本发明涉及抗生素制备领域，具体涉及一种复方硫酸庆大霉素注射液及其制备方法及其用途。
背景技术：
猪呼吸道疾病综合征是指猪在一定的应激环境下，病原共同作用导致猪只生长速度缓慢、料肉比升高、食欲减退、咳、喘、呼吸困难等一系列特征的疾病。
目前，猪呼吸道疾病综合征主要是由原发病原和继发病原混合感染引起的。其中由猪链球菌、副猪嗜血杆菌等导致的继发性感染有高淘汰率、高死亡率的特征。
调查显示，猪细菌性呼吸道病多发生在冬春季节，目前在我国已成为一种常见多发病。该病在猪只保育阶段和育肥阶段易感(6周龄～22周龄)，发病猪只主要表现为食欲废绝、热、喘、鼻腔及眼分泌物增加、呼吸加快等。据报道，猪细菌性呼吸道病发病率高死亡率低，死亡率随着发病猪只的年龄增长呈下降趋势。但康复猪只几乎丧失生产价值，猪细菌性呼吸道病给生猪养殖业带来的经济损失非常惨重。
猪细菌性呼吸道疾病综合征的危害患细菌性疾病综合征猪只的死亡，养殖者遭受巨大的经济损失。患病猪具有传染性，对其他健康猪只的健康也造成威胁。康复猪成长受抑制发育缓慢，出栏时间延长，料重比升高，养殖的综合成本提高。
另外存在一些人畜共患传染性疾病，对人类的健康甚至生命都构成了威胁。如猪链球菌，虽然在人类不常见，但病情严重甚至可致死。目前全球60多个国家报告，累计有近千人感染猪链球菌的病例，我国亦有人被感染的病例。
目前由于抗生素的滥用问题，导致许多细菌已经产生了耐药性，甚至出现了多重耐药菌株。
因此，如何使用现有的抗菌药物减缓细菌耐用性产生的同时增加疾病的治疗效率，是非常关键的。
技术实现要素：
为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的之一在于提供一种复方硫酸庆大霉素注射液。
本发明的目的之二在于所述复方硫酸庆大霉素注射液的制备方法。
本发明的目的之三在于所述复方硫酸庆大霉素注射液的用途。
为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：
一种复方硫酸庆大霉素注射液，其中，按含量百分比计算，包括：
硫酸庆大霉素10％；
盐酸林可霉素5％；
增效剂：甲氧苄啶1％；
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
溶剂：丙二醇20％；
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至5.0-6.0。
为了实现本发明的目的之二，所采用的技术方案是：
一种复方硫酸庆大霉素注射液的制备方法，包括如下步骤：
在所述注射用水当中加入所述偏重亚硫酸钠以及所述柠檬酸钠后搅拌溶解；
另取所述丙二醇加入所述甲氧苄啶后加温至50-60℃搅拌溶解；
合并上述两液后，依次加入所述硫酸庆大霉素和所述盐酸林可霉素后搅拌溶解；
用所述柠檬酸调节ph至4.5-6.5；
补加水至配制总量后进行过滤和充氮气、灌封操作后灭菌121℃×15min。
为了实现本发明的目的之三，所采用技术方案是：
一种复方硫酸庆大霉素注射液的用途，所述用途为制备用于治疗猪链球菌病感染的药物。
在本发明的一个优选实施例中，所述治疗猪链球菌病包括治疗猪链球菌或副猪嗜血杆菌感染。
本发明的有益效果在于：
本发明的复方注射液对副猪嗜血杆菌及猪链球菌有较强的杀灭作用，通过对现有的抗生素药的联合使用，提高了杀灭效果，减少了治疗成本。
具体实施方式
名词解释：
猪链球菌病
猪链球菌病是由多种致病性猪链球菌感染引起的一种人畜共患病。猪链球菌是猪的一种常见和重要病原体，也是人类动物源性脑膜炎的常见病因，可引起脑膜炎、败血症、心内膜炎、关节炎和肺炎，主要表现为发热和严重的毒血症状。
其中由猪链球菌、副猪嗜血杆菌等导致的继发性感染致死率高，危害严重,所以防治猪呼吸道疾病的首要任务是解决由革兰氏阳性菌猪链球菌、革兰氏阴性副猪嗜血杆菌引起的继发感染问题。而试验室从有临床症状的猪呼吸系统中分离到最常见致病菌有猪链球菌、副猪嗜血杆菌以及猪传染性胸膜肺炎放线杆菌等。其中支原体属猪肺炎支原体的检出率也非常高。
猪的呼吸系统对外源性异物有三道防线，这三道防线主要是及时清除病原体，产生免疫应答，恢复猪只自身健康。猪鼻内部的黏膜纤毛和特殊的鼻甲骨构造，可以将进入鼻中的空气进行湿润和过滤，此为第一道防线；支气管纤毛对病原体的黏附，此为第二道防线；进行清除致病菌和免疫应答的为第三道防线。此三条防线共同对外源性杂质、病毒、细菌进行清理和过滤，保证猪只的健康。当猪体遭受致病菌侵入或机体抵抗力降低等致病因素的影响时，易感猪群的呼吸系统极易遭受其他病原入侵受损，从而出现严重的呼吸系统疾病。
硫酸庆大霉素注射液
硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素，对各种革兰氏阳性、阴性细菌都有良好的抗菌作用。硫酸庆大霉素作用机制是与细菌核糖体30s亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成，并间接导致细菌细胞膜、细胞壁的缺损，对静止期细菌杀灭作用较强，且对许多致病菌具有抗生素后效应，在抗菌药物分类上属于第2类静止期杀菌剂。
硫酸庆大霉素由于其抗菌谱广且价格低廉，工艺成熟，性质稳定，因此在兽医临床使用非常广泛。硫酸庆大霉素注射液主要通过肌内注射，0.5h
短时间内即可达到血药峰浓度，吸收迅速、完全。血药峰浓度在皮下注射时稍有延缓。吸收后主要在细胞外液分布，药物可在腹水、胸水、脓液和关节液中出现。可透过胎盘组织，在胎畜中的浓度约为母体中的15％～50％。
硫酸庆大霉素的代谢主要通过肾小球经尿液排泄，约占投药量的40％～80％。主要用于链球菌、大肠杆菌、变形杆菌等敏感菌所引起的感染。如肠道、呼吸道、尿道、软组织等部位感染。李兰萍等通过试验得出，使用硫酸庆大霉素组治疗雏鸡白痢和鸡巴氏杆菌病疗效显著。吉沛华等在做硫酸庆大霉素与诺氟沙星治疗细菌性痢疾疗效比较，得知硫酸庆大霉素与诺氟沙星比较(p<0.05)，有统计学意义。硫酸庆大霉素不良反应小，对菌痢的治疗效果更好。王咏红等探讨12种抗生素对链球菌的敏感性证明，硫酸庆大霉素在治疗链球菌方面有优势。
综上所述，目前使用硫酸庆大霉素在临床上常用于治疗革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌感染。
盐酸林可霉素注射液
盐酸林可霉素是由链丝菌的变异菌株的发酵液中提取的林可霉素的盐酸盐。盐酸林可霉素为窄谱抗生素，主要对革兰氏阳性菌有效，特别对厌氧菌、肺炎球菌及多数链球菌有高效，亦可作为青霉素过敏患畜的替代药物。
盐酸林可霉素作用于敏感菌核糖体的50s亚基，通过阻止肽链的延长，从而抑制菌体蛋白的合成，产生抗菌作用。盐酸林可霉素一般为抑菌剂，但高浓度也具杀菌作用，在抗菌药物分类上属于第3类快效抑菌剂。
盐酸林可霉素主要治疗革兰氏阳性菌引起的感染，其属于窄谱抗生素类，有着不良反应少、不易产生耐药性、较少的药物残留以及很好的药效动力学特征。主要对肺炎球菌和多数链球菌及厌氧菌等革兰氏阳性菌有效。其机理是与敏感菌核糖体的50s亚基23rrna中心环结合，阻止肽链的延长，达到抑制菌体蛋白的合成的目的，产生抗菌作用，一般为抑菌剂，但高浓度也具杀菌作用。
盐酸林可霉素内服不易吸收，肌内注射吸收缓慢，吸收后广泛分布于体液和组织中，并可渗入骨组织，在骨髓内浓度较高。约50％在肝脏代谢，代谢产物仍具有活性。
而在现有的抗生素使用当中，由于部分细菌出现耐药性，因此经常需要加大药量，然而人们发现：
1.盐酸林可霉素注射液具有神经肌肉阻断作用。肌内注射给药可能会引起一过性腹泻或排软便。虽然极少见，如出现应采取必要的措施以防脱水。
2.硫酸庆大霉素主要的不良反应是对肾脏和第八对脑神经的损害，此外还有呼吸抑制作用，不宜进行推注。其中耳毒性能引起前庭损害，损害随着药物的累计而加重。
因此为了合理使用现有的抗生素，避免细菌进一步耐药性的产生和降低药量，为此申请人设计了一种复方硫酸庆大霉素注射液。
本发明的设计原理在于：
理论上，第2类与第3类抗生素合用可获得相加或协同作用，盐酸林可霉素和硫酸庆大霉素分别作用于细菌核糖体的50s和30s亚基通过不同途径阻断其蛋白质的合成，并使细菌细胞膜缺损，达到快速抑菌杀菌作用。
两药联用可快速抑制细菌蛋白质合成多个过程而杀菌。andreevap等报道，硫酸庆大霉素盐酸林可霉素体外联合应用对部分金黄色葡萄球菌、无乳链球菌具有协同作用。将硫酸庆大霉素盐酸林可霉素制成复方制剂既可以减少耐药性的发生，又可以降低毒副反应，对猪链球菌病的疗效显著提高。
且在结构层面，林可霉素属于林可胺类抗生素，林可胺类抗生素不仅对原发性病原-支原体有较强的杀灭作用，而且对继发性病原中的革兰氏阳性菌，如猪链球菌也有较强的杀灭作用。同时，庆大霉素作为氨基糖苷类抗生素，对继发性病原中的革兰氏阴性菌，如副猪嗜血杆菌具有较强的杀灭作用，从而实现了联合用药的目的。
实施例1
硫酸庆大霉素10％；
盐酸林可霉素5％；
增效剂：甲氧苄啶1％；
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
溶剂：丙二醇20％；
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至5.0-6.0。
配制方法：(以总量1000ml为例)
1、量取总量60％的注射用水，加入2g偏重亚硫酸钠、20g柠檬酸钠，搅拌溶解；
2、取处方量的丙二醇(200ml)，加入甲氧苄啶10g，加温至50-60℃，搅拌溶解；
3、合并上述两液，搅拌均匀；
4、分别加入100g硫酸庆大霉素、50g盐酸林可霉素，搅拌溶解；
5、用柠檬酸调节ph至4.5-6.5；
6、补加水至配制总量后，用0.45um聚醚砜滤芯过滤、充氮气、灌封后灭菌：121℃×15min。
对比例1
一种兽用复方硫酸庆大霉素注射液，含有如下组分，按含量百分比计算。
硫酸庆大霉素10％；
盐酸林可霉素5％；
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至4.5-6.5。
制备步骤同实施例1。
与实施例1相比，本对比例1没有添加增效剂，相同剂量药效比添加增效剂的差。
对比例2
一种兽用复方硫酸庆大霉素注射液，含有如下组分，按含量百分比计算。
硫酸庆大霉素10％；
盐酸林可霉素5％；
增效剂：甲氧苄啶2％
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
溶剂：丙二醇30％；
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至4.5-6.5。
制备步骤同实施例1，与实施例1相比，本实例增效剂加倍，相同剂量药效和不加倍的差不多。
对比例3
一种兽用复方硫酸庆大霉素注射液，含有如下组分，按含量百分比计算。
硫酸庆大霉素5％；
盐酸林可霉素10％；
增效剂：甲氧苄啶1％
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
溶剂：丙二醇20％；
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至4.5-6.5。
制备步骤同实施例1，
与实施例1相比，本实例主药含量调整，相同剂量药效差。
对比例4
一种兽用复方硫酸庆大霉素注射液，含有如下组分，按含量百分比计算。
硫酸庆大霉素10％；
盐酸林可霉素10％；
增效剂：甲氧苄啶1％
抗氧剂：偏重亚硫酸钠0.2％；
稳定剂：柠檬酸钠2％；
溶剂：丙二醇20％
余量为注射用水，采用柠檬酸将ph调节至4.5-6.5。
制备步骤同实施例1，
与实施例1相比，本实例主药含量调整，相同剂量药效差异不明显。
而现有专利201010176388.2的主成分包括：
硫酸庆大霉素4％；
氧氟沙星2％；
安乃近30％；
甲氧苄啶1.5％。
为加强兽药标准管理，保证兽药安全有效、质量可控和动物性食品安全，根据国家相关规定，明确废止注射用的抗生素、与安乃近、氟喹诺酮类的化学合成药物的复方制剂。
而现有专利201010176388.2的硫酸庆大霉素属注射用的抗生素、氧氟沙星属氟喹诺酮类的化学合成药物，且配方中含有解热镇痛药安乃近30％。该制剂可能对养殖业、人体健康造成危害或者存在潜在风险。
而本发明的优点在于：
庆大霉素对多种革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌有效。多数链球菌、厌氧菌等对本品耐药。
林可霉素主要抗革兰氏阳性菌和厌氧菌感染。临床常用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感染。
庆大霉素与林可霉素合用时，可扩大抗菌谱，增加药效，对葡萄球菌、链球菌等革兰氏阳性菌有显著协同作用。同时可用于支原体感染等，且庆大霉素、林可霉素可用于食品动物。
加入甲氧苄啶，可显著提高该复方制剂药效，增强疗效。
一、硫酸庆大霉素盐酸林可霉素注射液的破坏性试验和影响因素试验的数据结果。
该复方制剂(硫酸庆大10％、盐酸林可霉素5％、甲氧苄啶1％)、对比例3(硫酸庆大霉素5％、盐酸林可霉素10％、甲氧苄啶1％)、对比例4(硫酸庆大霉素10％、盐酸林可霉素10％、甲氧苄啶1％)样品制剂的稳定性试验：光照试验、加速试验、长期试验
(1)光照试验
含量变化如下表1：
表1
ph值变化如下表2：
表2
颜色变化如下表3：
表3
(2)3种样品制剂的加速试验
含量变化如下表4：
表4
ph值变化如下表5：
颜色变化如下表6：
表6
(3)3种样品制剂的长期试验如下表7：
表7
根据上述表格，可以得出：
根据加速试验、长期试验可得3种制剂的温度稳定性：实例4和实例5稳定性略差，而该复方制剂基本稳定。
根据稳定性试验结果，与生理适应ph值的接近程度等各项因素，说明该复方制剂(硫酸庆大霉素10％、盐酸林可霉素5％、甲氧苄啶1％)该配方为最佳配方。
(3)ⅱ期临床动物试验数据
从某猪场中选择和确定经过确诊为猪链球菌病的病猪160头，选取对比例3(硫酸庆大霉素5％、盐酸林可霉素10％、甲氧苄啶1％)、对比例4(硫酸庆大霉素10％、盐酸林可霉素10％、甲氧苄啶1％)、单方林可霉素与单方阿莫西林分别进行分组与给药。
各试验组用药后的临床疗效比较见表8：
表8
由上表8可见，本次试验中肌内注射该复方制剂高、中剂量组对自然病例猪链球菌的治愈率分别为83.3％、81.0％，有效率分别为92.7％、90.3％；对比例3、对比例4、林可霉素与阿莫西林对照组对自然病例猪链球菌的治愈率分别为75.5％、70.1％、66.0％、65.5％，有效率分别为82.6％、80.2％、73.0％、72.8％。
本发明的复方制剂高、中剂量组与对比例3、对比例4对照组差异性显著(0.01<p<0.05)；该复方制剂高、中剂量组与林可霉素、阿莫西林对照组、发病不给药组比较差异极显著(p<0.01)。说明该复方制剂的高、中剂量组对猪链球菌有良好的疗效。