1.本发明属于中药领域，具体涉及一种具有缓解精神及抗抑郁功效的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：：2.抑郁症是一种由各种原因引起的以抑郁为主要症状的常见的精神疾病。随着社会的发展，人们生活、工作压力的增大，人们的精神压力也日益增加，导致抑郁症的发病率一直呈上升趋势，其危害性已越来越引起医药卫生界的高度重视。由于抑郁症的诱因很多且发病机制复杂，从而导致抑郁症诊断识别率很低。3.目前市场上治疗抑郁症的药物主要以化药为主，抗抑郁效果不甚理想，并且存在价格昂贵，副作用大等问题。而中草药却有毒副作用小、不良反应小以及作用持久等优点，因此从中草药中寻找理想的抗抑郁药物是近年来研究的热点。4.逍遥散出自宋代《太平惠民和剂局方》，试验研究以及临床实践证明其有确切的抗抑郁作用。逍遥散由柴胡、当归、白术、白芍、茯苓、薄荷、生姜、甘草八味中药组成，是四逆散衍化而成，其功效为疏肝解郁，健脾和营，是调和肝脾的常用方剂。按君臣佐使分配，其中柴胡、当归、白芍为君药，白术、茯苓、生姜为臣药，薄荷为佐，炙甘草为使。逍遥散八味药理作用不同，其中柴胡主要为疏肝解郁，当归、白芍为养血柔肝，这三味药相互配合，既补肝又和肝，白术、茯苓、生姜三者合用可健脾，薄荷可助柴胡疏散条达，炙甘草可益气补中，调和诸药。5.中国专利cn108653405a、cn107625813a公开了一种由6味中药组成的中药组合物，“所述中药组分按质量份数计为：柴胡20～60、当归20～60、麸炒白术20～60、白芍20～60、薄荷8～20、炙甘草8～20；所述制备方法，包括如下步骤：1)在所述组分药材中加入6-10倍重量的60～90％乙醇提取2次，每次1-3h，滤过，合并滤液，浓缩得醇提清膏；2)药渣加入6-10倍重量的水提取2次，每次1-3h，滤过，合并滤液，浓缩得水提清膏，在水提清膏中加入乙醇使含醇量达60～80％，静置24h，取上清液，浓缩至清膏；3)将清膏与醇提清膏合并，混匀后浓缩至稠膏，微波减压干燥，粉碎过80目筛，即得中药提取物”。6.中国专利cn101732427a公开了由“柴胡细粉、当归提取物、白芍提取物、白术提取物、茯苓提取物、甘草提取物、薄荷提取物”组成的药物组合物。7.中国专利cn102813906a公开了由“柴胡、当归、炒白术、炙甘草、薄荷、干姜”组成的药物组合物。8.中国专利cn104644776a公开了由“柴胡、当归、茯苓、白芍、白术、甘草”制得的治疗月经不调的中成药散剂。9.中国专利cn108653405a中公开了采用了先合并醇提得醇提清膏，后水提清膏，在水提清膏中加醇再得清膏，并将醇提清膏和第二次获得的清膏合并的制备方法。逍遥散组方中柴胡、当归、白芍、白术、甘草有挥发性成分或挥发油，对挥发油类通过水蒸气蒸馏法等方法进行提取也被广泛应用到逍遥类产品的制备中。10.中国专利cn101732427a公开了将组方中除柴胡之外的其他组分合并水提并保留挥发物，向水提稠膏中加入乙醇过滤两次，将滤液与挥发物及柴胡细粉合并的制备方法。11.中国专利公开了cn104189833a公开了：1)将柴胡、当归、炒白术、薄荷四味药材用水蒸气蒸馏法得挥发油，2)使用环糊精处理挥发油得包合物，3)白芍、蜜炙甘草、茯苓和步骤1)提取得到的药渣合并水提，加入挥发油包合物，制得片剂的制备方法。12.中国专利公开了cn102908600a公开了：1)将柴胡、生姜、薄荷、当归提取挥发油，2)提取后的药渣与炒白术、茯苓进行水提，浓缩得稠膏，3)白芍、四分之一当量的炙甘草、剩余当量的当归碎成药粉，4)剩余量的炙甘草制成浸膏，5)合并制得药丸的制备方法。13.本发明对现有技术的配方进行了细致的研究，运用现代科学技术，研究逍遥散及其类方的抗抑郁作用机制，从逍遥散及其类方中筛选出了治疗抑郁效果最佳的组方，同时为降低成本，简化工艺，对制备方法做出了新的探索，从而完成了本发明。14.本发明的特点在于：(1)组方更为简单，成本较低，在大鼠抗抑郁模型中取得了相较于逍遥丸全方(七味，《中国药典》2015年版第1354-1355)及添加了薄荷的类方(六味)(cn108653405a、cn107625813a)更好的抗抑郁效果；(2)制备过程仅使用水作为溶剂进行两次提取，制备工艺更简化，更安全可控，成本更低。技术实现要素：15.本发明提供一种具有缓解精神及抗抑郁功效的中药组合物及其制备方法和应用。16.本发明具有如下优点：(1)本发明经过对各种不同组方的研究后，筛选的组方更为简单，成本较低，在大鼠抗抑郁模型中取得了相较于现有技术更优越的抗抑郁效果；(2)制备过程仅使用水作为溶剂进行两次提取，制备工艺更简化，更安全可控，成本更低。17.本发明提供一种具有缓解精神及抗抑郁功效的中药组合物，所述中药组合物由柴胡，白芍，麸炒白术，当归，炙甘草以及任选的加入或不加入茯苓组成的重量份中药原料药配方制备而成，其中不加入茯苓的配方为配方1：18.柴胡10～30、白芍10～30、麸炒白术15～30、当归10～30、炙甘草15～24。19.其中加入茯苓的配方为配方2：20.柴胡10～30、白芍10～30、麸炒白术15～30、当归10～30、茯苓10～30、炙甘草15～24。21.优选的，本发明所述的中药组合物，其特征在于，其中所述配方1为：22.柴胡15～25、白芍15～25、麸炒白术15～25、当归15～25、炙甘草15～20。23.其中所述配方2为：24.柴胡15～25、白芍15～25、麸炒白术15～25、当归15～25、茯苓15～25、炙甘草15～20。25.最优选的，本发明所述的中药组合物，其特征在于，其中所述配方1为：26.柴胡20、白芍20、麸炒白术20、当归20、炙甘草16。27.其中所述配方2为：28.柴胡20、白芍20、麸炒白术20、当归20、茯苓20、炙甘草16。29.本发明进一步包括本发明所述的中药组合物的制备方法，所述制备方法，包括如下步骤：按组方配比称取药材，加入4～7倍重量的水，提取1-3次，每次1～3h，提取后滤过，合并两次提取的滤液，静置4h以上，取上清液，浓缩得到提取物；以提取物为药物活性成分，必要是加入药用辅料，制备成药物制剂中药组合物。30.优选的所述制备方法，包括如下步骤：按组方配比称取药材，加入6-7倍重量的水，提取2-3h，过滤，药渣加入5-6倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，静置4h以上，取上清液，浓缩，浓缩终点控制在糖度65％～70％，以提取物为药物活性成分，必要时加入药用辅料，制备成药物制剂中药组合物。31.本发明进一步，所述配方1的中药组合物中包括折干重量逍遥柴白提取物9份，所述逍遥柴白提取物是由柴胡10～30、白芍10～30提取得到的；折干重量逍遥当白甘提取物32份，所述逍遥当白甘提取物是由麸炒白术15～30、当归10～30、炙甘草15～24提取得到的；其中所述逍遥柴白提取物中柴胡皂苷b2折干含量0.63～10.0mg/g、芍药苷折干含量9.4～115.9mg/g；所述逍遥当白甘提取物中甘草酸折干含量1.4～26.1mg/g、阿魏酸折干含量0.13～0.91mg/g、白术内酯iii折干含量0.0038～0.30mg/g。32.其中优选的，所述逍遥柴白提取物中柴胡皂苷b2折干含量0.94～6.8mg/g、芍药苷折干含量17.6～110.9mg/g；所逍遥当白甘提取物中甘草酸折干含量6.9～26.1mg/g、阿魏酸折干含量0.16～0.79mg/g、白术内酯iii折干含量0.0047～0.25mg/g。33.优选的，所述配方1的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：34.(1)逍遥柴白提取物的提取:在柴胡、白芍药材中加入4～7倍重量的水，提取1～3次，每次1～3h，提取后滤过，合并两次提取的滤液，静置4h以上，取上清液，浓缩即得；35.(2)逍遥当白甘提取物的提取：在当归、麸炒白术、炙甘草药材中加入4～7倍重量的水，提取1～3次，每次1～3h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取后提取液过滤，合并两次提取的提取液静置4h以上，取上清液，浓缩，浓缩，加入所收集的挥发油和芳香水，再次浓缩即得；36.(3)取逍遥柴白提取物和逍遥当白甘提取物按照配比混合均匀，以逍遥柴白提取物和逍遥当白甘提取物为药物活性成分，必要是加入药用辅料，制备成药物制剂中药组合物。37.最优选的，所述配方1的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：38.(1)逍遥柴白提取物的提取:在柴胡、白芍药材中加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，静置4h以上，取上清液，浓缩，浓缩终点密度控制在1.26～1.28，即得；39.(2)逍遥当白甘提取物的提取：在当归、麸炒白术、炙甘草药材中加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液静置4h以上，取上清液，浓缩，浓缩至终点，加入所收集的挥发油和芳香水，再次浓缩至终点，浓缩终点密度控制在1.29～1.31。40.(3)取逍遥柴白提取物和逍遥当白甘提取物按照配比混合均匀，以逍遥柴白提取物和逍遥当白甘提取物为药物活性成分，必要时加入药用辅料，制备成药物制剂中药组合物。41.本发明在薄荷和茯苓减方后，将剩余5味药材合并水提时进一步发现，当归中阿魏酸成分的定量受到柴胡某些成分的干扰，专属性不合格，如图1所示。考虑到当归中阿魏酸成分可定量且相对稳定，本发明进行了良好的提取工艺设计，通过分组提取的方式，避免了其他成分对当归中阿魏酸定量的干扰，如图2。分组提取，以提取物入药，不仅药效没有降低，其质量得到有效控制。42.柴胡药材里能测到的皂苷成分是柴胡皂苷a和柴胡皂苷d，提取过程中发生了水解，柴胡皂苷d转化为b2，在提取物中可检测到柴胡皂苷b2且折干含量最高。43.本发明还提供了一种药物制剂中药组合物(简称中药制剂组合物)，可以是任何可服用的药物形式：如：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。44.本发明的中药制剂组合物，优选的是单位剂量的药物制剂形式。45.本发明的中药制剂组合物，在制成药剂时，单位剂量的药剂可含有本发明的中药组合物0.1-1000mg，其余为药学上可接受的辅料。药学上可接受的辅料以重量计可以是制剂总重量的0.01-99.99％。46.本发明的中药制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量，如一日1-3次。一次1-20片等。47.优选的，本发明的中药制剂组合物为口服制剂或注射剂。48.其中，所述口服制剂选自胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、浓缩丸、口服液和合剂中的一种。49.其中，所述注射剂选自注射液、冻干粉针剂和水针剂中的一种。50.本发明的中药制剂组合物，其口服给药的制剂可含有常用辅料，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。51.适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。52.本发明的中药制剂组合物可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。53.口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。54.对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。55.有益效果56.本发明通过上述对逍遥散及近似组方抗抑郁机理、组方划裁、制备工艺的研究可知，逍遥散抗抑郁功效随着组方不同、制备工艺不同，其所得发挥抗抑郁功效的有效成分组成有着很大的不同。本发明按照特定药材及配比，采用特定提取的工艺，得到不同的具有抗抑郁功效的组合物。57.(1)本发明中药组合物中组方更简单，成本较低，在大鼠抗抑郁模型中取得了相较于逍遥丸全方(七味，《中国药典》2015年版第1354-1355)及添加了薄荷的类方(六味)(cn108653405a、cn107625813a)更好的抗抑郁效果。58.(2)制备过程仅使用水作为溶剂，制备工艺更简化，更安全可控，成本更低。由于在薄荷和茯苓减方后，将剩余5味药材合并水提时进一步发现，当归中阿魏酸成分的定量受到柴胡某些成分的干扰，专属性不合格，通过分组的提取工艺设计，避免了其他成分对当归中阿魏酸定量的干扰。同时分组提取后每一味药都可进行质量控制，无相互干扰。具体为：柴胡与当归分开，避免柴胡成分对当归中阿魏酸定量的干扰；每组提取物中至少含有1个稳定的指标性成分以表征提取物到制剂过程的工艺稳定性；将含有挥发性成分的麸炒白术与当归划为一组，在提取过程收集芳香水，在浓缩收膏终点将芳香水加入提取物中，使整体提取物与传统应用水煎剂成分接近。附图说明59.图1.5味药材合并提取阿魏酸含量分析方法专属性不合格，其中e03为本发明实施例14。60.图2.逍遥当白甘提取物中阿魏酸含量分析方法专属性合格。61.图3.甘草酸含量变化曲线图。具体实施方式62.下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。63.实施例164.按组方配比称取柴胡20kg、白芍20kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b2折干含量2.7mg/g、芍药苷折干含量42.1mg/g。65.实施例266.按组方配比称取柴胡20kg、白芍20kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b2折干含量2.9mg/g、芍药苷折干含量40.8mg/g。67.实施例368.按组方配比称取柴胡15kg、白芍25kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b2折干含量2.1mg/g、芍药苷折干含量54.2mg/g。69.实施例470.按组方配比称取柴胡25kg、白芍15kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b2折干含量3.1mg/g、芍药苷折干含量30.9mg/g。71.实施例572.按组方配比称取柴胡30kg、白芍10kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b折干含量23.7mg/g、芍药苷折干含量22.2mg/g。73.实施例674.按组方配比称取柴胡10kg、白芍30kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至相对密度1.27，得逍遥柴白提取物。其中柴胡皂苷b折干含量21.4mg/g、芍药苷折干含量65.70mg/g。75.实施例776.按组方配比称取当归20kg、麸炒白术20kg、炙甘草16kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。其中甘草酸折干含量15.7mg/g、阿魏酸折干含量0.50mg/g、白术内酯iii折干含量0.0.0078mg/g。77.实施例878.按组方配比称取当归20kg、麸炒白术20kg、炙甘草16kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。其中甘草酸折干含量15.4mg/g、阿魏酸折干含量0.48mg/g、白术内酯iii折干含量0.0073mg/g79.实施例980.按组方配比称取当归25kg、麸炒白术15kg、炙甘草15kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。其中甘草酸折干含量11.9mg/g、阿魏酸折干含量0.62mg/g、白术内酯iii折干含量0.0058mg/g。81.实施例1082.按组方配比称取当归25kg、麸炒白术15kg、炙甘草20kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。甘草酸折干含量18.8mg/g、阿魏酸折干含量0.59mg/g、白术内酯iii折干含量0.0055mg/g。83.实施例1184.按组方配比称取当归15kg、麸炒白术25kg、炙甘草18kg，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。其中甘草酸折干含量16.9mg/g、阿魏酸折干含量0.36mg/g、白术内酯iii折干含量0.0092mg/g。85.实施例1286.按组方配比称取当归30kg、麸炒白术15kg、炙甘草24kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。甘草酸折干含量21.4mg/g、阿魏酸折干含量0.67mg/g、白术内酯iii折干含量0.0047mg/g。87.实施例1388.按组方配比称取当归10kg、麸炒白术30kg、炙甘草15kg，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，提取结束收集挥发油和芳香水，提取液过滤，合并两次提取的提取液，常温条件下静置4h以上，取上清液浓缩至相对密度1.30，加入所收集的挥发油和芳香水，继续浓缩至相对密度1.30，得逍遥当白甘提取物。甘草酸折干含量7.4mg/g、阿魏酸折干含量0.23mg/g、白术内酯iii折干含量0.0154mg/g。89.实施例1490.取实施例1逍遥柴白提取物9kg(折干重量)、实施例7逍遥当白甘提取物32kg(折干重量)混匀，即得本发明的中药组合物。91.实施例1592.取实施例1-6任意一项逍遥柴白提取物、实施例7-13任意一项逍遥当白甘提取物按照折干质量比9:32混合均匀即本发明的中药组合物。93.实施例1694.柴胡20kg、白芍20kg、麸炒白术20kg、当归20kg、炙甘草16kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩终点控制在糖度65％～70％，得到中药提取物。95.实施例1796.柴胡10kg、白芍10kg、麸炒白术15kg、当归10kg、炙甘草15kg。按照实施例16制备。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩终点控制在糖度68％～72％，得到中药提取物。97.实施例1898.柴胡30kg、白芍30kg、麸炒白术30kg、当归30kg、炙甘草24kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。99.实施例19100.柴胡15kg、白芍15kg、麸炒白术15kg、当归15kg、炙甘草15kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。101.实施例20102.柴胡25kg、白芍25kg、麸炒白术25kg、当归25kg、炙甘草20kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。103.实施例21104.实施例16-20中的组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。105.实施例22106.柴胡15kg、白芍15kg、麸炒白术15kg、当归15kg、炙甘草15kg。按组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。107.实施例23108.柴胡25kg、白芍25kg、麸炒白术25kg、当归25kg、炙甘草20kg。按组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。109.实施例24110.柴胡10kg、白芍10kg、麸炒白术15kg、当归10kg、茯苓8kg、炙甘15kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩终点控制在糖度65％～70％，得到中药提取物。111.实施例25112.柴胡30kg、白芍30kg、麸炒白术30kg、当归30kg、茯苓24kg、炙甘草24kg。按组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。113.实施例26114.柴胡15kg、白芍15kg、麸炒白术15kg、当归15kg、茯苓15kg、炙甘草15kg。按组方配比称取药材，加入6倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入5倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。115.实施例27116.柴胡25kg、白芍25kg、麸炒白术25kg、当归25kg、茯苓25kg、炙甘草20kg。按组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取3h，过滤，药渣加入4倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，常温条件下静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得到提取物。117.实施例28118.柴胡20kg、白芍20kg、麸炒白术20kg、当归20kg、茯苓20kg、炙甘草16kg。按组方配比称取药材，加入7倍重量的水，提取2h，过滤，药渣加入6倍重量的水，提取1h，过滤，合并两次提取的滤液，静置4h以上，取上清液，浓缩至糖度65％～70％，得提取物。119.实施例29：含量测定120.下述含量测定中所述的折干含量＝提取物含量/提取物干燥残留，提取物干燥残留等同于固含量，检测方法参照欧洲药典《2.8.16》。121.(1)柴胡皂苷b2含量测定122.色谱条件：watersuplc色谱仪，色谱柱：behc18(2.1mm*100mm，1.7μm)色谱柱，流动相为乙腈(a)-水(b)，按下表进行梯度洗脱，检测波长254nm，柱温30℃。[0123][0124]对照品溶液制备：[0125]精密称取柴胡皂苷b标准品27.5mg，置于50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，定容，精密移取5ml，置于50ml量瓶中，用甲醇定容，混匀即得。[0126]供试品溶液制备：[0127]精密称取本品0.2g，置于50ml离心管中，加60％甲醇-0.5mol/lnaoh溶液20ml，超声40min，离心10min，精密量取10ml上样于pszg柱(先用10ml甲醇和10ml纯化水活化)，用水洗脱至洗脱液中性，再用25ml甲醇洗脱并收集洗脱液，50℃减压浓缩至干，用甲醇复溶至5ml容量瓶中，过0.22μm有机滤膜即得。[0128]60％甲醇-0.5mol/lnaoh溶液：取氢氧化钠2g，加水使溶解成100ml，即得0.5mol/lnaoh溶液，取甲醇60ml，加0.5mol/lnaoh溶液使成100ml，混合均匀，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试药、试剂加入量)[0129]测定法[0130]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算柴胡皂苷b2折干含量。[0131]计算公式：[0132][0133][0134]柴胡皂苷b2折干含量为0.63～10.0mg/g[0135]注：content(柴胡皂苷b2)：柴胡皂苷b2含量，单位mg/g；[0136]a供试品：供试品峰面积；[0137]c对照品：对照品溶液浓度，单位mg/ml；[0138]10：稀释倍数；[0139]h：对照品纯度；[0140]a对照品：对照品峰面积；[0141]m：供试品称样量，单位g；[0142]content(柴胡皂苷b2)折干：柴胡皂苷b2折干含量，单位mg/g；[0143]d：干燥残留，单位％。[0144]方法学验证数据：[0145]进样稳定性：对照品溶液：36h；供试品溶液：36h[0146]样品含量结果平行性评价：rad％≤3.0％[0147](2)芍药苷含量测定[0148]色谱条件：[0149]watersuplc色谱仪，色谱柱：hsst3(2.1mm*100mm，1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温为30℃，检测波长：230nm，进样量2μl。[0150]0.05％磷酸水溶液：取磷酸0.5ml，加超纯水使成1000ml，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0151][0152]对照品溶液制备：[0153]精密称取芍药苷标准品6mg，置于50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，用纯化水稀释至刻度，混匀即得。[0154]供试品溶液制备：[0155]精密称取本品0.1g，置于25ml量瓶中，加30％甲醇溶液适量，超声20min，充分溶解，用30％甲醇溶液定容，过0.22μm有机滤膜即得。[0156]30％甲醇溶液：取甲醇30ml，加水使成100ml，混合均匀，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0157]测定法[0158]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算芍药苷折干含量。[0159]计算公式：[0160][0161][0162]芍药苷折干含量为9.4～115.9mg/g[0163]注：content(芍药苷)：芍药苷折干含量，单位mg/g；[0164]a供试品：供试品峰面积；[0165]c对照品：对照品溶液浓度，单位mg/ml；[0166]25：供试品溶液体积，单位ml；[0167]h：对照品纯度；[0168]a对照品：对照品峰面积；[0169]m：供试品称样量，单位g；[0170]content(芍药苷)折干：芍药苷折干含量，单位mg/g；[0171]d：干燥残留，单位％。[0172]方法学验证数据：[0173]进样稳定性：对照品溶液：24h；供试品溶液：24h[0174](3)甘草酸含量测定[0175]色谱条件：[0176]watersuplc色谱仪，色谱柱：hsst3(2.1mm*100mm，1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，按下表规定进行梯度洗脱；柱温为30℃，检测波长230nm。[0177]0.05％磷酸水溶液：取磷酸0.5ml，加超纯水使成1000ml，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0178][0179]对照品溶液：[0180]精密称取甘草酸铵标准品6mg，置于50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，用纯化水稀释至刻度，精密移取5ml，置于25ml量瓶中，用30％甲醇溶液定容，混匀即得。[0181]供试品溶液：[0182]精密称取本品0.15g，置于25ml量瓶中，加30％甲醇溶液约15ml，超声20min，充分溶解，用30％甲醇溶液定容，过0.22μm有机滤膜即得。[0183]30％甲醇溶液：取甲醇30ml，加水使成100ml，混合均匀，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0184]测定法[0185]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算甘草酸折干含量。[0186]计算公式：[0187][0188][0189]甘草酸折干含量为1.4～26.1mg/g[0190]注：content(甘草酸)：甘草酸折干含量，单位mg/g；[0191]a供试品：供试品峰面积；[0192]c对照品：对照品溶液浓度，单位mg/ml；[0193]25：供试品溶液体积，单位ml；[0194]h：对照品纯度；[0195]a对照品：对照品峰面积；[0196]m：供试品称样量，单位g；[0197]content(甘草酸)折干：甘草酸折干含量，单位mg/g；[0198]d：干燥残留，单位％。[0199]方法学验证数据：[0200]进样稳定性：对照品溶液：24h；供试品溶液：24h[0201](4)阿魏酸[0202]色谱条件：[0203]watersuplc色谱仪，色谱柱：hsst3(2.1mm*100mm，1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温为30℃，样品温度20℃，检测波长：323nm，进样量2μl。[0204]0.05％磷酸水溶液：取磷酸0.5ml，加超纯水使成1000ml，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0205][0206]对照品溶液制备：[0207]精密称取阿魏酸标准品6mg，置于50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，用纯化水稀释至刻度，精密移取1ml，置于50ml量瓶中，用30％甲醇溶液定容，混匀即得。[0208]供试品溶液制备：[0209]精密称取本品0.15g，置于25ml量瓶中，加30％甲醇溶液约15ml，超声20min，充分溶解，用30％甲醇溶液定容，过0.22μm有机滤膜即得。[0210]30％甲醇溶液：取甲醇30ml，加水使成100ml，混合均匀，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0211]测定法：[0212]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算阿魏酸折干含量。[0213]计算公式：[0214][0215][0216]阿魏酸折干含量为0.13～0.91mg/g[0217]注：content(阿魏酸)：阿魏酸折干含量，单位mg/g；[0218]a供试品：供试品峰面积；[0219]c对照品：对照品溶液浓度，单位mg/ml；[0220]25：供试品溶液体积，单位ml；[0221]h：对照品纯度；[0222]a对照品：对照品峰面积；[0223]m：供试品称样量，单位g；[0224]content(阿魏酸)折干：阿魏酸折干含量，单位mg/g；[0225]d：干燥残留，单位％。[0226]方法学验证数据：[0227]进样稳定性：对照品溶液：36h；供试品溶液：36h[0228](5)白术内酯iii[0229]色谱条件：[0230]watersuplc色谱仪，色谱柱：hsst3(2.1mm*100mm，1.8μm)，以乙腈为流动相a，以0.05％磷酸水溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温为30℃，样品温度20℃，检测波长：220nm，进样量2μl。[0231]0.05％磷酸水溶液：取磷酸0.5ml，加超纯水使成1000ml，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0232][0233]对照品溶液的制备：[0234]精密称取白术内酯iii标准品6mg，置于50ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，用纯化水稀释至刻度，精密移取5ml，置于50ml量瓶中，用30％甲醇溶液定容，混匀即得。[0235]供试品溶液的制备：[0236]精密称取本品0.5g，置于10ml量瓶中，加30％甲醇溶液约7ml，超声30min，充分溶解，用30％甲醇溶液定容，离心，过0.22μm有机滤膜即得。[0237]30％甲醇溶液：取甲醇30ml，加水使成100ml，混合均匀，即得。(可根据实际需求，按比例调整各试剂加入量)[0238]测定法：[0239]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算白术内酯iii折干含量。[0240]计算公式：[0241][0242][0243]白术内酯iii折干含量为0.0038～0.30mg/g[0244]注：content(白术内酯iii)：白术内酯iii含量，单位mg/g；[0245]a供试品：供试品峰面积；[0246]c对照品：对照品溶液浓度，单位mg/ml；[0247]10：供试品溶液体积，单位ml；[0248]h：对照品纯度；[0249]a对照品：对照品峰面积；[0250]m：供试品称样量，单位g；[0251]content(白术内酯iii)折干：白术内酯iii折干含量，单位mg/g；[0252]d：干燥残留，单位％。[0253]方法学验证数据：[0254]进样稳定性：对照品溶液：48h；供试品溶液：48h[0255]样品含量结果平行性评价：rad％≤8.5％[0256]实施例30抗抑郁药效实验[0257]慢性不可预知温和刺激(chronicunpredictablemildstress，cums)结合孤养抑郁大鼠模型是与临床抑郁症最接近的动物模型，它是指在造模过程中将大鼠暴露于持续的温和不可预见的刺激条件之下，并结合孤养诱导大鼠产生与抑郁症患者类似的许多行为学异常症状。其中体重变化、糖水消耗百分比、敞箱实验运动得分是该抑郁模型的主要行为学评价指标，能反映临床抑郁症患者的食欲不振、快感缺失、自主活动能力及对新鲜环境的好奇程度降低等症状。[0258]抑郁症发病机制复杂，目前被广泛认可且研究较深入的假说包括单胺类神经递质假说、下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴功能亢进假说、神经可塑性假说。其中单胺类神经递质假说作为抑郁症最经典的一种假说，认为抑郁症的发生主要是由于大脑中枢神经系统内单胺类神经递质如5-羟色胺(5-ht)、多巴胺(da)和去甲肾上腺素(ne)等缺乏密切相关，这也是目前临床大部分抗抑郁药的作用靶点；下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴功能亢进可导致机体皮质酮(cort)含量异常升高，与其受体结合后产生神经毒性，造成海马区神经元损伤，从而引起抑郁；神经可塑性假说认为脑源性神经营养因子(bdnf)参与调控神经细胞的生存、生长、分化和凋亡，可对抗应激状态下神经元的损伤，促进神经元的修复与再生，提高神经元的可塑性，从而发挥抗抑郁作用。因此，本实验采用cums结合孤养抑郁大鼠模型，以cums结合孤养抑郁模型大鼠的行为学及生化指标(cort、da、ne、5-ht、bdnf)含量为抗抑郁作用药效学指标，比较加味逍遥丸减方前后的抗抑郁作用药效学。[0259]1实验动物与材料[0260]1.1实验动物[0261]spf级雄性spraguedawley(sd)大鼠130只[购于中国食品药品检定研究院，许可证号：scxk(京)2017-0005]，体重180～200g，适应性饲养及实验地点均为天津中医药大学实验动物中心。饲养条件：(22±2)℃，湿度(50±10)％，自然光照，自由摄食和饮水。实验动物的饲养和操作规程均遵守天津中医药大学实验动物饲养和使用的相关规定。[0262]1.2药品与试剂[0263]a组(加味逍遥方)、c组(逍遥方)、d组(本发明)、e组(本发明)、f组提取物按照表1中配方制备均由天士力医药集团股份有限公司提供；盐酸氟西汀(flu)产于礼来苏州制药有限公司；血浆皮质酮(cort)elisa试剂盒、神经营养因子(bdnf)elisa试剂盒、5-羟色胺(5-ht)elisa试剂盒、多巴胺(da)elisa试剂盒、去甲肾上腺素(ne)elisa试剂盒均购自美国r&dsystems；生理盐水购自石家庄四药有限公司。[0264]1.3实验设备与仪器[0265]敞箱(100cm×100cm×50cm，自制)，ltd0114子弹头警灯(浙江安华安全设备有限公司)，g6805-1治疗仪(中国青岛鑫升实业有限公司)，木质夹子，td21001电子天平(天津市天马仪器厂)，ikat18型超声组织破碎仪(宁波新芝生物科技有限公司)，3k15型冷冻高速离心机(美国sigma公司)，infinitem200pro型多功能酶标仪(瑞士tecan公司)，-80℃低温冰箱(美国thermo科技公司)。[0266]2实验方法[0267]2.1药物溶液配制[0268]2.1.1氟西汀混悬液的配制[0269]取盐酸氟西汀胶囊(20mg/粒)，除去胶囊壳，加入0.5％cmc-na溶液研磨配制成1mg/ml的氟西汀混悬液。[0270]2.1.2各组药液的配制[0271]a组、c组、d组、e组、f组提取物每天临床用量分别为5.21g、3.21g、3.26g、3.29g、2.55g，按15倍临床等效剂量折合成大鼠的剂量分别为7.0305g/kg、4.3380g/kg、4.4040g/kg、4.4415g/kg、3.4425g/kg，具体见表1。[0272]表1大鼠灌胃剂量折算表[0273][0274][0275]2.2cums结合孤养抑郁模型建立[0276]将130只sd大鼠适应性饲养7天后，在安静环境下对大鼠进行敞箱实验，根据水平运动和垂直运动得分相近的原则筛选大鼠，剔除得分过高或过低的大鼠。将筛选出大鼠随机分成正常组、模型组、flu组、a组、c组、d组、e组、f组，每组13只。[0277]正常组大鼠每笼4只常规饲养，自由饮水摄食，不接受任何其他额外刺激；其余各组大鼠均每只单笼饲养，每天随机接受以下2种不同应激刺激且相同刺激不可连续出现，从而使大鼠不能预料何种刺激，避免其产生适应性。cums刺激因子包括：束缚2h，冰水高台2h，噪音刺激(110db，30min)，足底电击(电流4ma，50次，每次间隔5s)，光照刺激(100000lx，30min)，昼夜颠倒24h，潮湿垫料12h，夹尾(距离大鼠尾尖1cm左右，2min)。持续造模，每周测量各组大鼠体重增长量、糖水消耗百分比及敞箱实验水平运动与垂直运动得分。[0278]2.3药效学测定指标[0279]2.3.1行为学实验[0280](1)体重变化[0281]实验第0、7、14、21、28、35、42、49、56、63天分别对大鼠进行体重测量，记录各组大鼠体重，分析造模过程中各组大鼠每周体重变化及造模前后体重增长量(％)结果。公式如下：[0282][0283](2)糖水消耗实验[0284]实验第0、7、14、21、28、35、42、49、56、63天对各组大鼠进行糖水消耗实验。实验前3天进行糖水适应，在笼子上放置两瓶1％浓度蔗糖溶液24h，然后放置1％蔗糖溶液一瓶、纯水一瓶24h，上下午调换水瓶位置，第3天禁食禁水24h。正式实验各组大鼠分别放置1％蔗糖溶液一瓶、纯水一瓶，上下午调换水瓶位置，记录各组大鼠24h内蔗糖溶液量(糖水消耗量)及纯水消耗量，计算糖水消耗百分比(％)。公式如下：[0285][0286](3)敞箱实验[0287]实验第0、7、14、21、28、35、42、49、56、63天对各组大鼠进行敞箱实验。实验所用敞箱大小为100cm×100cm×50cm(长×宽×高)，内侧面黑色，将底面用白线划分成100(10cm×10cm)个大小相同小方格。将每只大鼠依次放在中心固定的方格内，排除人为干扰，记录大鼠3min内活动路线。以实验大鼠穿越底面小方格的数量作为水平运动得分，大鼠每穿越1格(3爪以上跨入)均计为水平运动1分，若实验大鼠沿直线行走，则以每10cm计为1分。以实验大鼠直立次数作为垂直运动得分，大鼠双前肢离开敞箱底面为标志，无论大鼠站立多久，均以大鼠放下双前肢计为垂直运动1分。每只大鼠测试完毕后，彻底清理敞箱，再进行下一只大鼠的测试。记录每只大鼠的水平运动得分及垂直运动得分，分析各组大鼠水平运动得分及垂直运动得分差异。[0288]2.3.2生化指标检测[0289](1)取材[0290]行为学实验后，大鼠眼眶取血约1.5ml，置于肝素浸润的离心管中，8000r·min-1，4℃，离心10min，取上清液，置于﹣80℃低温冰箱中保存，用于大鼠血浆中皮质酮(cort)水平的测定。[0291]眼眶取血后，脱颈处死，在冰面上迅速剥离出皮层和海马，称重，置冻存管中在液氮中迅速冷冻，然后转移至﹣80℃低温冰箱中保存，用于大鼠皮层与海马中神经生长营养因子(bdnf)、5-羟色胺(5-ht)、多巴胺(da)和去甲肾上腺素(ne)含量的测定。[0292]2.3.3.2cort、bdnf、5-ht、da、ne测定及计算[0293]采用酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay，elisa)对各组大鼠血浆中cort含量及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne含量进行测定，在450nm波长下依序测量各孔的吸光度(od值)。以标准物的含量为横坐标，od值为纵坐标，绘制标准曲线并得回归方程，将各组大鼠血浆中cort及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne的od值代入回归方程，计算各组大鼠血浆中cort及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne的含量。[0294]2.4.实验数据处理及统计学分析[0295]实验数据以表示，采用spss22.0统计学软件分析，大鼠血浆中cort含量及皮层与海马中bdnf、5-ht、da、ne含量采用单因素方差分析(one-wayanova)进行组间差异分析。[0296]3实验结果与分析[0297]3.1体重变化结果[0298]各实验组大鼠随着造模过程可见不同程度的体重增加，结果见表2，模型组大鼠体重增长量较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法影响大鼠的食欲导致体重增长缓慢，模拟了抑郁症患者食欲减退、体重减轻症状。[0299]各给药组大鼠体重增长量较模型组显著升高(p《0.01)，表明各给药组均可抵抗cums结合孤养抑郁模型大鼠体重降低，从而改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状。由表可知：总体上各给药组大鼠体重增长量大小关系依次为flu组》d组》f组》e组》c组》a组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状的效果仅次于flu组药物，a组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状的效果最差。d组与e组比有显著差异p《0.01。[0300]表2各组大鼠体重增长量比较(n＝10)[0301]组别剂量(g/kg)第0天体重(g)第63天体重(g)体重增长量(％)正常组-226.00±10.86458.50±21.12102.95±5.47模型组-219.12±9.37308.00±13.45▼40.56±1.69▼a组7.03219.62±7.55334.00±18.01#52.11±7.24#c组4.34222.00±8.00338.87±12.47#52.87±8.85#d组4.40223.00±4.31423.37±20.43#89.82±7.43#e组4.44222.63±10.98381.25±13.19#71.65±10.95#f组3.44221.75±4.77383.75±10.67#73.11±5.56#flu组0.01226.25±9.13426.88±8.92#89.02±10.31#[0302]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0303]3.2行为学实验结果[0304]3.2.1糖水消耗百分比结果[0305]各实验组大鼠随着造模过程可见糖水消耗百分比逐渐降低，结果见表3；模型组大鼠糖水消耗百分比较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法降低大鼠糖水消耗百分比，模拟了抑郁症患者快感缺失症状。[0306]各给药组糖水消耗百分比较模型组均显著升高(p《0.01)，表明各给药组改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的快感缺失症状。由表可知：总体上各给药组大鼠糖水消耗百分比大小关系依次为flu组》d组》e组》f组》c组》a组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠快感缺失症状的效果仅次于flu组药物，a组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠快感缺失症状的效果最差。d组与e组比有显著差异p《0.01。[0307]表3各组大鼠糖水消耗百分比结果(n＝10)[0308]组别剂量(g/kg)第0天(％)第63天(％)正常组-89.41±3.4793.17±3.80模型组-90.11±2.6361.75±3.63▼a组7.0389.53±4.2167.92±3.60#c组4.3489.72±5.7768.63±4.38#d组4.4090.69±2.3388.31±4.14#e组4.4490.81±3.5279.12±2.74#f组3.4490.28±2.8678.67±4.51#flu组0.0189.99±3.7788.62±2.97#[0309]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0310]3.2.2敞箱实验结果[0311](1)水平运动得分[0312]各实验组大鼠敞箱水平运动得分随着造模过程可见逐渐降低，结果见各组大鼠敞箱水平运动得分结果见表4，模型组大鼠敞箱水平运动得分较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法可显著降低大鼠的情绪和自主活动能力，模拟了抑郁症患者的自主活动能力低下症状。[0313]各给药组敞箱水平运动得分较模型组均显著升高(p《0.01)，表明各给药组均可有效上调cums结合孤养抑郁模型大鼠的情绪和自主活动能力，从而改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的自主活动能力低下症状。由表可知：总体上各给药组大鼠水平运动得分大小关系依次为flu组》d组》e组》f组》c组》a组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的活动能力低下症状的效果仅次于flu组药物，a组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的自主活动能力低下症状的效果最差。d组与e组比有显著差异p《0.01。[0314]表4各组大鼠敞箱实验水平运动得分结果(n＝10)[0315]组别剂量(g/kg)第0天(％)第63天(％)正常组-243.25±38.10178.63±19.27模型组-226.62±25.7271.37±12.11▼a组7.03245.75±51.1288.13±12.28＊c组4.34211.25±46.6489.50±15.27＊d组4.40229.13±62.84162.75±30.07#e组4.44205.00±30.39127.75±23.57#f组3.44233.25±38.54119.38±24.54#flu组0.01239.50±35.31173.25±11.94#[0316]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0317](2)垂直运动得分[0318]各实验组大鼠垂直水平运动得分随着造模过程可见逐渐降低，结果见各组大鼠敞箱垂直运动得分结果见表5，模型组大鼠敞箱垂直运动得分较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法可显著降低大鼠的空间探索能力，模拟了抑郁症患者对新鲜环境好奇程度降低症状。[0319]各给药组敞箱垂直运动得分较模型组均显著升高(p《0.05)，表明各给药组均可改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境好奇程度降低症状。由表可知：总体上各给药组大鼠垂直运动得分大小关系依次为flu组》d组》e组》f组》c组》a组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境的好奇程度降低症状的效果仅次于flu组药物，a组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境好奇程度降低症状的效果最差。d组与e组比有显著差异p《0.05。[0320]表5各组大鼠敞箱实验垂直运动得分结果(n＝10)[0321]组别剂量(g/kg)第0天第63天正常组-11.50±2.079.38±1.92模型组-12.75±2.122.38±1.41▼a组7.0313.00±3.214.00±0.76＊c组4.3411.25±2.824.25±1.39＊d组4.4010.63±3.547.25±2.19#e组4.4410.57±4.286.13±2.10#f组3.4412.75±1.676.00±2.45#flu组0.0112.00±1.518.75±1.83#[0322]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0323]3.3.3生化指标检测结果[0324](1)各组大鼠血浆中cort含量比较[0325]各组大鼠血浆中cort含量见表6。模型组大鼠血浆中cort含量较正常组显著上升(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法显著升高大鼠血浆中cort含量，造成hpa轴功能亢进，从而造成大鼠抑郁。[0326]各给药组大鼠血浆中cort含量较模型组均显著下降(p《0.01)，表明各给药组均可改善cums结合孤养模型抑郁大鼠hpa轴功能亢进，从而发挥抗抑郁作用。由表可知：总体上各给药组大鼠血浆中cort含量大小关系依次为flu组》d组》f组》e组》c》组》a组，表明d组提取物抗抑郁作用仅次于flu组药物，a组提取物抗抑郁作用最差。d组与e组比有显著差异p《0.01。[0327]表6各组大鼠血浆中cort含量比较(n＝10)[0328]组别剂量(g/kg)cort(ng/l)正常组-307.7622±8.4732模型组-431.2767±8.0006▼a组7.03405.5870±1.3391#c组4.34390.3106±3.2073#d组4.40327.1428±2.1968#e组4.44331.6605±2.2757#f组3.44338.0807±0.3857#flu组0.01317.8717±7.6536#[0329]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0330](2)各组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量比较[0331]各组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量见表7。模型组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量较正常组显著降低(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法显著降低大鼠皮层中单胺类神经递质da、ne、5-ht含量及脑源性神经营养因子bdnf含量，从而造成大鼠抑郁。[0332]各给药组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量较模型组均显著上升(p《0.01)，表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠皮层中单胺类神经递质水平，且通过上调皮层中bdnf含量，促进神经元的修复与再生，从而发挥抗抑郁作用。由表可知：总体上各给药组大鼠皮层中da、ne、5-ht含量大小关系依次为flu组》d组》f组》e组》c组》a组，各给药组大鼠皮层中bdnf含量大小关系依次为d组》flu组》f组》e组》c组》a组，表明d组提取物抗抑郁作用最好，a组提取物抗抑郁作用最差。皮层da含量、ne含量、5-ht中d组与e组比有显著差异p《0.05。bdnf含量d组与e组比有显著差异p《0.01。[0333]表7各组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量比较(n＝10)[0334][0335][0336]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01。[0337](3)各组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较[0338]各组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较见表8。模型组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量较正常组显著降低(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法显著降低大鼠海马中单胺类神经递质da、ne、5-ht含量及脑源性神经营养因子bdnf含量，从而造成大鼠抑郁。[0339]各给药组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量较模型组均显著上升(p《0.01)表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠海马中单胺类神经递质水平，且通过上调海马中bdnf含量，促进神经元的修复与再生，从而发挥抗抑郁作用。由表可知：总体上各给药组大鼠海马中da、ne、5-ht含量大小关系依次为flu组》d组》f组》e组》c组》a组，各给药组大鼠海马中bdnf含量大小关系依次为d组》flu组》f组》e组》c组》a组，表明d组提取物抗抑郁作用最好，a组提取物抗抑郁作用最差。海马da含量、ne含量中d组与e组比有显著差异p《0.05；5-ht含量、bdnf含量中d组与e组比有显著差异p《0.01。[0340]表8各组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较(n＝10)[0341][0342][0343]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01。[0344]4小结[0345](1)慢性温和不可预见性应激(cums)结合孤养方法建立抑郁模型大鼠，可使大鼠体重增长显著降低、糖水消耗百分比下降、敞箱实验水平运动得分和垂直运动得分减少，成功模拟了临床抑郁症患者体重减轻、快感缺失、自主活动能力及对新鲜环境的好奇程度降低的症状，表明cums结合孤养抑郁模型大鼠建立成功。[0346](2)各组大鼠药效指标结果大小顺序结果见表9。由表可知：总体上各给药组大鼠药效指标结果大小关系依次为flu组、d组》f组、e组》c组》a组，表明d组提取物抗抑郁作用与flu组药物相当，a组提取物抗抑郁作用最差。[0347]综上所述，a组、c组、d组、e组、f提取物均可通过抵抗hpa轴功能亢进、提高单胺类神经递质含量及提高神经元可塑性发挥抗抑郁作用。总体上d组提取物抗抑郁作用与flu组药物相当，a组提取物抗抑郁作用最差。d组与e组比有显著差异。[0348]表9各组大鼠药效指标结果大小顺序表[0349]药效指标各组大小顺序体重增长量flu组》d组》f组》e组》c组》a组糖水消耗百分比flu组》d组》e组》f组》c组》a组水平运动得分flu组》d组》e组》f组》c组》a组垂直运动得分flu组》d组》e组》f组》c组》a组血浆中cort含量flu组》d组》f组》e组》c》组》a组皮层中da、ne、5-ht含量flu组》d组》f组》e组》c组》a组皮层中bdnf含量d组》flu组》f组》e组》c组》a组海马中da、ne、5-ht含量flu组》d组》f组》e组》c组》a组海马中bdnf含量d组》flu组》f组》e组》c组》a组合计flu组、d组》e组、f组》c组》a组[0350]试验例二本发明分组提取组合物与合提组合物的对比数据[0351]1实验动物与材料[0352]1.1实验动物[0353]spf级雄性spraguedawley(sd)大鼠90只[购于中国食品药品检定研究院，许可证号：scxk(京)2017-0005]，体重180～200g，适应性饲养及实验地点均为天津中医药大学实验动物中心。饲养条件：(22±2)℃，湿度(50±10)％，自然光照，自由摄食和饮水。实验动物的饲养和操作规程均遵守天津中医药大学实验动物饲养和使用的相关规定。[0354]1.2药品与试剂[0355]b组(实施例14)、c组、d组、f组同试验例一表1配方。[0356]1.3实验设备与仪器：同试验例一[0357]2实验方法[0358]2.1药物溶液配制[0359]2.1.1氟西汀混悬液的配制[0360]取盐酸氟西汀胶囊(20mg/粒)，除去胶囊壳，加入0.5％cmc-na溶液研磨配制成1mg/ml的氟西汀混悬液。[0361]2.1.2各组药液的配制[0362]b组、c组、d组、f组提取物每天临床用量分别为3.26g、3.37g、3.23g、2.72g，按15倍临床等效提取物剂量折合成大鼠的剂量分别为4.4010g/kg、4.5495g/kg、4.3605g/kg、3.6720g/kg。[0363]2.2cums结合孤养抑郁模型建立[0364]将90只sd大鼠适应性饲养7天后，在安静环境下对大鼠进行敞箱实验，根据水平运动和垂直运动得分相近的原则筛选大鼠，剔除得分过高或过低的大鼠。将筛选出大鼠随机分成正常组、模型组、flu组、b组、c组、d组、f组，每组12只。[0365]正常组大鼠每笼4只常规饲养，自由饮水摄食，不接受任何其他额外刺激；其余各组大鼠均每只单笼饲养，每天随机接受以下2种不同应激刺激且相同刺激不可连续出现，从而使大鼠不能预料何种刺激，避免其产生适应性。cums刺激因子包括：束缚2h，冰水高台2h，噪音刺激(110db，30min)，足底电击(电流4ma，50次，每次间隔5s)，45℃烘箱热烘10min，昼夜颠倒24h，潮湿垫料12h，夹尾(距离大鼠尾尖1cm左右，2min)。持续造模，每周测量各组大鼠体重增长量、糖水消耗百分比及敞箱实验水平运动与垂直运动得分。[0366]2.3药效学测定指标[0367]2.3.1行为学实验[0368](1)体重变化[0369]实验第0、7、14、21、28、35、42、54天分别对大鼠进行体重测量，记录各组大鼠体重，分析造模过程中各组大鼠每周体重变化及造模前后体重增长量(％)结果。公式如下：[0370][0371](2)糖水消耗实验[0372]实验第0、7、14、21、28、35、42、54天对各组大鼠进行糖水消耗实验。实验前3天进行糖水适应，在笼子上放置两瓶1％浓度蔗糖溶液24h，然后放置1％蔗糖溶液一瓶、纯水一瓶24h，上下午调换水瓶位置，第3天禁食禁水24h。正式实验各组大鼠分别放置1％蔗糖溶液一瓶、纯水一瓶，上下午调换水瓶位置，记录各组大鼠24h内蔗糖溶液量(糖水消耗量)及纯水消耗量，计算糖水消耗百分比(％)。公式如下：[0373][0374](3)敞箱实验[0375]实验第0、7、14、21、28、35、42、54天对各组大鼠进行敞箱实验。实验所用敞箱大小为100cm×100cm×50cm(长×宽×高)，内侧面黑色，将底面用白线划分成100(10cm×10cm)个大小相同小方格。将每只大鼠依次放在中心固定的方格内，排除人为干扰，记录大鼠3min内活动路线。以实验大鼠穿越底面小方格的数量作为水平运动得分，大鼠每穿越1格(3爪以上跨入)均计为水平运动1分，若实验大鼠沿直线行走，则以每10cm计为1分。以实验大鼠直立次数作为垂直运动得分，大鼠双前肢离开敞箱底面为标志，无论大鼠站立多久，均以大鼠放下双前肢计为垂直运动1分。每只大鼠测试完毕后，彻底清理敞箱，再进行下一只大鼠的测试。记录每只大鼠的水平运动得分及垂直运动得分，分析各组大鼠水平运动得分及垂直运动得分差异。[0376]2.3.2生化指标检测[0377](1)取材[0378]行为学实验后，大鼠眼眶取血约1.5ml，置于肝素浸润的离心管中，8000r·min-1，4℃，离心10min，取上清液，置于﹣80℃低温冰箱中保存，用于大鼠血浆中皮质酮(cort)水平的测定。[0379]眼眶取血后，脱颈处死，在冰面上迅速剥离出皮层和海马，称重，置冻存管中在液氮中迅速冷冻，然后转移至﹣80℃低温冰箱中保存，用于大鼠皮层与海马中神经生长营养因子(bdnf)、5-羟色胺(5-ht)、多巴胺(da)和去甲肾上腺素(ne)含量的测定。[0380](2)cort、bdnf、5-ht、da、ne测定及计算[0381]采用酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay，elisa)对各组大鼠血浆中cort含量及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne含量进行测定，在450nm波长下依序测量各孔的吸光度(od值)。以标准物的含量为横坐标，od值为纵坐标，绘制标准曲线并得回归方程，将各组大鼠血浆中cort及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne的od值代入回归方程，计算各组大鼠血浆中cort及皮层与海马中bdnf、5-ht、da和ne的含量。[0382]2.4.实验数据处理及统计学分析[0383]实验数据以表示，采用spss22.0统计学软件分析，大鼠血浆中cort含量及皮层与海马中bdnf、5-ht、da、ne含量采用单因素方差分析(one-wayanova)进行组间差异分析。[0384]3实验结果与分析[0385]3.1行为学实验结果[0386]3.1.1体重变化结果[0387]各实验组大鼠随着造模过程可见不同程度的体重增加，结果见各组大鼠体重增长量结果见表10，模型组大鼠体重增长量较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法影响大鼠的食欲导致体重增长缓慢，模拟了抑郁症患者食欲减退、体重减轻症状。[0388]表10各组大鼠体重增长量比较(n＝10)[0389][0390][0391]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0392]各给药组大鼠体重增长量较模型组显著升高(p《0.01)，flu组大鼠体重增长量高于d组，但flu组与d组大鼠体重增长量比较无显著性差异(p》0.05)，其它各组大鼠体重增长量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可抵抗cums结合孤养抑郁模型大鼠体重降低，从而改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状。由表10可知，各给药组大鼠体重增长量大小关系依次为flu组，d组》b组》f组》c组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状的效果与flu组药物相当，c组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠食欲减退、体重减轻症状的效果最差。d组与b组比有显著差异p《0.01。[0393]3.1.2糖水消耗百分比结果[0394]各实验组大鼠随着造模过程可见糖水消耗百分比逐渐降低，结果见各组大鼠糖水消耗比结果见表11，模型组大鼠糖水消耗百分比较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法降低大鼠糖水消耗百分比，模拟了抑郁症患者快感缺失症状。[0395]表11各组大鼠糖水消耗百分比结果(n＝10)[0396]组别剂量(g/kg)第0天(％)第54天(％)正常组-90.29±3.5893.88±3.59模型组-89.52±3.6565.03±3.82▼b组4.4091.41±3.5885.00±4.65#c组4.5589.72±5.7772.57±3.19#d组4.3691.42±3.2490.05±5.30#f组3.6789.61±3.7282.63±5.12#flu组0.0189.37±3.6491.64±4.99#[0397]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0398]与模型组比较，各给药组糖水消耗百分比均显著升高(p《0.01)，flu组大鼠糖水消耗百分比高于d组，但比较flu组与d组大鼠糖水消耗百分比无显著性差异(p》0.05)，b组大鼠糖水消耗百分比高于f组，但比较b组与f组大鼠糖水消耗百分比无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠糖水消耗百分比均有显著性差异((p《0.05))，表明各给药组均可改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的快感缺失症状。由表11可知：各给药组大鼠糖水消耗百分比大小关系依次为flu组，d组》b组，f组》c组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠快感缺失症状的效果与flu组药物相当，c组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠快感缺失症状的效果最差。d组与b组比有显著差异p《0.05。[0399]3.1.3敞箱实验结果[0400](1)水平运动得分[0401]各实验组大鼠敞箱水平运动得分随着造模过程可见逐渐降低，各组大鼠敞箱水平运动得分结果见表12，模型组大鼠敞箱水平运动得分较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法可显著降低大鼠的情绪和自主活动能力，模拟了抑郁症患者的自主活动能力低下症状。[0402]表12各组大鼠敞箱实验水平运动得分结果(n＝10)[0403]组别剂量(g/kg)第0天(％)第54天(％)正常组-184.60±10.82151.30±11.24模型组-185.10±9.9871.70±10.86▼b组4.40182.60±11.85118.50±13.62#c组4.55182.20±9.3784.40±11.06#d组4.36184.90±10.35133.50±13.07#f组3.67182.90±9.69113.20±7.96#flu组0.01185.80±11.20138.2±17.38#[0404]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0405]给药组敞箱水平运动得分较模型组均显著升高(p《0.01)，flu组大鼠敞箱水平运动得分高于d组，但flu组与d组大鼠敞箱水平运动得分比较无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠敞箱运动得分均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可有效上调cums结合孤养抑郁模型大鼠的情绪和自主活动能力，从而改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的自主活动能力低下症状。由表12可知：各给药组大鼠水平运动得分大小关系依次为flu组，d组》b组》f组》c组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的活动能力低下症状的效果与flu组药物相当，c组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠的自主活动能力低下症状的效果最差。d组与b组比有显著差异p《0.01。[0406](2)垂直运动得分[0407]各实验组大鼠垂直水平运动得分随着造模过程可见逐渐降低，各组大鼠敞箱垂直运动得分结果见表13，模型组大鼠敞箱垂直运动得分较正常组显著下降(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法可显著降低大鼠的空间探索能力，模拟了抑郁症患者对新鲜环境好奇程度降低症状。[0408]表13各组大鼠敞箱实验垂直运动得分结果(n＝10)[0409]组别剂量(g/kg)第0天第54天正常组-15.60±1.3513.90±1.52模型组-16.10±1.664.40±1.62▼b组4.4016.00±1.769.40±1.26#c组4.5516.30±1.065.90±1.20＊d组4.3615.80±1.6210.80±1.32#f组3.6715.80±1.758.10±1.20#flu组0.0116.30±1.8912.20±1.55#[0410]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0411]各给药组敞箱垂直运动得分较模型组均显著升高(p《0.05)，且其它各组大鼠敞箱垂直运动得分均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境好奇程度降低症状。由表13可知：各给药组大鼠垂直运动得分大小关系依次为flu组》d组》b组》f组》c组，表明d组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境的好奇程度降低症状的效果仅次于flu组药物，c组提取物改善cums结合孤养抑郁模型大鼠对新鲜环境好奇程度降低症状的效果最差。d组与b组比有显著差异p《0.05。[0412]3.2生化指标检测结果[0413]3.2.1各组大鼠血浆中cort含量比较[0414]皮质酮(cort)是一种糖皮质激素，高浓度的皮质酮与其受体结合产生神经毒性，造成海马区神经元损伤，导致下丘脑-垂体-肾上腺(hpa)轴功能亢进，从而引起抑郁。[0415]各组大鼠血浆中cort含量见表14。模型组大鼠血浆中cort含量较正常组显著上升(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法显著升高大鼠血浆中cort含量，造成hpa轴功能亢进，从而造成大鼠抑郁。[0416]表14各组大鼠血浆中cort含量比较(n＝10)[0417]组别剂量(g/kg)cort(ng/l)正常组-314.1979±9.3951模型组-460.6571±9.3572▼b组4.40362.5143±21.6609#c组4.55398.7368±15.0062#d组4.36340.6571±21.1191#f组3.67374.7254±20.8706#flu组0.01330.6143±9.0210#[0418]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0419]各给药组大鼠血浆中cort含量较模型组均显著下降(p《0.01)，且其它各组大鼠血浆中cort含量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可改善cums结合孤养模型抑郁大鼠hpa轴功能亢进，从而发挥抗抑郁作用。由表14可知：各给药组大鼠血浆中cort含量大小关系依次为flu组《d组《b组《f组《c组，表明d组提取物抗抑郁作用仅次于flu组药物，c组提取物抗抑郁作用最差。d组与b组比有显著差异p《0.05。[0420]3.2.2各组大鼠皮层及海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较[0421]多巴胺(da)、去甲肾上腺素(ne)和5-羟色胺(5-ht)是大脑中枢神经系统单胺类神经递质，脑源性神经营养因子(bdnf)是一种对神经元具有营养支持作用的蛋白质，其水平下降可导致抑郁症发生。[0422]各组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量见表15。各组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较见表16。模型组大鼠皮层及海马中da、ne、5-ht、bdnf含量较正常组显著降低(p《0.01)，表明cums结合孤养造模方法显著降低大鼠皮层及海马中单胺类神经递质da、ne、5-ht含量及脑源性神经营养因子bdnf含量，从而造成大鼠抑郁。[0423]表15各组大鼠皮层中da、ne、5-ht、bdnf含量比较(n＝10)[0424][0425][0426]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0427]表16各组大鼠海马中da、ne、5-ht、bdnf含量比较(n＝10)[0428][0429]与正常组比较，▽p﹤0.05，▼p﹤0.01；与模型组比较，＊p﹤0.05，#p﹤0.01[0430]各给药组大鼠皮层及海马中da含量较模型组均显著上升(p《0.01)，d组大鼠皮层da含量与b组无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠皮层及海马中da含量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠皮层及海马中da含量，从而发挥抗抑郁作用。由表15,16可知：各给药组大鼠皮层中da含量大小关系依次为flu组》d组，b组》f组》c组，b相对d有显著性差异p》0.05。[0431]各给药组大鼠海马中da含量大小关系依次为flu组》d组》b组》f组》c组，d相对b有显著性差异p《0.01。以上表明d组提取物抗抑郁作用仅次于flu组药物，c组提取物抗抑郁作用最差。[0432]各给药组大鼠皮层及海马中ne含量较模型组均显著上升(p《0.01)，flu组大鼠皮层及海马中ne含量与d组无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠皮层及海马中ne含量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠皮层及海马中ne含量，从而发挥抗抑郁作用。由表15,16可知：各给药组大鼠皮层及海马中ne含量大小关系依次为flu组，d组》b组》f组》c组，d相对b有显著性差异。表明d组提取物抗抑郁作用与flu组药物相当，c组提取物抗抑郁作用最差。[0433]各给药组大鼠皮层及海马中5-ht含量较模型组均显著上升(p《0.05)，d组大鼠皮层5-ht含量与b组无显著性差异(p》0.05)，b组大鼠海马5-ht含量与f组无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠皮层及海马中5-ht含量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠皮层及海马中5-ht含量，从而发挥抗抑郁作用。由表15,16可知：各给药组大鼠皮层中5-ht含量大小关系依次为flu组》d组，b组》f组》c组，b相对d有显著性差异p《0.05；各给药组大鼠海马中5-ht含量大小关系依次为flu组》d组》b组，f组》c组，d相对b有显著性差异p《0.05。表明d组提取物抗抑郁作用仅次于flu组药物，c组提取物抗抑郁作用最差。[0434]各给药组大鼠皮层及海马中bdnf含量较模型组均显著上升(p《0.01)，flu组大鼠皮层中bdnf含量与d组无显著性差异(p》0.05)，且其它各组大鼠皮层及海马中bdnf含量均有显著性差异(p《0.05)，表明各给药组均可提高cums结合孤养抑郁模型大鼠皮层及海马中bdnf含量，促进神经元的修复与再生，从而发挥抗抑郁作用。由表15,16可知：各给药组大鼠皮层中bdnf含量大小关系依次为flu组，d组》b组》f组》c组，各给药组大鼠皮层及海马中ne含量大小关系依次为flu组》d组》b组》f组》c组，d相对b有显著性差异p《0.01，表明d组提取物抗抑郁作用仅次于flu组药物，c组提取物抗抑郁作用最差。[0435]4小结[0436]4.1抑郁模型大鼠建立[0437]慢性温和不可预见性刺激(cums)结合孤养方法建立抑郁模型大鼠后，模型组大鼠行为学指标(体重变化、糖水消耗百分比、敞箱实验运动得分)较正常组显著降低；生化指标da、ne、5-ht、bdnf较正常组显著降低，而cort较正常组显著升高，表明抑郁模型大鼠造模成功。[0438]4.2行为学和生化指标测定结果[0439]各给药组大鼠行为学指标(体重增长量、糖水消耗百分比、敞箱实验运动得分)和生化指标(da、ne、5-ht、bdnf)较模型组均显著升高，而血浆cort较模型组均显著降低，表明各给药组均有抗抑郁作用。[0440]各给药组大鼠行为学及生化指标大小顺序结果见表17。由表可知：d组提取物抗抑郁作用最好，c组提取物抗抑郁作用最差。[0441]表17各组大鼠行为学及生化指标结果大小顺序表[0442][0443]综上所述，本研究抑郁模型大鼠造模成功后，行为学指标和生化指标测定结果中，虽某些组间无显著性差异，但总体上各给药组大鼠行为学指标和皮层及海马中生化指标含量大小顺序为flu组》d组》b组》f组》c组，血浆中cort含量大小顺序为flu组《d组《b组《f组《c组。[0444]d组、b组、f组、c组提取物均可通过抵抗hpa轴功能亢进、提高单胺类神经递质含量及提高神经元可塑性而发挥抗抑郁作用。其中d组和b组提取物行为学指标和生化指标均高于f组；d组和b组总趋势为d组》b组，但皮层中5-ht和da含量无显著性差异，其它指标d组和b组有显著差异；b组和f组总趋势为b组》f组，但糖水消耗百分比、皮层及海马中ne含量、海马中5-ht含量无显著性差异；c组提取物抗抑郁作用最差。[0445]实施例325味药材分组方式考察[0446]实验目的：5味药材水合提得到的提取物，在质量控制时发现柴胡成分对当归中阿魏酸定量有干扰，为解决这个问题，特别设计分组提取以避免干扰。[0447]实验方法：5味药材分组提取设计主要依据3个原则：1、柴胡与当归分开，避免柴胡成分对当归中阿魏酸定量的干扰；2、每组提取物中至少含有1个稳定的指标性成分以表征提取物到制剂过程的工艺稳定性；3、在提取过程收集芳香水，在浓缩收膏终点将芳香水加入提取物中，使整体提取物与传统应用水煎剂成分接近。[0448]实验结果：[0449]1、收油角度的分组方式：[0450]减方后，处方里还有柴胡、当归、麸炒白术、甘草、白芍共5味，其中有挥发性成分的是柴胡、当归和麸炒白术。考察单提出油情况：柴胡出油量极少，无法收集，约0.2ml/kg；麸炒白术有少量的油，0.95ml/kg；当归出油较明显，4.3ml/kg。从挥发油收集的角度，当归和麸炒白术可以一起收集挥发油，柴胡因为油量极少，进行合并水提。[0451]2、分析marker角度的分组方式：[0452]目的：筛选当归和麸炒白术组中合适的分析标记物来表征提取物到制剂过程的稳定性。[0453]当归：筛选出的藁本内酯和阿魏酸都不适合做分析标记物。藁本内酯是挥发性成分，受挥发油收集状态影响，提取批次间波动较大，且挥发性成分稳定性风险高。阿魏酸含量水平低(0.1％左右)且性质不稳定(对高温和光敏感)，在提取物中可定量，但在制剂中受柴胡成分的干扰，不能准确定量。[0454]麸炒白术：筛选出的苍术酮和白术内酯iii成分都不适合做分析标记物。苍术酮为挥发性成分，受挥发油收集状态影响，提取批次间波动较大，且挥发性成分稳定性风险高。白术内酯iii含量水平低(0.01％左右)，制剂中的可检测性差，从提取物到制剂的转移率存在风险。[0455]考虑在当归和麸炒白术组加入甘草，将甘草酸成分作为该组提取物的分析标记物来表征提取物到制剂的过程稳定性。因为甘草酸性质较为稳定，不受长时间煎煮的影响，见图3，且甘草酸处方比例低，有利于两组提取物之间的批次对应。实验结论：[0456]实验考察后确定的提取分组为：柴胡、白芍合并提取，得到逍遥柴白提取物；当归、麸炒白术、炙甘草合并提取得到逍遥当白甘提取物。如图2所示，包含当归的逍遥当白甘提取物，阿魏酸成分的含量分析方法专属性合格，提取物可实现全面的质量控制。如图3所示，甘草酸成分稳定可以作为该组提取物的分析标记物来表征提取物到制剂的过程稳定性。当前第1页12当前第1页12