肉苁蓉抗氧化胶囊的开发和应用的制作方法

本发明涉及肉苁蓉开发技术领域，具体涉及一种抗氧化抗衰老的天然产品的开发和应用。

背景技术：

肉苁蓉(salinecistanche)，是列当科植物肉苁蓉干燥带鳞叶的肉质茎，又名地精，大芸，是我国传统名贵中药，性温、味甘咸，为补肾壮阳、润肠通便之要药，始载于《神农本草经》，列为上品，素有“沙漠人参”之美誉，为国家卫健委公布的既是食品又是中药材的在限定使用范围和剂量内作为药食两用的物质。现代研究肉苁蓉中含有丰富的化学成分类型，国内外研究人员己从其中分离得到一百多种化合物，包括肉苁蓉含有糖、甜菜碱、苯乙醇苷等活性成分，其中苯乙醇苷类为肉从蓉的主要成分。随着国内外研究的逐渐深入，其越来越多的药理作用被发现，据文献报道，肉苁蓉具有抗氧化、免疫调节、改善记忆、抗肝炎、抗辐射、抗肿瘤、通便等重要的药理作用。肉苁蓉水提醇沉沉淀通过以d-半乳糖造成小鼠实验性衰老实验模型实验结果表明其具有抗氧化性损伤和抗肺衰老的作用。

蛹虫草(cordycepsmilitaris)，在分类学上与冬虫夏草同归于虫草属，是一种珍贵的药用真菌，实验研究证明，蛹虫草与冬虫夏草化学成分70％以上是相似的，药理作用与冬虫夏草相似，在临床上可替代冬虫夏草入药。蛹虫草含有多糖、虫草酸、氨基酸、虫草素、超氧化物歧化酶等生物活性物质，而这些物质都有很好的抗氧化性。研究表明，蛹虫草能提高老龄大鼠sod、gsh-px活性，其抗衰老能力优于ve。蛹虫草的诸多功效可能与其抗氧化活性有关，此外，蛹虫草还具有明显的镇静、增强戊巴比妥的睡眠作用。

氧化是一种使电子自物质转移至氧化剂的化学反应，在氧化过程中可生成自由基，进而启动链反应。当链反应发生在细胞中，细胞受到破坏或凋亡。自由基不但与衰老有关，而且还与许多和衰老有关的疾病有关系。随着年龄的增长，我们的机体都会发生衰老，也就是在形态结构和生理功能方面出现一系列退行性变化。一般会出现细胞数量减少，组织弹性减低，脏器萎缩、变性等，导致机体多种生理功能逐渐减退。人体内新陈代谢产生的许多自由基会损伤细胞膜，促进机体衰老。目前研究认为中枢神经系统疾病及损伤的归因就是单线态氧和其他自由基的不断产生和增加，而人体清除自由基的能力却在减弱。

本品采用肉苁蓉多糖提取物(抗氧化功效部分)为主要原料，配比功效物质主要是苯乙醇苷类化合物，具有提高免疫力的功效的肉苁蓉水提沉淀，同时充分达到充分利用肉苁蓉原料，实现肉苁蓉原料高附加值利用。加入蛹虫草超微粉可实现增强产品免疫力功能。

技术实现要素：

本发明建立了一种肉苁蓉抗氧化胶囊开发和应用，包括以下步骤：

(1)肉苁蓉多糖提取物和水提沉淀的提取制备

(a)将肉苁蓉原料烘干，粉碎成超微粉待用，称取适量肉苁蓉粉，加入超纯水，搅拌浸提，冷却至室温；

(b)转移物料至离心瓶中离心30min；

(c)收集上清液和下层沉淀，减压浓缩，获得浓缩液，上清液备用，下层沉淀即为本品原料肉苁蓉水提沉淀；

(d)向浓缩液中加入95％无水乙醇浸提3h；

(e)转移至离心瓶，离心30min，后收集下层沉淀，烘干称重，即为本品原料肉苁蓉多糖提取物；

(2)肉苁蓉系列产品的开发与制作

本产品由肉苁蓉多糖提取物、肉苁蓉水提沉淀、蛹虫草超微粉为主要原料，增加胶囊或其他剂型辅料制作而成。产品为棕黄色颗粒，具有增强机体抗氧化能力的功能特征。

优选的，所述步骤(1)(a)中的中的超微粉碎处理是将烘干处理后的肉苁蓉原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粗粉碎处理，并对粗粉碎处理后的肉苁蓉原料，使用超微粉碎机进行粉碎处理(300-500目)，得到所述肉苁蓉超微粉。

优选的，所述步骤(1)(a)中加入的超纯水是肉苁蓉粉的6倍量，搅拌浸提操作是在90℃下进行，时间为3h。

优选的，所述步骤(1)(b)中的离心操作是指将降温处理后的所述提取液置于离心瓶中，离心温度为10℃，离心时间为30min，转速为4000rpm/min。

优选的，所述步骤(1)(e)中的离心操作是指将降温处理后的所述提取液置于离心瓶中，离心温度为10℃，离心时间为30min，转速为4000rpm/min。

优选的，所述步骤(1)(e)中的浓缩烘干处理的温度为60-70℃。

优选的，所述步骤(2)中的是称取肉苁蓉多糖提取物、肉苁蓉水提沉淀、蛹虫草超微粉，得到所述主要原料。

说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。

附图说明

图1所示的是本发明实施例1中肉苁蓉多糖提取物与水提沉淀的提取流程图，乙醇沉淀f即为即为肉苁蓉多糖提取物，总糖含量为46.1％；水提沉淀d即为肉苁蓉水提沉淀；

图2所示的是本发明实施例3中肉苁蓉多糖提取物对dpph自由基的清除率。清除率与肉苁蓉多糖提取物的浓度呈正比关系，且清除率最高可达89.25％；

图3所示的是本发明实施例4中肉苁蓉多糖提取物的fe³⁺还原力的测定。随着肉苁蓉多糖提取物浓度的增加，代表还原能力的吸光度增强，当浓度达到100mg/ml时，吸光度可达2.771；

图4所示的是本发明实施例5中肉苁蓉抗氧化胶囊生产工艺流程图；

图5所示的是本发明实施例5中肉苁蓉抗氧化胶囊生产配方示意图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。

实施例1：肉苁蓉多糖提取物与肉苁蓉水提沉淀的提取制备

(a)将肉苁蓉原料烘干，粉碎成超微粉待用，称取适量肉苁蓉粉，加入6倍量的超纯水，90℃、搅拌浸提3h，冷却至室温；

(b)转移物料至离心瓶在10℃、4000rpm条件下离心30min，上清液备用，沉淀干燥后即得本产品原料肉苁蓉水提沉淀；

(c)收集(b)上清液，减压浓缩，获得浓缩液；

(d)向浓缩液中加入95％无水乙醇浸提3h；

(e)转移至离心瓶，在10℃、4000rpm条件下离心30min，后收集沉淀，烘干称重，即得本产品原料肉苁蓉多糖提取物；

实施例2：肉苁蓉多糖提取物总糖含量测定

【实验原理】

肉苁蓉多糖提取物在硫酸的作用下，迅速脱水生成糖醛衍生物，并与苯酚反应生成橙黄色溶液，反应产物在490nm处比色，采用外标法定量。

【实验方法】

(1)试样的制备

100mg/l葡萄糖标准溶液：将葡萄糖于105℃恒温烘干至恒重，称取葡萄糖约0.1g(精确至0.0001g)，用水溶解于1000ml容量瓶中，定容至刻度后摇匀。置4℃冰箱中避光贮存，两周内有效。

肉苁蓉多糖提取物测试液：将干燥至恒重的粗肉苁蓉多糖提取物50mg，用减量法称取后放置在100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀。

(2)标准曲线的制定

分别吸取0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml的葡萄糖标准溶液至10ml具塞试管，用蒸馏水补至1.0ml，向试液中加人1.0ml5％苯酚溶液，然后快速加入5.0ml浓硫酸(与液面垂直加人，勿接触试管壁，以便于反应液充分混合)，反应液静止放置10min。使用祸旋振荡器使反应液混合，然后将试管放置于30℃水浴锅中反应20min。取适量反应液在490nm处测吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，制定标准曲线。

(3)测定

准确吸取试样测试液0.2ml于10ml具塞试管，用蒸馏水补至1.0ml，按步骤2操作，以空白溶液调零，测得吸光度，以标准曲线计算总糖含量。

【实验结果与分析】

结果计算：粗糖中总糖含量以质量分数w计，数值以百分率(％)表示，按式计算。

v1样品定容体积，单位为毫升(ml)

v2比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升(ml)

m1从标准曲线上查得样品测定液中的含糖量，单位为微克(μg)

m2样品质量，单位为克(g)

ω样品含水量，％

v1＝100ml；v2＝0.2ml；m1＝46.10μg；m2＝0.05g；ω＝0％。带入公式计算得粗糖中总糖含量为46.1％，实验结果见表1。

表1粗糖中总糖含量

【实验结论】

用苯酚-硫酸法测得肉苁蓉多糖提取物中总糖含量为46.1％。实施例3：dpph法测定肉苁蓉多糖提取物抗氧化活性

【实验原理】

dpph是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫色，在517nm处有较大吸收。当dpph接受供试物的电子后，形成稳定的抗磁分子，颜色变浅，吸光度减小，而且这种颜色变浅的程度与配对电子数成化学剂量关系。因此可以根据其吸光度值的变化评价样品的抗氧化能力。

【实验方法】

将150ul不同浓度的肉苁蓉多糖提取物置于试管中，加入150ul1.0×10-4mol/l的dpph溶液混合均匀，室温下避光静置反应30min，随后在517nm波长处测吸光值a1，将无水乙醇代替dpph溶液得到吸光度a2，150ul的无水乙醇代替肉苁蓉多糖提取物得到吸光度a3。以0.1mg/mlve作为阳性对照。每个样品重复试验三次，取平均值，清除率计算如下：

【实验结果与分析】

dpph是一种以氮为中心的较为稳定的自由基，通常被用来测定抗氧化成分的体外抗氧化能力。其原理为dpph自由基在517nm附近有一定的吸收，当有自由基的清除剂存在的时候，会跟它的单电子进行配对，从而导致其在517nm附近的吸收减弱甚至消失，并且褪色程度同接收的电子数量成线性关系。从图2可以看出，肉苁蓉多糖提取物对dpph的清除率随着浓度的增加而不断增加，当浓度到达0.16mg/ml时清除率达到77.59％，浓度超过0.16mg/ml到达4mg/ml时，dpph的清除能力清除率下降到73.18％，当肉苁蓉多糖提取物浓度为20mg/ml时，dpph清除率达到83.06％，0.1mg/mlve的dpph清除率为95.18％，由此可以看出肉苁蓉多糖提取物对dpph的清除率相对较强。

【实验结论】

肉苁蓉多糖提取物对dpph具有有效的清除作用，其清除率最高可达89.25％。

实施例4：肉苁蓉多糖提取物还原力的测定

【实验原理】

还原力的检测，可检验化合物是否为良好的电子供应体，它所提供的电子可以使fe³⁺还原为fe²⁺，从而使体系溶剂颜色改变，即反映出体系中氧化还原状态的改变，吸光值越大，还原力越强，抗氧化效果越好。研究报道，一般还原力强的试剂具有较高的抗氧化能力，表明还原力与抗氧化剂的抗氧化能力具有直接的关联。还原能力一般认为是跟二羟基丙烯醛的存在相关联，主要是因为二羟基丙烯醛可以提供氢原子阻断自由基链从而发挥了抗氧化作用或是因为跟过氧化物的前提反应从而阻止了过氧化物的产生发挥作用。所以，抗氧化剂的抗氧化能力可以用还原力作为明显的指标。

【实验方法】

取150ul不同浓度的肉苁蓉水提醇沉沉淀(肉苁蓉多糖提取物)于离心管中，加入150ul0.2mol/l磷酸缓冲液(ph6.6)、150ul1％(w/v)铁氰化钾溶液混匀，50℃水浴中反应20min后，取出迅速冷却后加入150ul10％(w/v)的三氯乙酸混匀，4000r/min离心10min，取400ul上清液并加入400ul蒸馏水于试管中，加入50ul0.1％的fecl3摇匀，常温反应10min后于700nm波长处测定吸光度，用无水乙醇做空白对照，并以0.1mg/mlve做阳性对照，每个样品重复试验3次，取平均值。还原力计算如下：

还原力＝样品吸光度-空白对照组的吸光度

【实验结果】

肉苁蓉多糖提取物的还原能力如图3所示。随着肉苁蓉多糖提取物浓度的增加，肉苁蓉多糖提取物的还原能力也增加，当肉苁蓉多糖提取物的浓度达到100mg/ml时，还原能力达到最大值2.771。

【实验结论】

肉苁蓉多糖提取物具有还原力，因此，可推知肉苁蓉多糖提取物具有较好的抗氧化活性。

实施例5：肉苁蓉抗氧化胶囊的开发与制作

(1)肉苁蓉抗氧化胶囊产品概述

品名：肉苁蓉抗氧化胶囊

汉语拼音：roucongrongkangyanghuajiaonang

主要成份：肉苁蓉多糖提取物、肉苁蓉水提沉淀、蛹虫草超微粉。

性状：本品为棕黄色颗粒。

功能特征：增强机体抗氧化功能。

用法用量：口服，每次2粒，每日2-3次。

规格：200mg/粒

有效期：24个月

贮藏：密封

(2)主要原料

肉苁蓉多糖提取物、肉苁蓉水提沉淀(肉苁蓉苯乙醇苷类物质)、蛹虫草超微粉等。

(3)主要生产步骤：

称量配料，精确称取肉苁蓉多糖提取物，肉苁蓉水提沉淀，蛹虫草超微粉。

混合，将三种超微粉碎物使用三维混合机混合30min。

制粒，采用干式造粒机干法或湿法制粒对物料进行制粒。

总混，使用三维混合机再次混合30min。

胶囊填充，使用全自动胶囊填充机胶囊填充操作。

内包装，按照需求进行铝塑或瓶装操作。

外包，入库。

实施例6：肉苁蓉抗氧化氧化胶囊产品配方1(1000g每份)

主要原料按照肉苁蓉多糖提取物：肉苁蓉水提沉淀：蛹虫草超微粉＝1：2：2的质量配比，加胶囊剂辅料调制为肉苁蓉多糖提取物对整体质量占比为0.16mg/g。

配方：肉苁蓉多糖提取物0.16g、肉苁蓉水提沉淀0.32g、蛹虫草超微粉0.32g、小分子团水、乙醇、淀粉适量。

制备步骤：

(1)称量配料，精确称取取肉苁蓉水提醇沉沉淀(肉苁蓉多糖)，肉苁蓉水提沉淀，蛹虫草超微粉。

(2)混合，将三种超微粉碎物使用三维混合机混合30min。

(3)制粒，采用干式造粒机干法或湿法制粒对物料进行制粒。

(4)总混，使用三维混合机再次混合30min。

(5)胶囊填充，使用全自动胶囊填充机胶囊填充操作。

(6)内包装，按照需求进行铝塑或瓶装操作。

(7)外包，入库。

实施例7：肉苁蓉抗氧化氧化胶囊产品配方2(1000g每份)

主要原料按照肉苁蓉多糖提取物：肉苁蓉水提沉淀：蛹虫草超微粉＝1：2：2的质量配比，加胶囊剂辅料调制为肉苁蓉多糖提取物对整体质量占比为0.8mg/g。

配方：肉苁蓉多糖提取物0.8g、肉苁蓉水提沉淀1.6g、蛹虫草超微粉1.6g、小分子团水、乙醇、淀粉适量。

制备步骤：

(1)称量配料，精确称取取肉苁蓉水提醇沉沉淀(肉苁蓉多糖)，肉苁蓉水提沉淀，蛹虫草超微粉。

(2)混合，将三种超微粉碎物使用三维混合机混合30min。

(3)制粒，采用干式造粒机干法或湿法制粒对物料进行制粒。

(4)总混，使用三维混合机再次混合30min。

(5)胶囊填充，使用全自动胶囊填充机胶囊填充操作。

(6)内包装，按照需求进行铝塑或瓶装操作。

(7)外包，入库。