一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法及其应用

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法及其应用，具有显著美白作用。


背景技术：

2.黑色素其实是一种氨基酸衍生物，它们存在于皮肤底层的细胞之间，被称作色素母细胞，色素母细胞能够分泌麦拉宁色素，当紫外线照射到皮肤上时，刺激麦拉宁色素，激活酪氨酸酶的活性，来保护我们的皮肤细胞。多巴经酪氨酸氧化，释放出黑色素。黑色素经由细胞代谢的层层移动，到了肌肤表皮层形成雀斑、晒斑、黑斑等形状。酪氨酸酶是一种黑色素合成的限速酶，其活性与黑色素合成的数量有关。关于酪氨酸酶活性抑制剂的相关研究越来越多，为攻克色素细胞性肿瘤、黄褐斑等色素疾病提供帮助。随着生活水平的提高，人们对美白产品的要求也不断提高，天然植物来源的美白产品研究需求越来越大。
3.人参作为补益保健上品,其应用于美容护肤及治疗损容性疾病的历史悠久，在中国经典美容医书《千金方》、《圣济总录》和《鲁府禁方》均有含人参的美容方剂。人参可以延缓皮肤衰老使皮肤保持弹性的机制是人参总皂苷可清除损害细胞的氧自由基并且在一定程度上可以作为抗氧化剂，从而起到抑制细胞凋亡的作用。有研究表明人参皂甙rd对光老化成纤维细胞有一定的防治作用，可能是人参对成纤维细胞的抗老化作用的机制，并且实验组和对照组的细胞形态体积没有显著性差异说明人参皂苷rd可能没有毒副作用或毒副作用极小。
4.灵芝（ganoderma lucidum），又名芝草、菌灵芝、木灵芝、赤芝、铁菌等，是多孔菌科真菌灵芝的干燥子实体。灵芝富含多种活性成分，具有保健功效，并且灵芝也具有良好的美容功效，在《本草纲目》中记载了其可以“补中益气，增智慧，好颜色，久食轻身不老，延年神仙。”灵芝发酵液含有至少17 种氨基酸，7 种人体必需的氨基酸，所含的蛋白质可水解成分子量较小的、能透过半透膜的中间肽，成膜性能好，能赋予皮肤和毛发自然光泽，增加弹性。
5.椰子（cocos nucifera l.）棕榈科椰子属植物，果卵球状或近球形，果腔含有胚乳（即“果肉”或种仁），胚和汁液（椰子水）。椰汁及椰肉含大量蛋白质、果糖、葡萄糖、蔗糖、脂肪、维生素b1、维生素e、维生素c、钾、钙、镁等；椰子性味甘、平，入胃、脾、大肠经；果肉具有补虚强壮，益气祛风，消疳杀虫的功效，久食能令人面部润泽。
6.目前市场上针对上述症状的药酒类较多，但多通过中药泡制而成，然而泡制的方式，若使用低度数酒基对原料中的成分提取率有限，浪费较严重；而使用高度数酒基不利于病人或亚健康人群服用，局限性较大。


技术实现要素：

7.本发明提供一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法及其应用，通过发酵使原料中的成分最大化转化为人体易吸收的可溶性物质，再通过绿色无污染的纯化方式富集纯化，得到总皂苷物质；并且发酵酒度数较低，利于更广泛的人群服用。在使用时，具有一定酒精
含量更利于组织的快速渗透和吸收，使有效成分直达病灶，更好地发挥美白作用。
8.鉴于此，本发明提出一种操作简单、提取纯度高、提取效果稳定且安全无污染的一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法： (1) 发酵：刺梨10-50份、余甘子10-30份、柠檬5-30份、人参1-5份、天麻1-5份、灵芝1-10份、蝉花1-10份、酵母菌1-15份，清洗晾干后，破碎不去皮放入避光容器中，自然温度发酵300天以上；(2) 提取：取上述发酵液静置，过滤，并将滤液50℃以下减压浓缩得到浓缩液；(3) 富集：将浓缩液用大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至洗脱液无色，再用质量浓度为10-100％的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，即得彝族传统发酵药总皂苷。
9.本发明公开一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，通过采用发酵，并设计其提取、富集和精制的工艺步骤和参数，获得彝族传统发酵药总皂苷的最佳制备工艺，有效得到具有显著药理活性的彝族传统发酵药总皂苷，从而实现有效利用和开发资源，将彝族传统发酵药总皂苷作为有效成份，运用于美白的保健食品、食品和化妆品中。
具体实施方式
10.为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
11.本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
12.本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
13.实施例1-一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，包括如下步骤：(1) 发酵：刺梨50份、余甘子25份、柠檬20份、人参1份、天麻2份、灵芝2份、蝉花3份、酵母菌5份，清洗晾干后，破碎不去皮放入避光容器中，自然温度发酵300天；(2) 提取：取上述发酵液静置，过滤，并将滤液50℃减压浓缩得到浓缩液；(3) 富集：将浓缩液用xda-5型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至洗脱液无色，再用质量浓度为50%和90％的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，合并洗脱液，40℃减压浓缩至无醇，即得彝族传统发酵药总皂苷。
14.实施例2-一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，包括如下步骤：(1) 发酵：刺梨30份、余甘子30份、柠檬15份、人参2份、天麻1份、灵芝5份、蝉花5份、酵母菌2份，清洗晾干后，破碎不去皮放入避光容器中，自然温度发酵450天；(2) 提取：取上述发酵液静置，过滤，并将滤液50℃减压浓缩得到浓缩液；(3) 富集：将浓缩液用ab-8型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至洗脱液无色，再用质量浓度为50%和75％的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，合并洗脱液，50℃减压浓缩至无醇，即得彝族传统发酵药总皂苷。
15.实施例3-一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，包括如下步骤：(1) 发酵：刺梨25份、余甘子15份、柠檬25份、人参3份、天麻3份、灵芝2份、蝉花2份、酵母菌10份，清洗晾干后，破碎不去皮放入避光容器中，自然温度发酵500天；(2) 提取：取上述发酵液静置，过滤，并将滤液40℃减压浓缩得到浓缩液；(3) 富集：将浓缩液用d101型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至洗脱液无色，再用质量浓度为55％和100%的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，合并洗脱液，30℃减压浓缩至无醇，即得彝族传统发酵药总皂苷。
16.实施例4-一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，包括如下步骤：(1) 发酵：刺梨10份、余甘子30份、柠檬5份、人参5份、天麻5份、灵芝10份、蝉花10份、酵母菌1份，清洗晾干后，破碎不去皮放入避光容器中，自然温度发酵600天；(2) 提取：取上述发酵液静置，过滤，并将滤液35℃减压浓缩得到浓缩液；(3) 富集：将浓缩液用lsa-30大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至洗脱液无色，再用质量浓度为80％的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，50℃减压浓缩至无醇，即得彝族传统发酵药总皂苷。
17.对比例1-依据实施例4的一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，仅改变步骤(1)中的自然温度发酵150天，其余的制备步骤和参数条件均相同，获得一种彝族传统发酵药总皂苷。
18.对比例2-依据实施例4的一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，仅改变步骤(2)中的将滤液95℃减压浓缩得到浓缩液，其余的制备步骤和参数条件均相同，获得一种彝族传统发酵药总皂苷。
19.对比例3-依据实施例4的一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，仅改变步骤(3)中的用lsa-10大孔吸附树脂吸附，其余的制备步骤和参数条件均相同，获得一种彝族传统发酵药总皂苷。
20.对比例4-依据实施例4的一种彝族传统发酵药总皂苷的制备方法，仅改变步骤(3)中的再用质量浓度为5％的乙醇洗脱至洗脱液不含总皂苷成分，其余的制备步骤和参数条件均相同，获得一种彝族传统发酵药总皂苷。
21.由上表可以看出，由实施例1～4制备获得的总皂苷含量均≥20％，由此看出由本发明的制备方法制得的一种彝族传统发酵药总皂苷的提取纯度高，且提取的效果稳定，且实施1～4的一种彝族传统发酵药总皂苷的提取纯度明显高于对比例1～4，对比例1中降低了发酵天数、对比例2中升高了减压浓缩温度、对比例3中更换了大孔吸附树脂型号和对比例4中降低了总皂苷洗脱液乙醇的质量浓度，均影响了彝族传统发酵药总皂苷的提取纯度。
22.一种彝族传统发酵药总皂苷对酪氨酸酶的抑制活性精密称取实施例1～4和对比例1～4总皂苷，置于1 ml量瓶中，0.05 mol/l磷酸盐缓冲液(ph=6.8)溶解并定容，2倍稀释法稀释成不同质量浓度，作为样品溶液。取100 μl置于96孔培养板中，加入80 μl l-酪氨酸溶液(2 mmol/l)，与20 μl酪氨酸酶溶液(600 μmol/l)充分混匀，37 ℃下孵育25 min，在490 nm波长处检测光密度(od)值。以抑制率为纵坐标，总皂苷质量浓度为横坐标绘制曲线，计算ic
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，测定酪氨酸酶抑制率，公式为抑制率=[1-(b-b1)/(a-a1)]
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100%表2：一种彝族传统发酵药总皂苷的酪氨酸酶的抑制活性
从以上试验结果表明：彝族传统发酵药总皂苷具有明显的酪氨酸酶的抑制作用。彝族传统发酵药总皂苷纯度降低后，酪氨酸酶的抑制活性也随之降低。
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以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。