本发明涉及酪氨酸酶抑制剂，具体涉及硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物在抑制酪氨酸酶活性中的应用，还涉及该类化合物在药物、美白化妆品、食品保鲜剂、生物杀虫剂方面的应用。
背景技术：
：酪氨酸酶(ec1.14.18.1,tyrosinase)又称酚氧化酶、多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶，化学和光谱学研究表明，该酶的生物活性中心有一个双核铜离子活性部位，这个双铜活性部位能以3种不同的形式存在于酶促反应中，广泛存在于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶是人体中黑色素生成的关键限速酶，部分色素沉着性皮肤病，如黄褐斑、雀斑、白癜风等与酪氨酸酶有密切关联，黑色素瘤的形成与酪氨酸酶同样密不可分，因此酪氨酸酶抑制剂可用于临床治疗与之相关的皮肤病及恶性黑色素瘤，同时，酪氨酸酶与老年痴呆症有一定联系；酪氨酸酶也是果蔬中产生褐变反应的关键酶，并且酪氨酸酶还是昆虫体内不可缺少的一种酶。因此，酪氨酸酶抑制剂在医学、化妆品、食品保鲜、生物杀虫剂等领域有广泛应用。由于酪氨酸酶抑制剂在以上领域的广泛应用，国内外很多学者致力于寻找高效、稳定、低毒的酪氨酸酶抑制剂，有化学合成的，也有天然产物提取物，并探讨其抑制动力学、抑制机理及相关应用。然而到目前为止，并未找到比曲酸、氢化喹啉、熊果苷等市场现有的酪氨酸酶抑制剂更安全有效的替代品，而且近期因曲酸致癌性导致遭到限制使用。因此，开发新型高效低毒的酪氨酸酶抑制剂仍然是本领域的重要研究课题。技术实现要素：本发明的目的是提供一种新型高效低毒的酪氨酸酶抑制剂，将其应用于抑制酪氨酸酶活性方面，并可具体应用于医学、化妆品、食品保鲜、生物杀虫剂等领域。本发明的技术方案中，提供硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物在抑制酪氨酸酶活性方面的应用，该衍生物的结构式如下：（i）其中r为苯环上相连的基团，其数量为一个或多个，为氢，羟基，硝基，卤素原子，甲氧基，氰基，叔丁基或其组合。在r基团的数量为一个时，其在苯环的邻、间、对三个位置；在r基团的数量为多个时，满足可合成性的条件下，r在苯环上可以有多种可能的位置，一个苯环上的r基团相互之间可以相同也可以不同；r基团的数量至多为五个。可选地，上述应用具体为用于制备治疗与黑色素有关疾病的药物。可选地，所述疾病为黄褐斑、雀斑、白癜风或黑色素瘤。可选地，上述应用具体为用于制备治疗与酪氨酸酶相关的老年痴呆症的药物。可选地，上述应用具体用于制备具有抑制酪氨酸酶作用的美白化妆品。可选地，上述应用具体用于制备具有抑制酪氨酸酶作用的食品保鲜剂。可选地，上述应用具体用于制备具有抑制酪氨酸酶作用的生物杀虫剂。所述的一种含有硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物的制备方法，反应合成路线如下所示：具有步骤如下：（1）取4-硝基邻苯二胺、无水乙醇及氢氧化钠加入到三口反应烧瓶中，开启搅拌，使用恒压滴液漏斗缓慢滴加二硫化碳，滴完后，缓慢升温至85℃后保温回流，薄层色谱跟踪反应进程。反应结束后，减压蒸除乙醇后得红棕色固体，加入5%盐酸，充分搅拌后抽滤，滤饼水洗后得黄色固体，晾干得中间体5-硝基硫代苯并咪唑酮。（2）将铁粉加入到圆底反应瓶中，加入95%的乙醇及2滴浓盐酸后升温至40℃，分批加入上述中间体5-硝基硫代苯并咪唑酮，加入后升温至回流状态后保温反应，薄层色谱跟踪反应进程。反应结束后，冷却至室温，减压蒸出乙醇，剩余物以氢氧化钠溶液调ph=13，抽滤，滤液用冰乙酸调ph=5，用乙酸乙酯萃取,合并有机相用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得类白色固体5-氨基硫代苯并咪唑酮。（3）将5-氨基硫代苯并咪唑酮、苯甲醛或取代苯甲醛加入到反应瓶中。加入无水乙醇，搅拌，加入催化量冰乙酸，升温至80℃，回流保温反应，薄层色谱跟踪反应进程。反应结束后，冷却至室温，固体析出，抽滤，滤饼再用无水乙醇重结晶，干燥得硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物。本发明所涉及的硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物可用于制备与色素相关皮肤病、黑色素瘤及帕金森病药物，还可用于制备化妆品美白剂、食品保鲜剂、生物杀虫剂。本发明所涉及到的化合物制备简单，以4-硝基邻苯二胺为起始原料，经环合、还原、脱水得目标产物，对酪氨酸酶抑制活性较好，具有较好的应用前景，为解决美白化妆品、医药、食品保鲜剂、生物杀虫剂提供了一种新的开发途径。具体实施方式下面通过合成实验实例及活性实验实例对本发明作进一步说明，但并不是对本发明的限制。实施例一：化合物5-((2-硝基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮的合成（sbmt-1）的合成（r为硝基，位于苯环2号位）取4-硝基邻苯二胺3.06g（20mmol）、无水乙醇100ml及氢氧化钠1.2g加入到250ml三口反应烧瓶中，使用恒压滴液漏斗缓慢滴加二硫化碳2.2g（28mmol），缓慢升温至85℃，回流保温，薄层色谱跟踪反应进程。反应完成后冷至室温，减压蒸除乙醇，剩余物加入20ml5%盐酸，充分搅拌后抽滤，滤饼水洗后得黄色固体，晾干得5-硝基硫代苯并咪唑酮。将铁粉0.39g（6.96mmol）加入到50ml的圆底反应瓶中，加入12ml95%的乙醇及2滴浓盐酸后升温至40℃，开始分批加入0.267g（1.37mmol）5-硝基硫代苯并咪唑酮，加入后升温至回流状态，保温反应，薄层色谱跟踪反应进程。反应完成后，冷至室温，减压蒸出乙醇，剩余物以氢氧化钠溶液调ph=13，抽滤，滤液用冰乙酸调ph=5，用乙酸乙酯萃取（2×200ml）,合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得类白色固体5-氨基硫代苯并咪唑酮。将5mmol5-氨基硫代苯并咪唑酮、6mmol邻硝基苯甲醛加入到25ml反应瓶中。加入10ml无水乙醇，在搅拌下加入3滴冰乙酸，升温至80℃，回流保温反应，薄层色谱跟踪反应进程。反应完成后冷至室温，析出固体，抽滤，滤饼以无水乙醇重结晶，干燥后得黄色固体，收率为87.2%,熔点：>280oc。ir(cm-1，kbr)：3042，1615，1526，1507，1455，1344，1050，785，737，695；1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.63(s，2h，-nh)，8.90(s，1h，=ch)，8.15(d，j=8.4hz，2h，ph-h)，7.82(d，j=8.4hz，2h，ph-h),7.15(s，3h，ph-h);13cnmr(dmso-d6，125mhz)：δ169.5，155.8，149.5，132.0，129.9，124.9，117.6，110.2，102.1；ms(esi):m/z(100%)299(m+)。实施例二：5-((3-硝基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-2）的合成（r为硝基，位于苯环3号位）本实施例的制备方法除用间硝基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为90.6%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3093，1613，1533，1520，1494，1347，1188，798，731，646;1hnmr(dmso-d6，500mhz)：δ12.63(s，2h，-nh)，8.83(s，1h，=ch)，8.70(s，1h，ph-h)，8.32(s，2h，ph-h)，7.77(s，1h，ph-h)，7.36(s，3h，ph-h);13cnmr(dmso-d6，125mhz)：δ169.5，157.7，148.6，145.9，134.8，130.8，125.7，123.0，117.8，110.1，102.1;ms(esi)：m/z(100%)299(m+)。实施例三：5-((3-溴苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-3）的合成（r为硝基，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用间溴苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为56.8%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3125，1613，1488，1187，812，782，681;1hnmr(dmso-d6，300mhz)：δ12.64(s，1h，-nh)，12.61(s，1h，-nh)，8.66(s，1h，=ch)，8.10(s，1h，ph-h)，7.93(d，j=8.4hz，1h，ph-h)，7.69(d，j=8.4hz，1h，ph-h)，7.47-7.44(m，1h，ph-h)，7.18-7.10(m，1h，ph-h);13cnmr(dmso-d6，75mhz)：δ169.3，158.3，146.2，138.2，133.5，131.3，127.9，117.5，110.1，102.0;ms(esi):m/z(100%)331(m+)。实施例四：5-((4-溴苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-4）的合成（r为溴，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用对溴苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为65.6%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3076，2957，1613，1586，1190，837，819，721，666;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.61(s,2h,-nh),8.64(s,1h,=ch),7.85(s,2h,ph-h),7.68(s,2h,ph-h),7.13(s,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.3，158.6，145.7，135.7，133.5，132.2，130.7，125.1，117.4，110.1，102.0;ms(esi):m/z(100%)331(m+)。实施例五：5-((2-溴苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-5）的合成（r为溴，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻溴苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为39.5%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3400，1672，1570，1508，1338，1154，823，739，695;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.60(s,2h,-nh),8.82(s,1h,=ch),8.15(d,j=8.4hz,2h,ph-h),7.75(d,j=8.4hz,2h,ph-h),7.52-7.46(m,2h,ph-h),7.18-7.09(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ168.0,167.5,159.9,132.4,132.3,123.9,118.9,116.3;ms(esi):m/z(100%)331(m+)。实施例六：5-((2,6-二溴苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-6）的合成（r为二溴，位于苯环2,6号位）本实施例的制备方法除用2,6-二溴苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为69.8%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3059，1637，1618，1487，1189，848，745，725，634;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.63(s,2h,-nh),8.61(s,1h,=ch),7.78(s,2h,ph-h),7.32-7.06(m,4h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ168.1,167.3,158.0,132.4,128.5,126.4,123.4,121.4,120.9,111.8;ms(esi):m/z(100%)412(m+)。实施例七：5-((3,5-二溴苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-7）的合成（r为二溴，位于苯环3,5号位）本实施例的制备方法除用3,5-二溴苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为80.2%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3080，1611，1553，1491，1190，845，795，670，651;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.63(s,2h,-nh),8.63(s,1h,=ch),8.07(s,2h,ph-h),7.90(s,1h,ph-h),7.14(s,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ179.1,174.0,147.7,128.9,126.4,125.6,123.0,118.7,115.8,113.1,55.5;ms(esi)：m/z(100%)412(m+)。实施例八：5-((2-氯苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-8）的合成（r为氯，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻氯苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为26.1%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3122，1607，1521，1489，1185，809，748，706，621;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.62(s,2h,-nh),8.17(s,1h,=ch),7.59-7.53(m,2h,ph-h),7.49-7.47(m,2h,ph-h),7.20-7.14(m,2h,ph-h),7.11(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ168.3,167.7,161.6,159.4,129.9,127.4,116.8,111.6,108.3,102.5;ms(esi)：m/z(100%)288(m+)。实施例九：5-((2,4-二氯苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-9）的合成（r为二氯，位于苯环2，4号位）本实施例的制备方法除用2,4-二氯苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为34.6%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3083，1582，1523，1488，1131，843，800，757，634;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.61(s,2h,-nh),8.80(s,1h,=ch),8.12(d,j=8.5hz,1h,ph-h),7.68(d,j=7.6hz,1h,ph-h),7.51(d,j=8.4hz,2h,ph-h),7.17-7.12(m,2h,ph-h),7.09(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ168.1,167.3,158.0,132.4,128.5,126.4,123.4,121.4,120.9,111.8;ms(esi):m/z(100%)321(m+)。实施例十：5-((2-氟苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-10）的合成（r为氟，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻氟苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为10.5%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3155，1609，1484，1459，1313，774，720，635;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.60(s,2h,-nh),8.78(s,1h,=ch),8.09(s,1h,ph-h),7.57(d,j=7.4hz,1h,ph-h),7.33(d,j=7.7hz,2h,ph-h),7.16(s,2h,ph-h),7.10(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ169.3,163.5,152.4,146.6,133.8,133.5,131.7,128.1,125.3,123.9,117.2,116.6,110.2,102.1;ms(esi):m/z(100%)272(m+)。实施例十一：5-((3-氟苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-11）的合成（r为氟，位于苯环3号位）本实施例的制备方法除用间氟苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为44.4%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3121，1613，1581，1483，1189，845，789，741，662;1hnmr(dmso-d6,500mhz)δ12.62(s,2h,-nh),8.72(s,1h,=ch),8.09(s,1h,ph-h),7.74(s,2h,ph-h),7.56(s,1h,ph-h),7.35(s,1h,ph-h),7.13(s,2h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ169.2,158.4,145.8,138.6,136.0,133.5,132.2,131.3,129.8,128.3,123.8,117.3,110.2,102.1;ms(esi):m/z(100%)272(m+)。实施例十二：5-((4-氟苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-12）的合成（r为氟，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用对氟苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为83.4%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3099，2360，1504，1473，1230，1150，848，807，771;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ12.60(s,2h,-nh),8.66(s,1h,=ch),8.00(s,1h,ph-h),7.34(s,2h,ph-h),7.14-7.07(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ169.2,158.7,145.8,140.3,138.0,133.6,133.4,133.0,131.1,131.0,123.4,117.3,110.2,101.4;ms(esi):m/z(100%)272(m+)。实施例十三：5-((3-甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-13）的合成（r为甲氧基，位于苯环3号位）本实施例的制备方法除用间甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为76.7%，熔点281.0-283.5℃。ir(cm-1，kbr)：3084，1615，1580，1192，847，750，660;1hnmr(dmso-d6,500mhz)：δ13.12(s,2h,-nh),8.61(s,1h,=ch),7.46(s,3h,ph-h),7.11(s,4h,ph-h),3.82(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,125mhz)：δ169.2,159.7,146.7,138.1,133.5,131.4,130.2,126.4,123.4,121.9,117.2,113.1,110.2,102.0,55.6;ms(esi):m/z(100%)284(m+)。实施例十四：5-((2,4-二甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-14）的合成（r为二甲氧基，位于苯环2,4号位）本实施例的制备方法除用2,4-二甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为43.4%，熔点256.3-256.9℃。ir(cm-1，kbr)：3293，3061，2955，1595，1303，1161，831，798，771，641;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.53(s,1h,-nh),12.50(s,1h,-nh),8.75(s,1h,=ch),7.97(d,j=8.6hz,1h,ph-h),7.13(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.03-7.01(m,1h,ph-h),6.93(d,j=7.8hz,1h,ph-h),6.67-6.64(m,2h,ph-h),3.89(s,3h,och3),3.85(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.2,159.7,146.7,131.4,130.2,121.9,117.8,117.2,110.1,102.0,111.8,55.6;ms(esi):m/z(100%)314(m+)。实施例十五：5-((2,3,4-三甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-15）的合成（r为三甲氧基，位于苯环2,3,4号位）本实施例的制备方法除用2,3,4-三甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为78.7%，熔点256.6-258.6℃。ir(cm-1，kbr)：3254，2995，1592，1473，1296，1090，862，806，628;1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ12.52(s,2h,-nh),8.68(s,1h,=ch),7.79-7.77(d,j=8.8hz,1h,ph-h),7.15(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.05-7.03(m,1h,ph-h),6.98-6.95(m,2h,ph-h),3.90(s,3h,och3),3.87(s,3h,och3),3.79(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.0,156.7,154.6,154.5,147.6,141.8,133.5,131.1,122.6,116.8,110.2,108.9,101.8,62.4,60.9,56.5;ms(esi):m/z(100%)344(m+)。实施例十六：5-((3,4,5-三甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-16）的合成（r为三甲氧基，位于苯环3,4,5号位）本实施例的制备方法除用3,4,5-三甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为82.4%，熔点263.0-263.3℃。ir(cm-1，kbr)：3217，1616，1583，1483，1123，851，813，747，638;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.63(s,2h,-nh),8.58(s,1h,=ch),7.29(s,2h,ph-h),7.16(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.11(m,1h,ph-h),7.04(s,1h,ph-h),3.86(s,6h,och3),3.74(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.1,159.6,153.6,146.8,140.6,133.5,131.2,117.3,110.1,106.2,101.7,60.6,56.3;ms(esi):m/z(100%)344(m+)。实施例十七：5-((2,4,6-三甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-17）的合成（r为三甲氧基，位于苯环2,4,6号位）本实施例的制备方法除用2,4,6-三甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为81.6%，熔点203.7-204.3℃。ir(cm-1，kbr)：3049，2960，1604，1580，1457，1117，800，673，654;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.49(s,2h,-nh),8.60(s,1h,=ch),7.11(d,j=8.4hz,1h,ph-h),6.88(d,j=8.4hz,1h,ph-h),6.80(s,1h,ph-h),6.30(s,2h,ph-h),3.86(s,6h,och3),3.82(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ168.6,163.7,161.1,154.8,149.8,133.4,130.4,116.4,110.1,106.9,101.3,56.4,55.9;ms(esi):m/z(100%)343(m-)。实施例十八：5-((2,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-18）的合成（r为二羟基，位于苯环2,4号位）本实施例的制备方法除用2,4-二羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为47.3%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3127，2343，1616，1558，1497，1230，1128，837，805，710，668;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ13.56(s,1h,oh),12.65(s,1h,-nh),12.60(s,1h,-nh),10.23(s,1h,oh),8.82(s,1h,=ch),7.45(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.15-7.12(m,3h,ph-h),6.41-6.39(m,1h,ph-h),6.29(m,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.2,163.2,162.7,162.0,143.7,134.8,133.6,131.3,117.1,112.6,110.3,108.2,102.8,101.7;ms(esi):m/z(100%)284(m-)。实施例十九：5-((3,4-二羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-19）的合成（r为二羟基，位于苯环3,4号位）本实施例的制备方法除用3,4-二羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为35.3%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3142，2358，1636，1541，1498，1174，832，795，731，633;1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ12.53(s,1h,-nh),12.52(s,1h,-nh),9.58(s,1h,oh),9.29(s,1h,oh),8.41(s,1h,=ch),7.39(s,1h,ph-h),7.20(d,j=7.6hz,1h,ph-h),7.11(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.04(d,j=8.2hz,1h,ph-h),6.84-6.82(m,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ168.8,159.7,149.5,147.5,146.0,133.5,130.8,128.5,130.8,122.9,117.0,115.9,114.5,110.2,101.6;ms(esi):m/z(100%)284(m-)。实施例二十：5-((4-羟基-3,5-二甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-20）的合成（r为羟基和二甲氧基，分别位于苯环4号位和3,5号位）本实施例的制备方法除用4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为15.3%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3174，1610，1512，1329，1226，1124，818，638;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.58(s,2h,-nh),9.08(s,1h,oh),8.50(s,1h,=ch),7.25(s,1h,ph-h),7.15(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.08-7.06(m,1h,ph-h),7.00(d,j=7.6hz,1h,ph-h),3.84(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ168.9,159.8,148.6,148.5,147.3,139.5,133.5,130.9,127.5,127.1,117.1,110.1,107.5,106.5,101.6,56.5,56.4;ms(esi):m/z(100%)328(m-)。实施例二十一：5-((2-羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-21）的合成（r为羟基，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为45.7%，熔点>280℃。ir(cm-1,kbr)：3383,1607,1559,1495,1186,810,711,695;1hnmr(dmso-d6,600mhz)δ13.16(s,1h,oh),12.71(s,1h,-nh),12.65(s,1h,-nh),8.99(s,1h,=ch),7.66(d,j=7.4hz,1h,ph-h),7.41-7.38(m,1h,ph-h),7.24-7.18(m,3h,ph-h),6.98-6.95(m,2h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.5,162.7,160.5,143.5,133.6,133.4,132.9,131.9,119.8,119.5,117.5,116.9,110.3,102.0;ms(esi):m/z(100%)268(m-)。实施例二十二：5-((5-溴-2-羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-22）的合成（r为溴和羟基，分别位于苯环5号位和2号位）本实施例的制备方法除用5-溴-2-羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为15.5%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3074，1603，1564，1498，1188，863，777，636;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ13.14(s,1h,oh),12.73(s,1h,-nh),12.66(s,1h,-nh),8.97(s,1h,=ch),7.87(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.54-7.52(m,1h,ph-h),7.23-7.18(m,3h,ph-h),6.94(d,j=8.8hz,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.6,161.0,159.7,143.1,135.6,134.4,133.6,132.2,121.7,119.4,117.8,110.4,110.3.,102.0;ms(esi):m/z(100%)345(m-)。实施例二十三：5-((4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-23）的合成（r为羟基和甲氧基，位于苯环4号位和3号位）本实施例的制备方法除用4-羟基-3-甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为41.8%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3535，3113，1593，1512，1430，1292，942，720，640;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.57(s,1h,-nh),12.53(s,1h,-nh),9.71(s,1h,oh),8.49(s,1h,=ch),7.53(d,j=8.7hz,1h,ph-h),7.35-7.33(m,1h,ph-h),7.14-7.12(m,3h,ph-h),7.07-7.05(m,1h,ph-h),6.99(m,1h,ph-h),6.90(d,j=8.1hz,1h,ph-h),3.85(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ168.9,159.6,150.5,148.4,147.4,133.5,130.8,128.4,124.3,117.0,115.8,110.8,110.1,101.7,55.9;ms(esi):m/z(100%)298(m-)。实施例二十四：5-((4-叔丁基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-24）的合成（r为叔丁基，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用4-叔丁基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为21.5%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3075，2959，1612，1485，1193，841，721，644;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.58(s,2h,-nh),8.62(s,1h,=ch),7.87(d,j=7.8hz,2h,ph-h),7.53(d,j=7.8hz,2h,ph-h),7.16-7.09(m,2h,ph-h),7.04(s,1h,ph-h),1.31(s,9h,ch3);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.1,159.7,154.6,147.0,134.0,133.5,131.2,128.9,126.0,117.2,110.1,101.8;ms(esi):m/z(100%)310(m+)。实施例二十五：5-((2-氰基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-25）的合成（r为氰基，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻氰基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为53.2%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3092，1521，1493，1190，859，793，663;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.99(s,2h,-nh),8.82(s,1h,=ch),8.19(d,j=7.8hz,1h,ph-h),7.98(d,j=7.6hz,1h,ph-h),7.85-7.83(m,1h,ph-h),7.71-7.69(m,1h,ph-h),7.20(s,2h,ph-h),7.16(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.5,155.5,145.6,138.0,134.5,133.9133.5,132.1,131.9,129.2,117.8,117.6,111.8,102.1;ms(esi):m/z(100%)279(m+)。实施例二十六：5-((苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-26）的合成（r为氢）本实施例的制备方法除用苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为47.4%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3119，1613，1516，1487，1189，807，715，689;1hnmr(dmso-d6,600mhz)：δ12.60(s,1h,-nh),12.57(s,1h,-nh),8.66(s,1h,=ch),7.93(s,2h,ph-h),7.51(s,3h,ph-h),7.15-7.06(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,150mhz)：δ169.1,159.9,146.8,136.6,133.5,131.7,131.3,129.2,129.0,117.3,110.1,102.0;ms(esi):m/z(100%)254(m+)。实施例二十七：5-((4-硝基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-27）的合成（r为硝基，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用4-硝基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为57.7%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr):2995,1710,1535,1342,1199,877,805,410,624;1hnmr(dmso-d6,500mhz):δ12.69(s,1h,-nh),12.65(s,1h,-nh),8.89(s,1h,=ch),8.38(d,j=8.2hz,1h,ph-h),8.21(d,j=8.2hz,2h,ph-h),7.25-7.19(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,125mhz):δ169.2,153.2,145.1,144.7,142.6,135.4,126.0,126.1,125.5,115.8,114.2,106.4;ms(esi):m/z(100%)299(m+)。实施例二十八：5-((3,4-二氯苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-28）的合成（r为二氯，位于苯环3,4号位）本实施例的制备方法除用3,4-二氯苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为72.2%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3080，1611，1522，1488，1185，840，804，792，633;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.68(s,1h,-nh),12.53(s,1h,-nh),8.71(s,1h,=ch),8.65(s,1h,ph-h),7.94(m,1h,ph-h),7.81(m,1h,ph-h),7.17-7.11(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ168.1,167.3,158.0,132.4,128.5,126.4,123.4,121.4,120.9,111.8;ms(esi):m/z(100%)319(m-)。实施例二十九：5-((3-羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-29）的合成（r为羟基，位于苯环3号位）本实施例的制备方法除用间羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为39.6%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3080，2961，1636，1614，1579，1490，1196，845，808，717，685;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.57(s,1h,-nh),12.55(s,1h,-nh),9.66(s,1h,oh),8.55(s,1h,=ch),7.34-7.26(m,3h,ph-h),7.14-7.07(m,2h,ph-h),7.02(s,1h,ph-h),6.90(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ158.5,158.1,156.1,145.1,138.2,130.8,130.2,128.9,128.5,118.7,115.1,114.4,109.1,101.6;ms(esi):m/z(100%)269(m-)。实施例三十：5-((3-氯苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-30）的合成（r为氯，位于苯环3号位）本实施例的制备方法除用间氯苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为31.2%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3123，1613，1517，1489，1190，845，799，683;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.62(s,1h,-nh),12.58(s,1h,-nh)，8.68(s,1h,=ch),7.96(s,1h,ph-h),7.89(d,j=7.3hz,1h,ph-h),7.57-7.51(m,2h,ph-h),7.16-7.14(m,2h,ph-h),7.08(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.2,158.3,146.1,138.6,134.0,133.3,131.5,131.2,128.1,127.5,117.4,110.1,101.9;ms(esi):m/z(100%)286(m-)。实施例三十一：5-((4-氯苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-31）的合成（r为氯，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用对氯苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为71.2%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3086，1611，1510，1487，1467，1169，845，821，744，665;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.61(s,1h,-nh),12.57(s,1h,-nh),8.67(s,1h,=ch),7.95(d,j=8.2hz,2h,ph-h),7.57(d,j=8.1hz,2h,ph-h),7.15-7.06(m,3h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.1,158.5,146.3,136.5,135.3,133.3,131.4,130.5,129.2,117.3,110.0,101.8;ms(esi):m/z(100%)286(m-)。实施例三十二：5-((5-氯-2-羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-32）的合成（r为羟基和氯，分别位于苯环2号位和5号位）本实施例的制备方法除用5-氯-2-羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为71.3%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：1675，1585，1331，1250，783，718，683;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ13.10(s,1h,oh),12.72(s,1h,-nh),12.65(s,1h,-nh),8.95(s,1h,=ch),7.73(s,1h,ph-h),7.41-7.38(m,1h,ph-h),7.22-7.16(m,3h,ph-h),6.98(d,j=8.8hz,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.6,161.1,159.3,143.1,133.6,132.8,132.2,131.4,122.9,121.1,118.9,117.7,110.3,102.0;ms(esi):m/z(100%)302(m-)。实施例三十三：5-((2-甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-33）的合成（r为甲氧基，位于苯环2号位）本实施例的制备方法除用邻甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为59.6%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3135，2362，1613，1517，1488，1187，811，753，639;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.55(s,1h,-nh),12.52(s,1h,-nh),8.85(s,1h,=ch),8.00(d,j=7.7hz,1h,ph-h),7.49(s,1h,ph-h),7.15-7.13(m,2h,ph-h),7.12-7.04(m,2h,ph-h),6.96(s,1h,ph-h),3.89(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.1,159.6,154.8,147.5,133.5,131.2,127.1,124.4,121.1,117.0,112.4,110.2,101.8,56.2;ms(esi):m/z(100%)282(m-)。实施例三十四：5-((3-羟基-4-甲氧基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-34）的合成（r为羟基和甲氧基，分别位于苯环3号位和4号位）本实施例的制备方法除用3-羟基-4-甲氧基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为69.4%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：1675，1585，1331，1250，783，718，683;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ12.54(s,1h,-nh),12.52(s,1h,-nh),9.31(s,1h,oh),8.45(s,1h,=ch),7.40(s,1h,ph-h),7.28(s,1h,ph-h),7.12(d,j=8.4hz,1h,ph-h),7.04-6.97(m,3h,ph-h),3.81(s,3h,och3);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ168.9,159.5,151.2,147.3,147.2,133.5,130.9,129.8,122.7,117.1,114.0,112.0,110.1,101.8,56.0;ms(esi):m/z(100%)298(m-)。实施例三十五：5-((4-羟基苯亚甲基)氨基)-1h-苯并咪唑硫酮（sbmt-35）的合成（r为羟基，位于苯环4号位）本实施例的制备方法除用对羟基苯甲醛代替邻硝基苯甲醛外，其余与实施例一相同。得黄色固体，摩尔收率为47.8%，熔点>280℃。ir(cm-1，kbr)：3528，3079，1595，1514，1488，1194，842，807，717，631;1hnmr(dmso-d6,300mhz)：δ13.13(s,1h,oh),12.69(s,1h,-nh),12.63(s,1h,-nh),8.96(s,1h,=ch),7.64(s,1h,ph-h),7.38(s,1h,ph-h),7.19(s,3h,ph-h),6.95(s,1h,ph-h);13cnmr(dmso-d6,75mhz)：δ169.5,162.6,160.6,143.4,133.6,133.4,132.9,131.9,119.8,119.5,117.5,116.9,110.3,102.1;ms(esi):m/z(100%)268(m-)。实施例三十六：酪氨酸酶抑制活性测试溶液配制(1).0.1mph为6.8磷酸盐缓冲溶液：向500ml0.1mk2hpo4中加入0.1m的kh2po4水溶液混匀，用ph计调节溶夜ph值到6.8。(2).酪氨酸酶溶液（现用现配）：称取0.5mg的酪氨酸酶，用0.1mph为6.8的磷酸盐缓冲溶液溶解，定容至1ml。(3).样品dmso溶液：称取一定量样品用dmso溶剂溶解，定容浓度为1.0mm。(4).l-dopa溶液（现用现配）：称取1.5mg的l-dopa，用ph6.8的磷酸盐缓冲液溶解，定容至1ml。实验方法：在1.5ml的离心管中加入955μlph=6.8的磷酸盐缓冲溶液（0.1m）和一定体积的样品溶液（dmso溶解），用dmso补齐至975μl，然后加入5μl酪氨酸酶溶液（0.55mg/ml）于25℃孵化10分钟，将20μll-dopa（多巴）溶液（2.58mg/ml）加入到上述混合液中，迅速混合均匀，测定波长为475nm处的吸光度，由其随时间增长而上升的斜率计算出反应速率（消光系数ε=3600m-1cm-1）。由于酶的活力会随着放置时间增长而下降，因此测量时可适当调整酶的浓度（底物浓度固定为0.26mm），使吸光度的变化保持在每分钟改变0.1个单位。测定时温度恒定为25℃。用下式计算酪氨酸酶活性的抑制率,并依据对数浓度－酶抑制率回归方程求得半数作用浓度(ic50)。酪氨酸酶抑制率（％）=[b-s/b]×100其中b为有底物和酪氨酸酶，没加样品时的吸光度，s为有底物、酪氨酸酶和样品时的吸光度。以酪氨酸酶活力对样品浓度作图，按照作图法求出每个样品的ic50值。由上述方法得到目标产物的抑制酪氨酸酶活性如下表：化合物ic50（μm）化合物ic50（μm）sbmt-10.17±0.0225sbmt-190.85±0.0401sbmt-20.03±0.0121sbmt-201.25±0.0592sbmt-30.12±0.0243sbmt-211.61±0.0572sbmt-40.021±0.0112sbmt-224.71±0.0621sbmt-50.23±0.0431sbmt-231.31±0.0501sbmt-60.21±0.0307sbmt-248.17±0.0712sbmt-74.93±0.0873sbmt-252.89±0.0510sbmt-80.15±0.0328sbmt-265.32±0.0628sbmt-92.58±0.0527sbmt-270.0048±0.0014sbmt-100.33±0.0367sbmt-280.10475±0.0545sbmt-110.77±0.0415sbmt-290.1229±0.0275sbmt-120.98±0.0314sbmt-300.05345±0.0608sbmt-130.018±0.016sbmt-310.04955±0.0131sbmt-140.035±0.019sbmt-320.6148±0.1244sbmt-150.13±0.0412sbmt-330.1938±0.0761sbmt-160.69±0.0581sbmt-340.0829±0.01134sbmt-171.53±0.0507sbmt-350.1906±0.0645sbmt-180.13±0.0222熊果苷102.11±1.12曲酸9.99±0.015由上表可知，对比目标化合物和阳性对照的ic50值可以发现：所有目标化合物的ic50值都比曲酸和熊果苷要小，也就是达到抑制50%酪氨酸酶活性所需的剂量小，说明硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物抑制酪氨酸酶活性均比阳性对照熊果苷和曲酸好，其中化合物sbmt-27抑制效果最好，ic50为0.0048±0.0014μm，这是由于分子中的硫代苯并咪唑酮片段的硫原子能够和酪氨酸酶氨基酸残基形成氢键作用力，取代基与酪氨酸酶铜离子活性存在络合作用，同时两个苯环与酪氨酸酶氨基酸残基也存在相互作用，从而达到抑制酪氨酸酶活性的目的。实施例三十七：抗褐变效果测试将新鲜红富士苹果切成大小及厚度相近的苹果片，放入培养皿中，分别加入10ml样品溶液（实验组）、曲酸溶液（阳性对照组）以及无水乙醇中（空白对照组），并依次编号，浸泡10min后取出，随后晾干苹果切片上的溶剂，置于5℃冰箱中保存，白板校正色差仪后每隔一定的时间测量其l*、a*与b*值，测量三个不同位置并取平均值。其中l*值表示明亮程度，色泽越明亮其l*越大，反之则l*值越小，a*值与b*大小则与颜色的红绿程度与蓝黄程度有关。由上述方法得到目标产物的抗褐变效果如下表：由上表可得出0至56小时内，样品组与空白组及对照组的l*均呈现下降的趋势，说明在0至56小时内苹果均发生了一定程度的褐变，但样品组、对照组及空白组的l*值波动幅度无较大差异，说明在该时间内样品组的抗褐变效果与阳性对照曲酸无明显差异。随着储存时间的增加，样品组与空白组及对照组的l*继续呈现下降的趋势，但空白组下降趋势较样品组与阳性对照组明显，说明曲酸及样品具有一定的抗褐变效果。本发明提出硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物对酪氨酸酶抑制活性好，且具有抗褐变效果，具有较好的应用前景。本领域技术人员应当清楚，各类型的酪氨酸酶抑制剂在医学、化妆品、食品保鲜、生物杀虫剂等领域均有广泛应用。上文已经验证本发明各实施例的硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物在抑制酪氨酸酶活性方面的有益效果，因而本发明显而易见地能用于制备治疗与黑色素有关疾病的药物，如黄褐斑、雀斑、白癜风或黑色素瘤；也能用于制备治疗与酪氨酸酶相关的老年痴呆症的药物；还能用于制备具有抑制酪氨酸酶作用的美白化妆品、食品保鲜剂或生物杀虫剂。在以上各应用中，硫代苯并咪唑酮席夫碱衍生物是以纯化合物的形式存在，或以混合物中的组分形式存在，以及形成固态、液态、膏状等方式，均可参考现有及改进的技术，本申请并不受限于此。应当理解，本发明虽然已通过以上实施例进行了清楚说明，然而在不背离本发明精神及其实质的情况下，所属
技术领域：
的技术人员当可根据本发明作出各种相应的变化和修正，但这些相应的变化和修正都应属于本发明的权利要求的保护范围。当前第1页12