平卧菊三七萃取物用于制备改善睡眠品质的组合物及制备保健心血管的组合物的用途的制作方法

本发明涉及一种平卧菊三七萃取物的用途，特别是关于平卧菊三七萃取物用于制备改善睡眠品质的组合物及制备保健心血管的组合物的用途。
背景技术：
：平卧菊三七(学名：gynuraprocumbens(lour.)merr.)，又称平卧土三七，俗名为神仙草。其为菊科菊三七属下的一个种。平卧菊三七属于攀援草本植物，其茎匍匐、其叶具柄且叶片呈卵形。一般而言，平卧菊三七分布于中国广东、海南、贵州、云南、越南、泰国、印度尼西亚和非洲等区域。其生长在林间溪旁坡地砂质土上，攀援于灌木或乔木上。平卧菊三七为一种无毒级的药食兼可的植物，其根茎叶皆可使用。其中，平卧菊三七的根茎可作为中成药的原材料，且其鲜叶和嫩茎营养丰富，可作为中老年人补钙的绿色食品。此外，平卧菊三七的叶亦可生食，且其鲜叶可以开水冲泡当作茶饮使用。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供平卧菊三七萃取物的用途。在一些实施例中，一种平卧菊三七萃取物用于制备改善睡眠品质的组合物的用途，其中组合物包括作为用于调节褪黑激素合成基因的表现量的活性成分的平卧菊三七萃取物。在一些实施例中，一种平卧菊三七萃取物用于制备保健心血管的组合物的用途，其中组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物。此活性成分用于调节胆固醇的代谢基因的表现量、高密度脂蛋白生成基因的表现量、血栓生成相关基因的表现量、血管保健相关基因的表现量或其组合。综上所述，任一实施例的平卧菊三七萃取物可用以制备改善睡眠品质的组合物或制备保健心血管的组合物。在一些实施例中，组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物，且此活性成分可用于调节褪黑激素合成基因(如，aanat基因)的表现量。并且，所制备的组合物可用于改善失眠、提升深眠占比或其组合，从而达成改善睡眠品质的用途。在一些实施例中，组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物，且此活性成分可用于调节胆固醇的代谢基因的表现量(如，cept基因及scarb1基因)、高密度脂蛋白生成基因的表现量(如，abca1基因)、血栓生成相关基因的表现量(如，edn1基因、f3基因及serpine1基因)、血管舒张因子相关基因的表现量(如，ptgis基因)或其组合。并且，所制备的组合物具有降低心血管疾病的潜力，从而达成血管保健的用途。附图说明图1是实验组及控制组的aanat基因的相对基因表现倍率的结果图；图2是实验组及控制组的cetp基因及scarb1基因的相对基因表现倍率的结果图；图3是实验组及控制组的abca1基因的相对基因表现倍率的结果图；图4是实验组及控制组的edn1、f3及serpine1基因的相对基因表现倍率的结果图；图5是实验组及控制组的ptgis基因的相对基因表现倍率的结果图；图6是实验组及对照组于第0周及第4周的aanat基因的相对基因表现倍率的结果图；图7是实验组及对照组于第0周及第4周的深眠占比百分率的结果图；以及图8是实验组及对照组于第0周及第4周的睡眠品质差程度百分率的结果图。具体实施方式以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。平卧菊三七(gynuraprocumbens)，俗称为神仙草，具有清热解毒、止血止咳、提高人体免疫力和抗病毒能力、补钙、抗感冒、提高免疫力等功效。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物(gynuraprocumbensextract，或称longevityspinachextraction)是将平卧菊三七的完整植株(wholeplant)进行磨碎、萃取、过滤、浓缩、杀菌并干燥后得到。举例来说，将完整植株切碎后，以萃取溶剂进行萃取以得到初萃取液，接着将初萃取液过滤去除杂质后，接着将过滤后的初萃取液进行浓缩以得到浓缩液。接着将浓缩液杀菌，并将杀菌后的浓缩液以喷雾干燥的方式干燥为粉末。于此，干燥后的粉末中包含作为活性成分的平卧菊三七萃取物。在一些实施例中，含有平卧菊三七萃取物的粉末亦可购自厂商(长沙农建，中国)。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物用于制备改善睡眠品质的组合物。组合物包括作为用于调节褪黑激素合成基因的表现量的活性成分的平卧菊三七萃取物。在一些实施例中，褪黑激素合成基因为aanat基因。举例来说，以作为活性成分的平卧菊三七萃取物所制备的组合物可提升褪黑激素合成基因的表现量。在一些实施例中，含有平卧菊三七萃取物的组合物是通过提升深眠占比，从而改善睡眠品质。在一些实施例中，含有平卧菊三七萃取物的组合物是通过改善失眠，从而改善睡眠品质。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物用于制备保健心血管的组合物。组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物。并且，此活性成分用于调节胆固醇的代谢基因的表现量、高密度脂蛋白生成基因的表现量、血栓生成相关基因的表现量、血管舒张因子相关基因的表现量或其组合。举例来说，以作为活性成分的平卧菊三七萃取物所制备的组合物可具有下列至少一种功用：提升胆固醇的代谢基因的表现量、提升高密度脂蛋白生成基因的表现量、降低血栓生成相关基因的表现量及提升血管舒张因子相关基因的表现量。在一些实施例中，胆固醇的代谢基因包括cept基因及scarb1基因。当cept基因及scarb1基因(又称srb1基因)的表现量提高时，代表胆固醇的代谢能力提升。在一些实施例中，高密度脂蛋白生成基因为abca1基因。当abca1基因的表现量提高时，代表高密度脂蛋白的生成量亦提升。在一些实施例中，血栓生成相关基因包括edn1基因、f3基因及serpine1基因。当edn1基因、f3基因及serpine1基因的表现量下降时，代表血栓生成的可能性降低。在一些实施例中，血管舒张因子相关基因为ptgis基因。当ptgis基因的表现量上升时，代表内皮源性血管舒张因子的表现量亦提升。在生物体中，平卧菊三七萃取物依照其投予剂量、投予剂型及投予方式影响生物体内的一种或多种的基因(如，褪黑激素合成基因、胆固醇的代谢基因、高密度脂蛋白生成基因、血栓生成相关基因、血管舒张因子相关基因或其组合)的表现量。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物所制备的组合物可同时调节褪黑激素合成基因、胆固醇的代谢基因、高密度脂蛋白生成基因、血栓生成相关基因及血管舒张因子相关基因。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物所制备的组合物可同时调节胆固醇的代谢基因的表现量及高密度脂蛋白生成基因的表现量，或同时调节血栓生成相关基因的表现量及血管舒张因子相关基因的表现量。在一些实施例中，平卧菊三七萃取物所制备的组合物可同时调节胆固醇的代谢基因的表现量及血栓生成相关基因的表现量。在一些实施例中，以平卧菊三七萃取物所制备的组合物更包括佐剂。举例来说，佐剂可以为麦芽糖糊精(maltodextrin)、食物添加剂或其组合。举例来说，食物添加剂可以为苹果酸、蔗糖素、柠檬酸、水果香料、蜂蜜香料、甜菊糖苷或其组合。在一示范例中，将平卧菊三七萃取物与麦芽糖糊精(metodextrin)以9:1的重量比例混合以形成第一组合物(购自长沙农建，中国)。在另一示范例中，将平卧菊三七萃取物及佐剂混合以形成第二组合物。举例来说，将第一组合物(购自长沙农建，中国)、麦芽糖糊精及食品添加物混合以形成第二组合物，且此第二组合物包括15.75重量％平卧菊三七萃取物、72重量％麦芽糖糊精、4.5重量％水及7.75重量％食物添加剂。于此，在一些实施例中，以作为活性成分的平卧菊三七萃取物所制备的组合物可以通过将平卧菊三七进行萃取处理得到的平卧菊三七萃取物再加工后得到。范例一：睡眠相关的细胞基因实验褪黑激素可调节人类生理时钟的运作，但随着年龄增加，褪黑激素的分泌会减少而导致失眠的状态发生。因此，提高褪黑激素的表现有助于改善睡眠品质。于此，范例一将含有90重量％平卧菊三七萃取物及10％麦芽糖糊精的第一组合物(购自长沙农建，中国)用以测试卧菊三七萃取物对于人类神经细胞(sh-sy5y)(购自atcc)中的褪黑激素生成基因的表现量的影响。举例来说，褪黑激素生成基因为aanat基因(geneid:15)，aanat基因编码的蛋白质为参与褪黑激素(melatonin)合成途径的酵素之一，并可催化血清素(serotonin)合成褪黑激素。因此，范例一中以aanat基因作为分析标的。首先，将人类神经细胞培养于ebss培养液(ham'sf12及dmem以1：1体积比混合(gibc；cat.11320033)。接着，分别取105个人类神经细胞至每孔含有2毫升ebss培养液的六孔细胞培养盘中于37℃下培养24小时，并将每孔培养后的人类神经细胞依据下列测试条件分为实验组及控制组(共二组)以处理每孔培养后的人类神经细胞。实验组：依照每毫升ebss培养液含有0.25毫克第一组合物的比例(即，浓度为0.25毫克/毫升)将第一组合添加至含有培养后的人类神经细胞的ebss培养液中。控制组：不作任何处理，即不额外添加其他化合物至含有培养后的人类神经细胞的ebss培养液中。将实验组及控制组于37℃下再次培养24小时，以使实验组中的第一组合物处理培养后的人类神经细胞，而控制组则作为对照组以与实验组进行比较。将处理后的人类神经细胞(即实验组)及未处理人的类神经细胞(即控制组)以细胞裂解液分别破细胞膜以形成二组的细胞溶液。接着，以rna萃取试剂套组(购自geneaid公司，中国台湾，lotno.fc24015-g)分别萃取二组细胞溶液内的rna。接着，每组取1000奈克(ng)的萃取出的rna作为模板，透过反转录酶(购自invitrogene公司，美国，编号18080-051)将萃取出的rna反转录为相应的cdna。再通过abisteponeplustm即时pcr系统(abisteponeplustmreal-timepcrsystem(thermofisherscientific公司，美国))、kapasybrfast(购自sigma公司，美国，编号38220000000)及表1的引子(seqidno:1及seqidno:2)对二组的cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应(quantitativereal-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction)以观察实验组和控制组的人类神经细胞内的aanat基因的表现量。定量即时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应20秒，接着95℃反应3秒，60℃反应30秒，并重复40个回圈，并使用2-δct方法进行基因定量。于此，通过cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应可间接定量aanat基因的mrna表现量，从而推断aanat基因编码的蛋白质的表现量。表1引子名称序列编号引子序列aanat-fseqidno:1aacgtcatgacccctcagaagtaanat-rseqidno:2attcactgtgcctcaccctgta需要特别说明的是，下文述及的附图中显示的aanat基因的相对基因表现是以相对倍率呈现，其中使用excel软件的stdev公式计算标准差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。附图中“*”代表p值小于0.05，“**”代表p值小于0.01，以及“***”代表p值小于0.001。当“*”越多时，代表统计上的差异越显著。请参阅图1。将控制组的aanat基因的表现量视为1(即100％)时，实验组相对于控制组的aanat基因的表现量为1.36(即136％)，代表实验组的aanat基因的表现量为控制组的1.36倍。换言之，实验组相较于控制组的aanat基因的表现量上升36％。由此可知，当人类神经细胞以含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物处理后，人类神经细胞的aanat基因的表现量提高，代表褪黑激素生成基因的表现量提高。当褪黑激素生成基因的表现量提高时，褪黑激素的表现量亦提高。因此，含有平卧菊三七萃取物的组合物具有改善睡眠品质的功效。范例二：睡眠相关的人体功效实验募集多位睡眠品质差的受试者，并且针对含有15.75重量％平卧菊三七萃取物的第二组合物进行睡眠品质试验(下称试验)。并且，于试验前每位受试者以匹兹堡睡眠品质指数(pittsburghsleepqualityindex，psqi)量表测试匹兹堡睡眠品质指数，且当匹兹堡睡眠品质指数越高则代表受试者认为自己的睡眠品质越差。受试者人数共7人，且每位受试者的匹兹堡睡眠品质指数均大于5。此试验的时间长度共4周，于试验期间，受试者每日睡前一小时服用4克的第二组合物，换言之，受试者每日服用0.7克的平卧菊三七萃取物。第二组合物是以第一组合物(购自长沙农建，中国)及佐剂混合而成，其配方为每100克的第二组合物中，含有15.75克的平卧菊三七萃取物、76.5克的麦芽糖糊精混合物(以72克麦芽糖糊精及4.5克的水混合)、0.25克的蔗糖素、0.5克的甜菊醣苷、2.25克的水果香料粉，以及5克的苹果酸和无水柠檬酸。并且，于试验前(即受试者未服用第二组合物的状态，视为第0周，以下称第0周)、试验后(即第4周)检测三项睡眠相关实验。三项睡眠相关实验为受试者血液中的褪黑激素生成相关基因(范例二中以aanat基因作为标的)的表现量(如图2所示)、以智能手环侦测受试者的深眠占比(如图3所示)、以匹兹堡睡眠品质指数评估受试者的睡眠品质差程度(如图4所示)。需要特别说明的是，附图中显示的aanat基因的相对基因表现是以相对倍率呈现、图示中显示的深眠占比及睡眠品质差程度是以百分比呈现，其中使用excel软件的stdev公式计算标准差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。实验(一)受试者第0周及第4周的aanat基因的表现量于试验前(即第0周)及试验后(即第4周)分别使用含edta抗凝剂的紫头采血管收集7位受试者的静脉血各6毫升，接着将抽取后的静脉血以转速300xg离心15分钟。自离心后的静脉血取2毫升的血沉棕黄层(buffycoat)的白细胞层，并将白细胞层以2毫升磷酸缓冲液(1xpbs；以下称1xpbs缓冲液)稀释为4毫升，接着在稀释后的白细胞层中缓慢加入至含有3毫升的细胞分离液(ficoll-paqueplus细胞分离液)的离心管，其中加入期间稀释后的白细胞层与细胞分离液须为分层状态，不能混合。接着，将装有分层的稀释后的白细胞层与细胞分离液的离心管以400xg离心40分钟，并于离心后去除上清液，取上述离心后离心管内的中间层内的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,pbmc；以下称pbmc)2至3毫升。将pbmc以3倍体积的1xpbs缓冲液润洗后与前述1xpbs缓冲液混合均匀以形成pbmc混合液。接着将pbmc混合液以转速300xg离心10分钟以形成pbmc上液及pbmc沉淀物，并取pbmc沉淀物以600微升(μl)rna裂解缓冲液裂解后抽取rna。接着，如范例一的步骤，将萃取出rna的反转录为cdna后进行定量即时反转录聚合酶连锁反应以观察第0周及第4周血液中的aanat基因的表现量。请参阅图2。将第0周的7位受试者的aanat基因的平均表现量视为1(即100％)时，第4周的aanat基因的平均表现量为3.45(即345％)，代表第4周的aanat基因的平均表现量为第0周的3.45倍。由此可知，当使用者每日投予含有15.75重量％平卧菊三七萃取物的第二组合物并持续投予4周时，使用者血液中的aanat基因的表现量提高，代表aanat基因编码的蛋白质的表现量提高。并且，aanat基因编码的蛋白质作为参与褪黑激素生成途径的酵素，可将血清素反应为n-乙酰血清素(n-acetylserotonin)，n-乙酰血清素是从血清素到褪黑素的内源性合成的反应中间体。换言之，当aanat基因的表现量提高时，褪黑激素的表现量亦提高，从而具有改善睡眠品质的功效。实验(二)受试者第0周及第4周的深眠占比正常状态下人类每晚会有4至5次的睡眠周期，且每次睡眠周期分为四个阶段。其中，“深眠”状态发生于第三及第四阶段。“深眠”或称为深度睡眠也被称为慢波睡眠(slowwavesleep,sws)，当人体进入深眠状态时，脑波的变化大，其频率及震幅增加。并且，每晚的第一次睡眠周期的深眠状态通常持续45至90分钟，且睡眠状态的时间会随着睡眠周期次数增加而缩短。一般而言，深眠状态占睡眠周期的比例(即深眠占比)可代表睡眠品质的好坏，当深眠占比提高，代表睡眠品质亦提高。因此，实验(二)以深眠占比做为测试项目。于试验前(即第0周)，先以智能手环监测受试者的睡眠状况，并于试验后(即第4周)再次以智能手环监测受试者的睡眠状况，从而观察受试者的深眠占比。在实验(二)中，受试者配戴小米智能手环，并利用手环内建加速度传感器及光电式心律传感器，根据受试者于睡眠期间的手臂活动变量及其心律评估深眠与浅眠占比。此外，深眠状态下受试者的手臂活动量低且心率较平稳。请参阅图3。于第0周时，7位受试者的平均深眠占比为31.3％。而于第4周时，7位受试者的平均深眠占比为35.6％。换言之，7位受试者的平均深眠占比提升4.3％，代表受试者在服用第二组合物后，其睡眠周期中的深眠状态的时间增长。于此，可知服用含有15.75重量％平卧局三七萃取物的组合物可通过提高深眠占比以改善睡眠品质。实验(三)受试者第0周及第4周的睡眠品质差程度于试验前(即第0周)时，先以匹兹堡睡眠品质指数量表测试7位受试者的匹兹堡睡眠品质指数，并于试验后(即第4周)再次以匹兹堡睡眠品质指数量表测试7位受试者的匹兹堡睡眠品质指数，从而观察受试者的睡眠品质差程度。匹兹堡睡眠品质指数量表主要是评估测试者的睡眠品质，其内容包含包括睡眠品质、睡眠迟滞期、睡眠总时数、习惯性睡眠效率、睡眠困扰(如失眠)、安眠药的使用及日间功能失调等七项指标，此外更包括是否因咳嗽、燥热等生理因素导致睡眠中断等评估因素。请参阅图4。将第0周的7位受试者的睡眠品质差程度视为100％时，第4周的7位受试者的睡眠品质差程度为67.9％。换言之，7位受试者的睡眠品质差程度下降32.1％，代表7位受试者的睡眠品质提高。由此可知，当使用者依照每一个体每日投予含有15.75重量％平卧菊三七萃取物的第二组合物并持续投予4周时，使用者血液中的aanat基因的表现量提高、深眠占比提高及睡眠品质差程度下降。於此，实验(一)至(三)验证当每一个体投予含有15.75重量％平卧菊三七萃取物的组合物，并在持续投予4周后，可透过提升个体深眠占比、及/或改善个体失眠状态以改善个体的睡眠品质。范例三：中高密度胆固醇相关的细胞基因实验将含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物(购自长沙农建，中国)用以测试卧菊三七萃取物对于人类肝脏细胞(hepg2)(购自atcc)中的高密度脂蛋白生成基因及胆固醇的代谢基因。举例来说，高密度脂蛋白生成基因为abca1基因(geneid:19)，且abca1基因编码的蛋白质可促进高密度脂蛋白的生成与胆固醇代谢。胆固醇的代谢基因包括cetp基因(geneid:1071)和scarb1基因(geneid:949)。其中，cetp基因编码的蛋白质为血浆胆固醇酯转移蛋白，是作为脂质代谢中的重要的转运蛋白之一，而scarb1基因所编码的蛋白质为肝脏上高密度脂蛋白(hdl)的受器，可促进肝脏进行胆固醇代谢。因此，范例三中以abca1基因、cetp基因及scarb1基因作为分析标的。首先，将人类肝脏细胞培养于dmem(dulbecco’smodifiedeagle’s)培养液(gibco；cat.11965-092)。接着，分别取105个人类肝脏细胞至每孔含有2毫升dmem培养液的六孔细胞培养盘中于37℃下培养24小时。并将每孔培养后的人类肝脏细胞依据下列测试条件分为二组以处理每孔培养后的人类肝脏细胞。实验组：依照每毫升dmem培养液含有0.5毫克第一组合物的比例(即，浓度为0.5毫克/毫升)将第一组合添加至含有培养后的人类肝脏细胞的dmem培养液中。控制组：不作任何处理，即不额外添加其他化合物至含有培养后的人类肝脏细胞的dmem培养液中。将实验组及控制组于37℃下再次培养48小时，以使实验组中的第一组合物处理培养后的人类肝脏细胞，而控制组则作为对照组以与实验组进行比较。将处理后的人类肝脏细胞(即实验组)及未处理的人类肝脏细胞(即控制组)以细胞裂解液分别破细胞膜以形成二组的细胞溶液。接着，以rna萃取试剂套组(购自geneaid公司，中国台湾，lotno.fc35901-dg)分别萃取二组细胞溶液内的rna。接着，实验组及控制组每组各取1000奈克(ng)的萃取出的rna作为模板，透过反转录酶(购自invitrogene公司，美国，编号18080-051)将萃取出的rna反转录为相应的cdna。再通过abisteponeplustm即时pcr系统(abisteponeplustmreal-timepcrsystem(thermofisherscientific公司，美国))、kapasybrfast(购自sigma公司，美国，编号38220000000)及表2的引子(seqidno:3至seqidno:8)对二组的cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应(quantitativereal-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction)以观察实验组和控制组的人类肝脏细胞内的abca1基因、cetp基因及scarb1基因的表现量。定量即时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应20秒，接着95℃反应3秒，60℃反应30秒，并重复40个回圈，并使用2-δct方法进行基因定量。于此，通过cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应可间接定量abca1基因、cetp基因及scarb1基因的mrna表现量，从而推断abca1基因、cetp基因及scarb1基因编码的蛋白质的表现量。表2引子名称序列编号引子序列abca1-fseqidno:3aatcatggtcaatggaaggttcaabca1-rseqidno:4aagatggaagctggtattgtagcascarb1-fseqidno:5actccgactctgggctcttcascarb1-rseqidno:6ggcctccgggctgtagaacetp-fseqidno:7gcccagaccagcaacattctcetp-rseqidno:8gatgcccacagcggtgat需要特别说明的是，下文述及的附图中显示的abca1基因、cetp基因及scarb1基因的相对基因表现是以相对倍率呈现，其中使用excel软件的stdev公式计算标准差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。附图中“*”代表p值小于0.05，“**”代表p值小于0.01，以及“***”代表p值小于0.001。当“*”越多时，代表统计上的差异越显著。请参阅图5。将控制组的abca1基因的表现量视为1(即100％)时，实验组相对于控制组的abca1基因的表现量为1.58(即158％)，代表实验组的abca1基因的表现量为控制组的1.58倍。换言之，实验组相较于控制组的abca1基因的表现量上升58％。由此可知，当人类肝脏细胞以含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物处理后，人类肝脏细胞的abca1基因的表现量提高，代表高密度脂蛋白生成基因的表现量提高。当高密度脂蛋白生成基因的表现量提高时，高密度脂蛋白的表现量亦提高，具有保健心血管的功效。请参阅图6。将控制组的cetp基因及scarb1基因的表现量视为1时，实验组相对于控制组的cetp基因的表现量为198.32，且scarb1基因的表现量为206.88，代表实验组的cetp基因的表现量为控制组的198.32倍，且其scarb1基因的表现量为控制组的206.88倍。换言之，实验组相较于控制组的cetp基因及scarb1基因的表现量上升各约200％。由此可知，当人类肝脏细胞以含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物处理后，人类肝脏细胞的cetp基因及scarb1基因的表现量提高，代表胆固醇的代谢基因的表现量提高。当胆固醇的代谢基因的表现量提高时，胆固醇的代谢力提高。因此，含有平卧菊三七萃取物的组合物具有降低心血管疾病的潜力，从而达成保健心血管的功效。范例四：心血管保健相关的细胞基因实验将含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物(购自长沙农建，中国)用以测试卧菊三七萃取物对于人类血管内皮细胞(huvec)(购自bcrc)中的血管保健相关基因及血栓生成相关基因。举例来说，血管保健相关基因为ptgis基因(geneid:5740)，且ptgis基因编码的蛋白质为内皮源性血管舒张因子。血栓生成相关基因包括edn1基因(geneid:1906)、f3基因(geneid:2152)和serpine1基因(geneid:5054)。其中，edn1基因所编码的蛋白质水解后的胜肽可作为血管收缩剂、f3基因所编码的蛋白质与凝血机制相关，以及serpine1基因所编码的蛋白质是作为一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。因此，范例四中以ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因作为分析标的。首先，将人类血管内皮细胞培养于ec培养液(gibc；cat.m-200-500)。接着，分别取105个人类血管内皮细胞至每孔含有2毫升ec培养液的六孔细胞培养盘中于37℃下培养24小时。并将每孔培养后的人类血管内皮细胞依据下列测试条件分为二组以处理每孔培养后的人类血管内皮细胞。实验组：加入0.125体积％的第一组合物至含有培养后的人类血管内皮细胞的ec培养液中。控制组：不作任何处理，即不额外添加其他化合物至含有培养后的人类血管内皮细胞的ec培养液中。将实验组及控制组于37℃下再次培养6小时，以使实验组中的第一组合物处理培养后的人类血管内皮细胞，而控制组则作为对照组以与实验组进行比较。将处理后的人类血管内皮细胞(即实验组)及未处理人的类血管内皮细胞(即控制组)以细胞裂解液分别破细胞膜以形成二组的细胞溶液。接着，以rna萃取试剂套组(购自geneaid公司，中国台湾，lotno.fc24015-g)分别萃取二组细胞溶液内的rna。接着，实验组及控制组每组各取1000奈克(ng)的萃取出的rna作为模板，透过反转录酶(购自invitrogene公司，美国，编号18080-051)将萃取出的rna反转录为相应的cdna。再通过abisteponeplustm即时pcr系统(abisteponeplustmreal-timepcrsystem(thermofisherscientific公司，美国))、kapasybrfast(购自sigma公司，美国，编号38220000000)及表3的引子(seqidno:9至seqidno:20)对二组的cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应(quantitativereal-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction)以观察实验组和控制组的人类血管内皮细胞内的ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因的表现量。定量即时反转录聚合酶连锁反应的仪器设定条件为95℃反应20秒，接着95℃反应3秒，60℃反应30秒，并重复40个回圈，并使用2-δct方法进行基因定量。于此，通过cdna进行定量即时反转录聚合酶连锁反应可间接定量ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因的mrna表现量，从而推断ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因编码的蛋白质的表现量。表3引子名称序列编号引子序列ptgis-fseqidno:9ggcagacgggcgagaatptgis-rseqidno:10ccccccagggcatgttedn1-fseqidno:11cacgttgttccgtatggacttgedn1-rseqidno:12cctttcttatgattattccagtctttctcf3-fseqidno:13cgtacttggcacgggtcttcf3-rseqidno:14ccttctgactaaagtccgttcatctserpine1-fseqidno:15gtggagagagccagattcatcatserpine1-rseqidno:16ctgccgtctgatttgtggaa需要特别说明的是，下文述及的附图中显示的ptgis基因、edn1基因、f3基因和serpine1基因的相对基因表现是以相对倍率呈现，其中使用excel软件的stdev公式计算标准差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。附图中“*”代表p值小于0.05，“**”代表p值小于0.01，以及“***”代表p值小于0.001。当“*”越多时，代表统计上的差异越显著。请参阅图7。将控制组的ptgis基因的表现量视为1(即100％)时，实验组相对于控制组的ptgis基因的表现量为1.42(即142％)，代表实验组的ptgis基因的表现量为控制组的1.42倍。换言之，实验组相较于控制组的ptgis基因的表现量提高42％。由此可知，当人类血管内皮细胞以含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物处理后，人类血管内皮细胞的ptgis基因的表现量提高，代表血管舒张因子相关基因的表现量提高。当血管舒张因子相关基因的表现量提高时，血管舒张因子相关基因编码的蛋白质的表现量亦提高，具有保健心血管的功效。请参阅图8。将控制组的edn1基因、f3基因和serpine1基因的表现量视为1(即100％)时，实验组相对于控制组的edn1基因的表现量为0.72(即72％)、f3基因的表现量为0.61(即61％)且serpine1基因的表现量为0.91(即91％)，代表实验组的edn1基因的表现量下降为控制组的0.72倍、f3基因的表现量下降为控制组的0.61倍且serpine1基因的表现量下降为控制组的0.91倍。换言之，实验组相较于控制组的edn1基因的表现量下降28％、f3基因的表现量下降39％，及serpine1基因的表现量下降9％。由此可知，当人类血管内皮细胞以含有90重量％平卧菊三七萃取物的第一组合物处理后，人类血管内皮细胞的edn1基因、f3基因和serpine1基因的表现量下降，代表血栓生成相关基因的表现量下降。当血栓生成相关基因的表现量下降时，血栓生成的量亦下降，具有保健心血管的功效。于此，通过平卧菊三七萃取物制备的组合物，其可用以改善睡眠品质及保健心血管。并且，此组合物至少具有调节aanat基因、abca1基因、cept基因、scarb1基因、ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因中至少一项基因表现的能力。在一些实施例中，组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物，且此活性成分可用于提升aanat基因的表现量，因此，所制备的组合物可用于改善失眠及/或提升深眠占比，从而改善睡眠品质。在一些实施例中，组合物包括作为活性成分的平卧菊三七萃取物，且此活性成分可用于提升cept基因及scarb1基因的表现量、提升abca1基因的表现量、降低edn1基因、f3基因及serpine1基因的表现量、提升ptgis基因的表现量或其组合。因此，所制备的组合物具有降低心血管疾病的潜力，以及具有保健心血管的功效。综上，根据本发明任一实施例的以平卧菊三七萃取物作为活性成分的组合物，其可调节aanat基因、abca1基因、cept基因、scarb1基因、ptgis基因、edn1基因、f3基因及serpine1基因中至少一项基因表现的能力。因此，以平卧菊三七萃取物作为活性成分的组合物可具有下列至少一种功用：改善失眠、提升深眠占比、改善睡眠品质、提升胆固醇代谢力、促进高密度脂蛋白生成、降低血栓生成、保健心血管或其组合。虽然本发明以前述的实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习相像技术者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更动与润饰，因此本发明的专利保护范围须视本说明书所附的权利要求书所界定者为准。序列表<110>大江生医<120>平卧菊三七萃取物用于制备改善睡眠品质的组合物及制备保健心血管的组合物的用途<130>929-1099.20p1<150>us62/859,743<151>2019-06-11<160>16<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>22<212>dna<213>artificialsequence<400>1aacgtcatgacccctcagaagt22<210>2<211>22<212>dna<213>artificialsequence<400>2attcactgtgcctcaccctgta22<210>3<211>23<212>dna<213>artificialsequence<400>3aatcatggtcaatggaaggttca23<210>4<211>24<212>dna<213>artificialsequence<400>4aagatggaagctggtattgtagca24<210>5<211>21<212>dna<213>artificialsequence<400>5actccgactctgggctcttca21<210>6<211>18<212>dna<213>artificialsequence<400>6ggcctccgggctgtagaa18<210>7<211>20<212>dna<213>artificialsequence<400>7gcccagaccagcaacattct20<210>8<211>18<212>dna<213>artificialsequence<400>8gatgcccacagcggtgat18<210>9<211>17<212>dna<213>artificialsequence<400>9ggcagacgggcgagaat17<210>10<211>16<212>dna<213>artificialsequence<400>10ccccccagggcatgtt16<210>11<211>22<212>dna<213>artificialsequence<400>11cacgttgttccgtatggacttg22<210>12<211>29<212>dna<213>artificialsequence<400>12cctttcttatgattattccagtctttctc29<210>13<211>20<212>dna<213>artificialsequence<400>13cgtacttggcacgggtcttc20<210>14<211>25<212>dna<213>artificialsequence<400>14ccttctgactaaagtccgttcatct25<210>15<211>23<212>dna<213>artificialsequence<400>15gtggagagagccagattcatcat23<210>16<211>20<212>dna<213>artificialsequence<400>16ctgccgtctgatttgtggaa20当前第1页12