一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及医药领域，具体涉及一种治疗高尿酸血症的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
：尿酸是一种二元酸，其pka1为5.4，pka2为9.8，在人体内通常是以阴离子存在。人体内有两种途径获取嘌呤以合成尿酸，一类为内源性嘌呤代谢生成尿酸，内源性途径为肝脏，肠道和其他组织，如肌肉、肾脏和血管内皮等细胞核内蛋白嘌呤碱经代谢后形成，每天合成300-400mg尿酸；一类为外源性嘌呤生成尿酸，外源性途径则以摄取含高嘌呤碱食物为主，后在体内经分解代谢后形成，每天代谢形成大约300mg左右尿酸。男性一天总的尿酸生成为1200mg，而女性只有600mg左右。尿酸的生成是由于人体中的腺苷-磷酸酶(amp)经脱氨酶除氨基，再经核苷酸酶去磷酸化形成苷类，苷类分别通过嘌呤核苷磷酸化酶(pnp)进一步转化为嘌呤碱基次黄嘌呤和鸟嘌呤。然后通过黄嘌呤氧化酶(xo)将次黄嘌呤氧化形成黄嘌呤，并通过鸟嘌呤脱氨酶将鸟嘌呤脱氨基形成黄嘌呤。黄嘌呤再次被黄嘌呤氧化酶氧化形成终产物尿酸。在部分哺乳动物中，尿酸在尿酸酶的作用下，代谢为易溶于水的尿囊素，溶解于尿液中得以排出。但是人类和部分灵长动物体内的尿酸酶基因失活，体内的尿酸不能代谢为尿囊素排出体外。尿酸在肾脏中的排泄主要经过4个过程——滤过(100％)，重吸收(98-100％)，分泌(50％)和分泌后再重吸收(40％)，四个步骤后完成转运，最终只有8％～12％尿酸排出。尿酸的排泄中肾脏排泄大约2/3，而消化道排泄了1/3，尿酸进入消化道后，被大肠埃希菌酶所破坏，这个过程为尿酸的酶解。在肾脏中影响尿酸重吸收的最主要的载体蛋白有两种，尿酸盐离子转运体1(urat1)和葡萄糖转运体9(glut-9)。urat1是由scl22a12基因表达的尿酸阴离子转运体，位于肾近曲小管上皮细胞刷状缘侧。有学者用免疫组化方法发现伴有高尿酸血症的iga肾病肾脏中的urat1明显要高于无高尿酸血症的iga肾病患者。有实验发现增加了睾丸素的小鼠和减少了雌二醇的小鼠比起正常的小鼠，urat1的表达更高，容易患上高尿酸血症。glut-9是由alc2a9基因表达的葡萄糖转运体，在肝脏中的尿酸转运以及肾脏中尿酸的重吸收都发挥着重大的作用，主要在在肾脏中表达，位于肾小管上皮细胞基地外侧膜。另外一个与尿酸重吸收相关的转运蛋白是有机阴离子蛋白4(qat4)，位于肾近曲小管上皮细胞。与尿酸的分泌有关的主要是三磷酸腺苷结合转运蛋白(abcg2)，属于atp结合盒家族的成员，位于近端肾小管的顶膜，在肠中也有少量表达。正常情况下，人体内的尿酸大约有1200毫克，每天新生成约600毫克，同时排泄掉600毫克，处于平衡的状态。但如果体内产生过多来不及排泄或者尿酸排泄机制退化，则体内尿酸滞留过多，当血液尿酸浓度大于7毫克/分升，导致人体体液变酸，影响人体细胞的正常功能，一旦我们体内尿酸过多，身体无法及时排泄，就会聚集在体内，出现尿酸高的症状。尿酸高与代谢综合征：与尿酸高相关的主要是以肥胖、高血糖、高血压以及血脂异常的多种心血管疾病，不仅增加动脉粥样硬化血管疾病的发生，同时增加2型糖尿病发生的风险。临床数据显示，高血压的风险会随着血尿酸增加而增加，每当血尿酸增加60μmol/l时，高血压的风险率会增加15％-23％，心血管病病死率女性增加26％，男性增加9％，缺血性心脏病病死率女性增加30％，而男性增加17％，女性的冠心病增加48％。高尿酸血症对男性和女性冠心病的发生与预后都有所不同，很有可能与雌激素相关。尿酸高与痛风：痛风是一类由于嘌呤代谢紊乱具有反复发作特点的炎症性疾病，其特征表现为发作时关节处呈红色，触痛，灼热和肿胀。在病理学上对痛风的定义为关节、肌腱和其他组织和尿酸肾结石中的晶体沉积引起的炎症。处于生理ph值时使得二元弱酸尿酸以尿酸盐的形式在血液中存在，其浓度过高时则会以结晶的形式析出，一旦结晶析出沉积在关节等处易并发痛风。在多数研究发现痛风性关节炎中尿酸值(sua)均升高，如在范朋凯等人所调查到的，对新疆地区对原发性痛风性关节炎的相关生化指标分析后发现，痛风组血尿酸(sua)、尿糖(glu)等水平高于对照组,差异有统计学意义(p<0.01)。在许多关于痛风治疗药物的研究中也发现sua在造模期间有升高，经治疗后sua降低。尿酸高与肾病：有研究表明，血液中尿酸的水平与急性肾损伤(aki)有关，血尿酸的增加的同时，急性肾损伤的风险也增加了。而大量临床数据也表明了hua与急性肾损伤和慢性肾病(ckd)十分相关。但同时也有流行病学研究表明hua与慢性肾病之间没有联系。因此慢性肾病是否与hua相关，还值得研究。因此，尿酸高危害很多，且病因和病情复杂，现在一般用别嘌醇、非布司他等作为降血尿酸的药物，但这类药物均有明显的副作用，剂量不易掌握而诱发痛风等，临床可选择的药物明显不足。技术实现要素：基于上述问题，一方面，本发明提供一种治疗高尿酸血症的药物组合物，该治疗高尿酸血症的药物组合物能降低人体内的尿酸浓度。技术方案是：一种治疗高尿酸血症的药物组合物，该治疗高尿酸血症的药物组合物由以下成分制成：秦皮500-900重量份和威灵仙400-600重量份。作为优选，所述药物组合物还含有稀释剂和/或矫味剂和/或黏合剂作为辅料。作为优选，所述稀释剂为蔗糖、糊精、可溶性淀粉、甘露醇以及β-环糊精、微晶纤维素中的一种或其混合物。作为优选，所述矫味剂为甜菊素和/或阿司帕坦。作为优选，所述黏合剂为水和/或乙醇。作为优选，所述药物组合物的剂型为片剂、颗粒、胶囊、口服液和滴丸中的任意一种。一方面，本发明还提供一种制备治疗高尿酸血症的药物组合物的方法。技术方案是：一种制备治疗高尿酸血症的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤：①取秦皮和威灵仙；②加水煎煮，煎煮时收集挥发油；③合并煎煮液，过滤，浓缩。一方面，本发明还提供一种药物组合物在制备用于治疗高尿酸血症的的药物中的应用。技术方案是：一种药物组合物在制备用于治疗高尿酸血症的的药物中的应用，该药物组合物为上述的药物组合物。本发明的有益效果在于：本发明药物组合物抑制urat1表达水平，从而抑制尿酸的重吸收，同时增强了abcg2的表达水平，促进尿酸排泄，从而发挥降血尿酸作用，因此能作为降低尿酸的药物。附图说明图1是本发明药物组合物对高尿酸小鼠体重的影响；图2是本发明药物组合物对高尿酸小鼠血清尿酸水平的影响；图3本发明药物组合物对高尿酸小鼠肾功能的影响；图4是空白组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图5是模型组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图6是阳性组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图7是低剂量组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图8是中剂量组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图9是高剂量组对高尿酸小鼠肾脏病理的影响；图10是本发明药物组合物对高尿酸小鼠肝功能的影响；图11是空白组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图12是模型组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图13是阳性组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图14是低剂量组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图15是中剂量组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图16是高剂量组对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响(200×)；图17是本发明药物组合物对高尿酸大鼠体重的影响；图18是本发明药物组合物对高尿酸大鼠血清尿酸水平的影响；图19本发明药物组合物对高尿酸大鼠肾功能的影响；图20是空白组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图21是模型组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图22是阳性组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图23是低剂量组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图24是中剂量组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图25是高剂量组对高尿酸大鼠肾脏病理的影响(200×)；图26是本发明药物组合物对高尿酸大鼠肝功能的影响；图27是空白组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图28是模型组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图29是阳性组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图30是低剂量组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图31是中剂量组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图32是高剂量组对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响；图33是本发明药物组合物对对高尿酸大鼠肝组织xod的影响；图34是本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾组织转运蛋白表达的影响；图35是是空白组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图36是模型组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图37是阳性组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图38是低剂量组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图39是中剂量组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图40是高剂量组对高尿酸大鼠肾组织urat1的影响(200×)；图41是空白组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图42是模型组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图43是阳性组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图44是低剂量组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图45是中剂量组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图46是高剂量组对高尿酸大鼠肾组织glut9的影响(200×)；图47是空白组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)；图48是模型组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)；图49是阳性组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)；图50是低剂量组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)；图51是中剂量组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)；图52是高剂量组对高尿酸大鼠肾组织abcg2的影响(200×)。具体实施方式下面将结合附图对本发明作进一步说明。本发明提供的实施例仅为进一步解释本发明，不应解释为对本发明的任何限制。本领域技术人员应当清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。实施例1：治疗高尿酸血症的药物组合物颗粒的制备取秦皮700kg和威灵仙500kg，加水浸泡，每次加7-12倍量的水煎煮3次，每次煎煮时间为40-100分钟(每次煎煮时收集挥发油)，合并煎煮液，过滤，浓缩至相对密度1.08-1.12，经喷雾干燥制成浸膏粉，过筛，加入糊精混匀后再加入甜代糖混匀。加92％乙醇，过筛，40-60℃干燥，过筛后制粒，喷入挥发油，密闭闷润65-70分钟，分装，得治疗高尿酸血症的药物组合物颗粒。实施例2：治疗高尿酸血症的药物组合物口服液的制备取秦皮700kg和威灵仙500kg，加水浸泡，每次加7-12倍量的水煎煮3次，每次煎煮时间为40-100分钟(每次煎煮时收集挥发油)，合并煎煮液，过滤，浓缩至相对密度1.08-1.12，加乙醇使醇含量达70-80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇后离心；取上清液加入收集的挥发油和聚山梨酯、甜蜜素、山梨酸，混匀，加水，滤过，灌装，灭菌，得治疗高尿酸血症的药物组合物口服液。以下的实验例3-4中：①实验动物昆明小鼠(km)，18-22g，雄性，spf级，提供中心为成都达硕实验动物有限公司。sd大鼠，全雄，spf级，提供中心为成都达硕实验动物有限公司。②实验药物及试剂氧嗪酸钾(98％)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司或上海麦克林生化科技有限公司，临用前用生理盐水配置成浓度为25mg/ml溶液。酵母膏，北京奥博生物技术有限责任公司，临用前用热水溶解至750mg/ml溶液。别嘌醇，合肥久联制药有限公司或合肥久联制药有限公司，临用前用热水溶解至2mg/ml溶液。黄嘌呤氧化酶(xod)测试盒，江苏南京建成生物工程研究所。总蛋白定量测试盒(bca法)，江苏南京建成生物工程研究所。尿酸盐阴离子交换器(urat1)抗体：affinity。葡萄糖转运体9(glut9)抗体：abcam。三磷酸腺苷结合盒转运体g2(abcg2)抗体：abcam。③实验仪器全自动生化分析仪(西门子医学诊断产品(上海)有限公司)；酶标仪(mk3美国thermo)；紫外可见光光度计(alpha-1860，上海市漕河泾开发区松江高科技园)；电子天平(hzt-a+200，美国康州hz电子科技有限公司)。显微镜(olympus，tokyo，japan，bx53)肝组织中黄嘌呤氧化酶(xod)活性测定：样品前处理：准确称取组织重量(g)：体积(ml)＝1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(0.9％的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10％液匀浆，在2500～3000r/min，离心10min，取上清液进行测定。免疫组织化学法测定肾脏中相关蛋白表达水平(urat1，glut9，abcg2)：常规脱蜡水化组织切片，切片经枸橼酸抗原修复液，滴加过氧化物酶阻断剂(3％h2o2)于组织上，避光孵育15min，用pbs冲洗3次。滴加一抗于组织上，37℃孵育45min，孵育完毕，用pbs冲洗切片3次。滴加100ul二步法抗兔/鼠通用型免疫组化检测试剂盒中的a液(chemmatetmenvision+hrp)于组织上，37℃孵育45min；孵育完毕，用pbs冲洗切片3次，滴加预备好的显色剂dab工作液100ul，光镜下控制显色；显色完毕后，用蒸馏水冲洗终止显色。苏木素复染，各级酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。观察：使用显微镜2-3在各组组织随机选择1个视野(非坏死及出血、非特异性染色的边缘区)，用ccd采集高质量的图像(2448x1920pixels)。在采集图像时保证每次条件的一致，即以手动调节光源、光圈大小、白平衡、曝光强度、敏感度、对比度、gamma值等各项设置并且固定。即使是在更换切片时，除调整焦距和视野以外，显微镜上的其他部件的设置都保持不变，包括物镜的放大倍数。再换用20倍的物镜(总放大倍数为200倍)，依据上述条件每张切片按照等距抽样原则随机摄取10个有代表意义的视野进行图像采集。随机选择5个视野测iod值(绝对值)，并除以面积得出平均iod值(相对值)。统计学处理：所有数据采用平均值±方差表示，两组间的差异通过独立样本的t检验分析。数据处理采用graphpadprism5.01(graphpadsoftwareinc.)，当p<0.05认定为有统计学上的差异。实施例3治疗高尿酸血症的药物组合物对小鼠降血尿酸效果验证治疗高尿酸血症的药物组合物对小鼠降血尿酸效果验证的验证方法如下：①造模以及给药方法购买60只昆明雄性小鼠，实验前先让小鼠适应一周，期间常规饲料喂养，自由取食和饮水，自然昼夜采光。一周后，将60只小鼠按体重随机分成空白对照组、模型对照组、别嘌醇组(20mg/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组(2g/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物中剂量组(5g/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组(8g/kg)共6组，每组各有10只。分组后，再用苦味酸在每只小鼠身上做标记，使组内的小鼠都能区分。每天早上9:00对小鼠进行称重，根据体重来计算小鼠给药剂量，小鼠灌胃体积为10ml/kg，小鼠腹腔注射体积为10ml/kg。除空白组外，其他组先灌胃酵母膏7.5g/kg，10min后注射氧嗪酸钾250mg/kg，空白对照组先灌胃等量热水、10min后注射等量生理盐水。给药1h后，空白组和模型组给予等量蒸馏水，其余各组分别给予对应治疗药物。连续14天，期间自由饮食。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组(2g/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(2g/kg)，当为降血尿酸颗粒，为2g颗粒物/kg小鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为2g/kg。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物中剂量组(5g/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(5g/kg)，当为降血尿酸颗粒，为5g颗粒物/kg小鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为5g/kg。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组(8g/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(8g/kg)，当为降血尿酸颗粒，为8g颗粒物/kg小鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为8g/kg。②药效学观察及指标检测行为学观察：每天观察小鼠的一般体征(毛发是否正常、精神状态是否正常等)，每日称重并记录。生化指标测定：第14天灌胃1h后，对小鼠进行眼球取血，血液在3500rpm条件下离心10min，取血清，用全自动生化分析仪测尿酸值(sua)、肌酐值(scr)、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)以及尿素值。③肝肾组织病理学观察在眼球取血后，将小鼠脱颈处死，并收集的肝肾组织进行组织病理学分析：固定：将肝肾组织置于10％福尔马林溶液中固定48h。脱水：(75％、85％、95％、100％)乙醇逐级脱水，脱水过程中并时常加以搅拌，以充分脱水。透明：二甲苯透明(第一次用乙醇50％+二甲苯50％，再用纯二甲苯浸透两次，每个过程1h)。渗透：放在二甲苯50％+粉末石蜡50％中，于40℃烘箱中敞口过夜包埋：组织放在模具中，在冷台上冷却。切片：首先调整切片的厚度至5μm，切下蜡片，用软毛笔从刀口向上挑起切落的蜡片，再用镊子将其夹住拖放至摊片仪的水面，展开时间约1min-2min。随后用防脱玻片直立插入水中轻触切片再将附着上蜡片的玻片垂直提起，拨正切片的位置并编号后，置于60℃烘箱中烘烤2h，贴片后于37℃过夜。he染色：脱蜡(二甲苯脱蜡处理3次，每次10min)→水化(分别用100％乙醇、95％乙醇、85％乙醇、75％乙醇处理，每次3min)→蒸馏水冲洗(3min)→苏木素染色(5-10min)→分色液处理(5s)→大量自来水冲洗处理(3min)→li2co3处理(10min)→自来水冲洗1min处理→伊红染色处理(5min)→自来水冲洗处理(1min)→95％乙醇处理(1min)→100％乙醇处理(1min)→100％乙醇处理(1min)→二甲苯石碳酸(3:1)处理(1min)→二甲苯处理(1min)→二甲苯再处理(1min)→最后用中性树脂封制胶片。观察：使用显微镜在各组组织随机选择3个视野(非坏死及出血、非特异性染色的边缘区)，用ccd采集高质量的图像(2448x1920pixels)。在采集图像时保证每次条件的一致，即以手动调节光源、光圈大小、白平衡、曝光强度、敏感度、对比度、gamma值等各项设置并且固定。即使是在更换切片时，除调整焦距和视野以外，显微镜上的其他部件的设置都保持不变，包括物镜的放大倍数。再换用20倍的物镜(总放大倍数为200倍)，依据上述条件每张切片按照等距抽样原则随机摄取10个有代表意义的视野进行图像采集。④验证结果a、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠体重的影响生长状态分析：6组小鼠均正常生长，体重增加一致(如图1以及表1)，精神状态比较好，毛发顺滑。表1本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠体重的影响(n＝10)表1中，与空白组比较，其余5组无显著性差异(p>0.05)b、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠血清尿酸水平的影响与空白组比较，模型组sua水平升高，并有显著性差异(p<0.05)，提示造模成功。与模型组比较，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组sua水平显著降低(p<0.05)，而本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组和本发明治疗高尿酸血症的药物组合物中剂量组sua水平与模型组相比没有显著性差异(p>0.05)，但有下降趋势。结果见表2和图2。表2本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠血清尿酸水平的影响(n＝10)尿酸(μmol/l)空白组62.48±28.80模型组90.18±17.50*别嘌醇5.11±3.80###低剂量组74.55±32.47中剂量组79.88±41.55高剂量组65.83±36.21#表2中，与空白组比较，*p<0.05，与模型组比较，#p<0.05，###p<0.001。图2中，与空白组比较，*p<0.05，与模型组比较，#p<0.05，###p<0.001。c、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肾功能的影响尿素值：与空白组相比，模型组urea水平出现显著升高(p<0.001)，说明该模型在建立高尿酸模型的同时，具有一定的肾损伤。与模型组比较，nqg低剂量、中剂量以及高剂量的urea水平均显著降低(p<0.01)。肌酐值：与空白组相比，其余5组均无显著性差异。肾脏系数：与空白组相比，其余5组均无显著性差异。结果见表3和图3。表3本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肾功能水平的影响(n＝10)尿素(mmol/l)肌酐(μmol/l)肾脏系数(％)空白组5.33±0.7732.24±.4861.33±0.05模型组7.53±0.56***34.01±2.461.48±0.18别嘌醇8.23±3.5335.13±14.631.27±0.23低剂量组5.53±1.67##25.65±10.711.40±0.12中剂量组5.80±1.83##32.21±8.8421.47±0.18高剂量组6.06±1.05##31.30±7.7851.36±0.05表3中，与空白组比较，***p<0.001，与模型组比较，##p<0.01。图3中，与空白组比较，***p<0.001，与模型组比较，##p<0.01。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肾脏病理学的影响：he染色结果表明，空白组小鼠肾小球、肾小管结构清晰，无炎症浸润，无尿酸盐结晶等症状。与空白组比较，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组、中剂量组以及高剂量组未见明显差异。比较见图4-9。从图中可以看出，与空白组比较，其余5组无显著性差异(p>0.05)。d、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肝功能的影响ast和alt及ast/alt比值：与空白组相比，nqg低剂量组、中剂量组以及高剂量组未有显著性差异(p>0.05)。结果见表4，图10。表4本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肝功能水平的影响(n＝10)ast(u/l)alt(u/l)ast/alt比值空白组144.00±32.8951.50±16.812.92±0.72模型组154.10±37.652.00±11.342.97±0.29别嘌醇137.70±6949.57±10.442.636±1.06低剂量组137.3±38.0336.25±14.363.401±0.803中剂量组129.4±39.6745.00±18.773.139±0.782高剂量组145.70±31.7750.50±9.5012.94±0.70表4中，与空白组比较，其余5组无显著性差异(p>0.05)。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸小鼠肝脏病理学的影响：空白组可见糖原贮积，为小鼠正常生理现象，未见水肿，脂肪病变等。与空白组比较，nqg低剂量组、中剂量组以及高剂量组无显著性差异。比较及结果见图11-16。因此，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对于嗪酸钾腹腔注射(250mg/kg)联合酵母灌胃(7.5g/kg)所引起的小鼠高尿酸具有一定的降血尿酸的作用。实施例4治疗高尿酸血症的药物组合物对大鼠降血尿酸效果验证治疗高尿酸血症的药物组合物对大鼠降血尿酸效果验证的验证方法如下：①造模以及给药方法购买sd大鼠36只，实验前先让大鼠适应一周，期间常规饲料喂养，自由取食和饮水，自然昼夜采光。一周后，将36只大鼠按体重随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组(别嘌醇组10mg/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组(1mg/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物中剂量组(3mg/kg)、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组(6mg/kg)共6组。分组后，再用苦味酸在每只大鼠份上标记，使每只大鼠都能够区分。空白组大鼠自由取用正常食物，其余5组大鼠让其自由取食含有2.5％氧嗪酸钾饲料。每周记录其体重变化，连续7周。在第四周末，尾静脉取血，再在3000rpm条件下离心10min，取血清，测尿酸值。从第五周开始，空白组以及模型组灌胃等量蒸馏水，治疗组给予对应药物，连续3周。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组(1mg/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(1mg/kg)，当为降血尿酸颗粒，为1mg颗粒物/kg大鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为1mg/kg。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物中剂量组(3mg/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(3mg/kg)，当为降血尿酸颗粒，为3mg颗粒物/kg大鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为3mg/kg。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组(6mg/kg)是指实施例1制取的降血尿酸颗粒或实施例2制取的口服液低剂量组(6mg/kg)，当为降血尿酸颗粒，为6mg颗粒物/kg大鼠，当为口服液时，是指口服液中有效物质的含量为6mg/kg。②药效学观察及指标检测行为学观察：每天观察大鼠的一般体征(毛发是否正常、精神状态是否正常等)，每周称重并记录。生化指标测定：在给予治疗药物3周后股动脉取血，血液在3500r/min条件下离心10min，取血清，用全自动生化分析仪测尿酸值(sua)、肌酐值(scr)、谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)以及尿素值(urea)。③肝肾组织病理学观察与实施例3的肝肾组织病理学观察相同。④验证结果a、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠体重的影响生长状态分析：6组大鼠均正常生长，体重增加一致(如图17，如表5)，精神状态比较好，毛发顺滑。表5本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠体重的影响从表5及图17可知，与空白组比较，其余5组无显著性差异(p>0.05)。b、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠血清尿酸的影响尿酸值结果见表6和图18。第四周周末，与空白组比较，别嘌醇组(阳性组)、低剂量组、中剂量组和高剂量组的尿酸水平均有显著升高(p<0.01)，提示别嘌醇组(阳性组)、低剂量组、中剂量组和高剂量组均成功建立大鼠高尿酸血症模型。第七周周末，与空白组比较，模型组尿酸水平显著升高(p<0.05)，与模型组比较，nqg高剂量组尿酸水平显著降低(p<0.05)，nqg中剂量和低剂量组尿酸值有降低趋势，但未有显著性差异。表6本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠血清尿酸的影响(n＝6)第4周尿酸值(μmol/l)第7周尿酸值(μmol/l)空白组96.44±22.2973.62±20.83模型组197.50±28.92***126.61±36.66*别嘌醇组178.50±26.56***58.00±12.74##低剂量组158.90±29.19**93.30±14.61中剂量组153.20±27.77**84.32±19.5高剂量组180.90±29.26***78.18±18.34#从表6可知，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01。从图18可知，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01。c、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾功能的影响尿素值：与空白组相比，模型组、别嘌醇组以及nqg低剂量组的尿素水平无显著性差异(p>0.05)；与空白组相比，nqg中剂量组和nqg高剂量组的尿素显著降低(p<0.01)。结果见表7，图19。肌酐值：与空白组比较，其余5个组均无显著性差异。肾脏系数：与空白组比较，其余5个组均无显著性差异。表7本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾功能的影响(n＝6)表7中，与空白组比较，**p<0.01。图19中，与空白组比较，**p<0.01。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾脏病理学的影响：空白组：肾小球大小、形态、体积等未见明显异常。肾小管上皮未见坏死、脱落等。模型组：肾小球的大小、形态、体积等未见明显异常；多数大鼠的肾小管内可见较多褐色(棕褐色)结晶样物质沉淀，具有折光性，考虑尿酸盐结晶；部分肾小管上皮肿胀、坏死脱落。别嘌醇组：肾小球的体积均呈现不同程度的缩小(考虑萎缩可能性)；大部分大鼠肾小管管腔内可见同模型组肾小管中的褐色结晶物，可见部分肾小管上皮肿胀、坏死。低剂量组：肾小球的体积、形态、体积等未见明显异常，部分肾小管内可见褐色结晶。未见肾小管上皮肿胀、坏死。中剂量组：肾小球的大小、形态、体积未见明显异常；部分小管内可见少量褐色结晶薄片状物，肾小管上皮可见轻度肿胀。高剂量组：肾小球的大小、形态、体积等未见明显异常；肾小管内未见任何结晶物，少量肾小管上皮轻度肿胀。与空白组相比，模型组肾脏最主要病变为尿酸盐结晶，伴有部分的肾小管上皮肿胀和坏死脱落。与模型组比较，nqg低剂量肾脏病变减轻，仅在部分肾小管内有褐色结晶，nqg中剂量组肾脏病变减轻，褐色结晶减少，而在nqg高剂量中未见到褐色结晶，可见nqg低剂量组、中剂量组和高剂量尿酸盐结晶明显改善。结果见图20-25，其中，模型组标记点为尿酸盐结晶。d、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肝功能的影响ast和alt：ast以及alt升高时，表示肝脏受到一定损害。与空白组ast水平比较，nqg低剂量组、中剂量组和高剂量组的ast水平均无显著性差异(p>0.05)。与空白组alt值比较，模型组、别嘌醇组、nqg中剂量组和高剂量组出现显著降低(p<0.05)，提示无肝损伤等。见表8和图26。表8本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肝功能的影响(n＝6)ast(u/l)alt(u/l)空白组127.40±21.5850.80±6.12模型组142.00±32.6437.50±9.91***别嘌醇组104.08±27.1034.25±2.86***低剂量组100.33±10.5442.33±7.69中剂量组125.60±21.0339.60±5.67*高剂量组131.60±19.3134.40±2.93***表8中，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。图26中，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对对高尿酸大鼠肝脏病理学的影响：空白组未见水肿，脂肪病变等。与空白组比较，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组、中剂量组以及高剂量组无显著性差异。比较及结果见图27-32。e、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肝组织xod活性影响与空白组比较，模型组xod活性无显著性差异，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组、中剂量组和高剂量组无显著性差异。比较及结果见表9和图33。表9本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肝组织xod的影响(n＝6)xod(u/gprot)空白组29.07±1.35模型组32.46±5.28别嘌醇组26.51±2.67*低剂量组29.68±2.73中剂量组30.29±3.553高剂量组29.89±3.83表9中，与空白组比较，*p<0.05。图33中，与空白组比较，*p<0.05。f、本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾组织转运蛋白表达的影响尿酸盐离子阴离子转运体1(urat1)：对比空白组，模型组的平均光密度显著升高(p<0.01)，说明urat1表达水平增强。与模型组比较，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组、中剂量组和高剂量组平均光密度显著降低(p<0.05)。说明本发明治疗高尿酸血症的药物组合物能降低urat1的表达，从而抑制尿酸的重吸收。葡萄糖转运体9(glut9)：与空白组比较，模型组的平均光密度显著升高(p<0.01)，说明模型组glut9表达增强。与模型组比较，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物高剂量组的平均光密度值未有显著性差异(p>0.05)，中剂量和低剂量组的平均光密度有降低趋势，无显著性差异(p>0.05)。三磷酸腺苷结合盒转运体(abcg2)：与空白组相比，模型组的平均光密度显著性降低(p<0.001)，说明abcg2的表达显著性降低。对比模型组，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物低剂量组、中剂量组和高剂量组平均光密度值显著升高(p<0.01)。说明本发明治疗高尿酸血症的药物组合物能够增强abcg2的表达，增加尿酸的排泄。结果见表10、图34及图35-52。表10本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对高尿酸大鼠肾组织转运蛋白表达的影响(n＝6)urat1glut-9abcg2空白组11.10±8.332118.40±63.24231.8±51.3模型组93.64±48.37**666.8±346.90**70.61±32.29***别嘌醇组106.60±24.72838.20±45.8550.21±19.32低剂量组30.85±38.92#486.80±175.90108.5±60.49##中剂量组4.15±5.022##457.7±231.30218.90±47.56###高剂量组26.06±46.21#697.6±103.40179.20±58.49##表10中，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001。图34中，与空白组比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001。因此，本发明治疗高尿酸血症的药物组合物对氧嗪酸钾(2.5％)饲料饲养所建立的高尿酸大鼠模型具有明显的降血尿酸作用，其机制是本发明治疗高尿酸血症的药物组合物抑制urat1表达水平，从而抑制尿酸的重吸收，同时增强了abcg2的表达水平，促进尿酸排泄，从而发挥降血尿酸作用。实施例5临床实验本实施例中，高尿酸血症定义为血尿酸浓度高于正常值20％的为高尿酸血症，即男性患者血清尿酸水平＞504mmol/l，女性患者血清尿酸水平＞432mmol/l(血尿酸浓度高于正常值为男性血清尿酸水平不高于420mmol/l，女性血清尿酸水平不高于360mmol/l)。高尿酸血症确诊患者(性别不限，18～70岁者)45名，进行安慰剂对照评价随机双盲临床试验(随机分组)，其中药物试验组30例，安慰剂对照组15例。两组患者均在家正常起居、饮食，每4周(28天)检测1次血清尿酸浓度。同时，药物试验组给予实施例1制取的降血尿酸颗粒+碳酸氢钠。实施例1制取的降血尿酸颗粒的服用方法，每天2袋，上下午各服1袋；碳酸氢钠具体用法用量如下：3次/d，0.5g/次，口服，持续治疗12周。安慰剂对照组给予安慰剂颗粒(性状接近试验药物)+碳酸氢钠片，安慰剂颗粒和碳酸氢钠片的服用方法药物试验组。试验期间观察患者不同时间段血尿酸水平，治疗前后的肝功能指标变化以及不良反应情况。肝功能指标包括丙氨酸氨基转移酶、天氨酸氨基转移、尿素氮、肌酐。不良反应情况包括肝肾功能异常、胃肠道反应、皮疹、瘙痒。临床治疗效果判断标准：结合患者的临床症状改善程度，若治疗后其血清尿酸水平较治疗前降低≥25％，或者血清尿酸水平降于正常值范围为显效；若治疗后其血清尿酸水平较治疗前降低10％～25％，或者血清尿酸水平接近正常值范围，而且部分症状改善为有效；若治疗后其血清尿酸水平较治疗前降低＜10％为无效。分别于首次服药后28天、56天和74天检测并记录试验患者的血清尿酸浓度，结果见表11。表11临床疗效观察从表11中可以得出，在72天试验结束时，药物试验组的显效率为63.3％，有效率为26.6％，两者相加的总有效率为90％；安慰剂对照组的显效率为0％，有效率为13.3％，两者相加的总有效率为13.3％。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12