一种百部生物碱类似物的应用的制作方法

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种百部生物碱类似物的应用。

背景技术：

结肠癌(colorectalcancer，crc)是消化系统最常诊断的恶性肿瘤之一，在2018年全球新发癌症发病率和死亡率排行中，crc分别排在第三和第二。此外，近10年来我国crc发病率呈明显升高趋势，并且据预测，到2035年我国的crc的发生率和死亡率都会有大幅度增加，严重威胁患者的健康和寿命。对于crc的治疗，目前主要采取的是手术切除和化疗相结合的方法，常用的化疗药物有5-氟尿嘧啶(5-fu)、伊立替康、奥沙利铂等。在单独用药时，其药效极其有限，而在大多数情况下，为了改善疗效会联合使用这些药物中的两种或两种以上，但是有很强的副作用。因此，亟需发现全新的且对结肠癌耐药细胞具有高效活性的药物，提高化疗疗效，增强患者的整体生命质量，为更多癌症患者减轻病痛。

p53是一种抑癌基因，野生型p53诱导肿瘤细胞凋亡，然而缺失或突变的p53可能通过激活自噬促进肿瘤细胞存活，从而导致肿瘤细胞出现耐药性。此外，结肠癌产生多药耐药的机制较复杂多变，其中由于p53突变而出现结肠癌细胞耐药便是其中一种，因此，我们需要发现一类用于治疗由于p53缺失而出现耐药的这一类型结肠癌的药物。我们对前期合成的百部生物碱天然产物及其衍生物进行了p53突变结肠癌细胞抑制活性筛选，结果表明化合物3具有显著的抑制活性。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种百部生物碱类似物(化合物3)的新应用，研究其能够诱导细胞内活性氧增加，以及能够抑制hct116及其p53突变结肠癌细胞增殖。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

一种百部生物碱类似物的结构式为：

一种百部生物碱类似物的应用，应用于抑制结肠癌细胞hct116及其耐药细胞株hct116p53-/-的增殖，应用于制备治疗活性氧相关疾病的药物。

进一步，所述耐药细胞株hct116p53-/-是一种由于p53蛋白发生突变而形成的结肠癌细胞，该细胞株对多种现有临床一线抗癌药物呈现出耐药的情况。

与现有技术相比本发明具有以下优点：

1.本发明提供了百部生物碱类似物(化合物3)的一种新应用，即对p53突变的结肠癌细胞(hct116p53-/-)有显著抑制活性，且活性优于临床用药顺铂2.7倍；可应用于p53突变结肠癌的治疗。

2.本发明提供的百部生物碱类似物具有诱导细胞内活性氧增加的应用，可应用于与活性氧相关的疾病的治疗。

附图说明

图1是本发明百部生物碱类似物的对hct116及hct116p53-/-的药理活性数据；

图2是顺铂(cis)对hct116及hct116p53-/-的药理活性数据；

图3是加入nac对hct116的药理活性数据；

图4是加入nac对hct116p53-/-的药理活性数据。

具体实施方式

本发明实施例进一步公开了百部生物碱类似物(化合物3)通过诱导活性氧从而抑制结肠癌细胞的增殖。具体地，n-乙酰半胱氨酸(n-acetylcysteine,nac)是活性氧清除剂，当nac随着浓度增高，使百部生物碱类似物(化合物3)对hct116及hct116p53-/-两种细胞的抑制活性降低至消失。

实验具体实施方案：

实施例1

化合物3能显著抑制hct116p53-/-的增殖：

采用srb检测法检测细胞增殖作用，基于检测蛋白质的含量确定细胞的密度。对数生长期的细胞，胰酶消化，用新鲜培养基将细胞密度调整为4～6×10⁴个/ml，接种于96孔板中，每孔100μl，置于37.0℃，5.0％co2，饱和湿度的培养箱中培养过夜，使细胞贴壁。用培养基稀释药物至2倍检测浓度，保证药物稀释液中dmso含量保持一致，吸取100μl药物稀释液加入96孔板中，继续培养72h。弃除细胞培养基，轻轻地加入100μl预冷的10％(wt/vol)三氯乙酸(tca)，4℃至少放置1h以上。去除tca固定液，用缓慢流动的水洗涤五遍，用吸水纸去除残留的水，轻轻地加入100μlsrb染色液，室温孵育25min。去除srb染色液，用1％的冰醋酸溶液洗涤五遍去除未结合的染料。室温干燥，加入100μl的10mmtris(ph10.0)溶液，待染料完全溶解后，酶标仪检测od570nm。

表1百部生物碱类似物和cis对hct116及hct116p53-/-的抑制活性结果

如图1和图2所示，化合物3能浓度依赖性地显著抑制由于p53突变而出现耐药的结肠癌细胞(hct116p53-/-)，阳性对照为顺铂(cis)；本发明的百部生物碱类似物对hct116及hct116p53-/-的抑制活性结果如表1所示，化合物3能浓度依赖性地抑制hct116及hct116p53-/-细胞，ic50分别在13μmol和14μmol，耐药指数为1，阳性对照顺铂对hct116及hct116p53-/-细胞的ic50分别在11μmol和38μmol。耐药指数为3.6，化合物3对hct116的活性与cis相当，但是其对hct116p53-/-细胞的活性优于cis2.7倍。

实施例2

化合物3通过诱导活性氧从而抑制结肠癌细胞的增殖：

方法同上，药物孵育时，采用化合物3不和nac共孵育的方法，使药物终浓度达到化合物3和nac设置的检测浓度即可。其他操作方法步骤参考上述实验方法。

如图3和图4所示，表明化合物3通过诱导活性氧显著抑制结肠癌细胞的增殖，具体为：在hct116及hct116p53-/-细胞中，化合物3能显著抑制两种肿瘤细胞的增殖，但是逐渐加入活性氧清除剂n-乙酰半胱氨酸(n-acetylcysteine,nac)，化合物3的抑制活性显著降低。该实验表明，在以上两种细胞中，化合物3通过诱导细胞内活性氧增加来抑制两种肿瘤细胞的增殖，且呈浓度依赖性。以上实验表明化合物3可以通过诱导活性氧增加，从而抑制hct116及hct116p53-/-细胞的增殖。