-4)和白介素-13(il-13)是th2细胞分泌的主要细胞因子，也是th2细胞的重要标志物，它们可以影响皮肤角质细胞分化以及保水和屏障功能，从而导致皮肤过敏症状的出现^2-3。体外细胞实验结果显示，利用il-4和il-13或其他炎症因子组合刺激人皮肤角质细胞，能显著提高与th2细胞激活的相关基因caii，nell2以及il-8的表达，从而皮肤角质细胞在体外表现出类特应性皮炎(atopicdermatitis)的症状，该表型与临床发现相吻合⁴。

本发明拟根据上述原理提供一种组合活性物，为制备有效的抗敏药物提供新的策略。

1.kamsteeg,m.；jansen,p.a.；vanvlijmen-willems,i.m.；vanerp,p.e.；rodijk-olthuis,d.；vandervalk,p.g.；feuth,t.；zeeuwen,p.l.；schalkwijk,j.,moleculardiagnosticsofpsoriasis,atopicdermatitis,allergiccontactdermatitisandirritantcontactdermatitis.brjdermatol2010,162(3),568-78.

2.bernard,f.x.；morel,f.；camus,m.；pedretti,n.；barrault,c.；garnier,j.；lecron,j.c.,keratinocytesunderfireofproinflammatorycytokines:bonafideinnateimmunecellsinvolvedinthephysiopathologyofchronicatopicdermatitisandpsoriasis.jallergy(cairo)2012,2012,718725.

3.bogiatzi,s.i.；fernandez,i.；bichet,j.c.；marloie-provost,m.a.；volpe,e.；sastre,x.；soumelis,v.,cuttingedge:proinflammatoryandth2cytokinessynergizetoinducethymicstromallymphopoietinproductionbyhumanskinkeratinocytes.jimmunol2007,178(6),3373-7.

4.lee,s.h.；bae,i.h.；choi,h.；choi,h.w.；oh,s.；marinho,p.a.；min,d.j.；kim,d.y.；lee,t.r.；lee,c.s.；lee,j.,amelioratingeffectofdipotassiumglycyrrhizinateonanil-4-andil-13-inducedatopicdermatitis-likeskin-equivalentmodel.archdermatolres2019,311(2),131-140.

技术实现要素：

本发明为解决现有技术中的上述问题提出的一种组合活性物及其在制备舒缓皮肤过敏产品或药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一个方面是提供一种组合活性物，包括以下质量份数的原料：粉防己碱1-5份、β-谷甾醇5-10份和麦冬根提取物8-12份。

进一步地，该组合活性物包括以下质量份数的原料：粉防己碱3份、β-谷甾醇8份和麦冬根提取物10份。

进一步地，麦冬提取物的制备方法为：将麦冬根粉碎，麦冬根和水以1：8质量比混合，加热至80-100℃，提取2-4小时，然后用活性炭脱色，减压浓缩至0.4体积，得麦冬根提取物。

本发明的第二方面是提供该组合活性物的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，按规定的质量分数称取粉防己碱和β-谷甾醇，混合得到粉谷混合物；

步骤二，制备麦冬根提取物；

步骤三，将步骤一得到的粉谷混合物和规定重量份数的麦冬根提取物混合，得到该组合活性物。

本发明的第三方面是提供该抗敏活性组合物在制备舒缓皮肤过敏产品或药物中的应用。

进一步地，该药物还包括药学上可接受的载体。

进一步地，该载体选自以下任一种或多种：填充剂、粘合剂、增溶剂、崩解剂和助流剂。

进一步地，该产品为化妆品，组合活性物在化妆品中添加的量为1-40％。

本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

本发明提供的一种组合活性物通过粉防己碱、β-谷甾醇和麦冬根提取物合理的配伍，可以显著抑制th2细胞的活性及其相关基因或炎症因子的表达，在皮肤抗敏修护功效上有应用潜力，为制备舒缓皮肤过敏产品和药物提供了策略。此外，该组合活性物的制备方法简单，可被大规模生产和应用。

附图说明

图1为本发明一验证实施例中样品对人原代皮肤角质细胞细胞活力的影响柱状结果图；

图2为本发明一验证实施例中更低浓度范围的麦冬根提取物对人原代皮肤角质细胞细胞活力的影响柱状结果图；

图3为本发明一验证实施例中粉防己碱/β-谷甾醇复合物、麦冬根提取物以及复合物和麦冬根提取物的配伍对th2激活相关基因caii的影响柱状结果图；

图4为本发明一验证实施例中粉防己碱/β-谷甾醇复合物、麦冬根提取物以及复合物和麦冬根提取物的配伍对th2激活相关基因nell2的影响柱状结果图；

图5为本发明一验证实施例中粉防己碱/β-谷甾醇复合物、麦冬根提取物以及复合物和麦冬根提取物的配伍对炎症因子il-8表达的影响柱状结果图。

具体实施方式

本发明提供了一种组合活性物，通过粉防己碱、β-谷甾醇和麦冬根提取物合理的配伍，可以显著抑制th2细胞的活性及其相关基因或炎症因子的表达。

该组合活性物包括以下质量份数的原料：粉防己碱1-5份、β-谷甾醇5-10份和麦冬根提取物8-12份。

麦冬提取物的制备方法为：将麦冬根粉碎，麦冬根和水以1比8质量比混合，加热至80-100℃，提取2-4小时，然后用活性炭脱色，减压浓缩至0.4体积，得麦冬根提取物。

在一优选的实施例中，组合活性物包括以下质量份数的原料：粉防己碱3份、β-谷甾醇8份和麦冬根提取物10份。

在一优选的实施例中，麦冬根提取物麦冬提取物的制备方法为将麦冬根粉碎，麦冬根和水以1比8质量比混合，加热至90℃，提取3小时，然后用活性炭脱色，减压浓缩至0.4体积，得麦冬根提取物。

下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，并且验证本发明的组合活性物对th2细胞活性的抑制作用，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

实施例1

本实施例提供一种优选的组合活性物，包括以下质量份数的原料：粉防己碱3份、β-谷甾醇8份和麦冬根提取物10份。

其中，麦冬根提取物麦冬提取物的制备方法为将麦冬根粉碎，麦冬根和水以1比8质量比混合，加热至90℃，提取3小时，然后用活性炭脱色，减压浓缩至0.4体积，得麦冬根提取物。

实施例2

本实施例提供实施例1中的组合活性物的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，按规定的质量分数称取粉防己碱和β-谷甾醇，混合得到粉谷混合物；

步骤二，制备麦冬根提取物：将麦冬根粉碎，麦冬根和水以1比8质量比混合，加热至80-100℃，提取2-4小时，然后用活性炭脱色，减压浓缩至0.4体积，得麦冬根提取物。

步骤三，将步骤一得到的粉谷混合物和规定重量份数的麦冬根提取物混合，得到该组合活性物。

验证实施例

以下验证实施例采用的细胞和试剂如下：人原代皮肤角质细胞，β-谷甾醇、粉防己碱，麦冬根提取物(fust)，角质细胞培养基、elisa试剂盒采，cck-8试剂盒。

采用的主要设备包括细胞培养箱，实时荧光定量pcr仪，超净工作台,酶标仪(tecan)。

样品的提前准备：以下验证实施例检测共计3个样品，其具体信息见下表1。

表1测试样品信息

验证实施例1

本验证实施例对细胞活力进行测试，包括如下步骤：

人原代皮肤角质细胞使用培养基在37℃，含5％co2，湿度为95％的培养箱中培养。待细胞生长至80％以上融合后，种于96孔板，每孔加入不同浓度的β-谷甾醇或粉防己碱或麦冬根提取物培养96h，用cck试剂盒检测细胞活力。结果如图1和图2所示。

由图1可知，粉防己碱在10μm及以下对人原代皮肤角质细胞没有毒性作用，β-谷甾醇在1μm-50μm对人原代皮肤角质细胞没有毒性作用，麦冬根提取物对细胞有明显毒性作用。由图2可知，麦冬根提取物在0.01％及以下对细胞活力没有影响。

验证实施例2

本验证实施例对th2相关基因或炎症因子表达量的检测，包括如下步骤：

步骤1，人原代皮肤角质细胞使用培养基在37℃，含5％co2，湿度为95％的培养箱中培养。待细胞生长至80％以上融合后，种板。继续培养72h后，分别加入待测活性物及组合，il-4和il-13(15ng/ml)持续刺激4天。

步骤2，吸取步骤1的上清液，用pbs清洗一次后利用trizol法提取rna，反转为cdna后利用实时荧光定量pcr检测基因表达情况，所得结果以2-δδct法相对定量基因表达量。结果如图3和4所示，其中，引物信息如下：

步骤3，吸取步骤1的上清液，用酶联免疫吸附测定(elisa)法检测上清液中il-8的量。结果如图5所示

由图3可知，细胞经il-4/il-13刺激诱导后，caii基因表达明显上调，粉谷复合物(粉防己碱和β-谷甾醇的复合物)单用能显著下调caii的基因表达；同样的，用不同浓度的麦冬根提取物处理细胞后，caii的表达也被抑制，显示出良好的抗敏效果；在使用粉谷复合物与麦冬根提取物配伍后，其抑制效果明显优于单用粉谷复合物和麦冬根提取物。

由图4可知，细胞经il-4/il-13刺激诱导后，nell2基因表达明显上调，粉谷复合物单用能显著下调nell2的基因表达。同样的，用不同浓度的麦冬根提取物处理细胞后，nell2的表达也被抑制。在使用粉谷复合物与麦冬根提取物配伍后，其抑制效果明显优于单用粉谷复合物和麦冬根提取物。

由图5可知，细胞经il-4/il-13刺激诱导后，il-8表达明显增高，粉谷复合物单用能显著抑制il-8炎症因子表达。同样的，用不同浓度的麦冬根提取物处理细胞后，il-8的表达也被抑制，且呈现出一定的剂量依赖效应。在使用粉谷复合物与0.001％麦冬根提取物配伍后，其抑制效果优于单用粉谷复合物和麦冬根提取物。

综上所述，该组合活性物(粉谷复合物与麦冬根提取物联用)能起到很好的抗敏效果。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。